PROTEO DE PLANTAS NA AGRICULTURA SUSTENTVEL

Sami J. Michereff Reginaldo Barros

Editores

Universidade Federal Rural de Pernambuco

Pr-Reitoria de Pesquisa e Ps-Graduao
Programa de Ps-Graduao em Fitossanidade Recife - PE 2001

MINISTRIO DA EDUCAO E DO DESPORTO UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DE PERNAMBUCO Reitor: Prof. Emdio Cantdio de Oliveira Filho Vice-Reitor: Prof. Valmar Corra de Andrade Pr-Reitora de Pesquisa e Ps-Graduao: Profa. urea Wischral Coordenador do Programa de Ps-Graduao em Fitossanidade: Prof. Reginaldo Barros Diretor da Imprensa Universitria: Sr. Anto Marcelo Freitas A. Cavalcanti 2001 by Sami Jorge Michereff e Reginaldo Barros Direitos de edio reservados aos editores Criao da Capa: Genilda Pereira de Andrade Editorao Eletrnica: Sami Jorge Michereff Pedidos para: SAMI J. MICHEREFF Departamento de Agronomia rea de Fitossanidade Universidade Federal Rural de Pernambuco Av. Dom Manoel de Medeiros, s/n Dois Irmos 52171-900 Recife, PE Fone/Fax: (81) 3302.1205 E-mail: michereff@uol.com.br Catalogao na Fonte Setor de Processor Tcnicos da Biblioteca Central UFRPE

D441

Proteo de plantas na agricultura sustentvel / eds. Sami Jorge Michereff, Reginaldo Barros. Recife : UFRPE, Imprensa Universitria, 2001. 368 p. : il. Bibliografia ISBN 85-87459-06-6 CDD 632 CDU 632 11. PLANTA PROTEO 2. PLANTA DOENA 3. PLANTA PRAGA 4. FITOSSANIDADE 5. ENTOMOLOGIA 6. FITOPATOLOGIA 7. AGRICULTURA SUSTENTVEL 8. MANEJO INTEGRADO I. Michereff, Sami Jorge. II. Barros, Reginaldo

No permitida a reproduo total ou parcial deste livro sem a autorizao expressa dos editores.

EDITORES E COLABORADORES

EDITORES
SAMI JORGE MICHEREFF. Departamento de Agronomia - rea de Fitossanidade, Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE), 52171-900 Recife, PE. E-mail: michereff@uol.com.br. REGINALDO BARROS. Departamento de Agronomia - rea de Fitossanidade, Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE), 52171-900 Recife, PE. E-mail: rbarros@ufrpe.br.

COLABORADORES
ANA ROSA PEIXOTO NASCIMENTO. Departamento de Tecnologia e Cincias Sociais, Universidade do Estado da Bahia (UNEB), 49800-000 Juazeiro, BA. E-mail: anarpeixoto@hotmail.com. ANDRA MARIA ANDR GOMES. Departamento de Agronomia - rea de Fitossanidade, Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE), 52171-900 Recife, PE. E-mail: aagomes@yahoo.com. DELSON LARANJEIRA. Departamento de Agronomia - rea de Fitossanidade, Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE), 52171-900 Recife, PE. E-mail: rejadel@yahoo.com.br. DOMINGOS EDUARDO GUIMARES TAVARES DE ANDRADE. Departamento de Agronomia rea de Fitossanidade, Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE), 52171-900 Recife, PE. E-mail: degta@uol.com.br. EDMILSON JACINTO MARQUES. Departamento de Agronomia - rea de Fitossanidade, Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE), 52171-900 Recife, PE. E-mail: emar@ufrpe.br. ELINEIDE BARBOSA DA SILVEIRA. Departamento de Biologia - rea de Microbiologia, Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE), 52171-900 Recife, PE. E-mail: elineidebs@yahoo.com.br.

GAUS SIVESTRE DE ANDRADE LIMA. Laboratrio de Cultura de Tecidos, Empresa Pernambucana de Pesquisa Agropecuria (IPA), 50761-000 Recife, PE. E-mail: gausandrade@bol.com.br. GENIRA PEREIRA DE ANDRADE. Departamento de Agronomia - rea de Fitossanidade, Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE), 52171-900 Recife, PE. E-mail: genira@yahoo.com. GERSON QUIRINO BASTOS. Departamento de Agronomia - rea de Fitotecnia, Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE), 52171-900 Recife, PE. E-mail: gersonquirino@bol.com.br. GILVAN PIO-RIBEIRO. Departamento de Agronomia - rea de Fitossanidade, Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE), 52171-900 Recife, PE. E-mail: gilvanpio@uol.com.br. IDJANE SANTANA OLIVEIRA. Departamento de Agronomia - rea de Fitossanidade, Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE), 52171-900 Recife, PE. E-mail: idjaneso@ig.com.br. IRAILDES PEREIRA ASSUNO. Departamento de Fitopatologia, Universidade Federal de Viosa (UFV), 36571-000 Viosa, MG. E-mail: iraassuncao@bol.com.br. IRENE MARIA RAMOS MARQUES. Departamento de Zoologia, Universidade Federal de Pernambuco (UFPE), 50670-420 Recife, PE. E-mail: imar@npd.ufpe.br. JOS VARGAS DE OLIVEIRA. Departamento de Agronomia - rea de Fitossanidade, Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE), 52171-900 Recife, PE. E-mail: vargasoliveira@uol.com.br. LUCIANE VILELA RESENDE. Departamento de Agronomia - rea de Fitotecnia, Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE), 52171-900 Recife, PE. E-mail: lucianevilela@uol.com.br. LUIZ AUGUSTO MARTINS PERUCH. Departamento de Agronomia - rea de Fitossanidade, Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE), 52171-900 Recife, PE. E-mail: lamperuch@bol.com.br. MAIRON MAOURA DA SILVA. Departamento de Agronomia - rea de Fitossanidade, Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE), 52171-900 Recife, PE. E-mail: maironmoura@bol.com.br. MANOEL GUEDES CORRA GONDIM JNIOR. Departamento de Agronomia - rea de Fitossanidade, Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE), 52171-900 Recife, PE. E-mail: manoguedes@hotmail.com. RAQUEL GHINI. Laboratrio de Fitopatologia, EMBRAPA Meio Ambiente (CNPMA), 13820-000, Jaguarina, SP. E-mail: raquel@cnpma.embrapa.br. RICARDO OTAVIANO RIBEIRO DE LIMA. Estao Experimental de Cana-de-Acar, Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE), 55810-000 Carpina, PE. Email: eecacpe@truenet.com.br.

