sona2021 15:18 ‘A alivagdo local dos receptores adranérgicos a2 & necesséria para a plasticidade cortical motorainduzida pela estimulago Ir para 0 contetido principal Obrigado por visitar nature.com. Vocé esté usando uma versio do navegador com suporte limitado para CSS. Para obter a melhor experiéneia, recomendamos que vocé use um navegador mais atualizado (ou desative 0 modo de compatibilidade no Internet Explorer). Enquanto isso, para garantir suporte continuo, estamos exibindo o site sem estilos e JavaScript. Propaganda scientific reports © Ver todos os diarios + ProcuratQ + Conecte-se® + Explore o contetido¥ + Sobre o jornal¥ + Publique conosco¥ « Inscreva-se para alertas& natureza > relatérios cientificos > artigos > artigo A ativagio local dos receptores adrenérgicos a2 & neces ria para a plasticidade corti induzida pela estimulagio do nervo vago baixar PDF & + Aigo + cess line + Publicados: 04 de novemiro de 2021 hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 vuesonarz02t 15:18 ‘A alivagdo local dos receptores adranérgicos a2 & necesséria para a plasticidade cortical motorainduzida pela estimulago A ativagao local dos receptores adrenérgicos a2 é necessaria para a plasticidade cortical motora induzida pela estimulagao do nervo vago * Ching-Tzu Tseng! , + Solomon J. Gaulding!, * Canice Lei E. Dancel! + Catherine A. Thom! (Fiesta aor) Relatérios Cientificos volume 11 , Nimero do artigo: 21645 ( 2021 ) + 335 acessos + 1 Altmétrico © Métricas detalhes Resumo A estimulago do nervo vago (VNS) associada ao treinamento de reabilitagdo est’ emergindo como um tratamento potencial para melhorar a recuperagdo da fungdo motora apés 0 AVC. Em ratos, 0 VNS emparelhado com treinamento de membro anterior qualificado resulta em reorganizagao significativa do mapa motor cortical somatotépico; no entanto, os mecanismos subjacentes a esta forma de plasticidade dependente de VNS permanecem obscuros. Estudos recentes mostraram que a plasticidade cortical induzida por VNS é dependente da inervagio noradrenérgica do neocértex. No sistema nervoso central, os receptores noradrenérgicos a2 (a2-ARs) stio amplamente expressos no cértex motor e tém sido criticamente implicados na comunicagao sindptica e na plasticidade. No estudo atual, examinamos se a ativagio de a2-ARs corticais & necessaria para que ocorra a reorganizagao cortical motora conduzida por VNS. Consistente com estudos anteriores, descobrimos que o VNS emparelhado com o treinamento motor aumenta a representag4o do mapa da musculatura hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 21811571272021 16:18 A alvago local dos receptoresadrengios 22 6 necessiia para a plascidade cortical motor induzida pela estmuagio relevante para a tarefa no cértex motor. A infuso de antagonistas @2-AR em MI bloqueou a reorganizagdo do mapa motor conduz ido por VNS. Nossos resultados sugerem que a ativagdo a2-AR local é necessaria para que ocorra a reorganizs 10 cortical induzida por VNS, fornecendo uma visao sobre os mecanismos que podem estar subjacentes aos efeitos neuroplasticos da terapia VNS. baixar PDF & Introducgao O aumento da neuroplasticidade dentro do sistema motor tem sido apontado como uma terapia potencial para restaurar a disfungdo que freqiientemente surge apds um acidente vascular cerebral e outras lesdes neurais, Estudos pré-clinicos recentes demonstraram que a estimulagao do nervo vago (VNS) emparelhada com 0 treinamento de reabilitagdo especifico facilita a recuperagao da fungo motora em modelos de rato de acidente vascular cerebral, leso cerebral traumitica, lesdo da medula 12" espinhal ¢ lesao do nervo periférico 45° © Estudos clinicos em estagio inicial sugeriram de forma semelhante que VNS emparelhado com exercicios de reabilitagdo pode melhorar a fungo dos membros superiores em pacientes com AVC 7 8. Em ratos feridos e saudaveis, VNS emparelhado com treinamento motor induz consistentemente uma expansio da representagdo do mapa somatotépico da musculatura relevante para a tarefa dentro do cértex motor #9 10 112, Descobertas recentes sugerem ainda que essa reorganizagdo cortical motora pode ser necessaria para que ocorra 0 aumento da recuperagdo funcional mediado por VNS apés a lesao 4 Embora os mecanismos subjacentes & eficdcia do VNS permanegam pouco compreendidos, foi demonstrado que a reorganizagiio cortical conduzida pelo VNS depende da atividade coordenada de 10° varios sistemas neuromodulatérios * 11 Lesdes neurotéxicas para sistemas neuromoduladores colinérgicos, serotonérgicos ou noradrenérgicos bloqueiam a reorganizagio do mapa cortical induzida por VNS !°!! , consistente com o papel critico de cada um desses neuromoduladores no “147 15°16 suporte a plasticidade neocortical '* . Anoradrenalina (NA), em particular, ha muito 13’ 15718 tempo est implicada na neuroplasticidade e neuroprotegao , ¢a sinalizagdio noradrenérgica hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 aasonar2024 15:18 ‘A alivagdo local dos receptores adranérgicos a2 & necesséria para a plasticidade cortical motorainduzida pela estimulago & conhecida por desempenhar um papel critico na eficdcia do VNS !! "19" 20°21" 22°25°24 yng. ) 25 aumenta as taxas de disparo de neurénios noradrenérgicos no locus coeruleus (LC) °° ¢ aumenta as concentragdes de NA no neocértex e hipocampo 2° 26 . Além disso, as lesdes do LC abolem os efeitos antidepressivos e atenuantes das convulsées do VNS 2227. Esses estudos anteriores demonstram que 0s efeitos benéficos do VNS dependem da ativagdo do LC e da sinalizagao noradrenérgica intacta, No entanto, os mecanismos locais pelos quais NA contribui para a plasticidade neocortical mediada por VNS permanecem desconhecidos, Compreender os mecanismos noradrenérgicos de VNS ¢ fundamental para compreender suas limitagdes terapéuticas para a recuperagio de lesdo neural, pois varias comorbidades comuns podem prejudicar a sinalizagio de NA, incluindo doenga de Alzheimer, doenga de Parkinson, depressio e TDAH 2879" 30°31 A noradrenalina modula a transmissio sinaptica e a plasticidade por todo 0 SNC, agindo nos receptores al, «2 ¢ f adrenérgicos acoplados a proteina G (ARs). Em neocértex sensoriais e pré- frontais, «2-ARs ubiquamente expressos so conhecidos por regular a transmissao sinaptica *7 e a 34°35 excitabilidade neuronal *> , © a ativaciio deste subtipo de receptor aumenta os processos de 36” atengdo 38. Dada a importincia dos a2-ARs na regulagao da fungdo do circuito neocortical, formulamos a hipétese de que a ativagao local desses receptores no cértex motor primario (M1) pode desempenhar um papel critico na mediagao dos efeitos promotores da plasticidade do VNS. Para testar essa hipdtese, usamos uma abordagem farmacoldgica para bloquear a2-ARs locais em MI durante um paradigma motor emparelhado com VNS anteriormente mostrado para induzir reorganizagao do mapa motor significativo. Nossos resultados demonstram que o antagonismo de a2-ARs dentro de M1 bloqueia a reorganizagiio do mapa motor induzida por VNS, sugerindo que a ativago desses receptores contribui criticamente para os efeitos promotores de plasticidade de VNS Resultados VNS emparelhado com o desempenho motor aumenta a representagao do mapa cortical da musculatura relevante para a tarefa hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 4181sona2021 15:18 A alivagdo local dos receptores adrenérgicos a2 & neces para a plas cidade cortical mato indiida pala exirulngo Estudos anteriores mostraram que, em ratos que executam uma tarefa de avaliagdo de bradicinesia altamente qualificada, 0 VNS emparelhado com o desempenho de presso de alavanca bem- sucedido resulta na expansio da representag’o do mapa do membro anterior proximal (PFL) relevante para a tarefa no cértex motor contralateral ao membro treinado 9" 19" 11" 1239 No estudo atual, os ratos foram solicitados a realizar uma tarefa simplificada de pressio na alavanca, conforme descrito anteriormente “° (Fig. 1A — C). Verificamos primeiro que a reorganizagao do mapa induzida por VNS foi induzida usando este paradigma de treinamento simplificado, comparando os mapas motores de ratos tratados com sham ¢ VNS que receberam infusdes de veiculo intracortical. Descobrimos que 0 VNS emparelhado com o desempenho correto da presso da alavanca expandiu significativamente a representagdio do PFL dentro do mapa motor cortical (Fig. 1 D; Comparagao da rea do mapa do PFL, sham | veh vs. VNS | veh: t (11) = - 2,68; p = 0,022, testes t ndo pareados de Student). Além disso, a representagao PFL foi a tinica regiao do mapa significativamente afetada pelo tratamento VNS (Fig. 1 Complementar ; Comparagdo das areas do mapa, sham | veh vs. VNS veh: area total do mapa: t (11) = 0,24, p = 0,811; membro anterior distal (DFL): t (11) = 1,95, p= 0,077; corpo anterior (vibrissa + mandibula + pescogo): t (11) = 0,383, p = 0,709; corpo posterior (tronco + membro posterior + cauda): t (11) = 1,04, p = 0,323 testes t de Student nao pareados). Notamos que, em todos os animais, conseguimos obter mapas motores corticais completos usando ICMS (Fig. 2 A; Fig. 2 Complementar ), demonstrando que o implante da canula e as infusdes de drogas nao impactaram significativamente a somatotopia cortical motora em nossas maos. Nossos resultados so altamente consistentes com estudos anteriores, indicando que VNS emparelhado com uma tarefa motora bem aprendida expande seletivamente a representagdo do mapa motor cortical da musculatura relevante para a tarefa? ' '!”