Efeito antimicrobiano de cimentos obturadores endodnticos com e sem iodofrmio sobre o Enterococcus faecalis

Antimicrobial effect of endodontic filling cements with and without iodoform on Enterococcus faecalis
Devanir de Arajo Cervi1, Patrcia Amoroso de Andrade2, Bruna Rocha Minuncio3, Gisele Piza3, Ana Emlia Farias Pontes4
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Departmento de Endodontia, Curso de Odontologia, Fundao Educacional de Departamento de Microbiologia, Curso de Odontologia, Fundao Educacional de Curso de Odontologia, Fundao Educacional de Barretos, SP, Brasil Curso de Mestrado em Cincias Odontolgicas, Fundao Educacional de Barretos,

Barretos, SP, Brasil

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Barretos, SP, Brasil

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SP, Brasil Endereo para correspondncia: Devanir de Arajo Cervi: dacervi@ig.com.br RESUMO O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito antimicrobiano in vitro de trs cimentos endodnticos com ou sem iodofrmio. Para isto, Enterococcus faecalis foram aplicados em 18 placas de gar de Mller-Hinton. Em cada uma, foram depositadas trs pores separadas de cimento endodntico. Trs placas foram usada por grupo experimental: cimento base de xido de zinco e eugenol (grupo OZE), cimento OZE mais iodofrmio (grupo ZOEi), cimento base de hidrxido de clcio (grupo HC), cimento HC mais iodofrmio (grupo HCi), cimento resinoso base de hidrxido de clcio (grupo RHC), cimento RHC mais iodofrmio (grupo RHCi). Os halos de inibio foram medidos no sentido horizontal e vertical, e os dados analisados estatisticamente pelos testes de Kruskal-Wallis seguido do mtodo de Dunn. Os halos de inibio do grupo

RHCi foram significantemente menores que os dos grupos OZE (nos perodos de 12h, 24h, e 36h), OZEi e HC (ambos nos perodos de 12h, 24h, 36h e 48h), e HCi (nos perodos de 12h, 24h e 48h). Dentro das limitaes deste estudo pode-se concluir que o uso de iodofrmio no trouxe benefcios quando adicionado aos cimentos base de xido de zinco e eugenol, e base de hidrxido de clcio. Adicionalmente, seu emprego levou diminuio do efeito antimicrobiano do cimento resinoso base de hidrxido de clcio. O desenvolvimento de estudos complementares proposto para confirmar estes achados in vivo. Palavras chaves: Iodofrmio, Enterococcus faecalis, Cimentos obturadores ABSTRACT This study aims to evaluate the in vitro antimicrobial effect of three endodontic sealers with or without iodoform. For this, Enterococcus faecalis were spread on 18 MllerHinton agar plates. In each one, three separated portions of an endodontic sealer were applied. Three plates were used for each experimental group: zinc oxide eugenol based cement (ZOE group), ZOE cement plus iodoform (ZOEi group), calcium hydroxide based cement (CH group), CH cement plus iodoform (CHi group), calcium hydroxide and resin based cement (CHR group), CHR cement plus iodoform (CHRi). The inhibition zones were measured in horizontal and vertical, and data was statistically analyzed by Kruskal-Wallis test followed by Dunn method. Inhibition zones for CHRi group was significantly lower than those from groups ZOE (12h, 24h, and 36h periods), ZOEi and CH (both on 12h, 24h, 36h and 48h periods), and CHi (12h, 24h and 48h periods). Within the limits of this study, it was concluded that the use of iodoform was not beneficial when added to sealer based on zinc oxide and eugenol, and based on calcium hydroxide. Additionally, its use leads to a decrease in the antimicrobial effect of sealers based on resin and calcium hydroxide. The development of complementary studies is suggested to confirm those finding in vivo. Keywords: Iodoform, Enterococcus faecalis, sealers

