IDENTIFICAÇÃO MORFOLÓGICA

INOCULANTES

Outubro 2021
 Identificação Morfológica UFC

Preparação Amostras
Etapas para Preparação da Amostra:
1. No recebimento a identificação da amostra deve estar visível;
2. Deve se iniciar o processamento da amostra o mais rápido possível.
3. Se for necessário deve realizar o armazenamento da amostra em refrigerador
ou geladeira científica, exceto amostras contendo Cromobacterium, pois baixas
temperaturas podem prejudicar o desenvolvimento do microrganismo, sendo a
temperatura ideal entre 20ºC à 23ºC.
4. Ao realizar a análise a amostra deve estar em temperatura ambiente (em torno
de 25ºC);
5. É necessário realizar a homogeneização da amostra antes da diluição;
6. Verificar odor, aspecto e coloração da amostra – importante que esses dados
sejam descritos no laudo.
Etapas para Diluição e Plaqueamento da Amostra:
As etapas a seguir foram baseadas na Intrução Normativa nº30 de 12 de novembro de
2010 – MAPA Secretária de Defesa Agropecuária:
1. Realizar a homogeneização no vórtex da amostra a ser analisada;
2. Colocar 900µl de solução salina em 6 microtubos:
▪ Colocar 100µl da amostra multiplicada no Primeiro microtubo – realizar
homogeneização no vórtex a partir desse realizar a próxima etapa;
▪ Colocar 100µl da amostra multiplicada no Segundo microtubo – realizar
homogeneização no vórtex a partir desse seguir de forma consecutiva até o
sexto microtubo.
3. A partir das diluições 5, 6 e 7 realizar a transferência de uma amostra de 100µl
para as placas com meio de cultura compatível;
4. Realizar plaqueamento de cada amostra em duplicata;
5. Realizar a semeadura em metodologia spread plate (placa cheia) com auxilio de
uma alça de Drigalski. Espalhar o material até observar que o meio de cultura
absorveu a amostra;
6. Colocar as placas na estufa a 30ºC pelo tempo estabelecido para cada
microrganismo.
Observação das Colônias nas Placas

1. Após o tempo estabelecido é necessário realizar a contagem das colônias segundo cada
microrganismo;
2. Realizar o registro fotográfico de forma nítida que abranja toda a placa com as colônias.
3. Utilizando o catálogo a seguir para orientação.
 Identificação Morfológica UFC

Bacillus subtilis
Características Morfológicas (PRÉ – INÓCULO)
Morfologia Descritivo Colônia

Formato Borda irregular

Coloração Colônia pode apresentar coloração diferente no mesmo plaqueamento

Textura Aspecto seco

Relevo Exemplo 1 protuberância central

Exemplo 2 sem protuberância
Coloração Gram Bastonete Gram Positivo

Arquivo Fotográfico

Possível ver a coloração distinta e bordas irregulares Desenvolvimento Colônia de

das colônias. Bacillus subtilis – Meio de Cultura TSA

Registro fotográfico mais de perto das colônias Coloração de Gram, apresentando bastonetes Gram
Bacillus subtilis Positivos.
 Identificação Morfológica UFC

Bacillus subtilis
Características Morfológicas (MULTIPLICADO)
Morfologia Descritivo Colônia

Formato Borda pode ficar mais regular

Coloração Colônia bege ou esbranquiçada em TSA

Textura Aspecto seco

Relevo Mais plano em relação ao pré-inóculo

Coloração Gram Bastonete Gram Positivo

Arquivo Fotográfico

Exemplo 1 de colônia de Bacillus subtillis após Exemplo 2 de colônia de Bacillus subtillis após
multiplicação multiplicação

Exemplo 3 de colônia de Bacillus subtillis após Exemplo 4 de colônia de Bacillus subtillis após
multiplicação multiplicação
 Identificação Morfológica UFC

Bacillus amyloliquefaciens
Características Morfológicas (PRÉ - INÓCULO)
Morfologia Descritivo Colônia

Formato Borda Rizóide

Coloração Extremidade bege com centro branco

Textura Enrugada

Relevo Elevado e apresenta “botão” central

Coloração Gram Bastonete Gram Positivo

Arquivo Fotográfico

Desenvolvimento Colônia de
Bacillus amyloliquefaciens Possível ver a coloração e bordas das colônias.
– Meio de Cultura TSA

