Biologia celular e tecidual

Microscopia
Matheus Reis Santos de Melo
Historia da microscopia

mikrós (do grego, pequeno)

scoppéoo (do grego observar, ver através).

Organismo Sistemas Órgãos Tecidos Células

Historia da microscopia

Limite de resolução do olho humano

Menor estrutura visível a olho nu

10 a 20 µm 20 a 50 µm
0,1 mm =100 µm
Historia da microscopia
Historia da microscopia

Teorias Desmistificação
Microrganismos Doenças
(Abiogênse) do sobrenatural

Nero Cláudio César Primeiras lentes, 1280 – Itália

Lente de Layard, uma das primeiras lentes criadas. Augusto Germânico,
Aproximadamente 721 a.C.. imperador romano
Historia da microscopia

Galileo Galilei (1564-1642)

Aumento 30X

3 lentes bi-
convexas

Diagrama de occhiolino. the museo Galileo in Florence.

Historia da microscopia

Hans Martens Janssen

Fabricante de lentes e
óculos Holandês Zacharias Janssen
(1580-1635)
MOC – Microscópio óptico composto (1590)
Historia da microscopia

Robert Hooke (1635-1703)

Livro micrografia escrito Desenho de Hooke sobre sua

pelo biólogo inglês Robert observação que levou ao termo
MOC – Microscópio “cell”. (1655).
Hooke
óptico composto
Historia da microscopia

Maior coleção de
lentes do mundo
Comerciante de tecidos;
Cientista;
Construtor de microscópios . Mais de 250 40x
microscópios 160x
280x
Anton van Leeuwenhoek
(1632-1723)
Descobertas em 1675

Bactérias Protozoarios Fluxo de sangue em

Fibra muscular
capilares
Historia da microscopia

Pioneiro nos estudos de

núcleos celulares vegetais

Robert Brown, botânico e Núcleos de células vegetais

físico escocês (1773-1858)

Página de título Prodromus Florae

Novae Hollandiae de Robert Brown
Historia da microscopia

Teoria celular
(1838)

•Todos os organismos vivos são compostos de uma ou mais

células.
•A célula é a unidade básica de estrutura e organização nos
organismos.
Matthias Schleiden, Theodor Schwann, •As células surgem de células pré-existentes.
botânico alemão fisiologista alemão
(1804-1881) (1810-1882)
Historia da microscopia

Anatomista; Descreveu as Descobriu que

Biólogo; mitocôndrias espermatozoide
fisiologista suíço. (1857) são células

Albert V. Kolliker
(1817 – 1905)

Mitocôndria Espermatozoides
Historia da microscopia

Anatomista Alemão

Descreveu em 1879 o
Walter Flemming comportamento dos
(1843-1905) cromossomos

Cromossomos durante a mitose

Historia da microscopia
Atualmente a fundação Zeiss é uma
multinacional dedicada à fabricação de
instrumentos ópticos e de precisão.

Calr Zeiss
(1816 – 1899)

Mecânico de
precisão

Microscópio óptico Microscópio óptico

invertido
Microscopia óptica

oculares

objetivas

Aumento das objetivas x aumento das oculares = aumento final

Microscopia óptica
Óleo de imersão

Difração da luz no ar (1x) Com óleo Sem óleo

Difração da luz na lâmina (1,5x)
Microscopia óptica
Lente ocular: consiste em duas lentes que ampliam a imagem gerada pelas objetivas.

Tubo ou canhão: Suporte para as lentes oculares, ajuste de espaçamento para oculares.

Revolver: Suporte giratório para lentes objetivas.

Braço ou coluna: função de estruturação do microscópio.

Platina: função de apoio para a lâmina, perdendo a lâmina e podendo deslocar pela plataforma.

Condensador ou diafragma: Redução ou ampliação da região a ser iluminada.

Lâmpada: fonte de luz.

Pé ou base: ponto de apoio/fixação do microscópio

Parafuso macrométrico: objeto de rotação para ajuste/movimentação vertical da mesa.

Parafuso micrométrico: objeto de rotação para ajuste/movimentação lateral da mesa.

Charriot: Responsável pela movimentação lateral da lâmina.

Microscopia óptica

Estrutura X aumento ≥ Limite do olho (100 µm)

Menor estrutura X 1000 = 100 µm

Menor estrutura = 100 ÷1000 = 0,1 µm ou 100 nm

Teoricamente poderia visualizar objetos de 100 nm com aumento de 1000x

Microscopia óptica
Impossível visualizar objetos menores que o espectro de luz

Comprimento de onda de luz visível (700nm – 400nm)

Teoricamente poderia visualizar objetos de 100 nm com aumento de 1000x

Microscopia óptica
Estruturas não visíveis ao
Estruturas visíveis ao M.O.
M.O.