ROSA DE LIMA RAMOS MARIANO. Departamento de Agronomia - rea de Fitossanidade, Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE), 52171-900 Recife, PE. E-mail: rmariano@truenet.com.br. SAYONARA MARIA PAULINO DE ASSIS. Departamento de Biologia rea de Botnica, Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE), 52171-900 Recife, PE. E-mail: smpassis@uol.com.br. SELMA CAVALCANTI CRUZ DE HOLANDA TAVARES. Laboratrio de Controle Biolgico, EMBRAPA Semi-rido (CPATSA), 13820-000 Petrolina, PE. E-mail: selmaht@cpatsa.embrapa.br. SNIA MARIA ALVES DE OLIVEIRA. Departamento de Agronomia - rea de Fitossanidade, Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE), 52171-900 Recife, PE. E-mail: smaoliveira@bol.com.br. SUZANA ALENCAR FREIRE DANTAS. Departamento de Agronomia - rea de Fitossanidade, Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE), 52171-900 Recife, PE. E-mail: suzanaalencar@globo.com. VIVIANE JUREMA LOPES BORGES RODRIGUES. Departamento de Agronomia - rea de Fitossanidade, Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE), 52171-900 Recife, PE. E-mail: vivianeju@hotmail.com. WAGNER BETTIOL. Laboratrio de Fitopatologia, EMBRAPA Meio Ambiente (CNPMA), 13820-000 Jaguarina, SP. E-mail: bettiol@cnpma.embrapa.br.

APRESENTAO
A agricultura convencional est construda em torno de dois objetivos que se relacionam: a maximizao da produo e do lucro. Na busca dessas metas, um rol de prticas foi desenvolvido sem preocupao com as conseqncias de longo prazo e sem considerar a dinmica ecolgica dos agroecossistemas. Dentre essas prticas bsicas, o controle qumico de pragas, doenas e plantas invasoras constitui a espinha dorsal da agricultura moderna. Alm de serem responsveis por grande parte dos custos de produo, os pesticidas tm um efeito profundo no ambiente e, freqentemente, sobre a sade humana. A preocupao da sociedade com o impacto da agricultura no ambiente e a contaminao da cadeia alimentar com pesticidas vem alterando o cenrio agrcola, demandando novas tecnologias, dentre as quais se insere a agricultura sustentvel, que se baseia em quatro alicerces fundamentais: sustentabilidade (habilidade para manter o sistema em existncia por um longo perodo de tempo quando submetido a estresse), estabilidade (obteno consistente de rendimento a curto ou longo prazo), produtividade (capacidade de produo por rea) e equidade (distribuio relativa de riqueza na sociedade). Sem dvida nenhuma, a transio da agricultura convencional para uma agricultura sustentvel um grande desafio, no qual a proteo de plantas est inserida. Nesse sentido, na resoluo dos problemas relacionados com a ocorrncia de pragas e doenas de plantas em nveis de danos econmicos devem ser utilizadas tcnicas que propiciem a mnima dependncia externa de insumos, o aumento da biodiversidade, a manuteno da estrutura do solo, o baixo ou nenhum risco ambiential e toxicolgico, a manuteno do sistema por longo perodo de tempo e uma boa produtividade agrcola. Este livro se prope a abordar alguns aspectos relacionados proteo de plantas com prticas sustentveis, bem como motivar novas iniciativas que abordem esse assunto de extrema importncia para o futuro da agricultura brasileira. Sami J. Michereff Reginaldo Barros

NDICE

Pgina EDITORES E COLABORADORES ................................................................ APRESENTAO .................................................................................... NDICE ..................................................................................................... 1. PROTEO DE PLANTAS EM SISTEMAS AGRCOLAS ALTERNATIVOS .............
Wagner Bettiol & Raquel Ghini III VII IX

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2. MANEJO SUSTENTVEL DE DOENAS RADICULARES EM SOLOS TROPICAIS ...

Sami J. Michereff, Luiz A.M. Peruch & Domingos E.G.T. Andrade

3. BACTRIAS PROMOTORAS DE CRESCIMENTO DE PLANTAS E BIOCONTROLE DE DOENAS ........................................................

Elineide B. Silveira

71

4. UTILIZAO DE MICRORRIZAS NO MANEJO DE DOENAS DE PLANTAS .......... 101

Delson Laranjeira

5. MTODOS ALTERNATIVOS PARA O CONTROLE DE DOENAS DE PLANTAS ..... 123

Wagner Bettiol

6. DIAGNOSE E MANEJO DE FITOBACTERIOSES DE IMPORTNCIA NO

NORDESTE BRASILEIRO

141

.........................................................................................
Rosa L.R. Mariano, Elineide B. Silveira, Sayonara M.P. Assis, Andra M.A. Gomes, Idjane S. Oliveira & Ana R.P. Nascimento

7. ESTRATGIAS E MTODOS APLICADOS AO CONTROLE DE FITOVIROSES ....... 171

Genira P. Andrade & Gilvan Pio-Ribeiro

8. DIAGNOSE E MANEJO DE DOENAS DAS FRUTEIRAS TROPICAIS NO NORDESTE BRASILEIRO .........................................................................

