Normas de Laboratório

ROSNGELA UHRIG SALVATORI
GREICE ALINE KAISECAMP WOLF

FABOLA DRESCH
ANDREIA APARECIDA GUIMARES STROHSCHOEN
LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA:
normas gerais, instrues de trabalho e
Procedimentos Operacionais Padres (POP)
Rosngela Uhrig Salvatori

Greice Aline Kaisecamp Wolf
Fabola Dresch
Andreia AParecida Guimares Strohschoen
Laboratrio de Microbiologia:
normas gerais, instrues de trabalho e
Procedimentos Operacionais Padres
1 edio
Lajeado, 2013
Coordenao e reviso final: Ivete Maria Hammes

Editorao: Bruno Henrique Braun e Marlon Alceu Cristfoli
Capa: Bruno Henrique Braun
Avelino Tallini, 171 - Bairro Universitrio - Cx. Postal 155 - CEP 95900-000,
Lajeado - RS, Brasil. Fone: (51) 3714-7024 / Fone/Fax: (51) 3714-7000
E-mail: editora@univates.br / http://www.univates.br/editora
S182
Salvatori, Rosngela Uhrig

Laboratrio de Microbiologia: normas gerais, instrues
de trabalho e procedimentos operacionais padres /
Rosngela Uhrig Salvatori, Greice Aline Kaisecamp Wolf,
Fabola Dresch e Andreia Aparecida Guimares Strohschoen
- Lajeado: Ed. da Univates, 2013.
72 p.
ISBN 978-85-8167-044-7
1. Microbiologia 2. Manual de laboratrio I. Ttulo
CDU: 579(035)
Ficha catalogrfica elaborada por Nalin Ferreira da Silveira CRB 10/2186
Todos os textos so de exclusiva

responsabilidade das autoras.
Dados das
autoras
ANDREIA APARECIDA GUIMARES STROHSCHOEN
ROSNGELA UHRIG SALVATORI
Possui graduao em Licenciatura em Cincias com

habilitao Plena em Biologia pelo Centro Universitrio
UNIVATES (1998). Tem especializao em Planejamento
e Gesto Ambiental pelo Centro Universitrio UNIVATES
(2000). Realizou Mestrado em Biologia Animal pela
Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS)
(2002) e Doutorado em Cincias: Ecologia pela
Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS)
(2011). Atualmente professora do Departamento de
Cincias Biolgicas e da Sade do Centro Universitrio
UNIVATES, como professora nos cursos de graduao,
especializao e no Programa Mestrado em Ensino de
Cincias Exatas.
Possui graduao em Cincias pela Universidade do

Vale do Rio dos Sinos (1981), graduao em Habilitao
em Biologia - Licenciatura Plena pela Faculdade de
Filosofia Cincias e Letras de Santa Cruz do Sul (1983)
e mestrado em Microbiologia Agrcola e do Ambiente
pela Universidade Federal do Rio Grande do Sul
(1999). Atualmente professor do Centro Universitrio
Univates, socio da Sociedade Brasileira de Microbiologia,
comisso - CFAP do Conselho Regional de Biologia 3
Regio e coord. lab. de microbiologia didtico do Centro
Universitrio Univates. Durante 15 anos foi Gerente
Tcnica do Laboratrio de Microbiologia do Unianlises
- Univates. Tem experincia na rea de Microbiologia,
com nfase em Microbiologia dos Alimentos, atuando
principalmente nos seguintes temas: salmonela,
gua, embutidos, coliformes termotolerantes,
biossurfactantes e Boas Prticas de Fabricao.
FABOLA DRESCH
Graduanda do curso de Biomedicina, Centro
Universitrio UNIVATES. Funcionria-tcnica do
Laboratrio Didtico de Microbiologia do Centro
Universitrio UNIVATES.
GREICE ALINE KAISECAMP WOLF

Graduanda do curso de Cincias Biolgicas, Centro
Universitrio UNIVATES. Estagiria do Laboratrio
Didtico de Microbiologia do Centro Universitrio
UNIVATES.
LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA: normas gerais, instrues de trabalho e procedimentos operacionais padres
Apresentao
Os assuntos pertinentes Microbiologia so

fundamentais para diferentes reas, desde a pesquisa
bsica, aplicada, indstria, etc. No entanto, poucos
materiais apresentam noes bsicas de trabalho em
um laboratrio de Microbiologia indispensveis para
os estudantes. Este fato nos motivou a preparar este
manual.
As informaes aqui apresentadas so o resultado
preliminar do trabalho dos profissionais que atuam
em laboratrios de Microbiologia, sendo apresentados
conhecimentos obtidos na experincia prtica adquirida
ao longo dos anos ministrando disciplinas dessa rea,
como Microbiologia Experimental e Microbiologia de
Alimentos.
Os experimentos propostos seguem os Padres
Internacionais e so imprescindveis para a realizao
de qualquer atividade em um laboratrio de
Microbiologia. Contempla as Normas Gerais para o bom
funcionamento de um Laboratrio de Microbiologia,
os principais equipamentos necessrios para o seu
funcionamento, aqui apresentados como Instrues
de Trabalho. Tambm as principais metodologias
inerentes a anlise de alimentos, transformadas em
Procedimentos Operacionais Padres (POPs). Destinase principalmente a estudantes como um material
auxiliar no seu processo de aprendizagem, bem como
pretende subsidiar a prtica docente buscando a
otimizao do tempo do professor que realiza atividades
prticas vinculadas s anlises microbiolgicas. Foi

organizado para ser verstil e de fcil utilizao tanto
para o estudante quanto para o professor.
Esta a primeira verso de um manual prtico,
sendo que estamos cientes de que a microbiologia
uma cincia dinmica, por isso suas tcnicas so
rapidamente modificadas, refinadas e atualizadas. Com
isto, espera-se apresentar aqui algumas atividades
bsicas e futuramente realizar a complementao,
aprofundamento e atualizao.
As autoras
AGRADECIMENTO
Agradecemos ao Centro Universitrio UNIVATES

pelo apoio financeiro para a execuo deste projeto.
Ao Laboratrio Didtico de Microbiologia do Centro
Universitrio UNIVATES.
As autoras
NORMAS GERAIS Instruo de Trabalho...... 8
Sumrio
1 -
2 -
3 -
4 -
NORMAS DE SEGURANA........................................9
LIMPEZA DO LABORATRIO...................................11
DESCARTE DE MATERIAL E DE AMOSTRAS...........12
USO E LIMPEZA DO APARELHO DE OSMOSE
REVERSA...................................................................13
5 - USO E LIMPEZA DAS BALANAS ELETRNICAS...14
6 - USO E LIMPEZA DO BANHO-MARIA......................16
7 - USO E LIMPEZA DA CAPELA DE FLUXO
LAMINAR..................................................................18
8 - LAVAGEM, PREPARO E ESTERILIZAO DE
MATERIAIS PARA ANLISES MICROBIOLGICAS...19
9 - USO E LIMPEZA DAS ESTUFAS
BACTERIOLGICAS..................................................23
10 - USO E LIMPEZA DAS ESTUFAS DE
ESTERILIZAO E SECAGEM...................................25
11 - USO E LIMPEZA DO FORNO DE MICRO-ONDAS...27
12 - USO E LIMPEZA DAS GELADEIRAS.........................29
13 - USO E LIMPEZA DO HOMOGENEIZADOR DE
AMOSTRAS (STOMACHER).....................................30
14 - USO E LIMPEZA DA INCUBADORA PARA
BOLORES E LEVEDURAS..........................................31
15 - USO E LIMPEZA DA AUTOCLAVE............................33
16 - USO E LIMPEZA DO AGITADOR DE TUBOS...........36
17 - USO E LIMPEZA DO CONTADOR DE COLNIAS....37
18 - USO E LIMPEZA DO ESTERILIZADOR A VCUO....38
19 - PESAGEM DE AMOSTRAS.......................................39
20 - PREPARO DA SUSPENSO INICIAL E DILUIES
DECIMAIS DE AMOSTRAS.......................................40
NORMAS GERAIS Procedimento

Operacional Padro.......................................... 41
1 - PREPARAO E CONSERVAO DE MEIOS DE
CULTURA...................................................................42
2 - CONTAGEM TOTAL DE MICRORGANISMOS EM
GUA UTILIZANDO O MEIO GAR NUTRIENTE.....44
3 - CONTAGEM DE BOLORES E LEVEDURAS EM
PRODUTOS COM ATIVIDADE DE GUA MENOR
OU IGUAL A 0,95......................................................46
4 - CONTAGEM DE BOLORES E LEVEDURAS EM
PRODUTOS COM ATIVIDADE DE GUA MAIOR
QUE 0,95...................................................................48
5 - CONTAGEM DE Enterobacteriaceae...............50
6 - CONTAGEM PADRO DE MICRORGANISMOS
MESFILOS AERBIOS ESTRITOS E
FACULTATIVOS VIVEIS...........................................52
7 - CONTAGEM TOTAL DE COLIFORMES TOTAIS E
TERMOTOLERANTES...............................................54
8 - NMERO MAIS PROVVEL DE COLIFORMES
TOTAIS E TERMOTOLERANTES EM GUA.............56
9 - CONTAGEM DE Staphylococcus aureus EM
GAR BAIRD-PARKER...............................................59
10 - DETECO E ENUMERAO DE Listeria
monocytogenes..................................................62
11 - Deteco de Salmonella...................................66
12 - CONTAGEM DE Bacillus cereus POR
INCUBAO A 30 C................................................69
13 - CONTAGEM DE Clostridium perfringens......71
1-20
NORMAS GERAIS
Instruo de Trabalho
1- NORMAS DE
SEGURANA
PRINCIPAIS NORMAS de Segurana EM

Laboratrio de Microbiologia
10. Todo o material deve ser identificado. As etiquetas

devem ser autoadesivas;
1. Refrigeradores, Micro-ondas e estufas no so

apropriados para aquecer ou conservar alimentos
a serem consumidos;
11. No caso de derramamento de algum material

infeccioso, cobrir imediatamente a rea com
um desinfetante adequado e deixar de 15 a 30
minutos antes da limpeza;
2. No comer, beber ou fumar dentro do laboratrio;
4. As mesas ou bancadas de trabalho devem ter

superfcie lisa, de fcil limpeza e de desinfeco;
12. Devem ser registrados os acidentes como o

derrame de cultura, ferimentos etc. Os ferimentos
devem ser desinfetados e cobertos com
esparadrapo;
5. Quando da manipulao de material txico ou

infectante, usar luvas de proteo;
13. Os tubos com cultura devem ser conservados

sempre em suas respectivas estantes;
6. As pipetas usadas devem ser colocadas

horizontalmente em soluo desinfetante
imediatamente aps o uso, antes de se proceder a
sua limpeza e esterilizao;
14. As culturas de fungos, quando esporuladas,

apresentam riscos de infeco respiratria ou de
reao alrgica, mesmo sem formar aerossis.
Estas culturas devem ser manipuladas rapidamente
e sem movimento brusco;
3. O uso do avental de algodo obrigatrio;
7. No colocar materiais contaminados sobre a

bancada. Esses materiais devem ser colocados
em recipientes apropriados e esterilizados em
autoclave;
8. Cuidado ao acender o bico de gs (bico de Bunsen).
Verificar se no existem substncias inflamveis
por perto;
9. Flambar alas, agulhas e pinas antes e aps o
uso;
15. No cheirar os meios de cultura inoculados;