INTRODUO O Enterococcus faecalis uma bactria que pertence ao grupo dos estreptococos D. Caracteristicamente, essa bactria gram-positiva, anaerbia facultativa, hemoltica e comensal encontrada em vrias partes do organismo como boca, aparelho digestivo, animais, pssaros, no solo e na gua [CHAMPAGNE et al, 2011]. responsvel por oitenta por cento de todas as infeces causadas por bactrias do gnero Enterococcus, podendo causar infeces no trato urinrio, corrente sangnea, abdmen, endocrdio, trato biliar e em feridas provocadas por queimaduras, alm de infeces de origem endodntica [ZEHNDER et al,2009; GASPAR et al, 2009]. Tem sido associada a leses endodnticas de difcil tratamento, e seus produtos txicos so responsveis pelo desenvolvimento e persistncia da periodontite apical de origem endodntica [KAYAOGLU et al, 2004]. a espcie bacteriana mais frequentemente encontrada quando identificada a flora microbiana no interior dos canais radiculares de dentes com insucesso no tratamento endodntico [FISHER et al, 2009; GOMES et al, 2006]. A sua erradicao dos canais radiculares com o preparo biomecnico e com a utilizao irrigantes bactericidas e curativos anti-bacterianos muito difcil [PORTENIER et al,2003; BRINSTER et al, 2007] e ele pode sobreviver at 60 dias aps a obturao do canal radicular [VIVACQUA-GOMES et al, 2005]. O Enterococcus faecalis podem permanecer viveis dentro dos tbulos dentinrios podendo aderir s paredes do canal radicular, acumular e formar comunidades organizadas em forma de biofilme. Este fator ajuda a resistir sua destruio, permitindo que as bactrias tornarem-se mil vezes mais resistente a fagocitose, aos anticorpos, e aos antimicrobianos do que os organismos no produtores de biofilme [MATHEW et al, 2010]. Ele um microorganismo detectado em pacientes assintomticos, com infeces endodnticas persistentes [RAS et al, 2004]. A sua prevalncia est na faixa de 24% at 77% [STUART et al, 2006]. Este achado pode ser explicado pela sobrevivncia e vrios fatores de virulncia, incluindo a sua capacidade de competir com outros microorganismos, invadir tbulos dentinrios e resistir privao nutricional [VAGHELA et al, 2011]. Por sua vez, o iodofrmio foi descoberto por Serullas em 1822, e introduzido na teraputica por BOUCHARADT em 1836. Este material facilmente reabsorvido na regio periapical e no provoca reao de corpo estranho, com uma potente propriedade germicida [BALLAL et al, 2006]. Age como detergente, desinfetante de intensidade

mdia e desodorizante em decorrncia de sua capacidade de oxidao e do poder redutor do iodo sobre as secrees bacterianas. Estimula a formao de um tecido de granulao pela influncia especfica do iodo sobre o desenvolvimento celular, e proporciona uma ligeira anestesia [ESTRELA et al, 2006]. O iodofrmio libera iodo em estado nascente ao entrar em contato com o tecido periapical, estimula a formao de um novo tecido de granulao, o que contribui para a posterior reparao ssea [BARKER et al, 1971]. As propriedades ideais de um cimento endodntico so: ser homogneo, promover selamento adequado, ter radiopacidade, no sofrer contrao aps sua presa, no manchar a estrutura dentria, ser bactericida ou bacteriosttico, tomar presa lentamente, ser solvel aos fludos bucais, bem tolerados pelos tecidos periapicais e solvel aos solventes comuns [FERNANDES et al, 2008]. O presente trabalho tem como objetivo avaliar in vitro o efeito antimicrobiano de trs tipos de cimentos obturadores de canais radiculares ( base de xido de zinco e eugenol, hidrxido de clcio, ou resinoso base de hidrxido de clcio) acrescido ou no de iodofrmio frente bactria Enterococcus faecalis.