Snia M.A. Oliveira, Selma S.C.H. Tavares & Suzana A.F. Dantas

183

9. DIAGNOSE E MANEJO DE DOENAS EM CULTIVOS HIDROPNICOS ............... 225

Andra M.A. Gomes & Viviane J.L.B. Rodrigues

10. BIOTECNOLOGIA E PROTEO DE PLANTAS .............................................

Luciane V. Resende & Mairon M. Silva

243

11. DESAFIOS DA BIOTECNOLOGIA APLICADA PROTEO DE PLANTAS ........... 273

Gerson Q. Bastos

12. BIOLOGIA MOLECULAR COMO FERRAMENTA NA DETECO DE FITOPATGENOS .................................................................................

Gaus S.A. Lima & Iraildes P. Assuno

291

13. CAROS DE FRUTEIRAS TROPICAIS: IMPORTNCIA ECONMICA, IDENTIFICAO E CONTROLE .................................................................

Manoel G.C. Gondim Jr. & Jos V. Oliveira

311

14. ATUALIZAO NA PRODUO DE AGENTES DE CONTROLE BIOLGICO DE PRAGAS DA CANA-DE-ACAR ..............................................................

Edmilson J. Marques, Ricardo O.R. Lima & Irene M.R. Marques

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PROTEO DE PLANTAS EM SISTEMAS AGRCOLAS ALTERNATIVOS
WAGNER BETTIOL RAQUEL GHINI

INTRODUO
A preocupao da sociedade com o impacto da agricultura no ambiente e a contaminao da cadeia alimentar com pesticidas vem alterando o cenrio agrcola, resultando na presena de segmentos de mercado vidos por produtos diferenciados, tanto aqueles produzidos sem uso de pesticidas, como por aqueles portadores de selos de que os pesticidas foram utilizados adequadamente. Essas presses tm levado ao desenvolvimento de sistemas de cultivo mais sustentveis e, portanto, menos dependentes do uso de pesticidas. O conceito de agricultura sustentvel envolve o manejo adequado dos recursos naturais, evitando a degradao do ambiente de forma a permitir a satisfao das necessidades humanas das geraes atuais e futuras (Bird et al., 1990). Esse enfoque altera as prioridades dos sistemas convencionais de agricultura em relao ao uso de fontes no renovveis, principalmente de energia, e muda a viso sobre os nveis adequados do balano entre a produo de alimentos e os impactos no ambiente. As alteraes implicam na reduo da dependncia de produtos qumicos e outros insumos energticos e o maior uso de processos biolgicos nos sistemas agrcolas. A proteo de plantas nos mtodos convencionais, por meio do uso de pesticidas, apresenta caractersticas extremamente atraentes, como a simplicidade, a previsibilidade e a necessidade de pouco entendimento dos processos bsicos do agroecossistema para a sua aplicao. Por exemplo, para obter-se sucesso com a aplicao de um herbicida de amplo espectro importante o conhecimento de como aplicar o produto, sendo necessria pouca informao sobre a ecologia e a fisiologia de espcies. Muitos estudos de controle biolgico adotam uma abordagem semelhante, onde enfatizado o encontro entre patgeno-antagonista ou presa-predador. Tal estratgia apropriada para predadores relativamente agressivos e especficos, mas tem menor valor em situaes mais complexas. Nesses casos, aps a introduo,
Michereff, S.J. & Barros, R. (Eds.) Proteo de Plantas na Agricultura Sustentvel. 2001. Recife, UFRPE

Direitos de edio reservados aos editores ISBN 85-87459-06-6

por exemplo, de um agente microbiano de controle biolgico, haver o seu estabelecimento em um nicho, seguido da interao com o organismo alvo e outras espcies de organismos. Essas complexas interaes so fundamentais para o sucesso do controle, devendo ser analisadas de modo holstico e consideradas em longo prazo, e no em curto prazo. Assim sendo, h a necessidade de um amplo conhecimento da ecologia do sistema (Atkinson & McKinlay, 1995). Em contraste com a agricultura convencional, os sistemas alternativos buscam obter vantagens das interaes de ocorrncia natural. Os sistemas alternativos do nfase ao manejo das relaes biolgicas, como aquelas entre praga e predadores e processos naturais, como a fixao biolgica do nitrognio ao invs do uso de mtodos qumicos. O objetivo aumentar e sustentar as interaes biolgicas nas quais a produo agrcola est baseada, ao invs de reduzir e simplificar essas interaes (National Research Council, 1989). Um dos principais problemas da agricultura sustentvel refere-se ao controle de doenas, pragas e plantas invasoras. Diversas tcnicas utilizadas para minimizar os danos ocasionados por esses problemas fitossanitrios contaminam o ambiente ou causam alteraes que comprometem a sustentabilidade do sistema. Neste captulo so discutidos os problemas do controle fitossanitrio convencional; a complexidade dos sistemas naturais e dos agroecossistemas; as novas tecnologias de proteo de plantas desenvolvidas e as possveis alteraes dos sistemas de cultivo, visando sustentabilidade agrcola.