16. As placas de contagem de bactrias, preparadas
com meios incuos como gar nutritivo, no
podem ser consideradas inofensivas;
17. Lminas e lamnulas utilizadas devem ser colocadas
em recipiente com desinfetante;
18. Lavar e desinfectar as mos antes de iniciar
uma atividade laboratorial. Repetir o mesmo
procedimento ao final da anlise;
1 - NORMAS DE
SEGURANA
19. Limpar a mesa de trabalho, antes e depois de cada

sesso de trabalho, usando desinfetante;
20. Desinfectar a bancada de trabalho no incio e
trmino de cada atividade;
21. Retirar os materiais, amostras e reagentes, bem
como equipamentos e aparelhos, da bancada de
trabalho to logo terminar a tarefa;
22. Papis e resduos utilizados s devem ser colocados
no recipiente de coleta de lixo comum quando no
apresentarem risco de contaminao;
23. indispensvel a presena de extintores de
incndio, estrategicamente posicionados no
ambiente laboratorial. Os extintores devem ser do
tipo p qumico pressurizado (tipo BC), podendo
ser utilizados em casos de acidentes eltricos ou
em materiais inflamveis;
24. Desenvolver o hbito da limpeza e da organizao;
25. No permitir a entrada ou permanncia de pessoas
estranhas no laboratrio.
10
1 OBJETIVO E CAMPO DE APLICAO
2- LIMPEZA DO
LABORATRIO
11
Descrever os procedimentos de limpeza e desinfeco

adotados para o laboratrio de microbiologia. Aplicase ao Laboratrio de Microbiologia.
Ao iniciar o trabalho no laboratrio obrigatrio

a lavagem das mos e antebrao com detergente
apropriado, completando-se a desinfeco com a
aplicao de lcool 70%.
2 REFERNCIAS NORMATIVAS
4.4 Lmpadas
Manual de Gesto da Qualidade.
3 MATERIAIS
Luvas de borracha, lcool 70% e hipoclorito de
sdio.
4 PROCEDIMENTO
4.1 Bancadas
Bancadas, na superfcie das quais so realizadas as
anlises microbiolgicas, devem ser limpas com lcool
70% antes de iniciar a anlise e ao trmino da mesma.
4.2. Piso
O piso do laboratrio de microbiologia limpo
e desinfetado diariamente com 5 mL de soluo de
hipoclorito de sdio a 2% , em um litro de gua.
As lmpadas do laboratrio so limpas a seco,

semestralmente. Eventualmente lmpadas so
substitudas, quando necessrio.
4.5 Limpeza das vidrarias e

materiais utilizados
Os frascos utilizados para amostragem de guas so
colocados de molho em soluo de hipoclorito de sdio
e sabo lquido por no mnimo 24 horas. Lavados com
gua corrente, detergente e esponja, retirando todos
os resduos do seu interior.
5 REFERNCIAS
Mtodos de Anlises Microbiolgicas para alimentos
LARA.
Manual de Mtodos de Anlise Microbiolgica de
alimentos ITAL
4.3 Funcionrios
Os usurios do laboratrio usam jaleco e touca
durante os procedimentos.
6 REGISTROS
No aplicvel.
3- DESCARTE DE
MATERIAL E DE
AMOSTRAS
12
4.2 Descarte de Materiais no Reutilizveis
Descrever o procedimento de descarte de material

utilizado e das amostras processadas no laboratrio
de microbiologia. Aplica-se ao Laboratrio de
Microbiologia Didtico.
Placas de Petri e ponteiras so autoclavadas aps

a realizao de anlises e descartadas conforme
determinado na Instituio, ou seja, destinados ao lixo
orgnico.
4.3 Descarte de Materiais Txicos e

Perfuro-cortantes
Projeto Destinao dos Resduos Internos UNIVATES.
3 MATERIAIS
Autoclave, caixa coletora para vidraria danificada,
saco para esterilizao, saco de lixo comum, caixa
coletora para material txico e perfuro-cortantes.
4 PROCEDIMENTO
4.1 Descarte de Amostras
As amostras so descartadas quando do trmino
da anlise. As amostras processadas so armazenadas
em sacos adequados e destinados esterilizao em
autoclave a 121 +/- 1C por 20 min.
Posteriormente o material encaminhado ao
destino estabelecido para lixo orgnico na Instituio.
As alquotas de amostras utilizadas para as diluies
nos processos analticos so autoclavadas da mesma
forma e tambm encaminhadas ao lixo orgnico da
Instituio.
Estes materiais so acondicionados em caixa

coletora prpria, sendo seu recolhimento efetuado
quando atingida a capacidade da mesma.
4.4 Descarte de Vidrarias Danificadas

Estas vidrarias so armazenadas em caixa coletoras
prprias e destinadas a usina de reciclagem da prpria
Instituio para fins de reaproveitamento.
As vidrarias quebradas com meio de cultura so
autoclavadas antes do descarte, acondicionadas em
recipientes apropriados (Becker de 1000 mL, potes
plsticos).
5 REFERNCIAS
No aplicvel.
6 REGISTROS
No aplicvel.
13
4- USO E
Descrever o procedimento de uso e limpeza do

aparelho de Osmose Reversa.
utilizada nos procedimentos analticos, bem como na

ltima lavagem de vidrarias e materiais pertinentes ao
laboratrio.
LIMPEZA DO
Em laboratrios, a osmose reversa utilizada para

garantir a mxima pureza em seus produtos.
5 REFERNCIAS
Manual de utilizao do equipamento de osmose

reversa Marconi.
APARELHO
DE OSMOSE
REVERSA
Manual de Instrues da Osmose Reversa.
6 REGISTROS
3 MATERIAIS
A osmose reversa um processo de separao em
que um solvente separado de um soluto de baixa
massa molecular por uma membrana permevel ao
solvente e impermevel ao soluto.
A membrana permitir apenas a passagem
de solvente (gua pura), retendo os solutos (sais
dissolvidos e contaminantes). Isso ocorre quando se
aplica uma grande presso sobre este meio aquoso, o
que contraria o fluxo natural da osmose.
Pr-filtros, filtro de carvo ativado, coluna de osmose
reversa, coluna de resina mista e filtro absoluto.
4 PROCEDIMENTO
4.1 Utilizao da osmose reversa
O equipamento de osmose reversa no laboratrio
de Microbiologia serve para a obteno de gua a ser
No aplicvel.
5- USO E
LIMPEZA DAS
BALANAS
ELETRNICAS
Descrever o procedimento de uso e limpeza das

balanas. A balana um equipamento utilizado para a
pesagem de alquotas de amostras e para o preparo de
solues nutrientes necessrias para os procedimentos
analticos.
Manual de Instrues da Balana Eletrnica.
3 MATERIAIS
Detergente neutro, lcool 70%, esponjas e panos de
limpeza adequados.
4 PROCEDIMENTO
4.1 Descrio dos componentes
Prato da balana; entrada da fonte de alimentao;
ps niveladores; tecla liga/desliga; tecla calibrao/
pesagem; nvel da balana; tecla tara; display.
4.2 Instalao das balanas

Retirar a balana da embalagem.
Retirar totalmente a trava de segurana para
transporte, localizada na parte inferior da balana,
girando-a no sentido anti-horrio.
Girar a tampa protetora at fechar o orifcio.
Guardar o dispositivo de travamento para ser usado
14
em eventuais transportes, ou quando a balana for

enviada assistncia tcnica.
Importante: O aperto na colocao do dispositivo
deve ser efetuado com a mo, sem usar ferramentas
auxiliares, tais como alicate, ou outros instrumentos.
Coloc-la sobre a mesa de trabalho em local
adequado, isento de radiao de calor, trepidaes,
correntes de ar e umidade.
Encaixar corretamente o prato na balana.
Encaixar o conector da fonte de alimentao no
plugue existente na parte traseira da balana.
NUNCA LIGAR A FONTE REDE, SEM ANTES T-LA
CONECTADA BALANA.
Nivelar a balana pelos ps niveladores at
centralizar a bolha de nvel.
4.3 Utilizao das balanas

Ao ligar rede eltrica o display mostrar
DESLIGADO.
Aguardar 30 minutos de pr-aquecimento.
Se a fonte for desligada ou faltar energia, aguardar
novo pr-aquecimento.
NUNCA DESLIGAR A BALANA PELO CONECTOR
TRASEIRO.
15
Pressionar L/D. Durante trs segundos aparecero

todos os pontos do display.
Passar um pano umedecido com gua e detergente

neutro.
LIMPEZA DAS
A seguir, o display mostrar a verso da balana

e logo aps: 0.00 g (ou 0,0 g conforme o modelo da
balana).
No utilizar detergentes agressivos (solventes ou

similares).
BALANAS
O sinal ~ indica leitura no estabilizada, e o sinal =

indica leitura estabilizada.
ELETRNICAS
Se, ao ligar a balana aparecer: Erro: plat. C/P (erro,

plataforma com peso), basta remover o peso ou o
vasilhame do prato.
5- USO E
Ao desligar a balana pela tecla L/D, o display

mostrar: DESLIGADO, contudo a balana continuar
energizada para ser mantida em equilbrio trmico.
Cuidar para que no escorra lquido para o interior

da balana. Para evitar que isto acontea, passar um
pano seco e macio, logo aps a limpeza com o pano
mido.
Se houver alguma sujeira no prato entre uma
pesagem e outra, remover com algodo ou perfex
umedecido em lcool 70%.
5 REFERNCIAS
Zerar a balana antes de efetuar as pesagens,

pressionando T.
Manual de utilizao da balana eletrnica Tecnal.
Se for necessrio o uso de vasilhame, coloc-lo

sobre o prato da balana e pressionar T para trav-lo.

alimentos ITAL.
Realizar a pesagem pretendida.

Retirar o vasilhame.
Ao iniciar nova pesagem ter o cuidado de verificar
se a balana est zerada.
4.4 Limpeza
BIER, Otto. Bacteriologia e imunologia em suas

aplicaes a medicina e a higiene. So Paulo:
Melhoramentos, 1975.
LACAZ-RUIZ, Rogrio. Manual Prtico de
Microbiologia Bsica. So Paulo: Editora Edusp, 2000.
A limpeza realizada no final da rotina de trabalho.

Antes de iniciar a limpeza, desconectar a balana da
rede de corrente eltrica.
6 REGISTROS
No aplicvel.
16
6- USO E
LIMPEZA DO
BANHO-MARIA
4.2 Caractersticas

banho-maria. O banho-maria um equipamento
utilizado para manter uma soluo ou qualquer outro
material a uma temperatura constante. utilizado
tambm, para preparao de meios de cultura e
para incubao de micro-organismos. Em casos de
incubaes exigentes temperatura, utilizar o banhomaria com circulao de gua.
O banho-maria um equipamento constitudo em

chapa de ao inox, com paredes duplas e isoladas com
l de vidro.
4.3 Utilizao do banho-maria
Manual de Instrues do banho-maria.
3 MATERIAIS
Termmetro, gua destilada, sabo neutro, lcool
70%, esponja e panos adequados.
4 PROCEDIMENTO
Termostato automtico: de 20 C a 120 C.
Lmpada piloto: quando acesa indica que o banhomaria est ligado; ao atingir a temperatura desejada, a
luz se apagar.
Chave liga-desliga: com chave reversvel, que
seleciona a voltagem 110 ou 220 volts.
A tampa e as estantes so de ao inoxidvel. Deve-se

optar pelos banhos-maria que apresentam tampa em
cunha, que evitam gotejamento da gua evaporada,
fazendo com que esta corra para as extremidades da
mesma.
Abrir a tampa e colocar gua at que a soluo a ser

preparada fique submersa.
No caso de incubao de tubos inoculados, estes
devem permanecer mergulhados na gua, at uma
altura superior superfcie do meio de cultura.
Introduzir o material a ser incubado.
Regular o termostato para a temperatura adequada.
Ligar a chave eltrica.
Atingida a temperatura requerida, a lmpada-piloto
se apaga.
Utilizar termmetro
temperatura.
para
verificao
da
O tempo de incubao e a temperatura variam de

acordo com o meio e o indicado pelo fabricante.
6- USO E
LIMPEZA DO
BANHO-MARIA
17
No caso de manuteno de meios com gar, no

estado lquido, recomenda-se a temperatura mxima
de 45 C, para no comprometer nutrientes presentes
no meio.

A temperatura para a cultura de micro-organismos

obedece a metodologia utilizada.

4.4 Controle de temperatura

Para controlar a temperatura mxima atingida
utilizar termmetro de mxima com trava.
Registrar apropriadamente os dados pertinentes ao
controle de temperatura.
4.5 Limpeza
A limpeza feita semanalmente com gua e
detergente neutro.
Aps a limpeza, feita a desinfeco com lcool
70%.
5 REFERNCIAS
Manual de utilizao do banho-maria.
alimentos ITAL.
6 REGISTROS
No aplicvel.
18
4.2 Limpeza
7- USO E
Descrever o procedimento de uso e limpeza da

capela de fluxo laminar.
A limpeza feita diariamente: antes do incio dos

procedimentos analticos e ao final destes;
LIMPEZA
O equipamento destinado ao procedimento de

inoculao das amostras.
Passar um pano umedecido com lcool 70%; caso

houver necessidade, limpar com detergente neutro;
Remover todo o vestgio de espuma e, novamente

proceder a desinfeco;
DA CAPELA
DE FLUXO
LAMINAR
Manual de Instrues da Capela de Fluxo Laminar.
3 MATERIAIS
Lmpada UV, detergente neutro, cido peractico
0,2 % ou lcool 70%.
4 PROCEDIMENTOS
4.1 Utilizao da capela de fluxo laminar
Antes de iniciar os trabalhos, fazer a desinfeco
com lcool 70%, de toda a parte interna do fluxo;
Ligar o aparelho;
Ligar a lmpada germicida e esperar 15 minutos, no
mnimo, para deslig-la;
Colocar todo o material necessrio para o
procedimento evitando o afastamento do fluxo laminar;
Manipular rapidamente as amostras, mas com
segurana para evitar erros e desperdcios. O descarte
de pipetas e outros materiais deve ser feito em
utenslio prprio que permanece prximo cabine do
fluxo laminar.
Quando usar lcool para a desinfeco, cuidar

para no passar nas reas em acrlico, pois ficaro
irreversivelmente foscas.
5 REFERNCIAS
Manual de Mtodos de Anlises Microbiolgicas em
Alimentos ITAL
Microbiologia Bsica. So Paulo: Editora Edusp, 2000,
129 p.
6 REGISTROS
No aplicvel.
8- LAVAGEM,
PREPARO E
ESTERILIZAO
DE MATERIAIS
PARA ANLISES
MICROBIOLGICAS
19
4 PROCEDIMENTOS
Descrever a relao de materiais utilizados

nos procedimentos analticos do Laboratrio de
Microbiologia bem como o seu preparo e esterilizao.
Laboratrio de Microbiologia.
Antes de iniciar o procedimento de lavagem, retirar

a identificao das vidrarias com algodo umedecido
em lcool ou acetona.
4.1 Preparo de provetas, frascos de

