UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA

CURSO DE ZOOTECNIA
DISCIPLINA: HISTOLOGIA E EMBRIOLOGIA ANIMAL

Introdução à Microscopia
Prof. Adriana Jucá
adrianajuca@ufba.br

Salvador/BA
2021
 As células: propriedades
• Altamente complexas e organizadas
• Tem programa genético
• Capazes de produzir cópias de si mesmas
• Adquirem e utilizam energia
• Realizam várias reações químicas
• Respondem a estímulos
• Capazes de fazer auto-regulação
Tipos estruturais
COMO FOI POSSÍVEL
VISUALIZAR TUDO ISSO?
 O advento da Microscopia
• Lentes de aumento
– 500 a.C.
• Cristais de rocha usados por Confúcio
– 1000 d.C.
• “pedra da leitura”, “lupa primitiva”
– 1270 d.C.
• Marco Polo viu chineses com “óculos”

http://www.portalsaofrancisco.com.br/alfa/microscopio/historia-do-microscopio.php
 1. Introdução
• Histologia
• Tecidos: epitelial, conjuntivo, muscular e
nervoso
• Tecidos = células + MEC
 Microscópio – Origem
• 1590 - Hans Janssen e Zacharias
– Holandeses fabricantes de óculos
– Sem registro de uso científico

http://www.portalsaofrancisco.com.br/alfa/microscopio/historia-do-
microscopio.php
FONTE: Museum of Microscopy
 O estudo das células: Hook
• 1665 - Robert Hooke descreve a estrutura
celular da cortiça
• Cellula
– Diminutivo do latim Cella
• Pequeno aposento
 Estudo das células: Leeuwenkoek

• 1674: Leeuwenhoek
– Aperfeiçoa o microscópio
– Observações de materiais biológicos

http://www.portalsaofrancisco.com.br/alfa/microscopio/historia-do-
microscopio.php

Antonie van Leeuwenhoek (1632 -

O microscópio ao longo do tempo

http://microeletronico.blogspot.com/
O microscópio ao longo do tempo
Microscópio Microscópio
de Culpeper de 1751

FONTE: Museum of Microscopy FONTE: Museum of Microscopy

O microscópio ao longo do tempo
Microscópio
de Cuff

FONTE: Museum of Microscopy FONTE: Museum of Microscopy

O microscópio ao longo do tempo
Microscópio de
Adams, Sec
XVIII

FONTE: Museum of Microscopy FONTE: Museum of Microscopy

O microscópio ao longo do tempo

FONTE: Museum of Microscopy FONTE: Museum of Microscopy

Microscópios do final do
século XIX
Microscópio moderno
http://www.enilaequipamentos.com.br/MaisAnuncio.asp?CodProduto=372
Partes do microscópio
Partes do microscópio
2. Preparação de tecidos
• Cortes histológicos
• Micrótomos
• Microscópio de luz
 Etapas
• Obtenção, limpeza e fragmentação
• Fixação (formol ou gelo)
• Desidratação (etanol)
• Diafanização/clareamento (xilol)
• Inclusão (parafina)
• Microtomia
• Coloração (xilol, corante e xilol)
• Montagem
2.1. Fixação
• Objetivo: preservar a estrutura do tecido
• Funções:
* Parar as reações celulares;
* Manter as organelas e estruturas em posição;
* Insolubilizar proteínas;
* Não deformar o tecido e permitir boa adesão do
corante.
• Tipos:
* Físicos: calor, frio
* Químicos: formol (MO)
glutaraldeído + tetróxido de ósmio (ME)
 Fixação
• Processo químico • Processo físico
– Preserva amostra em – Congela a amostra
formol – Corta em criostato
– Corta em micrótomo – Indicada para análise
rápida

http://teovida.wikispaces.com/Curiosidade%E2%80%A
6Celulas+Estaminais
 Fixação física por congelação

• Tecidos – congelamento rápido

• Criostato (micrótomo para tecidos
congelados) – “cortes por congelação”
2.2. Desidratação

• Retirada da água da amostra

• Passa a amostra em etanol
– Soluções com concentração crescente
– Até chegar a 100% de etanol
2.3. Diafanização

• Retira o etanol da amostra

• Passa a amostra por xilol
• Clareamento da amostra (transparente)
– Pronta para ser adicionada à parafina líquida
2.4. Inclusão
• Objetivo: Consistência rígida
• Parafina (MO) e resina plástica (MO e ME)
• ex: Inclusão ou embebição em parafina
Parafina derretida e quente (56-60C)
 Lâmina com cortes parafinizados

lâmina
Bateria de reagentes

xilol 100 90 70 50 água H E 50 70 90 100 xilol

álcoois (graus GL) álcoois (graus GL)

Montagem
(colocação do bálsamo
e da lamínula)

Lâmina pronta para observação

Emblocamento em parafina
 2.5. Corte no Micrótomo
• Micrótomo (1-10µm)
1µm = 0,001mm = 10-6m

• Colocados em água aquecida e depois em lâminas

de vidro (coloração).

