HIBRIDAÇÃO NORTHERN

Esta técnica envolvem as seguintes etapas:

Etapa 1:

Misturas de moléculas de RNA de cadeia simples (Hibridação Northern) são separadas por
electroforese com base na dimensão.

Etapa 2:

As moléculas de RNA, são transferidos para membranas de nitrocelulose ou de nylon.

Etapa 3:

A membrana, contendo os ácidos nucleicos ligados, é cuidadosamente removida do gel.

Etapa 4:

A membrana é depois colocada num saco de plástico selado ou numa garrafa de hibridação,
juntamente com a solução de hibridação (uma solução salina tamponada) e a sonda de RNA,
radioactivamente marcada e na forma de cadeia simple, por um período de tempo prolongado
em condições que favorecem a hibridação.

Etapa 5:

A membrana é em seguida removida do saco ou da garrafa de hibridação e lavada

vigorosamente, de modo que apenas as moléculas de sonda que hibridaram com o RNA
imobilizado na membrana permanecem ligadas. Após auto-radiografia, o RNA que hibridou
com a sonda marcada é visualizado como uma banda.

A hibridação Northern permite:

• Detectar a presença de mRNA específico

• Estimar a dimensão do mRNA, relativamente a RNAs marcadores

• Estimar a quantidade relativa do mRNA (por comparação do sinal de hibridação com o de

outros genes que são expressos em níveis conhecidos).

• Detectar a presença de transcritos diferentes de um gene específico (splicing alternativo,

promotores

Para além da hibridação Northern, as técnicas de RT-PCR e alternativos). hibridação in situ

permitem analisar em que tecidos ou condições experimentais os genes se expressam.