S| ESCOLA TECNICA HEMATOLOGIA | LOGIN: SENHA: ALUNO(A STURMHEMATOLOGIA 1 AULA 4 A hematologia é uma area cientifica que se dedica ao estudo da fisiologia e patologia do sangue e seus componentes, além do estudo da medula éssea e dos ganglios linfaticos. Para comecar os estudos hematolégicos, deve-se entender a composicao do sangue total. O sangue total é dividido em duas porsées: 55% Parte liquida: plasma (Composto 92% de agua e 3% ao toa 8% de sais minerais, horménios, eletrdlitos, vitaminais) 45% Parte sdlida: Elementos figurados (Eritrécitos, wom Leucécitos e Plaquetas) GES eo toto ‘Algumas caracteristicas do sangue: corresponde a 8% do peso corporal de um adulto, odor de ferro, sua espessura deve ser equilibrada devido sua constituicao (viscosidade). Vale ressaltar que quando falamos de leucécitos, estamos falando de um grupo de células, que sao: neutréfilos, eosinéfilos, baséfilos, monécitos e linfécitos. Além de entender sua constituicao, é necessario entender as funcées do sangue. O sangue é considerado um tecido conjuntivo especializado que circula em um sistema fechado de canais, representado pelo coracdo artérias, vasos capilares e veias. Por"caminhar" por todo 0 organismo, o sangue possui diversas funcdes, como: + Transporte de nutrientes: Transporta nutrientes a todas as células e retira produtos t6xicos resultantes do metabolismo. + Transporte de gases: Complexo Oxiemoglobina e Carboxiemoglobina. + Distribuigao de calor: Distribui calor, mantendo constante a temperatura do corpo. + Defesa: Atua no processo de defesa, carregando anticorpo e células que destroem agentes invasores e ajuda na cicatrizacdo e recuperacao de tecidos lesionados. + Equilibrio acido/basico: Auxilia na manutengao do equilibrio 4cido/basico e osmético dos fluidos corporais. + Transporte de horménios: Poss lta bom funcionamento das fungdes do corpo Na hematologia, é importante entender o processo de formacao das células, sua morfologia e suas fungées especificas no nosso orga 4. Hematopoese Hematopoese ¢ 0 processo de produgao e maturacao das células sanguineas. Este proceso ocorre em érgaos chamados hematopoiéticos, mas na fase adulta ocorre principalmente na medula sea. Durante a gestagao, as células do feto so produzidas no saco vitelino até o segundo més. A partir do segundo més até ao sétimo més, 0 processo de produgao de células sanguineas passa a acontecer no aco e no figado. Depois disso, a medula éssea (MO) passa a assumir gradativamente essa funcao. Medula éssea: a medula dssea com atividade hematopoiética é conhecida como medula vermelha, enquanto o restante dos ossos possui medula dssea amarela, preenchida com tecido gorduroso. Portanto, a medula éssea vermelha é um tecido funcional que tem capacidade de produzir Células sanguineas a partir de alguns estimulos. A]Nas crianas, praticamente todos os ossos possuem medula éssea vermelha, mas nos adultos, essa quantidade se limita a alguns locais especificos. Todas as células sanguineas sao originadas a partir de uma célula tronco pluripotente (Stem cell). Essas células tronco hematopoiéticas possuem grande capacidade de proliferacao. ‘Amedula éssea recebe estimulos especificos para produzir e diferenciar determinado tipo celular, dependendo da necessidade do organismo. Milhares de células sanguineas sao produzidas diariamente e esse processo precisa ser regulado por alguns fatores de crescimento que auxiliam estimulam a maturacao das células envolvidas. ‘A producao de cada linhagem recebe um nome especifico. Hematopoese é 0 termo usado para 0 processo geral, mas a producao de linfécitos é chamada de linfopoiese. Produgao de Plaquetas (ou Trombocitose) é chamada de Trombopoiese, Producao de granulécitos é chamada de granulopoiese; de monécitos, chamada de monopoiese e Eritrécitos (hemacias), chamada de Eritropoiese. i fl ii = ‘Chas preorsors a) Série Vermelha Quando falamos de série vermelha, nos referimos as hemacias e seu contetido (hemoglobina). As hemacias também sao conhecidas como eritrécitos ou glébulos vermelhos. Tem como funcao o transporte de gases. ‘As hemécias sao consideradas células anucleadas (ou “nao célula’), pois perdem o nticleo e algumas organelas, como é 0 caso das mitocéndrias em seu processo de maturagao. Sao flexiveis e em forma arredondada com formato de disco biconcavo, no qual a borda é mais espessa e o centro mais fino, com um halo mais claro. (|S40 produzidas na medula éssea vermelha em um processo chamado ERITROPOIESE. E COMO OCORRE A ERITROPOIESE? Para estimular a medula dssea vermelha a produzir hemacias, nosso organismo produz um horménio chamado eritropoetina (EPO). Este horménio ¢ sintetizado 90% pelos rins e 10% pelo figado e tem como principal fungao controlar este processo que agora conhecemos como eritropoiese. Esse horménio nao possuo reservas e é secretado de acordo com a necessidade. Os rins servem como um "sensor" de oxigénio. Quando a tensao de 02 diminui, ha um estimulo para producao de EPO e esta por sua vez, estimula o comeco da eritropoiese para que a quantidade de hemacias aumente e os niveis de oxigénio normalize no organismo. A partir da produgao deste horménio, ocorre o estimulo para que a medula éssea vermelha comece o processo de maturacao das hemacias, que além da eritropoetina precisa de outros produtos, como 0 ferto (Fe). O Fe é essencial para a producao do contetido interno das hemacias, conhecido