Esterilizao e Desinfeco

O objectivo fundamental o estudo de cada microorganismo per si, para posteriormente o poder enquadrar e observar nas suas relaes com outros elementos, no s no seu ecossistema, mas tambm nas mais diversas condies (muitas das vezes adversas) que se usam in vitro. Este estudo s possvel atravs do isolamento e obteno de culturas puras, isto , o conjunto de indivduos oriundos de uma clula-me que a priori, reagiram de igual modo frente a padres pr-estabelecidos. Uma condio fundamental a utilizao de meios esterilizados, isto , ambientes isentos de todos os microorganismos vivos nomeadamente de bactrias ou formas de resistncia. Assim sendo, necessrio ter a noo de esterilizao e desinfeco.

Esterilizao: consiste na completa destruio e eliminao de todos os microorganismos na

forma vegetativa e esporulada. Esta destruio pode ser efectuada atravs de mtodos fsicos e/ou qumicos.

Desinfeco o processo que destri ou inactiva microrganismos na forma vegetativa, mas

geralmente no afecta os esporos bacterianos. Os mtodos utilizados podem ser fsicos ou qumicos.

Antispticos so desinfectantes que podem ser utilizados sobre a pele e em casos especiais as
mucosas.

Agentes fsicos

1. Calor hmido 2. Autoclavagem aquecimento a 121C durante 15-20 min a 1.02 atm. Este processo
o mais eficaz, pois o seu poder de penetrao maior. Numa atmosfera hmida e a uma temperatura elevada os microrganismos morrem quando se d a coagulao e desnaturao das enzimas e protenas que fazem parte da sua estrutura. Ex: autoclave um aparelho essencial no laboratrio de microbiologia, sendo usado para esterilizar meios de cultura e outros materiais contaminados termoestveis, como batas, compressas, etc. Nos laboratrios tambm prtica corrente a descontaminao de todo o material infectado, quer do que vai ser colocado posteriormente no lixo, quer do que vai ser posteriormente reutilizado.

3. Pateurizao
LTH (low temperature holding) aquecimento a 62.8 C 65.6C, por 30 minutos. HTST (high temperature short time) aquecimento a 71.7C, 15 segundos. UHT (ultra high temperature) aquecimento a 141C, 3 segundos.

4. Ebulio
Consiste no aquecimento a 100C durante 5 a 10 minutos. Destri todas as formas vegetativas presentes na gua e alguns dos endsporos, contudo, alguns esporos resistem a 100C por perodos de tempo superiores a uma hora (ex. Bacillus subtilis).

5. Tindalao
Processo muito antigo, utilizado para esterilizao de meios de cultura e solues nutritivas. Consiste no aquecimento a 80-100C, durante 30-60 min em 3 dias consecutivos.

6. Calor Seco
Aquecimento em forno ou estufa a 180C durante 1-2 horas. Destri os microrganismos por oxidao dos seus constituintes celulares essenciais e coagulao das suas protenas. Este mtodo usado principalmente na esterilizao de material de vidro, metal, de certos produtos nos quais a percentagem de gua muito pequena e no se deixam penetrar pela humidade (ex.: vaselina), bem como de certos produtos termoestveis que necessrio manter no estado seco. Todo o material deve estar devidamente limpo, seco, empacotado e cuidadosamente acondicionado. Contudo, no se deve carregar demasiado a estufa, evitando a falta de espao que dificulta a livre circulao de ar quente.

7. Incinerao
Utilizado em larga escala para distribuio (??) de resduos hospitalares. - aquecimento ao rubro as elevadas temperaturas a que se submetem estes materiais (fios e ansas de platina e pinas) matam rapidamente os microorganismos presentes por carbonizao.

8. Radies
Radiaes ionizantes (X e Gama)
So radiaes de elevada energia e poder de penetraao. Actuam sobre os constituintes da clula, nomeadamente DNA e protenas celulares. Usam-se para esterilizao de material plstico (seringas, placas de Petri, etc) e de borracha.

Radiaes no ionizantes (raios UV [240-280 nm])

So radiaes de fraca energia e fraco poder de penetrao. Actuam a nvel do DNA, impedindo a sua replicao ou alterando-o. Usam-se na desinfeco do ar de gabinetes, recintos hospitalares (salas de operao), cmaras de fluxo, etc. Estas radiaes so altamente agressivas para a pele e para os olhos, pelo que nunca se deve trabalhar na sua presena.

