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CURSO DE ENFERMAGEM
COLORAO DE GRAM
FORTALEZA
2015
COLORAO DE GRAM
FORTALEZA
2015
RESUMO
SUMRIO
INTRODUO..............................................................................................................4
2
2.1
COLORAO DE GRAM.............................................................................................5
Procedimento do Mtodo de Gram.................................................................................6
3
3.1
3.1.1
3.1.2
3.1.3
3.1.4
3.1.5
3.1.6
3.1.7
3.1.8
3.2
3.2.1
3.2.2
3.2.3
3.2.4
3.2.5
3.2.6
3.2.7
3.2.8
CONCLUSO..............................................................................................................16
REFERNCIAS........................................................................................................................17
INTRODUO
A tcnica de Gram, tambm conhecida como colorao de Gram, um mtodo de
colorao de bactrias desenvolvido pelo mdico dinamarqus Hans Christian Joachim Gram
(1853-1938), em 1884, o qual permite diferenciar bactrias com diferentes estruturas de
parede celular a partir das coloraes que estas adquirem aps tratamento com agentes
qumicos especficos. O mtodo consiste em tratar sucessivamente um esfregao bacteriano,
fixado pelo calor, com os reagentes cristal violeta, lugol, etanol e fucsina bsica. As bactrias
que adquirem a colorao azul violeta so chamadas de Gram-positivas e aquelas que
adquirem a colorao vermelha so chamadas de Gram-negativas.
O mtodo da colorao de Gram baseado na capacidade das paredes celulares de bactrias
Gram-positivas de reterem o corante cristal violeta no citoplasma durante um tratamento com
etanol enquanto as paredes celulares de bactrias Gram-negativas no o fazem. A colorao de
Gram um dos mais importantes mtodos de colorao utilizados em laboratrios de
microbiologia e de anlises clnicas.
COLORAO DE GRAM
A colorao de Gram uma colorao diferencial que permite dividir as bactrias em
duas classes: Bactrias Gram positivas e Gram Negativas. Graas a esta tcnica podemos
classificar e diferenciar as bactrias e esta diferenciao est baseada na diferente estrutura e
composio, no diferente teor lipdico da parede celular de dessas bactria.
A tcnica foi desenvolvida Hans Christian Joachim Gram (13 de setembro de 1853 14 de
novembro de 1938) foi um bacteriologista da Dinamarca. Filho de Frederik Terkel Julius
Gram, um professor de jurisprudncia, e Louise Christiane Roulund. Gram estudou botnica
na Universidade de Copenhagen e foi assistente em botnica do zologo Japetus Steenstrup.
Seu interesse por plantas o introduziu s bases da farmacologia e o uso do microscpio.
Entrou na Escola de Medicina em 1878, graduando-se em 1883. Em Berlim (1884) Hans
Gram observou que as bactrias, depois de serem corantes diferentes, adquiriam cores e assim
se diferenciavam. Atravs do banho de corantes, algumas bactrias se coraram de roxo, e
foram denominadas de bactrias Gram positivas. Outras bactrias se coraram de vermelho, e
foram denominadas bactrias Gram negativas, surgindo a Tcnica de Gram, que ainda hoje
um procedimento padro na microbiologia.
Muitas descobertas da cincia, at mesmo as que ocorreram por acidente, ajudaram muito na
sade das pessoas. A descoberta de Hans hoje em dia, fundamental para a taxonomia
(cincia que classifica os seres vivos) e se voc perguntar a um microbiologista qual a
importncia da colorao de Gram, certamente responder que sem ela seria impossvel
diferenciar determinadas bactrias. (Taxonomia: a cincia que classifica os seres vivos, ela
estabelece critrios para classificar todos os animais e plantas sobre a Terra em grupos de
acordo com as caractersticas fisiolgicas, evolutivas e anatmicas e ecolgicas de cada
animal ou grupo).
Ajudando a reconhecer as caractersticas de cada caso de infeco e determinar os tratamentos
mais convenientes. Cerca de 90 a 95% das bactrias Gram-negativas so patognicas e muitas
Gram-positivas so no patognicas e algumas, inclusive, so teis. As paredes mais
complexas das bactrias Gram-negativas as tornam mais resistentes e dificultam que os
antibiticos e outros medicamentos adentrem em seu interior. Alm disso, as bactrias Gramnegativas geralmente so mais ameaadoras do que as Gram-positivas por terem uma maior
virulncia e serem ou se tornarem mais facilmente resistentes aos antibiticos. A tcnica de
Gram tem tambm uma grande importncia clnica porque permite que as bactrias associadas
a infeces sejam prontamente caracterizadas como Gram-positivas ou Gram-negativas, o que
permite monitorar a infeco e adotar certas opes de tratamento, mesmo antes que seja feita
uma cultura.