como hemoglobina. Veremos mais a frente que a hemoglo! portante funcao em nosso organismo. Sem Fe, no ha producao adequada de hemoglobina. Eritrot Proeritroblasto Reticulbcito Eriteoe @@@Ger%*e Bana +t FP Hemoglobin Inicio da produgso Caracteristicas morfolégicas de cada fase celular da eritropoiese: + Proeritroblasto: Nucleo tem cromatina pouco condensada e é volumoso, citoplasma azul escuro. Presenca de nucléolos. Auséncia de hemoglobina. + Eritroblasto baséfilo: Inicio da produgao da Hemoglobina com a presenca de Fe. Ainda apresenta 0 citoplasma azulado e nticleo com a cromatina um pouco mais condensada. + Eritroblasto policromatico: Recebem esse nome porque o citoplasma comega a ter a colorado avermelhada pelo aumento de produgao de hemoglobina, mas nao deixou de ser azulado, tornando-o "bicolor", + Eritroblasto Ortocromatico: Citoplasma com cor vermelha e nticleo bem condensado e picnético. Célula cada vez menor. Nesta fase maturacional, ocorre a expulsao do nticleo, + Reticuldcito: célula jovem, que ainda nao se maturou em eritrécito. Nao possui mais nticleo, mas possui ainda vestigios de RNA no citoplasma. + Hemacia: Célula anucleada, sem RNA presente e rica em hemoglobina. 74gure 3: + Pomel, 2 Cac tao, 2 Ceo ‘om ois cer ean coscronc Figura Important saber que pacientes com problemas renais tendem a ser anémicos por conta da deficiéncia de produgdo de EPO e por isso precisam repor a mesma. Este proceso ocorre de 7-10 dias. Uma hemacia madura circula em torno de 120 dias no sangue periférico de um individuo. b) Hemoglobina A hemoglobina é uma proteina conjugada. Constituida 96% de uma albumina chamada globina e 4% de um grupamento prostético chamado heme. £ uma substancia corante da hemacia, cuja sua principal funcao é transportar oxigénio (02) dos pulmées para os tecidos e gas carbénio (CO,) dos tecidos para os pulmées. Chamamos esse transporte de Complexo Oxiemoglobina e Carboxiemoglobina. Uma hemoglobina é composta por 4 cadeias de globina associadas a um radical heme. Todas as cadeias (beta, delta e gama) obrigatoriamente formam hemoglobina com a globina do tipo alfa. 02 B = Hemoglobina A (96 - 98%) 0282 = Hemoglobina Ao (2,3 - 3,8%) 1272 = Hemoglobina F (0 - 1%) c) Absorgao de Ferro (Fe) O Ferro (Fe) é basicamente proveniente da alimentacao. Mas existe dois tipos de ferro fornecido pela dieta: 0 Ferro nao-heme (ou Férrico/Fe+++), proveniente de cereais, vegetais, carne vermelha. O Ferro Heme (ou Ferroso/Fe++), proveniente de origem animal. A absorcao do Fe ocorre quase inteiramente no duodeno, porém a absorcao ocorre apenas na forma ferrosa (Fe+-+), visto que a maior parte dos alimentos esta na forma férrica (Fe+++). Com ingestao de vitamina c, ocorre a conversao do Fe Férrico para Ferroso, proporcionando a absorcao adequada de Fe, que é importantissimo para produgao de hemoglobina. d) Hemoglobina e transporte de gases ‘Ahemoglobina tem uma afinidade natural por oxigénio, gracas a essa afinidade ocorre o transporte de oxigénio advindo os pulmées para os tecidos. A pressao de oxigénio é necessaria para que ocorra liberagao do oxigénio nos tecidos. A transferéncia se torna cada vez mais lenta 4 medida que a presséo atmosférica diminui, mas 0 organismo responde comecando a produzir quantidades maiores de uma enzima chamada difosfoglicerato (2,3-DPG). A enzima tem a capacidade de enfraquecer a ligacao oxigénio-hemoglobina e permite que o oxigénio saia com menor pressdo para os tecidos. Quanto mais elevada for a situacao de hipoxia (menor pressao de oxigénio), mais 2,3-DPG sera produzido, mantendo 0 processo de transferéncia de oxigénio para os tecidos. Portanto, essa enzima tem como fungao a quebra de afinidade momentanea da hemoglobina por oxigénio, facilitando assim a liberacao de oxigénio para os tecidos onde ha baixa pressao do mesmo. i)2. Hemocatarese O ciclo vital das hemacias é chamado de Hemocatarese. Neste proceso, entende-se o que acontece com as hemdcias “envelhecidas” apés cumprir seu ciclo de 120 dias e como os seus produtos podem ser reabsorvidos eu descartados pelo organismo. ‘Apés 120 dias no organismos, as hemacias envelhecidas sio“sequestradas” pelo baco e ld so destruidas por fagocitose pelos macréfagos. Neste momento, os produtos que compdem as hemécias so separados. Seu contetido interno, a hemoglobina, é separada em heme e globina. Globina é a parte composta por proteinas. A membrana externa da hemacia que é composta de aminoacidos junto com a globina serao aproveitados em outros processos metabélicos do organismo. Heme sera dividida em duas partes. A primeira 6 0 Ferro (Fe). Fe sera transportado pela proteina transportadora de ferro chamada transferrina até a medula éssea vermelha para producao de nova hemoglobina. A segunda parte é a protoporfirina, que é um composto quimico em formato de anel. A propotorfirina sofre conversao e torna-se biliverdina, que originara a bilirrubina que migrara para o figado. No figado, bilirrubina se associara com 0 Acido glicurénico, tornando-se agora um produto Unico chamado bilirrubina conjugada. Bilirrubina conjugada sera eliminada na urina na forma de urobilinogénio e/ou nas fezes na forma de estercobilinogénio. Ciclo Vital das Hemacias Hemocaterese 1 SANGUE IACROFAGO MEDULA OSSEA i 120 dias ~, Se Keron Or / aN rma 4 ee eee cans ceased ‘UROBILINOGENI Hemograma - Parte 4: O hemograma é um dos exames mais comuns e