BANHO-MARIA
 Microtomia
• Parafina • Resina
– Micrótomo – Criostato

http://www.kochinst.com.br/produt/sl200.jpg http://www.opatologista.com.br/produtos/grande/cm1510%2002.jpg
Incidência dos planos de corte
Interpretação de cortes

Como diferentes estruturas

tridimensionais são
observadas após serem
cortadas
 Problemas na interpretação de cortes
• Distorções e artefatos

Exemplos:
- Retração causada pelo fixador
- Pregas
- Precipitação de corantes ou sujidade
- Ruptura do tecido
2.6. Coloração
• Corantes básicos – coram componentes
celulares basofílicos (ácidos nucléicos,
glicosaminoglicanos e glicoproteínas ácidas). ex:
azul-de-toluidina, azul-de-metilino, hematoxilina.

• Corantes ácidos – coram componentes celulares

acidófilos (mitocôndrias, grânulos de secreção,
proteínas citoplasmáticas e colágeno). ex: orange
G, eosina, fucsina ácida.
Coloração de Hematoxilina e Eosina (HE)

• Hematoxilina – Azul ou violeta – núcleo das

células e outras estruturas ácidas
• Eosina – Cor-de-rosa – citoplasma e colágeno
 Outros corantes
• Tricrômicos (de Mallory e Mason) – núcleo e
citoplasma; e diferenciam colágeno e m. liso
• Picro-sirius – colágeno
• Contracorante – contornos das células ou
núcleos

Hematoxilina
Tricrômico de Masson férrica Picrosirius
 Impregnação por metais

• Prata e ouro
- Tecido nervoso
3. Microscópios
 3.1. Microscopia de Luz
• Lâminas coradas são
examinadas por iluminação
• Microscópio: partes
mecânica e óptica
 Ocular

Objetiva
Suporte
Condensadora

Luz
 Microscopia de luz
• Observação de estruturas acidófilas e
basófilas

Junqueira; Carneiro, 2008

 Esfregaço sanguíneo

Hemácias Monócito

Medula óssea
MICROSCOPIA ÓPTICA – Luz visível
 Microscopia Eletrônica
• Interação entre elétrons e tecidos
• ME de transmissão e de varredura
Microscopia Eletrônica de Transmissão
• Imagem em branco (elétron-transparente) e
preto (elétron-densas)
Membrana elástica interna de uma arteríola
M.E. de transmissão.
Microscopia Eletrônica de Varredura
• Imagens pseudotridimensionais das superfícies
de células, tecidos e órgãos.
• Elétrons não atravessam o espécime
Microscopia Eletrônica de Varredura
 Macrófago alveolar fagocitando E. coli na superfície
do vaso sanguíneo da cavidade pleural (M.E. varredura)
 Histoquímica
• Identifica a natureza química dos
constituintes celulares
• Coloração específica dos constituintes

Íons de cálcio precipitado (preto)

Cartilagem não-calcificada (marrom)

http://www.ufmt.br/bionet/conteudos/01.09.04/citoq.htm
 Imunohistoquímica
• Reação altamente específica
– Interação entre antígeno/anticorpo
• Formação de cromógeno
– Complexos enzima-antígeno-anticorpo

diagnosticar doenças inflamatórias,

infecciosas e neoplasias

https://https://www.researchgate.net/publication/265601258_Biochemica_land_pancreatic_morphological_effects_
after_isolated_ileal_interposition_in_normal_rats/figures?lo=1
 Microscopia de Fluorescência
Copyright © 2007 Dr. Salme Taagepera

• Luz
– Comprimento de onda curto
• Elétrons
– Saem e voltam a órbita
– Emitem luz
• Formando a imagem
fluorocromos

dinâmica de células vivas

 Radioautografia
• Estudo de processos biológicos em cortes de
tecido por meio de substâncias radioativas
• Radiação em emulsões fotográficas
• Usada em microscópio de luz e eletrônico

JUNQUEIRA; CARNEIRO, Histologia Básica, 10ª ed

 Tecidos em geral

Tecido epitelial
*Revestimento
Tecido
*Secreção
conjuntivo
*Absorção
*Preenchimento
*Sustentação
*Vascularização
*Nutrição
CÉLULA EPITELIAL QUANTO A FORMA

PAVIMENTOSA

CÚBICA

CILÍNDRICA
COLUNAR
QUANTO NÚMERO DE CAMADAS

EPITÉLIO
SIMPLES

*
CONJUNTIVO

EPITÉLIO
ESTRATIFICADO
CONJUNTIVO PROPRIAMENTE DITO

DENSO

FROUXO
 C
O
N E
J S
U P
Tecido mucoso Tecido elástico
N E
T C
I I
V A
O I
Tecido reticular S
S Tecido adiposo
 TECIDO CARTILAGINOSO

HIALINA ELÁSTICA FIBROCARTILAGEM

TECIDO ÓSSEO
- Sangue

neutrófilo

hemácias eosinófilo
monócito

plaquetas basófilo
linfócito
 TECIDO MUSCULAR
ESTRIADO ESQUELÉTICO

FIBRAS EM CORTE FIBRAS EM CORTE

LONGITUDINAL TRANSVERSAL
 TECIDO MUSCULAR
ESTRIADO CARDÍACO

FIBRAS EM CORTE
LONGITUDINAL
 TECIDO MUSCULAR
LISO

em
em corte
corte Transv.
Longit.
TECIDO NERVOSO
 Objetivos da aula

• Entender como o material biológico é

processado para ser observado ao
microscópio óptico e eletrônico.
• Aprender a interpretar um corte histológico
e o princípio do método utilizado para sua
coloração.
 Obrigada!

Department of Biology, Duke University. Specimen: Dividing Cell. Technique: Spinning Disc Confocal