Resumo Tcnicas Histolgicas

A Histologia o estudo da estrutura do material biolgico e das maneiras como os seus

componentes se inter-relacionam, tanto estrutural quanto funcionalmente. O estudo da
histologia se iniciou com o desenvolvimento de microscpios simples e de tcnicas para
preparo de material biolgico, tornando-o adequado para exame.
As etapas da tcnica histolgica so: coleta do material, fixao, clivagem, descalcificao,
processamento, incluso, microtomia, colorao.
A fixao a principal tcnica histolgica, tudo depende de que o material esteja bem
preservado. Existem dois mtodos de fixao: fixao fsica e fixao qumica.
A fixao fsica promove a conservao de sua amostra atravs do aquecimento ou
resfriamento e a fixao por calor ou aquecimento coagula protenas incluindo as enzimas
autolticas e dissolve os lipdios. O processo de fixao por ar frio age retardando o processo
de necrose e autlise.
A fixao qumica o processo de estabilizao de molculas pela ao de agentes qumicos.
Os principais fixadores so: agentes oxidantes, agentes desnaturantes, fixadores de
mecanismos desconhecidos, fixadores aldedos e suas combinaes.
Os principais fatores que influenciam a fixao so: temperatura, volume da mistura fixadora,
concentrao, ph da mistura fixadora, osmolaridade, espessura da amostra, tempo de fixao.
O valor do fixador deve ser 20 vezes maior que o do fragmento de tecido ou pea cirrgica.
Isso se deve ao fato de que as molculas so ligadas quimicamente ao tecido e o volume no
adequado leva ao desgastamento dessas molculas, antes de a fixao se concluir.
Os aldedos so os mais utilizados na histotecnologia, devido ao seu baixo custo e eficincia.
A coleta do material o procedimento de retirada de uma amostra viva ou morta atravs de
bipcias, necrpcias ou retiradas cirrgicas. Deve-se preparar o local e separar os utenslios a
serem utilizados no procedimento, colocar o lquido fixador dentro do frasco de boca larga. O
frasco deve ser devidamente identificado e etiquetado. A amostra deve ser colocada dentro do
frasco com o lquido fixado e fechada para evitar que ocorra a evaporao do fixador. Cabe ao
tcnico verificar a amostra, registrar, identificar, de acordo com a resoluo 1823/27 do
Conselho de Medicina.
A clivagem o processo de diminuio para melhor penetrao do fixador nas amostras. 3
milmetros, corte unidirecional, o tempo mnimo de fixao deve ser respeitado. Depois de
lavada a amostra, deve ser condicionada em lcool 70%, caso no seja levada imediatamente
ao processamento.
A descalcificao serve para identificar algumas matrizes do sistema celular. Os tipos de
descalcificadores podem ser: cidos, histoqumicos, resinas de troca inica, solues
descalcificadoras patenteadas e descalcificadores eletrolticos. No mtodo utilizado, deve ser
levado em conta, a emergncia do material, o grau de mineralizao do tecido, a colorao a
ser empregada e o tipo de fixador. Os descalcificadores so divididos em cidos fracos e
cidos fortes. Os tecidos mineralizados e bem calcificados devem ser lavados e envoltos em
uma gaze, amarrado com barbante, depois emergido no frasco com o lquido descalcificador.
O processamento visa substituir a gua nos tecidos por um meio mais slido. As etapas do
processamento so: desidratao, elastificao, infiltrao. O etanol um agente desidratante.
A clarificao consiste no processo de remoo do lcool dos tecidos, atravs de um agente
clarificador. A infiltrao a saturao das cavidades dos tecidos por uma substncia que ser
inclusa. Fatores importantes do processamento: tamanho do espcime, reagentes utilizados,

espcie animal, propriedades dos tecidos, presena de vcuos, temperatura durante o

processamento.
Incluso, a amostra colocada em parafina (microscopia de luz) ou em resina (microscopia de
luz e eletrnica) a fim de torn-la rgida e, dessa forma, permitir o corte em lminas finas no
micrtomo. Ao ser imersa em parafina fundida e colocada em uma estufa a 58-60 C, o calor
promove a evaporao do xilol e a ocupao dos espaos teciduais por parafina. O tecido
embebido por parafina se torna rgido aps ser retirado da estufa. Uma das vantagens da
resina em relao parafina que aquela produz menos artefatos, gerados pela alta
temperatura da estufa.
Microtomia, na penltima etapa, os blocos de tecido so levados ao micrtomo para serem
cortados em cortes finos de 1 a 10m. A microtomia tambm pode ser efetuada em espcimes
congelados, seja em nitrognio lquido seja por congelamento rpido, no brao de um criostato
a -20C com uma lmina de ao pr-resfriada.
Na colorao as lminas so, em seguida, coradas com corantes especficos para que possam
ser visualizadas e diferenciadas as estruturas especficas que se quer observar. Os corantes
so hidrossolveis e podem ser acidfilos ou basfilos. Os corantes acidfilos, so bsicos e
coram estruturas teciduais cidas como os cidos desoxirribonuclico (DNA) e ribonuclico
(RNA), o ncleo e os ribossomos. Como exemplo de corantes acidfilos, destacam-se a
Hematoxilina, o Azul de Metileno e o Azul de Toluidina. Os corantes basfilos, so cidos e
coram estruturas teciduais bsicas como as mitocndrias, os grnulos de secreo, protenas
citoplasmticas e colgeno. Como exemplo de corantes basfilos, destacam-se a Eosina,
Orande G, Fucsina cida.
A combinao mais utilizada a de Hematoxilina com Eosina (HE). A Hematoxilina cora em
azul ou violeta e a Eosina, em cor-de-rosa. Outros corantes utilizados so os tricrmios
(corantes de Mallory e Masson), importantes na diferenciao entre colgeno e msculo liso.
Alm deles, a impregnao por metais, como a prata e o ouro, comum no estudo de tecido
nervoso.
Colorao, as lminas so, em seguida, coradas com corantes especficos para que possam
ser visualizadas e diferenciadas as estruturas especficas que se quer observar. Os corantes
so hidrossolveis e podem ser acidfilos ou basfilos. Os corantes acidfilos, so bsicos e
coram estruturas teciduais cidas como os cidos desoxirribonuclico (DNA) e ribonuclico
(RNA), o ncleo e os ribossomos. Como exemplo de corantes acidfilos, destacam-se a
Hematoxilina, o Azul de Metileno e o Azul de Toluidina. Os corantes basfilos, so cidos e
coram estruturas teciduais bsicas como as mitocndrias, os grnulos de secreo, protenas
citoplasmticas e colgeno. Como exemplo de corantes basfilos, destacam-se a Eosina,
Orande G, Fucsina cida.
A combinao mais utilizada a de Hematoxilina com Eosina (HE). A Hematoxilina cora em
azul ou violeta e a Eosina, em cor-de-rosa. Outros corantes utilizados so os tricrmios
(corantes de Mallory e Masson), importantes na diferenciao entre colgeno e msculo liso.
Alm deles, a impregnao por metais, como a prata e o ouro, comum no estudo de tecido
nervoso.