mais importantes de uma rotina laboratorial. A par dele, conseguimos entender a condicao clinica de um paciente e decidir a melhor conduta. Devemos sempre considerar outros exames complementares para auxiliar 0 diagnéstico. Mas para comecar os estudos, precisamos entender os resultados que sdo apresentados no hemograma, como orientamos o paciente e quais 0s erros pré-analiticos que podem impactar nos resultados. |.Eritrograma: Neste primeiro momento estudaremos apenas indices apresentados no Eritrograma, que avalia a série vermelha de forma quantitativa e qualitativa. E no eritrograma que sabemos se o paciente apresenta um quadro anémico, por exemplo. Com 0 complemento dos indices hematimeétricos, pode-se chegar ao diagnéstico com mais facilidade. Esses indices veremos mais a frente. a. Contagem de Hemacias: 64Nos mostra a quantidade de hemécias circulantes em um determinado volume de sangue. A contagem de hemacias atualmente é feita de maneira automatizada com equipamentos hematolégicos. b. Dosagem de Referéncia Homens 3,00 = 0.5 (ilhSes/mm") ‘Mulheres 5 (nilles/mm?) Criangas 6 (millsbes/mm") ‘Nascimento 0 (millies/mm?) Hemoglobina Dosagem de hemoglobina (Hb) nos mostra se o paciente é anémico ou nao. A definicao de anemia é& diminuicao de hemoglobina circulante. Se a hemoglobina estiver abaixo do normal, o individuo esta anémico. Referéncia Homens 15,0= 2,0 @/aL) Mulheres 13,5 1,5 @/aL) Criangas 12,515 @aL) ‘Nascimento 18,02 4,0 (g/dL) c. Hematécrito Hematécrito (Ht) é a porcentagem de hemicias referente ao sangue total. Mas 0 que 60 sangue total? E 0 sangue completo, ou seja, plasma e a parte dos elementos figurados. No organismo, eles circulam em forma de sangue total, mas na rotina laboratorial, podemos separd-los, para assim avalia-los de forma individual. Quando utilizamos o sangue total, ele equivale a 100%. Sabemos que o plasma corresponde em torno de 55% desta totalidade, além da porcentagem de leucécitos, plaquetas e hemacias. A porcentagem de hemacias, chamamos de hematocrito. Se o hematécrito de um individuo é 45%, isso significa que 45% do sangue total deste individuo é composto por hemacias e os outros 55% & composto por plasma, leucécitos e plaquetas. Refergncia omens Mulheres Criangas @-6 anos) ‘Nascimento = 15% + Orientagées ao paciente: Nao necessita de jejum prévio e nem resguardo alimentar e/ou social. + Erros pré-analiticos: Erros de identificacao da amostra do paciente. O garroteamento para a coleta venosa nao deve ultrapassar de um minuto, evitando-se congestao. local e hemoconcentracao. Utilizar sempre material descartavel (lancetas, agulhas, seringas). 65Os esfregacos em laminas devem ser feitos logo apés a coleta, evitando-se a coagulagao do material ou a aco dos anticoagulantes sobre as células. Quando o material é colhido com anticoagulante, a homogeneizacao do mesmo deve ser delicada, evitando-se a lise das células. Conservacao do sangue coletado de maneira adequada, tempo de anilise e utilizagao de tubo adequado interferem no resultado. Exerc s de fixagao: 4. Qual a composicao do sangue total? 2. Quais as funcdes da hemoglobina? » - Qual a fungdo da Eritropoetina? 4. Descreva as fungées do tecido sanguineo, a . Cite os principais erros pré-analiticos quando falamos de hemograma. it}AULA 2: INDICES HEMATIMETRICOS Os indices hematimétricos nos auxiliam na classificacdo das anemias, pois identificam o volume (tamanho) médio das hemacias (VCM), 0 contetido (quantidade) de hemoglobina média dentro das hemdcias (HCM) e a concentragio (relacao volume x quantidade) média de hemoglobina dentro das hemicias (CHCM). Além de nos permitir avaliar a populacao de hemacias, se esta homogénea ou heterogénea (RDW). 4. Volume Corpuscular Médio (VCM) Também conhecido como Volume Referéncia Globular Médio (VGM). Avalia o | | Normocitica 80 - 100 fL tamanho médio das hemécias. E iacrocinca time | REIN BO expresso em fentolitros (L), | Macrocitica > 1007 hematocrito VCM=—————. x10 hemacias 2. Hemoglobina Corpuscular Média (HCM) Também ——conhecido como a Hemoglobina Globular Média (HGM). Normocrémica | 32376 Avalia a quantidade média de | an ‘hemoglobina dentro de cada hemacia. E expresso em picograma (pg) e reflete hemoglobina coloracdo das hemécias. HCM= emogionea, x10 hemacias 3. Concentragao de Hemoglobina Corpuscular Média (CHCM) Também conhecida como Concentracao de Hemoglobina Globular Média (CHGM). Permite avaliar o grau de concentragao de hemoglobina no eritrécito de acordo com o hematécrito. O CHCM também pode indicar quando a qualidade da amostra ndo é boa, por exemplo, de algum erro pré-andlitico (coleta inadequada, hemélise, armazenamento inadequado). E expresso em g/dL e reflete coloragao das hem cias. Referéncia Normocrémica cHcmsnemaglobina x100 ~hematdcrito ipocrémica )4. Indice de Aniso ose Eritrocitaria (RDW) Anisocitose € 0 termo utilizado quando Reterénc uma populacéo celular apresenta uma grande oscilacio de tamanho entre si. Ou seja, existem células muito grandes, ‘Anisocitose | > 146% | médas © muito pequenas em uma mesma populacéo. Expresso em porcentagem, Normocitose | 11,5% a 14,5% Todos esses indices auxiliam na avaliacao e no diagnéstico de anemias e so fundamentais para 0 hemograma. ESFREGACGO SANGUINEO Quando falamos de esfregaco, falamos de amostra disposta em lamina destinada a andlise microscépica. Temos varios tipos de esfregacos, como