Estgio/Metodologias

1. Determinao de cido Ltico

As determinaes das concentraes de cido ltico foram realizadas a partir da
metodologia proposta por Pryce (1969). Em tubos de plstico para centrfuga, 3,95 mL de
reagente precipitante (Em um balo de 1L: 10 g de tungstato de sdio (Na 2O4W) + 22 ml de
cido ortofosfrico 90% (H3PO4) + 5 g de sulfato de cobre (CuSO 4.7H2O) + gua destilada)
foram adicionados a 50 L do sobrenadante da amostra previamente centrifugada a 12.000 x g
por 60 min. Imediatamente aps a adio dos reagentes, os tubos foram agitados por
aproximadamente 5 segundos e centrifugados por 5 minutos a 2.000 x g.
Em seguida, 1,0 mL do sobrenadante foi transferido para tubos de ensaio e, de forma
rpida, 6,0 mL de cido sulfrico (H2SO4) foram adicionados em cada tubo, sendo novamente
agitados por 10 segundos. Aps agitao, os tubos foram resfriados em gua corrente e
adicionados de 100 L de reagente de colorao (1,5 g de p-hidroxibifenil em 100 ml de
dimetilformamida, em balo de 100 mL), agitados e deixados em repouso por 10 minutos.
Na etapa seguinte, os tubos foram transferidos para banho-maria com gua fervente por
aproximadamente 90 segundos, resfriados em gua corrente e levados ao espectrofotmetro para
leitura da absorbncia utilizando-se filtro de comprimento de onda de 565 nm.
As solues padro foram obtidas atravs de diluio seriada da soluo inicial de 4,0
mg/mL (2,13 g de lactato de ltio + 5 mL de H 2SO4 + gua destilada em balo volumtrico de
500 mL) e utilizadas na construo da curva padro com as concentraes de 0; 0,25; 0,50; 1,0;
2,0 e 4,0 mg/mL.

Material

Tubos de plstico para centrfuga

Bales de 100 mL, 500 mL e 1L
Pipetas
Micropipetas de 50 e 100 L
Balana
Centrfuga
Tubos de ensaio
Banho-maria

Espectrofotmetro

Reagentes

Tungstato de sdio (Na2O4W)

cido ortofosfrico (H3PO4)
Sulfato de cobre (CuSO4.7H2O)
cido sulfrico (H2SO4)
P-hidroxibifenil
Dimetilformamida
Lactato de ltio