MEIOS DE CULTURAS

Meio Basal de Eagle (BME) aa essencias

Meio Mnimo Essencial de Eagle (MEM) + aa

Meio MEM modificado por Dulbecco (DMEM) 4x +

aa

RPMI (linfcitos)

Soro fetal bovino

MEIOS DE CULTIVOS: ADITIVOS

ANTIBITICOS: estreptomicina (Gram -), penicilina (Gram
+), anfotericina
TAMPO pH: bicarbonato (, pH, metb. glic.), HEPES, etc.
O pH : maioria: 7.4
linhagens de fibroblastos 7.4 - 7.7
clulas epidrmicas 5.5
SORO FETAL: bovino, ovino, cavalo, humano. 10%, (250%), fatores de crescimento, Transporte ( glic / Fosf/ aa)
e permeabilidade, inatv.
ADITIVOS ESPECFICOS: suplemento de piruvato, Lglutamina, glicose, etc.

Composio de um Meio Tpico Adequado

para o Cultivo de Clulas de Mamferos
Aminocidos

Vitaminas

Sais

Outros

Protenas (necessrias em meios sem

soro, quimicamente definidos)

Arginina
Cistina
Glutamina
Histidina
Isoleucina
Leucina
Lisina
Metionina
Fenilalanina
Treonina
Triptofano
Tirosina
Valina

Biotina
Colina
Folato
Nicotinamida
Pantotenato
Piridoxal
Tiamina
Riboflavina

NaCl
KCl
NaH2PO4
NaHCO3
CaCl2
MgCl2

Glicose
Penicilina
Estreptomicina
Vermelho de fenol
Soro

Insulina
Transferrina
Factores especficos de crescimento

Preparo do meio de cultura

10% de soro fetal bovino

1 mL antibitico/antimictico

1 mL L-glutamina

100 mL de meio de cultura RPMI 1640

Preparo do meio de cultura

Esterilizao por autoclavao ( semiaberto);
Componentes termosensveis;
Esterilizao por filtrao (Filtros 0,22 m):
filtrao sob presso > 10L; filtrao a vcuo entre 0,1 a 10L; filtrao
por seringa at 100mL.

Teste de esterilidade

Bactri
a

Clulas de
tecido

Cultivadas
em
suspenso

Cultivadas
em
superfcie
slida

Taxa de
Duplicao
em 30 min.

Duplica
o em 18 24 hrs

Caractersticas principais
Mudana repentina de pH;
Turbidez do meio ;
Deteriorao da cultura: queda de
viabilidade, alteraes no
metabolismo

A esterilizao

depende do tempo mnimo de esterilizao do volume de

meio no recipiente a esterilizar. Tempo mnimo de esterilizao em autoclave (121C, 1 bar) para meios
de cultura

Volume
de
meio
por
recipiente
(ml)
25

Volume de
Tempo mnimo de
meio
autoclavagem
por
(min)
recipiente
Esterilizao dos
(ml)
meios de cultura
20
500

Tempo mnimo de
autoclavagem
(min)
35

50

25

1000

40

100

28

2000

48

250

31

4000

63

Exceo: sacarose, aa.