bacteriolégico, vaginal e sanguineo. Oesfregaco de sangue, também conhecido como distensao sanguinea ou extensao sanguinea, é um teste realizado em hematologia para contagem e a identificacao de anormalidades nas células do sangue. O teste consiste na extensao de uma fina camada de sangue sobre uma lamina de microscopia que, apés corada, é analisada em microscépio. O esfregaco sanguineo geralmente é quando solicitado o hemograma ao paciente. Seu principal objetivo é analisar a morfologia das células, fornece informacées sobre a estimativa do numero de leucécitos, investigar problemas hematolégicos, distuirbios encontrados no sague e eventualmente parasitas. (Os materiais necessarios para confecco e an: + Laminas para microscopia; + Sangue total a ser analisados; + Lamina distensora; + Corantes hematolégicos; + Microscépico éptico; + EPIs. lise de um esfregaco sanguineo sao: it)Apoiar a lamina de microscopia, jé com a identificaco do paciente, sobre superficie limpa. Certificar- se de que a lamina tem boa qualidade e nao esta suja ou possui vestigios de gordura, 0 que pode prejudicar o teste. Colocar uma pequena gota de sangue proxima a uma das extremidades da lamina. Com o auxilio de outra lamina, colocar a gota de sangue em contato com a sua borda. Para isso, a lamina extensora deve fazer um movimento para tras tocando a gotacom o dorso em um angulo de 45°. O sangue da gota ira se espalhar pela borda da lamina extensora por capilaridade. A lamina deve entao deslizar suave e uniformemente sobre a outra, em direc’o oposta a extremidade em que a gota de sangue esta. O sangue ser “puxado” pela lamina. i)Depois de completamente estendido, 0 sangue forma uma pelicula sobre alémina devidro | _ Deve-se deixar que o esfregaco seque sem nenhuma interferéncia. ‘Seguir para 0 passo de coloracao. —_— Fatores que influenciam na qualidade * Velocidade e pressao E necessario esfregar uma lamina sobre a outra rapidamente, antes que o sangue seque ou coagule. Uma pressao excessiva ou qualquer movimento de parada durante esse processo pode comprometer 0 esfregaco. + Tamanho da gota de sangue Uma pequena gota de sangue (10-15 iL) é 0 suficiente para preparar uma distensdo com comprimento adequado; uma gota grande pode fazer com que a distenso se estenda além do comprimento da lamina. + Angulo E importante lembrar também que a espessura da pelicula é determinada, em grande parte, pelo Angulo formado entre as laminas na extensao da gota de sangue. Angulos maiores que 45°, por exemplo, produzem extensées espessas e curtas, dificultando posteriormente a visualizacao das células; Angulo menor que 30° a distensao fica mais fina + Hematécrito Aviscosidade (hematécrito) do sangue, também ird afetar a distensdo. O sangue de um paciente com anemia tera uma menor viscosidade e a distensao ficar4 muito fina se o angulo nao for aumentado. O oposto também é verdadeiro no caso de um paciente com policitemia.Os analisadores hematolégicos fornecem informacées qualitativas na forma de“FLAGS’, ou alarmes, que alertam o analista clinico para a presenga de possiveis resultados erréneos devido a variaveis interferentes: + Presenca de células anormais; + Grumos plaquetérios; + Alteragdes de série vermelha ou branca; + Alteracao dos indices hematimétricos. Apenas amostras com resultados acima ou abaixo dos valores de referéncia e/ou com a presenca de FLAGS, precisam ser revisadas microscopicamente. ERROS MAIS COMUNS NA CONFECCAO DO ESFREGACO SANGUINEO tp a on A B Cc D E F G H A bocda irregular da lamina extensora E- Gota de sangue concentrada no centro da limina: B- pausas na hora de mover a lamina extensora; _F = sujera ou gordura na limina ou amostralipémica C- movimento muito répido: G - Pressio desigual na limina extensor D - cota de sangue muito pequena H- Demora na confeccio do esfregaco/gota seca Observagao de laminas Cabeca da lamina: regiao imediatamente apés o local em que estava a gota sanguinea. Nessa regido, com frequéncia, hd aumento do ntimero de leucécitos. Corpo da lamina: regido intermedidria entre cabeca e cauda. E nessa regio que os leucécitos, hemAcias e plaquetas esto distribuidos de forma homogénea. E a area escolhida para andlise qualitativa e quantitativa da distensao sanguinea. Cauda da lamina: regido final da distensao sanguinea. Nessa regiao, hd encontro de alguns esferécitos e elevacao de monécitos e granulécitos, que podem apresentar maior distorc4o morfolégica.TECNICAS DE COLORACAO. * Principios da coloragao Os corantes de Romanowsky foram idealizados pelo cientista Romanowsky, no qual uma solucao de corantes poderia corar diferentes estruturas a partir da mistura dos corantes eosina e azul de metileno, preparadas por varios autores: Leishman, May-Grunwald, Giemsa, Wright e outros (que doam seus respectivos nomes aos corantes). Estes corantes sao dissolvidos em alcool, geralmente o metanol. + Eosina: é um corante acido que cora as estruturas acidéfilas em tom rosa, como as hemacias, devido a hemoglobina e os granulos dos eosinéfilos; + Azul de metileno: corante bsico, que cora as estruturas baséfilas (que tem atracao a substancias dcidas e que fixam corantes basicos, pois “gostam’ de basicos - lembre-se que 0s opostos de atraem) em tom azul, como os niicleos, devido ao RNA e ao DNA € os granulos dos baséfilos. Etapas: + Fixagao: na qual a preparacao a ser corada é previamente fixada, geralmente com metanol. 