Pr-Reitoria de Graduao

Curso de Biomedicina
Estgio Supervisionado III
RELATRIO DE ESTGIO SUPERVISIONADO III
Aluno: Diego Soares Rocha
Campo de estgio: Hospital Santa Lcia
Braslia DF
2014
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Supervisor Local do campo de estgio: Paulo Roberto Sabino Junior
E-mail: paulors@ucb.br

Caracterizao do Estgio
Perodo de realizao: 17 de Fevereiro de 2014 a 20 de Junho de 2014.
Carga horria semanal: 20 horas

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1 INTRODUO
Este relatrio consiste na discrio da rotina do Laboratrio de Anlises Clnicas do Hospital
Santa Lcia (HSL) nos setores de microbiologia, bioqumica, hematologia, urinlise e lquidos
biolgicos, coleta e cadastro.
O estgio consiste na fase de preparao do aluno para o ingresso no mercado de trabalho.
Durante o semestre acompanharei a rotina laboratorial de cada setor. Tenho como objetivo aproveitar
ao mximo essa oportunidade, aprendendo o procedimento operacional padro dos exames e a operar
os aparelhos que os realizam.

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2 DADOS DE CARACTERIZAO DA EMPRESA
O HSL referncia no segmento hospitalar e o primeiro da rede privada instalado no Distrito
Federal, fundado em 1963 por um grupo de jovens mdicos que acreditaram no potencial da recm-
inaugurada capital do pas.
O Laboratrio de Anlises Clnicas do HSL certificado em Excelncia Laboratorial, do
Programa Nacional de Controle de Qualidade da Sociedade Brasileira de Anlises Clnicas.
Alguns aparelhos do laboratrio foram adquiridos por comodato com a VITALAB e outros
so do prprio hospital e a aquisio da maioria dos reagentes realizada atravs da VITALAB.
Segundo os dados estatsticos do Sistema de Diagnstico Laboratorial MV2000, so
realizados mensalmente 40 000 exames em todos os setores do Laboratrio de Anlises Clnicas.

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3 DESCRIO DAS ATIVIDADES REALIZADAS
3.1 MICROBIOLOGIA (17/FEV 21/MAR)

O setor de microbiologia possui um microscpios, uma estufas, duas geladeiras, uma cabine de
fluxo laminar e dois equipamentos, um para identificao de microorganismos e de concentrao
inibitria mnima (MIC) de antimicrobianos, VITEK 2 compact, e outro para hemoculturas,
BacT/ALERT 3D, ambos da Biomrieux.
As placas so compradas prontas com os meios desejados e as alas calibradas so
descartveis. A descrio dos meios se encontra na Tabela 1.
Tabela 1 Meios de Culturas utilizados
MEIO CARACTERSTICAS FINALIDADE
gar Mac Conkey Possui cristal violeta que inibe
o crescimento de bactrias
Gram-positivas
Meio seletivo para Gram-
negativas
Identifica a fermentao de
lactose
gar Chocolate Meio rico adicionado de sangue
de carneiro, de cavalo ou de
coelho
As hemcias so destrudas,
liberando hemina e hematina
Meio no seletivo
Muito utilizado para cultivo de
microorganismos muito
exigentes
gar Sangue Meio rico adicionado de sangue
de carneiro
As hemcias se encontram
ntegras, permitindo a
visualizao de hemlise
Meio no seletivo
Permite diferenciar o tipo de
hemlise (alfa, beta, ou gama)
Caldo BHI Caldo derivado de nutrientes de
crebro e corao
Meio no seletivo
CHROMagar CPS Meio Cromognico Contagem de microrganismos
urinrios
Identificao de E. coli,
Enterococcus, KES e Proteae
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CHROMagar VRE Meio Cromognico Indentificao de Enterococcus
resistentes Vancomicina
CHROMagar MRSA Meio Cromognico Identificao de
Staphylococcus aureus
resistente Meticilina

