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Tecnologias de reprodução assistida em bovinos: uma revisão

ArtigoemRevue Scientifique et Technique de l OIE · Maio de 2005


Fonte: PubMed

CITAÇÕES LÊ
120 1.276

2 autores:

Reuben J Mapletoft John e Hasler


Universidade de Saskatchewan Vetoquinol EUA, Inc.

385PUBLICAÇÕES10.307CITAÇÕES 89PUBLICAÇÕES4.199CITAÇÕES

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Rev. tecnologia. Desligado. interno. Episódio., 2005,24(1), ... - ...

Tecnologias de reprodução assistida em


bovinos: uma revisão

Mapleton RJ(1)& JF Hasler(2)

(1) Western College of Veterinary Medicine, Universidade de


Saskatchewan, Saskatoon, SK S7N 5B4, Canadá

(2) AB Technology, Bioniche Animal Health USA, Inc., Pullman, WA


99163, Estados Unidos da América

Resumo

Durante um período de aproximadamente trinta anos, a transferência comercial

de embriões bovinos tornou-se um grande negócio internacional. A tecnologia

está bem estabelecida e mais de 500.000 embriões são produzidos anualmente

a partir de vacas superovuladas em todo o mundo. Uma vez que embriões

bovinos comzona pelúcidapodem ser especificados como livres de patógenos

por meio de procedimentos de lavagem, milhares de embriões congelados são

rotineiramente vendidos e transferidos entre países. Em todo o mundo,

aproximadamente 15% dos embriões bovinos são produzidos porem vitro

tecnologia. A tecnologia de reacção em cadeia da polimerase está actualmente a

ser utilizada para sexagem de embriões em pequena escala e é provável que

esta tecnologia seja utilizada para “diagnóstico de embriões” no futuro. A

sexagem do sêmen é uma tecnologia estabelecida e provavelmente será usada

em pequena escala num futuro próximo, especialmente emem vitrosistemas de

produção de embriões. A clonagem de bovinos adultos através de transferência

nuclear e a produção de bovinos clonados e transgénicos foi tecnicamente

alcançada. No entanto, esta é uma tecnologia cara e ineficiente, que está sendo

utilizada principalmente pela indústria farmacêutica. Os benefícios na

agricultura serão provavelmente mínimos num futuro próximo.

Palavras-chave

Tecnologias de reprodução assistida – Bovinos – Clonagem – Diagnóstico de

embriões – Sexagem de embriões – Transferência de embriões –Em vitrotecnologia

– Sexagem de sêmen.

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Introdução

Para uma perspectiva histórica sobre a reprodução assistida, o leitor deve consultar

uma revisão recente e abrangente da transferência de embriões de animais de

criação e das tecnologias associadas (4). O período anterior a 1970 não será

abordado detalhadamente neste artigo, e as revisões serão referenciadas com a

maior frequência possível para economizar espaço. Em resumo, a primeira

transferência bem-sucedida de embriões de mamíferos foi realizada por Walter

Heape em 1890. Heape transferiu dois embriões de coelho angorá de quatro células

para uma corça belga inseminada, que posteriormente deu à luz quatro filhotes

belgas e dois angorá (3, 4, 30). ). Parece não haver relatos de sucesso adicional na

transferência de embriões de mamíferos até a década de 1920, quando vários

investigadores descreveram novamente a transferência de embriões em coelhos (3).

Warwick e colegas realizaram um trabalho considerável sobre a transferência de

embriões em ovinos e caprinos nas décadas de 1930 e 1940 (4), mas foi Umbaugh

(73) quem relatou as primeiras transferências de embriões bem-sucedidas em

bovinos em 1949. Ele produziu quatro gestações a partir da transferência de

embriões bovinos, mas todas as receptoras abortaram antes que as gestações

atingissem o termo. Em 1951, o primeiro bezerro transferido para transferência de

embriões nasceu após a transferência cirúrgica de um embrião do quinto dia

derivado de um matadouro (82). No entanto, foram Rowson e colegas de Cambridge

que desenvolveram grande parte da tecnologia que mais tarde encontrou uso

comercial (4).