0 corante Romanowski, preparado em solugao alcodlica, quando aplicado sobre a lamina realiza esta etapa + Coloragao: adiciona-se agua de colorago (gua tamponada com pH=7,0 ou agua destilada recentemente fervida) sobre o corante, ionizam-se os sais contidos na solucao. + Lavagem: apés a coloracao, as laminas sao lavadas sob jato de agua corrente e entao secas ao ar. Tipos de coloraga May-Grunwald e Giemsa + So na verdade duas técnicas de coloracao juntas. + Tanto 0 May quanto 0 Giemsa sao corantes. + Apés a confeccao do esfregaco, estando seco, levar a0 May por 2 minutos, pelo mesmo tempo retirar + excesso na agua, e levar ao Giemsa por 10 minutos. + Processo mais demorado, mas com grande qualidade e durabilidade na coloracao. Leishman + Depois de confeccionado e seco, adicionar ao esfregaco o corante de forma que preencha toda a lamina, por volta de 20 gotas. + Apés 1 minuto adicionar de égua, o dobro da quantidade de corante (40 gotas). + Aguardar 10 minutos, procedendo a homogeneizacao do corante na superficie da lamina. Panético + Coloraco RAPIDA + Submergir a lamina por 10 segundos em cada corante, retirando 0 excesso ao passar de um para 0 outro. nguineo rRRoteiro de aula pratica: Tema: Esfregaco Sanguineo e coloracao rapida Panética Objetivo: Realizar esfregaco com qualidade de forma que as células possam estar bem-dispostas para avaliacao ao microscépio. Realizar a coloracao panética se atentando ao procedimento estabelecido. Procedimento: Esfregaco 4- Separe duas laminas, uma para depositar o material e outra para servir como extensora; 2- Certifique-se de que as laminas esto limpas, caso contrario limpe com alcool 70% e espere secar ou seque com papel toalha. 3- Coloque uma gota de sangue na face da lamina que possui uma seco aspera (ajudara a identificar em que lado esté 0 esfregaco aps a colora¢ao); 4- Toque a lamina extensora & frente da gota de sangue, arraste para trés até a gota se espalhar pela extensora; 5- Segure com firmeza a extensora ea lamina onde esta o material para ter firmeza na "corrida"; 6- Realize a extensao com movimento suave, mas nao tao vagaroso pressionado a extensora de modo a realizar um esfregaco com boa espessura; Coloragao 4- Apés a secagem do esfregaco em temperatura ambiente, submergir na primeira solucao, geralmente de coloracao verde ou azul claro (fixador) por aproximadamente 10 segundos; 2- Deixar escorrer o excesso de material em um papel absorvente e submergir no corante 2 geralmente de coloracao vermelha por aproximadamente 10 segundos; 3- Deixar escorrer o excesso de material em um papel absorvente e submergir no corante 3 geralmente de coloracao roxa por aproximadamente 10 segundos; 4- Deixar escorrer 0 excesso de corante e lavar na pia sem deixar a agua bater diretamente no material, podendo deixar escorrer pelas maos e em seguida na lamina até que todo excesso de corante seja removido. Conclusao: A correta execucao do esfregaco e do proceso de coloracao auxilia no diagnéstico de anemias e leucemias, além da boa observacao da morfologia das células do sangue. EXERCICIOS DE FIXACAO 4. Quais os fatores devemos nos atentar para a confeccao de um bom esfregaco? 2. Qual o fundamento da coloragao Panstica? 3. Qual a importancia dos indices hematimétricos na interpretacao do hemograma? 4. Qual a importancia da confeccao do esfregaco sanguineo de qualidade? BAULA 3, ALTERAGOES MORFOLOGICAS DAS HEMACIAS * Poiquilocitose: Termo utilizado para designar alteracdes morfoldgicas nas hemacias. Principais poiquilocitoses: + Esferdcito Sao esferécitos com a biconcavidade reduzida. Pode ser causado por defeitos genéticos nas proteinas de membrana ou ser adquirida, aparecendo nos casos de anemia hem a + Ovalécitos / Eliptécitos Sao eritrécitos que apresentam formas ovaladas e eliptociticas. As causas dessa alteragao séo defeitos genéticos nas proteinas do citoesqueleto da célula. Porém, podem ser encontradas uma pequena quantidade de eliptécitos/ovalécitos nas Talassemias, anemias ferroprivas e anemias megaloblasticas. + Estomatécito Sao eritrécitos com o halo central semelhante a uma boca de peixe. 0 termo“stoma’ significa boca. Pode ser um artefato da distensdo sanguinea, Pode estar presente em hepatopatias e em sangue de VOxyv OR recém-nascidos. ~ Q oN D> " + Codécito Hemacia em alvo. A hemacia apresenta dupla biconcavidade de tal maneira que quando projetada em um plano, a hemoglobina é visualizada em uma pequena faixa periférica e geralmente, na parte central, o que Ihe dé 0 aspecto em “em alvo". Podem ser encontrados nas hepatopatias, em pacientes esplenectomizados e na anemia ferropriva.+ Dacriécitos So eritrécitos em forma de gota ou lagrima. A deformacao ocorre quando as células passam pelo aco, sofrendo estiramento além dos limites da elasticidade. E muito comum na mielofibrose, devido a hematopoese extramedular (0 baco produz células sanguineas devido hipocelularidade da medula 6ssea). Pode ser encontrado também nas talassemias e anemias hemoliticas. + Drepanécito Hemacia em formato de foice. Os eritrécitos adquirem essa forma devido a presenca de Hemoglobina S, que polimeriza e se precipita na membrana da célula, ocasionando a deformacao. € encontrando em doencas falciformes. aan Oa 22 l* + Equinécito Hemacia mamilonada. In vitro pode ser artefato. In vivo decorre de hipotireoidismo e apés transfusdes sanguineas.