Fundamentos da Microbiologia Farmacêutica

Prof. Plínio Naves

Microbiologia Farmacêutica

Função principal é garantir a fabricação segura de preparações

farmacêuticas e dispositivos médicos
Avaliação de risco (tanto proativa como reativa)
Testes essenciais estão descritos nas principais farmacopeias (Norte-
americana, Europeia e Japonesa)

2
Principais análises microbiológicas
● testes de esterilidade
● análise de endotoxina bacteriana
● métodos de enumeração microbiana - teste de limites microbianos
● detecção de micro-organismos específicos
● teste de susceptibilidade antimicrobiana
● métodos e limites para testar água de grau farmacêutico
● eficácia desinfetante
● testes de toxicidade pirogênica e anormal
● monitoramento ambiental
● indicadores biológicos
3
Risco de contaminação no contexto industrial
Microbiologia farmacêutica enfatiza o controle de contaminação
Microbiologistas estão envolvidos em vários aspectos do processo de
produção
✔
Testes e avaliação de dados
✔
Avaliações de risco, de forma proativa ou em resposta a um problema
✔
Colaboração no projeto de sistemas como parte de uma estratégia de
controle de contaminação

4
Métodos Microbiológicos
● Métodos qualitativos
presença ou ausência de micro-organismos (totais ou indicadores)

● Métodos quantitativos
métodos de enumeração

● Métodos de identificação
caracterização do micro-organismo isolado
5
Rotina dos testes microbiológicos
Amostragem e teste - avaliação da qualidade microbiológica do processo
de fabricação farmacêutica

Isso envolve a seleção, amostragem e testes

● material de partida (matérias-primas)
● amostras durante o processo ou de produtos intermediários
● exame das formulações do produto final
● teste do produto final

6
 Matéria Prima

A maioria possui testes microbiológicos definidos pelas farmacopeias

Testes adicionais – Natureza do material, etapa do processo e requisitos
do produto final (produto não estéril)
Alguns tipos de materiais de partida podem não ter uma metodologia
estabelecida (o microbiologista definirá os testes apropriados)

7
8
 Testes microbianos - matéria prima

● contagem microbiana
(testes para a contagem microbiana total e a
contagem total de fungos e bolores)
● presença - ausência de micro-organismos
indicadores específicos
(indesejáveis ao produto ou processo)

9
Micro-organismos indicadores
Especificados nas Farmacopeias ou definidos pelo analista
● Bactérias Gram-negativas tolerantes a bile (enterobactérias, aeromonas, etc)
● Salmonella sp
● Escherichia coli
● Pseudomonas aeruginosa
● Staphylococcus aureus
● Candida albicans
● Clostrídios

10
Testes microbianos - matéria prima
Micro-organismos especificados para cada material
Farmacopeia designa quais micro-organismos devem ser examinados
Além disso, alguns materiais exigem a detecção de endotoxina
bacteriana
O principal método de teste é o teste de lisado de amebócito de Limulus
(LAL)
https://www.youtube.com/watch?v=LgQZWSlLBnA

11
Amostras do processamento / produto intermediário
Estágios representativos ou pontos críticos durante a fabricação
Amostras para testes de carga microbiana (bioburden)
Verificação dos tipos e quantidades de micro-organismos no produto
durante o processo de fabricação
A carga biológica é normalmente avaliada utilizando o método da
contagem total de micro-organismos viáveis

12
Amostras do processamento / produto intermediário
Estágios representativos ou pontos críticos durante a fabricação
Amostras para testes de carga microbiana (bioburden)
Verificação dos tipos e quantidades de micro-organismos no produto
durante o processo de fabricação
A carga biológica é normalmente avaliada utilizando o método da
contagem total de micro-organismos viáveis

13
Contagem total de micro-organismos viáveis
Quantificação de micro-organismos
O resultado - número de unidades formadoras
de colônias (ufc) por grama (ou por mililitro)
de micro-organismos presentes
Métodos microbiológicos rápidos podem ser
utilizados como alternativas aos métodos
farmacopeicos, com justificativa e aprovação
regulatória