PROBLEMAS DO CONTROLE CONVENCIONAL

O uso intensivo de pesticidas na agricultura tem, reconhecidamente, promovido diversos problemas de ordem ambiental, como a contaminao dos alimentos, do solo, da gua e dos animais; a intoxicao de agricultores; a resistncia de patgenos, de pragas e de plantas invasoras a certos pesticidas; o desequilbrio biolgico, alterando a ciclagem de nutrientes e da matria orgnica; a eliminao de organismos benficos; e a reduo da biodiversidade. Boa parte dos pesticidas aplicados no campo perdida. Estima-se que cerca de 90% dos pesticidas aplicados no atingem o alvo, sendo dissipados para o ambiente e tendo como ponto final reservatrios de gua e, principalmente, o solo. As perdas se devem, de forma geral, aplicao inadequada, tanto em relao tecnologia, quanto ao momento de aplicao. Em alguns casos, porque a aplicao foi feita para dar proteo contra uma praga ou patgeno que no esto presentes na rea. Isto ocorre porque ainda
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so realizadas pulverizaes baseadas em calendrios e no na ocorrncia do problema. O uso de uma significativa quantidade de produtos qumicos seria evitado se fossem tomadas medidas de controle somente quando atingidos os nveis de dano econmico. Atualmente, sabe-se que impossvel erradicar patgenos, insetos ou plantas invasoras no campo e que, alm de tudo, isso desnecessrio. O balano entre os riscos e os benefcios indica o momento exato da adoo de medidas de controle. Tanto a falta como o excesso de medidas de controle podem causar prejuzos. Enquanto na agricultura convencional a recomendao de que as invasoras so um obstculo a ser superado, na agricultura orgnica tenta-se tirar proveito desse importante recurso para o processo produtivo. Busca-se obter os efeitos positivos das invasoras na ciclagem de nutrientes, no aporte de matria orgnica ao solo, no controle da eroso, como abrigo de inimigos naturais e de predadores, como substrato para microrganismos do solo, como cobertura e importante fator na conservao da gua no solo. As plantas invasoras contribuem para a diversificao dos agroecossistemas e constituem um indicador das condies em que se encontra o solo no tocante fertilidade, estrutura e compactao, dentre outros aspectos (Costa & Campanhola, 1997). Porm, a tomada de deciso depende de informaes seguras. Gravena et al. (1998), por exemplo, realizando o manejo ecolgico de pragas e doenas do tomateiro envarado, demonstraram a possibilidade de reduzir de 31 aplicaes de inseticidas e 31 de fungicidas no manejo convencional, para 10 e 21 aplicaes de inseticidas e fungicidas, respectivamente, no manejo ecolgico de tripes, pulgo, mosca branca, traa, broca pequena, requeima, pinta preta e vira-cabea, sem alterar a produtividade. O uso contnuo e exclusivo de pesticidas tem resultado na ocorrncia de pragas ou patgenos resistentes a determinados produtos, que nem sempre diagnosticada (Ghini & Kimati, 2000). Assim, esses pesticidas continuam a ser aplicados, mesmo tendo sua eficincia comprometida pela ocorrncia de resistncia no organismo alvo. Os efeitos dessas aplicaes nos organismos no alvo tambm podem causar srios desequilbrios no agroecossistema. O surgimento de doenas iatrognicas (as que ocorrem devido ao uso de pesticidas) um exemplo de problemas que podem ocorrer. Vrios aspectos do surgimento de pragas e doenas devido ao uso de pesticidas so discutidos por Chaboussou (1987). Quanto tecnologia de aplicao, a maior parte dos equipamentos apresenta uma baixa eficincia com relao quantidade de produto que atinge o alvo e a quantidade total aplicada. Dessa forma, h necessidade do desenvolvimento de equipamentos para aplicao dos pesticidas, especialmente para os novos produtos que so aplicados em menores quantidades de princpio ativo por rea.
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SISTEMAS NATURAIS VERSUS AGROECOSSISTEMAS

