Revista Brasileira de Cincias Farmacuticas Brazilian Journal of Pharmaceutical Sciences vol. 39, n. 1, jan./mar.

, 2003

Aplicao do mtodo da espectrofotometria de derivadas na identificao e doseamento simultneo de sistemas multicomponentes

Lus Roberto Paschoal*, Weverson Alves Ferreira, Mara Rgia Dias Prado e Ana Paula Oliveira Vilela
Faculdade de Farmcia, Laboratrio de Controle de Qualidade Fsico-Qumico, UNIFENAS

*Correspondncia: L. R. Paschoal Faculdade de Farmcia Laboratrio de Controle de Qualidade Fsico-Qumico - UNIFENAS Rod. MG 179 KM 0 Campus Universitrio 37130-000 Alfenas MG Brasil E-mail: lr_paschoal@yahoo.com

Neste trabalho, demonstrou-se a aplicao do mtodo da espectrofotometria de derivadas no doseamento simultneo de alguns frmacos em produtos farmacuticos comerciais. Os mtodos desenvolvidos apresentaram-se precisos, sensveis, seletivos, reprodutivos e de baixo custo.

Unitermos: Espectrofotometria de derivadas Doseamento simultneo Benzocana cloreto de cetilpiridnio Lidocana prilocana Mebendazol tiabendazol

INTRODUO
A utilizao do mtodo da espectrofotometria de derivadas no doseamento simultneo de dois princpios ativos em diversas formas farmacuticas tem permitido a obteno de expressivos resultados em nosso laboratrio. Devido s suas propriedades e caractersticas, este mtodo apresenta-se como ferramenta muito til nas anlises de frmacos associados em comprimidos, pastilhas, cremes, entre outros, sem a necessidade de separaes prvias. A cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) uma tcnica muito explorada, principalmente pelos laboratrios de controle de qualidade das indstrias farmacuticas, tendo em vista que nos compndios oficiais, tais como a USP United States Pharmacopoeia, 2000, a maioria dos frmacos utiliza este mtodo para a separao e posterior doseamento. Entretanto, o mtodo em questo uma alternativa menos dispendiosa e tambm eficiente, se comparada ao mtodo da CLAE. Como prova desse fato, muitos trabalhos recentes (Yesilada et al., 1991; Bonazzi et al., 1996; Erk, Onur, 1997; Hassouna, 1997; Karali et al., 1998; Dinc, Onur, 1998; Paschoal, Ferreira, 2000; Prado et al., 2001,) foram publicados, empregando o mtodo da espectrofotometria de derivadas, que se mostrou ser preciso, sensvel, seletivo, reprodutivo e de baixo custo.

ALGUNS ASPECTOS TERICOS DA ESPECTROFOTOMETRIA DE DERIVADAS

Um dos problemas da espectrofotometria nas regies do ultravioleta visvel (UV-vis) de misturas de componentes est relacionado com a sobreposio das bandas (overlapping) de transio eletrnica ou de transferncia de carga em um mesmo solvente. A Figura 1 ilustra a sobreposio de dois frmacos associados na forma farmacutica de pastilha e estudada em soluo hidroalcolica por Paschoal e Ferreira (2000). A diferenciao do espectro de ordem zero no aumenta as informaes do espectro original, mas ocorre supresso das bandas largas, realce das bandas estreitas, a resoluo de um ombro para uma banda, etc., obedecendo, ainda, a Lei de Beer-Lambert. Em um espectro de primeira ordem (derivada primeira) ocorre a anulao no ponto referente ao comprimento de onda mximo (max) do espectro de ordem zero. positivo onde a absoro aumenta e negativo onde ela diminui. Assim, uma curva diferencial de ordem n se anula n vezes, apresentando n + 1 bandas. Na sobreposio de espectros de derivadas dos componentes de uma mistura, obtidos desse modo, pode-se individualizar melhor os constituintes e at eliminar a interferncia de um componente sobre o outro, excipientes,

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entre outros. A Figura 2 mostra os espectros de primeira ordem dos compostos obtidos a partir da Figura 1. Observa-se nas curvas da Figura 2 que, em certos , ocorre a anulao do espectro de um componente enquanto h absoro do outro. Deste modo, sobrepondo-se vrias derivadas de concentraes crescentes de cada com-

ponente e, obtendo-se os valores das amplitudes nos pontos de anulao (zero crossing), possvel construir-se curvas de calibrao, alm de se eliminar eletronicamente os erros sistemticos provenientes de interferncias (overlapping). Comercialmente, espectrofotmetros que realizam varredura de espectro, apresentam no software de

FIGURA 1 - Espectros de absoro de ordem zero do cloreto de cetilpiridnio 16 mg L 1 (a) e da benzocana 15 mg L1 (b) , obtidos em lcool/gua (1:1).