Desenvolvimento Colônia de
Bacillus amyloliquefaciens Coloração de Gram, apresentando Bastonete Gram
– Meio de Cultura TSA Positivo.
 Identificação Morfológica UFC

Bacillus amyloliquefaciens
Características Morfológicas (MULTIPLICADO)
Morfologia Descritivo Colônia

Formato Borda Rizóide as vezes com margem lobulada

Coloração Extremidade bege com centro branco

Textura Enrugada

Relevo Elevado e apresenta “botão” central

Coloração Gram Bastonete Gram Positivo

Arquivo Fotográfico

Exemplo 1 de colônia de Bacillus amyloliquefaciens

Exemplo 2 de colônia de Bacillus amyloliquefaciens
após multiplicação
após multiplicação

Exemplo 3 de colônia de Bacillus amyloliquefaciens Exemplo 4 de colônia de Bacillus amyloliquefaciens

após multiplicação após multiplicação
Identificação Morfológica UFC

Bacillus arybhattai
Características Morfológicas (PRÉ – INÓCULO)
Morfologia Descritivo Colônia

Formato Borda regular arredondadas

Coloração Alternância em cores bege e amarelado

Textura Pouco Mucoíde

Relevo Convexo

Coloração Gram Bastonete Gram Positivo

Arquivo Fotográfico

Desenvolvimento Colônia de
Desenvolvimento das colônias em meio de cultura
Bacillus arybhattai
TSA.
– Meio de Cultura TSA

Desenvolvimento Colônia de Coloração de Gram, apresentando Bastonetes Gram

Bacillus arybhattai Positivo.
– Meio de Cultura TSA
 Identificação Morfológica UFC

Bacillus arybhattai
Características Morfológicas (MULTIPLICADO)
Morfologia Descritivo Colônia

Formato Borda regular arredondadas

Coloração Alternância em cores bege e branco

Textura Pouco Mucoide

Relevo Convexo

Coloração Gram Bastonete Gram Positivo

Arquivo Fotográfico

Exemplo 1 de colônia de Bacillus arybhattai

após multiplicação Exemplo 2 de colônia de Bacillus arybhattai
após multiplicação

Exemplo 3 de colônia de Bacillus arybhattai Exemplo 4 de colônia de Bacillus arybhattai

após multiplicação após multiplicação
 Identificação Morfológica UFC

Pseudomonas fluorescens
Características Morfológicas (PRÉ – INÓCULO)

Morfologia Descritivo Colônia

Formato Circular com borda regular

Coloração Esverdeada

Textura Lisa

Relevo Convexo

Coloração Gram Bastonete Gram Negativo

Arquivo Fotográfico

Desenvolvimento Colônia de
Pseudomonas fluorescens Possível ver a coloração e bordas das colônias.
– Meio de Cultura Pseudomonas F

Desenvolvimento Colônia de
Pseudomonas fluorescens Coloração de Gram, apresentando Bastonetes Gram
– Meio de Cultura Pseudomonas F Negativo.
 Identificação Morfológica UFC

Pseudomonas fluorescens
Características Morfológicas (MULTIPLICADO)
Morfologia Descritivo Colônia

Formato Circular com borda regular

Coloração Esverdeada

Textura Lisa

Relevo Convexo

Coloração Gram Bastonete Gram Negativo

Arquivo Fotográfico

Exemplo 1 de colônia de Pseudomonas Exemplo 2 de colônia de Pseudomonas

fluorescens após multiplicação fluorescens após multiplicação

Exemplo 3 de colônia de Pseudomonas Exemplo 4 de colônia de Pseudomonas

fluorescens após multiplicação fluorescens após multiplicação
 Identificação Morfológica UFC

Bacillus megaterium
Características Morfológicas (PRÉ – INÓCULO)
Morfologia Descritivo Colônia

Formato Circular com borda regular

Coloração Bege

Textura Mucoide

Relevo Convexo

Coloração Gram Bastonete Gram Positivo

Arquivo Fotográfico

Desenvolvimento Colônia de
Possível ver a coloração e bordas das colônias.
Bacillus megaterium
– Meio de Cultura TSA