As doenas de plantas ocorrem na natureza com o objetivo, em parte, para manter o equilbrio biolgico e a ciclagem de nutrientes, sendo, desse ponto de vista, benficas. O que se observa que as doenas e as pragas ocorrem na forma endmica. No ocorrem epidemias que poderiam destruir as espcies vegetais, haja vista que colocaria em risco a sobrevivncia dos patgenos e das pragas. Porm, as epidemias so freqentes em ecossistemas agrcolas. A interferncia humana, alterando o equilbrio da natureza, resulta na ocorrncia de epidemias. Uma das condies que favorecem o aumento da populao de patgenos e pragas de forma epidmica o cultivo de plantas geneticamente homogneas, o que contrrio diversidade de variedades (Bergamin et al., 1995). O resgate dos princpios e mecanismos que operam nos sistemas da natureza pode auxiliar a obteno de sistemas agrcolas mais sustentveis (Colgio, 1996). Os sistemas de cultivo caracterizados pela mistura de culturas (policulturas ou consrcios) apresentam diversas vantagens na proteo de plantas. A freqncia de insetos-praga menos abundante nas policulturas do que nas monoculturas. Vrios mecanismos que diminuem a ocorrncia de doenas operam favoravelmente na proteo de plantas das policulturas. Por exemplo, as espcies suscetveis podem ser cultivadas em menores densidades, j que o espao entre elas ser ocupado por plantas resistentes que interessam ao produtor. A menor densidade de plantas suscetveis e a barreira oferecida pelas plantas resistentes dificultam a disseminao do patgeno, reduzindo a quantidade de inculo no campo (Liebman, 1989). Efeito semelhante obtido com o uso de multilinhas, isto , a mistura de linhagens agronomicamente semelhantes, mas que diferem entre si por apresentarem diferentes genes de resistncia vertical. Alm do aumento da diversidade no espao, o aumento da diversidade no tempo, por meio da rotao de culturas, tambm faz com que os processos biolgicos auxiliem a proteo de plantas, como por exemplo, no controle de diversos fitopatgenos veiculados pelo solo (van Bruggen, 1995). Uma outra forma de aumentar a diversidade, conseqentemente a complexidade do sistema (sistemas mais complexos so mais estveis), o cultivo em faixas. As culturas devem ser de famlias diferentes, assim, os patgenos e as pragas de uma no atingem a outra e h uma reduo da ocorrncia dos problemas relacionados com a proteo de plantas. Essa seqncia pode ser usada nos cultivos de inverno, vero e, no ciclo seguinte, as reas so invertidas para funcionar como rotao de cultura no tempo e no espao. No caso de plantas perenes, esse conceito pode ser at mais amplo, cultivando diferentes espcies florestais e formando uma agrofloresta. Alm
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das vantagens da reduo do uso de pesticidas, h menor risco econmico, pois h maior diversificao da renda. Nesse caso, precisa tambm ser trabalhado o uso adequado de plantas invasoras, selecionando as que podero ser benficas do ponto de vista nutricional e de equilbrio biolgico. As entrelinhas devem sempre estar cobertas por vegetao. Um exemplo desse manejo o cultivo de seringueira na Amaznia consorciado com espcies nativas. Nesse sistema, a principal doena da seringueira, o mal das folhas, controlada devido ao manejo integrado, isto , controle gentico, cultural e biolgico. O componente gentico devido ao uso de diversos clones de seringueira; o cultural, pelo plantio de espcies diferentes, como dend, mogno, etc.; e o biolgico, pela multiplicao e/ou aplicao de microrganismos antagnicos (Hansfordia pulvinata) ao Microcyclus ulei, agente causal da doena. Trenbath (1993) explica que vrios mecanismos podem estar associados reduo da ocorrncia de pragas e doenas em cultivos consorciados, sendo os principais: (1) alteraes nas caractersticas da planta hospedeira, tornando-as menos atraentes para as pragas ou reduzindo as chances de infeco , devido a alteraes no crescimento da planta e no microclima; (2) efeitos diretos nas pragas ou patgenos devido s condies impostas pela menor concentrao de hospedeiros, como as menores chances de encontrar plantas suscetveis e a reduo da sobrevivncia e fecundidade; (3) efeitos indiretos nas pragas ou patgenos devido maior quantidade de inimigos naturais ou antagonistas que possuem chances de sobreviver nos microhabitats disponveis. A diversificao de culturas nas propriedades rurais, alm dos benefcios agronmicos e econmicos, traz benefcios sociais, pois estende a estao de trabalho dos empregados rurais, sendo esse aspecto parte integrante da sustentabilidade. Entretanto, a indiscriminada diversificao da vegetao dentro de um agroecossistema pode no resultar na reduo do risco de ocorrncia de pragas e doenas. O efeito de combinaes planejadas de plantas deve ser estudado criteriosamente antes da aplicao em programas de manejo.