A indústria de transferência de embriões bovinos, como é conhecida hoje, surgiu

na América do Norte no início da década de 1970 (3, 4). As raças continentais de

gado importadas para o Canadá eram muito valiosas e relativamente escassas

devido às restrições internacionais de saúde e comércio. A transferência de

embriões ofereceu um meio pelo qual o seu número poderia ser multiplicado

rapidamente. Durante vários anos, o uso mais comum da transferência de

embriões em programas de produção animal foi a proliferação dos chamados

fenótipos desejáveis. No entanto, em 1987, Smith (59, 60), da Universidade de

Guelph, introduziu o conceito de ovulação múltipla e transferência de embriões

(MOET). Ele mostrou como programas MOET bem elaborados poderiam levar ao

aumento da intensidade de seleção e à redução dos intervalos de geração,

resultando em melhores ganhos genéticos. O estabelecimento de rebanhos

nucleares e a submissão da prole de novilhas ao 'MOET juvenil'

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poderia resultar em ganhos genéticos que se aproximassem do dobro daqueles

alcançados com programas tradicionais de testes de progênie. É digno de nota que, antes

do trabalho de Smith, a maioria das transferências de embriões realizadas no Canadá

ocorria em gado de corte, enquanto aproximadamente 75% do trabalho de transferência

de embriões no Canadá em 2002 envolvia gado leiteiro. Aproximadamente 65% do

trabalho de transferência de embriões nos Estados Unidos da América (EUA) continua a

envolver gado de corte (70).

A transferência de embriões é agora comumente usada para produzir touros de

inseminação artificial (IA) de vacas e touros altamente comprovados (10, 68).

Embora os custos técnicos pareçam impedir a utilização de técnicas de

transferência de embriões para qualquer coisa que não seja a produção de

sementes neste momento, a indústria pecuária comercial pode beneficiar da

utilização de touros produzidos através de programas MOET bem concebidos

(15, 53). O sucesso dos programas MOET levou agora ao uso desta tecnologia

para testar geneticamente touros de IA (40). Vacas selecionadas são

superestimuladas e inseminadas com touros altamente comprovados. A prole

masculina é colocada em espera enquanto a prole feminina é colocada em

produção. Os touros são então comprovados por registros de produção de

irmãos e não de descendentes (61). Com esta abordagem, é possível testar

geneticamente um touro em três anos e meio, em oposição aos cinco anos e

meio usando esquemas tradicionais de testes de progênie. Embora alguma

precisão possa ter sido sacrificada, os intervalos de geração mais curtos

resultam em um maior ganho genético geral. Embora os resultados apoiassem a

teoria, a fisiologia foi um fator limitante. Os resultados superovulatórios

dificultaram a produção do número desejado de descendentes para testes

genéticos.

Embora as aplicações (42) e técnicas (43) associadas à transferência de embriões

bovinos tenham sido previamente revisadas, uma breve perspectiva histórica

pode ser útil. Os primeiros investigadores descreveram técnicas não cirúrgicas

de recuperação de embriões (52), mas estas não tiveram muito sucesso e,

portanto, todas as recuperações e transferências de embriões realizadas no

início da década de 1970 foram realizadas cirurgicamente. Como consequência,

os primeiros programas comerciais de transferência de embriões baseavam-se

na exposição cirúrgica médio-ventral do útero e dos ovários com a doadora sob

anestesia geral. Isso exigiu instalações cirúrgicas e uso limitado de

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a tecnologia na indústria de laticínios porque o úbere das vacas leiteiras dificultava o

acesso médio-ventral ao trato reprodutivo. Somente em meados da década de 1970 é que

a recuperação não cirúrgica de embriões se tornou suficientemente desenvolvida para ser

utilizada na prática comercial (17, 19, 50). No início da década de 1980, foram adoptadas

técnicas não cirúrgicas de transferência de embriões (51, 86), permitindo que a

transferência de embriões fosse praticada na exploração e tornando-a especialmente

atractiva para os produtores de leite.

A indústria de transferência de embriões cresceu rapidamente no final da

década de 1970, tanto em termos do número de profissionais como do número

de doadores liberados. Seidel (54) relatou que, em 1979, mais de 17.000

gestações resultantes da transferência de embriões bovinos foram registradas

na América do Norte. Mais recentemente, Thibier (70) relatou que, no ano de

2002, 538.312 embriões bovinos foram transferidos em todo o mundo, dos quais

52% foram transferidos após congelamento e descongelamento na fazenda e

15% foram produzidos porem vitrotécnicas. A América do Norte continuou a ser

o centro da atividade comercial de transferência de embriões, com mais de

42.000 vacas doadoras superestimuladas e mais de 190.000 embriões

transferidos (35% de todas as transferências de embriões relatadas no mundo).