Erlenmeyer, frascos shott e bqueres
Associao Brasileira de Normas Tcnicas ABNT1295
3 MATERIAIS
lcool 70%, algodo hidrfilo, algodo hidrfobo,
autoclave, balana analtica, bastes de vidro,
destilador, deionizador para gua, ou aparelho de
osmose reversa, escovetes de diversos tamanhos,
esponjas de ao e de fibra sinttica, esptulas de ao
inoxidvel, estufa de esterilizao e secagem, equipada
com termmetro, papel alumnio ou papel Kraft, luvas
de amianto, luvas de borracha, provetas graduadas de
1000 mL, 500 mL, 250 mL e 100 mL de borossilicato
ou vidro neutro, tesoura, pina de ao inoxidvel,
indicadores de esterilizao (fita ou ampola com
suspenso de Bacillus stearothermophilus e Bacillus
subtillus), bico de Bunsen, trip, tela de amianto,
bqueres de borossilicato ou vidro neutro, estiletes,
fita adesiva tipo crepe ou barbante, gaze.
4.1.1 Lavagem
Lavar com gua e detergente, utilizando esponja e
escovete. Caso os materiais apresentem incrustaes
ou resduos gordurosos, proceder imerso destes
em soluo de hipoclorito de sdio a 2% e detergente
neutro.
Enxaguar dez vezes com gua corrente, enchendo e
esvaziando totalmente a vidraria.
Utilizar no ltimo enxgue, gua destilada ou
deionizada.
Deixar drenar a gua das vidrarias e secar em estufa
a 100 C.
4.1.2 Preparo e esterilizao

Colocar tampo de algodo hidrfobo e gaze no
bocal dos frascos erlenmeyer. Cobrir com folha de
alumnio ou papel Kraft e fixar com barbante, atilho ou
fita adesiva tipo crepe.
20
8- LAVAGEM,
Cobrir os bocais das provetas e dos bqueres com

folha de alumnio ou papel Kraft e fixar com fita adesiva
tipo crepe, atilho ou barbante.
PREPARO E
Esterilizar em autoclave a 121 C, por 30 min ou em

estufa a 170 C 180 C por 2 horas.
ESTERILIZAO
Identificar o material com data de esterilizao e

prova de esterilizao.
4.3.2 Esterilizao
Observao: Frascos destinados ao preparo de meios

de cultura, que so submetidos esterilizao por
autoclave no momento do preparo do meio, dispensam
esterilizao prvia.
Acondicionar em porta-pipetas ou embrulhar em

grupos em papel Kraft.
4.2 Placas de Petri descartveis usadas
Esterilizar em estufa a 170 C, por 2 horas ou em

autoclave a 121 C por 30 minutos.
DE MATERIAIS
PARA ANLISES
MICROBIOLGICAS
Colocar em saco prprio para autoclave, esterilizar a

121 +/- 1 C por 30 minutos e descartar.
4.3 Preparo de pipetas

4.3.1 Lavagem
Retirar o algodo do bocal de cada pipeta com
estilete de ponta fina ou agulha histolgica.
Imergir as pipetas em soluo de hipoclorito de
sdio a 2% e detergente por 24 horas.
Enxaguar em gua corrente.
Se necessrio, imergir em soluo de hexano alcalino
at total eliminao dos resduos.
Enxaguar, tantas vezes quantas forem necessrias,

at a eliminao completa dos resduos.
Enxaguar com gua destilada ou deionizada.
Secar em estufa a 100 C.
Colocar algodo hidrfobo no bocal das pipetas.
Identificar o material com nome, volume, data de

esterilizao e prova de esterilizao.

4.4 Preparo de tubos de Durham

4.4.1 Lavagem
Colocar em um recipiente com gua e levar ao
micro-ondas at ferver.
Imergir em soluo de hipoclorito de sdio a 2% e
detergente neutro por no mnimo 24 horas.
Lavar os tubos com gua e detergente.
8- LAVAGEM,
Colocar, se necessrio, os tubos em recipiente

com soluo hexano alcalino at total eliminao dos
resduos.
PREPARO E
Enxaguar dez vezes em gua corrente, enchendo e

esvaziando totalmente os tubos.
ESTERILIZAO
Colocar em um recipiente com gua destilada ou

deionizada e levar ao micro-ondas at ferver.
DE MATERIAIS
PARA ANLISES
MICROBIOLGICAS
Deixar esfriar e retirar bem a gua.

deionizada.
Deixar escorrer bem toda a gua, colocar os tubos
para secar em estufa a 100 C.
4.5.2 Tampas
Imergir em soluo de hipoclorito de sdio a 2% e
detergente neutro por no mnimo 24 horas.
Secar em estufa a 100 C.
Lavar com gua e detergente.
Os tubos de Durham dispensam prvia esterilizao.
Enxaguar dez vezes em gua corrente.
4.5 Preparo de tubos de ensaio com tampas

4.5.1 Lavagem
Esvaziar o contedo do tubo e colocar de molho
em soluo de hipoclorito de sdio a 2% e detergente
neutro por no mnimo 24 horas.
Lavar com gua e detergente, utilizando escovetes e
esponjas para retirar resduos internos.
Enxaguar em gua corrente.
21

deionizada.
Deixar escorrer a gua e secar em estufa a 50 C.
4.5.3 Esterilizao
Esse procedimento necessrio para tubos
utilizados para conter meios de cultura j estreis ou
para solues em ensaios complementares especficos.
Colocar, se necessrio, os tubos em recipiente

contendo soluo hexano alcalino at total eliminao
dos resduos.
Vedar os tubos secos com as tampas, embrulhar em

papel Kraft em grupos de trs ou cinco, de acordo com
a utilizao e esterilizar em autoclave a 121 C, por 30
min, ou em estufa a 180 C, por 2 horas.
Enxaguar dez vezes em gua corrente, enchendo e

esvaziando totalmente os tubos.
Identificar com nome, volume, data de esterilizao

e prova de esterilizao.
8- LAVAGEM,
PREPARO E
ESTERILIZAO
DE MATERIAIS
PARA ANLISES
MICROBIOLGICAS
4.6 Preparo e esterilizao de pinas

4.6.1 Lavagem
Lavar as pinas com gua e detergente.
4.6.2 Esterilizao
22
4.8 Ponteiras descartveis usadas

Esterilizar em autoclave a 121+/-1 C, por 30 minutos
e descartar.
5 REFERNCIAS
Embrulhar em grupos as pinas em papel Kraft ou

papel alumnio.

LARA.
Esterilizar em autoclave a 121 C, por 30 min, ou em

estufa a 180 C, por 2 horas.

alimentos ITAL.
Identificar com nome, data de esterilizao e prova

de esterilizao.
6 REGISTROS
No aplicvel.
4.7 Preparo e esterilizao de bastes

tipo hquei
4.7.1 Lavagem
Lavar o material com gua e detergente.
4.7.2 Esterilizao
Embrulhar individualmente os bastes em papel
Kraft ou papel alumnio.
Esterilizar em autoclave a 121 C, por 30 min, ou em
estufa a 180 C, por 2 horas.
23
9- USO E
LIMPEZA DAS
ESTUFAS
BACTERIOLGICAS
Descrever o procedimento de uso e limpeza de

estufas bacteriolgicas.
Chave liga-desliga: alm de permitir ligar ou desligar

o aparelho, atravs dela que se altera a tenso da
eletricidade.
A estufa de incubao ou bacteriolgica um

equipamento utilizado para os procedimentos
analticos, ou seja, para a cultura de microrganismos
que possa estar presente nas amostras processadas,
em uma temperatura pr-determinada.
Controlador eletrnico: regulvel da temperatura

ambiente at 240 C. Controle programvel
manualmente.
4.2 Utilizao estufas de incubao
Manual de Instrues da Estufa Bacteriolgica.
3 MATERIAIS
Termmetro de mxima e mnima, detergente
neutro, lcool 70%, esponjas e panos de limpeza
adequados.
4 PROCEDIMENTO
Respiro: serve para expelir o excesso de calor e
manter a uniformidade da temperatura. Antes de ligar
necessrio remover a tampa plstica.
Lmpada piloto: quando acesa indica que a estufa
est ligada, ao atingir a temperatura desejada a luz se
apagar.
Termmetro de mxima e mnima: serve para

acompanhamento das oscilaes de temperatura.
Regular o
programada.
termostato
para
temperatura
Ligar a estufa na rede, o interruptor acionado e a

lmpada piloto acende.
Ao atingir a temperatura programada, a lmpada
piloto apaga.
Colocar o termmetro no orifcio localizado acima
da estufa ou no seu interior.
A TEMPERATURA DEPENDE DO MATERIAL INCUBADO.
O LIMITE DE TOLERNCIA FICA EM 1 C.
4.3 Acondicionamento do material analtico

Placas que se destinam cultura de bactrias so
incubadas invertidas.
9- USO E
No sobrepor mais que cinco placas para garantir

uma uniformidade de distribuio de temperatura.
LIMPEZA DAS
Os tubos devem ser levados em estantes apropriadas

e com garantia de que o calor possa permear entre
eles.
ESTUFAS
rigorosamente necessrio que todo o material

que vai para a estufa esteja identificado.
BACTERIOLGICAS
Saquetas e erlenmeyers utilizados em prenriquecimentos de algumas anlises devem estar

identificados e separados de tal forma que o ar quente
consiga circular entre eles.
4.4 Limpeza
A limpeza feita semanalmente.
Passar um pano umedecido com lcool 70%.
Se houver alguma sujeira, como pingos de amostras
incubadas, passar esponja com detergente neutro.
Retirar toda a espuma com um pano enxaguado
vrias vezes em gua limpa.
Aps a limpeza passar um pano umedecido com
lcool 70%.
5 REFERNCIAS
alimentos ITAL.
24

6 REGISTROS
No aplicvel.
25
10- USO E
LIMPEZA DAS
Descrever o procedimento de uso e limpeza das

estufas de esterilizao e secagem de materiais. A estufa
de esterilizao e secagem destina-se esterilizao de
vidrarias necessrias para procedimentos analticos,
bem como para a secagem de material.
ESTUFAS DE
ESTERILIZAO
E SECAGEM
Manual de Instrues da Estufa de Esterilizao e
Secagem.
3 MATERIAIS
Termmetro de mxima com trava, papel de
embrulho, Bacillus subtilis, fita adesiva, detergente
neutro, lcool 70%, esponja e panos de limpeza
adequados.
4 PROCEDIMENTO
Respiro: serve para expelir o excesso de calor e
manter a uniformidade da temperatura. Antes de ligar
necessrio remover a tampa plstica.
Lmpada piloto: quando acesa indica que a estufa
est ligada, ao atingir a temperatura desejada a luz se
apagar.
Chave liga-desliga: alm de permitir ligar ou desligar

o aparelho, atravs dela que se altera a voltagem.
Controlador eletrnico: regulvel da temperatura
ambiente at 240 0C. Controle programvel
manualmente.
Termmetro de Escala Linear: Serve para fazer a
medida da temperatura dentro da estufa. colocado
atravs do respiro.
4.2 Utilizao da estufa de esterilizao e

secagem
Antes de ligar, verificar se a estufa e a rede eltrica
so da mesma tenso eltrica.
Para trocar a tenso, soltar o parafuso que prende a
capa da chave, girar com a alavanca no ponto central.
Verificar a marcao existente no painel e fazer a
ligao de acordo com a rede eltrica no local, reapertar
o parafuso que prende a capa da chave.
Regular o
programada.
termostato
para
temperatura
Ligar a estufa na rede, o interruptor acionado e a

lmpada piloto acende.
Ao atingir a temperatura programada, a lmpada
piloto apaga.
Colocar o termmetro de mxima no orifcio
localizado acima da estufa.
10- USO E
LIMPEZA DAS
ESTUFAS DE
ESTERILIZAO
E SECAGEM
26
4.3 Preparao do material a ser esterilizado
4.5 Limpeza
Proteger as placas de Petri e pipetas graduadas com

papel de embrulho.

detergente neutro.
A temperatura de esterilizao no mnimo 170 C.