!2 | validando os procedimentos de treinamento e tratamento aqui utilizados. figura 1 hitps wn nature.comvartclesis41598.021-00976.2 siasonar2021 15:18 ‘A alivagdo local dos receptores adranérgicos a2 & necesséria para a plasticidade cortical motorainduzida pela estimulago Hit Trial B 44, + —Miss Trial (degrees) Lever Deflection {TOF 3 Trial Time (s) a 0 Mapping ce Surgery + £5 : 4 i 23 Acquisition ; Recovery = 2 (20.8%2.0days) { (7.1 £0.8days) w1 QO Treatment (10 sess.) VN Yoh: - : Design experimental. (A) Desenho ilustrando a tarefa habilidosa de alcancar apertar a alavanca e os procedimentos VNS. Os ratos foram obrigados a pressionar e soltar uma alavanea situada a 2 cm fora da cabine de treinamento dentro de uma janela de 2 s para receber recompensa ( B) Exemplo recompensado (acerto, vermelho) e tentativas ndo recompensadas (falha, cinza) de uma Unica sesso de pré-tratamento. Os ratos foram obrigados a pressionar a alavanca além do “limite de acerto” (9,5 graus abaixo da horizontal) e retorna-la a menos de 4,75 graus da horizontal ("Limite de liberacao / recompensa") em menos de 2 s para receber a recompensa alimentar. "Miss Trials” ndo recompensadbs foram aqueles em que os ratos ndo conseguiram atingir o limite de acerto (traco cinza, esquerda) ou nao conseguiram soltar a alavanca dentro da janela de tempo exigida (traco cinza, direita). (€) Desenho experimental e cronograma. Ratos Sprague-Dawley fémeas foram treinados na tarefa de pressdo de alavanca (Aquisi¢ao) antes da implantagao de manguitos VNS e cnula intracortical. Apés a cirurgia, os ratos foram treinados até que o desempenho estavel fosse restabelecido (recuperacao), e entao alocados dinamicamente em um grupo de tratamento. Durante o tratamento, os ratos receberam 10 sessées de treinamento em que ioimbina (yoh) ou veiculo de hitps:wwn nature comvartclesis41598021-00976.2 ast1611272021 15:18 _Aalvagd loca dos recploresarndsicos a2 &necessra para a plasticdade cota moor india pela estimulagBo controle foi infundido em M1 30 min antes do treinamento comportamental, e em que VNS ou estimulagao simulada foi emparelhada com desempenho correto de presséo na alavanca; sham | veh (n = 7), VNS | veh (n = 6), sham | yoh (rn = 6), VNS | yoh (n = 6). (D ) VNS emparelhado com a tarefa de pressao de alavanca aumentou significativamente a 4rea do membro anterior proximal (PFL) relevante para a tarefa em M1. * p <0,05, teste t nao pareado de Student. Figura 2 Sham+Veh —VNS+Veh_—«Sham + Yoh VNS+ Yoh Q o 2, 60, 8 ¥ 50] 28 BE $24 82 20] = 33 20 ee ge 10 ol WS: = + = + Yon: = + + A infusao cortical de antagonistas a2-AR seletivos bloqueou a reorganizaco do mapa motor induzida por VNS. (A) Exemplos de mapas motores corticais de individuos em cada grupo de tratamento; os mapas representativos sao de assuntos em cada grupo que exibiram a drea total mediana do mapa e a representacdo do membro anterior proximal (PFL) para aquele grupo. DFL: membro anterior distal; Ant .: representagéo anterior do corpo (vibrissa, cabega ou pescoco); Post : representacao posterior do corpo (tronco, membro posterior ou cauda); NR: nao responsivo. (B ) A infusdo de canula de 1 pL de corante de fluoresceina de sédio foi usada para estimar a difusdo da droga no cértex. (€) A area total do mapa motor foi significativamente maior em ratos tratados com VNS que receberam infusao de ioimbina (yoh) em comparacao com hitps:wwn nature comvartclesis41598021-00976.2 7811511212021 16:18 A alvago local dos receptoesadrengicos 026 necessiria para a plastcidade cortical motor induzia pla estmuago outros grupos. ( D) Para controlar a variacao no tamanho total do mapa entre os assuntos, as areas da sub-regido foram normalizadas para a area total do mapa para cada assunto. VNS emparelhado com treinamento de alavanca aumentou significativamente a representaco PFL normalizada em ratos infundidos com veiculo. Em ratos com infuséo de ioimbina, a expansdo de PFL induzida por VNS foi bloqueada Em (C), (D), 0s circulos a cheio indicam dados para ratos individuais; barras de erro denotam SEM; * p <0,05, ** p <0,01, comparagao post hoc de Tukey. A infusao intracortical de antagonistas «2-AR bloqueia a plasticidade do mapa motor induzida por VNS To test whether a2-AR activation is necessary for VNS-induced motor cortical map reorganization, we infused the selective a2-AR antagonist yohimbine into M1 30 min prior to each training-paired NS, or sham stimulation, session. Sodium fluorescein diffusion experiments suggest that our a2- AR antagonist infusions were likely to impact a large cortical area centered on M1, and to cover the majority of the forelimb map area in most animals (Fig. 2B). Two-way ANOVA was used to analyze the effects of VNS and yohimbine treatment on motor map plasticity. These analyses revealed a significant main effect of yohimbine treatment on total map area, as well as a main effect of yohimbine and a VNS x yohimbine interaction on distal and posterior subregions areas (Table 1), Post-hoc comparisons confirmed that the rats receiving both VNS and yohimbine treatments exhibited significantly larger total map areas compared to vehicle-treated groups (Fig. 2C; Supplementary Table 1), and that this effect was largely attributable to larger posterior body representations among the VNSlyoh group (Supplementary Table 1). Table 1 Comparison of motor map areas across treatment groups. ‘Two-way ANOVA further revealed a trend toward a significant main effect of VNS on PFL area, as well as a trend toward a VNS x yohimbine interaction effect (Table 1). To examine subregion specific effects and account for observed differences across treatment groups in total map size, we normalized PEL, DEL, anterior and posterior map areas by total map area for each subject. After normalization, two-way ANOVA revealed significant main effects of both VNS and yohimbine hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 aia1571272021 16:18 A alvago local dos receptoresadrengios 02 6 necessiia para a plascidade coca moto induzida pla estmulagio treatments, as well as a significant VNS x yohimbine interaction, that was specific to the task- relevant PFL motor map representation (Fig. 2D; Table 1; Supplementary Fig. 3). Post-hoe analyses revealed that while VNS treatment significantly increased the percentage of the motor map representing the PEL, infusion of yohimbine prior to VNS treatment blocked this effect (Comparison of PFL representations: sham|veh vs. VNS|veh: p = 0.002; VNS\vch vs. VNSlyoh, p= 0.002; sham|veh vs. VNSlyoh, p = 1.0; shamlyoh vs. VNSlyoh, p = 0.754; Tukey post hoc tes Supplementary Table 2 for full subregion-specific post-hoc results). To control for potential off-target effects of yohimbine*! 42-43, we tested a second, more selective 02-AR antagonist, RS799484445-4647, in a smaller number of VNS treated rats (n= 4) that underwent treatment and ICMS mapping after the completion of the main study. Unlike yohimbine, RS79948 had no effect on total motor map area (Fig. 3A; Supplementary Table 3), suggesting that the overall map expansion we observed in the yoh|VNS treatment group may be unrelated to 02-AR antagonism. Yohimbine is known to additionally antagonize dopamine D2 receptors and agonize serotonin 5-HTIA receptors“, and both catecholamines have been linked to changes in motor map 8,49. size*®-49; these or other off-target effects may contribute to the enlarged maps observed in our yoh|VNS group. RS79948 was found to be as effective as yohimbine at blocking the VNS-induced expansion of the task-relevant PFL representation in M1 (Fig. 3B; Supplementary Table Combined, these results suggest that antagonism of «2-ARs within M1 blocks VNS-driven motor map reorganization. Figure 3 hitps:wwn nature comvartclesis41598.021-00976.2 iatson2021 15:18 ‘A alivagdo local dos receptores adranérgicos a2 & necesséria para a plasicidade cortical motorainduzida pela estmulago A 2 B60 E 20 8% 50 — BE @ 15 5 40 < oS 30 g" 33 oo “wo =5 ic 5 Ze 10 oO - 0 0 VNS: + + + VNS: Yoh: - te - Yoh: RS79948: - - + RS79948: - - 9 m nN g g «sS «515 fo 010 42 gs SB 380, a a°° = =0.0! CAPOH aS O antagonismo cortical «2-AR bloqueia a reorganizaco do mapa conduzida por VNS Veh Yoh sem alterar a expressdo da proteina a2-AR. (A) Ao contrario da ioimbina, 0 antagonista seletivo de a2-AR RS79948 nao aumentou a area total do mapa motor em individuos tratados com VNS (n = 4). (B) A infusdo de RS79948 bloqueou a expansdo induzida por VNS da representagdo de PFL. Em (A), (B),* p <0,05, ** p <0,01, comparacao post hoc de Tukey. (€ - E) A infusdo intracortical de ioimbina nao alterou significativamente a expressao proteica dos subtipos do adrenoreceptor a2A (a2A-AR, D) ou adrenorreceptor at2C (a2C-AR, E) em M1. Em (C), as amostras de proteinas usadas para quantificar a expressdo de a2A-AR (parte superior) e a2C-AR (parte inferior) foram processadas em paralelo em géis separados. Os sinais de controle (GAPDH) foram entao detectados de ambas as membranas em paralelo apds a remogao dos anticorpos primarios de cada subtipo a2-AR. As imagens em (C) foram cortadas para melhorar a clareza e a concisdo da apresentagao; manchas de comprimento total hitps:wwn nature comvartclesis41598021-00976.2 01a1571272021 16:18 A atvago local dos receptoresadrengicos 026 necessiia para a plastcidade cortical motor induzia pla estmuago sao apresentadas na Fig. 4 suplementar . Em DE, a intensidade do sinal a2A-AR (D) e 2C-AR (E) é apresentada em relagdo a intensidade do GAPDH na mesma coluna. Circulos preenchidos denotam dados para assuntos individuais; barras de erro denotam SEM. Como a xilazina exerce seus efeitos anestésicos por meio do agonismo de «2-ARs, também testamos se a administragao intracortical repetida de ioimbina resultou em alteragdes neuronais que podem ter confundido nossos resultados de mapeamento cortical. Em ratos tratados com sham, o tratamento com joimbina nao resultou em nenhum efeito funcional detectével na somatotopia do mapa motor do ICMS (Fig. 2 C, D; Tabela | ; Tabelas Suplementares 1-2 ). Nem os limiares de amplitude de microestimulagio necessirios para evocar movimento durante 0 mapeamento de ICMS diferiram entre os grupos de tratamento (Tabela complementar 4) Para testar diretamente se a expressiio de a2- ARs foi alterada por infusio intracortical repetida de antagonistas a2-AR, os ratos naive receberam infuses MI de ioimbina (n = 4) ou veiculo (n = 3) duas vezes ao dia por 5 dias. Os ensaios de Western blot revelaram que a expressio dos subtipos de adrenoreceptores 2A ¢ a2C em MI nao foram significativamente diferentes em ratos tratados com veiculo e drogas (Fig. 3 C —E; Suplementar Fig. 4 ; nivel relativo de proteina «2A-AR: veh = 0,645 + 0,27 vs. yoh = 0,699 + 0,13, 1 (5) =- 0,2, p= 0,853; nivel de proteina a2C-AR relativo: veh = 1,037 + 0,23 vs. yoh = 0,991 = 0,11, t (5) = 0,19, p = 0,855 ; média + SEM, testes t ndo pareados de Student). Estas andlises indicam que o antagonismo de 02-AR nfo alterou dramaticamente a expressio de «2-AR cortical ou a organizagdo do mapa motor. ‘Tomados em conjunto, nossos resultados sugerem que a ativagdo de a2-ARs desempenha um papel critico na reorganizagao cortical induzida por VNS no cértex motor. Nem VNS nem antagonismo de a2-AR cortical alteram o desempenho comportamental Como o desempenho comportamental diferencial também pode contribuir potencialmente para as diferengas observadas na reorganizacao cortical impulsionada pelo VNS, examinamos se 0 desempenho ao pressionar a alavanca variou entre os grupos de tratamento. Antes do implante de eletrodos VNS e cénula de infusio, nao encontramos nenhuma diferenga significativa na taxa de hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 wat1571212021 16:18 A atvago local dos receptoresadrengicos 026 necessiia para a plastcidade cortical motor induzia pla estan io aprendizagem entre os grupos (Tabela 2 ). Para testar se 0 VNS ou 0 antagonismo cortical a2-AR impactou 0 desempenho comportamental, comparamos 0 total de tentativas realizadas ¢ a porcentagem de desempenho correto em periodos de treinamento e grupos de tratamento. Nao encontramos nenhuma diferenga entre os grupos de tratamento em qualquer medida de desempenho durante as sess6es de treinamento antes ou durante o tratamento (Fig. 4 A, B; Tabela 2) Tampouco encontramos um impacto significative da época de treinamento no total de ensaios realizados ou na porcentagem de desempenho correto para qualquer grupo de tratamento (comparagdes de pré- tratamento vs. tratamento: porcentagem de desempenho correto: sham | veh: p = 0,075; VS | veh, p 0,941; sham | yoh: p = 0,210; VNS | yoh: p = 0,911; ensaios por sesso: sham | veh: p = 0,090; VNS | veh: p = 0,324 sham / drug: p = 0,795; VNS | yoh: p = 0,921; testes t emparelhados), confirmando que a experiéncia dos animais com a tarefa nio diferiu antes da VNS ou infusio da droga, que o desempenho comportamental nao foi afetado por nenhum dos tratamentos. As velocidades de pressdo da alavanca e as duragdes das tentativas nao diferiram entre os grupos de tratamento durante os perfodos de pré- amento ¢ tratamento (Tabela 2 ; Fig. 5 suplementar ), indicando ainda que a coordenagdo motora durante desempenho da tarefa nao foi alterada pelo antagonismo @2-AR local ou pelo tratamento VNS. Também confirmamos que todos os grupos receberam um némero aproximadamente igual de VNS ou estimulos simulados durante 0 periodo de tratamento de 10 sessdes (Fig. 4 C; Tabela 2 ). Estes resultados demonstram que as diferengas nas representacdes do mapa PFL nao podem ser explicadas por diferengas no desempenho comportamental ou exposigdo VNS entre os grupos de tratamento. Combinados, nossos resultados mostram que VNS emparelhado com treinamento motor induz uma reorganizagao significativa do mapa motor cortical somatotépico, ¢ que esta plasticidade induzida por VNS é bloqueada pela administragao local de antagonistas «2-AR. Table 2 Lever press behavior did not differ across treatment groups and was not impacted by VNS or a2-AR antagonist infusions. Figure 4 hitps:wwn nature comvartclesis41598.021-00976-2 yasonar2021 15:18 A alivagdo local dos receptores adrenérgicos a2 & necesséria para a plasticidade cortical motorainduzida pela estmulago > o ° 100, 200; 175} 2140 2 80 i e f¢ . . 3, ot tte EG 120 . © Rod BR i Ei 3g . a Ba F Bool ett Be 80 1 3549 8° 75a | 3 & 60 ee a) | SE 40 20 Ba 25 8° 20 fy ol E NS: = + NS: - + VNS) = + = Yoh: ~ + Yo) = = # + Yoh: - - + + Differences in behavioral performance or VNS exposure cannot explain mapping results. (A) There was no difference across groups in average percent correct performance prior to surgery, before treatment, or during the ten treatment sessions, nor did treatment impact percent correct performance in any group. (B) No difference was observed across treatment groups in the average number of training trials performed per session during any epoch, nor did treatment significantly impact the number of trials performed within any treatment group. (€) The total number of rewarded trials did not differ across treatment groups during the Treatment period, indicating that VNS treated rats in both yohimbine- and vehicle-infused groups received equivalent exposure to VNS. Filled circles denote data for individual subjects; error bars denote SEM. Discussion Prior studies have shown that VNS phasically activates the LC, and that cortical noradrenergic depletion inhibits VNS-driven motor map reorganization!!-?5. Here, we replicate and extend this prior work, demonstrating that selective antagonism of a2-ARs within the motor cortex during VNS treatment is sufficient to block VNS-induced plasticity. Our results suggest that the activation of a2- ARs following VNS-driven noradrenaline release plays a critical role in the induction of motor cortical plasticity that may underlie VNS efficacy during motor rehabilitation. Cortical map reorganization in healthy animals is generally found to be correlated with learning- related improvements in sensory discrimination or motor performance>”*5!529354, Once a task becomes well-learned, however, cortical maps revert to a macro structure that closely resembles that hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 raatsonarz02t 15:18 ‘A alivagdo local dos receptores adranérgicos a2 & necesséria para a plasicidade cortical motorainduzida pela estmulago of naive animals while behavioral proficiency is maintained?»° , suggesting that map expansion per se is not necessary to maintain good performance. Our finding that VNS-induced map reorganization is not accompanied by a change in behavioral performance is supported by several prior studies that utilize a similar training-paired VNS treatment protocol?-!®!!:12, and is consistent with literature suggesting that after task mastery has been achieved, overrepresentation of task- relevant musculature is not associated with further performance improvement>®. Cortical motor map reorganization also accompanies successful motor rehabilitation following stroke and other neural injuries*575859. Importantly, disruption of cortical plasticity processes during recovery both disrupts map reorganization and impairs performance improvement*525?, suggesting that map plasticity reflects neuronal plasticity processes that are functionally relevant for successful rehabilitation. In animals recovering from peripheral nerve injury (PNI), VNS paired with rehabilitation training was recently shown to induce an expansion of the M1 representation of task- relevant musculature’ similar to that observed in healthy subjects. Cortical cholinergic depletion, known to block VNS-induced map reorganization in healthy rats!°, was found to block both map reorganization and performance recovery in the PNI subjects‘, providing additional evidence that VNS-driven map reorganization likely reflects functionally relevant plasticity processes. No estudo atual, descobrimos que o antagonismo «2-AR inibe de forma semelhante a reorganizs do mapa induzida por VNS em individuos saudaveis. Uma questo chave que surge a partir deste resultado, entio, é se «2-ARs corticais contribuem criticamente para a reabilitagdio motora aprimorada por VNS apés leso neural. Dada a expressio onipresente de @2-ARs dentro do neocértex eo conhecido envolvimento desses receptores na transmissio sinaptica na plasticidade, estudos futuros serao criticos para determinar os mecanismos celulares e de circuito especificos pelos quais «2-ARs podem contribuir para a eficécia do VNS . Por exemplo, a ativagao de autoreceptores a2-AR dentro do neocértex é conhecida por suprimir a liberagao pré-sinaptica de NA pelos terminais LC *? °°, © antagonismo desses autorreceptores pode, portanto, resultar em liberagado de NA acima do normal em resposta ao VNS. A ideia de que a liberagdo excessiva de NA poderia bloquear a plasticidade cortical conduzida por VNS é consistente com estudos anteriores que relatam uma curva em forma de U invertido para a eficdcia de VNS |2 ©! . Nesses estudos, as amplitudes de estimulagao moderadas induzem efetivamente a reorganizagao cortical, mas as hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 aia1571272021 16:18 A alvago local dos receptoresadrengicos 02 6 necessiia para a plastcidade cortical moto induzida pla estmulagio intensidades altas no induzem a plasticidade. Se NA esta especificamente envolvido neste fenémeno ainda nao foi determinado, mas uma possibilidade & que a ativagdo excessiva de receptores i adrenérgicos de baixa afinidade (f-ARs) leve a dessensibilizagao ou intemalizagao deste subtipo de receptor. A ativacao do B-AR é conhecida por promover LTP nas sinapses corticais 62 63" 64 glutamatérgicas . portanto, uma perda de sinalizagdo nesses receptores poderia diminuir a capacidade do VNS de conduzir a plasticidade neocortical. O antagonismo de a2-ARs heterossindpticos também pode contribuir para nossos achados. Nos cértices sensorial e motor, a ativagdo de a2-ARs heterossindpticos demonstrou promover a excitabilidade dendritica, aumentando a integragao sinaptica ¢ aumentando a atividade do calcio dendritico que se acredita conduzir a plasticidade a longo prazo *> ° 6° . No cértex pré-frontal (PFC), a ativagao de a2-AR aumenta de forma semelhante a excitabilidade dendritica, resultando no disparo persistente de neurdnios piramidais que se acredita estarem subjacentes 4 meméria de trabalho °° 37 38 _ A ativagio de a2-ARs pés-sinapticos localizados nos dendritos apicais dos neur6nios piramidais corticais aumenta a excitabilidade dos neurdnios piramidais via G -regulagio i acoplada de cAMP levando ao fechamento de canais HCN bloqueados por nucleotideos ciclicos * 34°35°38'67" 68 © fechamento dos canais de HCN aumenta a resisténcia da membrana e a soma 4 a temporal das entradas dendriticas, aumentando a probabilidade de eventos de Ca —_dendritico ** °° , disparo persistente *8 6% ¢ plasticidade sinaptica 7° . Em nosso estudo, o antagonismo a2-AR em MI durante o desempenho da tarefa seria esperado para reduzir a excitabilidade, integragao sinapticae Ca dendriticosinalizagao entre células piramidais que expressam HCN, o que poderia ticidade na rede. Mais pesquisas s4o necessarias prejudicar a capacidade do VNS de conduzir a pl para esclarecer se e como o bloqueio de a2-ARs corticais impacta a sinalizag4o noradrenérgica induzida por VS e a plasticidade sindptica no neocértex. ‘As vias inflamatérias também podem desempenhar um papel nos efeitos pré-plasticidade dependente de NA da VNS. No SNC, foi demonstrado que o NA promove efeitos neuroprotetores dependentes de B-AR; estes incluem inibig&o da ativagdo microglial, produgao reduzida de fatores * Saad, . . 73 & : . pré-inflamatorios e ativagao de vias neurotréficas | . Além disso, recentemente foi hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 1stsona2021 15:18 ‘A alivagdo local dos receptores adranérgicos a2 & necesséria para a plasicidade cortical motorainduzida pela estmulago demonstrado que VNS envolve vias de sinalizago anti-inflamatérias em modelos animais de doenga neurodegenerativa "4 75, Como 0 antagonismo «2-AR demonstrou aumentar a liberagdo local de noradrenalina, a interrupgao da ativacio do B-AR pode contribuir para a interrupgao da sinalizagao neuroprotetora ¢ diminuigio da eficdcia do VNS. Em nosso estudo, certamente seria de se esperar que o implante crénico de cénula intracortical desencadeasse fortes respostas inflamatérias no M1 Notamos que todos os individuos em nosso estudo foram submetidos 4 canulagdo e que, na auséncia de antagonistas a2-AR, o VNS foi, no entanto, eficaz na indugo da plasticidade do mapa motor cortical. Esses resultados sugerem que qualquer resposta inflamatéria presente no momento da entrega do VNS nio foi suficiente para interferir na eficdcia do VNS em nosso estudo. Nao podemos, entretanto, descartar a possibilidade de que interrupgdes mediadas por drogas na sinalizago inflamatéria podem ter contribuido para o bloqueio da plasticidade induzida por VNS que observamos apés o antagonismo a2-AR. Como a inflamagao ¢ um componente importante da lesdo neural e da recuperagao, estudos futuros serao criticos para determinar até que ponto a reabilitagdo motora aprimorada pela VNS depende da modulagio das vias neuroinflamatérias. NS has been reported to enhance a variety of cortical and subcortical memory processes, consistent with activation of multiple, broadly projecting, plasticity promoting neuromodulatory systems’°. In the neocortex, WNS paired with sensory cues or specific movements drives task-dependent map 0,77,78,79,80 plasticity’ , while training alone or unpaired VNS fail to induce cortical reorganization*?:778!, VNS delivery during item presentation has been associated with increased 82,83, memory retention and improved working memory performance’ 'S5_ These effects on memory and cognition are correlated with VNS-driven hippocampal plasticity, including induction of LTp®687 and increased progenitor cell proliferation in the dentate gyrus**°.