No entanto, a transferência comercial de embriões na América do Norte está

estática ou em declínio. Na América do Sul, em comparação, a transferência

comercial de embriões está a expandir-se, representando 22% das

transferências de embriões em todo o mundo em 2002. A Europa e a Ásia

registaram, cada uma, cerca de 17% do número total de transferências de

embriões bovinos em 2002 (70).

A Sociedade Internacional de Transferência de Embriões (IETS) foi fundada


em 1974, com 82 membros fundadores, representando investigadores,
académicos e médicos veterinários (69). No entanto, com a fundação de
organizações regionais de transferência de embriões, um número crescente
de profissionais de transferência comercial de embriões deixou de ser
membro do IETS em favor das suas organizações regionais. É também claro
que um número crescente de membros do IETS são investigadores básicos
que representam instituições governamentais, industriais ou académicas,
incluindo a medicina humana (30). Contudo, o IETS tem desempenhado um
papel muito importante na divulgação de informações básicas e aplicadas,
auxiliando no rápido crescimento da transferência de embriões.

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indústria nas décadas de 1980 e 1990. Em particular, o Comité de


Importação/Exportação do IETS, agora referido como Comité Consultivo de
Saúde e Segurança (HASAC), tem sido fundamental na recolha e divulgação
de informações científicas sobre o potencial de controlo de doenças através
da utilização da transferência de embriões bovinos (69 ). Destacam-se as
seguintes contribuições:

– a reunião da «mesa redonda» sobre questões de controlo de doenças e

transferência de embriões, organizada pela IETS e pela Organização Mundial da

Saúde Animal (OIE) em 1985 (46)

– a formulação de procedimentos de controle de doenças para a movimentação

internacional de embriões, conforme estabelecido no Código Sanitário para Animais

Terrestres da OIE (47)

– a organização do Simpósio Internacional do Movimento


Embrionário, patrocinado pelo IETS no XXXIII Congresso Mundial de
Veterinária em Montreal, em 1987.

Estes eventos marcantes, além da estreita colaboração contínua entre o IETS


e a OIE, tornaram possível o movimento internacional de embriões bovinos.
A este respeito, oManual do IETS: guia de procedimentos e informações
gerais para o uso da tecnologia de transferência de embriões com ênfase
em procedimentos sanitários(64) tornou-se a fonte de referência para
procedimentos de controle de doenças utilizados em protocolos de
exportação.

Em 1982, a American Embryo Transfer Association foi formada para unir e


organizar a indústria comercial de transferência de embriões nos EUA. Em
1984, foi formada a Associação Canadense de Transferência de Embriões. Os
objetivos de ambas as organizações incluem o seguinte:
– estabelecer padrões de desempenho e conduta
– estabelecer ligação com agências federais para transferência de embriões nacionais

e internacionais.

Estas associações também cooperam diretamente com associações de


criadores, grupos de produtores e grupos internacionais, como o IETS. Seu
objetivo é estabelecer padrões de prática que garantam a confiança

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no uso de tecnologia de transferência de embriões para controle de doenças,

nos EUA e no Canadá e em todo o mundo. Os seus programas de certificação

são vitais para garantir que os profissionais de transferência de embriões sejam

técnica e eticamente competentes para manusear embriões para comércio

internacional.

Não houve aumento apreciável no número de embriões produzidos por doadora

superovulada nos últimos vinte anos. No entanto, o reconhecimento da

importância da dinâmica das ondas foliculares (1, 7) e o desenvolvimento de

métodos para a sincronização da emergência das ondas foliculares (7, 8)

simplificaram a forma como a superovulação é alcançada, resultando no

aumento da produção de embriões por unidade de tempo. As vacas doadoras

estão sendo superestimuladas com mais frequência do que no passado, e mais

embriões estão sendo produzidos por ano, sem nenhuma alteração no

protocolo atual de superestimulação. A aplicação de procedimentos

semelhantes às receptoras tornou desnecessária a detecção do cio e a

necessidade de esperar que os animais “entrem no cio”, facilitando a gestão de

programas comerciais de transferência de embriões (8).