70%.
O tempo necessrio para esterilizao no mnimo

2 horas.
O papel que protege o material adquire cor parda,
no devendo escurecer em demasia e nem se tornar
quebradio.
4.4 Controle de temperatura

Para controlar a temperatura mxima atingida
durante a esterilizao, utilizar termmetro de mxima
com trava.
Opcionalmente pode ser utilizado Bacillus subtillus
para a verificao da eficincia do processo de
esterilizao.
Verificar a temperatura atingida pelo termmetro.
No atingida a temperatura de esterilizao, retornar o
material para a estufa e esterilizar novamente.
Abrir o forno Pasteur somente depois que este
estiver atingido equilbrio com a temperatura ambiente,
pois o contato do ar frio com o vidro superaquecido
ir provocar quebra e estilhaos, podendo atingir o
operador.
5 REFERNCIAS
LARA.
alimentos ITAL
6 REGISTROS
No aplicvel.
11- USO E
LIMPEZA DO
FORNO DE
MICRO-ONDAS
1 OBJETIVOS E CAMPO DE APLICAO

Descrever os procedimentos para uso e limpeza do
forno micro-ondas. O Forno Micro-ondas utilizado
para preparao de meios de cultura e fervura de tubos
de Durham.
Manual de Instrues de uso do forno micro-ondas.
3 MATERIAIS
Detergente neutro, lcool 70%.
4 PROCEDIMENTO
4.1 Instrues de uso
Verifique se est corretamente ligado e sem nenhum
material entre a porta e o gabinete;
Verifique se o prato giratrio e seu suporte esto
bem encaixados toda a vez que ligar o forno;
Nunca ligue o forno vazio, pois isso pode provocar
fascas em seu interior;
Mantenha a tampa do guia de ondas sempre limpa:
resduos nesse local impedem a passagem das microondas, podendo provocar choque eltrico;
Se o material ou recipiente que esto dentro do
forno faiscarem durante a operao, mantenha a porta
27
aparelho fechada, desligue-o e desconecte o cabo de

fora da tomada;
Use sempre luvas trmicas para retirar o material do
forno, pois h transferncia de calor aos recipientes;
Depois de retirar o material do forno, manuseie
com cuidado, evitando que o vapor formado pelo
aquecimento entre em contato com mos ou rosto do
manipulador.
4.2 Cuidados durante a limpeza

Mantenha sempre a porta aberta ao limpar qualquer
das partes de micro-ondas: isso evita que ele seja ligado
acidentalmente com o interior vazio;
Antes de limpar a parte interna, remova o prato
giratrio e o suporte;
Nunca jogue gua em parte alguma do gabinete ou
da porta: limpe-os interna e externamente com pano
umedecido com uma mistura de gua e detergente
neutro;
Nunca utilize detergentes fortes (abrasivos), lcool,
amonaco ou produtos qumicos no indicados, nem
use ps, palha de ao ou esponjas grossas para lavar
os acessrios;
Para fazer a limpeza completa do forno (parte
interna e externa), desconecte o plugue da tomada;
11- USO E
LIMPEZA DO
FORNO DE
MICRO-ONDAS
Caso a porta embaar e o interior do forno reter

gua aps o preparo de algum material, seque todas
as partes umedecidas com um pano macio (perfex).
A limpeza geral obedece ao cronograma semanal.
5 REFERNCIAS
6 REGISTROS
No aplicvel.
28
29
12- USO E
LIMPEZA DAS
Descrever os procedimentos para limpeza e uso

das geladeiras de acordo com a finalidade a que se
destinam. As geladeiras so utilizadas para manuteno
de amostras refrigeradas aguardando processamento
e de meios de cultura.
GELADEIRAS
Manual de Instrues Geladeira / Freezer Consul.
Regular o
programada;
termostato
para
temperatura
Ligar a geladeira na rede.
4.3 Procedimento de limpeza das

geladeiras
A limpeza feita mensalmente com gua e
detergente neutro.
70%.
3 MATERIAIS
Termmetro, detergente neutro e lcool 70%.
4 PROCEDIMENTO
4.1 Finalidades
As geladeiras do Laboratrio de Microbiologia
apresentam duas finalidades:
As geladeiras 1 e 2 so utilizadas para estocagem
de material de laboratrio tais como meios de cultura,
reagentes e outros materiais pertinentes s anlises.
A geladeira 3, utilizada para armazenamento de
material contaminado e cepas.
4.2 Procedimento de utilizao de geladeira
5 REFERNCIAS
Mtodo de Anlises Microbiolgica para Alimentos
LARA.
6 REGISTROS APLICVEIS
No aplicvel.
13- USO E
LIMPEZA DO
HOMOGENEIZADOR
DE AMOSTRAS
(STOMACHER)

homogeneizador de amostras. O homogeneizador
um equipamento utilizado para a triturao e
homogeneizao de amostras.
Manual de Instrues do Bag Mixer 400.
3 MATERIAIS
Detergente neutro, lcool 70%, esponjas e panos de
limpeza adequados.
4 PROCEDIMENTO
Boto do timer
Alavanca para a abertura e fechamento da porta
Conjunto de ps homogeneizadoras.
4.2 Instalao do Homogeneizador

Remover o equipamento da embalagem.
Colocar em uma superfcie plana e estvel.
4.3 Utilizao do Homogeneizador

Ligar o aparelho na corrente eltrica.
Ajustar o tempo necessrio para a homogeneizao
de acordo com a amostra.
30
Abrir a porta e inserir o saco estril com a amostra

e o diluente.
Fechar a porta prendendo a extremidade do saco.
O homogeneizador iniciar o ciclo automaticamente,
parando no final do tempo estabelecido.
Abrir a porta e retirar a saqueta.
O homogeneizador estar pronto para um novo ciclo.
4.4 Limpeza do Homogeneizador

Desligar da corrente eltrica.
A limpeza feita semanalmente ou mais
frequentemente, se necessrio, com gua e detergente
neutro.
Utilizar pano adequado passando nas ps de
homogeneizao e no interior do equipamento.
Cuidar para que resduos de detergente no
permaneam no equipamento.
Aps a limpeza, feita a desinfeco com lcool 70%.
5 REFERNCIAS
No aplicvel.
6 REGISTROS
No aplicvel.
14- USO E

incubadora para fungos.
LIMPEZA DA
A incubadora para fungos um equipamento

utilizado para a cultura de amostras submetidas a
pesquisa de bolores e leveduras.
INCUBADORA
PARA BOLORES
E LEVEDURAS
31
A lmpada piloto ao apagar, indica que a temperatura

de termostatizao foi atingida e, aps isto, iniciamse os ciclos de liga-desliga, para manuteno da
temperatura desejada.
Aguardar a estabilizao da temperatura +/- 30
minutos.
Em caso de necessidade de movimentao do
aparelho, esperar 30 minutos antes de relig-lo.
Manual de Instrues Incubadora de Fungos

Marconi.
No abrir a porta frequentemente para evitar a

condensao dentro da cmara interna.
3 MATERIAIS
Para evitar problemas com a estabilizao

da temperatura, manter o interruptor ligado
constantemente.
Termostato, detergente neutro e lcool 70%.
4 PROCEDIMENTO
A TEMPERATURA DEPENDE DA METODOLOGIA

EMPREGADA. O LIMITE DE TOLERNCIA FICA EM
1 C.
A INCUBADORA DE FUNGOS UTILIZADA

EXCLUSIVAMENTE PARA O CULTIVO DE BOLORES E
LEVEDURAS.
4.2 Limpeza
4.1 Procedimento de utilizao da incubadora

para fungos
Acionar o interruptor geral e deixar os componentes
eletrnicos estabilizarem por 5 minutos, lembrando
sempre que o mesmo no pode ser ligado e desligado
em intervalos inferiores a 3 minutos.
Selecionar a temperatura desejada.
A limpeza realizada semanalmente.

Limpar com uma esponja, gua e detergente neutro.
Retirar todo o resduo de espuma com um pano
enxaguado em gua limpa.
Para a desinfeco, passar um pano umedecido em
lcool 70%.

5 REFERNCIAS
14- USO E
LIMPEZA DA
INCUBADORA
PARA BOLORES
E LEVEDURAS
Mtodo de Anlises Microbiolgica para Alimentos

LARA
alimentos ITAL.
Microbiologia Bsica. So Paulo: Editora Edusp, 2000,
129p.
6 REGISTROS
No aplicvel.
32
15- USO E
LIMPEZA DA

autoclave. A autoclave um aparelho utilizado nos
processos de esterilizao a vapor e presso, sendo
empregada para materiais destinados a anlises, meios
de cultura e materiais contaminados para descarte.
AUTOCLAVE
Manual de Instrues da autoclave Phoenix.
3 MATERIAIS
33
Atingida a presso de trabalho, regular a chave

eltrica para o mdio, a fim de manter a presso.
Verificar a vlvula de segurana de modo que o
manmetro fique estvel.
Regular o relgio minuteiro para controlar o tempo
de esterilizao.
Terminado o tempo de esterilizao, desligar a
autoclave.
Esperar o manmetro descer a zero e abrir o registro
para a sada do vapor.
Detergente neutro, esponja, jarra, gua potvel,

gua deionizada ou destilada.
O TEMPO PARA A REDUO DA PRESSO

IMPRESCINDVEL PARA A EFICINCIA DA
ESTERILIZAO.
4 PROCEDIMENTO
4.1 Utilizao da autoclave
Jamais se deve forar um abaixamento da presso

para abrir a autoclave, pois todo o procedimento ser
comprometido.
Abrir a tampa e colocar gua na caldeira at cobrir o

descanso do cesto.
Abrir a tampa e retirar o material sempre utilizando

luvas de amianto.
Introduzir o material a ser esterilizado.
Em cada esterilizao verificar o nvel de gua.
Fechar a tampa, apertando bem e por igual, os

manpulos.
Para troca de gua e limpeza da autoclave utilizar o

registro inferior.
Abrir o registro de presso e ligar a chave eltrica no

calor mximo.
Materiais limpos e materiais contaminados so

autoclavados em ciclos separados.
Aguardar o comeo da sada do jato contnuo de

vapor dgua e, ento, fechar o orifcio de escapamento.
15- USO E
LIMPEZA DA
AUTOCLAVE
O material limpo esterilizado em autoclave

temperatura de 121 C, com tolerncia de 1 C, por
15 minutos.
A esterilizao em excesso de meios de cultura
pode alterar caractersticas bioqumicas, propriedades
nutritivas e deteriorar a qualidade do meio;
34
4.2 Controle da temperatura

Opo 1:
a) Utilizar, a cada ciclo, fitas para autoclave que so
esterilizadas junto com o material.
b) Findo o perodo de esterilizao, verificar a cor
desenvolvida na fita.
Esterilizao insuficiente pode no destruir as

bactrias presentes;
c) O desenvolvimento de listras mais escuras na fita

indica a temperatura de esterilizao atingida.
A eficincia da esterilizao pode ser observada

atravs do controle da temperatura ou da eficincia
biolgica.
d) Utilizar juntamente com as fitas para autoclave,

termmetro de mxima com trava e, no fim da
esterilizao, verificar a temperatura mxima.
Para melhor eficincia da autoclave recomendvel:
e) No atingida a temperatura de esterilizao,

recomear todo o processo.
No empacotar objetos totalmente fechados.

Garantir o perfeito vedamento da tampa antes de
ligar o vapor.
Retirar todo o excesso de ar, trocando-o por vapor.
Aguardar o equilbrio de presso antes de reabrir a
autoclave. Observar continuamente as marcaes
do manmetro e do termmetro.
Para abrir a tampa da cmara de autoclave, devese observar se todo o vapor foi evacuado e se o
manmetro est marcando zero.
- Para retirada de material recm autoclavado, deve-se
utilizar luvas de amianto de cano longo.
- A gua utilizada na autoclave deve ser destilada ou
deionizada.
f) Caso a temperatura de esterilizao ultrapassar a

temperatura recomendada, descartar o material
autoclavado.
g) Os dados obtidos so anotados em relatrio de
controle.
Opo 2:
a) Pode-se avaliar a eficincia das esterilizaes atravs
do controle de eficincia biolgica:
b) Utilizar esporos de Bacillus stearothermophylus.
Devido termorresistncia dos esporos, estes
somente so destrudos a uma temperatura de
120+/-1 C, por 15 minutos, com 1 atm de presso.
15- USO E
LIMPEZA DA
AUTOCLAVE
Em temperaturas mais baixas ou perodos mais

curtos no h destruio dos esporos.
c) As ampolas so colocadas junto com o material a
esterilizar, acondicionadas em tubo de ensaio
para evitar que, no caso de rompimento de uma
ampola haja contaminao.
d) Aps o tratamento em autoclave controlado o
resultado atravs da incubao das ampolas em
estufa, a 55 C, por 24/48 horas.
e) Incubar junto uma ampola que no tenha sido
esterilizada como prova de controle.
f) Sendo a esterilizao eficiente no h crescimento
de Bacillus stearothermophylus e a colorao
violeta da ampola permanece inalterada.
g) Em caso de esterilizao ineficiente, o crescimento
dos bacilos observado pela turvao do caldo e
acidificao por fermentao dos acares e sua cor
muda de violeta para amarelo.
h) A ampola controle tambm muda de colorao
passando de violeta para amarelo.
4.3 Limpeza
Autoclaves de esterilizao de meios de cultura e
vidraria
detergente neutro.
35
Autoclaves de esterilizao de material contaminado