°. Recent studies have also demonstrated that VNS paired with conditioned cues enhances the extinction of conditioned fear?!\°? and the extinction of cued drug-seeking?®. This VNS-enhanced extinction memory is associated with changes in neuronal activation and synaptic plasticity that are specific to the prefrontal cortex and basolateral amygdala°>. Combined, these studies at once highlight both the broad potential impacts of VNS and the region-specific plasticity obtained when VNS is temporally paired with specific cues or behaviors. Such findings have attracted significant interest in VI driven targeted neuroplasticity as a potential treatment for a variety of neurological disorders, including stroke, tinnitus, and PTSD”®. hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 61asonarz02t 15:18 ‘A alivagdo local dos receptores adranérgicos a2 & necesséria para a plasticidade cortical motorainduzida pela estimulago NS paired with motor rehabilitation training is increasingly under investigation to improve therapeutic outcomes in patients recovering from neural injuries, While VNS efficacy is known to depend on the coordinated release of neuromodulators within the neocortex, the specific cellular and circuit mechanisms involved remain poorly understood. Our results demonstrate that activation of a2-ARs plays a critical role in the induction of motor cortical reorganization by VNS, which is thought to be key to the recovery of motor function following stroke and other neural injuries. These findings may have significant clinical implications for the use of VNS as a plasticity promoting therapy, as many commonly prescribed medications impact noradrenergic signaling, including monoamine reuptake inhibitors, B-blockers, a-blockers, and a2 agonists. Moreover, among older populations most at risk for stroke, noradrenergic depletion due to Alzheimer’s disease, Parkinson’s disease, or other dementias is not uncommon?®??. . The current study underscores the importance of cortical noradrenergic signaling in VNS efficacy and opens broad possibilities for future research into the cellular mechanisms by which «2-AR activation impacts motor cortical network dynamics and plasticity. Methods All procedures were approved by the University of Texas Institutional Animal Care and Use Committee in accordance with the National Institutes of Health guide for the care and use of laboratory animals. Experiments were designed, conducted, and reported in compliance with ARRIVE guidelines Animal subjects and experimental design A total of fifty-four adult female Sprague-Dawley rats, 10-12 weeks old (251.3 + 3.8 g) at study start, were used in these experiments. Female rats were used because substantial previous studies have shown that VNS paired with the motor behavior used in this study induces cortical plasticity in this sex?»!®11.12.94 Rats were pair housed throughout the study in a 12:12 h reversed light cycle room (lights on at 6:00 pm) and all procedures were performed during the dark cycle. During behavioral training, rats were food restricted to approximately 90-95% of their free-feeding weight. hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 watsona2021 15:18 ‘A alivagdo local dos receptores adranérgicos a2 & necesséria para a plasticidade cortical motorainduzida pela estimulago To test the effects of local 02-AR antagonism on VNS-induced cortical plasticity, rats were trained ona skilled reaching lever press task. After reaching proficiency on the task, VNS cuff electrodes were chronically implanted around the left cervical vagus nerve and intracortical infusion cannula were implanted targeting the forelimb region of M1. After surgical recovery, rats returned to training until stable behavioral performance was reestablished on the lever press task. Rats were then assigned to one of four treatment groups using dynamic allocation®’. A two-factor study design was used to test the effects of training-paired VNS (or sham) treatment and intra-M1 infusion of the a2- AR antagonist, yohimbine (or vehicle). To control for off-target effects of yohimbine, additional lever-trained subjects were included in a control group that received training-paired VNS treatment along with intracortical infusions of the more selective 02-AR antagonist, RS79948. Rats that received RS79948 were the last to begin behavioral training and were not randomly assigned to this treatment group. Rats in the RS79948 group were trained in parallel with rats included in all other treatment groups, however, VNS and RS79948 infusions, and ICMS motor cortical mapping procedures, occurred 4-10 weeks after the main study was completed. Experimenters conducting the behavioral training, VNS, and mapping procedures remained blinded to the treatment assignments of all rats throughout the study, including those of the RS79948 group. No total, quarenta e cinco ratos foram submetidos a treinamento comportamental. Dezesseis individuos foram excluidos do estudo devido a complicagées de saiide antes (n = 1) ou durante a recuperagao da (n = 2) cirurgia, falha em atender aos critérios de desempenho comportamental durante a aquisigao da tarefa (n= 2) ou recuperagdo (n = 1), falha da canula implantada durante o tratamento (n = 4) ou falha dos eletrodos do manguito implantados (n = 6). Vinte e nove ratos completaram com sucesso 0 estudo ¢ estao incluidos nas andlises de mapeamento de comportamento VNS | veh: n= 6; RS79948, Sujeitos ¢ motor: vinte e cinco nos principais grupos de tratamento (sham | veh: n = sham | yoh: n = 6; VNS yoh: n = 6), e mais quatro no grupo de controle VNS ingénuos adicionais (n = 9) foram incluidos em outros experimentos de controle, conforme descrito abaixo. Treinamento comportamental hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 10sonarz02t 15:18 A alivagdo local dos receptores adranérgicos a2 & necesséria para a plasicidade cortical motorainduzida pela estmulago Qs ratos foram treinados em uma versao simplificada de uma tarefa de pressio de alavanca automatizada publicada anteriormente 9’ 19" !1" 12°39 na qual eles foram obrigados a pressionar e liberar totalmente uma alavanca posicionada 2 cm fora de uma cdmara comportamental MotoTrak (Valintus Ine., Dallas, TX) para receber uma recompensa em comida (Fig. 1A, B). A fenda pela qual os ratos acessavam a alavanca foi posicionada préxima a uma divis6ria da gaiola, o que garantiu que os ratos executassem essa tarefa habilidosa de apertar a alavanca com @ membro anterior direito, A posigdo da alavanca foi monitorada continuamente a 100 Hz e variou de 0 (nenhuma forga aplicada) a 13 graus abaixo da horizontal (depressao méxima da alavanca). Os ratos receberam um pellet alimentar de 45 mg (Bio-Serv, Flemington, NJ) aps pressionar com sucesso (para mais de 9,5 graus da horizontal) e, em seguida, liberar (retornar a menos de 4,75 graus da horizontal) a alavanca dentro de uma janela de 2 s (Pig. . 1B), Antes do treinamento, cada rato foi aclimatado ao manuscio durante 3-5 sessées didrias de aclimatagdo de 10 minutos, entdo habituado ao ambiente de treinamento durante duas sessies de habituagio de 30 minutos, entregues em dias consecutivos, nas quais eles foram autorizados a explorar livremente o Estande do MotoTrak. Apés a habituagao, os ratos receberam duas sessdes de treinamento comportamental de 30 min na tarefa de presstio de alavanca por dia, cinco dias por semana, com pelo menos 1 h de descanso na gaiola domiciliar entre as sessdes do mesmo dia. O treinamento na tarefa foi realizado em varias etapas. No estigio 1, a alavanca foi localizada dentro da cabine e os ratos foram recompensados por fazerem depresses da alavanca progressivamente maiores. Uma vez que os ratos puderam realizar a depressio da alavanca completa por 100 tentativas / dia por dois dias consecutivos, os ratos passaram para o estigio 2, em que a recompensa foi recebida apés a liberagio da alavanca apés uma depressio completa, A fase de treinamento de Aquisigao iniciou-se na etapa 3, na qual a alavanca foi progressivamente movimentada do interior para o exterior da cabine de treinamento, até atingir a posigdo final de 2 cm fora da cabine. O treinamento comportamental didrio continuou até que os critérios de desempenho fossem alcangados (> 55 tentativas e> 65% corretos por sesso, por 8/10 sessdes de treinamento consecutivas). A cirurgia foi entdo realizada para implantar eletrodos de manguito do nervo vago ¢ cénula guia intracortical. Apos 3-7 dias de descanso apés a citurgia, os animais receberam sessdes adicionais de treinamento de recuperagdo para se aclimatarem ao cabo de estimulagio ¢ para restabelecer 0 desempenho comportamental criterioso. Os animais foram entio atribuidos a um grupo de tratamento usando alocagdo dindmica A fase de treinamento de Aquisi¢ao iniciou-se na etapa 3, na qual a alavanca foi progressivamente movimentada do interior pata 0 exterior da cabine de treinamento, até atingir a posigao final de 2 cm fora da cabine. O treinamento comportamental diario continuou até que os critérios de desempenho fossem alcangados (> 55 hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 91a1571272021 16:18 A alvago local dos receptoresadrengios 026 necessiia para a plastcidade cortical moto induzida pla estmulago tentativas e> 65% corretos por sesso, por 8/10 sessdes de treinamento consecutivas). A cirurgia foi entio realizada para implantar eletrodos de manguito do nervo vago ¢ canula guia intracortical. Apés 3-7 dias de descanso apés a cirurgia, os animais receberam sessdes adicionais de treinamento de recuperagdo para se aclimatarem ao cabo de estimulagiio e para restabelecer o desempenho comportamental criterioso. Os animais foram ento atribuidos a um grupo de tratamento usando alocagdo dindmica A fase de treinamento de Aquisigao iniciou-se na etapa 3, na qual a alavanca foi progressivamente movimentada do interior para 0 exterior da cabine de treinamento, até atingir a posigdo final de 2 cm fora da cabine. O treinamento comportamental diario continuou até que os critérios de desempenho fossem alcangados (> 55 tentativas e> 65% corretos por sessio, por 8/10 sessOes de treinamento consecutivas). A cirurgia foi entdo realizada para implantar eletrodos de manguito do nervo vago e cAnula guia intracortical. Apés 3-7 dias de descanso apés a cirurgia, os animais receberam sessdes adicionais de treinamento de recuperagdo para se aclimatarem ao cabo de estimulagdo e para restabelecer o desempenho comportamental