FIGURA 2 - Espectros de absoro de derivada primeira do cloreto de cetilpiridnio 16 mg L1 (a) e da benzocana 15 mg L1 (b), obtidos em lcool/gua (1:1).

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interface, que um programa que controla o funcionamento do aparelho, a possibilidade de se derivar at a quarta ou mais derivadas, alm de outros diferentes recursos necessrios obteno dessas curvas, tais como . Desta forma, os objetivos do presente trabalho so: (a) apresentar a metodologia empregada em nosso laboratrio para o doseamento simultneo de alguns frmacos em diferentes formas farmacuticas; (b) incentivar alunos de ps-graduao, pesquisadores, laboratrios, entre outros, a utilizarem este mtodo como alternativa eficiente na identificao e anlise de misturas de componentes.

Solues Padro Em todas as determinaes usualmente preparam-se solues padro mais concentradas (estoque) dos frmacos, no solvente determinado, em que ocorreu sua mxima solubilidade. Exemplos: Soluo estoque: - soluo hidroalcolica 1:1 a 100 mg . mL-1 de cloreto de cetilpiridnio ou de benzocana; - soluo 1:1 (cido clordrido e gua) 100 mg . mL-1 de mebendazol ou de tiabendazol; - soluo hidroalcolica 1:1 a 100 mg . mL-1 de lidocana ou prilocana. A seguir, so preparadas solues diludas de concentraes variadas, a partir das solues estoque correspondentes, em determinada faixa de concentraes, que seguem a Lei de Lambert-Beer, para obteno dos espectros de ordem zero. As solues das amostras de produtos acabados so preparadas do mesmo modo e diluio, sendo, tambm, obtidos seus espectros de ordem zero.

MATERIAL E MTODOS
Reagentes As matrias-primas cloreto de cetilpiridnio, benzocana, mebendazol e tiabendazol, foram adquiridas dos distribuidores Henrifarma, Synth, Emellffar Comercial e do Brasil. Os insumos prilocana e lidocana, grau USP foram fornecidos pela empresa Cristlia Produtos Qumicos Farmacuticos Ltda. J as amostras dos produtos acabados foram aquelas solicitadas aos fabricantes de produtos comerciais acabados e conforme demonstrado abaixo: 1 - Pastilhas Cetil Drops (Luper): cada pastilha contm: - cloreto de cetilpiridnio = 2,5 mg - benzocana = 2,0 mg 2 - Creme Medicana 5 % (Cristlia): - lidocana = 25 mg - prilocana = 25 mg 3 - Comprimidos Octelmin ( Schering-Plough): cada comprimido contm: - mebendazol = 100 mg - tiabendazol = 166 mg Todos os demais reagentes e solventes empregados foram de grau analtico, com pureza superior a 98% v/v. Toda a gua utilizada nas lavagens de vidraria, preparo das solues e diluies foi recm-destilada e desionizada. Triplicatas das amostras identificadas por fabricante foram analisadas frente a padres analticos e atravs dos mtodos de espectroscopias nas regies do ultravioleta e infravermelho, anlise trmica (TG/DTG), Karl Fischer, ponto de fuso, entre outros. Os frmacos foram utilizados como adquiridos dos fabricantes, sem purificaes prvias.

TCNICA EXPERIMENTAL E EQUIPAMENTO UTILIZADO

Os espectros de ordem zero e suas respectivas derivadas so obtidos na regio do ultravioleta (UV), empregando-se espectrofotmetro Shimadzu mod. UV-1601 PC, de varredura, que apresenta as seguintes caractersticas: duplo feixe entre 190 - 1100 nm, banda espectral de 2 nm, interfaceado por software, que permite correo automtica de linha base e manipulao total do espectro. As anlises espectrofotomtricas so realizadas a 20 oC, utilizando controlador de temperatura Shimadzu TCC-240 A.