NOVAS TECNOLOGIAS E SUSTENTABILIDADE

O desenvolvimento tecnolgico tem colaborado para a adoo de sistemas mais sustentveis, pois muitas dessas tecnologias foram desenvolvidas considerando prioritria a sustentabilidade e a preservao do ambiente. O uso de feromnios sexuais sintticos de insetos pragas vem permitindo uma considervel reduo do uso de inseticidas e, conseqentemente, menor impacto ambiental. O controle de Carpocapsa da macieira j realizado exclusivamente com feromnios em diversas localidades dos USA e Europa. As tecnologias de agricultura de preciso permitem o emprego de pesticidas apenas nas reboleiras onde ocorre a doena, a praga ou a planta invasora e no em toda a rea, reduzindo sensivelmente o uso de pesticidas. Tal tecnologia aumenta a eficincia, minimiza os impactos ambientais e aumenta a competitividade. Tambm tcnicas como o controle biolgico e fsico esto sendo desenvolvidas e muitas esto em uso como: termoterapia de rgos de propagao e frutos; a energia solar para controle de fitopatgenos do solo (solarizao); a radiao ultravioleta para o controle de patgenos em pscolheita; o emprego em estufas de cortinas que filtram determinados comprimentos de onda com conseqente controle de doenas e pragas; a premunizao de plantas ctricas contra a tristeza dos citros e de plantas de abbora contra o mosaico comum; o Baculovirus anticarsia para o controle da lagarta da soja; o controle da vespa da madeira com o nematide Delademus siricidicola; o Bacillus thuringiensis para o controle de larvas de lepidpteras; o controle da broca da cana-de-acar com Cotesia flavipes; o controle de numerosas pragas com leo e extrato de nim (Azadirachta indica); leite de vaca, cru e diludo, para o controle de odios; o controle de patgenos veiculados pelo solo causadores do tombamento do fumo com Trichoderma e outros. Tambm as tcnicas de manejo integrado e manejo ecolgico de pragas e doenas conduzem a sensveis redues de uso de pesticidas, com vantagens econmicas e ambientais. Abreu Junior (1998) apresenta uma coletnea de receitas para proteo de plantas e animais, utilizando especialmente produtos naturais, que podem ser adotadas em sistemas alternativos. Uma anlise da agricultura alternativa no estado de So Paulo e informaes sobre tcnicas adotadas so descritas por Costa & Campanhola (1997). Essas tecnologias conduzem a um maior equilbrio do agroecossistema, mas para serem empregadas exigem um melhor nvel tecnolgico dos agricultores. O uso de cultivares resistentes fundamental para os sistemas agrcolas alternativos. Trata-se de um mtodo barato e de fcil utilizao para o controle de importantes doenas e pragas (Innes, 1995). Porm, os mtodos de melhoramento aplicados para a obteno de variedades resistentes
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utilizadas nos sistemas convencionais nem sempre so os mais eficientes para os sistemas alternativos. Os agricultores orgnicos, por exemplo, so orientados no sentido de optar por espcies vegetais compatveis com o ecossistema e utilizar sementes produzidas de forma diferenciada, para cada realidade ecolgica. Mas, de modo geral, tem-se lanado mo de sementes disponveis no mercado, melhoradas e produzidas de forma convencional (Costa & Campanhola, 1997). O resgate de mtodos de controle cultural muito importante para a proteo de plantas em sistemas alternativos de cultivo. Entre as prticas esto a eliminao de plantas ou parte de plantas doentes, preparo e irrigao do solo de forma adequada, poca e densidade de plantio, barreiras fsicas (quebra-ventos), cultivo em ambiente protegido, enxertia e poda, entre outros. Nem sempre essas tcnicas isoladamente so suficientes para a obteno de um controle adequado, mas so fundamentais para o manejo integrado de pragas e doenas. Outro aspecto importante o equilbrio nutricional das plantas. Normalmente, a adubao baseada nas necessidades de NPK, no considerando os micronutrientes e outros elementos que podem ser benficos para as plantas. Diversos trabalhos mostram os efeitos dos nutrientes sobre doenas de plantas, e conseqentemente a reduo da necessidade de controle com uma equilibrada nutrio de plantas. Esses efeitos so amplamente discutidos no livro Soilborne plant pathogens: management of diseases with macro- and microelements (Engelhard, 1989). O uso de matria orgnica, tanto por meio de incorporao ao solo, como aps transformao para posterior uso, deve ser considerado como mtodo alternativo de controle de doenas, pragas e plantas invasoras. Uma das transformaes conhecidas a digesto anaerbica ou aerbica, cujo produto denominado biofertilizante, e pode ser usado em pulverizaes foliares ou aplicaes diretas ao solo (Bettiol et al. 1998). Uma das principais caractersticas do biofertilizante a presena de microrganismos, responsveis pela decomposio da matria orgnica, produo de gs e liberao de metablitos, entre eles, antibiticos e hormnios. Assim, quanto mais ativa e diversificada a matria-prima do biofertilizante, maior a possibilidade de liberao de diferentes substncias orgnicas. Alm disso, o biofertilizante atua devido ao considervel efeito nutricional para as plantas, face presena de macro e micronutrientes. Dessa forma, a ao conjunta de diversos mecanismos responsvel pelo controle obtido. O efeito de fontes de matria orgnica na severidade de doenas de plantas depende do tipo de material utilizado, da relao C:N e do tempo decorrido da incorporao. De modo geral, solos supressivos apresentam maior atividade da microbiota do que solos conducentes. Assim, a adio regular de fontes adequadas de matria orgnica pode induzir supressividade
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por estimular a atividade de decompositores primrios, principalmente bactrias, fungos e outros organismos como caros, nematides e artrpodes, como Collembola, que podem ter importante funo no controle de fitopatgenos (Lartey et al., 1994). Os decompositores primrios podem atuar como antagonistas de fitopatgenos por competio por nutrientes, antibiose e parasitismo, enquanto que a micro e mesofaunas podem contribuir para o controle por predao (van Bruggen, 1995). Um exemplo clssico de controle de doenas em sistema orgnico a supresso de Phytophthora cinnamomi em abacate na Austrlia (Malajczuk, 1983). Altos teores de matria orgnica foram mantidos na camada superficial dos solos dos pomares. O principal mecanismo de ao foi o aumento da lise de hifas por bactrias e actinomicetos. A atividade predadora da microfauna, em particular de diversas amebas, tambm foi aumentada nos solos com alto teor de matria orgnica. Os solos conducentes continham amebas similares, mas em menor densidade populacional. O reconhecimento de que as propriedades fsicas e qumicas do solo afetam diretamente a proteo de plantas est tornando-se evidente com um aumento de publicaes a respeito e com o uso desses conhecimentos no manejo integrado de culturas. Determinadas doenas de plantas podem ser controladas com adequado manejo do solo. Quanto s plantas invasoras, Forcella & Burnside (1994) fizeram uma anlise de como foi o controle desde o advento da agricultura at os dias de hoje, e tentam prever como ser no futuro o uso dos mtodos qumicos, fsicos, biolgicos e culturais. Os mtodos fsicos (capina manual ou mecnica) predominaram sobre os demais mtodos durante muito tempo. Nesse perodo, provavelmente, os mtodos culturais e biolgicos ocorreram por obra do acaso, e no intencionalmente. Com o desenvolvimento dos herbicidas, o controle qumico rapidamente dominou os demais mtodos de manejo. Conseqentemente, todas as outras alternativas decresceram em importncia, embora o controle fsico ainda continue a ser hoje mais importante do que o cultural e o biolgico. Esses autores esperam que, nos prximos 10 ou 20 anos, haja um decrscimo na importncia do controle qumico, devido principalmente a motivos sociais e ambientais. Os mtodos fsicos devem ressurgir devido a sua facilidade em substituir o controle qumico. Assim, o manejo sustentvel das plantas invasoras no futuro ter uma distribuio mais equilibrada ou integrada entre as categorias de controle. Os produtos qumicos continuaro a constituir-se em uma alternativa rpida para a soluo dos problemas, porm os novos produtos sero mais seguros e sero usados com mais critrio, em um verdadeiro programa de manejo integrado. Os implementos mecnicos tradicionais ou novos sero de grande utilidade no futuro, mas seu uso estar acoplado ao conhecimento da ecologia das plantas invasoras. Os mtodos culturais que sero mais explorados no futuro incluem: poca e densidade de plantio,
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seleo da variedade, escolha do mtodo de cultivo, rotao de culturas e culturas de cobertura (usadas para impedir a proliferao de plantas daninhas entre os ciclos das culturas principais). Os mtodos fsicos incluem o cultivo mnimo, descargas eltricas e solarizao; sendo que nos mtodos biolgicos esto includos insetos fitfagos e fitopatgenos.