* Acantécito Hemidcia em forma espiculada (cheia de espinhos). In vitro, pode ser artefato. In vivo decorre de hepatopatias, diminuicao da funcao do baco. o0®@ #9 “< Ove | + Inclusées eritrocitarias Os eritrécitos podem apresentar inclusées em seu citoplasma que podem ser de origem diferente e ter significados diferentes. + Ponteado baséfilo: Resquicio de material genético. Numerosos granulos dispersos pelo citoplasma. Comum nas Talassemias, intoxicagao por chumbo, anemias hemoliticas. + Corpiisculo de Heinz: Formada por hemoglobina desnaturada. Os granulos tendem a aparecer na periferia dos eritrécitos. Aparecem no sangue de recém-nascido e prematuros, drogas como cloratos, primaquina e fenilhidrazina. + Corptisculo de Howell-Jolly: Resto de cromatina, complexos renascentes de nticleo. Mintiscula esfera Unica. Comuns em anemias hemoliticas;+ Anel de Cabot: Resto de fuso nuclear, proteinas que fazem parte da divisdo celular. Anel cor purpura, aparece em anemias megaloblasticas. Eee ANEMIAS definida pela Organizacao Mundial de Satide (OMS) como a condicao na qual o contetido de hemoglobina no sangue esta abaixo do normal como resultado da caréncia de um ou mais nutrientes essenciais, seja qual for a causa dessa deficiéncia. AOMS definiu anemia, cerca de 30 anos atras, como sendo a “diminuicao da taxa de hemoglobina sanguinea abaixo de 13g/dL para homens adultos, 12 g/dL para mulheres adultas e 11 g/dL. para gestantes e criancas de seis meses a seis anos’. ‘A anemia é considerada uma sindrome pois pode decorrer de multiplas causas. Dentre as causas, as anemias podem ser causadas por deficiéncia de ferro, zinco, vitamina B12 e proteinas. Mas a anemia ferropriva é muito comum que as demais (estima-se que 90% das anemias sejam causadas por caréncia de Ferro). O ferro é um nutriente essencial para a vida e atua principalmente na sintese (fabricacao) das células vermelhas do sangue e no transporte do oxigénio para todas as células do corpo. Criangas, gestantes, lactantes (mulheres que estao amamentando), meninas adolescentes e mulheres adultas em fase de reproducao sao os grupos mais afetados pela anemia, muito embora homens - adolescentes e adultos - e os idosos também possam ser afetados pela anemia. ‘A anemia pode ser classificada em duas categorias: aquelas que nascem com 0 individuo (neste caso temos uma anemia hereditaria) ou podem ocorter com o individuo por algo que Ihe acontece durante a vida (neste caso sao as anemias adquiridas). + Anemias hereditarias: Geralmente se relacionam a alteracdes genéticas na fabricagdo do glébulo vermelho - seja na membrana que dé forma ao glébulo vermelho, seja das substancias que estao em seu interior — hemoglobina e proteinas. Exemplos: Talassemias e Anemias falciformes. + Anemias adquiridas: Podem acontecer por caréncia de nutrientes, por alteragdes na medula éssea ou ainda por outra doenca que leva a anemia por outros mecanismos. + Caréncia de nutrientes: Vitamina B12, Ferro. + Demais condigées: Alteracdes na medula éssea ou doencas que levam ao “estado anémico’, renal crénico, doencas infectocontagiosas. Classificago das anemias: + Anemia ferropriva uiEo tipo de anemia decorrente da deficiéncia de ferro dentro do organismo levando a uma diminuicao da producao, tamanho e teor de hemoglobina dos glébulos vermelhos, hemacias. O ferro é essencial para a produgao dos gldbulos vermelhos e seus niveis baixos no sangue comprometem toda cascata de producao das hemacias. = RIO; + Quadro clinico: palidez, cansaco, sonoléncia cefaleia, tonturas. + Quadro laboratorial: Hemdcias microciticas hipocrémica, reducao de HCM eVCM. Possivel associaco com parasitose - eosinofilia + Possiveis causas da anemia ferropriva: Diminuicao de ingestao; Diminuicdo de absorcao intestinal; Defeito no transporte; Aumento da excrecao ou perdas; Aumento da necessidade fisiolégica ou patolégica. + Anemia por deficiéncia de B12 (Anemia Megaloblastica) Na anemia por deficiéncia de vitamina B12 ocorre baixa contagem de hemacias devido a pouca quantidade dessa vitamina no organismo. Anemias causadas por deficiéncia de vitaminas, no geral, so chamadas de anemias megaloblsticas. J4 alguns tipos de anemias causadas por deficiéncia de vitamina B12 so chamadas de anemias perniciosas. A deficiéncia de vitamina B12 pode resultar de uma dieta deficiente desta vitamina, que é encontrada principalmente em carnes, ovos e leites. Esse & um problema muito comum em vegetarianos e veganos. + Quadro clinico: Triade classica ~ Fraqueza, dor na lingua e parestesias. Além dos sintomas classicos, iarreia, glossite ("lingua careca”), perda de apetite. + Quadro laboratorial: Baixa contagem de hemadcias no sangue periférico, medula éssea hipercelular. Em casos graves, observamos presenca de Eritroblasto no sangue periférico, Neutréfilo ipersegmentado e macrocitose. vemos: vf+ Anemia hemolitica Em pessoas saudaveis, 0s glébulos vermelhos duram por cerca de 120 dias antes de serem descartados pelo organismo. Na anemia hemolitica, 0s glébulos vermelhos no sangue sao destruidos antes do tempo normal, sem dar tempo de serem repostos pela medula dssea. A anemia hemolitica ocorre quando a medula éssea nao é capaz de repor os gldbulos vermelhos que estao sendo destruidos. A anemia hemolitica também tem sua forma autoimune, que ocorre quando o sistema imunolégico identifica erroneamente seus préprios glébulos vermelhos como corpos estranhos, desenvolvendo