Desenvolvimento Colônia de Coloração de Gram, apresentando bastonetes Gram

Bacillus megaterium positivo. Arranjo em cadeia.
– Meio de Cultura TSA
 Identificação Morfológica UFC

Bacillus megaterium
Características Morfológicas (MULTIPLICADO)
Morfologia Descritivo Colônia

Formato Circular com borda regular

Coloração Bege, amarelado

Textura Lisa ou Mucoide

Relevo Convexo

Coloração Gram Bastonete Gram Positivo

Arquivo Fotográfico

Exemplo 1 de colônia de Bacillus megaterium Exemplo 2 de colônia de Bacillus megaterium

após multiplicação após multiplicação

Exemplo 4 de colônia de Bacillus megaterium

Exemplo 3 de colônia de Bacillus megaterium
após multiplicação (colônias maiores)
após multiplicação
 Identificação Morfológica UFC

Azospirilum brasilense
Características Morfológicas (PRÉ – INÓCULO)
Morfologia Descritivo Colônia

Formato Circular com Borda regular

( possui duas cepas: cepa 1 – menor, cepa 2 - maior)
Coloração Cepa 1 - Levemente Bege, esbranquiçada
Cepa 2 – Bege mais escuro, amarelado
Textura Lisa

Relevo Convexo

Coloração Gram Bastonete Gram Negativo

Arquivo Fotográfico

Desenvolvimento Colônia de
Azospirilum brasilense – Meio de Cultura SoluFarmAz Evidenciando as duas cepas A: Abv6 e B: Abv5.

Desenvolvimento Colônia de Coloração de Gram, apresentando cocos bacilos Gram

Azospirilum brasilense – Meio de Cultura SoluFarm Az negativo.
 Identificação Morfológica UFC

Azospirilum brasilense
Características Morfológicas (MULTIPLICADO)
Morfologia Descritivo Colônia

Formato Circular com borda regular

( possui duas cepas: cepa 1 – menor, cepa 2 - maior)
Coloração Cepa 1 - Levemente Bege, esbranquiçada
Cepa 2 – Bege mais escuro, amarelado
Textura Lisa ou Mucoide

Relevo Convexo

Coloração Gram Bastonete Gram Negativo

Arquivo Fotográfico

Exemplo 1 de colônia de Exemplo 2 de colônia de

Azospirilum brasilense - meio de cultura TSA Azospirilum brasilense - meio de cultura TSA

Exemplo 3 de colônia de Exemplo 4 de colônia de

Azospirilum brasilense - meio de cultura Azospirilum brasilense - meio de cultura
SoluFarmAz SoluFarmAz
 Identificação Morfológica UFC

Bradirizobium
Características Morfológicas (PRÉ – INÓCULO)
Morfologia Descritivo Colônia

Formato Circular com Bordas Definidas

( possui duas cepas: cepa 1 – menor, cepa 2 - maior)
Coloração Cepa 1 - Levemente Rosa
Cepa 2 – Levemente Rosa
Textura Mucoide

Relevo Elevado

Coloração Gram Cocobacilo Gram Negativo

Arquivo Fotográfico

Cepa 5079

Cepa 5080

Desenvolvimento das 2 cepas de Desenvolvimento Colônia de

Bradirizobium– Meio de Cultura SoluFarmRZB Bradirizobium– Meio de Cultura SoluFarmRZB

Coloração de Gram, apresentando cocobacilo Gram

Possível ver a coloração e bordas das colônias.
negativo.
 Identificação Morfológica UFC

Bradrizobium
Características Morfológicas (MULTIPLICADO)
Morfologia Descritivo Colônia

Formato Circular com Bordas Definidas

( possui duas cepas: cepa 1 – menor, cepa 2 - maior)
Coloração Quando o meio de cultura tiver o corante vermelho congo as colônias
podem variar de rosado, salmão, alaranjado, laranja e vermelho. Sendo
possível haver diferentes colorações em uma mesma placa de Petri.
Textura Mucoide / Extremamente mucoide

