9/2/2023

Preparações Microscópicas Fixadas -

Coloração Simples

Preparações microscópicas fixadas

Procedimento experimental:

Objetivos

Manipulação asséptica de culturas bacterianas

Preparo de esfregaços de diferentes culturas bacterianas

Execução da fixação dos esfregaços

Execução da técnica de coloração simples

Observação de formas e arranjos de bactérias

2

1
 9/2/2023

Manipulação asséptica

Procedimento experimental:
Como usar o Bico de Bunsen?

1. Posicionar o bico de Bunsen a sua frente na bancada

2. Acender a chama do bico de Bunsen

3. Regular a entrada de ar pelo movimento do anel na

base do bico de Bunsen até atingir uma chama mais azul

4. Trabalhar sempre próximo em torno de 15 cm e

atrás da chama

Manipulação asséptica de culturas microbianas

2
 9/2/2023

Preparações microscópicas fixadas

Preparo do esfregaço:
A. Espalhar a cultura,

B. Secar ao ar,

C. Passar a lâmina na chama 3X Fixação.

5

Preparações microscópicas fixadas

Características e vantagens das preparações microscópicas fixadas

• O preparo de esfregaço permite a observação do espécime com maior
aumento (1000X), dispensa o uso de lamínula
• A fixação do esfregaço resulta na morte das células, paralisação das
atividades celulares (DESVANTAGEM)
• A fixação por calor ou reagentes químicos (ácidos ou bases concentrados)
ocorre em decorrência da desnaturação e coagulação das proteínas do
espécime
• Preparações microscópicas fixadas são permanentes
• O objetivo das técnicas de coloração é aumentar o contraste
• A coloração simples utiliza um corante
• O objetivo da coloração simples é a observação da forma e arranjo celular
6

3
 9/2/2023

Morfologia de procariotos

Formas mais comuns de procariotos:

(1) COCOS - Esférica

Ex.: Staphylococcus aureus
1
3

(2) BACILOS - Cilíndrica

2
Ex.: Escherichia coli

(3) ESPIRALADAS
Ex.: Spirillum sp.
7

Morfologia de procariotos

Arranjos celulares em cocos:

Estreptococcos

Diplococos

Tétrades

Sarcina

Estafilococos
8

4
 9/2/2023

Morfologia de procariotos

Arranjos celulares em cocos:

Estreptococos Diplococos

Estafilococos Tétrades

Morfologia de procariotos

Arranjos celulares em bacilos:

Diplobacilos Estreptobacilos

10

5
 9/2/2023

Preparações Microscópicas Fixadas -

Coloração Simples

Coloração Simples

Fixação. Etapas:

B. Cobrir com o corante,

A. Passar a lâmina na chama 3X C. Remover excesso com água,

D. Secar ao ar ou com
E. Observar ao microscópio. papel absorvente, 12

6
 9/2/2023

Uso do óleo de imersão na objetiva de 100X

Importância do óleo de imersão:

Óleo de imersão – Índice de

refração igual ao do vidro
(lâmina e lente).

13

Uso do óleo de imersão na objetiva de 100X

Importância do óleo de imersão:

Diminuir a distorção
da luz e aumentar a
qualidade da imagem

14

7
 9/2/2023

15

RESULTADOS EXPERIMENTAIS
ESPERADOS

Coloração simples

Resultado experimental:
Staphylococcus aureus
Cristal violeta ou Safranina/Fucsina

FORMA: Cocos ARRANJO: Estafilococos AUMENTO: 1000x

16

8
 9/2/2023

Coloração simples

Resultado experimental:
Micrococcus luteus
Cristal violeta ou Safranina/Fucsina

FORMA: Cocos ARRANJO: Tétrades AUMENTO: 1000x

17

Coloração simples

Resultado experimental:
Bacillus subtilis
Cristal violeta ou Safranina/Fucsina

FORMA: Bacilos ARRANJO: Estreptobacilos AUMENTO: 1000x

18

9
 9/2/2023

Coloração simples

Resultado experimental:
Escherichia coli
Cristal violeta ou Safranina/Fucsina

FORMA: Bacilos ARRANJO: Diplobacilos AUMENTO: 1000x

19

Obrigado(a)!

10