2. MATERIAL E MTODOS Cem miliglotas da bactria Enterococcus faecalis (ATCC 29212) foram inoculadas em um tubo de ensaio previamente esterilizado, contendo 1ml em meio BHI. O tubo foi incubado a 37C por 48 horas e, aps esse perodo, a sua diluio foi ajustada de acordo com a escala de MacFarland, correspondendo a uma concentrao de 1,5 x 108. A suspenso foi semeada por difuso em dezoito placas de Petri contendo 20 ml de gar Mller-Hinton. Em seguida, trs poos em cada placa foram confeccionados no gar com auxlio de uma pipeta de Pasteur, com 3 mm de dimetro e 5mm de profundidade. As placas ento foram divididas em 6 grupos com trs placas cada: cimento base de xido de zinco e eugenol [grupo OZE (FillCanal, Technew Indstria e Comrcio, Brasil)], cimento OZE mais iodofrmio (grupo OZEi), cimento base de hidrxido de clcio [grupo HC, (Sealapex, SybronEndo Corporation, Orange, CA, EUA)], cimento HC mais iodofrmio (grupo HCi), cimento resinoso base de

hidrxido de clcio (grupo RHC (Sealer 26 (Dentsply Industria e Comrcio Ltda, Petrpolis, RJ, Brasil)), cimento RHC mais iodofrmio (grupo RHCi). Nos grupos OZEi, HCi e RHCi foram acrescidos 50 mg de iodofrmio (Biodinmica Qumica e Farmacutica Ltda, Ibipor, PR, Brasil) quando de suas espatulaes.. Aps a manipulao dos cimentos; com e sem iodofrmio; de acordo com as instrues dos fabricantes, os poos foram preenchidos com os mesmos com o auxlio de uma seringa plstica de 3 ml. As placas de Petri foram ento incubadas a 37 C pelos perodos de 12, 24, 36 e 48 horas, e os halos de inibio apresentados foram mensurados. As mensuraes em milmetros foram realizadas no sentido vertical e horizontal com o auxlio de uma rgua milimetrada e anotadas em uma tabela prpria. ANLISE ESTATSTICA Todas as amostras foram includas na avaliao. Os valores apresentados correspondem mdia das medidas verticais e horizontais dos halos de inibio. A anlise estatstica foi desenvolvida por meio de um programa especfico (BioEstat 5.0, Sociedade Civil Mamirau/ MCT CNPq, Belm, Brasil), considerando a hiptese nula baseada na ausncia de diferena entre os grupos, e um nvel de significncia de 5%. Os dados experimentais foram submetidos ao teste de normalidade ShapiroWilk. Uma vez que apresentaram distribuio no-normal, foi empregado o teste Kruskal-Wallis seguido do teste de Dunn. RESULTADOS Os halos de inibio do grupo RHCi foram significantemente menores (teste Kruskal Wallis, p = 0,001) que os dos grupos OZE (nos perodos de 12h, 24h, e 36h), OZEi e HC (ambos nos perodos de 12h, 24h, 36h e 48h), e HCi (nos perodos de 12h, 24h e 48h) (Tabelas 1, 2 e 3, e Fig.1).

Tabela 1 Valores, mdias e desvio-padro (DP) dos halos de inibio (em milmetros) obtidos com o uso dos cimentos OZE e OZEi. Grupo OZE 12 h 24 h 0,65 1,40 0,70 2,00 0,75 1,60 1,60 1,40 1,45 1,65 1,45 1,35 1,85 0,65 1,55 0,70 1,35 0,65 1,3 1,3 0,4 0,5 36 h 0,65 0,60 0,70 1,65 1,60 1,70 2,15 1,80 1,50 1,4 0,6 48 h 0,85 0,90 0,80 1,60 1,70 1,70 2,30 1,90 1,60 1,5 0,5 Grupo OZEi 12 h 24 h 1,50 1,00 1,80 1,05 0,90 1,20 1,10 1,20 1,10 0,85 1,10 1,00 1,05 1,55 1,00 1,25 1,00 1,55 1,2 1,2 0,3 0,2 36 h 1,00 1,05 1,20 1,00 1,00 1,20 1,55 1,50 1,65 1,2 0,3 48 h 1,90 1,95 2,10 1,40 1,00 1,15 1,70 1,65 1,95 1,6 0,4

