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I- Materiais e Reagentes
- ter de petrleo (p.e. 30 60 oC) ou hexano
- Etanol
- Acetona
- Clorofrmio
- Sulfato de sdio anidro
- Folhas de espinafre
- Almofariz
- Pipeta de Pasteur
- Funil de separao de 60 mL
- Bquer de 50 mL
- Erlenmeyer de 25 mL
- Proveta de 10 mL
- Papel de filtro
- Placa de Petri
- Cubetas ou bquer de 100 mL
- Placas de slica gel
- Capilares
II Procedimento:
a) Preparao do extrato
Colocar em um almofariz 5-10 folhas de espinafre e alguns mililitros de
uma mistura de 2:1 de ter de petrleo ou hexano e etanol. Triturar bem as
folhas. Utilizando uma pipeta de Pasteur, e uma bolinha de algodo, filtrar o
extrato, transferindo-o para um funil de separao. Adicionar, igual volume de
gua. Girar lentamente o funil, pois a agitao brusca pode causar a formao
de emulso. Separar e descartar a fase aquosa. Repetir esta operao de
lavagem, por mais duas vezes, sempre descartando a fase aquosa. Transferir a
soluo de pigmentos para um Erlenmeyer e adicionar aproximadamente 2 g
de sulfato de sdio anidro. Aps alguns minutos, utilizando uma pipeta de
Pasteur, decantar a soluo de pigmentos do sulfato de sdio, transfirindo para
um bquer. Se a soluo no estiver fortemente colorida de verde escuro,
concentrar parte do ter de petrleo, usando uma suave corrente de ar.
b) Aplicao da amostra na placa
Utilizando um capilar, aplicar duas ou trs pores da soluo de
pigmentos sobre uma placa de slica (2,5 x 7,5 cm) a 1,0 cm de uma das
extremidades. Evitar a difuso da mancha de forma que seu dimetro no deva
ultrapassar a 2 mm durante a aplicao da amostra. Deixar o solvente
evaporar.
c) Desenvolvimento do cromatograma
Preparar uma cuba colocando uma tira de papel de filtro de 4x5 cm e 5
mL de clorofrmio. Esperar o tempo suficiente para que ocorra a completa
saturao. Colocar cuidadosamente a placa na cuba, evitando que o ponto de
aplicao da amostra mergulhe no solvente. Quando o solvente atingir cerca de
0,5 cm do topo da placa, remover a placa e marcar a frente do solvente (linha
de chegada da fase mvel). Deixar secar ao ar e observar o nmero de
manchas coloridas. Copiar a placa com as substncias separadas
(cromatograma), obedecendo fielmente a distncia entre o ponto de aplicao
e a frente do solvente, bem como a distncia percorrida por cada substncia,
iniciando pelo ponto de aplicao at o centro de maior concentrao da
mancha.
Preparar uma nova cuba usando como eluente uma mistura de CHCl 3 e
acetona (9:1). Esperar que ocorra a saturao completa e efetuar um novo
desenvovimento da placa, tendo o cuidado de no deixar que a frente do