Microbiologia

Prof Rosana Rezende de Oliveira

Curso Tecnologia de Produo Sucroalcooleira

Introduo
mikros = pequenos + bios = vida + logos = cincia

Microbiologia

o estudo dos microrganismos.

E microrganismos so as formas de vida que, originalmente, s poderiam ser

vistas com o auxlio do microscpio ptico (posteriormente, com o microscpio eletrnico). Elas incluem: Bactrias, Fungos, Vrus, Protozorios, Algas unicelulares, Virides e Prions.

Origem
Primeiros microrganismos: 3,5 - 3,8 bilhes de anos Uso de bebidas fermentadas data do surgimento das primeiras civilizaes - Egito Grcia 1 cdigo de sade pblica
Livro dos Nmeros (1000 a.C.): isolamento de pessoas com lepra ou Gonorria isolamento de cadveres.
Deuteronmio (600 a.C.): proibio do consumo de certas carnes: porco, mariscos, animais encontrados mortos

Origem
Bhagavata Purana (500 a.C.): descrio dos sintomas da peste Bubnica.

India (1300 a.C.): proibio do casamento de pessoas com tuberculose. China (50 a.C.): uso de sandlias mofadas para controle de infeces bacterianas nos ps. Jenner (1749-1823): aperfeioou um mtodo de vacinao j utilizado na India (Rig Veda, 1100 a.C.).

Classificao
Classificao dos seres vivos, de acordo com Whittaker (1969)

1.Monera (procaritos) microrganismos primitivos;

2. Protista (algas, protozorios, fungos limosos); 3. Plantae (plantas verdes, algas superiores); 4. Fungi (fungos - bolores e leveduras); 5. Animalia (animais que ingerem alimentos).

Microscopia

1 Microscpio com Lentes mltiplas Construdo por Robert Hooke (1635-1703)

O microscpio de Leeuwenhoek (16321723): Primeiras observaes de microorganismo vivos animlculos relatadas Sociedade Real de Londres em 1674.

A Histria do Microscpio
Robert Hooke, estudioso ingls, foi o primeiro (em 1665) a observar clulas. Para tal valeu-se de um rudimentar microscpio, idealizado anos antes por um outro estudioso, Anthony Van Leeuwenhoeck.

Hooke observou cortes finos de cortia, que se apresentavam ao microscpio com um aspecto similar a pequenos favos de mel empilhados. A cada um destes favos Hooke atribuiu a designao de cellulae (clulas).

A Histria do Microscpio

Cerca de dez anos mais tarde o prprio Leeuwenhoeck observou pequenos seres vivos, que designou por protozorios, aos quais mais tarde foi dada a designao de bactrias.

A Histria do Microscpio
Incio (1600): - Incorporao do microscpio aos visualizao dos materiais biolgicos estudos anatmicos; - Desenvolvimento de tcnicas de preparo para a

1663 Robert Hooke

1689 Marcello Malpighi

1750

1852

Fundamento: Sistema de lentes combinadas, que so colocadas de forma a ampliarem a imagem do objeto

Interao da luz com o espcime

Absoro

ou

Refrao dos raios de luz

Criar contrastes entre o objeto e o meio em que envolve

Microscpio

Principal instrumento da Biologia Celular e Histologia

produo de imagens aumentadas de objetos no visualizados olho n 1) De luz (ML) / ptico (comum) Modificado (variaes) com propsitos especiais Contraste de fase Invertido

Polarizao

Fluorescncia

2) Eletrnico (ME) - imagens mais aumentadas / feixe de eltrons

Microscpio eletrnico de transmisso (MET) Microscpio eletrnico de varredura (MEV)

Trajeto da luz

Centralizao do feixe de luz Iluminao de Khler

Iluminao perfeita

Menos ocorrncia de aberraes e irregularidades no trajeto luminoso

Microscopio ptico

CARACTERSTICAS DA IMAGEM
Antes

Ampliada
Depois

Simtrica
Invertida

Virtual

Microscopia

Aumento final

Objetiva

4x = Vermelha 10x = Amarela 40x = Azul claro 100x = Preta / branca

Tipos de Microscpios

Microscopia de Luz Microscopia convencional Microscopia de contraste de fase Microscopia de contraste interferencial Microscopia de campo escuro Microscopia de polarizao Microscopia de fluorescncia Microscopia confocal a laser