Controle de Doenças

Vários grandes estudos demonstraram agora que o embrião bovino não

transmite doenças infecciosas. Na verdade, o Subcomité de Investigação do

HASAC, dentro do IETS, categorizou os agentes de doenças com base no risco de

transmissão com um embrião bovino (66). A categoria 1 inclui doenças ou

agentes de doenças para os quais foram acumuladas provas suficientes para

demonstrar que o risco de transmissão é insignificante, desde que os embriões

sejam manuseados adequadamente entre a colheita e a transferência. O

manuseio adequado inclui o seguinte:

– inspeção dozona pelúcidamicroscopicamente com uma ampliação de pelo

menos 50×para garantir que esteja intacto e livre de material aderente

– dez lavagens do embrião com diluição de pelo menos 100 vezes de cada

lavagem

– ocasionalmente, dois tratamentos com tripsina para dissociar vírus que

tendem a aderir aozona pelúcida.

As doenças da categoria 1 incluem:

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– leucose bovina enzoótica


– febre aftosa (bovinos)
– língua azul (gado)
– Brucela abortada(gado)
– rinotraqueíte infecciosa bovina (é necessário tratamento com tripsina)
– Doença de Aujeszky (pseudo-raiva) em suínos (é necessário tratamento com

tripsina)

- encefalopatia espongiforme bovina.

As doenças das categorias 2, 3 e 4 são aquelas para as quais foi gerada menos

informação de investigação. No entanto, deve-se notar que nenhuma das

doenças infecciosas estudadas foi transmitida porna Vivo- produziram embriões

bovinos, desde que os procedimentos de manipulação dos embriões fossem

seguidos corretamente (58). Consequentemente, foi sugerido que a

transferência de embriões fosse utilizada para salvar material genético no caso

de um surto de doença (85), o que poderia ser uma alternativa útil no

estabelecimento de rebanhos livres de doenças.

Exportação e importação de embriões

O transporte intercontinental de animais vivos custa vários milhares de dólares,

enquanto um rebanho inteiro pode ser transportado, na forma de embriões

congelados, por menos do que o preço de uma única passagem aérea. Os

benefícios adicionais dos embriões congelados em comparação com animais

vivos incluem:

– um risco reduzido de transmissão de doenças

– custos de quarentena reduzidos

– a capacidade de selecionar animais de uma base genética mais ampla

– a capacidade de reter os genes dos animais selecionados no


país exportador
– a capacidade de adaptação dos animais.

A adaptação é particularmente importante em ambientes tropicais e

subtropicais, onde o bezerro resultante teria a oportunidade de se adaptar

primeiro enquanto estava no útero e depois enquanto amamentava uma vaca

receptora nativa da área. No entanto, o risco reduzido de transmissão de

doenças infecciosas é o benefício esmagador da utilização de embriões no

comércio internacional.

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Em 1961, foi relatado o transporte bem-sucedido de embriões de ovelhas em

ovidutos de coelhos por longa distância (30). Embora não existam registos publicados

de embriões bovinos transportados de forma semelhante, o advento de técnicas

fiáveis de criopreservação ajudou a movimentação de embriões bovinos através das

fronteiras internacionais. Nos últimos dez anos, as regulamentações de importação

de embriões para muitos países foram simplificadas a tal ponto que os exportadores

de embriões são agora capazes de operar de forma previsível e rotineira. Em 2002,

aproximadamente 30 mil embriões foram congelados na América do Norte para

exportação. Obviamente, o crescimento das exportações de embriões está

intimamente ligado à existência de regulamentações sanitárias realistas nos países

importadores. No entanto, as alterações nestas regulamentações são muitas vezes

imprevisíveis, especialmente quando surgem problemas de doenças relativamente

novos.