Mdia Desvio-padro

Tabela 2 Valores, mdias e desvio-padro (DP) dos halos de inibio (em milmetros) obtidos com o uso dos cimentos HC e HCi. Grupo HC Grupo HCi 12 h 24 h 36 h 48 h 12 h 24 h 36 h 48 h 1,35 1,35 1,30 1,55 0,90 1,20 1,20 1,25 0,85 1,20 1,50 1,55 0,95 1,10 1,00 1,35 1,10 1,00 1,40 1,20 1,10 1,10 1,05 1,10 1,10 1,30 1,50 1,45 1,35 1,45 1,40 1,85 1,20 1,35 1,10 1,65 1,45 1,20 1,45 1,55 1,25 1,15 1,40 1,55 1,20 1,30 1,55 1,70 0,85 1,30 1,30 1,60 0,85 1,10 1,20 1,20 1,15 1,45 1,10 1,50 1,00 0,90 1,10 1,15 1,20 1,25 1,50 1,10 1,00 1,00 1,00 1,35 Mdia 1,1 1,3 1,3 1,5 1,1 1,2 1,2 1,4 Desvio-padro 0,2 0,1 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,3 Tabela 3 Valores, mdias e desvio-padro (DP) dos halos de inibio (em milmetros) obtidos com o uso dos cimentos RHC e RHCi. Grupo RHC 12 h 24 h 0,60 0,95 0,60 1,00 0,65 1,00 0,70 0,90 0,95 0,95 1,00 0,75 0,90 0,70 36 h 0,80 0,75 0,80 0,75 0,95 0,90 1,00 48 h 1,00 0,95 1,00 0,90 1,00 1,10 1,10 Grupo RHCi 12 h 24 h 0,50 0,50 0,60 0,65 0,60 0,70 0,55 0,65 0,50 0,60 0,55 0,60 0,55 0,65 36 h 0,80 0,90 0,75 0,75 0,70 0,85 0,60 48 h 0,85 0,95 0,90 0,85 0,90 1,00 0,90

1,05 0,95 Mdia 0,8 Desvio-padro 0,2

0,70 0,70 0,9 0,1

1,05 1,00 0,9 0,1

1,00 1,10 1,0 0,1

0,60 0,55 0,6 0,0

0,60 0,50 0,6 0,1

0,80 0,75 0,8 0,1

0,85 0,90 0,9 0,1

Figura 1 Grfico do tipo Box-Plot (mdia, desvio-padro, valores mnimo e mximo) do halo de inibio de cada grupo.

DISCUSSO Uma das principais propriedades biolgica do cimento obturador de canal radicular ser bactericida ou pelo menos bacteriosttico (MAISTO, 1975), para sanear as bactrias que porventura escaparam durante o preparo biomecnico do canal radicular e do curativo de demora. O iodofrmio acentuadamente radiopaco, volatiliza-se lentamente em contato com o ar temperatura ambiente, porm de forma mais rpida quando a 37C. Alm disso, agregado a outros anti-spticos perfeitamente tolerado pelos tecidos periapicais, ainda que em grandes sobreobturaes. O iodofrmio libera iodo em estado nascente ao entrar em contato com o tecido periapical, estimulando a formao de um novo tecido de granulao, o que contribui para a posterior reparao ssea. Ele atua em melhores condies quando privado de oxignio, em meio alcalino (PUCCI, 1945). O Enterococcus faecalis provavelmente a espcie que melhor se adapta e tolera as condies ecologicamente exigentes de um canal radicular preenchido. A erradicao do microorganismo dos canais radiculares com o preparo biomecnico e a utilizao de irrigantes bactericidas e curativos antibacterianos muito difcil (ORSTAVIK, 2005; SAHA et al, 2010). Os Enterococcus faecalis inoculados em canais radiculares mantiveram a viabilidade (vivo) por 12 meses. As implicaes clnicas so de que os Enterococcus faecalis sepultados no momento da obturao podem proporcionar a origem de colnias e, longo prazo poder promover uma subseqente infeco em dentes obturados sem nutrientes adicionais (POETENIER, 2005). Portanto, o nosso trabalho foi o de averiguar a eficincia da somatria bactericida dos cimentos obturadores de canais radiculares junto com a do iodofrmio na atuao contra as bactrias Enterococcus faecalis. Analisando a ao antibacteriana dos cimentos obturadores de canais radiculares AH Plus, EndoFill e Sealer 26 frente s bactrias Enterococcus faecalis, Pseudomona aeroginosa e Cndida albicans, inoculadas em BHI, halos de inibies foram apresentados em ordem crescente: AH Plus, Sealer 26 e EndoFill (cimento base de xido de zinco e eugenol) (MOHAMMADI, 2009). Na avaliao de seis cimentos obturadores de canais radiculares (Endofill, Acroseal, Sealer 26, Sealapex, Endomethasone N e AH Plus), frente ao Enterococcus faecalis em difuso em agar por 48 horas, foi observado que os cimentos base de xido de zinco e eugenol obtiveram melhores capacidades antimicrobianas quando