OBTENO DE SISTEMAS ALTERNATIVOS

A compreenso da natureza somente possvel num enfoque holstico, observando ciclos, trabalhando com sistemas e respeitando as inter-relaes e propores. Todos os fatores so interdependentes. Com o enfoque temtico-analtico que vem predominando na agricultura, perdeu-se a viso geral do sistema e, assim, aumentaram os problemas relacionados com a proteo de plantas, devido a um manejo inadequado dos solos, da natureza e do prprio controle desses problemas. O processo evolutivo para a converso dos agroecossistemas em sistemas agrcolas de alto grau de sustentabilidade possui duas fases distintas: 1) melhora da eficincia do sistema convencional, com a substituio dos insumos e das prticas agrcolas; 2) redesenho dos sistemas agrcolas. A primeira fase vem sendo trabalhada de forma relativamente organizada, com a reduo do uso de insumos, controle e manejo integrado, tcnicas de cultivo mnimo do solo, previso da ocorrncia de pragas e doenas, controle biolgico, variedades adequadas, feromnios, integrao de culturas, cultivos em faixa ou intercalados, desenvolvimento de tcnicas de aplicao que visem apenas o alvo e conscientizao dos consumidores, entre outros. Em relao ao redesenho dos sistemas agrcolas h a necessidade de se conhecer a estrutura e o funcionamento dos diferentes sistemas, seus principais problemas e, conseqentemente, desenvolver tcnicas limpas para resolv-los (Edwards, 1989). Devido complexidade dessa tarefa, esforos vm sendo realizados por diferentes correntes de pesquisa, mas todas consideram a mnima dependncia externa de insumos, a biodiversidade, o aproveitamento dos ciclos de nutrientes, a explorao das atividades biolgicas, o uso de tcnicas no poluentes, o reaproveitamento de todos os subprodutos e a integrao do homem no processo. Essa forma de agricultura vem sendo denominada agricultura alternativa, onde diferentes correntes se destacam: agricultura orgnica, agricultura ecolgica, agricultura natural, agricultura biodinmica, etc. Em relao sustentabilidade, pode-se afirmar que tanto os sistemas encontrados na primeira fase, quanto na segunda, apresentam maior grau de sustentabilidade que o convencional, mas no a auto-sustentabilidade.

O cultivo de dend no sul de Belm/PA um exemplo da evoluo observada na primeira fase do processo evolutivo. Como o Elaeidobios (bicho nanico), polinizador da cultura, essencial para a produo, no poderia ser eliminado devido ao uso de pesticidas para o controle de desfolhadores e de doenas. Assim, realizado um monitoramento constante sobre a ocorrncia de doenas, pragas e seus inimigos naturais. O controle realizado de forma biolgica, isto , nos focos so aplicados agentes de controle biolgico ou feito o monitoramento para verificar a presena de inimigos naturais no local. Quando se verifica a presena desses organismos, aguardada a morte dos insetos, feita a coleta e, aps a triturao, o produto resultante pulverizado sobre as plantas. Quando necessrio, lanase mo do Bacillus thuringiensis. A adubao nitrogenada realizada pelo cultivo de uma leguminosa (puerria) que deposita no solo entre 300 e 400 kg de N por hectare por ano. Essa leguminosa, alm do fornecimento do N, protege o solo e impede o desenvolvimento de outras invasoras. Outra praga, a broca do coqueiro, transmissora do anel vermelho, controlada exclusivamente com o uso de feromnios. Assim, o sistema tem se mantido estvel. Os cultivos orgnicos esto expandindo rapidamente, tanto em pases desenvolvidos, como em desenvolvimento, onde os produtos orgnicos freqentemente so destinados ao mercado externo. Os novos produtores, de modo geral, ingressam no negcio a partir de informao de outros agricultores orgnicos. Esse fato ocorre porque a pesquisa, geralmente, encontra-se atrasada em relao s prticas agrcolas adotadas pelos produtores orgnicos, especialmente com relao proteo de plantas. H ainda muitas questes a serem respondidas sobre o desenvolvimento de doenas na agricultura orgnica. Muitas delas no podem ser resolvidas em curto espao de tempo, em experimentos reducionistas, mas necessitam de um maior grau de integrao. necessria a estreita colaborao entre os vrios especialistas, como da rea de Biologia Molecular para o desenvolvimento de ferramentas para determinao da biodiversidade, ou da rea de Epidemiologia para o desenvolvimento de estratgias para o estudo da distribuio espacial e temporal de patgenos em culturas e em ambientes semi naturais. A pesquisa em agricultura orgnica tambm requer a estreita colaborao entre agrnomos, ecologistas, especialistas em solos e proteo de plantas e economistas (van Bruggen, 2001). Dos trabalhos de pesquisa realizados comparando a severidade de doenas de plantas em sistemas orgnicos e convencionais, de modo geral, as doenas radiculares so menos severas nos cultivos orgnicos, enquanto que as doenas foliares podem ser mais ou menos severas ou similares, dependendo da reao do patgeno, do estado nutricional da planta (principalmente o teor de nitrognio) e condies climticas. Geralmente, h maiores dificuldades de controle de doenas foliares do que das radiculares
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por meio de mtodos biolgicos e culturais, especialmente em regies de clima mido (van Bruggen, 2001). Uma abordagem sistmica foi adotada por Gliessman et al. (1996), que conduziram estudos para verificar as limitaes durante a converso para o sistema orgnico de produo de morangos. Foi avaliada a eficincia dos mtodos alternativos, alteraes nas caractersticas do solo, ocorrncia de pragas, doenas e populaes benficas (antagonistas e predadores), respostas da cultura, alm de avaliao econmica. Trabalho com abordagem semelhante vem sendo desenvolvido na Universidade da California (Estados Unidos), para a cultura da ma (Caprile, 1994). Em ambos os estudos, tem sido demonstrado que a agricultura orgnica conduz ao aumento da biodiversidade, melhora as caractersticas fsicas, qumicas e biolgicas do solo e o retorno econmico ainda continua dependente do manejo de pragas e doenas. O uso da informao, por meio de ferramentas como modelos matemticos, fundamental para a tomada de deciso em todos os tipos de sistemas. A reduzida capacidade de processar informaes, no passado, restringiu a habilidade de redesenhar sistemas alternativos. Estudos epidemiolgicos so fundamentais para uma maior compreenso da estrutura e do funcionamento dos sistemas de produo em relao ao comportamento das doenas e das pragas no campo e a otimizao dos seus controles. Com o conhecimento da estrutura e do funcionamento dos sistemas de produo, pode-se entender melhor a sade das plantas e no somente os fatores relacionados s pragas e doenas de cada cultura.