14
15
16
Avaliação de risco
Deve ser conduzida para todas as amostras
Determinar o significado de uma carga
microbiana acima de um nível pré-definido
(Farmacopeia)

17
Produtos terminados
Devem sempre ser submetidos a testes microbiológicos
Os requisitos e especificações de testes para produtos estéreis são
tipicamente definidos na farmacopeia

18
Rotina para avaliação microbiológica de produto final
Teste de esterilidade (o produto deve estar livre de micro-organismos
viáveis)
Teste de endotoxina ou pirogênio (aqui o limite dependerá da dose,
aplicação e tipo de paciente desejado e cálculo de limite seguindo a
orientação nas farmacopeias)
Teste de toxicidade em modelo animal

19
Rotina para avaliação microbiológica de produto final
Para produtos não estéreis, o produto normalmente terá uma
especificação baseada na contagem microbiana máxima permitida
Exigências de que o produto esteja livre de certos micro-organismos
especificados (indesejáveis )
Participação do microbiologista no estabelecimento das especificações
(no estágio inicial do desenvolvimento do produto)
Testes preliminares e na caracterização do produto
Estratégias para combater a atividade antimicrobiana inerente à produção

20
Material auxiliar na fabricação farmacêutica
Garantia da segurança microbiológica
✔
Gases comprimidos (ufc em partículas suspensas)
✔
Vapor condensado (endotoxina)
✔
Água de grau farmacêutico - Água para injeção (WFI) e água purificada
✔
Água de alimentação (rede de fornecimento) - micro-organismos
circulantes (biofilmes formados na tubulação)

21
Avaliação microbiológica dos sistema de água

✔
Contagem microbiana aeróbia total
✔
Endotoxinas bacterianas
✔
Micro-organismos específicos (indicadores)

22
 1. Filtração de partículas
2. Malha de resina
3. Malha fina de carbono
4. Pré-filtro de osmose de reserva
5. Filtro de ventilação do tanque
6. Filtro de detritos bacterianos
7. Filtro de bactérias no ponto de uso
23 (opcional)
Análise microbiológica da água
✔
A metodologia e os limites são definidos pelas farmacopeias
✔
O monitoramento ambiental - determina níveis de alerta internos com
base no desempenho histórico do sistema.
✔
A frequência do monitoramento depende do estado do sistema de água
(se está sob qualificação ou não) e da qualidade dos resultados
✔
O microbiologista determinará a frequência adequada
✔
As amostras de água para injetáveis são tipicamente tomadas a cada dia
útil com as saídas em um sistema rotacional

24
Monitoramento microbiológico do ambiente
✔
Parte fundamental da avaliação das instalações de fabricação
farmacêutica
✔
Os dados de monitoramento ambiental indicam se as salas limpas estão
operando corretamente (são a base para a fabricação farmacêutica)
✔
O monitoramento ambiental é dividido em monitoramento viável e não
viável
✔
Monitoramento viável é o exame de micro-organismos (bactérias e
fungos) localizados dentro dos ambientes de fabricação

25
Programa geral de monitoramento microbiológico
● Definição dos métodos de monitoramento (para avaliar a
contaminação do ar, da superfície e do pessoal)
● Meios de cultura (como meios de uso geral ou meios específicos
para fungos) e se é necessário um neutralizador desinfetante
● Intervalos de tempo e temperatura de incubação
● Procedimentos para amostragem
● Amostras de locais dentro das salas limpas

26
Programa geral de monitoramento microbiológico
● Frequência de monitoramento
● Condições da sala para a amostragem (em repouso ou em
operação)
● Determinação de quem assume a equipe de monitoramento
(produção ou controle de qualidade)
● Estabelecimento dos níveis de alerta e ação
● Orientação sobre como lidar com resultados fora dos limites
● Caracterização da microbiota
27
28