Embora os procedimentos de manuseio recomendados pela IETS


possibilitem exportar com segurançana Vivoembriões derivados de
doadores que são seropositivos para determinados agentes patogénicos
(63), o caso é muito diferente para embriões produzidos comem vitro
técnicas (44). A estrutura dozona pelúcidadeem vitroembriões bovinos
produzidos (IVP) difere daquele dena Vivoembriões derivados (79). Numa
revisão recente, foi demonstrado que é mais provável que vários agentes
patogénicos permaneçam associados aem vitroembriões derivados após a
lavagem do que comna Vivoembriões derivados (65). Isto tem ramificações
potencialmente sérias para o movimento internacional de embriões PIV. Os
testes sorológicos para os micróbios em questão poderiam ser realizados
em vacas doadoras que produzem oócitos através da coleta de óvulos
guiada por ultrassom transvaginal (OPU). No entanto, pode haver um sério
risco para a saúde quando os oócitos são recuperados de ovários derivados
de matadouros (44).

Criopreservação: transferência direta de embriões congelados/


descongelados e vitrificação

O desenvolvimento de métodos eficazes de congelamento de embriões (38, 83)

tornou a transferência de embriões uma tecnologia muito mais eficiente, que já

não depende da disponibilidade imediata de receptoras adequadas. O

congelamento de embriões bovinos é agora comum e as taxas de gravidez são

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apenas um pouco menos do que aqueles alcançados com embriões frescos (39).

Recentemente, o uso de crioprotetores altamente permeáveis, como o

etilenoglicol, permitiu a transferência direta de embriões bovinos (32, 75). Nessa

abordagem, a palha do embrião é descongelada em banho-maria, assim como o

sêmen, e seu conteúdo é depositado diretamente no útero da receptora, como

ocorre na IA. Não há necessidade de microscópio ou procedimentos

complicados de diluição. O crioprotetor deixa o embrião no útero, sem causar

estresse osmótico. Num estudo recente da indústria norte-americana de

transferência de embriões, as taxas de gravidez de embriões transferidos

directamente foram comparáveis às alcançadas com glicerol (39). Durante

2002, mais de metade dos embriões recolhidos na América do Norte foram

congelados e a maioria foi congelada em etilenoglicol para transferência directa

(70). Embora o nível de habilidade necessário para transferir esses embriões seja

o mesmo necessário para embriões congelados convencionalmente, não é

necessário nenhum embriologista no momento do descongelamento.

Consequentemente, um número crescente de embriões de transferência direta

está agora a ser transferido por técnicos com experiência em IA.

Os procedimentos de congelamento e descongelamento são demorados e

requerem o uso de freezers biológicos e um microscópio. Procedimentos

complicados de congelamento de embriões poderão em breve ser substituídos

por um procedimento relativamente simples chamado vitrificação (48). Com a

vitrificação, são utilizadas altas concentrações de crioprotetores e o embrião em

sua solução crioprotetora é colocado diretamente em nitrogênio líquido. Como

resultado da alta concentração de crioprotetores e do método ultrarrápido de

congelamento, não se formam cristais de gelo; em vez disso, a solução

congelada forma um “vidro”. Como a formação de cristais de gelo é um dos

processos mais prejudiciais no congelamento, a vitrificação tem muito a oferecer

na criopreservação de oócitos e embriões PIV. Porém, sua maior vantagem é a

simplicidade. A vitrificação é agora amplamente utilizada experimentalmente e

resultados recentes sugerem que embriões bovinos podem ser vitrificados em

palhetas de 0,25 ml para transferência direta (76).

Produção de embriõesem vitro

Embora cada ovário contenha centenas de milhares de oócitos ao nascer, a


maioria é perdida por atresia. Esse processo começa antes mesmo

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aniversário. Esta tremenda perda de material genético poderia ser reduzida

através da colheita de oócitos do ovário e da utilização de técnicas de PIV (12,

29). A PIV bovina é hoje um procedimento bem estabelecido e razoavelmente

eficiente. Além disso, a OPU em intervalos frequentes, em combinação com em

vitrofertilização, provou o seu valor na melhoria ou aumento da produção de


embriões de doadores designados. Além disso, o PIV pode ser utilizado para

recuperar material genético insubstituível após o abate para controlo de

doenças infecciosas ou abate por outras razões (30).Em vitro a fertilização

também tem sido utilizada para produzir milhares de embriões necessários à

investigação científica (26), incluindo esforços para produzir células estaminais

embrionárias. As técnicas constituintes de maturação de oócitos e de cultura de

embriões também são partes integrantes dos procedimentos de clonagem por

transferência nuclear de células somáticas e geração de gado transgênico que

produz proteínas farmacêuticas valiosas em seu leite (45).Em vitro a fertilização

por injeção intracitoplasmática de espermatozóides, tão proeminente na

reprodução humana assistida, é viável em bovinos, mesmo com esperma

liofilizado (36), mas ainda não é amplamente aplicada.

