21/02/2013

Cromatografia em
coluna clássica

Prof. Cleiton Nunes

DCA/UFLA

Cromatografia em coluna clássica

A fase estacionária está inserida

dentro de uma coluna

CLÁSSICA

ou

ALTA EFICIÊNCIA
(HPLC, GC)

1
 21/02/2013

Cromatografia em coluna clássica

PREPARATIVAS – empacotadas

Finalidades de purificação

ANALÍTICAS – empacotadas ou capilares

Finalidades de identificação ou quantificação

Cromatografia em coluna clássica

Separação: vários métodos dependendo da fase estacionária

• adsorção é a mais usada
• separação em fase normal

FE:
Mais usado:
alumina – Al2O3
sílica – SiO2

Menos usual:
carvão ativado + carvão grafitinizado
óxido de magnésio – MgO
silicato de Magnésio – Mg3Si4O10(OH)2

 Geralmente devem ser condicionados (ou ativados) para remoção de H2O adsorvida
 Para sílica e alumina 400°C por 4 h
 Demais 200°C por 2h

FM:
hexano, metil-tercbutil-eter, CHCl3, CH2Cl2

2
 21/02/2013

Cromatografia em coluna clássica

Pode ser alterada Fase móvel

durante o processo

Camada de material particulado

FE é misturada com FM
e adicionada na coluna, Amostra
aplicando vibração para evitar
bolhas
Esperar FE assentar antes do uso Fase estacionária

Placa porosa ou chumaço de lã de vidro

Controle de vazão da fase móvel

Coletor de eluato

Cromatografia em coluna clássica

injeção: detecção:
coluna: ø 10cm x 0,5-1,0 m eluição:
conta-gotas coleta manual
ø partícula 60-200μm gravidade
ou becker outras técnicas

gravimetria

análise
química

análise
espectral

etc.

3
 21/02/2013

Cromatografia em coluna clássica

Fases estacionárias alternativas

Separação dos pigmentos das folhas de papoula vermelha por cromatografia em

coluna utilizando-se sal de cozinha como adsorvente.

Cromatografia em coluna clássica

Fases estacionárias alternativas

Separação dos pigmentos das folhas de papoula vermelha por cromatografia em coluna
utilizando-se amido como adsorvente.

4
 21/02/2013

Cromatografia em coluna clássica

Fases estacionárias alternativas

Separação dos pigmentos das folhas de papoula vermelha por cromatografia

em coluna utilizando-se açúcar refinado como adsorvente.