Os meios a serem semeados so definidos de acordo com a origem da amostra (Tabela 2). Os
mais comuns so o semeio de urina em CHROMagar CPS, hemoculturas em gar Sangue/Mac
Conkey, Swab Nasal em CHROMagar MRSA e Swab Retal em CHROMagar VRE e Mac Conkey.
O semeio para urocultura realizado com ala calibrada de 1 L pela tcnica de varredura de
forma a permitir a quantificao, o mesmo realizado pra aspirado traqueal e lavado brnquico. As
outras culturas so feitas por esgotamento, obtendo colnias isoladas.
Tabela 2 Orientaes de Semeadura

AMOSTRAS
M
a
c

C
o
n
k
e
y

C
h
o
c
o
l
a
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-
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g
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L

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i
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a

H
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P
a
r
d
i
n
i

Abscessos X X X
Aspirado Traquial (Quantitativo) X X X
BAAR/Ziehl X
Cultura para BK e Fungos X
Escovado Brnquico X
Escarro X X X X
Ferida Operatria X X X X X
Fezes X X
Fragmentos em Geral X
Lavado Brnquico (Quantitativo) X X X
Lquidos em Geral X X X X X
Lquor X X X X
Ponta de Cateter (Semear por rolamento) X
Secrees em Geral X X X
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Secreo Ocular X X
Secreo de Orofaringe X X
Secreo Traqueal (Quantitativo) X X X
Secreo Uretal/Vaginal X X X
Swab Nasal X
Swab Retal X X
Urina X
Urina (Pesquisa por gonococo) X X
Vlvulas em Geral X