Alguns laboratórios relataram sucessos muito modestos na produção de

gestações a partir de PIV de embriões de bezerros (18, 22, 67), o que oferece o

potencial para aumento do ganho genético ao diminuir os intervalos entre

gerações (5). Além disso, a OPU provou ser segura e muito bem-sucedida em

vacas prenhes e é frequentemente usada quando há alta demanda por

descendentes de uma determinada vaca doadora ou quando os programas

MOET exigem descendentes adicionais. Oócitos com boa viabilidade foram

coletados uma ou duas vezes por semana, ou após pré-tratamento com

hormônio folículo-estimulante, no final da gestação, entre 90 e 150 dias, com

muito poucos abortos (23, 25).

Vários autores abordaram diretamente a questão do uso da PIV como substituto da

na Vivoprodução de embriões por procedimentos convencionais de transferência de

embriões (11, 29, 57). É claro que as gravidezes podem ser produzidas pela PIV a

partir de fêmeas doadoras que são inférteis tanto para a IA como para a tecnologia

convencional de transferência de embriões (20, 31, 41). No entanto, não está claro se

a PIV é uma alternativa realista à superovulação convencional e à transferência de

embriões para a produção de embriões de bovinos reprodutivamente saudáveis. Os

dados de 2002 mostram que, num cenário mundial

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base, mais de 80.000 embriões PIV (frescos e congelados) foram


transferidos (70). Isto é quase o dobro do número reportado para 2001,
mas é explicado, quase inteiramente, pelo aumento da atividade no
Brasil.

Uma unidade comercial de transferência de embriões na América do Norte

forneceu dados comparando a eficácia da transferência convencional de

embriões com a da PIV em bovinos (11). As taxas de sucesso da PIV (4,7

embriões por sessão de OPU, 48% de blastocistos de oócitos recuperados)

excederam em muito os resultados publicados de outros programas comerciais.

Os autores compararam diretamente os resultados da PIV e do convencionalna

Vivo programas e concluiu que o PIV produziria cerca de 3,4 vezes mais
embriões e 3,2 mais gravidezes num período de 60 dias, assumindo apenas uma

superovulação por doadora. Esta taxa é um pouco mais elevada do que a

relatada por outros profissionais de transferência comercial de embriões (ver

acima). Actualmente, sob condições comerciais na América do Norte, parece ser

mais caro produzir gravidezes por PIV do que com superovulação convencional e

transferência de embriões. Para a maioria dos criadores, esta tecnologia é uma

vantagem apenas para vacas extremamente valiosas que são inférteis ou que

não conseguem produzir embriões após superestimulação.

Determinação pré-natal do sexo

A determinação do sexo dos embriões bovinos antes da implantação, utilizando a

reação em cadeia da polimerase (PCR), é um serviço oferecido por um número

moderado de empresas de transferência de embriões (71). Contudo, a remoção da

biópsia do embrião requer um alto nível de habilidade do operador, e a biópsia do

embrião é uma técnica invasiva que resulta na ruptura da integridade do embrião.

zona pelúcidae alguma redução na viabilidade do embrião. Tanto este procedimento

como um programa de PCR bem-sucedido também exigem um nível mais elevado de

higiene e cuidados do que o frequentemente praticado na transferência de embriões

“na exploração”. Embora um número modesto de criadores de gado aceite

prontamente a sexagem de embriões, esta não é uma tecnologia que tenha sido

amplamente utilizada na indústria de transferência de embriões. Durante 2002,

quase 3.800 embriões sexados foram transferidos no Canadá, um terço deles após

congelamento e descongelamento (70).