A limpeza feita aps cada ciclo com gua e
detergente neutro.
5 REFERNCIAS
alimentos ITAL.
6 REGISTROS
No aplicvel.
16- USO E
LIMPEZA DO
AGITADOR DE
TUBOS

agitador de tubos de ensaio.
O agitador de tubos de ensaio um aparelho
importante no processo de anlises microbiolgicas,
j que homogeneiza o contedo dos tubos de ensaio
atravs de agitao circular.
No aplicvel.
3 MATERIAIS
lcool 70% e algodo.
4 PROCEDIMENTO
4.1 Utilizao do agitador de tubos
O aparelho deve ser ligado na corrente eltrica.
A chave liga/desliga deve ser posicionada na opo
LIGA.
Deve-se selecionar a agitao desejada (contnua ou
no).
Para agitar o tubo, basta, segurando firme, posicionlo sobre o suporte, na parte superior do aparelho e
pressionar para que seu funcionamento inicie.
36
Agitar o contedo durante alguns segundos, e

prosseguir a anlise.
4.2 Limpeza
Antes e depois do uso, o agitador deve ser limpo
com algodo embebido em lcool 70%.
5 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
No aplicvel.
6 REGISTROS
No aplicvel.
17- USO E
LIMPEZA DO

contador de colnias. O contador de colnias um
utenslio que auxilia na contagem das colnias de microorganismos cultivadas nas placas de petri, atravs de
sua observao na lupa, e com iluminao.
CONTADOR DE
COLNIAS
No aplicvel.
3 MATERIAIS
Placa de petri com cultura e caneta para retroprojetor.
lcool 70% e algodo.
4 PROCEDIMENTO
4.1 Utilizao do contador de colnias
Lig-lo no boto liga/desliga este procedimento
acender a lmpada.
Colocar a placa com a cultura sobre a base
quadriculada.
Contar as colnias existentes.
Caso, o nmero de colnias seja muito elevado,
pode-se contar um quadrante e multiplicar por 20. Esta
37
ser uma contagem estimada do nmero de colnias

da placa.
4.3 Limpeza
Depois do uso, o equipamento deve ser limpo com
algodo embebido em lcool 70%.
5 REFERNCIAS
No aplicvel.
6 REGISTROS
No aplicvel.
1 OBJETIVO
18- USO E
LIMPEZA DO
ESTERILIZADOR
A VCUO

contador de colnias.
2 CAMPO DE APLICAO
O contador de colnias um utenslio que auxilia na
contagem das colnias de micro-organismos cultivadas
nas placas de petri, atravs de sua observao na lupa,
e com iluminao.
Caso, o nmero de colnias seja muito elevado,

pode-se contar um quadrante e multiplicar por 20. Esta
ser uma contagem estimada do nmero de colnias
da placa.
5.2 Limpeza
Depois do uso, o agitador deve ser limpo com
algodo embebido em lcool 70%.
6 REFERNCIAS
No aplicvel.
No aplicvel.
7 REGISTROS
4 MATERIAIS
Placa de petri com cultura e caneta para retroprojetor.
lcool 70% e algodo.
5 PROCEDIMENTO
5.1 Utilizao do contador de colnias
Lig-lo no boto liga/desliga este procedimento
acender a lmpada.
Colocar a placa com a cultura sobre a base
quadriculada.
Contar as colnias existentes.
38
No aplicvel.
19- PESAGEM
Descrever o procedimento de pesagem de amostras

para anlise microbiolgica.
DE AMOSTRAS
A pesagem correta das amostras de suma

importncia para a inocuidade da amostra e sua
proporcionalidade em relao ao diluente.
ISO 6887-1 : 2011.
3 MATERIAIS E EQUIPAMENTOS
lcool 70%;
Algodo;
Colher estril, pina estril, cabo e lmina de bisturi
estreis (de acordo com a amostra a ser pesada);
Bolsa plstica estril;
Balana de preciso;
Bico de Bunsen ou capela de fluxo laminar.
4 PROCEDIMENTO
4.1 Desinfetar com algodo e lcool 70% e ligar a
balana conforme IT MIC004;
4.2 Ligar a chama, ou utilizar a capela de fluxo laminar,
seguindo a IT MIC006;
39
4.3 Prximo chama, ou com a exausto da capela

ligada, pesar, em uma bolsa estril uma quantidade
de amostra representativa de, no mnimo 10 g ou 10
mL, variando em, no mximo 5% do valor pesado, para
menos ou para mais;
4.4 Fechar assepticamente a bolsa e repetir com as
demais amostras;
4.5 Desligar a balana.
5 REFERNCIAS
No aplicvel.
6 REGISTROS
No aplicvel.
20- PREPARO
DA SUSPENSO
INICIAL E
DILUIES
DECIMAIS DE
AMOSTRAS
40
1 OBJETIVO
5 PROCEDIMENTO
Descrever o procedimento de preparo da suspenso

inicial e das diluies decimais das amostras para
anlises microbiolgicas.
5.1 Efetuar a pesagem da amostra, conforme IT MIC018;
2 CAMPO DE APLICAO
5.2 Com a chama ligada, adicionar bolsa com a

amostra, o diluente na proporo indicada no item 4;
5.3 Homogeneizar no stomacher, observando a IT
MIC012;
A diluio das amostras garante a inoculao

adequada dos microrganismos no meio de cultura.
5.4 Se a amostra possuir grandes partculas, deixar

descansar para que as mesmas sedimentem. Esta ser
a suspenso inicial.
5.5 Com auxlio de ponteira e micropipetador estreis,

subtrair 1 mL desta suspenso e repassar para um tubo
de ensaio contendo o diluente apropriado;
ISO 6887-1: 2011.
4 MATERIAIS E EQUIPAMENTOS
lcool 70%;
Algodo;
Tubos de ensaio ou frascos com diluente apropriado,
na quantidade necessria para a amostra (9 partes de
diluente para uma parte de amostra);
5.6 Homogeneizar com o agitador de tubos (ver IT

MIC015). Esta ser a primeira diluio decimal, e a
partir dela, sero feitas as sucessivas diluies, de
acordo com a necessidade de cada amostra.
6 REFERNCIAS
No aplicvel.
ponteiras de 1 mL;
Micropipetador de 1 mL;
Agitador de tubos;
Homogeneizador de amostras (Stomacher);
Bico de Bunsen ou capela de fluxo laminar.
7 REGISTROS
No aplicvel.
1-13
NORMAS GERAIS
Procedimento Operacional Padro
41
1-PREPARAO
E
CONSERVAO
DE MEIOS DE
CULTURA
PREPARAO E CONSERVAO DE MEIOS DE

CULTURA
Meios de cultura desidratados fornecidos por
diferentes fabricantes podem apresentar pequenas
diferenas em suas composies.
Observar atentamente a quantidade necessria
de meio desidratado, em gramas por litro de meio
a ser preparado, o modo de preparo, o tempo e a
temperatura de esterilizao em cada caso.
Ao adquirir meios de cultura, observar atentamente
a formulao, comparando-a com aquela indicada
neste manual. s vezes, as diferentes marcas utilizam
diferentes termos para uma mesma substncia. Por
exemplo, os termos triptona e tripticase referem-se
peptona de casena obtida por digesto triptica ou
pancretica. Assim, os produtos gar tripticase soja,
gar soja triptona, Caso gar (antigo Casoy) referem-se
um produto que contm peptona de casena (obtida
por digesto trptica ou pancretica) e peptona de
farinha de soja.
PREPARAO E DISTRIBUIO DE MEIOS DE

CULTURA
Os meios comerciais devem ser hidratados em
pequena quantidade de gua at que todo o meio
fique mido e s depois deve-se acrescentar o
restante da gua.
42
Os meios preparados no comerciais devem ser

pesados separadamente em papel manteiga ou
papel alumnio e adicionados em um nico frasco
(normalmente em bquer), hidratar em pequena
quantidade de gua at que todo o meio fique
mido e s depois deve-se acrescentar o restante
da gua.
Sempre que for necessrio, levar o meio para
fundir, usar vidro Pyrex, aquecer sobre a tela de
amianto ou similar e trip, no bico de Bunsen ou, se
permitido, em micro-ondas.
Usar sempre luvas trmicas apropriadas para
laboratrio para manipular vidrarias quentes;
Sempre que for usado o termo esterilizar em
autoclave, o tempo de esterilizao e a temperatura
deve ser compatvel com o meio a ser produzido,
conforme orientao do fabricante.
Sempre que for usado o termo esterilizar por
filtrao, usar o filtro com porosidade de 0,22
micra, recomendado para partculas bacterianas.
Quando distribuir o meio antes de autoclavar, os
tubos no precisam estar esterilizados;
Quando distribuir o meio aps a autoclavao,
os tubos, frascos, placas, pipetas e vidrarias ou
materiais auxiliares obrigatoriamente devem ser
estreis.
Os meios devem ser autoclavados com as tampas
semiabertas, para que a esterilizao seja por igual
1-PREPARAO
E
CONSERVAO
DE MEIOS DE
CULTURA
em todo o contedo dos tubos - tampas fechadas

no permitem a entrada do vapor.
CONTROLE DE QUALIDADE, ESTERILIDADE E

CRESCIMENTO
Para controle dos meios confeccionados, incubar
placas ou tubos no inoculados 36 1 C por 24
horas.
No deve haver mudana de cor nem crescimento
de qualquer colnia.
Para o controle de crescimento, sempre que possvel
usar cepas ATCC, que so cepas de referncias de
origem e padro definido de provas para a sua
caracterizao.
Se no for possvel o uso de cepas ATCC, usar cepas
100% positivas para os controles de qualidade de
crescimento realizados.
RECOMENDAES GERAIS
Evitar usar meios vencidos (liofilizados e prontos
para uso); se usar, certificar-se com o controle de
crescimento de que realmente est funcionando.
No usar meios prontos para uso em tubos ou placas
que estejam ressecados.
43
Observar com ateno para as instrues de alguns

inculos que so especficos para alguns meios de
cultura.
Recomenda-se o uso de tubos com tampa de
rosca, pois evitam o ressecamento rpido do meio
(tamanho dos tubos utilizados geralmente so de 11
por 100 mm).
Todos os meios confeccionados devem ser
devidamente identificados com o nome, data de
fabricao e data de validade.
Todos os meios de placa devem ser embalados
em filme plstico PVC transparente para evitar o
ressecamento.
Evitar o uso de sacos plsticos para embalar as
placas, pois a gua de condensao formada facilita
a proliferao de fungos; para meios de cultura em
tubos, colocar em sacos plsticos, procurando tirar o
excesso de ar. Convm guardar os tubos com meios
preparados em sacos plsticos, para sua maior
segurana.
2- CONTAGEM
TOTAL DE
MICRORGANISMOS
EM GUA
UTILIZANDO
O MEIO GAR
NUTRIENTE
44
1 OBJETIVO E CAMPO DE APLICAO:
4 REAGENTES E MATERIAIS:
Aplica-se enumerao de bactrias em gua

potvel tratada, incluindo tambm guas minerais
engarrafadas.
gar Nutriente Extrato de levedura; lcool 70%;

soluo salina peptonada 0,1%; algodo; placas de
petri.
2 DOCUMENTOS COMPLEMENTARES:
5 DESCRIO/PROCEDIMENTO
5.1 Pesagem e preparo de amostra
ISO 6887- Microbiologia de alimentos e de produtos

de alimentao animal Preparao de amostras-teste,
suspenso inicial e diluies decimais para anlises
microbiolgicas.
ISO 7218, Microbiologia de alimentos e de produtos
de alimentao animal Orientaes gerais para
ISO 8261, Leite e produtos derivados Guia geral
para preparao de amostras-teste, suspenso inicial e
diluies decimais para anlises microbiolgicas.
ISO/TS 11133 - Microbiologia de alimentos e de
produtos de alimentao animal Orientaes gerais
na preparao e produo de meios de cultura.
IT MIC018 e IT MIC019.
3 EQUIPAMENTOS:
Balana semianaltica; agitador de tubos; bico de
Bunsen ou capela de fluxo laminar; micropipetador de
0,1 a 1 mL; estufa bacteriolgica a 22 C +/- 1 C, e a
36 C +/- 1 C.
Efetuar a suspenso inicial da amostra e suas

diluies decimais conforme necessidade.
5.2 Inoculao em placas

Dispensar 1 mL de amostra em duplicata em placas
de petri identificadas.
Verter de 15 a 20 mL de gar sobre a amostra,
homogeneizar e esperar a solidificar em superfcie
plana.
5.3 Incubao
Incubar a metade das placas de petri invertidas a 36
+/-1 C, durante 44 +/- 4 horas, e a outra parte a 22+/-1
C, durante 68 +/- 4horas.
5.4 Contagem das colnias

Contar as colnias presentes nas placas e calcular
o nmero estimado de colnias presentes em 1 mL de
amostra.
5.5 Expresso dos resultados
2- CONTAGEM
TOTAL DE
MICRORGANISMOS
EM GUA
Expressar o resultado em UFC/mL.

No havendo crescimento bacteriano, expressar os
resultados como no detectados em 1 mL. Havendo
mais de 300 colnias nas placas com as maiores
diluies, expressar o resultado como >300.
6 DOCUMENTOS DE REFERNCIA
Norma ISO 6222:1999.
UTILIZANDO
O MEIO GAR
NUTRIENTE
7 REGISTROS
No aplicvel.
45
3- CONTAGEM
DE BOLORES E
LEVEDURAS EM
PRODUTOS COM
ATIVIDADE DE
GUA MENOR
OU IGUAL A
0,95
46
4 REAGENTES E MATERIAIS
Aplica-se enumerao de bolores e leveduras em

produtos cuja atividade de gua seja menor ou igual a
0,95.
gar Base Glicerol Diclorano (DG18); lcool 70%;

soluo salina peptonada 0,1%; algodo; pina, bisturi
e cabo para este, estreis; saqueta plstica estril;
ponteira de 1 mL estril; ala de drigalski estril; placas
de petri.
2 DOCUMENTOS COMPLEMENTARES
microbiolgicas.
5.1 Conceitos

Acmulo de massa microbiana localizada e visvel

desenvolvida sobre ou dentro de meio nutriente slido
a partir de uma partcula vivel.