Relevo Elevado

Coloração Gram Cocobacilo Gram Negativo

Arquivo Fotográfico

Exemplo 1 de colônia de Exemplo 2 de colônia – Evidenciando as colorações

Bradirizobium - meio de cultura SoluFarmRZB diferentes em meio SoluFarmRZB, devido ao vermelho
congo

Exemplo 3 evidenciando colônias extremamente Exemplo 4 de colônia de

mucóides no meio de cultura YMA Bradirizobium - meio de cultura YMA
 Identificação Morfológica UFC

Cromobacterium
Características Morfológicas (PRÉ - INÓCULO)
Morfologia Descritivo Colônia

Formato Circular com borda regular

Coloração Pode produzir violaceína, apresentando coloração roxa, lilás ou translúcida

Textura Lisa

Relevo Convexo

Coloração Gram Cocobacilo Gram Negativo

Arquivo Fotográfico

Desenvolvimento da colônia de Cromobacterium em Desenvolvimento da colônia de Cromobacterium

meio de cultura TSA evidenciando a coloração roxo escuro

Exemplo 3 da colônia de Cromobacterim em meio Coloração de Gram, apresentando bastonete Gram

TSA. negativo.
 Identificação Morfológica UFC

Cromobacterium
Características Morfológicas (MULTIPLICADO)
Morfologia Morfologia Descritivo Colônia
Formato Formato Circular com borda regular

Coloração Coloração Pode produzir violaceína, apresentando

coloração roxa, lilás ou translúcida
Textura Textura Lisa
Relevo Relevo Convexo
Coloração Gram Coloração Gram Cocobacilo Gram Negativo

Arquivo Fotográfico

Exemplo 1 de colônia de Exemplo 2 de colônia – Evidenciando as colorações

Cromobacterium - meio de cultura TSA diferentes em meio TSA

Exemplo 3 de colônia Cromobacterium em meio de Exemplo 4 de colônia de

cultura TSA Cromobacterium - meio de cultura TSA
 Identificação Morfológica UFC

Bacillus pumilus
Características Morfológicas (PRÉ - INÓCULO)
Morfologia Descritivo Colônia

Formato Borda rizóide

Coloração Bege, acinzentado

Textura Enrugada

Relevo Convexo

Coloração Gram Bastonete Gram Positivo

Arquivo Fotográfico

Desenvolvimento da colônia de Bacillus pumilus em Possível ver a borda rizóide e o centro diferenciado das
meio de cultura TSA colônias de Bacillus pumilus.

Desenvolvimento mais de perto das colônias de Coloração de Gram, apresentando bastonete Gram
Bacillus pumilus. positivo.
 Identificação Morfológica UFC

Bacillus pumilus
Características Morfológicas (MULTIPLICADO)
Morfologia Morfologia Descritivo Colônia
Formato Formato Circular ou rizóide

Coloração Coloração Bege, acinzentado

Textura Textura Enrugada

Relevo Relevo Elevado com protuberâncias
Coloração Gram Coloração Gram Cocobacilo Gram Negativo

Arquivo Fotográfico

Exemplo 1 de colônia de Exemplo 2 de colônia – Evidenciando a protuberância

Bacillus pumilus - meio de cultura TSA com textura enrugada.

Exemplo 3 evidenciando diferentes colorações na

mesma plca de Petri. Exemplo 4 de colônia em meio de cultura TSA
 Identificação Morfológica UFC

Bacillus amyloliquefaciens
cepa 2
Características Morfológicas (PRÉ - INÓCULO)
Morfologia Descritivo Colônia

Formato Borda Rizóide

Coloração Bege ou branca

Textura Enrugada

Relevo Irregular

Coloração Gram Bastonete Gram Positivo

Arquivo Fotográfico

Desenvolvimento Colônia de
Bacillus amyloliquefaciens Possível ver a coloração e bordas das colônias.
– Meio de Cultura TSA

Possível ver a diversidade de formatos das colônias de

Bacillus amyloliquefaciens Coloração de Gram, apresentando Bastonete Gram
– Meio de Cultura TSA Positivo.
 Identificação Morfológica UFC