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Num futuro próximo, estarão, sem dúvida, disponíveis ensaios de PCR para

identificar outras características de importância económica (6). A extensão do

mercado para esta tecnologia dependerá do valor dos genes em questão para os

criadores de gado. A seleção assistida por marcadores (MAS), baseada na

identificação de marcadores genéticos para alelos desconhecidos de características

valiosas, provavelmente tem um futuro semelhante (24). Assim como a genotipagem

de alelos específicos, o MAS pode ser potencialmente aplicado a biópsias de

embriões se marcadores suficientemente valiosos puderem ser identificados.

Atualmente existe um ensaio de PCR para detecção simultânea do gene de

deficiência de adesão de leucócitos bovinos e do sexo das biópsias de embriões (30).

É provável que sejam desenvolvidas técnicas de PCR que permitam a análise de um

grande número de marcadores de uma biópsia simultaneamente, levando ao

conceito de “diagnóstico de embriões”.

A tecnologia de citometria de fluxo usada para separar os espermatozoides contendo

X e Y em frações vivas foi aprimorada nos últimos dez anos (34, 35).

Aproximadamente 10 milhões de espermatozoides vivos de cada sexo podem ser

selecionados por hora (55), com uma taxa de pureza resultante de 90%. Em testes de

campo de IA envolvendo aproximadamente 1.000 novilhas, as taxas de gravidez após

a inseminação com 1 milhão de espermatozoides sexados e congelados foram

relatadas como sendo de 70% a 90% daquelas de controles não sexados inseminados

com 20 a 40 milhões de espermatozoides (56). Um estudo recente que comparou 574

bezerros produzidos a partir de espermatozóides separados por sexo com 385

bezerros controle concluiu que não houve diferenças na gestação, mortes neonatais,

facilidade de parto, peso ao nascer ou taxa de sobrevivência ao desmame (72). As

desvantagens da citometria de fluxo são a lenta velocidade de triagem, a diminuição

da viabilidade espermática (taxas de prenhez), especialmente em vacas doadoras

superovuladas, o custo do sêmen e a disponibilidade de sêmen de touros específicos

(2). É provável que o sémen sexado tenha maior utilização na PIV de embriões

bovinos num futuro próximo.

Produção de descendentes idênticos

Os embriões podem ser divididos antes da transferência para produzir gêmeos

idênticos. Foram relatadas taxas de gravidez de 50% ou mais por semiembrião,

resultando em uma taxa líquida de gravidez de mais de 100% por embrião

bovino original (27). A clonagem também pode ser usada para produzir

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descendência (9). A clonagem embrionária foi relatada pela primeira vez por

Willadsen (81). Ele mostrou que o programa de desenvolvimento dos núcleos de oito

e dezesseis células poderia ser reconfigurado para a fertilização pelo citoplasma do

oócito. O nascimento de cordeiros clonados a partir de células embrionárias

cultivadas em 1996 (14), e de 'Dolly', clonado a partir de uma célula mamária retirada

de uma ovelha adulta (84), resultou em uma grande investigação sobre a clonagem

em vários mamíferos . Os resultados contradizem dois modelos de longa data na

biologia do desenvolvimento, como segue:

a)que células embrionárias diferenciadas são irreversivelmente modificadas

b)que as células (neste caso, células somáticas) de mamíferos adultos não poderiam ser

reprogramadas para se desenvolverem em embriões.

Após o sucesso da clonagem em ovinos, também foram produzidos clones


bovinos, utilizando os seguintes tipos de células (revisado em 30):
– fibroblastos fetais
– células do oviduto e do cumulus

– células da granulosa

– células fibroblásticas da pele

- células musculares.

A transferência nuclear de células somáticas adultas também tem sido utilizada

para preservar a última vaca sobrevivente numa raça rara (80), e fibroblastos de

um touro de 21 anos foram utilizados com sucesso para produzir um bezerro

clonado (33). O progresso tem sido prejudicado por taxas muito baixas de

eficiência de clonagem, baixas taxas de gravidez, altas taxas de aborto e baixa

sobrevivência dos bezerros (21, 37, 77, 87). Consequentemente, o uso desta

tecnologia para multiplicação de gado de elite em larga escala depende da

melhoria da eficiência dos procedimentos (28). No entanto, foi relatado

recentemente que mais de 2.600 embriões bovinos clonados foram transferidos

para receptores num programa nos EUA (20). Além disso, muito recentemente,

foi relatado que era possível clonar bovinos com nada mais do que equipamento

normal de transferência de embriões (74).