9. Esterilizao por filtrao

Utiliza-se sempre que se pretende eliminar as bactrias dos produtos lquidos que se alteram com o calor (termolbeis) ou de gases (ex. Ar atmosfrico). Este processo difere dos outros mtodos de esterilizao porque no envolve a destruio de microorganismos, mas sim a sua remoo atravs da passagem por filtros sintticos, granulares ou fibrosos. Os filtros so de material diverso tal como: amianto, porcelana, celulose (acetato de celulose, nitrocelulose ou policarbonato). Os filtros de membrana de 0.2 um (micrmetros) so utilizados para filtrar soro, plasma, antibiticos, vitaminas, etc.

Agentes qumicos
1.

Esterilizantes agentes qumicos que eliminam de um objecto ou material biolgico

todas as formas de vida microbiana.

xido de etileno - um gs altamente solvel em gua e violentamente explosivo. Utilizado

na esterilizao de material termosensvel. A esterilizao faz-se em cmaras apropriadas. Actualmente tem vindo a ser substitudo pelo plasma de perxido e pelo formaldedo a 2% a baixa temperatura. Estes mtodos tm a vantagem de no necessitarem de perodo de arejamento exigido pelo xido de etileno.

Formaldedo e gluteraldedo

2.

Desinfectantes e antispticos

os desinfectantes podem ter sobre os

microrganismos as seguintes aces:

- Bactericida / Bacteriosttico (impedindo a clula de se dividir) / Bacterioltico (efectuando a lise da parede da clula) - Fungicida / Fungisttico - Virucida / Virusttico - Esporicida Bactericida induz a morte celular sem ocorrer lise. Bacteriosttico inibe crescimento e diviso, sem morte celular. Bacterioltico induz a morte celular por lise.

Compostos fenlicos inactivam as protenas e podem interagir com o DNA. Muito

usados na descontaminao de instrumentos clnicos.

lcool (etanol, propanis) coagulam as protenas e solubilizam lpidos de que resulta

a destruio das membranas celulares.

Cloro (hipoclorito e compostos N-clorados) oxidantes que ocnduzem

destruio da actividade de protenas celulares.

Iodo (tintura de iodo ou iodopovidona) destruio da actividade de protenas e

enzimas essenciais por oxidao.

Perxido de Hidrognio (gua oxigenada) oxidante que reage com componentes

celulares essenciais, como os lpidos membranares e DNA.

Sais metlicos e compostos mercuriais (nitrato de prata, mercurocromo, mertiolato): inactivao das protenas celulares. Detergentes catinicos (compostos quaternrios de amnio -

cetrimida): inactivam as protenas e alteram a membrana citoplasmtica.

Clorexidina: parece ligar-se s superfcies celulares, ocasionando a desorganizao

estrutural e funcional da membrana.

Ozono.

Actividade Microbiana dos Detergentes Qumicos

Desinfectante lcool Gluteraldedo Ortoftalaldedo Outros Aldedos*** Dixido de cloro cido peractico*** Comp. Peroxigenados*** Quaternrios de amnia*** Soro fisiolgico superoxidado Esporos 0 +* +* +* +++ +++ Micobactrias ++ +++* +++ +++ +++ +++ Bactrias +++ +++ +++ +++ +++ +++ Vrus ++ +++ +++ +++ +++ +++

+++

++

++

++

++

+++

+++

+++

+++

0 nenhum ; + fraca ; ++ moderada ; +++ boa ; * a actividade esporicida dos aldedos ncessita de contacto prolongado (>3 horas) ** existem dvidas da actividade do gluteraldedo sobre algumas micobactrias atpicas *** a actividade destes compostos varia com a concentrao

Avaliao da Esterilizao
1) Qumica (ex. Fita que muda de cor ao atingir certa temperatura). 2) Biolgica (ex. Ampola lacrada que vai ao autoclave e fica, supostamente, desinfectada; ao colocar essa mesma ampola na estufa no dever revelar-se crescimento de nenhum microorganismo; caso se verifique p.ex.B. subtilis ou Geobacillus stearothermophylus recomenda-se verificao do autoclave).

Although physicians cannot be all-knowing, they can still be all-caring. Such physicians may not immediately know the best approach to a patients condition, but they will not rest until they have found it. There is real dignity in that. in, Quiet in the library, NEJM Aula desgravada por Tiago Magalhes e Tiago Veloso