Roteiro de Prtica de bioqumica: ENZIMAS

PROPRIEDADES DA UREASE 1 - REAO DA UREASE COM O BIURETO TCNICA Tubo 1. 3 gotas de soluo de urease + 1 mL de biureto Tubo 2. 1 mL de biureto Comparar as cores dos dois tubos. E plicar. 2 - TESTE DE ATIVIDADE !ela ao da urease a ur"ia se co#$erte em am%#ia e &cido carb%#ico C' (N)2*2 + 2 )2' )2 C'3 )2' + C'2 )2C'3 + N)3

A ao e#+im&tica da urease pode ser demo#strada ,a+e#do-a reagir com uma soluo de ur"ia ,racame#te tampo#ada a p) ./0 co#te#do o i#dicador $ermel1o de ,e#ol (amarelo ./0 2/3 $ermel1o*. 4ob a ao da e#+ima ,ormar& am%#ia su,icie#te par sobrepu5ar a ao do tampo e o p) subir&. A cor da soluo e#to mudar& de amarelo para $ermel1o. TCNICA !ipetar 1/6 mL de soluo de ur"ia (0/78/ p) ./0* #um tubo de e#saio e adicio#ar 3 gotas de soluo de urease. 8isturar. 'bser$ar a muda#a de colorao ap9s 3 mi#utos. 3 - ESPECIFICIDADE A urease " especi,icada pelo seu substrato/ a ur"ia. !odemos demo#strar isso/ reagi#do-a com deri$ados da ur"ia/ como e emplo tem a tiour"ia (N) 2 - C4 : N)2*. TCNICA Em um tubo adicio#e 1/6 mL de soluo de tiour"ia (0/78/ p) ./0* + 3 gotas de soluo de urease e compare com o tubo do teste de ati$idade (reao 2*. E plicar o ;ue ocorreu. 4 - DESNATURAO PELO CALOR TCNICA 8isturar #um tubo de e#saio 1 mL de &gua destilada com 3 gotas de soluo de urease. Le$ar ao ba#1o-maria a 100<C dura#te 6 mi#utos. !ipetar em outro tubo 1/6 mL de soluo de ur"ia e adicio#e 0/6 mL da soluo de urease ,er$ida. Aguardar 6 mi#utos. Comparar com o tubo do teste de ati$idade (reao 2*. E plicar. 5 - INIBIO POR SAIS DE MERCRIO 's grupos (-4)* sul,idr=licos so esse#ciais para a ati$idade da urease. Eles podem ma#ter ou tal$e+ co#stitua parte do ce#tro ati$o da e#+ima. 4e ,orem o idados a e#+ima se tor#ar& i#ati$a. 2(-4)* + )gCl2 4 - )g - 4 + 2)Cl

>eali+ar os testes abai o? T@A'4 1 2 @>EA4E 3 gotas 3 gotas BC@A 1 mL 1 mL )gCl2 6D 6 gotas @>IA 1/6 mL 1/6 mL C'L'>AEF'