anticorpos que atacam as hemacias, destruindo-as muito prematuramente. Pode ter como consequéncia: esplenomegalia e hepatomegalia * Anemia falciforme Euma doenca hereditaria (passa dos pais para os filhos) caracterizada pela alteracao dos glébulos vermelhos do sangue, tornando-os parecidos com uma foice, dai o nome falciforme. Essas células tem sua membrana alterada e rompem-se mais facilmente, causando anemia. E importante nao confundir a anemia falciforme com a anemia ferropriva, causada por deficiéncia de ferro. A segunda é muito mais ‘comum (estima-se que 90% das anemias sejam causadas por caréncia de ferro) + Caracteristicas: Presenca de Hemoglobina S Alteracao fisica dos eritrocitos (forma de foice) Rompem facilmente * Diagnéstico: 79Eletroforese Hemograma (Citologia) + Anemia Aplastica Esta anemia rara, com risco de vida, ocorre quando seu corpo nao produz uma quantidade suficiente de glébulos vermelhos. As causas da anemia aplastica incluem infeccdes, doencas autoimunes e exposicao a produtos quimicos toxicos. A doenca pode se manifestar de diferentes formas e intensidades. + Possiveis causas: Infeccées, doencas autoimunes, exposigao a produtos quimicos toxicos. + Anemias causadas por outras doengas Algumas doencas podem afetar a capacidade do corpo de fazer glébulos vermelhos. Por exemplo, alguns pacientes com doenca renal desenvolvem anemia porque os rins nao estao fazendo o suficiente para sinalizar a medula éssea que ela deveria fazer novos ou mais glébulos vermelhos. A quimioterapia utilizada para tratar varios tipos de cancer também prejudica a capacidade do corpo de fazer novos glbulos vermethos, podendo causar a anemia. CauUsAS ‘Aanemia ocorre quando 0 sangue nao possui sangue vermelho suficiente. Isso pode acontecer se: + Seu corpo nao produz células sanguineas vermelhas suficientes +O sangramento faz com que vocé perca os glébulos vermelhos mais rapidamente do que eles podem ser substituidos + Seu corpo destréi os glébulos vermelhos. FATORES DE RISCO Uma dieta que nao possui certas vitaminas Ter uma dieta com baixas quantidades em ferro, vitamina B12 e dcido folico aumenta o risco de anemia. Distirbios intestinais Ter uma desordem intestinal que afeta a absorcao de nutrientes no intestino delgado - como doenca de Crohn e doenca celiaca - coloca vocé em risco de anemia. Menstruacao Em geral, as mulheres que ndo chegaram ainda na menopausa apresentam maior risco de anemia ferropriva do que homens e mulheres na pés-menopausa. Isso porque a menstruacao causa a perda de glébulos vermelhos. Gravidez Se vocé esté gravida e nao esta tomando um multivitaminico com dcido félico, vocé pode estar com um risco aumentado de anemia Condigées crénicas Se vocé tem cancer, insuficiéncia renal ou outra condicao crénica, vocé pode estar em risco de anemia de doenca crénica. Essas condigdes podem levar a uma escassez de glébulos vermelhos. Os sinais e sintomas da anemia sdo inespecificos, necessitando-se de exames laboratoriais (sangue) para que seja confirmado o diagnéstico como: Exame fisico durante a consulta (ANAMNESE) Hemograma completo: detecta se a taxa de hemoglobina esta baixa e se 0 formato dos glébulos vermelhos esta alterado Exames laboratoriais para analisar a deficiéncia de vitaminas (BIOQUIMICA). Eletroforese de hemoglol POLICITEMIA E caracterizada pelo numero excessivo de células vermelhas no sangue e tem o aumento da viscosidade do sangue, pode provocar dores de cabeca, tonturas e, até infarto. Geralmente diagnosticada no Hemograma.+ Policitemia priméria: também conhecida como policitemia neonatal ou POLICITEMIA VERA, acontece devido a alterages na producao de células sanguineas pela medula + Policitemia secundaria: E resultado de outras doencas, como tumores renais A policitemia nao tem cura, mas pode ser controlada com remédios e transfusdes para diminuir a viscosidade do sangue e prevenir complicacées. + Sintomatologia: Dor de cabeca constante; Visdo embagada; Pele vermelha, especialmente no rosto, mos e pés; Cansaco excessivo; Coceira na pele, principalmente apés o banho. + Alteragdes Laboratoriais das Policitemias: Hematécrito = 60% (homens) e 56% (mulheres) Plaqueotose > 400.000/1 Neutrofilia > 10.000/u & HEMOGLOBINOPATIAS So doencas que acometem os genes responsaveis pela sintese das hemoglobinas. As hemoglobinopatias estdo entre as doengas monogénicas mais comumente encontradas nas populacdes, com mais de 1.000 diferentes alelos mutantes caracterizados em nivel molecular. As principais, do ponto de vista clinico, so as doengas falciformes (DF) e a talassemia B, que acometem populacées origindrias do continente africano, da Regido Mediterranea, do Sudeste Asiatico e do Oriente Médio e Extremo Oriente8. Cerca de 1-2% da populacdo mundial é composta de heterozigotos da Hb S e 3% de heterozigotos da talassemia B. + Talassemias: As Talassemias sdo doencas genéticas que envolvem mutacées genéticas e sao divididas em dois tipos: a-talassemia e B-talassemia. Como os préprios nomes sugerem, as talassemias afetam as cadeias polipeptidicas da hemoglobina. Costumam apresentar mais de uma forma clinica (desde traco talassémico até o quadro severo da doenca). Quem possui o traco talassémico é clinicamente normal, mas so observadas macrocitose e hipocromia, com niveis normais de ferro sérico. O diagnéstico pode ser feito por analise de DNA.O portador silencioso nao tem manifestagées