criterioso. Os animais foram entio atribuidos a um grupo de tratamento usando alocagio dindmica em que a alavanca foi progressivamente movimentada do interior para o exterior da cabine de treinamento, até atingir a posigao final de 2 cm fora da cabine. O treinamento comportamental didrio continuou até que os critérios de desempenho fossem alcangados (> 55 tentativas e> 65% corretos por sessio, por 8/10 sessdes de treinamento consecutivas). A cirurgia foi ento realizada para implantar eletrodos de manguito do nervo vago e cAnula guia intracortical. Apés 3-7 dias de descanso apés a cirurgia, os animais receberam sess6es adicionais de treinamento de recuperagdo para se aclimatarem ao cabo de estimulagdo e para r belecer 0 desempenho comportamental criterioso. Os animais foram entdo atribuidos a um grupo de tratamento usando alocagio dinamica em que a alavanca foi progressivamente movimentada do interior para o exterior da cabine de treinamento, até atingir a posigdo final de 2 cm fora da cabine. O treinamento comportamental diario continuou até que os ctitérios de desempenho fossem alcangados (> 55 tentativas e> 65% corretos por sesso, por 8/10 sessdes de treinamento consecutivas). A cirurgia foi ent&o realizada para implantar eletrodos de manguito do nervo vago e cAnula guia intracortical. Apés 3-7 dias de descanso apés a cirurgia, os animais receberam sess6es adicionais de treinamento de recuperagdo para se aclimatarem ao cabo de estimulagdo e para restabelecer 0 desempenho comportamental criterioso. Os animais foram entdo atribufdos a um grupo de tratamento usando alocagio dindmica 55 tentativas e> 65% de acertos por sesso, por 8/10 sessdes de treinamento consecutivas). A cirurgia foi entio realizada para implantar eletrodos de manguito do nervo vago e cénula guia intracortical. Apés 3-7 dias de descanso apés a cirurgia, os animais receberam sessdes adicionais de treinamento de recuperagdo para se hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 ovat1571272021 16:18 A alvago local dos receptoresadrengios 22 6 necessiia para a plascidade cortical moto induzida pla estmilagio aclimatarem ao cabo de estimulagdo e para restabelecer o desempenho comportamental criterioso. Os animais foram entio atribuidos a um grupo de tratamento usando alocago dindmica 55 tentativas e> 65% de acertos por sesso, por 8/10 sessdes de treinamento consecutiv. |. A cirurgia foi entio realizada para implantar eletrodos de manguito do nervo vago e canula guia intracortical. Apés 3-7 dias de descanso apés a cirurgia, os animais receberam sessdes adicionais de treinamento de recuperagao para se aclimatarem ao cabo de estimulagao e para restabelecer 0 desempenho comportamental criterioso. Os animais foram entio atribuidos a um grupo de tratamento usando alocago dinamica?> e recebeu 10 sessdes finais de tratamento nas quais foram administradas infusdes intracorticais de drogas ou vefculos e VNS pareado com treinamento ou estimulagiio simulada. O projeto experimental e o cronograma so mostrados na Fig. I C Procedimentos cirtirgicos Os ratos foram anestesiados com um coquetel de cloridrato de cetamina (50 mg / kg), xilazina (20 mg / kg) ¢ acepromazina (5 mg / kg) injetados por via intraperitoneal e receberam doses suplementares conforme a necessidade para manter a anestesia estvel durante os procedimentos. O implante de eletrodos do manguito do nervo vago foi realizado conforme descrito anteriormente > 10°96 Resumidamente, uma incisdo foi feita no pescogo e o nervo vago esquerdo exposto por culos subjacentes. O nervo vago foi isolado da artéria carétida com dissec¢do romba e colocado dentro de um eletrodo de manguito estimulador bipolar com derivagdes de platina-iridio de baixa impedancia (<5 k@) 97 98" 9. F ios de chumbo foram tunelados por via subcutdnea em diregdo ao crdnio e ligados a um conector de 2 canais. A fungio adequada do manguito foi validada estimulando o nervo vago usando um trem de 10 s de 0,8 mA, pulsos bifisicos de 100 jis administrados a 30 Hz para provocar uma breve interrupgao da respiragao ¢ queda na SpO , consistente com o reflexo Hering-Breuer 100A incistio do pescogo foi entiio suturada e a cabega do animal estabilizada em uma estrutura estereotxica. Trés parafusos ancora foram inseridos no crnio em pontos proximos a sutura lambdoide e 0 conector de dois canais foi cimentado com acrilico. Uma cénula guia de ago calibre 22 (Plastics1, Roanoke, VA) foi direcionada para a area do membro anterior do cortex motor primario esquerdo (AP: + 0,5 mm, ML: - 2,5 mm do bregma, DV: - 1,0 mm da superficie pial) e cimentado no local com acrilico. A incisao do couro cabeludo foi suturada, um creme antibidtico topico foi aplicado em ambos os locais da incisdo ¢ os hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 2iat15/12/2021 15:18 _Aativago acl dos recoptres adronérgcos a2 6 necessria para a plasildade cortical matora induzida pela estimulago animais receberam comprimidos de Rimadyl (carprofeno, 2 mg / 5 g comprimido) e Baytril (enrofloxacina, 0,5 mg / 5 g comprimido) (Bio-Serv , Flemington, NJ) por trés dias durante a recuperagio. Parametros VNS After recovery from surgery, rats continued behavioral training until criterial performance was re- established on the task, Prior to treatment group assigment, implanted cuff function was validated by delivering 1-5 VNS test stimulations to ensure that implanted cuff impedance was between 3 and 4 kQ and that stimulation provoked no overt behavioral response. Rats in which electrode function could not be validated prior to group assignment were either dropped from the study (n= 2) or included in the veh|sham treatment group (n= 4). Rats with behavioral responses to stimulation were excluded from the study (n= 2). Subjects then received 10 additional training sessions in which VNS, or sham stimulation, was delivered during rewarded trials immediately following each correct lever press-and-release, VNS parameters were identical to those shown in previous studies to effectively induce motor cortical map reorganization? !°!!.!2; yNg was delivered as a 500 ms train of 15 pulses (0.8 mA, 100 pisec biphasic pulse width) at 30 Hz. Sham treated rats were connected to the stimulator cables and received identical behavioral training as VNS groups, but no stimulation was delivered during the training sessions. During each training-paired VNS treatment session, cuff function was continuously monitored using a digital oscilloscope to ensure that implanted device impedance remained within 3-4 kQ. VNS-treated rats were excluded from the study if cuff function was lost during the Treatment period (n= 1). Drug administration Thirty minutes prior to each of the final 10 training-paired VNS or sham treatment sessions, an 2- AR antagonist, or drug-free vehicle, was infused into the motor cortex to assess the necessity of «2- AR activation in VNS-dependent cortical reorganization. For the main study, the @2-AR antagonist yohimbine (Acros Organics, Fair Lawn, NJ) was used (shamlveh, n = 7; VNS|veh, n=6; shamlyoh, n=6; VNSlyoh, n=6). As yohimbine has been found to exhibit off-target effects at higher concentrations“!-43, we also tested the highly selective a2-AR antagonist RS79948“4:45-46-47 (Tocris Bioscience, Bristol, United Kingdom) in an additional group of VNS-treated rats (n= 4). Neurological effects of yohimbine and RS79948 following intracranial infusions are well supported hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 2214415/1272021 15:18 _Alivago local dos recoptoes adrendrpicos a2 6 necessdria para a pasicdad cortical moors india pea estimuiago by prior electrophysiological and behavioral studies?77¥:!01,102,103,104,105 Here, we utilized the same intracranial infusion parameters adopted in previously published rodent studies!"?!4, A total volume of 1 wL of yohimbine (5 j1g/jiL in 40% saline + 60% DMSO), RS79948 (2 pg/L in 40% saline + 60% DMSO) or vehicle (40% saline + 60% DMSO) was infused through the implanted cannula at a rate of 0.25 L/min, Cannula placements in M1 were stereotaxically confirmed during surgery, and fluid flow was validated during each infusion. To estimate the probable spread of intracortically infused compounds within MI, a 1% solution of sodium fluorescein salt (Sigma Aldrich, St Louis, MO, USA) was intracortically infused at the M1 target coordinates in two untrained rats (Fig. 1D). Sodium fluorescein was prepared in the same 40% saline + 60% DMSO solvent and has similar chemical properties as the compounds used in this study, including similar molecular weight (sodium fluorescein MW: 376.27 g/mol: yohimbine MW: 354.4 g/mol; RS79948 MW: 401 g/mol), charge (0 for all drugs), and low polar surface area (sodium fluorescein: 78.8 A?; yohimbine: 65.6 A?; RS79948: 58.2 A2). These structural similarities suggest that sodium fluorescein should provide an effective estimate of yohimbine and RS79948 diffusion within neural tissue, though we note that differences in steric properties across the three compounds may nonetheless contribute to differential cortical diffusion. Dye was infused using identical parameters as those used during daily drug administration (volume: 1 uL, rate: 0.25 uL/min) and allowed to diffuse for 30 min, Rats were then deeply anesthetized with 0.5 mL sodium pentobarbital and phenytoin solution (Somnosol, Henry Schein Animal Heath, Dublin OH) delivered intraperitoneally, and transcardially perfuused with 120 mL ice-cold PBS followed by 120 mL 4% paraformaldehyde, Brains were removed and fixed with 4% paraformaldehyde for 24 h, followed by cryoprotection with 30% sucrose for 48-72 h. Coronal sections were prepared with a Leica cryostat at 40 jum thickness. Western blot To test whether repeated intracortical infusions of «2-AR antagonists altered receptor expression levels in M1, 7 naive female Sprague-Dawley rats were implanted with intracortical infusion cannula targeting the left forelimb area of M1, as described above. After recovery from surgery, rats, were infused with yohimbine (n= 4) or drug-free vehicle (n= 3) twice a day for 5 consecutive days. Solutions and infusion parameters were identical to those used in the main treatment groups, described above. Twenty-four hours after the final infusion, animals were anesthetized and sacrificed hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 aia1571212021 16:18 A alvago local dos receptoesadrengicos 02 6 necessiria para a plastcidde cortical motor induzia pla estmulag io by decapitation; brains were quickly removed and flash frozen on dry ice. For each subject, four 1 mm diameter tissue punches were collected from MI and homogenized in lysis buffer (10 mM Tris, pH 7.5, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, and 1% NP-40) containing protease and phosph inhibitors (Roche, Basel, Switzerland), Protein concentration in each sample was quantified using a e Pierce BCA Protein Assay kit (Thermo Scientific, Waltham, MA). A total of 25 y1g of protein