Transgênicos

A utilização de células somáticas cultivadas para produzir clones permite que os trabalhadores

modifiquem geneticamente as células através da transferência de genes (16). Infelizmente,

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Rev. tecnologia. Desligado. interno. Episódio.,24(1) 14

taxas muito baixas de eficiência de clonagem, baixas taxas de gravidez, altas

taxas de aborto e baixa sobrevivência dos bezerros são comuns. A transfecção

substituiu em grande parte a técnica ineficiente de microinjeção pró-nuclear,

que foi usada durante os primeiros anos de produção de animais transgênicos.

A transfecção provou ser muito bem sucedida na produção de células

transgénicas com sequências de ácido desoxirribonucléico (ADN) relativamente

curtas. Contudo, sequências de ADN mais longas, que incorporam genes

grandes e complexos, foram incorporadas com sucesso em cromossomas

artificiais humanos, que foram então introduzidos em fibroblastos bovinos e,

finalmente, em clones bovinos (49). Este trabalho envolveu uma série de etapas,

incluindo a produção de fetos intermediários, que foram testados

geneticamente e depois utilizados para produzir o desejado gado clonado. Roble

outros.(49) relataram que foram produzidos 21 bezerros portadores de


cromossomos artificiais humanos e que pelo menos alguns desses

descendentes produziram anticorpos policlonais humanos.

A tecnologia transgênica também poderia ser usada para produzir linhagens clonais

de embriões que foram geneticamente modificados (13, 45, 49, 62, 78) para:

– melhorar a eficiência da produção de carne ou leite


– modificar a composição do leite

– melhorar a resistência a doenças.

Contudo, o uso desta tecnologia para multiplicar bovinos de elite ou

geneticamente modificados em larga escala depende de grandes melhorias na

eficiência dos procedimentos. É altamente provável que os embriões

transgénicos clonados sejam utilizados pela indústria farmacêutica muito antes

de poderem ser produzidos a um custo e com uma eficiência aceitável para a

indústria pecuária. Assim, a disponibilidade de clones transgénicos para a

indústria pecuária será provavelmente bastante limitada durante alguns anos.

Conclusão

A transferência comercial de embriões em bovinos tornou-se uma indústria


bem estabelecida em muitas partes do mundo, com mais de 500.000
embriões sendo transferidos anualmente. Embora isto resulte num número
muito pequeno de descendentes, considerando o número total de bezerros
nascidos em todo o mundo todos os anos, o impacto é grande devido à
qualidade dos animais produzidos. Ovulação múltipla e embrião

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A transferência de embriões está agora a ser utilizada para um verdadeiro melhoramento

genético, especialmente na indústria dos lacticínios, e a maior parte do sémen utilizado

hoje em dia provém de touros produzidos por transferência de embriões. No entanto, o

verdadeiro benefício da transferência de embriões é quena VivoOs embriões bovinos

produzidos podem ser especificados como livres de patógenos por meio de protocolos de

lavagem, tornando este procedimento ideal para programas de controle de doenças ou na

movimentação internacional de material genético animal. As técnicas melhoraram ao

longo dos últimos trinta anos para que os embriões congelados e descongelados possam

ser transferidos para recipientes adequados de forma tão fácil e simples como na IA.Em

vitroa produção de embriões e a sexagem de embriões e sémen também são realizadas

com sucesso, mas o tempo e o custo limitam a sua utilização generalizada. A clonagem de

células somáticas e a produção de embriões clonados transgênicos também

demonstraram ser possíveis, mas o alto custo e a ineficiência desses procedimentos

impedem seu uso em programas de melhoramento de gado neste momento. Uma

combinação de transferência de embriões, utilizando vacas altamente comprovadas

inseminadas com sémen de touros altamente comprovados, e inseminação artificial em

toda a indústria parece ser a utilização mais provável para a transferência de embriões

bovinos num futuro próximo.

Os resumos em francês e espanhol estão em preparação e serão


apresentados aqui. Por favor, informe se gostaria de ver uma ou
ambas as traduções. Não é necessário.

Currículo francês: título

Retomar

Mots-clés

Resumo em espanhol: título

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Rev. tecnologia. Desligado. interno. Episódio.,24(1) 16

Resumo

Palavras-chave

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