A bactria Escherichia coli foi descoberta em 1800 por Theodor Escherich.

O nome Escherichia coli, refere-se a um grupo de bactrias constitudo por diferentes estirpes que tm em comum vrias caractersticas (gnero: Escherichia; espcie: coli) (Veloso, 2006). A E. coli um microrganismo procariota, relativamente pequeno e simples. Esta uma bactria da famlia das Enterobacteriaceae mesfila com forma de bastonete, Gram-negativa e anaerbia facultativa. Este microrganismo fermenta a lactose e o seu habitat natural o lmen intestinal dos seres humanos e outros animais de sangue quente (Veloso, 2006). As estirpes comensais so geralmentes desprovidas de factores de virulncia, contudo, podem causar infeces em indivduos imunodepremidos. As estirpes patognicas, responsveis por diversas infeces intestinais, possuem numerosos factores de virulncia codificados em plasmdeos ou mesmo no cromossoma bacteriano. Vrios estudos demonstram que estas estirpes virulentas derivam das comensais, pela aquisio de operes de virulncia extra-cromossmicos (Costa e colaboradores, 2006).

Para a determinao de E. coli no sumo foram utilizados dois meios: um meio cromognico BCIG e um meio selectivo que permite isolar microrganismos Gram-negativos que fermentam a lactose. Foi em 1949, pela primeira vez, reportada a presena de uma enzima -Dglucuronidase em Escherichia coli por Buehler e colaboradores. A -D-glucuronidase produzida pela maioria das estirpes de E. coli de (cerca 97%) provenientes do ambiente ou do intestino humano. Embora esta enzima tambm tenha sido detectada noutros membros da famlia Enterobacteriaceae, incluindo Shigella e algumas estirpes de Salmonella, Yersinia, Citrobacter, Edwardia e de Hafnia, a sua presena est presente num nmero limitado de estirpes de cada uma destas espcies. Assim, a enzima -D-glucuronidase pode ser considerada um marcador vlido para a deteco de Escherichia coli em produtos alimentares e amostras de gua (Biokar e neogen, 2010 e 2006). Em 1990, foi utilizado com sucesso o substrato cromognico cido 5-bromo-4-cloro3indoxil- -Dglucornico (BCIG). Este quando incorporado em agar (agente solidificante) permite a deteco de E. coli em 24 h. Esta tcnica utiliza a presena de temperaturas e tempo adequados e inibidores, combinando estes factores com a actividade enzimtica possvel detectar selectivamente bactrias alvas (Figura 1) ( Biokar e neogen, 2010 e 2006). Os sais biliares n 3 so agentes de inibio selectivos contra bactrias Gram-positivas especialmente bacilos e estreptococos fecais, sendo a E. coli uma bactria Gram-negativa esta no inibida pela presena destes sais (Biokar e neogen, 2010 e 2006).

BCIG Substrato cromognico.

Triptona Fonte de Azoto.

Sais biliares Inibio de bacterias Grampositivas.

Agar Agente solidificante.

Figura 1 Caractersticas do meio com substrato cromognico.

O mecanismo seguinte (Figura 2) mostra como se procede a reaco da -Dglucuronidase. A Bactria E. coli absorve o substrato cromognico 5-bromo-4-cloro-3-indolil-D-glucuronido, BCIG. A enzima -D-glucuronidase cliva a ligao entre o cromforo 5-bromo-4cloro-3-indoxil e o -D-glucornico (oxidao dimerativa), fazendo com que as colnias tenham colorao azul pois o cromforo libertado colorido e acumula-se no interior das clulas (Biokar e neogen, 2010 e 2006).

Figura 2 - Mecanismo de reaco da enzima -D-glucuronidase.

importante voltar a referir que nem todas a estirpes de Escherichia coli possuem -Dglucuronidase, mais concretamente o sertipo mais perigoso 0157: H7, que forma colnias brancas. A incubao feita a 44 C em 24h (crescimento ptimo para E. coli) permite a reduo do crescimento de bactrias contaminantes( Biokar e neogen, 2010 e 2006).

No caso do segundo protocolo, foi utilizado um meio selectivo que permitiu isolar microrganismos Gram-negativos que fermentam a lactose. A lactose um hidrato de carbono que utilizado como nutriente pelos microrganismos, sendo importante na determinao dos mesmos. Quando uma bactria lactose positiva significa que esta utiliza a lactose como fonte de energia, no caso de ser lactose negativa indica que o microrganismo no consegue utilizar a lactose para produzir energia (Flournoy, 1990).

Quando a bactria Gram-negativa fermenta a lactose formado um subproduto cido. Este cido provoca o abaixamento do pH, levando a precipitao dos sais biliares tornando as colnias vermelhas escuras. Alguns microrganismos que fermentam a lactose, tais como Escherichia coli, produzem um precipitado de sais biliares a volta das colnias. Neste meio introduzido um factor de stress para outros microrganismos, o NaCl. Este meio incubado a 44 C durante 40- 48h, se houver crescimento num tempo menor, o microrganismo presente poder no ser E. coli (Flournoy, 1990).

Biokar (2010). TBx agar. Acedido em: 26.05.2012, URL: http://www.solabia.fr/solabia/produitsDiagnostic.nsf/0/C79DF52317778F70C12574C700383D 89/$file/TDS_BK146_BM069_v7.pdf. Costa P., Nunes, T., Pires-Vaz, P. e Bernardo, P. (2006). Reprodutibilidade e especificidade dos mtodos de deteco de Escherichia coli em guas e lamas colhidas em estaes de tratamento de guas residuais. Revista portuguesa de cincias veterinrias, 101: 283. Flournoy, D., Wongpradit, S., e Silberg, S. ( 1990) Facilitating Identification of LactoseFermenting Enterobacteriaceae on MacConkey Agar. Proc. Okla. Acad. Sci. 70:5 8. Neogen (2006). DC MEDIUM with BCIG. Acedido http://www.neogen.com/acumedia/pdf/ProdInfo/7704_PI.pdf. em: 26.05.2012, URL:

Tryland, I. e Fiksdal, l. (1998). Enzyme Characteristics of b-D-Galactosidase- and b-DGlucuronidase-Positive Bacteria and Their Interference in Rapid Methods for Detection of Waterborne Coliforms and Escherichia coli. American Society for Microbiology, 64, 3: 1018.

Veloso, A. ( 2006) Optimizao de Estratgias de Alimentao para a Identificao de Parmetros de um Modelo de E. coli. Tese de doutoramento em engenharia qumica e biolgica pela universidade do Minho. 14-15 pp.