Colnia
Leveduras
Microrganismos aerbicos mesoflicos, os quais,
a 25C em meio gar micolgico sob as condies
estabelecidas nesta parte da ISO 21527, desenvolvem
colnias redondas, foscas ou no, sobre a superfcie do
meio, geralmente possuindo borda regular e superfcie
medianamente convexa.
Bolores
3 EQUIPAMENTOS
Bunsen ou capela de fluxo laminar; micropipetador
de 0,1 a 1 mL; incubadora a 25 C +/- 1 C.
Microrganismos filamentosos, mesoflicos e

aerbicos, os quais, em meio gar micolgico sob as
condies estabelecidas nesta parte da ISO 21527,
desenvolvem propgulos/gametngios ou colnias,
achatados ou aveludados, geralmente com corpos de
frutificao ou esporos coloridos.
3- CONTAGEM
DE BOLORES E
LEVEDURAS EM
PRODUTOS COM
Pesar a amostra e/ou efetuar sua suspenso inicial e

suas diluies decimais conforme necessidade.
7 REGISTROS

Dispensar 0,1 mL de amostra na superfcie do gar
nas placas de petri identificadas.
Espalhar o inculo com ala de drigalski.
5.4 Incubao
GUA MENOR
Incubar as placas de petri sem inverter a 25 +/-1 C,

durante 5 a 7 dias. No caso de suspeita de Xeromices
bisponi, incubar por 10 dias.
0,95

Contar as colnias presentes nas placas contendo
at 150 colnias.
Bolores e leveduras
separadamente.
devem
ser
No aplicvel.
8 ANEXOS
No aplicvel.
ATIVIDADE DE
OU IGUAL A
Norma ISO 21527-2:2008.
contados

Expressar o resultado em UFC/mL ou UFC/g.
NOTA: manipular as placas com cuidado devido a
facilidade da disperso de esporos no ar.
47
4- CONTAGEM
DE BOLORES E
LEVEDURAS EM
PRODUTOS COM
ATIVIDADE DE
GUA MAIOR
QUE 0,95
48
Aplica-se enumerao de bolores e leveduras em

produtos cuja atividade de gua seja maior que 0,95.
gar Base Diclorano Rosa de Bengala com

Cloranfenicol (DRBC); lcool 70%; soluo salina
peptonada 0,1%; algodo; pina, bisturi e cabo para
este, estreis; saqueta plstica estril; ponteira de 1 mL
estril; ala de drigalski estril; placas de petri.
microbiolgicas.
3 EQUIPAMENTOS:
0,1 a 1 mL; incubadora a 25 C +/- 1 C.
5.1 Conceitos
Colnia
Acmulo de massa microbiana localizada e visvel
desenvolvida sobre ou dentro de meio nutriente slido
a partir de uma partcula vivel.
Leveduras
Microrganismos aerbicos mesoflicos, os quais,
a 25 C em meio gar micolgico sob as condies
estabelecidas nesta parte da ISO 21527, desenvolvem
colnias redondas, foscas ou no, sobre a superfcie do
meio, geralmente possuindo borda regular e superfcie
medianamente convexa.
Bolores
Microrganismos filamentosos, mesoflicos e
aerbicos, os quais, em meio gar micolgico sob as
condies estabelecidas nesta parte da ISO 21527,
desenvolvem propgulos/gametngios ou colnias,
achatados ou aveludados, geralmente com corpos de
frutificao ou esporos coloridos.
4- CONTAGEM
DE BOLORES E
LEVEDURAS EM
PRODUTOS COM
ATIVIDADE DE
GUA MAIOR
QUE 0,95
6 DOCUMENTOS DE REFERNCIA:

7 REGISTROS:

Dispensar 0,1 mL de amostra na superfcie do gar
nas placas de petri identificadas.
Espalhar o inculo com ala de drigalski.
Incubar as placas de petri sem inverter a 25 +/-1 C,

durante 5 dias.

Contar as colnias presentes nas placas contendo
at 150 colnias.
devem
ser
No aplicvel.
8 ANEXOS
No aplicvel.
5.4 Incubao
Bolores e leveduras
separadamente.
Norma ISO 21527-1:2008.
contados

Expressar o resultado em UFC/mL ou UFC/g.
NOTA: manipular as placas com cuidado devido a
facilidade da disperso de esporos no ar.
49
5- CONTAGEM DE
Enterobacteriaceae
Aplica-se enumerao de colnias

Enterobacteriaceae em anlises microbiolgicas.
50
de
microbiolgicas.
gar VRBG; gar Nutriente; gar Glicose; lcool

70%; soluo salina peptonada 0,1%; algodo; pina,
bisturi e cabo para este, estreis; saqueta plstica
estril; ponteira de 1 mL estril; ala de drigalski estril;
placas de petri.

Pesar a amostra e / ou efetuar sua suspenso inicial

e suas diluies decimais conforme necessidade.


IT MIC 018 e IT MIC019.
Dispensar 1 mL de amostra na placa de petri

identificada.
Verter 10 mL de gar VRBG sobre o inculo e
homogeneizar. Deixar solidificar e verter mais 15 mL
de gar como cobertura para criar uma ambiente de
semianaerobiose.
3 EQUIPAMENTOS
5.3 Incubao
Balana de preciso; agitador de tubos; bico de

0,1 a 1 mL; incubadora a 37 C +/- 1 C.
Incubar as placas de petri invertidas a 37 +/-1 C,

durante 24 +/- 2 horas.
5- CONTAGEM DE
Enterobacteriaceae
Selecionar as placas contendo at 150 colnias

caractersticas (rosa at vermelho ou roxa, com ou sem
halo).
Contar as colnias caractersticas e selecionar
aleatoriamente 5 destas para repique.
Estriar as colnias selecionadas sobre o gar
nutriente e incubar a 37 +/-1 C, durante 24 +/- 2 horas.
Realizar o teste de oxidase, estriando uma colnia
sobre a tira teste. No havendo mudana de cor,
conforme indicao do fabricante das tiras, considerar
o teste negativo.
5.5 Teste de fermentao

Com agulha de inoculao, semear as colnias
negativas para oxidase, em tubos com gar glicose e
incub-los a 37 +/-1 C, durante 24 +/- 2 horas.
O desenvolvimento de uma colorao amarelada no
meio indica resultado positivo.

Colnias glicose positivas e oxidase negativas so
consideradas Enterobacteriaceae.
Expressar o resultado em UFC/g ou mL.
Norma ISO 21528-2:2004.
7 REGISTROS
No aplicvel.
8 ANEXOS
No aplicvel.
51
6- CONTAGEM
PADRO DE
MICRORGANISMOS
MESFILOS
AERBIOS
ESTRITOS E
FACULTATIVOS
VIVEIS
52
Aplica-se enumerao de microrganismos

mesfilos aerbios estritos e facultativos viveis em
amostras matrias-primas, alimentos e gua.
gar PCA; Soluo de TTC; lcool 70%; soluo

salina peptonada 0,1%; algodo; placas de petri.
microbiolgicas.
Pesar a amostra, e efetuar sua suspenso inicial e

Dispensar 1 mL de amostra e das diluies
necessrias em placas de petri identificadas.

Verter de 15 a 20 mL de gar PCA sobre a amostra,

homogeneizar e esperar solidificar.

5.3 Incubao
3 EQUIPAMENTOS
Balana
de
preciso;
Equipamento
de
homogeneizao; bico de Bunsen ou capela de
fluxo laminar; micropipetador de 0,1 a 1 mL; estufa
bacteriolgica a 36 +/- 1 C.

durante 48 horas.

Selecionar as placas para leitura, da seguinte forma:
Entre 25 e 250 colnias para produtos em geral e
entre 20 e 300 colnias para gua.
6- CONTAGEM
PADRO DE
MICRORGANISMOS
MESFILOS
AERBIOS
ESTRITOS E
FACULTATIVOS
VIVEIS
Contar as colnias e expressar o resultado em UFC/g

ou mL.
Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento.
IN No 62, 26 de agosto de 2003.
7 REGISTROS:
No aplicvel.
8 ANEXOS
No aplicvel.
53
7- CONTAGEM
TOTAL DE
COLIFORMES
TOTAIS E
TERMOTOLERANTES
54
Aplica-se contagem de coliformes totais e

termotolerantes em alimentos, matrias-primas e
raes que contenham limite mximo igual ou superior
a 100 UFC/g ou mL de amostra.
gar VRB; Caldo Verde Brilhante Bile 2% lactose;

Caldo EC; lcool 70%; soluo salina peptonada 0,1%;
algodo; placas de petri.
microbiolgicas.

Dispensar 1 mL de amostra e das diluies desejadas
em placas de petri identificadas.

Verter 15 mL de gar VRBA sobre a amostra,

homogeneizar e esperar solidificar. Adicionar mais 10
mL de VRBA formando uma sobrecamada.

5.3 Incubao

durante 18 a 24 horas.
3 EQUIPAMENTOS
Balana
de
preciso;
Equipamento
de
homogeneizao; bico de Bunsen ou capela de
fluxo laminar; micropipetador de 0,1 a 1 mL; estufa
bacteriolgica a 36 +/- 1 C; banho-maria a 45 C.
Selecionar as placas para leitura, as placas que

contenham entre 15 e 150 colnias.
7- CONTAGEM
TOTAL DE
COLIFORMES
TOTAIS E
TERMOTOLERANTES
55
Contar as colnias tpicas, ou seja, as que

apresentarem cor rsea, com 0,5 a 2 mm de dimetro,
rodeadas ou no por uma zona de precipitao da bile
presente no meio. Anotar os resultados da contagem.
Da mesma forma, se no houver formao de gs

em 24 horas, as amostras devero ser reincubadas por
mais 24 horas.
Contar colnias tpicas e atpicas separadamente e

prosseguir com a confirmao, selecionando de 3 a 5
colnias dos dois tipos para repique.
Inocular cada colnia em tubos contendo caldo

verde brilhante bile 2% lactose e tubos de Durham, e
incubar a 36 +/- 1 C por 24 a 48 horas.
A presena de coliformes totais confirmada atravs
da formao de gs em pelo menos 1/10 do tubo de
Durham, ou ainda, pela efervescncia quando agitado
gentilmente.
Anotar o resultado para cada colnia utilizada, bem
como a sua diluio.
Tubos que apresentarem resultado negativo aps
24 horas devero ser incubados por mais 24 horas.
Coliformes Termotolerantes:
Inocular as colnias suspeitas em tubos contendo
caldo EC com tubos de Durham, e incubar a 45 +/- 2 C,
por 24 a 48 horas em banho-maria com agitao.
O resultado positivo dado da mesma forma que na
confirmao de coliformes totais (ou por formao de
gs, ou efervescncia).
Para clculo dos resultados, consultar o Anexo IV

da IN 62 Procedimento para contagem de colnias, e
expressar o resultado em UFC/g ou mL.
7 REGISTROS:
No aplicvel.
8 ANEXOS
No aplicvel.
8- NMERO MAIS
PROVVEL DE
COLIFORMES
TOTAIS E
TERMOTOLERANTES
EM GUA
56
Aplica-se a determinao do NMP de coliformes

totais e termotolerantes em gua e gelo usados em
estabelecimentos produtores de alimentos.
Caldo Lauryl Sulfato de Sdio concentrao simples e

dupla; Caldo Verde Brilhante Bile 2% lactose; Caldo EC;
lcool 70%; soluo salina peptonada 0,1%; algodo;
placas de petri.
microbiolgicas.
5.1 Preparo de amostra

No caso de amostras de gelo, quando encaminhadas

em frascos de boca larga, deixar descongelar no prprio
frasco, sob refrigerao, pelo perodo necessrio para
seu completo descongelamento.

3 EQUIPAMENTOS
Bico de Bunsen ou capela de fluxo laminar;
micropipetador de 0,1 a 1 mL; estufa bacteriolgica a
36 +/- 1 C; banho-maria a 45 C.
Preparar a amostra de gua de acordo com as

instrues contidas nas ISOS 6887 e7218.
Antes do incio da anlise, homogeneizar bem.