Bacillus subtilis cepa 2

Características Morfológicas (PRÉ – INÓCULO)
Morfologia Descritivo Colônia

Formato Borda Rizóide

Coloração Bege fosco

Textura Aspecto seco

Relevo Irregular

Coloração Gram Bastonete Gram Positivo

Arquivo Fotográfico

Desenvolvimento das colônias de Bacillus subtilis em Desenvolvimento Colônia de

meio de cultura TSA. Bacillus subtilis – Meio de Cultura TSA

Registro fotográfico mais de perto das colônias Coloração de Gram, apresentando bastonetes Gram
Bacillus subtilis, evidenciando as bordas rizóides. Positivos.
 Identificação Morfológica UFC

Bacillus subtilis cepa 2

Características Morfológicas (MULTIPLICADO)
Morfologia Descritivo Colônia

Formato Borda irregular ou rizóide

Coloração Colônia bege ou esbranquiçada em TSA

Textura Aspecto seco

Relevo Mais plano em relação ao pré-inóculo

Coloração Gram Bastonete Gram Positivo

Arquivo Fotográfico

Exemplo 1 de colônia de Bacillus subtillis após Exemplo 2 de colônia de Bacillus subtillis após
multiplicação multiplicação

Exemplo 3 de colônia de Bacillus subtillis após Exemplo 4 de colônia de Bacillus subtillis após
multiplicação multiplicação
 Identificação Morfológica UFC

Bacillus amyloliquefaciens
cepa 2
Características Morfológicas (MULTIPLICADO)
Morfologia Descritivo Colônia

Formato Borda Rizóide

Coloração Bege e branca

Textura Enrugada

Relevo Irregular

Coloração Gram Bastonete Gram Positivo

Arquivo Fotográfico

Exemplo 1 de colônia de Bacillus amyloliquefaciens

Exemplo 2 de colônia de Bacillus amyloliquefaciens
após multiplicação
após multiplicação

Exemplo 3 de colônia de Bacillus amyloliquefaciens Exemplo 4 de colônia de Bacillus amyloliquefaciens

após multiplicação após multiplicação
 Identificação Morfológica UFC

Bacillus thuringiensis
Características Morfológicas (PRÉ - INÓCULO)
Morfologia Descritivo Colônia

Formato Circular com borda irregular

Coloração Acizentado, bege

Textura Lisa

Relevo Plano

Coloração Gram Bastonete Gram Positivo

Arquivo Fotográfico

Desenvolvimento Colônia de
Bacillus thuringiensis Possível ver a coloração e bordas das colônias.
– Meio de Cultura TSA

Desenvolvimento Colônia de
Bacillus thuringiensis Coloração de Gram, apresentando Bastonete Gram
– Meio de Cultura TSA Positivo.
 Identificação Morfológica UFC

Bacillus thuringiensis
Características Morfológicas (MULTIPLICADO)
Morfologia Descritivo Colônia

Formato Borda irregular

Coloração Acizentado, bege (fosco)

Textura Lisa

Relevo Plano

Coloração Gram Bastonete Gram Positivo

Arquivo Fotográfico

Exemplo 1 de colônia de Exemplo 2 de Colônia de

Bacillus thuringiensis Bacillus thuringiensis
– Meio de Cultura TSA – Meio de Cultura TSA

Possível ver a coloração e bordas das colônias. Presença de cristais na colaração de Gram após 5 dias
de incubação da placa.
 Identificação Morfológica UFC

Coloração de Gram
Passo a Passo

1. Em uma lâmina colocar uma gota de água destilada e com uma alça
bacteriológica pegar uma pequena fração de uma colônia;
2. Espalhar a amostra na lâmina fazendo movimentos circulares;
3. Fixar em fogo ou aguardar a secagem total desse material;
4. Realizar a coloração de Gram de acordo com as instruções do Kit de coloração;
5. Analisar no microscópio óptico em lente de maior aumento, utilizando o óleo de
imersão.
6. Após análise realizar o registro fotográfico da lâmina (essa fotografia deve estar
no laudo).

Registro Fotográfico Laudo

Modelo do enquadro fotográfico

Foto 1 – Represente a placa por completo.

Foto 2 – Que tenha um zoom nas colônias.
Foto 3 – Coloração de Gram (forma visível).