Microscopia eletrnica Microscopia eletrnica de transmisso Microscopia eletrnica de alta voltagem Microscopia eletrnica de varredura

Outros tipos de microscpio Microscopia de tunelamento quntico Microscopia de fora atmica

Aplicaes da Microscopia de Contraste de fase

Anlise do material biolgico sem colorao prvia: 1. Culturas de clulas 2. Exames parasitolgicos 3. Esfregaos e Raspagens de mucosas (Consultrios) 4. Sangue 5. Protozorios de ambientes aquticos 6. Algas 7. Bactrias

Diferenas de ndices de refrao

Sem colorao Cultura de clulas: neurnios Bactrias

Aplicaes da Microscopia de Contraste Interferencial

Observao de materiais biolgicos sem colorao:
1. Parasitologia: Interpretao de estruturas e apndices dos parasitos (taxonomia) 2. Anlise de massa seca celular organizao e compactao de material biolgico 3. Monitoramento de culturas celulares

Algas

Escamas

Aplicaes da Microscopia de Contraste Interferencial

Cultura Celular: macrfago

caro

Aplicaes da Microscopia de Campo Escuro

empregada para estudos de pequenos materiais: Plncton Bactrias Cristais Estruturas subcelulares (fimbrias e flagelos) Gros de plen

Microscopia de campo escuro da bactria Leptospira spp

Aplicaes da Microscopia de Fluorescncia

Identificao de compostos naturalmente fluorescentes Quantificao (Fluorometria): citoqumica normal e patolgica

Imunofluorescncia: conjugao de anticorpos a fluorocomos que permite identificao de molculas especficas

Imunocitoqumica Hibridao in situ (FISH)

Aplicaes da Microscopia confocal a laser

1. Todas as possibilidades j descritas para a microscopia de fluorescncia convencional 2. Reconstruo 3-D de organismos microscpicos 3. Aumento de sinais de fluorescncia de estruturas subcelulares. Exs: microtbulos, miofilamentos, filamentos intermedirios e elementos finos da matriz extracelular

Microscopia
Microscopio Fluorescente
Utilizado em Diagnstico atravs da Tcnica Anticorpo-Corante. Identificao Bacteriana.

Microscopio Contraste de Fase Utilizado para visualizar estruturas celulas in vivo. Visualizar clulas maiores protozorios, leveduras, algas e algumas bactrias.

Microscpio Eletrnico
Aumento de at 400.000x Visualizao Detalhes celulares Vrus Amostras coradas com metais pesados e radioativos.

Varredura

Transmisso

Aumento de at 400.000x Visualizao Detalhes celulares Vrus Tridimensional Amostras coradas com metais pesados e radioativos.

Microscpio Confocal

Microscpio Atmica

Clulas

Clulas

Introduo

Mtodos de Identificao
Colorao de Gram Criado em 1884 pelo bacteriologista Dinamarqus Hans Cristian Gram. Rotina mais importante num laboratrio de microbiologia.

Permitir dividir as bactrias em dois grupos:

a. Positivas Violeta-lugol impregna o peptidioglicano da parede celular;

b. Negativas Violeta-lugol removido da fina camada

de peptidioglicano e a Fucsina impregna o interior celular.

Mtodos de Identificao
Colorao de Gram

Introduo

Metabolismo Microbiano
Metabolismo

Catabolismo

Anabolismo

So processos metablicos que implicam na quebra de substncias complexas em substncias mais simples. Liberam energia Formao de ATP.

So processos metablicos que implicam na construo de molculas a partir de outras. Requerem energia Gasto ATP.

Metabolismo Microbiano
Reao de Oxido-Reduo

Oxidao Molcula perde eltrons.