comparados com os outros cimentos (SEDGLEY et al, 2005), no que corrobora com os nossos resultados. Dentre os cimentos obturadores base de hidrxido de clcio presentes no mercado, o Sealapex apresenta grande biocompatibilidade e um bom selamento marginal apical, mas no possui a radiopacidade desejada, motivo pelos quais muitos profissionais passaram a interagir com o iodofrmio para tal necessidade (VALERA et al, 2010). O acrscimo de iodofrmio ao cimento Sealapex praticamente no alterou a sua propriedade biolgica (bactericida) (KOOPER et al, 2007) o que tambm ns observamos em nosso experimento, onde as mdias dos perodos praticamente foram as mesmas. Entretanto sabemos que bactrias como o Enterococcus faecalis e a Cndida Albicans so resistentes ao bactericida do hidrxido de clcio (VAGHELA et al, 2011). Oliveira, 2010, em seu trabalho com Enterococcus faecalis, pseudomonas pigmentada, cndida sp, nos alertou que so freqentemente reconhecidas como resistentes ao de agentes fsicos, qumicos, antibiticos e quimioterpicos sendo que os cimentos endodnticos Sealer 26 e Fillcanal foram os que apresentaram as maiores mdias de atividade antimicrobiana corroborando em parte com a pesquisa, pois o cimento Sealer 26 foi o que apresentou os piores resultados tanto com a adio de iodofrmio como sem. O Sealer 26, um derivado do cimento AH26 acrescido de hidrxido de clcio, apresentou alguma ao frente ao microorganismo sem e com iodofrmio, em todos os perodos analisados. Sua ao, no grupo sem iodofrmio, provavelmente no se deve ao hidrxido de clcio e, sim, ao formaldedo liberado da hexametilenotetramina (VALERA et al, 2005). O cimento FillCanal que similar ao de Grossmam, proporcionou os maiores halos de inibio do que os outros cimentos pesquisados, talvez porque as combinaes de veculos para estes materiais o leo de eugenol extrado de cravo, que proporciona efeito antimicrobiano. Como tambem um composto fenlico, tem uma importante ao sobre as bactrias, fungos e formas vegetativas (ZEBRAL et al, 1997). Trabalhos futuros devem ser desenvolvidos para esclarecer porque o iodoformio perdeu seu efeito antimicrobiano; se frente a outras bacterias e outros cimentos obturadores o uso do iodoformio seria benefico; avaliao se o uso do iodoformio traria beneficios biologicos quanto a reparao dos tecidos periapicais.

CONCLUSES Podemos concluir dentro das condies in vitro deste estudo que, o cimento base de xido de zinco e eugenol (FillCanal) com e sem iodofrmio acrescido em sua composio, e, estatsticamente, promoveu um melhor desempenho antimicrobiano frente bactria Enterococcus faecalis, seguido em ordem decrescente pelos cimentos Sealapex e Sealer 26. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS BALLAL, S.; GUPTA, T.; KANDASWAMY, D. Management of A Retained Primary Maxillary Second Molar with C-Shaped Canal Confirmed with The Help of Spiral Computed Tomography - A Case Report, Endodontology, v. 18 , p. 14-19, 2006. BARKER, B. C. W.; LOCKETT, B. C. Endodontic experiments with resorbable paste, Australian Dental Journal, v. 16, p. 364372,1971. BRINSTER, S.; FURLAN, S.; SERROR P. C-Terminal WxL Domain Mediates Cell Wall Binding in Enterococcus faecalis and Other Gram-Positive Bacteria, Journal of bacteriology, v. 189, p. 124453, 2007. CHAMPAGNE, J.; DIARRA, M.S.; REMPEL, H.; TOPP, E.; GREER, C.W.;

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