ROTEIRO DE ESTUDO – PURIFICAÇÃO DE PROTEÍNAS

1. O que representa o pl de cada proteína?

O pl ou ponto isoelétrico de cada proteína representa o valor de pH que essa

proteína específica possui um número de cargas positivas equivalente ao número
de cargas negativas, ou seja, é o pH no qual essa biomolécula é eletricamente
neutra.

2. Qual o princípio em que se baseia a técnica de precipitação conhecida

como “salting out”?

“Salting out” é uma etapa do fracionamento da purificação de proteínas, tal

processo ocorre devido a alteração na solubilidade de algumas proteínas
provocada pela presença de alguns sais, já que esses terão uma interação com
as moléculas de água e deixarão menos água ligadas às proteínas.

3. Qual a razão de proceder a uma diálise das proteínas precipitadas?

Caso a proteína de interesse seja uma das que estão ligadas aos sais, o
processo da diálise é responsável por separar as proteínas do soluto que foi
utilizado, geralmente, esse soluto é o sulfato de amônio.

4. Qual o princípio funcional das técnicas de cromatografia de troca iônica,

de exclusão (ou filtração em gel) e afinidade?

Troca iônica: depende da diferença das cargas elétricas finais de cada proteína
em um determinado pH, as proteínas que possuírem a mesma carga que a
resina de troca iônica subirão primeiro na coluna, já as de sinal oposto depois.

Exclusão (ou filtração em gel): depende da diferença de tamanho das

proteínas, as maiores emergem primeiro e as menores depois.

Afinidade: é baseada na afinidade de ligação que aquela proteína possui, nesse

caso o ligante fica fixo na coluna e as proteínas que possuírem afinidade com
esse ligante ficarão ligadas a eles.

5. Uma coluna de troca iônica – catiônica – tem qual tipo de íon em seu
“braço”? Ela se presta a prender que tipo de íon? E uma coluna de troca
aniônica? E para qual tipo de íon se destina?
Colunas de troca catiônica possuem ânions, que se destinam a prender cátions,
enquanto a aniônica possui cátions para prender os ânions.

6. Qual o princípio de separação da eletroforese em condições

desnaturantes com SDS em gel de poliacrilamida?

O princípio é a massa molecular, já que o SDS desnatura parcialmente as

proteínas.

7. Na técnica de eletroforese em condições nativas e distribuição de pH ao

longo do gel utilizando anfóteros – em que ponto as proteínas devem
parar? Justifique

As proteínas devem ser separadas por tamanho, sendo assim, elas param no
ponto em que o pH se iguala ao pl.