A rotina no setor se inicia com a impresso dos mapas de Urocultura, Secrees, Culturas de
Vigilncia e Hemocultura com todas as amostras recebidas desde os ltimos mapas. Em seguida
realizada a leitura das placas, lem-se primeiramente as que foram reincubadas, presentes nos mapas
anteriores, depois as que foram semeadas no dia anterior, presentes nos mapas impressos no inicio da
rotina.
3.1.1 Urocultura
As placas de urocultura devem conter no mnimo 50 000 UFC/mL para serem
consideradas positivas, podendo ser reincubadas at dois dias, se aps dois no houver crescimento,
o resultado liberado como negativo. Havendo o crescimento mnimo, as bactrias devem ser
diferenciadas em bacilos gram-negativos (BGN) ou cocos gram-positivos (CGP) para realizar a
identificao e MIC no VITEK 2 compact. Para BGN utiliza-se o carto GN para a identificao e
o 238 para a MIC. Para CGP uitiliza-se o carto GP para a identificao e o 585 para a MIC. Como
no meio CPS, que feito as uroculturas, alguns BGNs podem ser diferenciados, quando h o
cerscimento de E. Coli, que se apresenta uma colnia brilhosa, com bordas irregulares e de cor
marrom escuro, no se usa o carto GN, utiliza-se apenas o carto 238, economizando assim cartes
de identificao.
3.1.2 Secrees
As placas de secrees so reincubadas at trs dias para secrees em geral e para
lquido pleural e lquor at cinco dias. Havendo qualquer crescimento deve ser diferenciado em BGN
ou CGP, podendo contar com o auxlio da prova da catalase para diferenciar em CGP. Aps a
diferenciao utilizam-se os cartes GN e 239 para a identificao/MIC de BGN e os cartes GP e
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585 para CGP. O carto 238 para a MIC utilizado somente para amostras de urina, qualquer outro
tipo de amostra no qual h um BGN utiliza-se carto 239.
3.1.3 Culturas de Vigilncia
As Culturas de Vigilncia, Swab Nasal e Retal, so semeadas no CHROMagar MRSA (Swab
Nasal), e no gar Mac Conkey e CHROMagar VRE (Swab Retal). Durante o meu tempo no setor os
meios CHROMagar MRSA e CHROMagar VRE estavam em falta, chegando somente nos meus
ltimos dias no setor placas de CHROMagar VRE, mas nada de CHROMagar MRSA. Embora essa
seja as orientaes de semeadura de Swab Nasal e Retal, a falta desses meios no atrapalhou a rotina
do setor de microbiologia. Os Swabs Nasais foram semeados no gar Sangue, adicionando um disco
de meticilina para a identificao de Staphylococcus aureus resistente Meticilina, e o Swab Retal
no meio CHROMagar CPS, adicionando um disco de vancomicina para a indentificao de
Enterococcus resistentes Vancomicina. Se esses microrganismos crescerem nas placas, deve-se
realizar o teste de MIC atravs do carto 585.
O Swab Retal tambm semeado no Mac Conkey para a pesquisa de BGN fermentadores
resistentes aos carbopenmicos atravs do disco de fuso. Primeiramente faz o teste de disco difuso
com o ertapenem. Se crescer BGN fermentadores resistentes, o microorganismo identificado
atravs do carto 239 e realiza-se um repique no gar Mac Conkey para a realizao de do teste de
disco difuso com os disco de ertapenem novamente, meropenem e imipenem.
3.1.4 Hemoculturas e BacT/ALERT 3D
As hemoculturas so incubadas no equipamento BacT/ALERT 3D. Para isso, a coleta da
amostra deve ser realizada em um tubo especfico do equipamento, que possui um lquido com
nutrientes que permitem o crescimento de qualquer microorganismo e um disco cromognico no
fundo. O consumo dos nutrientes do meio produz dixido de carbono, que muda o disco de uma cor
escura para uma cor clara. Dentro do aparelho um diodo emissor de luz (LED) projeta luz sobre o
disco e detecta a quantidade refletida. Essa medida ento comparada com a quantidade refletida no
momento que o frasco foi inserido no aparelho. Caso haja uma produo considervel de CO2 dentro
do perodo de 5 dias a amostra considerada positiva. Aps cinco dias, as amostras que no
apresentarem mudana de cor so consideradas negativas, e so descartadas. O display do
equipamento mostra o nmero de amostras negativas e positivas registradas. Ao se abrir as gavetas,
uma luz indica quais frascos devem ser retirados.
As amostras positivas so semeadas em uma placa bipartida de gar Sangue e gar Mac
Conkey por esgotamento de ala. Qualquer microorganismo que crescer nas placas deve ser
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identificado. Colnias que crescerem em ambos os meios so gram-negativas e so identificadas
pelos cartes GN e 239, enquanto as que crescerem apenas no gar Sangue so gram-positivas e
devem ser identificadas pelos cartes GP e 585. Entretanto, devido aos riscos inerentes septicemia,
deve ser feita uma lmina corada por Gram diretamente do frasco da hemocultura, e o resultado
adiantado ao mdico assim que ficar pronto, para auxiliar na escolha do antibitico a ser usado. Os
frascos de hemocultura que foram semeados so guardados na geladeira at a identificao completa
dos microorganismos.
3.1.5 VITEK 2 compact
Os testes de identificao de microorganismos e de MIC de antimicrobianos so realizados de
forma automatizada pelo aparelho VITEK 2 compact. As placas das culturas a serem identificadas
so separadas durante a leitura e registradas no computador do aparelho. Para o registro so
imputados o nmero do pedido do exame, data de coleta, tipo de material semeado, nome e data de
nascimento do paciente, de onde o paciente (UTI, andares, emergncia ou ambulatrio), e o carto
a ser utilizado.
Os cartes so placas com poos que possuem os testes bioqumicos determinados para cada
classe de microorganismos, assim como os antimicrobianos em suas diluies para determinar o
perfil de resistncia. So utilizados cinco cartes diferentes: GN, para identificao de BGN; GP para
identificao de CGP; 238 para determinao do perfil de resistncia antimicrobianos de BGN de
uroculturas; 239 para determinao do perfil de resistncia antimicrobianos de BGN nas demais
amostras; e 585 para determinao do perfil de resistncia antimicrobianos de CGP em qualquer
tipo de amostra..
Para a inoculao no carto, a colnia a ser testada capturada com palito estril e dissolvida
em 3 mL de salina e a sua turbidez medida. Para a realizao no teste no aparelho, a turbidez deve
estar entre 0,53 e 0,66 nm. Estando dentro dessa faixa pipeta-se 145 L nos cartes GN, 238 e 239, e
280 L nos cartes GP e 585. Aps esse processo os carto so levados para o aparelho para a
realizao dos testes.

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4 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. Manual de Microbiologia Clnica para o Controle de
Infeco em Servios de Sade. 2004.
Silva, Neufeld. Bacteriologia e Micologia para o Laboratrio Clnico. 2006. Editora Revinter. 1 Ed.