Reduo Molcula recebe eltrons. Energia liberada durante as reaes de oxido reduo

armazenada dentro da clula na forma de ATP (Adenosina

Tri-Fosfatada). Adenosina-P~P~P Altamente energtica

Classes de organismos, quanto s fontes de energia e carbono

Metabolismo Microbiano

Metabolismo Microbiano

Metabolismo Microbiano

Metabolismo Microbiano

Respirao Aerbia

Metabolismo Microbiano
Cadeia de Transporte de Eltrons

Metabolismo Microbiano
Fermentao

Metabolismo Microbiano

Fotossntese

Importncia dos Microorganismos

GRUPO IMPORTNCIA

Bactrias

Produtores de antibiticos e antifngicos Fixadoras de nitrognio Controle biolgico Produtores de alimentos: iogurte Produtores de cidos e vitaminas Sintetizadores de hormnios por engenharia gentica

Algas Vrus Microrganismos marinhos

- Fotossintetizantes - Controle biolgico - Engenharia gentica (vetores de terapia gentica) - Base da cadeia alimentar - Produtores de alimentos: queijos, cerveja, po, vinho, rum, usque. - Produtores de antibiticos e antifngicos - Maiores decompositores do planeta - Controle biolgico

Fungos

Importncia dos Microorganismos

DOENA AIDS1 Antrax1 Botulismo1 Brucelose1 Cancro das hastes1 Cinomose1 Febre aftosa3 Ferrugem do caf2 Gonorria1 Gripe1 Hepatite1 Herpes Zoster1 Leptospirose3 Micoses1 Podrido do colmo2 Raiva3 Ttano1 Tuberculose1 Varola1 "Vassoura de bruxa2 CAUSADOR Vrus Bactria Bactria Bactria Fungo Vrus Vrus Fungo Bactria Vrus Vrus Vrus Bactria Fungos Fungo Vrus Bactria Bactria Vrus Fungo

Importncia dos Microorganismos

TOXINA Microorganismo Produtor

Aflatoxinas
Fumonisinas Toxina botulnica Toxina estafiloccica Tetanospasmina Tircotecenos LPS

Aspergillus flavus e A. parasiticus

Fusarium verticillioides Clostridium botulinum Staphylococcus aureus Clostridium tetani Fusarium sp Bactrias Gram negativas

Importncia dos Microorganismos

Importncia dos Microorganismos

Importncia dos Microorganismos

Clula de Levedura

Fermentao

Fermentao
Saccharomyces cerevisiae

Caractersticas: Famlia dos Ascomicetos; Possu forma leveduriforme;

Reproduo Assexuada por brotamento;

Aerbio Facultativo; Unicelular, imvel; Parede Celular deMananas Polmeros de Manose; Heterotrficos.

Fermentao

Aerbio Facultativo Fonte de Glicose

Acima concentrao crtica

Abaixo concentrao crtica

Fermentao

Respirao Aerbia

Fermentao

Fermentao

Fermentao

CONTAMINAO BACTERIANA Consumo de acar e nutrientes cidos ltico e actico Biomassa bacteriana Manitol Floculao da levedura

Fermentao

Tempo fermentao
Gasto de cido sulfrico Maior formao de espuma Ao estressante levedura (glicerol) Produo de toxinas (?)

Fermentao

Impacto das Leveduras Contaminantes

Fermentao
Caractersticas fermentativas das leveduras contaminantes

desejvel

espuma

floculao

Engenharia Gentica
Melhoramento por tcnicas de mutao/seleo Ex: Penicillium chrysogenum Produo de Penicilina Dcada de 40 100 unid/cm3 1976 51.000 unid/cm3 1985 200.000 unid/cm3 Tcnica do DNA Recombinante:

- Aumento da Capacidade da atividade enzimtica;

- Aumernto de cpias do genes de interesse; - Produo de Hormnios, Insulina, Interferons, Fator VIII

(Hemofilia) E.coli; S. cerevisiae; A. niger.

BENEFCIOS DO USO DAS LINHAGENS SELECIONADAS

RENDIMENTO (DIFCIL VERIFICAR)

INSUMOS (FCIL COMPUTAR OS GASTOS)