UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEARÁ

DEPARTAMENTO INSTITUTO CIÊNCIAS DO MAR

MICROBIOLOGIA AMBIENTAL

Atividade de avaliação de conhecimento

Aula Prática 01: Técnica de Coloração de Gram
15 de setembro de 2023

Aluno: Henrique Lima

Matrícula: 470335
Curso: Engenharia Ambiental
Professora: Oscarina Viana

FORTALEZA, 2023.
 Atividade:

1. Liste os principais reagentes utilizados na técnica de coloração de Gram

explicando a função de cada um deles.

Resposta: Para a primeira prática da disciplina de Microbiologia, denominada

como Coloração de Gram que objetiva apresentar um diferencial entre as células através
da sua cor e assim classificando-as em gram-positivas e gram-negativas, foram
utilizados os seguintes reagentes:

1. Cristal Violeta: Seguindo o roteiro da prática, após a etapa A. Preparação e

Fixação do Esfregaço, temos a etapa B. Coloração de Gram em que ocorre as
imersões. Dessa forma, o primeiro reagente utilizado é o Cristal de Violeta, que
devido à ligação iônica entre os grupos básicos do corante e os grupos ácidos
dos constituintes da membrana celular das bactérias, tanto as gram-positivas
como em gram-negativas absorvem o corante. Assim, essa etapa é bastante
importante, pois o Cristal Violeta possui a função de determinar mais na frente
as gram-positivas, uma vez que essas o retêm.

2. Lugol: O segundo reagente é um suplemento iodado a partir da combinação de

iodo e iodeto de potássio, o lugol. Ele possui uma função fundamental em reter o
colorante cristal violenta que foi adicionado antes, essa combinação é chamada
de complexo cristal violeta-lugol e confere a coloração roxa classificando a
bactéria como Gram-positiva.

3. Álcool: O terceiro reagente é o álcool e possui a função de dissolver a

membrana de lipídios formadora das bactérias gram-negativas e, assim,
remover o complexo formado entre o corante e o lugol, descorando essas
bactérias, o que não ocorre com as gram-positivas.

É importante essa etapa pois ela determina a coloração final. Assim, a parede
celular das gram-positivas é caracterizada por uma camada espessa de
peptidoglicano, nas gram-negativas essa camada é mais, porém é mais complexa
devido a presença dos lipídeos que forma a camada externa. O álcool nas
 positivas desidrata a sua camada e aumenta a porosidade, que tende a prender o
cristal violeta-iodo formado anteriormente. Já nas negativas, ele aumenta a
permeabilidade e permite a perda do corante.

4. Safranina: No último passo de imersão nos reagentes, é a vez do processo de

contracolaração, utilizando a Safranina. Depois da aplicação do álcool, as gram-
negativas ficaram descoloridas, ou seja, sem apresentar, em certa intensidade, a
coloração roxa. Assim, a Safranina possui a função de evidenciar as bactérias
gram-negativas, atribuindo-as a coloração rosa. A utilização desta como corante
de fundo possibilita uma melhor visualização, uma vez que ela dista mais da
coloração roxa.

2. Após a fixação e coloração das culturas bacterianas por meio da técnica de

coloração de Gram, o material deve ser visualizado em microscópio óptico.
Quais as especificações da objetiva para se ter alta resolução e nitidez do
material?

Resposta: Após os procedimentos de lavagem, é necessário levar as lâminas

para o microscópio para que seja possível identificar as bactérias. Assim, é fundamental
que se utilize o óleo de imersão e a objetiva com 100X de aumento, conhecida como
objetiva de imersão. Essas especificações conferem uma melhor resolução e nitidez na
visualização das amostras. O óleo substitui o ar entre a objetiva e a amostra por um
meio de alto índice de refração, o que deve evitar arranhaduras na lente e corrigir a
direção da luz. E a objetiva de 100x possui a função de gerar a imagem real, invertida e
em uma dimensão maior do material contido na amostra.