per sample was loaded into 10% SDS-PAGE gels and separated by electrophoresis. Proteins were then transferred onto 0.45 jim pore size PVDF membranes (MilliporeSigma, Burlington, MA) using a wet tank transfer system (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) at 150 V for 1.5 hon ice. The membranes were then blocked with 5% non-fat dry milk in TBST Tris buffer (0.1 M Tris, 0.9% NaCl, 0.1% Tween-20) for | h at room temperature, washed with TBST three times and hybridized with primary antibody (Anti-a2A Adrenergic receptor, 1:200, Proteintech, Cat No: 14266-1-AP; Anti-a2C Adrenergic receptor, 1:500, Sigma, SKU: SAB4500566) overnight at 4 °C. The membranes were washed three times with TBST and hybridized with secondary antibodies (Anti- rabbit IgG, HRP-linked antibody, 1:10,000, Cell Signaling Technology) for 1 h at room temperature. Finally, the membranes were washed with TBST (3x) and signals were detected with Immobilon Western Chemiluminescent HRP substrate (MilliporeSigma, Burlington, MA) and visualized with a Bio-Rad ChemiDoc Touch. Membranes were then stripped using a mild stripping buffer (199.8 mM glycine, 3.5 mM sodium dodecyl sulfate, 0.01% Tween-20, pH = antibody (GAPDH Polyclonal antibody, 1:5000, Proteintech, Cat No: 10494-1-AP). Signal band intensity was analyzed using ImageJ; for each subject, @2A~AR and a2C-AR target band intensities .2) and reprobed with control were normalized to their respective same-gel GAPDH signal intensities. Intracortical microstimulation (ICMS) mapping Within 24 h of the final treatment-paired training session, rats underwent CMS mapping of the left motor cortex to derive functional somatotopic maps as previous described?*!®!!>!2, Rats were anesthetized with ketamine hydrochloride (70 mg/kg) and xylazine (5 mg/kg) injected intramuscularly and placed in a stereotaxic frame. Prior to mapping, cuff electrode function was validated in VNS-treated subjects by applying a 10 s train of 100 us biphasic pulses (amplitude = 0.8 mA; pulse frequency ~ 30 Hz) to elicit the Hering-Breuer reflex. Rats in which no reflex was evoked were excluded from the study (n= 1), VNS headcaps and chronically implanted cannula were surgically removed. To prevent swelling, a small incision was made in the cisterna magna. A craniotomy and durotomy were performed to expose the left motor cortex (ca. + 4.0 to— 3.0 mm hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 aiasonarz02t 15:18 A alivagdo local dos receptores adrenérgicos a2 & neces para a plas cidade cortical mato indiida pala exirulngo anterior/posterior and ca. + 0.2 to +5 mm lateral to bregma) and a low impedance tungsten electrode (300-500 kQ, FHC, Bowdoin, ME) was stereotaxically lowered 1,8 mm into motor cortex at multiple sites in a grid pattern with 0.5 mm spacing. Silicone fluid was used to cover the exposed cortical surface. Microstimulation consisted of a 40 ms train of ten 200 see monophasic cathodal pulses delivered at 300 Hz. Stimulation intensity was gradually increased from 0 to 200 WA until a movement was first observed or maximal amplitude was reached. Threshold-evoked movements were classified as proximal forelimb, distal forelimb, vibrissa, jaw, neck, trunk, hindlimb, or tail. If no movement was observed at 200 1A, responses were evaluated at 1.6 mm and 2.0 mm electrode depths to allow for variations in cortical thickness. Stimulation sites within the grid were tested in random order, and the borders of motor cortex were defined by unresponsive sites at 200 wA amplitude at all three depths. ICMS was accomplished with two experimenters. One experimenter determined the random placement of the stimulation electrode. The second experimenter, blinded to both the location of the electrode and to the treatment condition of the rat, delivered the stimulation and determined the primary movement and threshold stimulation amplitude. Anilise estatistica As anilises estatisticas foram realizadas em Python usando a biblioteca Pandas !°7 , a biblioteca 108, 109 4 \dos os dados resumidos sao relatados como média + erro SeiPy padriio da média (SEM). © 0 pacote statsmodels Para confirmar que o paradigma de treinamento comportamental simplificado usado neste estudo foi capaz de replicar a plasticidade cortical induzida por VNS conforme relatado na literatura, as areas do mapa cortical dos dois grupos tratados com veiculo foram comparadas primeiro usando 0 teste t de Student nao pareado. Para anélises de mapeamento de ICMS no estudo principal, os resultados de mapeamento de ICMS foram comparados em todos os grupos de tratamento usando a anélise de variancia bidirecional (ANOVA), seguida por testes post hoc de Tukey. Para todas as comparagdes de mapas motores, diferengas significativas so relatadas se p <0,05. O desempenho comportamental durante os periodos de pré-tratamento e tratamento foi comparado entre os grupos usando ANOVA de duas vias. Os parametros comportamentais examinados incluiram tentativas médias por sessdo, desempenho correto percentual médio por sessao, velocidade média de pressao da alavanca, duragdo média da tentativa e VNS total ou estimulos simulados hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 sia1571212021 16:18 A atvago local dos receptoresadrengicos 026 necessiia para a plastcidade cortical motor induzia pla estan io fornecidos durante o tratamento, Para todas as comparagdes comportamentais, 0 periodo de tratamento consistiu em 10 sessdes nas quais VNS ou estimulagdo simulada foi emparelhada com 0 desempenho correto da tarefa, enquanto o periodo de pré-tratamento consistiu em 6 sessdes de treinamento imediatamente antes do tratamento. Dentro de cada grupo de tratamento, as mudangas no desempenho comportamental entre os periodos de pré-tratamento ¢ tratamento foram avaliadas usando testes t de duas amostras emparelhados, Para todas as comparagdes comportamentais, diferengas significativas relatadas se p <0,05. Disponibilidade de dados Os conjuntos de dados gerados durante ¢ / ou analisados durante o estudo atual esto disponiveis junto ao autor correspondente mediante solicitagdo razoavel. Abreviagées @2-ARs, Receptores noradrenérgicos alfa-2 ICMS: Microestimulagao intracortical MI. Cértex motor primario N/D: Noradrenalina PFL: Membro anterior proximal VNS: hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 26141sonar2024 15:18 A alivagdo local dos receptores adrenérgicos a2 & necesséria para a plasticidad cortical motorainduzida pela estmulago Estimulagdo do nervo vago veh. Veiculo yoh: Joimbina Referéncias IL Khodaparast, N. et al. A estimulago do nervo vago durante o treinamento de reabilitagio melhora a recuperagio do membro anterior apés acidente v em ratos. Neurorehabil. Reparo neural. 30 , 676-684 (2016). ular cerebral isquémico erdnico 2 Ganzer, PD et al. A neuromodulagao de circuito fechado restaura a conectividade da rede e 0 controle motor apés leso da medula espinhal. Elife 7 , 66 (2018). 3 Hays, SA et al. A estimulagao do nervo vago durante o treinamento de reabilitagao melhora a recuperagao funcional apés hemorragia intracerebral. Stroke https://doi.org/10.1161/STROKEAHA.114.006654 (2014). 4 Meyers, EC et al, Aumentar a plasticidade nas redes centrais melhora a recuperagdo motora e sensorial apés danos nos nervos. Nat. Comum. 10 , 1-14 (2019), & Meyers, EC et al, A estimulagio do nervo vago aumenta a plasticidade estvel ea generalizago da recuperagao do derrame. Stroke 49 , 710-717 (2018). G Pruitt, DT et al. A estimulago do nervo vago fornecida com o treinamento motor aumenta a recuperagdo da fungiio apés lesfo cerebral traumatica. J. Neurotrauma 33 , 871-879 (2016). TL Dawson, J. et al. Seguranga, viabilidade ¢ eficdcia da estimulagio do nervo vago emparelhada com reabilitago do membro superior aps acidente vascular cerebral isquémico. Stroke 47 , 143-150 (2016). hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 zie1571272021 16:18 A alvago local dos receptoresadrengios 22 6 necessiia para a plascidade cortical moto induzida pla estmilagio {8 Kimberley, TJ ef al, Estimulagdo do nervo vago emparelhada com reabilitagdo do membro superior apés acidente vascular cerebral crénico: um estudo piloto randomizado cego. Stroke 49 , 2789-2792 (2018). ® Porter, BA ef al. O emparelhamento repetido da estimulagao do nervo vago com um movimento reorganiza o cértex motor primario. Cereb, Cortex 22 , 2365-2374 (2012). IM Hulsey, DR ef al. A reorganizagdo do cértex motor pela estimulagdo do nerve vago requer inervagao colinérgica. Brain Stimul. 9 , 174-181 (2016). Ill Hulsey, DR, Shedd, CM, Sarker, SF, Kilgard, MP & Hays, SA A norepineftina e a serotonina sao neces vago. Exp. Neurol. 320 , 112975 (2019). s para a plasticidade cortical direcionada a estimulagao do nervo IZ Morrison, RA ef al, A intensidade da estimulag3o do nervo vago influencia a plasticidade do cértex motor. Brain Stimul. 12 , 256-262 (2019). IER Vitrac, C. & Benoit-Marandmarianne, M. Monoaminergic modulation of motor cortex function. Frente. Neural Circuits 11 , 66 (2017). IMA Lesch, KP & Waider, J. Serotonin na modulagao da plasticidade neural e redes: implicagdes para distirbios do neurodesenvolvimento. Neuron 76 , 175-191 (2012). IS Salgado, H., Treviiio, M. & Atzori, M. AcGes especificas da camada e da area da norepinefrina na transmissio sinaptica cortical. Brain Res. 1641 , 163-176 (2016). IG Gu, Q. Sistemas de transmissiio neuromodulatéria no cértex e seu papel na plasticidade cortical. Neuroscience 111 , 815-835 (2002). I Rasmusson, DD O papel da acetilcolina na plasticidade sinaptica cortical. Behav. Brain Res. 115 , 205-218 (2000). IK O'neill, E. & Harkin, A. Targeting the noradrenergic system for anti-inflamatério and neuroprotective effects: Implications for Parkinson's disease. Neural Regener. Res. 13 , 1332— hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 siasonarz02t 15:18 ‘A alivagdo local dos receptores adranérgicos a2 & necesséria para a plasicidade cortical motorainduzida pela estmulago 1337 (2018). I Dorr, AE & Debonnel, G. Efeito da estimulagao do nervo vago na transmissao serotonérgica e noradrenérgica. J. Pharmacol. Exp. Ther: 318 , 890-898 (2006). i Follesa, P. ef al, A estimulagao do nervo vago aumenta a concentragdo de norepineftina ¢ a expresso génica de BDNF e bFGF no cérebro de rato. Brain Res. 1179 , 28-34 (2007). IL Furmaga, H., Shah, A. & Frazer, A. As vias serotonérgicas e noradrenérgicas so necessirias para os efeitos comportamentais do tipo ansiolitico e do tipo antidepressivo da estimulagdo repetida do nervo vagal em ratos. Biol. Psychiatry 70 , 937-945 (2011), 22 Krahl, SE, Clark, KB, Smith, DC & Browning, RA As lesdes do locus coeruleus suprimem 0s efeitos atenuantes das convulsdes da estimulagdo do nervo vago. Epilepsia 39 , 709-714 (1998). 2R Manta, S., Dong, J., Debonnel, G. & Blier, P. Enhancement of the function of rat serotonin and norepinephrine neurons by sustentado vago nervoestimulation. J. Psychiatry Neurosci. 