Mtodos de anlise do DNA Sequenciao do DNA Tcnicas de PCR cDNA

Sequenciao de DNA

Mtodo de Sanger baseado na terminao de cadeias

Figure 8-50a Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

Figure 8-50b Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

Sanger Sequencing

Figure 8-50c Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

Tecnologia de sequnciao automtica

Next Generation Sequencing

Figure 8-51 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

Reaco em Cadeia da Polimerase (PCR, Polimerase Chain Reaction)

Kary Mullis (1985 - nome do ficheiro Chain Reaction.POL Polymerase Chain Reaction PCR

Amplificao de DNA
1985 - Kary Mullis e colaboradores descrevem a reaco de PCR - Polymerase Chain Reaction

Kary Mullis

Figure 8-45a Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

Reaco em Cadeia da Polimerase (PCR, Polimerase Chain Reaction)

Pela tcnica de PCR obtm-se cpias fiis de fragmentos de DNA ou cDNA

Aplica-se na obteno da impresso digital, genotipagem ou perfil de DNA em biotecnologia forense quando se pretende analisar e comparar DNA de origens distintas.

Aplica-se em genmica, analisando a expresso gnica atravs de PCR de cDNA

Aparelho de PCR

Termociclador

Amplificao de DNA por Reaco em Cadeia da Polimerase (PCR)

A mistura de reaco contm o DNA alvo a amplificar, dois iniciadores (primers P1 e P2) e a Taq polimerase termoestvel A 94 C o DNA alvo desnaturado. O arrefecimento a 45-70 C permite a hibridao dos primers com as sequncias complementares do DNA alvo

desnaturao a 94C anneling a 45 - 60 C extenso a 72 C pela Taq polimerase

Taq polimerase - polimerase termoestvel isolada da bactria termoflica Thermus aquaticus

Figure Q8-3 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

DNA genmico DNA que constitui o genoma de uma clula ou de um organismo. Por oposio a cDNA (DNA preparado por transcrio reversa a partir do RNA menssageiro).

Processamento do mRNA
Capping em 5 Poliadenilao em 3 RNA splicing: remoo dos intres

Genmica: anlise gentica baseada na sequenciao de genomas

Tecnologia de arrays usada em genmica

Figure 8-73 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

http://www.dnalc.org/resources/animations/index.html