TRATAMENTO DOS DADOS EXPERIMENTAIS

Espectroscopia eletrnica na regio do ultravioleta Os espectros de absoro de ordem zero dos frmacos e suas respectivas derivadas so obtidos em solvente adequado, atravs do estudo da absoro da radiao na regio do ultravioleta (200 a 350 nm) e = 2,0 nm . As medidas espectrofotomtricas so realizadas em cubetas padronizadas de quartzo de 1 cm e velocidade de varredura de 8,3 nm s-1 (middle), observando-se a estabilidade das solues. Os mximos de absoro, max, so, ento, identificados empregando-se os recursos do software do espectrofotmetro. Os coeficientes de absortividades molares (e)

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dos compostos so calculados empregando-se a Lei de Lambert-Beer e corrigindo a linha de base obtida para o solvente utilizado. A seguir, os espectros de derivada primeira so calculados e visualizados a partir dos seus espectros de ordem zero usando-se o software do equipamento. Derivadas superiores so conseguidas com o mesmo procedimento; porm h a necessidade de efetuar-se um ajuste nas curvas atravs da escolha do valor adequado para a melhor relao sinal/rudo. Preparao das curvas calibrao A partir da tcnica de anulao (zero crossing), isto

, lendo-se as amplitudes de absoro de um componente no comprimento de onda de anulao do outro, so construdas curvas de calibrao com a finalidade de se determinar a linearidade do mtodo e permitir a anlise quantitativa do produto acabado. A Figura 3 mostra exemplos de curvas de calibrao obtida por Paschoal e Ferreira, (2000), para o caso os frmacos ilustrados na Figura 2. A Tabela I apresenta os resultados obtidos para os teores de cloreto de cetilpiridinio e benzocana determinados em pastilhas, pelo mtodo de espectrofotometria de derivadas. Da mesma forma, foi desenvolvida a determinao simultnea de lidocana e prilocana em cremes pelo mtodo da espectrofotometria de derivadas (Prado et al., 2001).

FIGURA 3 - (esquerda) Curva de calibrao do cloreto de cetilpiridnio obtida em 220,7 nm (amplitude negativa). A = 1,33.10 -4 + 1,22.10 -3. c (mg L-1), com r = 0,9999. (direita) Curva de calibrao da benzocana obtida em 231,4 nm (amplitude negativa). A = 3,51.10 5 + 3,37.10 -3. c (mg L-1), com r = 0,9999. TABELA I - Valores encontrados para benzocana e cloreto de cetilpiridnio em misturas binrias, para produto comercial (pastilhas) e para uma simulao do produto em laboratrio Simulao (a) Quantidade Recupetotal enconrado trada (mg) (%) 1,95 1,93 2,56 97,50 96,50 102,40 Pastilhas (a) Quantidade Recupetotal enconrado trada (mg) (%) 2,20 2,00 2,42 110,00 100,01 96,80

Frmaco Benzocana 1D231,40 nm Benzocana 1D310,00 nm Cloreto de Cetilpiridnio 1D220,70 nm

Valor terico (mg) 2,00 2,00 2,50

RSD (%) 0,44 0,28 1,15

Valor terico (mg) 2,00 2,00 2,50

RSD (%) 0,24 0,52 1,31

(a) os valores so devidos a quatro repeties.

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A Figura 4 apresenta os espectros de ordem zero obtidos para os anestsicos isoladamente. A seguir so apresentadas as curvas de derivada primeira (Figura 5) e segunda (Figura 6), obtidas a partir dos espectros de ordem zero, evidenciando os comprimentos de onda de anulao dos ativos, do creme e simulao de um creme (Figura 7).

A Tabela II apresenta os resultados encontrados para os anestsicos estudados em creme a 5% (m/m), empregando-se o mtodo da espectrofotometria de derivadas e comparando os resultados com aqueles determinados por CLAE pela indstria fabricante. A seguir, so apresentados os resultados da determinao simultnea de mebendazol e tiabendazol em com-

FIGURA 4 - Espectros de aboro de ordem zero da lidocana 30 mg L-1 (a) e prilocana 30 mg L-1 (b), obtidos em soluo gua/lcool 1:1 (v/v).

FIGURA 5 - Espectros de absoro de primeira derivada de lidocana 30 mg L 1 (a) e de prilocana 30 mg L 1 (b), obtidos em lcool/gua (1:1).

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FIGURA 6 - Espectros de absoro de segunda derivada de lidocana 30 mg L 1 (a) e de prilocana 30 mg L 1 (b) , obtidos em lcool/gua (1:1).