34 , 272-280 (2009), 24 Raedt, R. et al. O aumento da noradrenalina hipocampal é um biomarcador da eficdcia da estimulagao do nervo vago em um modelo de crise limbica. J. Neurochem. 117 , 461-469 (2011). 2% Hulsey, DR ef al. Caracterizagao paramétrica da atividade neural no locus coeruleus em resposta A estimulagio do nervo vago. Exp. Neurol. 289 , 21-30 (2017). 2G Roosevelt, RW, Smith, DC, Clough, RW, Jensen, RA & Browning, RA Concentragdes extracelulares aumentadas de norepinefrina no cértex ¢ hipocampo apés estimulagdo do nervo vago no rato. Brain Res. 1119 , 124-132 (2006). 2M Grimonprez, A. ef al. O efeito do tipo antidepressivo da estimulagio do nervo vago é mediado pelo locus coeruleus. J. Psychiatr. Res. 68 , 1-7 (2015). hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 olasonarz02t 15:18 A alivagdo local dos receptores adranérgicos a2 & necesséria para a plasicidade cortical motorainduzida pela estmulago 28. 28 Eldholm, RS et al. Associagdo entre comorbidade vascular e progressao da doenga de Alzheimer: um estudo observacional de dois anos em clinicas de memoria norueguesas. BMC Geriatr. 18 , 66 (2018). 2B Bunn, F. et al. Comorbidade e deméncia: Uma revisdo de escopo da literatura. BMC Med. 2, 192 (2014). BN Leonard, BE Noradrenaline em modelos basicos de depressio. em European Neuropsychopharmacology vol. 7 S11 ~ S16 (Elsevier, 1997). BIL Del Campo, N., Chamberlain, SR, Sahakian, BJ & Robbins, TW Os papéis da dopamina e noradrenalina na fisiopatologia e tratamento do transtomno de déficit de atengao / hiperatividade. Biol. Psychiat. 69 , e145 ~ e157 (2011). RZ Starke, K. Regulation of noradrenaline release by presynaptic receptor systems. Rev. Physiol. Biochem. Pharmacol. 77 , 1-124 (1977). RR Labarrera, C. ef al. A modulagdo adrenérgica regula a excitabilidade dendritica dos neurénios piramidais da camada 5 in vivo. Cell Rep. Https://doi.org/10.1016/j.celrep.2018.03.103 (2018). 4 Carr, DB, Andrews, GD, Glen, WB & Lavin, A. A ativagao dos receptores alfa2- noradre1 cos aumenta a excitabilidade ¢ a integrago sindptica em neurénios piramidais do cértex pré-frontal de rato via inibigdo de correntes de HCN. J. Physiol. https://doi.org/10.1113/jphysiol.2007.141671 (2007). BR Barth, AMI, Vizi, ES, Zelles, T. & Lendvai, B. Os receptores «2-adrenérgicos modificam a geragao de espiculas dendriticas via canais HCN no cértex pré-frontal. J. Neurophysiol. 99 , 394-401 (2008) RG Franowicz, JS et al. A mutagdo do adrenoceptor « 2A prejudica o desempenho da meméria de trabalho e anula o aprimoramento cognitivo pela guanfacina. J. Neurosci. https://doi.org/10.1523/jneurosci.22-19-08771.2002 (2002). hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 ovat1571272021 16:18 A alvago local dos receptoresadrengios 026 necessiia para a plastcidade cortical moto induzida pla estmulago 37.37 Li, BM, Mao, ZM, Wang, M. & Mei, ZT Alfa-2 modulaco adrenérgica da atividade neuronal cortical pré-frontal relacionada 4 meméria operacional espacial em macacos. Neuropsychopharmacology 21 , 601-610 (1999). BR Wang, M. ef al. Os adrenoceptores a2A fortalecem as redes de meméria de trabalho ao inibir a sinalizagdo do canal eAMP-HCN no cértex pré-frontal. Cell hitps://doi.org/10.1016/j.cell.2007.03.015 (2007). BP Hays, SA et al. A tarefa de avaliagdo de bradicinesia: um método automatizado para medir a velocidade do membro anterior em roedores. J. Neurosci. Methods 214 , 52-61 (2013). 4s Tseng, CT, Brougher, J., Gaulding, SJ, Hassan, BS & Thorn, CA A estimulagdo do nervo ‘ago promove reorganizago cortical e reduz a ingestio de calorias dependente da tarefa em ratos machos c fémeas. Brain Res. 1748 , 66 (2020). 4ill Papeschi, R., Sourkes, TL & Youdim, MBH O efeito da ioimbina no metabolismo da serotonina do cérebro, comportamento motor e temperatura corporal do rato. EUR. J. Pharmacol. 15 , 318-326 (1971). 42 Rouot, B., Quennedey, MC & Schwartz, J. Characteristies of the [3H] -yohimbine binding on rat brain a2. Naunyn, Schmiedebergs. Arco. Pharmacol, 321 , 253-259 (1982) 48 Millan, MJ et al. Agdes agonistas e antagonistas da ioimbina em comparagio com fluparoxano nos receptores «2-adrenérgicos (AR) s, serotonina (5-HT) (1A), 5-HT (1B), 5-HT (ID) ¢ receptores da dopamina D2 e D3. Significado para a modulagao da transmissio monoaminérgica frontocortical. Sinapse https://doi.org/10.1002/(SICI) 1098- 2396(200002)35:2%3¢79::AID-SYN1%3e3.0,CO;2-X (2000). 444 Uhlén, S. et al. Ligagdo de [3H] RS79948-197 aos adrenoceptores a (2A) -, a (2B) - e a (2C) humanos, de rato, de cobaia e de porco. Comparag3o com MK912, RX821002, rauwolscine e ioimbina. EUR. J. Pharmacol. 6 , 66. hitps://doi.org/10.1016/S0014- 2999(97)01521-5 (1998). 45 hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 stat1571272021 16:18 A alvago local dos receptoresadrengios 026 necessiia para a plastcidade cortical moto induzida pla estmulago 4fume, SP et al. Avaliagdo em rato de RS-79948-197 como um ligante PET potencial para adrenoceptores a2 centrais. EUR. J. Pharmacol. 317 , 67-73 (1996). 46 Milligan, CM et al. [3H] -RS-79948-197, um radioligando de alta afinidade seletivo para subtipos de adrenoceptores «2. Ann, NY Acad. Sci. 812 , 176-177 (1997). 4. Ortega, JE, Ferndndez-Pastor, B., Callado, LF & Meana, JJ In vivo potentiation of reboxetine and citalopram effect on extracelular noradrenalina in rat brain by a2-adrenoceptor antagonism. EUR. Neuropsychopharmacol. 20 , 813-822 (2010). 488 Hosp, JA, Molina-Luna, K., Hertler, B., Atiemo, CO & Lufl, AR modulagdo dopami de mapas motores no cértex motor de rat (2009). : Um estudo in vivo. Neuroscience 159 , 692-700 4B Scullion, K. et al. Os receptores da serotonina 1A alteram a expresso das representagdes do movimento. J, Neurosci. 33 , 4988-4999 (2013). SH Reed, A. et al. A plasticidade do mapa cortical melhora o aprendizado, mas no & necessiria para melhorar o desempenho. Neuron https://doi.org/10.1016/j. neuron.20011.02.038 (2011). SIL Recanzone, GH, Merzenich, MM & Dinse, HR Expansio da representacao cortical de um campo especifico da pele no cértex somatossensorial primario por microestimulagao intracortical. Cereb, Cortex hitps://doi.org/10,1093/cercor/2.3.181 (1992), 2 Conner, JM, Culberson, A., Packowski, C., Chiba, AA & Tuszynski, MH Lesdes do sistema colinérgico do prosencéfalo basal prejudicam a aquisigdo de tarefas e abolem a plasticidade cortical associada ao aprendizado de habilidades motoras. Neuron https://doi.org/10.1016/S0896-6273(03)00288-5 (2003). SR Conner, JM, Kulezycki, M. & Tuszynski, MH Contribuigdes tinicas de projecdes colinérgicas distintas para a plasticidade cortical motora e aprendizagem. Cereb. Cortex hitps://doi.org/10.1093/cercor/bhq022 (2010). hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 saiat1571272021 16:18 A alvago local dos receptoresadrengicos 02 6 necessiia para a plastcidade cortical moto induzida pla estmulagio 54. $4 Doyon, J. & Benali, H. Reorganizacao e plasticidade no cérebro adulto durante a aprendizagem de habilidades motoras. Curr. Opinides Neurobiol. https://doi.org/10.1016/j.conb.2005.03.004 (2005). SH Molina-Luna, K., Hertler, B., Buitrago, MM & Luft, AR Motor learning transiently changes cortical somatotopy. Neuroimage hitps://doi.org/10.1016/j neuroimage.2007.11.018 (2008). 6 Monfils, MH, Plautz, EJ & Kleim, JA Em busca do engrama motor: a plasticidade do mapa motor como mecanismo de codificagaio da experiéneia motora. Neuroscientist 1, 471-483 (2005). SI. Hosp, JA & Luft, AR Plasticidade cortical durante aprendizagem motora e recuperago apés acidente vascular cerebral isquémico. Neural Plast. https://doi.org/10.1155/2011/871296 (2011). ‘BR Joy, MT & Carmichael, ST Encorajando um estado cerebral excitavel: mecanismos de reparo cerebral no derrame. Nat. Rev. Neurosci. https://doi.org/10.1038/s41583-020-00396-7 (2020), 59. Okabe, N. et al. A terapia de movimento induzido por restrigdo melhora a eficdcia do treinamento especifico da tarefa aps acidente vascular cerebral cortical grave, dependendo das projecdes corticospinais ipsilesionais. Exp. Neurol. https://doi.org/10.1016/j.expneurol.2018.04.006 (2018). @ Starke, K., Gijthert, M. e Kilbinger, H. Modulation of neurotransmitter release by presynaptic autoreceptors. Reviews 69 , 66 (1989). @iL Borland, MS et al. Plasticidade do mapa cortical em fungao da intensidade da estimulagao do nervo vago. Brain Stimul. 9 , 117-123 (2016). @ Huang, SY et al, A neuromodulagao pull-push de LTP e LTD permite escalonamento sinaptico induzido por experiéncia bidirecional no cértex visual. Neuron 73 , 497-510 (2012). 63 hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 s3iat1571272021 16:18 A alvago local dos receptoresadrengios 22 6 necessiia para a plascidade cortical moto induzida pla estmilagio @owicky, AV, Christofi, G. & Bindman, LJ Investigagao da modulagdo B-adrenérgica da transmisso sindptica e indugdo pés-sindptica de LTP associativo em neurdnios da camada V em fatias do cortex sensério-motor de rato. Neurosci. Lett. 137 , 270-273 (1992). 4 Salgado, H., Kohr, G. & Trevio, M. O tom noradrenérgico determina o controle dicotémico da plasticidade dependente do tempo do pico cortical. Sci. Rep. 2 , 66 (2012). @ Lim, EP, Dawe, GS & Jay, TM Ativagdo de beta- e alfa-2-adrenoceptores na amigdala basolateral tem efeitos opostos na potenciagao de longo prazo pré-frontal do hipocampo. Neurobiol. Aprender. Mem. 137 , 163-170 (2017). @ Sheets, PL et al. Expressio de HCN corticospinal-especifica no cértex motor de camundongo: integragao sinéptica dependente de Ih como um mecanismo de microcircuito candidato envolvido no controle motor. J. Neurophysiol. https://doi.org/10.1152/jn.00232.2011 (2011). 67 Inyushin, MU, Arencibia-Albite, F., Vazquez-Torres, R., Véle: Hernandez, ME & Jiménez~ Rivera, CA A ativago do receptor noradrenérgico alfa-2 inibe a corrente catidnica ativada por hiperpolarizagao (Ih) em neurdnios da regido ventral area tegmental. Neuroscience 167 , 287— 297 (2010). GR Won, J., Lee, PR & Oh, SB O agonista do adrenoceptor alfa 2 guanabenz inibe diretamente 0s canais modulados por nucleotideo ciclico (HCN) ativados por hiperpolarizagaio em neurénios do nucleo trigeminal mesencefalico. EUR. J. Pharmacol. 854 , 320-327 (2019). 69 » 69. Tsay, D., Dudman, JT & Siegelbaum, SA Os canais HCN1 restringem picos de Ca evocados sinapticamente em dendritos distais de neurénios piramidais CAL. Neuron https://doi.org/10.1016/j.neuron.2007.11.015 (2007) ‘7M Nolan, MF et al. Um papel comportamental para a integragdio dendritica: canais HCN1 restringem a meméria espacial e a plasticidade nas entradas para dendritos distais de neurdnios piramidais CAI. Cell hitps://doi.org/10.1016/j.cell.2004.11.020 (2004). hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 aiasona2021 15:18 A alivagdo local dos receptores adranérgicos a2 & necesséria para a plasicidad cortical motorainduzida pela estmulago 71. 71 Se, C. & Ej, M. A ativagao da noradrenalina de vias neurotréficas protege contra a toxicidade amiléide neuronal. J. Neurochem. 