AULA 02

RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS - EaD DATA:

08 / 03 / 2021

VERSÃO:01

RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS: MICROBIOLOGIA E IMUNOLOGIA – Aula 2

DADOS DA ALUNA:

NOME: MARIA DE DEUS PORTELA RAMOS MATRÍCULA: 01386244

CURSO: FARMÁCIA POLO: JÓQUEI CLUB / TERESINA-PI
PROFESSORA ORIENTADORA: MARIA CLARA PESTANA CALSA

ORIENTAÇÕES GERAIS:

• O relatório deve ser elaborado individualmente e deve ser escrito de forma clara e
concisa;
• O relatório deve conter apenas 01 (uma) lauda por tema;
• Fonte: Arial ou Times New Roman (Normal e Justificado);
• Tamanho: 12;
Margens: Superior 3 cm; Inferior: 2 cm; Esquerda: 3 cm; Direita: 2 cm;
• Espaçamento entre linhas: simples;
• Título: Arial ou Times New Roman (Negrito e Centralizado).

TEMA DE AULA: CONTAGEM DE LEVEDURAS POR DILUIÇÃO SERIADA

RELATÓRIO:

1. Definir o método de contagem de leveduras em placa por diluição seriada.

O método de contagem em placa de Petri por diluição seriada consiste na apuração

de grandes grupos microbianos, como as leveduras. Esse método é um dos mais
utilizados em laboratórios, com ele é previsto o número de colônias através de mais
de uma diluição. E, comumente, são utilizadas várias diluições decimais de amostra.
Ademais, a principal vantagem de utilizar essa técnica está na possibilidade de
determinar o verdadeiro tamanho de uma população de bactérias existente.

2. Calcular a UFC/g ou mL da amostra estudada.

Equipamentos e vidrarias:
05 Tubos de ensaio;
01 Água peptonada;
01 Placa de Petri;
01 Alça de Drigalski;
01 Lamparina;
01 Alça de platina;
01 Pipeta estéril;
01 Pera.
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Procedimentos
1. Para fazer a diluição, colocar de 10 ml de água peptonada em tubo e 9 ml nos
outros tubos. Ligar a lamparina. Distribuir 10 ml no tubo 1 e 9 ml nos outros
tubos (2, 3, 4 e 5) com o auxílio da proveta de 10 ml;
2. Pega pequena quantidade de colônia da placa, próximo do fogo da lamparina,
com o auxílio da alça de platina e dissolver aquela no tubo 1. Logo depois, é
preciso flambar a alça para a descontaminação;
3. Para fazer a diluição utilizou uma pipeta e pera. Retirou 1 ml do tubo e
transferir para o tubo 2 e misturar. E depois transferiu essa mistura do tubo 2
e transferiu para o tubo 3. E assim sucessivamente até chegar no tubo 5;
4. Pegar 0,5 ml de diluição do tubo 5 e plaquear;
5. Flambar a alça de Drigalski e espere esfriar um pouco e esfregar no na placa
(meio de cultura) até secar o líquido e depois tampar e colocar na estufa (na
temperatura de 37°) de cabeça pra baixo para o crescimento das bactérias,
por 24hrs a 48hrs;
6. Retirar a placa da estufa e fazer a contagem das colônias.

Cálculo da UFC/g ou mL de uma amostra.

R = a x 10b UFC/g ou mL
R = resultado
a = os dois primeiros algarismos significativos, números de 0 a 9
b = expoente (0 a 10) UFC = unidade formadora de colônias
g = grama e mL= mililitro

Exemplos:

Diluição 10-2 (1:100)

Média das contagens: 30 UFC
Resultado: 30 x 100 = 3.000 = 3 x 10^3 UFC/g ou mL

Diluição 10-3 (1:1.000)

Média das contagens: 40 UFC
Resultado: 40 x 1.000 = 40.000 = 4 x 10^4 UFC/g ou mL

TEMA DE AULA: COLORAÇÃO DE GRAM

RELATÓRIO:

1. Definir o fundamento da coloração de Gram.

Coloração de Gram é o método de coloração utilizado para identificar as bactérias
dos grupos gram-positivas e gram-negativas. No experimento se a lâmina não ficar
corada, deve-se utilizar a fucsina para ver se é gram-positiva, com isso a lâmina irá
se apresentar na cor azul ou roxa. Se as células estiverem na cor vermelho ou rosa,
significa que na lâmina tem bactéria gram-negativa.
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2. Visualizar a morfologia e classificar as bactérias nas lâminas de acordo com o seu
comportamento diante dos corantes de Gram.
Equipamentos e vidrarias:
01 lâmina;
01 pinça de madeira;
01 lamparina;
01 alça de platina.

Procedimentos
1. Pegar a lâmina com a pinça;
2. Deixar a alça de platina estéril com a ajuda do fogo da lamparina e pegar a
colônia contida no meio de cultura;
3. Colocar três gotinhas de água na lâmina;
4. Dissolver a bactéria na água contida na lâmina;
5. Flambar a alça de platina no fogo, pois não irá utilizar;
6. Secar a lâmina com o fogo da lamparina para a fixação da bactéria na lâmina.

Método Coloração de Gram

1. Colocar o corante cristal de violeta e deixar 1 minuto junto com o seu
esfregaço e a bactéria que deixou secando no calor;
2. Lavar a lâmina com água da torneira;
3. Cobrir a lâmina com lugol, aguardar 1 minuto e depois lavar a lâmina,
deixando a água cairna pinça de maneira e nunca na lâmina;
4. Aplicar o descorante na lâmina e aguardar 30 segundos;
5. Lavar a lâmina com um pouco de água;
6. Aplicar fucsina e aguardar 30 segundos, se a lâmina não ficar corada;
7. Lavar e enxugara lâmina;
8. Observar no microscópio óptico.

No experimento, a lâmina não ficou corada e teve que usar o corante fucsina. As
bactérias, quanto a morfologia, podem ser classificadas com cocos, bacilos, vibriões
e espirilos. A seguir, a imagem obtida do microscópio:

Figura 1: Resultado da análise da lâmina com bactéria gram-positiva

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Referências Bibliográficas

Madigan, Michael T. et al. Microbiologia de Brock 14. ed. Porto Alegre: Artmed,
2016.