clinicas relevantes, podendo apresentar apenas uma discreta hipocrémica. A tinica maneira de identificar é através de analise de DNA. O tratamento pode ser feito por transplante de medula, transfusdes e uso de agente quelante. + Anemia falciforme A anemia falciforme é causada por uma mutagao no cédon 6 do gene da globina beta, onde uma adenina é substituida por uma timina, Isso faz com que a hemoglobina tenha uma conformagao diferente e passe a ser chamada de Hb S. tAHDS se torna insolvel quando desoxigena e se agrega a longos polimeros, resultantes do alinhamento das moléculas de HbS. Isso acarreta a formacao da hemacia em formato de foice. Os sintomas do individuo estdo associados com processos inflamatérios causados por vaso-oclusdo, que acarreta uma série de fatores como adesio das hemacias, leucdcitos e plaquetas ao endotélio, diminuindo o fluxo sanguineo no local. Apés a reoxigenacao, alguns eritrécitos podem até assumir 0 formato natural, mas esse processo danifica a sua membrana, fazendo com que a mesma se rompa com facilidade. Pacientes com traco falciforme, que nao apresentam sintomas relevantes, conseguem ter uma qualidade de vida. A eletroforese de hemoglobina é uma técnica diagnéstica que tem como objetivo identificar os diferentes tipos de hemoglobina que podem ser encontrados circulantes no sangue. A partir da identificacao do tipo de hemoglobina, é possivel verificar se a pessoa possui alguma doenca relacionada a sintese de hemoglobina, como talassemia ou anemia falciforme, por exemplo. ‘Além disso, pode ser solicitada com o objetivo de aconselhar geneticamente casais que queriam ter filhos, por exemplo, sendo informado se ha chance da crianca ter algum tipo de disturbio no sangue relacionado a sintese de hemoglobina. Também pode ser solicitada como exame de rotina para acompanhamento de pacientes ja diagnosticados com HEMOGLOBINOPATIA. No caso de bebés recém-nascidos a identificagao do tipo de hemoglobina ¢ feita por meio do teste do pezinho, sendo importante para o diagnéstico da anemia falciforme, por exemplo. ‘Apés a coleta realizada corretamente (ndo pode haver hemdlise — destruicao das hemacias) e com Jejum de no minimo 4 horas (depende do laboratério). A amostra é encaminhada para o laboratério e destinada ao setor de hematologia ‘Tpe de hemogiobina Vator normal es 147 dias ce Kade: até 84%, #60 02s ce eace: até 77% 2.4 meses ce age: a 40%: 4.26 meses de Wace: at 7.0% 7a 12 meses ce wade: até 3.5%: 12a 18 meses oe ade: até 2.8%: auto: 00.220% Hat gua ou superior a 95% waz 18-35% Com 0 auxilio de outra técnica diagnéstica denominada HPLC (Cromatografia Liquida de Alta Eficiéncia), é possivel verificar a concentracao das hemoglobinas normais e anormais. 82EXERCICIOS DE FIXACAO: 4. Quais sao as alterac6es laboratoriais encontradas na anemia ferropriva? 2. Escolha uma anemia e fale sobre ela. 3. Por que sintomas como palidez sao caracteristicos da anemia? 4. Caracterize anemia. 5. O que éhemoglobinopatia? 83AULA 4 Roteiro de aula pratica: Tema: Esfregaco Sanguineo e coloracao rapida Panética Objetivo: Realizar esfregaco com qualidade de forma que as células possam estar bem-dispostas para avaliagao ao microscépio. Realizar a coloracao panética se atentando ao procedimento estabelecido. Procedimento: Esfregaco 4- Separe duas laminas, uma para depositar o material e outra para servir como extensora; 2- Certifique-se de que as laminas esto limpas, caso contrdrio limpe com alcool 70% e espere secar ou seque com papel toalha. 3- Coloque uma gota de sangue na face da lamina que possui uma seco aspera (ajudara a identificar em que lado esta 0 esfregaco apés a coloracao); 4- Toque a lamina extensora a frente da gota de sangue, arraste para tras até a gota se espalhar pela extensora; 5- Segure com firmeza a extensora e a lamina onde est o material para ter firmeza na “corrida”, 6- Realize a extensdo com movimento suave, mas nao téo vagaroso pressionado a extensora de modo a realizar um esfregaco com boa espessura; Coloragao 4 Apés a secagem do esfregaco em temperatura ambiente, submergir na primeira solucao, geralmente de coloracao verde ou azul claro (fixador) por aproximadamente 10 segundos; 2- Deixar escorrer o excesso de material em um papel absorvente e submergir no corante 2 geralmente de coloracao vermelha por aproximadamente 10 segundos; 3- Deixar escorrer o excesso de material em um papel absorvente e submergir no corante 3 geralmente de coloracao roxa por aproximadamente 10 segundos; 4- Deixar escorrer 0 excesso de corante e lavar na pia sem deixar a Agua bater diretamente no material, podendo deixar escorrer pelas maos e em seguida na lamina até que todo excesso de corante seja removido. Conclusao: A correta execucao do esfregaco e do proceso de coloracao auxilia no diagnéstico de anemias e leucemias, além da boa observacao da morfologia das células do sangue. Roteiro de aula pratica: Tema: Observacao de laminas normais e de alteragées morfolégicas na série vermelha, Objetivo: Identificar os eritrécitos normais e alterados morfologicamente além das anemias. Procedimento: 4- Focalizar as laminas propostas pelo professor (a) na objetiva de 40x de aumento; 2- Focalizar as laminas propostas pelo professor (a) na objetiva de 100x de aumento; 3- Anotar as observacdes e se atentar em descrever as caracteristicas das células observadas para auxiliar na identificagao. ny