113 , 649-660 (2010). 72 McNamee, EN, Ryan, KM, Kilroy, D. & Connor, TJ A noradrenalina induz a expresso do receptor IL-Ira e IL-1 tipo II em eélulas gliais primarias e protege contra a neurotoxicidade induzida por IL-1B. EUR. J. Pharmacol. 626 , 219-228 (2010). TR Culmsee, C., Semkova, I. & Krieglstein, J. NGF medeia o efeito neuroprotetor do agonista do adrenoceptor B2 clenbuterol in vitro e in vivo: evidéncias de um estudo antisense de NGF. Neurochem. Int. 35 (1), 47-57 (1999). ‘TA Farrand, AQ et al. Os efeitos da estimulagao do nervo vago so mediados em parte por TrkB em um modelo de doenga de Parkinson. Behav. Brain Res. 373 , 1120-80 (2019). TH Farrand, AQ et al. Os efeitos diferenciais dos paradigmas de estimulagao do nervo vago guiam o desenvolvimento clinico da doenga de Parkinson. Brain Stimul. 13 , 1323-1332 (2020). Ti Hays, SA Reforgando as terapias de reabilitagdo com estimulagao do nervo vago. Neurotherapeutics 13 , 66 (2016). ‘TM. Engenheiro, ND et al. Reverter a atividade neural patolégica usando plasticidade direcionada. Nature 470 , 101-106 (2011). TAR Borland, MS et al. © emparelhamento da estimulagao do nervo vago com tons impulsiona a plasticidade ao longo da via auditiva. J. Neurophysiol. 122 , 659-671 (2019). 7 Shetake, JA, Engineer, ND, Vrana, WA, Wolf, JT & Kilgard, MP O emparelhamento dos trens de tons com a estimulago do nervo vago induz plasticidade temporal no cértex auditivo. Exp. Neurol. 233 , 342-349 (2012). ‘{€N Engenheiro, CT, Engenheiro, ND, Riley, JR, Seale, JD & Kilgard, MP O emparelhamento dos sons da fala com a estimulagdo do nervo vago leva 4 plasticidade cortical especifica do estimulo. Brain Stimul. 8 , 637-644 (2015). hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 36/411571272021 16:18 A alvago local dos receptoresadrengios 02 6 necessiia para a plastcidae coca moto induzida pla estmuagio $8IL Hays, SA ef al. O tempo e a quantidade de estimulagao do nervo vago durante © treinamento de reabilitagdo afetam a recuperago pos-AVC da forga do membro anterior. NeuroReport https://doi.org/10.1097/WNR.0000000000000154 (2014). {®2 Clark, KB, Krahl, SE, Smith, DC & Jensen, RA A estimulagdo vagal unilateral pés- treinamento melhora o desempenho de retengo no rato. Neurobiol. Aprender. Mem. 63 , 213~ 216 (1995). {BR Clark, KB et al. A estimulagdo elétrica pés-treinamento de aferentes vagais com inativagio eferente vagal concomitante aumenta os processos de armazenamento de meméria no rato. Neurobiol. Aprender. Mem. 70 , 364-373 (1998). 8H Clark, KB, Naritoku, DK, Smith, DC, Browning, RA & Jensen, RA Meméria de reconhecimento aprimorada apés estimulagdo do nervo vago em sujeitos humanos. Nat. Neurosci, 2 , 94-98 (1999). {5 Ghacibeh, GA, Shenker, JI, Shenal, B., Uthman, BM & Heilman, KM A influéncia da estimulagao do nervo vago na meméria. Cogn. Behav. Neurol. 19 , 119-122 (2006). {86 Zuo, Y., Smith, DC & Jensen, RA Estimulagdo do nervo vago potencia a LTP do hipocampo em ratos que se movem livremente. Physiol. Behav, 90 , 583-589 (2007). {871 Ura, H. et al. A estimulagao do nervo vago induziu aumento de longa duragao da transmissao sindptica e diminuig&o da descarga de células granulares no giro denteado do hipocampo de ratos anestesiados com uretano. Brain Res. 1492, 63-71 (2013) {GR Biggio, F. ef al. A estimulagdo cronica do nervo vago induz plasticidade neuronal no hipocampo de rato. Int. J. Neuropsychopharmacol, 12, 1209 (2009). {8D Revesz, D., Tjernstrom, M., Ben-Menachem, E, & Thorlin, T. Effects of vago nervestimulation on rat hippocampal progenitor proliferation. Exp. Neurol. 214 , 259-265 (2008). 90 hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 3618411571272021 16:18 A atvago local dos receptoresadrengios 02 6 necessiia para a plascidade coca moto induzida pla estmuagio O'Leary, OF ef al. O nervo vago modula a expresso do BDNF e a neurogénese no hipocampo. EUR. Neuropsychopharmacol. 28 , 307-316 (2018). IL Pefia, DF, Engineer, ND & McIntyre, CK Remissio répida da expressio do medo condicionado com treinamento de extingdio emparelhado com estimulagao do nervo vago. Biol. Psychiatry hitps://doi.org/10.1016/j.biopsych.2012.10.021 (2013). WW Pefia, DF et al. A estimulagao do nervo vago aumenta a exting%io do medo condicionado & modula a plasticidade na via do cértex pré-frontal ventromedial para a amigdala. Frente. Behav. Neurosci. bttps://doi.org/10.3389/fnbeh.2014.00327 (2014). GR Childs, JE, DeLeon, J., Nickel, E. & Kroener, estimulagdo do nervo S. Vagus reduz a procura de cocaina e altera a plasticidade na rede de extingdo. Aprender. Mem. https://doi.org/10.1101/lm.043539.116 (2017). 4 Khodaparast, N. et al. A estimulaco do nervo vago durante o treinamento de reabilitagio melhora a forga do membro anterior apés acidente vascular cerebral isquémico. Neurobiol. Dis. 60 , 66 (2013) 9 Pocock, SJ & Simon, R. Atribuigdo de tratamento sequencial com equilibrio para fatores de prognéstico no ensaio clinico controlado, Biometrics 31 , 103 (1975). 86 Khodaparast, N. ef al. A estimulagio do nervo vago fornecida durante a reabilitagdo motora melhora a recuperag’io em um modelo de AVC em ratos, Neurorehabil, Neural Repair 28 , 698-706 (2014). OM. Chil s, JE, Alvarez-Dieppa, AC, MeIntyre, CK & Kroener, estimulagao do nervo S. Vagus como uma ferramenta para induzir plasticidade em vias relevantes para a aprendizagem de extingdo. J. Vis. Exp. 2015 , 66 (2015). BB Rios, M. et al. Protocolo para construgdo de eletrodos de manguito de estimulagio nervosa de rato. Métodos Protoc. 2 , 19 (2019). 99 hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 s7iat1571272021 16:18 A alvago local dos receptoresadrengios 02 6 necessiia para a plastcidade coca motor induzida pla estmulagio Banchez, CA, Brougher, J., Rahebi, KC & Thorn, CA Preparago de eletrodos de estimulago de nervo periférico para implantagio crénica em ratos. J. Vis. Exp. https://doi.org/10.3791/61128 (2020). IHN Receptores sensoriais de pintura, AS Vagal e seus efeitos reflexos. Physiol. Rev. 53, 159- 227 (1973) OIL Li, BM & Mei, ZT Déficit de resposta retardada induzido pela injegao local do antagonista a2-adrenérgico ioimbina no cértex pré-frontal dorsolateral em macacos adultos jovens. Behav. Neural Biol. 62 , 134-139 (1994). IM Caetano, MS et al. Controle noradrenérgico da perseveragao do erro no cértex pré-frontal medial. Frente. Integr. Neurosci. https://doi.org/10.3389/fnint.2012.00125 (2012). IR Elliott, AE & Packard, MG A infusio de drogas ansiogénicas na amigdala antes da recuperagao influencia os ratos em relagdo ao uso da meméria de habito. Neurobiol. Aprender. Mem. 90 , 616-623 (2008). MOH Wingard, JC & Packard, MG A amigdala e a modulagao emocional da competigao entre a meméria cognitiva e a meméria habitual. Behav. Brain Res. 193 , 126-131 (2008). 10K Horrillo, I., Ortega, JE, Diez-Alarcia, R., Urigiien, L. & Meana, JJ A fluoxetina crénica reverte os efeitos do tratamento crénico com corticosterona em a2-adrenoceptores no cértex frontal do rato, mas nao no locus coeruleus. Neuropharmacology https://doi.org/10.1016/j.neuropharm,2019.107731 (2019). 1% Wang, B., Wang, Y., Wu, Q., Huang, H. & Li, S. Effects of a2A adrenoceptors on norepineftina secre¢ao do locus coeruleus durante a depressio induzida por estresse crénico. Frente. Neurosci. 66 , 243 (2017). WT, Mckinney, W. Data Structures for Statistical Computing in Python (2010). IMGR Virtanen, P. et al. SciPy 10: Algoritmos fundamentais para computacdo cientifica em Python. Nat. Methods 17 , 261-272 (2020). hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 36iat15/12/2021 15:18 Aalivago acl dos recoptores adronérgcos 2 6 necessria para a plasildade cortical matora induzida pela estimulago MHP Scabold, S. & Perktold, J. Statsmodels: Economometrie and Statistical Modeling with Python Proceedings of the 9th Python in Science Conference hitp://statsmodels.sourceforge.net/ (2010). Reconhecimentos Este estudo foi financiado pela University of Texas at Dallas e pelo University of Texas Board of Regents. Agradecemos a Jackson Brougher, Marghi Jani, Camilo Sanchez ¢ Matt Buell por sua assisténcia técnica, e Kiree Gove pela arte. Informagao sobre o autor Afiliagées 1, school of Behavioral and Brain Scies University of Texas at Dallas, 800 W, Campbell Rd, Richardson, TX, 75080, BUA Ching-Te Teng, Salomon J Gaulding, Canice te, Dancal Catherine A. Thorn Contribuigées CAT e CTT desenharam o estudo, analisaram os dados ¢ prepararam o manuscrito. CTT, SJG CLED realizaram os experimentos. autor correspondente Correspondéncia para Catherine A. Thom . DeclaragGées de ética Interesses competitivos Os autores declaram nao haver interesses conflitantes. hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 91sonarz02t 15:18 ‘A alivagdo local dos receptores adranérgicos a2 & necessétia para a plasticidade cortical motorainduzida pela estimulago Informagao adicional Nota do editor A Springer Nature permanece neutra em relago a reivindicagdes jurisdicionais em mapas publicados ¢ afiliagdes institucionais. Informagao suplementar Informagao suplementar. Direitos e permissées Acesso aberto Este artigo esta licenciado sob uma Licenga Internacional Creative Commons Atribuigdo 4.0, que permite o uso, compartilhamento, adaptagao, distribuig&o ¢ reprodugdo em qualquer meio ou formato, desde que vocé dé o devido crédito ao (s) autor (es) original (is) e a fonte, fornecer um link para a licenga Creative Commons e indicar se foram feitas alteragdes. As imagens ou outro material de terceiros neste artigo esto incluidos na licenga Creative Commons do artigo, a menos que indicado de outra forma em uma linha de crédito para o material. Se o material nfo estiver incluido na licenga Creative Commons do artigo e seu uso pretendido nio for permitido por regulamentagio legal ou exceder o uso permitido, vocé precisard obter permissio diretamente do detentor dos direitos autorais. Para ver uma cépia desta licenga, visitehttp://creativecommons.org/licenses/by/4.0/ . Reimpressées e permissdes Sobre este artigo fe este artigo hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 4011571272021 16:18 A alvago local dos receptoresadrengios 22 6 necessiia para a plascidade cortical moto induzida pla estmilagio ‘Tseng, CT., Gaulding, SJ, Dancel, CLE et al. A ativagao local dos receptores adrenérgicos a2 necesséria para a plasticidade cortical motora induzida pela estimulagdo do nervo vago. Sci Rep 11, 21645 (2021). https://doi.org/10.1038/s41598-021-00976-2 Recebido: 29 de abril de 2021 Aceitaram: 20 de outubro de 2021 Publicados: 04 de novembro de 2021 DOI: https://doi.org/10.1038/s41598-021-00976-2 Compartilhe este artigo Qualquer pessoa com quem vocé compartilhar o link a seguir poder ler este contetdo: (Obter link compartihavel Fornecido pela iniciativa de compartilhamento de contetido Springer Nature SharedIt ASSUNTOS corer cortex motor Relatérios cientificos ( Sci Rep ) ISSN 2045-2322 (online) © 2021 Springer Nature Limited hitps ww nature comvartclesis41598.021-00976.2 aan