Observação de células eucarióticas e a

sua afinidade a corantes ácidos e

básicos

Biologia Molecular da Célula

1º Ano de Bioquimica
Ano Letivo 2020/2021
Docente: Graça Maria Pereira da Costa
Discente: Edward Sousa (2109220)
13 de novembro de 2020
 INTRODUÇÃO
Define-se como coloração ao processo no qual um corpo é colorido ou
toma a cor pela ação de uma substância corante e que não desaparece quando
lavado com a mesma substância em que foi dissolvido o corante.. Ao longo dos
anos no estudo dos preparados biológicos uma limitante fundamental tem sido a
pequena variação na absorção de luz nos diferentes componentes da célula;
isto, somado ao facto do microcópio ótico possuir um contraste reduzido, faz a
observação de determinadas entidades um trabalho árduo. Este problema tem
sido solucionado graças ao processo de coloração; devido à propiedade de
distintos componentes celulares de incorporar com intensidade variável estas
substâncias corantes. O que faz com que nós consigamos observar um
determinado componente é a sua capacidade de absorver radiação na faixa da
luz visível, cada cor está relacionada com um comprimento de onda específico;
os nossos olhos conseguem detectar uma faixa de radiação que vai de 400 a
700 nanômetros. Alguns compostos orgânicos podem absorver radiação nesses
comprimentos de onda de cada cor. Na pesquisa de novos corantes foi então
necessário sintetizar compostos que pudessem absorver radiação. Um exemplo
do processo de coloração pode ser observado na figura 1 (Gomes, A.R.;
Zaiden, S.F.; Nakaghi, L.S. O; 2008).
Hoje em dia, existe uma grande
variedade de corantes com diversas
clasificações; entre elas, existem os
chamados corantes ácidos e básicos. Os
corantes ácidos são aqueles que têm carga
negativa e afinidade com o citoplasma
(ex. Eosina), Os corantes básicos possuem
carga positiva e têm afinidade pela
cromatina nuclear e cartilagem (ex. Azul
de metileno). Os componentes de
estruturas que reagem com um corante
Figura 1 – Tecidos do intestino sendo básico são considerados basófilos
corados por PAS (coloração ácido- enquanto que os componentes do tecido
periódico-Schiff)
que reagem com corantes ácidos são
considerados acidófilos. A metacromasia é a mudança da cor do corante
depois de reagir com os componentes tecidulares.
Um dos seres eucarióticos mais simples e que foi objeto de estudo no
presente trabalho laboratorial foi a levedura Saccharomyces cerevisiae, um
fungo unicelular que se pode reproduzir assexuadamente por dois processos:
fissão binária (divisão de uma célula em duas por mitose, cada uma com o
mesmo genoma da “célula-mãe”) ou gemulação (desenvolvimento de um anel
de quitina à volta da área onde se formará a protuberância, que será expelida
através da parede celular do progenitor, com menores dimensões). Possui ciclo
de vida diplobionte (figura 2): inicia-se a fase haploide (α) com a meiose de
uma célula diplóide resultando numa estrutura contendo quatro produtos da
meiose (ascósporos). O Inicio da fase diploide (a) dá-se com a conjugação de
duas células haplóides e formação de uma célula diplóide que prolifera
vegetativamente. A conjugação em leveduras ocorre entre células de tipo
sexual diferente, designados por a e α.
Na sua parte interna, delimitada por
uma membrana celular bem definida e
também por uma parede celular; as
levedura possuem um núcleo, vacúolo,
retículo endoplasmático,
mitocôndrias, aparelho de Golgi,
cabos de actina, vesículas excretórias
e glóbulos de gordura (figura 3).

Figura 2 – Ciclo de vida resumido de

Saccharomyces cerevisiae

As leveduras enquadram-se no reino

Fungi e são organismos anaeróbios
facultativos porque conseguem realizar a
respiração celular na presença de oxigénio
(aeróbia) ou na sua ausência (anaeróbia).
São usadas industrialmente para a fabrico
de cervejas e pão; mas também como uma
fonte de nutrientes pelo seu alto valor
proteico e vitamínico do complexo B.

Figura 3 – Partes da levedura

Saccharomyces Cerevisiae.

MATERIAIS E METODOS
Com o objetivo de observar a afinidade de diferentes corantes ácidos e
básicos com os componentes celulares de Saccharomyces cerevisiae, foi
realizada uma preparação temporária do referido fungo com água destilada
numa placa de Petri, a preparação foi logo tranferida a um tubo de ensaio. Com
o uso de uma pipeta de Pasteur foi colocada uma gota da solução numa lâmina
de vidro que foi coberta superiormente por uma lamela. Com o uso do
microscópio ótico, foi observada a amostra com ampliações de 50x, 100x,
400x e 1000x. Para a observação em ampliações de 1000x, foi usado óleo de
imersão (colocou-se uma gota numa zona de interesse da lâmina, fazendo
contacto direto com a objetiva de 100x). Após o registo das observações
realizadas, usou-se xilol para a limpeza do óleo de imersão, empregando para
o efeito um cotonete de algodão e limpando com movimentos circulares a
objetiva, a lâmina e o condensador.
 Os corantes usados nesta experiência foram o azul de metileno, Lugol
de Gram, Giemsa e o Carmim acético. Para o emprego dos corantes primeiro
aplicaram-se duas gotas da preparação temporária numa lâmina de vidro que foi
posteriormente secada com calor usando uma lamparina de álcool e uma
pinças de madeira; logo, foram aplicadas duas gotas de corante e deixaram-se
atuar por um tempo: azul de metileno (1 minuto), Lugol de Gram (1 minuto),
Giemsa (7 minutos) e Carmim acético (15 minutos). Após do tempo,
escorreram-se as lâminas com água corrente e água destilada. Após a sua
secagem ao ar, foram cobertas superiormente por uma lamela e observadas em
todas as ampliações do microscópio, segundo o mesmo procedimento usado
na observação das leveduras sem coloração. A seguir mostram-se esboços
das observações realizadas com ampliação de 1000x, das leveduras sem
coloração (figura 4) e com os corantes anteriormente referidos (figura 5, 6, 7 e
8).

