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TCNICAS DE CROMATOGRAFIA

Ana Paula Pacheco

Classificao dos mtodos analticos CLSSICOS E INSTRUMENTAIS Chamados de mtodos de via mida Baseados em propriedades fsicas (qumicas em alguns casos )

Eletroanaltico Gravimetria Volumetria

Cromatogrfico

Espectromtrico

*Separao: interaes fsico-qumicas.

Propriedades eltricas

Propriedades pticas

Propriedades mistas*

Identificao/quantificao: propriedades pticas ou eltricas.

HISTRICO
Mikhail (Michael, Mikhael) Semenovich Tswett (1903), botnico russo: Separao de misturas de pigmentos vegetais em colunas recheadas com adsorventes slidos e ter de solventes variados.
petrleo

mistura de pigmentos
CaCO3

pigmentos separados

1906 Cromatografia = chroma [cor] + graphe [escrever] (grego)

DEFINIO
Cromatografia um mtodo fsicoqumico de separao de misturas, identificao e quantificao de seus componentes.

PRINCPIOS BSICOS
A separao depende da interao dos componentes da mistura com a fase mvel e com a fase estacionria.
A interao dos componentes da mistura com estas duas fases influenciada por diferentes foras intermoleculares, incluindo inica, dipolar, apolar, e especficos efeitos de afinidade e solubilidade.

A identificao se d mediante a comparao da interao de padres com as fases estacionrias. A quantificao feita tambm pela comparao com padres de concentraes conhecidas, atravs de curvas analticas.

CLASSIFICAO DAS TCNICAS CROMATOGRFICAS


De acordo com o sistema cromatogrfico Em Coluna Cromatografia Lquida Cromatografia Gasosa Cromatografia Supercrtica Planar Centrfuga (Chromatotron) Cromatografia em Camada Delgada (CCD) Cromatografia em Papel (CP)

CLASSIFICAO DAS TCNICAS CROMATOGRFICAS


De acordo com a fase mvel Utilizao de Gs Cromatografia Gasosa (CG) Cromatografia Gasosa de Alta Resoluo (CGAR) Utilizao de Lquido Cromatografia Lquida Clssica (CLC) Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (CLAE) Utilizao de Gs Pressurizado Cromatografia Supercrtica (CSC)

CLASSIFICAO DAS TCNICAS CROMATOGRFICAS


De acordo com a Fase Estacionria Lquida Slida Quimicamente Ligadas De acordo com o modo de separao Por Adsoro Por Partio Por Troca Inica Por Afinidade

CLASSIFICAO DAS TCNICAS CROMATOGRFICAS


Tcnica
Planar Coluna

FM

Lquido

Gs

Lquido

FE

Lq

Sl

Lq

Sl

Lq

Sl

Troca Inica

Afinidade

Fase Ligada

Excluso

Tipo de cromatografia

CP CCD CGL CGS

CLL CLS

CTI

CB

CLFL

CE

Cromatografia
Analogia O processo cromatogrfico pode ser comparado a um grupo de abelhas e moscas sobrevoando uma certa regio. Ao passarem por uma flor, espera-se algum efeito sobre as moscas e abelhas.

Fase estacionria

Analitos

Cromatografia
Analogia

Para uma mesma mistura, a simples troca da fase estacionria pode ser suficiente para alterar completamente a ordem de eluio de componentes da mistura.

Fase estacionria

Analitos

Cromatografia
Princpio Bsico Separao de misturas por interao diferencial dos seus componentes com uma FASE ESTACIONRIA (lquido ou slido) e uma FASE MVEL (lquido ou gs).

Cromatografia
Cromatografia em papel - CP
A mais simples de todas. Pode-se at fazer em casa!
Fase estacionria lquida suportada na celulose.

Fase mvel

Separao

A cromatografia em papel (CP) uma tcnica de partio, utiliza dois lquidos (lquido-lquido) sendo um fixado em um suporte slido (papel de filtro). Um bom exemplo a separao da tinta verde. Com o processo de cromatografia possvel verificar que a cor verde uma mistura de tintura azul e amarela.

Cromatografia
Cromatografia em papel - CP
A mais simples de todas. Pode-se at fazer em casa!

Desenvolvida por Consden, Gordon e Martin em 1944, bem simples e utiliza pequena quantidade de amostra. Aplica-se na separao e identificao de compostos polares hidrossolveis.

Cromatografia de Camada Delgada - CCD


Teve incio em 1938 com os trabalhos de Izailov e Shraiber, mas comeou a ser largamente utilizada na ddaca de 1960. O processo de separao est fundamentado, principalmente, no fenmeno de adsoro. Entretanto com fases estacionrias tratadas pode ocorrer tambm por partio ou troca inica.

Cromatografia

Cromatografia de Camada Delgada - CCD Termos e parmetros tcnicos

Cromatografia

Smancha Rf Ssolvente

s c

a Rfa s
b Rfb s
c Rfc s

Cromatografia de Camada Delgada - CCD

Cromatografia

FASES ESTACIONRIAS
Slica (SiO2) Alumina (Al2O3) Celulose Poliamida

Ativao de 30 a 60 min de 105 a 110 oC

Ativao de 10 min a 105 oC

Cromatografia de Camada Delgada - CCD

Cromatografia

ANLISE QUALITATIVA
- Comparao com valores de Rf tabelados - Comparao com padro eludo em conjunto - Extrao e aplicao de mtodos instrumentais

Cromatografia de Camada Delgada - CCD

Cromatografia

Concluses:
Amostra no contm a espcie B

Amostra pode conter a espcie A

Para se certificar da presena, eluir em outros solventes


Amostra

A B

Aps Eluio

Cromatografia de Camada Delgada - CCD

Cromatografia

Cromatografia Bi-dimensional

Solvente 1

Solvente 2

Cromatografia
Cromatografia planar

Chromatotron uma cromatografia de camada fina preparativa acelerada centrifugamente. Pode substituir pequenas colunas e HPLC.

FIM