As bactrias agem patogenicamente por meio de toxinas. As toxinas das bactrias patognicas
so substncias que causam danos aos tecidos animais. Elas so de dois tipos: endotoxinas e
exotoxinas. Ambas alteram o metabolismo normal das clulas ou dos tecidos do hospedeiro,
danificando-os. As endotoxinas secretadas pelas bactrias Gram-negativas geralmente esto
ligadas membrana externa da parede da clula, s sendo liberadas aps destruio das
mesmas. Quando ocorre o rompimento da clula bacteriana e liberao da toxina, h uma
resposta do sistema imune que, em geral, causa febre, dores, choques e vasodilatao. Em
grandes quantidades, a toxina pode levar septicemia e morte. Quando a infeco causada
por uma bactria Gram-positiva, a toxina liberada na corrente sangunea pela parede
bacteriana tem efeito semelhante provocada pelas endotoxinas. Entre elas esto as infeces
de maior virulncia, como a toxina diftrica, a toxina colrica, a toxina botulnica, a toxina
tetnica, a toxina pertussis, etc.
2.1
3. Distender a suspenso bacteriana com movimentos elpticos at que esta forme um filme
tnue e homogneo (ESFREGAO);
4. Deixar o esfregao secar a temperatura ambiente;
-A partir de Culturas em meio lquido:
1. Colocar uma alada da cultura na lmina;
2. Distender a suspenso bacteriana com movimentos elpticos at que esta forme um filme
tnue e homogneo;
3. Deixar o esfregao secar a temperatura ambiente;
Antes de iniciar a colorao, deve-se assegure de que o esfregao esteja seco. No fixar o
esfregao em chama, pois este processo promove a desidratao brusca dos constituintes
celulares. Lembre-se de que a violeta-de-metila j contm fixador qumico.
Depois disso feito a colorao do esfregao atravs do mtodo de Gram. Esse mtodo deve
proceder da seguinte forma:
1. Cobrir o esfregao com violeta-de-metila e deixe por aproximadamente 15 segundos;
2. Adicionar igual quantidade de gua sobre a lmina coberta com violeta-de-metila e deixe
agir por 45 segundos;
3. Escorrer o corante;
4. Lavar em um filete de gua corrente;
5. Cobrir a lmina com lugol diludo (1/20) e deixe agir por aproximadamente 1 minuto;
6. Escorrer o lugol e lave em um filete de gua corrente;
7. Adicionar lcool etlico (99,5 GL) sobre a lmina; descorando-a, at que no desprenda
mais corante;
8. Lavar em um filete de gua corrente;
9. Cobrir a lmina com safranina e deixe agir por aproximadamente 30 segundos;
10. Lavar em um filete de gua corrente;
11. Deixar secar ao ar livre, ou seque suavemente, com o auxlio de um papel de filtro limpo;
12. Colocar uma gota de leo de imerso sobre o esfregao;
13. Ler em objetiva de imerso (100 X)
3.1
As bactrias Gram-positivas so aquelas que obtm uma colorao violeta ou azul escura
atravs da tcnica de Gram. So o oposto das bactrias Gram-negativas, que so incapazes de
fixar a violeta de genciana, retendo em seu lugar o corante de contraste (safranina ou fucsina)
que lhes d a tonalidade vermelha ou rosa. Apresentam uma parede espessa, homognea,
geralmente no estratificada e predominantemente constituda por peptidoglicano. Deste
modo, o precipitado insolvel que se forma por ao do mordente, fica retido no interior da
clula pela camada espessa de peptidoglicano, logo, estas clulas no so descoradas
permanecendo com a colorao conferida pelo corante primrio (prpura).
3.1.1
Staphylococcus aureus
3.1.2
Streptococcus pyogenes
Streptococcus pneumoniae
10
Meningite: infeco das meninges do crebro que uma emergncia potencialmente fatal. O
pneumococo a principal causa de meningite em adultos. Incio sbito de dores de cabea,
vmitos, sensibilidade luz. O tratamento com antibiticos tem de ser institudo pouco depois
do incio dos sintomas ou a morte torna-se inevitvel.
Septicmia: invaso e multiplicao no sangue. Mortalidade muito elevada. Normalmente
ocorre aps multiplicao num rgo especfico sem limitao efetiva.
3.1.4
Enterococcus faecalis
Clostridium tetani
Lactobacillus sp
a espcie de bactria que predomina no meio vaginal. Ele responsvel pela fabricao de
uma substncia cida capaz de inibir o crescimento de outras bactrias potencialmente
nocivas mucosa vaginal. A substncia produzida se chama cido ltico e sua fabricao se
d a partir da digesto, por parte dos lactobacilos, do glicognio presente nas clulas de
revestimento da vagina.