FIGURA 7 - Espectros de primeira derivada do creme (a) e da simulao do creme (b) de lidocana 30 mg L-1 e prilocana 30 mg L-1. primidos atravs de espectrofotometria de derivadas. A Figura 8 apresenta os espectros de absoro de ordem zero (impedindo o doseamento convencional) e a Figura 9 os de derivada primeira obtidos dos antihelmnticos mebendazol e tiabendazol em soluo cida, demonstrando a sobreposio das bandas (overlapping). Pelas curvas obtidas em primeira derivada, observase a possibilidade do doseamento simultneo dos frmacos associados em comprimidos atravs da tcnica de zero-crossing. Assim, foram obtidas as equaes de regresso linear correspondentes aos comprimentos de onda de anulao do mebendazol (287,10 nm) e do tiabendazol (242,5,00 nm), obtendo r = 0,9999 e r = 0,9993, respectivamente.

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TABELA II - Teores de lidocana e prilocana encontrados na amostras do creme Medicana 5% COMPOSTOS CLAE* (mg/g) 23,75-26,25 23,75-26,25 % 95-105 95-105 ESPECTROFOTOMETRIA DE DERIVADAS**
1

Lidocana Prilocana

D=227,1 nm (mg/g) 22,96

D=217,4 nm (mg/g) 26,53

*TEORES MDIOS: Fonte: Cristlia Produtos Qumicos Farmacuticos Ltda.; ** Lote analisado

FIGURA 8 - Espectros de absoro de ordem zero de mebendazol (12mg L-1) (a) e tiabendazol (b) (12 mg L-1), obtidos em H2O/HCl 50 % (v/v).

FIGURA 9 - Espectros de absoro de primeira derivada de mebendazol (12 mg L-1) (a) e tiabendazol (b) (12 mg L-1), obtidos em H2O/HCl 50 % (v/v).

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TABELA III - Valores encontrados para tiabendazol e mebendazol em misturas binrias, para produto comercial (comprimidos) e para uma simulao do produto em laboratrio Simulao (a) Quantidade Recupetotal enconrado trada (mg) (%) 165,97 100,00 99,98 100,00 Comprimidos (a) Quantidade Recupetotal enconrado trada (mg) (%) 163,32 96,00 98,38 96,00

Frmaco Tiabendazol 1D 287,10 nm Mebendazol 1D 242,50 nm

Valor terico (mg) 166,00 100,00

RSD (%) 0,66 0,46

Valor terico (mg) 166,00 100,00

RSD (%) 0,65 0,88

(a) os valores so devidos trs repeties.

CONCLUSES
A metodologia proposta neste trabalho configura-se, assim, em alternativa extremamente vantajosa e vivel para a soluo de problemas espectrais de sobreposio de mais de um componente. A grande vantagem da utilizao da espectrofotometria de derivadas est relacionada com a possibilidade de se minimizar os problemas com interferentes, sem complicados procedimentos de separao ou extrao prvios, bem como no necessitar de padres ultrapuros exigidos na CLAE, alm da grande possibilidade da validao do mtodo no doseamento simultneo, aliada ao baixo preo.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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ABSTRACT
Application of derivative spectrophotometric method in identification and simultaneous analysis of multi-component system The application of the derivative spectrophotometric method in the simultaneous determinations of some drugs in commercial pharmaceutical products is demonstrated in this work. The developed methods proved to be selective, reproductive and of low cost. UNITERMS: Derivative spectrophotometric methods. Simultaneous determinations. Benzocaine cetylpiridinium chloride. Lidocaine prilocaine. Mebendazole thiabendazole.

AGRADECIMENTOS
A FAPEMIG e ao CNPq, pelo apoio financeiro referente aquisio do espectrofotmetro de varredura e bolsas de iniciao cientfica, respectivamente. As indstrias Cristlia Produtos Qumicos Farmacuticos e a ScheringPlough, pelo fornecimento de padres bem como de produtos comerciais de suas linhas.

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THE UNITED STATES PHARMACOPEIA AND THE NATIONAL FORMULARY, US Pharmacopoeial Convention, Rockville, MD, 2000. 2569p.

YESILADA, A.; ERDOGAN, H.; ERTAN, M. 2nd Derivative Spectrophotometric Determination of Paraaminophenol in the Presence of Paracetamol. Anal. Lett., New York, v. 24, n.1, p. 129-138. 1991. Recebido para publicao em 21 de junho de 2002.