Quando o gelo for encaminhado em sacos plsticos,
colocar a amostra dentro de outro saco plstico
resistente (sem perfuraes) e deixar descongelar,
sob refrigerao, pelo perodo necessrio para seu
completo descongelamento.
Aps descongelamento total, verificar a presena de
gua no saco plstico de proteo da amostra, o que
indica a presena de perfuraes na embalagem do
gelo. Nesse caso, no analisar a amostra.
Da mesma forma, as amostras de gelo que chegarem
descongeladas ou em descongelamento devero ser
descartadas.
8- NMERO MAIS
PROVVEL DE
COLIFORMES
TOTAIS E
TERMOTOLERANTES
EM GUA
Quando a embalagem da amostra de gelo mostrar

evidncias de que no continha perfuraes, aps o
descongelamento total, homogeneizar bem e proceder
anlise, seguindo o procedimento estabelecido para
amostras de gua.
5.2 Inoculao
57
Repicar dos tubos de lauryl sulfato de sdio para

tubos contendo caldo verde brilhante bile 2% lactose
e tubos de Durham, e incubar a 36 +/- 1C por 24 a 48
horas.
5.4.1Confirmao de totais
Dispensar 10 mL da amostra em uma srie de 3 tubos

contendo lauryl sulfato de sdio em concentrao
dupla.
A presena de coliformes totais confirmada atravs

da formao de gs em pelo menos 1/10 do tubo de
Durham, ou ainda, pela efervescncia quando agitado
gentilmente.
Inocular 1 mL em uma srie de 3 tubos contendo

lauryl sulfato de sdio em concentrao simples.
Anotar o nmero de tubos positivos para cada srie

de diluio.
Efetuar uma diluio decimal e dispensar 1 mL desta

em outra srie de 3 tubos contendo lauryl sulfato de
sdio em concentrao simples.
Tubos que apresentarem resultado negativo aps

24 horas devero ser incubados por mais 24 horas.
5.3 Incubao
Incubar os tubos a 36 +/- 1 C, por 24 a 48 horas.
5.4 Leitura
A positividade para coliformes totais dada pela
formao de gs (pelo menos 1/10) nos tubos de
Durham e por efervescncia sob gentil agitao da
amostra.
Anotar o nmero de tubos positivos para cada srie.
5.4.2 Coliformes Termotolerantes

Repicar dos tubos de lauryl sulfato de sdio para
tubos contendo caldo EC com tubos de Durham, e
incubar a 45 +/- 0,2 C, por 24 a 48 horas em banhomaria com agitao.
O resultado positivo dado da mesma forma que na
confirmao de coliformes totais (ou por formao de
gs, ou efervescncia).
Da mesma forma, se no houver formao de gs
em 24 horas, as amostras devero ser reincubadas por
mais 24 horas.
8- NMERO MAIS
PROVVEL DE
COLIFORMES
TOTAIS E
TERMOTOLERANTES
EM GUA
A partir da combinao de nmeros correspondentes

aos tubos que apresentaram resultado positivo em cada
um dos testes confirmativos, verificar o Nmero Mais
Provvel (NMP) de acordo com a tabela correspondente
no BAM.
Expressar o valor obtido em NMP/100 mL.
BAM. Bacteriological Analytical Manual. [Online].
7 REGISTROS
No aplicvel.
8 ANEXOS
No aplicvel.
58
9- CONTAGEM DE
Staphylococcus
aureus EM
GAR BAIRDPARKER
59
Aplica-se baixa contagem de Staphylococcus

aureus em anlises microbiolgicas, com gar BairdParker.
gar Baird-Parker; Caldo BHI; Coaguplasma; lcool

70%; soluo salina peptonada 0,1%; algodo; pina,
bisturi e cabo para este, estreis; bolsa plstica estril;
ponteira de 1 mL estril; ala de drigalski estril; tubos
de ensaio; placas de petri.
microbiolgicas.
3 EQUIPAMENTOS
0,1 a 1 mL; estufa a 35C +/- 1 C.

Dispensar 0,1 mL da suspenso inicial ou da prpria
amostra, se lquida, em placas contendo gar BairdParker, espalhando o inculo com a ala de Drigalski.
5.3 Incubao
Incubar as placas invertidas a 35 C por 24 +/2horas.
Olhar as placas e marcar, no fundo das mesmas
quaisquer colnias atpicas presentes.
Reincubar por mais 24 +/- 2 horas, e marcar as
colnias tpicas e atpicas.
9- CONTAGEM DE
Staphylococcus
aureus EM
GAR BAIRDPARKER
Contar as colnias apenas nas placas com no mximo

300 colnias, e destas, at 150 tpicas e/ou atpicas em
duas diluies sucessivas.
Para enumerao de baixos valores de estafilococos
coagulase positiva, confirmar todas as colnias
presentes.
As colnias tpicas de estafilococos coagulase positiva
podem ser pretas ou cinzas, brilhantes e convexas, com
1 a 1,5 mm de dimetro. So circundadas por um halo
translcido, que pode conter outro halo opalescente,
justaposto colnia.
As colnias atpicas podem ser pretas e brilhantes,
com ou sem borda branca bem marcada, ausncia
ou difcil visualizao de rea translcida ou de halo
opalescente, ou ainda, podem ser cinza, sem zonas
claras ou translcidas.
5.4 Confirmao
Selecionar 5 colnias tpicas e 5 atpicas para semear
em tubos contendo caldo BHI, e incubar a 35 ou 37 C
por 24 +/- 2horas.
Adicionar, em tubos estreis, 0,1 mL da cultura a 0,3
mL de coaguplasma e incubar a 35 ou 37 C, por 4 a
6 horas. Verificar os tubos, inclinando-os para ver se
houve coagulao.
60
Em caso negativo, reanalisar aps 24 horas de

incubao, ou aps tempos de incubao descritos
pelo fabricante.
Como controle, inocular 0,1 mL de caldo BHI em 0,3
mL de coaguplasma. Esta amostra no poder sofrer
coagulao para que as anlises sejam vlidas.
Considerar como positivos, os testes em que o
cogulo ocupa mais da metade do volume original.

Calcular o nmero de colnias positivas conforme
clculo descrito na ISO 6888-1:1999.
Quando o nmero de colnias confirmadas for igual
ao nmero de colnias selecionadas e repicadas, o
resultado ser igual contagem inicial, levando-se em
considerao a diluio utilizada.
Quando o nmero de colnias confirmadas for
diferente do nmero de colnias selecionadas e
repicadas, calcular a proporo de colnias positivas
conforme clculo descrito na ISO 6888-1:1999.
O resultado final ser a soma dos resultados de
colnias tpicas e atpicas confirmadas.
Expressar o resultado como:
Contagem de Staphylococcus aureus: X x 10y UFC/
g ou mL ou Contagem de Staphylococcus coagulase
positiva: X x10y UFC/ g ou mL..
9- CONTAGEM DE
Staphylococcus
Norma ISO 6888-1:1999.
7 REGISTROS
No aplicvel.
aureus EM
GAR BAIRDPARKER
8 ANEXOS
No aplicvel.
61
10- DETECO
E ENUMERAO
DE Listeria
monocytogenes
62
Aplica-se ao cultivo e isolamento de Listeria

monocytogenes em anlises microbiolgicas de
alimentos.
gar Oxford; gar Palcam; gar Triptona Soja

Extrato de levedura; gar Sangue de Carneiro; gar de
Motilidade; Caldo Demi Fraser; Caldo Fraser; Caldo
Triptona Soja Extrato de levedura; Caldo de utilizao
de carboidratos (Xilose e Rhamnose); Meio CAMP;
Soluo de perxido de hidrognio; Soluo salina
de tampo fosfato (PBS); lcool 70%; algodo; placas
de petri; pina estril; bisturi e cabo para o mesmo,
estreis; tbua de fatiar estril, bolsa plstica estril;
ponteiras de 1 mL, estreis.
microbiolgicas.
5.1 Pesagem e preparo da amostra
Pesar a alquota de amostra representativa para o
produto em uma saqueta estril.
5.2 Pr- enriquecimento

Verter o caldo Demi Fraser, respeitando a poro de
1/10 (amostra/diluente), dentro da bolsa contendo a
amostra, homogeneizar no stomacher e incubar a 30
C, por 24+/- 2 horas.
3 EQUIPAMENTOS
Balana de preciso; Homogeneizador de amostras
(stomacher); agitador de tubos; bico de Bunsen ou
capela de fluxo laminar; micropipetador de 0,1 a 1 mL;
estufa bacteriolgica a 36 C +/- 1 C, e a 41,5 C +/- 1
C; banho-maria a 37 +/- 1C.
5.3 Enriquecimento seletivo

Inocular 0,1 mL deste preparado em tubos contendo
10 mL de caldo Fraser e incubar a 35 ou 37C, durante
48 +/- 2 horas.
10- DETECO
E ENUMERAO
DE Listeria
monocytogenes
63
5.4 Isolamento
5.5 Confirmao de Listeria spp
Estriar, em Palcam e Oxford, uma alada da amostra

enriquecida no meio Demi Fraser e no meio Fraser.
Selecionar, de cada meio seletivo, pelo menos cinco

colnias tpicas. Caso haja menos de cinco, utilizar
todas as que houver.
Incubar as placas com o primeiro meio seletivo

invertidamente em estufa a 30, 35 ou 37 C, e as placas
com o segundo meio em jarras de microaerobiose ou
anaerobiose por 24 horas, podendo haver at 24 horas
adicionais, caso o crescimento seja sutil ou nulo aps
as primeiras 24 horas.
Examinar as placas e observar colnias tpicas de
Listeria spp.
NOTA: Colnias tpicas de Listeria spp. no gar Oxford
so pequenas, possuem cor acinzentada, com um halo
enegrecido. Aps 48 horas as colnias tornam-se mais
escuras podendo apresentar um brilho esverdeado, um
pouco maiores, com halo enegrecido e centro cncavo.
Para o gar Palcam em microaerobiose, expor
as placas ao ar por 1 hora, para que retomem a cor
rseo-arroxeada. Aps 24 horas as colnias tpicas
apresentam colorao verde-acinzentada, com 1,5 a 2
mm de dimetro, algumas vezes com centro negro e
sempre com halos enegrecidos. Aps 48 horas, as
colnias so verdes, cncavas no centro e circundadas
por um halo negro.
Estriar as colnias selecionadas em placas contendo

gar Triptona Soja Extrato de Levedura, de forma a se
formarem colnias isoladas e incubar, invertidamente
a 35 ou 37 C, por 18 a 24 horas, ou at que haja
crescimento satisfatrio.
As colnias tpicas sero convexas, opacas sem cor e
com borda lisa, medindo cerca de 1 a 2 mm de dimetro.
Utilizar estas colnias para os testes confirmativos.
5.5.1 Reao de catalase

Suspender uma alada de colnia sobre algumas
gotas de perxido de hidrognio vertidas em
lamina microscpica ou placa de petri e observar.
A formao de borbulhas indica reao positiva.
5.5.2 Colorao de Gram

Listeria spp. Gram positiva, em forma de bastonetes
curtos e finos.
10- DETECO
E ENUMERAO
DE Listeria
monocytogenes
64
5.5.3 teste de motilidade (se necessrio)
5.5.4.2 Utilizao de carboidratos
Inocular uma colnia isolada em um tubo contendo

caldo Triptona Soja Extrato de Levedura, e incubar a 25
C, por 8 a 24 horas, ou at haver turbidez do meio.
Inocular, em cada um dos meios de utilizao de

carboidratos, uma alada da cultura obtida no caldo
Triptona Soja Extrato de Levedura e incubar a 35 ou 37
C, por at 5 dias. A reao positiva indicada pela cor
amarela, que ocorrer principalmente nas primeiras 24
a 48 horas.
Transferir uma alada para lmina microscpica

e sobre a cultura, colocar a lamnula. Observar no
microscpio. Listeria spp. Apresenta a forma de
bastonete fino e curto com movimentao flagelar
rotatria ou de tombamento.
Com uma alada da cultura, perfurar o gar teste de
motilidade e incubar a 25 C por 48 horas.
Observar o crescimento ao redor da perfurao.
Listeria spp. apresenta crescimento em forma de
guarda-chuva.
No havendo crescimento suficiente, incubar por
at 5 dias e observar novamente.
5.5.4 Confirmao de Listeria monocytogenes

5.5.4.1 Teste de hemlise
Inocular em placas de gar Sangue, uma alada da
cultura tpica, perfurando tambm o gar. Incubar a 35
ou 37 C, por 24 +/- 2 horas.
Listeria monocytogenes apresenta zonas claras ,
estreitas e translcidas.
5.5.4.3 Teste CAMP

Semear culturas de S. aureus e Rhodococcus equi
em linhas nicas sobre o gar sangue, de maneira
paralela e diametralmente oposta.
Semear culturas obtidas no gar Triptona Soja
Extrato de levedura perpendicularmente as culturas
descritas no item anterior, mantendo uma distncia
de 1-2 mm destas. Estriar linhagens controle de L.
monocytogenes, L. innocua e L. ivanovii. Incubar as
placas a 35 ou 37 C, por 18 a 24 horas.
Considera-se positiva a reao quando forma-se
uma zona de hemlise aumentada na interseco entre
as linhagens-teste e as linhagens de S. aureus e R. equi.
5.5.4.4 Confirmao definitiva

Enviar as culturas para um laboratrio de
sorotipagem ou, possivelmente tipagem lisognica.
10- DETECO
E ENUMERAO
Norma ISO 11290-1:1996.
7 REGISTROS
No aplicvel.
DE Listeria
monocytogenes
8 ANEXOS
No aplicvel.
65
11- Deteco de
Salmonella
66
Aplica-se ao cultivo e isolamento de Salmonella spp.