Células eucarióticas Células procarióticas

Parede celular vegetal Vírus

plastos Membrana celular

mitocôndrias Reticulo endoplasmático

flagelos Complexo de Golgi

cílios Lisossomos

núcleo Ribossomos
Microscopia óptica

Tipos de microscópio óptico

Microscópio de campo claro

Microscópio de campo escuro

Microscópio de contraste de fase

Microscópio de polarização

Microscópio de fluorescência
Microscopia óptica
Tipos de microscopias ópticas
1. Microscópio de campo claro
Essa é a técnica mais comumente usada, quando a luz passa através da amostra, fazendo com que a área observada seja bem
iluminada. O feixe de luz passa através da amostra sendo captado pela objetiva. O microscópio usado pela maioria dos
estudantes e pesquisadores é o microscópio de campo claro.

Problemas: Distorção de coloração,

dificuldade de visualização.
Foto Hepatocitos em microscopia de campo claro
Microscopia óptica
Tipos de microscopias ópticas
2. Microscópio de campo escuro
Alguns raios luminosos incidem na amostra e são captados pela lente objetiva, o que gera “figuras” luminosas em um fundo
escuro. Apenas a luz que foi dispersa ou refratada pelas estruturas na amostra alcançam a lente.

princípio que nos permite ver as estrelas

a noite ou as partículas de pó no feixe
de luz em um projetor numa sala escura.

Espiroqueta, Treponema pallidum, responsável

pela sífilis.
Microscopia óptica
Tipos de microscopias ópticas Porções mais densas
Pontos escuros
do espécime
3. Microscópio de contraste de fase
Transforma diferentes fases dos raios de luz em diferenças luminosas,
permitindo a observação dos espécimes através do contraste gerado. Porções menos densas
Pontos claros
do espécime

Sem contraste Com contraste

Microscopia óptica de contraste de fase Saccharomyces cerevisiae,
levedura usada na produção principalmente de pão, cerveja e etanol.
https://academics.nsuok.edu Geralmente usada com amostras vivas e não coradas
Microscopia óptica
Tipos de microscopias ópticas
4. Microscópio de polarização
Constituído por dois prismas – um polarizador e outro analisador – este tipo de microscópio é
utilizado na observação de materiais birrefringentes, que produzem dupla refração (estruturas
anisotrópicas, com índices diferentes de refração como os ossos, músculos, fibras, cabelos,
etc.).

Foto através de um microscópio dos cristais crescidos do derretimento

do ácido esteárico
Microscopia óptica
Tipos de microscopias ópticas
5. Microscópio de fluorescência
A observação dos espécimes é feita através da fixação de substâncias fluorescentes (fluoro e cromos), que, ao receberem luz,
podem ser observados através do brilho gerado.

Luz ultravioleta

Destaca pontos
específicos

Fases da mitose de uma célula eucariótica. Em verde estão os

microtúbulos formando os fusos mitóticos e em vermelho o DNA.
Microscópio eletrônico de Transmissão

Inventor do Microscópio
Eletrônico de
Transmissão (MET)

Ganhador do prêmio
Nobel em 1986

Ernst Ruska (1906 – 1988)

Microscópio eletrônico de
transmissão de Ernst Ruska
Microscópio eletrônico de transmissão (MET)

Amostra super Elétrons

Feixe de elétrons transmitidos ou anteparo
fina
difratados

A imagem gerada é uma projeção bidimensional da amostra

de campo claro ou escuro, e ainda por difração de elétrons.

espectroscópicas, composicionais e cristalográficas

Grau detalhado de
(metais, ligas metálicas, cerâmicas, semicondutores, vidros,
caracterizações
polímeros, madeira, têxteis, concreto, amostras biológicas,
estruturais
Microscópio eletrônico de etc.)
transmissão (1000000x)
Microscópio eletrônico de transmissão (MET)

Imagem bidimencional

Imagem preto e branco

Sais de metais pesados

(Uranio, chumbo, Ósmio)

Placa fluorescente, filme

fotográfico, câmera CCD.
Microscópio eletrônico de transmissão (MET)
 Microscópio eletrônico de transmissão (MET)

Fonte: ResearchGate
Microscópio eletrônico de varredura (MEV)

irradiação da superfície da amostra

Forma de imagem tridimencional 100000X

Microscópio eletrônico de varredura,

FESEM JEOL JSM-7401F. USP. São Paulo.

Estrutura superficial da amostra

Microscópio eletrônico de varredura (MEV)

Elétrons retroespalhados

Elétrons secundários

Usado a vácuo

Resfriar a amostra ou
diminuir a intensidade do
feixe de elétrons
Microscópio eletrônico de varredura (MEV)
Microscópio eletrônico

Tumor de Ovário: Microscopia Eletrônica Tumor de Ovário: Microscopia Eletrônica

de transmissão de Varredura