Separação dos pigmentos presentes em folhas verdes por cromatografia

Preparação do extrato vegetal -

almofariz placa cromatográfica
acetona Colocar a matriz vegetal em um
pistilo almofariz e adicione cerca de 5 mL Cada grupo
papel filme
pipeta de Pasteur
de acetona. Em seguida, triture as receberá três placas
béquer
folhas utilizando o pistilo. Transfira a cromatográficas
papel de filtro
parte líquida, com o auxílio de uma medindo 1,5 x 5,0 cm
tubo capilar pipeta de Pasteur para um béquer
de 50 mL. Vede o béquer com um
papel filme

Cromatografia em camada delgada

Posicione a placa , a parte mais estreita
apontada para você
Meça 0,5 cm a partir da base da placa e faça
um risco, utilizando lápis, na horizontal;
Aplica na linha a amostra com auxilio do tubo
capilar;
Em uma folha de papel escreva os números
de 1 a 3 e deixe-a em cima da bancada;
Adicione cerca de 8 mL de hexano à cuba
cromatográfica;
Coloque a placa dentro da cuba;
Assim que o eluente atingir a altura de, mais
ou menos, 4,8 cm, retire a placa de dentro da
cuba;
. Deposite a placa em cima da folha de papel,
próximo ao número 1. Espere o solvente
evaporar e observe
Repita o procedimento, utilizando uma
outra placa, mas agora utilizando o
acetato de etila como eluente. Deposite a
placa em cima da folha de papel, próximo
ao número 2. Espere o solvente evaporar
e observe.
Repita o procedimento, utilizando uma
mistura de acetato de etila: hexano na
proporção de 8:2 (hexano: acetato de
etila). Deposite a placa em cima da folha
de papel, próximo ao número 3. Espere o
solvente evaporar e observe. Compare os
resultados obtidos nos três
experimentos.
 Preparação da cuba
cromatográfica

Forrar o fundo da cuba, com
papel de filtro. Tanto o papel de
filtro colocado na lateral quanto o
do fundo da cuba deve ser trocado
corriqueiramente para evitar
contaminação dos experimentos.
Cromatografia em coluna
Posicione um suporte universal em cima da
bancada e acople duas garras pequenas;
A coluna poderá ser empacotada de três
Pegue a coluna e adapte um pequeno maneiras diferentes
chumaço de algodão;
Prenda a coluna no suporte universal e
posicione um Erlenmeyer de 250 mL de boca
larga embaixo da coluna

3 2
Empacotamento misto
Pese 8 g de sílica. Em seguida, transfira a sílica para
um béquer e reserve. Feche a torneira da
coluna. Adicione cerca de 15 mL da mistura de
eluente. Em seguida, vá adicionando a sílica aos
poucos, dando pequenas batidas com a mangueira
flexível. Quando toda a sílica estiver
compactada, abra a torneira e deixe escoar o
solvente. A coluna não deve secar, ou seja, devese
observar a formação de um pequeno anel de
solvente na parte superior da sílica.
1
Empacotamento com a sílica seca
Empacotamento com sílica úmida
Pese 8 g de sílica e em seguida adicione à coluna. Dê
Pese 8 g de sílica. Em seguida, transfira a sílica para um pequenas batidas na coluna com uma mangueira
béquer e adicione 30 mL da mistura de eluente. Mexa com flexível até que a sílica esteja bem sedimentada. Em
um bastão de vidro até obter uma consistência fluída. Com seguida, com o auxílio de um béquer, adicione a fase
o auxílio de um funil, e com a torneira da coluna aberta,
móvel lentamente para não perturbar a superfície. Caso
transfira essa mistura para a coluna. Adicione pequenas
seja observado
quantidades de eluente, com o auxílio de uma pipeta de
bolhas de ar, dê pequenas batidas com a mangueira
Pasteur, até que toda sílica fique compactada. Nesse
flexível até que estas se desprendam. Recolha a fase
procedimento, não é desejável que fique sílica retida na
móvel no Erlenmeyer, pois essa será utilizada na eluição
parede de vidro da
da coluna. A coluna não deve secar, ou seja, deve-se
coluna. A coluna não deve secar, ou seja, ao final deve-se
observar a formação de um pequeno anel de solvente
observar a formação de um pequeno anel de solvente na
na parte superior da sílica.
parte superior da sílica.

Com a torneira da coluna fechada, aplique cerca de 0,5 mL do extrato vegetal no topo da coluna om o auxílio de uma pipeta de Pasteur. Em
seguida, abra a torneira de modo que a amostra fique impregnada na sílica. Mas cuidado! Assim que o eluente escoar, feche a torneira! O
objetivo aqui é impregnar a amostra na sílica e não secar a coluna.
Em seguida, ajuste a coluna no suporte universal de modo que você consiga colocar e tirar os tubos de ensaio que serão utilizados para
recolher as frações.
Adicione a mistura de solvente na coluna e recolha cerca de 2 mL de solvente em cada tubo de ensaio. Inicie a eluição da coluna e continue
até que os componentes da amostra sejam separados e recolhidos nos tubos de ensaio. Anote em seu caderno o número das frações que
contêm as substâncias separada