em anlises microbiolgicas de alimentos.
gar XLD; outro gar para Salmonella; gua

peptonada tamponada; Caldo Rappaport Vassiliadis
Soja; gar TSI; Meio de descarboxilao L - lisina;
Meio VP; gar Ureia; gar Nutriente; Reagentes
Galactosidase; Tolueno; Triptona/Triptofano; lcool
70%; algodo; placas de petri; pina estril; bisturi e
cabo para o mesmo, estreis; tbua de fatiar estril,
saqueta plstica estril; ala de inoculao; ponteiras
de 1 mL, estreis.
microbiolgicas.
3 EQUIPAMENTOS
Balana de preciso; Homogeneizador de amostras
(stomacher); agitador de tubos; bico de Bunsen ou
capela de fluxo laminar; micropipetador de 0,1 a 1 mL;
estufa bacteriolgica a 36 C +/- 1 C, e a 41,5 C +/- 1
C; banho-maria a 37 +/- 1C.
Pesar a alquota de amostra representativa para o
produto em uma saqueta estril.
5.2 Pr- enriquecimento

Verter a gua peptonada tamponada, respeitando a
poro de 1/10 (amostra/diluente), dentro da saqueta
contendo a amostra.
Homogeneizar no stomacher e incubar a 37+/- 1 C,
por 18+/- 2 horas.
5.3 Enriquecimento seletivo

Inocular 0,1 mL deste preparado em tubos contendo
10 mL de caldo Rappaport Vassiliadis Soja e incubar a
41,5+/-1 C, durante 24 +/- 3 horas.
5.4 Isolamento
11- Deteco de
Salmonella
67
Interpretao:
Estriar, em gar XLD e XLT4, uma alada da amostra

enriquecida no meio RVS e incubar as placas invertidas
a 37+/- 1 C, por 24+/- 3 horas.
a) fundo:
Examinar as placas e observar colnias tpicas e

atpicas que possam ser Salmonella e marc-las, no
fundo da placa.
vermelho ou inlaterada glicose negativa (no

utilizada).
NOTA: Colnias tpicas de Salmonella no gar XLD,

possuem centro negro, com halo rosado em seu
entorno; Salmonellas variantes negativas de H2S, so
rosas, com um rosa mais intenso no meio da colnia;
Salmonella lactose-positiva amarela, com ou sem
escurecimento.
bolhas ou fendas formao de gs da glicose.
5.5 Seleo
Selecionar, de cada meio seletivo, pelo menos uma
colnia tpica ou suspeita, e, em seguida, mais quatro
colnias, caso a primeira seja negativa.
Estriar as colnias selecionadas em placas contendo
gar nutriente, de forma a se formarem colnias
isoladas e incubar, as placas invertidas a 37+/- 1 C, por
24+/- 3 horas.
5.6 Confirmao Bioqumica

5.6.1 gar TSI
Estriar, a partir de picada no fundo do bisel, uma
alada da cultura obtida em gar TSI inclinado e incubar
a 37+/- 1 C, por 24+/- 3 horas.
amarelo glicose positiva (utilizada).
preto sulfeto de hidrognio (formado).

b) superfcie:
amarelo lactose e/ou sacarose positiva (utilizadas).
vermelho ou inalterada lactose e sacarose
negativas.
Culturas tpicas de Salmonella mostram inclinao
alcalina (vermelho) e cida (amarelo) no fundo com
formao de gs. Em cerca de 90% dos casos h
formao de H2S, com escurecimento do gar.
Para Salmonella lactose-positiva, a parte inclinada
do TSI fica amarela, portanto, faz-se necessria a
continuidade dos testes confirmativos.
5.6.2 gar ureia

Estriar, em superfcie inclinada do gar Ureia e
incubar a 37+/- 1 C, por 24+/- 3 horas, examinando
em intervalos.
Se a reao for positiva, a diviso da Ureia libera
amnia e a cor do meio alterada para rosa e
11- Deteco de
Salmonella
68
posteriormente para cereja escuro. A reao, muitas

vezes, j visvel aps 2 a 4 horas de incubao.
creatina, trs gotas de soluo alcolica de 1-naftol

e, em seguida, duas gotas de soluo de hidrxido de
potssio, agitando aps a adio de cada reagente.
5.6.3 Meio de descarboxilao L-lisina
A mudana da cor rosa para a cor vermelha brilhante

dentro de 15 minutos indica reao positiva.
Inocular imediatamente abaixo da superfcie do

meio lquido e incubar a 37+/- 1 C, por 24+/- 3 horas.
A turvao da cor roxa d o resultado por positivo, e
a colorao amarela indica reao negativa.
5.6.4 Deteco de Galactosidase

Suspender uma alada da colnia suspeita em um
tubo contendo 0,25 mL de soluo salina.
Adicionar uma gota de tolueno e agitar o tubo,
colocando-o em banho-maria a 37 C por 5 minutos.
Adicionar 0,25 mL de reagente para deteco de
Galactosidase e mistur-lo.
Recolocar no banho-maria e deixar at 24 +/- 3
horas examinando em intervalos.
A cor amarela indica reao positiva e possvel de
ser detectada aps 20 minutos. Se utilizar discos de
papel, seguir a instruo de uso do fabricante.
5.6.6 Meio para reao de Indol

Inocular um tubo contendo 5 mL de triptona/
triptofano com a colnia suspeita e incubar a 37+/- 1
C, por 24+/- 3 horas.
Adicionar 1 mL do reagente de Kovacs.
A formao de um anel vermelho indica uma reao
positiva. Um anel amarelo-marrom indica reao
negativa.
Consultar Tabela 1 ISO 6579:2002, para
interpretao das reaes da Salmonella.
7 REGISTROS
No aplicvel.
5.6.5 Meio de reao VP Voges Proskauer

Suspender em tubo estril com 3 mL do meio,
uma alada da colnia suspeita e incubar a 37+/- 1
C, por 24+/- 3 horas. Aps, adicionar duas gotas de
8 ANEXOS
No aplicvel.
12- CONTAGEM
DE Bacillus
cereus POR
INCUBAO A
30 C
69
Aplica-se baixa contagem de Bacillus cereus em

anlises microbiolgicas, pelo mtodo de incubao a
30 C.
gar manitol gema de ovo polimixina (MYP);

gar sangue de carneiro; lcool 70%; soluo salina
peptonada 0,1%; algodo; pina, bisturi e cabo para
este, estreis; bolsa plstica estril; ponteira de 1 mL
estril; ala de drigalski estril; tubos de ensaio; lminas
de microscpio e leo de imerso; placas de petri.
microbiolgicas.

Pesar a amostra e / ou efetuar sua suspenso inicial

e suas diluies decimais conforme necessidade.

5.2 Inoculao

3 EQUIPAMENTOS
Bunsen ou capela de fluxo laminar; micropipetador
de 0,1 a 1 mL; estufa a 30C +/- 1 C; banho-maria a
aproximadamente 80 C; microscpio.
Dispensar 0,1 mL da suspenso inicial ou da prpria

amostra, se lquida, em duas placas contendo gar
MYP, espalhando o inculo. Incubar invertidamente a
30 C por 18 a 24 horas.
Aps a incubao, analisar a presena de colnias
tpicas e atpicas.
Em MYP, as colnias possuem de 2 a 5 mm de
dimetro e so irregulares. Sua colorao rosa contra
um fundo carmesim, circundadas por um halo de
precipitao de at 5 mm de extenso.
Em casos duvidosos a confirmao deve ser feita de
qualquer forma.
5.3 Confirmao em gar sangue de carneiro
DE Bacillus
Estriar as colnias suspeitas em placas contendo

gar sangue e incubar a 30 C, por 24 +/- 2 horas e
verificar a hemlise, atravs do clareamento do
entorno das colnias.
cereus POR
Calcular o total de colnias de B. cereus conforme

ISO 7218:1996/Emenda 1:2001.
12- CONTAGEM
INCUBAO A
30 C
7 REGISTROS
No aplicvel.
8 ANEXOS
No aplicvel.
70
13- CONTAGEM
DE Clostridium
perfringens
71
Aplica-se enumerao por contagem em placa de

Clostridium perfringens em anlises microbiolgicas.
gar sulfito-cicloserina (SC); Soluo D-Cicloserina

(adicionar 1 mL a cada 100 mL de gar, antes de
plaque-lo); Meio fluido Thioglicato; Meio Lactose
Sulfito;
microbiolgicas.
3 EQUIPAMENTOS
Balana
de
preciso;
Equipamento
homogeneizao; banho maria a 46 C;
de
jarras de anaerobiose; bico de Bunsen ou capela

de fluxo laminar; micropipetador de 0,1 a 1 mL; estufa
bacteriolgica a 37 +/- 1 C.
lcool 70%; soluo salina peptonada 0,1%; algodo;

placas de petri.
5.2 Inoculao
Dispensar em duplicata, 1 mL de amostra em placas
de petri identificadas.
Verter cerca de 15 mL de gar SC sobre a amostra,
homogeneizar e esperar solidificar. Verter mais 5 a 10
mL de gar como cobertura.
5.3 Incubao
Incubar as placas de petri invertidas em jarras de
anaerobiose a 37 +/-1 C, durante 20 +/- 2 horas.
5.4 Contagem de colnias
13- CONTAGEM
DE Clostridium
perfringens
Selecionar as placas contendo menos de 150

colnias, e se possvel, placas representando diluies
sucessivas.
Contar as
perfringens.
colnias
presumidamente
de
C.
5.5 Confirmao
Selecionar 5 colnias de cada amostra para
confirmao.
5.5.1 Confirmao usando meio lactose

sulfito (LS)
Inocular cada uma das colnias em meio fluido
thioglicolato, e incubar em anaerobiose a 37 C por 18
a 24 horas.
Transferir assepticamente, 5 gotas da cultura para
tubos contendo o meio LS com tubos de Durham e
incubar aerobicamente a 46 C por 18 a 24 horas em
banho-maria.
Verificar a presena de gs nos tubos de Durham e
a colorao preta.
Tubos de Durham contendo mais de de gs e com
colorao preta do meio so considerados positivos.
Em caso de dvida, transferir assepticamente 5
gotas da cultura do meio LS para outro tubo contendo o
72
meio LS com tubo de Durham e incubar aerobicamente

a 46 C por 18 a 24 horas em banho-maria, analisando
quanto s mesmas determinantes.
7 REGISTROS
No aplicvel.
8 ANEXOS
No aplicvel.

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ROSNGELA UHRIG SALVATORI

GREICE ALINE KAISECAMP WOLF

Rosngela Uhrig Salvatori

Coordenao e reviso final: Ivete Maria Hammes

Salvatori, Rosngela Uhrig

Ficha catalogrfica elaborada por Nalin Ferreira da Silveira CRB 10/2186

Todos os textos so de exclusiva

ANDREIA APARECIDA GUIMARES STROHSCHOEN

ROSNGELA UHRIG SALVATORI

Possui graduao em Licenciatura em Cincias com

Possui graduao em Cincias pela Universidade do

GREICE ALINE KAISECAMP WOLF

LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA: normas gerais, instrues de trabalho e procedimentos operacionais padres

Os assuntos pertinentes Microbiologia so

prticas vinculadas s anlises microbiolgicas. Foi

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PRINCIPAIS NORMAS de Segurana EM

10. Todo o material deve ser identificado. As etiquetas

1. Refrigeradores, Micro-ondas e estufas no so

11. No caso de derramamento de algum material

2. No comer, beber ou fumar dentro do laboratrio;

4. As mesas ou bancadas de trabalho devem ter

12. Devem ser registrados os acidentes como o

5. Quando da manipulao de material txico ou

13. Os tubos com cultura devem ser conservados

6. As pipetas usadas devem ser colocadas

14. As culturas de fungos, quando esporuladas,

3. O uso do avental de algodo obrigatrio;

7. No colocar materiais contaminados sobre a

15. No cheirar os meios de cultura inoculados;

LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA: normas gerais, instrues de trabalho e procedimentos operacionais padres

19. Limpar a mesa de trabalho, antes e depois de cada

LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA: normas gerais, instrues de trabalho e procedimentos operacionais padres

1 OBJETIVO E CAMPO DE APLICAO

Descrever os procedimentos de limpeza e desinfeco

Ao iniciar o trabalho no laboratrio obrigatrio

Manual de Gesto da Qualidade.

As lmpadas do laboratrio so limpas a seco,

4.5 Limpeza das vidrarias e

LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA: normas gerais, instrues de trabalho e procedimentos operacionais padres

1 OBJETIVO E CAMPO DE APLICAO

4.2 Descarte de Materiais no Reutilizveis

Descrever o procedimento de descarte de material

Placas de Petri e ponteiras so autoclavadas aps

4.3 Descarte de Materiais Txicos e

Projeto Destinao dos Resduos Internos UNIVATES.

Estes materiais so acondicionados em caixa

4.4 Descarte de Vidrarias Danificadas

LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA: normas gerais, instrues de trabalho e procedimentos operacionais padres

1 OBJETIVO E CAMPO DE APLICAO

Descrever o procedimento de uso e limpeza do

utilizada nos procedimentos analticos, bem como na

Em laboratrios, a osmose reversa utilizada para

Manual de utilizao do equipamento de osmose

Manual de Instrues da Osmose Reversa.

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1 OBJETIVO E CAMPO DE APLICAO