Figura 4 e 5 – Leveduras sem corolação e com azul de metileno (1000x).

Figura 6 e 7 – Leveduras com Lugol de Gram e Giemsa.

 RESULTADOS E DISCUSSÃO
Para todas as preparações foram observadas
pequenas estruturas arredondadas,
aglomeradas entre si de forma variável e que
evidenciavam em alguns casos pequenas
saliências (isto é, evidenciavam o processo de
gemulação); estas estrutururas arredondadas
correspondiam as leveduras da espécie
Saccharomyces cerevisiae. Para a
determinação das dimensões médias destes
organismos, foram realizadas cinco (5)
medições da largura e do comprimento das
células das leveduras a partir da figura 9 (Costa,
2020):
Figura 8 – Leveduras com Carmim
acético

Tabela 1 – Cálculo da média e o desvio padrão

da largura e comprimento das células de
leveduras.

Célula Largura Comprimento

(µm) (µm)
1 12,5 13,15
2 5,26 12,5
3 8,33 13,15
4 10 11,6
5 8,33 15,62
Média 8,884 13,20
Desvio 2,3693 1,3350
Figura 9 – Leveduras coradas com azul padrão
de metileno.

Assim, as dimensões aproximadas (largura x comprimento) das células

das leveduras observadas foram de 8,884x13,20µm e os seus desvios padrão
foram respetivamente de 2,3693 e 1,3350.
Para o azul de metileno, como evidenciado pela figura 5, foi possível
distingir com melhor detalhe o núcleo da célula, isto devido ao facto deste
corante ter mais afinidade com os componentes basófilos (núcleo e hetero
cromatina), confirma-se então que o azul de metileno é um corante básico. Com
o Lugol de Gram (figura 6) foi possível observar pequenos pontos no interior
das células das leveduras, os quais correnpondiam aos filamentos
citoplasmáticos (tecidos acidófilos); o que quer dizer que o Lugol de Gram é
um corante ácido. Com o Giemsa e o carmím acético (figuras 7 e 8) foi possível
colorir as células, mas não reconhecer nem tecidos basófilos nem acidófilos;
isto devido, provávelmente, ao facto do tempo de aplicação do corante não ter
sido suficiente, ao facto de existir pouca afinidade entre os componentes
intracelulares e os corantes, ou então devido a erros na técnica de preparação
das amostras com os corantes.
 CONCLUSÕES
Para este tipo de observações, o Microcópio Eletrónico de
Transmissão (MET) é ideal para a visualização mais detalhada dos
componentes tecidulares basófilos e acidófilos de Saccharomyces cerevisiae;
provindo imagens mais claras e consequêntemente melhores resultados
experimentais. Embora no presente trabalho laboratorial tenha sido utilizado o
microcópio ótico (que, em comparação com o MET possui menor resolução)
foi ainda possível observar organelos intracelulares com o azul de metileno e o
Lugol de Gram. Entre estes dois corantes, aquele que permitiu uma melhor e
mais variada visualização de organelos foi o azul de metileno, foi o corante
mais interessante na opinião do investigador.
É possível concluir então que os corantes com melhor afinidade para os
componentes de Saccharomyces cerevisiae foram o azul de metileno e o Lugol
de Gram; adicionalmente seria também possível concluir de maneira hipotética
que o giemsa e o carmim acético possuem menores afinidades com os
referidos componentes tecidulares.

REFERÊNCIAS
 Pires, I., 7. Observação de alguns organelos celulares (1),
encurtador.com.br/jmG89, acedido em 13/11/2020.
 Vidal, D. B., Colorantes e coloración I, encurtador.com.br/dloG3,
acedido em 13/11/2020.
 Lorena, S., Corantes, encurtador.com.br/muvJ7, acedido em 13/11/2020.
 Desconhecido, 2011, Colorações: Histoquímicas,
encurtador.com.br/msBOR, acedido em 13/11/2020.
 Oliveira, R., 2006, Ciclo de vida das leveduras,
encurtador.com.br/gnBC2, acedido em 13/11/2020.
 Desconhecido, Leveduras, https://www.todamateria.com.br/leveduras/,
acedido em 13/11/2020.
 Desconhecido, Cissiparidade ou Fissão Binária,
encurtador.com.br/jnyX5, acedido em 13/11/2020.
 Moreira, C.; Feijó, J., 2010, Gemulação, encurtador.com.br/eMNRS,
acedido em 13/11/2020.
 Desconhecido, Qual é a diferença entre microscópio ótico e
eletrônico, encurtador.com.br/dyCM5, acedido em 14/11/2020.
 Costa, G., 2020, Célula epitelial da mucosa bucal (célula de
organismo do Reino Animalia e célula de levedura (célula do
organismo do Reino Fungi), Funchal.