11
Corynebacterium diphtheriae
uma espcie de bactria formada por bacilos pleomrficos que medem de 0,3 a 0,8 por 1,0 a
8,0 micrmetros em suas maiores dimenses. Formam grandes colnias quando cultivadas em
meio gar sangue durante uma noite. A espcie dividida em quatro diferentes bitipos,
classificados de acordo com as propriedades qumicas e com a morfologia das colnias:
balfanti, gravis, intermedius e mitis. A maior parte dos casos descritos de difteria foi causada
pelos bitipos gravis e mitis, de modo que os outros dois bitipos esto raramente associados
doena.
Doena relacionadas:
Difteria: O sintoma tpico da difteria o aparecimento de placas pseudomembranosas,
acinzentadas e firmes nas amdalas e rgos adjacentes.
Mal-estar, dor de garganta, febre, corrimento nasal, gnglios linfticos inflamados e manchas
avermelhadas na pele so outros sintomas possveis da doena. Edema de pescoo, toxemia,
prostrao e asfixia mecnica so sinais que sugerem o agravamento da infeco.
3.1.8
Staphylococcus epidermidis
uma espcie de bactria firmicute, caracterizada por ser coagulase negativa e catalase
positiva.
uma espcie comensal da pele e mucosas, responsvel principalmente por infeces
hospitalares, atravs de cateteres, sondas (material de plstico) bem como prteses devida sua
capacidade de formar biofilmes. Os biofilmes dificultam a chegada de drogas antimicrobianas
e at mesmo de clulas fagocticas ao foco de infeco.
A espcie no produz toxinas e uma vez que faz parte da microbiota endgena humana, as
infeces causadas por esta espcie so geralmente oportunistas e de origem hospitalar
(nosocomiais).
12
3.2
Pseudomonas aeruginosa
Aerbia, baciliforme. Seu ambiente de origem o solo, mas sendo capaz de viver mesmo em
ambientes hostis, sua ocorrncia comum em outros ambientes. um patognico oportunista,
ou seja, que raramente causa doenas em um sistema imunolgico saudvel, mas explora
eventuais fraquezas do organismo para estabelecer um quadro de infeco.
Normalmente infecta o aparelho respiratrio, aparelho urinrio, queimaduras, e tambm causa
outras infeces sanguneas. Em raras circunstncias pode causar pneumonia por contgio
entre humanos.
3.2.2
Haemophilus influenzae
pequenas ou
13
3.2.3
Escherichia coli
Helicobacter pylori
14
Gastrite: Manifesta sintomas como dor ou queimao no abdmen, nuseas, perda de apetite,
arrotos frequentes, inchao e perda de peso no intencional.
lceras ppticas: Manifesta sintomas como dor e queimao na "boca do estmago", perda de
peso, no se sentir como se tivesse comido e dor ao comer.
3.2.5
Treponema pallidum
Com forma espiral do grupo das espiroquetas, anaerbia facultativa e catalase negativa.
Possuem de 6 a 14 espirais espaados e regulares, diminuindo de amplitude e de periodicidade
ao nvel das extremidades, 6 a 10 filamentos axiais e 1 disco de insero. Tem cerca de 10
micrmetros de comprimento, com apenas 0,2 micrmetros de largura. Move-se ao longo do
seu eixo longitudinal, com movimentos tipo "saca-rolhas".
Doena relacionada:
Sfilis: na primria formam-se feridas indolores (cancros) no local da infeco; na secundria
apresentar dores musculares, febre, dor de garganta e dificuldade para deglutir; na terciria a
infeco se espalha para reas como crebro, sistema nervoso, pele, ossos, articulaes, olhos,
artrias, fgado e at para o corao.
3.2.6
Vibrio cholerae
Tem a forma de uma vrgula com cerca de 1-2 micrmetros. Possui flagelo locomotor
terminal. Estes vibries, tal como todos os outros, vivem naturalmente nas guas dos oceanos,
mas o seu nmero to pequeno que no causam infeces.
Doenas relacionadas:
Diarreia: volumosa e aquosa, sempre sem sangue ou muco (se contiver estes elementos tratase de disenteria).
Hipotenso: com risco de choque hipovolmico (perda de volume sanguneo) fatal, a
principal causa de morte na clera.
Taquicardia: acelerao do corao para responder s necessidades dos tecidos, com menos
volume sanguneo.
3.2.7
Salmonella
15
Shigella
16
CONCLUSO
Neste trabalho falamos sobre a colorao gram, sobre os seus procedimentos, o que
so bactrias de gram (+) e gram (-), suas respectivas bactrias, e os sintomas e doenas que
elas causam. Assim, com este trabalho podemos saber mais sobre este tema. A colorao
torna-se necessria para observao microscpica uma vez que a maioria das bactrias
transparente, no sendo possvel distinguir a sua morfologia.
Conclumos que a colorao de gram importante, pois assim podemos diferenciar os grupos
de bactrias.
17
REFERNCIAS
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http://pt.scribd.com/doc/51493643/Relatorio-coloracao-de-gram>, Acesso em: 01 abr. 2015.
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