9/2/2023

Preparações Microscópicas Fixadas -

Coloração Diferencial de Gram

Coloração diferencial

Fundamentos Teóricos:

Utiliza dois corantes

Inclui etapa de descoloração

Permite separar grupos bacterianos

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Fonte (Figura): https://pixabay.com/pt/vectors/lupa-inc%C3%B3gnita-pesquisa-d%C3%BAvida-2831367/

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Coloração de Gram

Função dos reagentes:

Gram positiva Esfregaço Gram negativa

Cristal violeta Corante primário

Lugol Mordente

Álcool Descolorante

Fucsina ou Contracorante
safranina 3
Fonte (Figura): xxxxx

Paredes Celulares de Bactérias

Gram positiva Gram negativa

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Tipos de coloração:
Coloração simples Visualizar forma e arranjo de bactérias
Formas e Arranjos:

Separar bactérias em grupos

Coloração diferencial
Ex: coloração de Gram e de de Ziehl-Neelsen).

Coloração especial Visualizar estruturas microbianas

Ex: flagelos, cápsulas, endósporos, etc. 5

Coloração diferencial de Ziehl-Neelsen:

1. Fucsina (a quente)

2. Lavagem com uma

solução álcool-ácido

3. Azul de metileno
(contracorante)

Bacilo – Rosa/Avermelhado Demais células – Azuis

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Tipos de coloração

Coloração especial de endósporos:

1. Verde malaquita (a
quente)
2. Lavagem com água

3. Safranina (contracorante)

Esporo – Verde Célula vegetativa – Avermelhada

Tipos de coloração

Colorações especiais de cápsula e de flagelos:

Cápsula - Coloração negativa Flagelos - Peritríquios

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Klebsiella pneumoniae Salmonella sp

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RESULTADOS ESPERADOS

Staphylococcus aureus

FORMA: Cocos ARRANJO: Estafilococos

Gram positiva 10

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Bacillus subtilis

FORMA: Bacilos ARRANJO: Estreptobacilos

Gram positiva 11

Escherichia coli

FORMA: Bacilos ARRANJO: Diplobacilos

Gram negativa 12

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Exercício :

Forma? Arranjo? Gram?

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Coloração de Gram

Exercício experimental:

O que seria um resultado falso positivo?

O que poderia resultar em um resultado falso positivo?

O que seria um resultado falso negativo?

O que poderia resultar em um resultado falso negativo?

Como poderia confiar no resultado da coloração de Gram?

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CAUSAS DE POSSÍVEIS RESULTADOS ERRÔNEOS OU

DUVIDOSOS NA TÉCNICA DE COLORAÇÃO DE GRAM:

1. Idade de cultura bacteriana – Gramlabilidade (resultado

falso negativo)
2. Fixação excessiva (resultado falso negativo)
3. Erro na preparação ou perda de atividade de reagentes
4. Não cobertura de todo o esfregaço com reagentes
5. Lavagem excessiva com álcool (resultado falso negativo)
6. Lavagem insuficiente com álcool (resultado falso positivo)

SOLUÇÃO: Fazer controle (executar a técnica

com culturas bacterianas de Gram conhecido)

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Coloração de Gram

Possíveis resultados experimentais: CULTURAS MISTAS

Bacilos Gram negativos + Bacilos Gram negativos +

Cocos Gram positivos Bacilos Gram positivos
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