CONSIDERAES FINAIS
O desenvolvimento da proteo de plantas em sistemas alternativos de cultivo com maior grau de sustentabilidade necessita que se estude a estrutura e o funcionamento dos agroecossistemas, com ateno especial s condies nutricionais, estrutura e biota do solo, biodiversidade funcional, elevao dos teores de matria orgnica do solo e outros fatores que permitam um adequado manejo dos sistemas de cultivo. O conceito absoluto de agricultura sustentvel pode ser impossvel de ser obtido na prtica, entretanto funo da pesquisa e da extenso oferecer opes para que sistemas mais sustentveis sejam adotados. Para tanto, os projetos de pesquisa pontuais e de curta durao so de pouca utilidade. As discusses demonstram a necessidade da interdisciplinaridade dos projetos de pesquisa, pois somente estudos que incluem o monitoramento de sistemas de produo nas diversas reas do conhecimento fornecero informaes suficientes para o entendimento das diferentes interaes.
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BIBLIOGRAFIA
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MANEJO SUSTENTVEL DE DOENAS RADICULARES EM SOLOS TROPICAIS
SAMI JORGE MICHEREFF LUIZ AUGUSTO MARTINS PERUCH DOMINGOS EDUARDO GUIMARES TAVARES DE ANDRADE

INTRODUO
A agricultura sustentvel se baseia em quatro alicerces fundamentais: sustentabilidade (habilidade para manter o sistema em existncia por um longo perodo de tempo quando submetido a estresse), estabilidade (obteno consistente de rendimento a curto ou longo prazo), produtividade (capacidade de produo por rea) e equidade (distribuio relativa de riqueza na sociedade). Dentre outros aspectos, a sustentabilidade agrcola implica, necessariamente, na resoluo dos problemas relacionados ocorrncia de doenas de plantas, com base na conservao dos recursos naturais, aumento da diversidade biolgica, reduo no uso de pesticidas e maximizao da produtividade (Thurston, 1992). As doenas radiculares provocam perdas atravs de tombamentos de plntulas, podrides do colo e razes, murchas vasculares e galhas, estando entre os principais fatores que reduzem drasticamente a produtividade de culturas de interesse alimentar no mundo (Hillocks & Waller, 1997b). Mesmo assim, as doenas radiculares tm recebido menos ateno que doenas foliares. Isto se deve, principalmente, ao fato dos sintomas serem confinados s razes, refletindo na dificuldade de observao dos mesmos ao nvel do solo e complexidade dos fatores envolvidos na interao hospedeiro-patgeno-ambiente (Figura 2.1). Os fitopatgenos habitantes do solo podem ser definidos como organismos que passam a maior parte de seu ciclo de vida no solo. Tipicamente, infectam razes ou caules, e seus estdios de disseminao e sobrevivncia so confinados ao solo, embora alguns fitopatgenos possam tambm produzir esporos disseminados pelo ar ou gua, o que resulta na disseminao em grandes reas (Hillocks & Waller, 1997b).
Michereff, S.J. & Barros, R. (Eds.) Proteo de Plantas na Agricultura Sustentvel. 2001. Recife, UFRPE

Direitos de edio reservados aos editores ISBN 85-87459-06-6

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Figura 2.1 Interao dos componentes que afetam o crescimento e a sanidade de plantas envolvendo patgenos radiculares [adaptado de Curl (1982)]. Nesse captulo, sero considerados fitopatgenos habitantes do solo ou patgenos radiculares, somente aqueles organismos que tm capacidade para sobreviver no solo por um longo perodo na ausncia de seu hospedeiro e infectam rgos subterrneos das plantas. Essa abordagem exclui fungos e bactrias que no apresentam estruturas de resistncia ou reduzida habilidade de competio saproftica. Para estes, as sementes ou os resduos de culturas constituem a fonte de inculo inicial, mas os sintomas aparecem principalmente nos rgos areos da planta. A compreenso das relaes entre patgeno, hospedeiro e ambiente no tarefa simples, pois as interaes entre estes vrtices do tringulo de doenas radiculares se desenvolvem num sistema de grande complexidade: o solo. Caractersticas abiticas e biticas atuam de modo direto e indireto com diferentes intensidades e de maneira imprevisvel sobre o desenvolvimento de doenas. A biologia de patgenos radiculares complexa. Somam-se a
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esta complexidade as limitaes operacionais decorrentes da opacidade do solo, o que dificulta a realizao de observaes detalhadas e acuradas. Outro fator complicador a presena de uma populao estabelecida de microrganismos com sua prpria biologia no solo, sem uma conexo com a planta hospedeira (Maffia & Mizubuti, 2001). Em ambientes tropicais, os problemas com patgenos radiculares parecem ser ainda mais srios, uma vez que as condies climticas sofrem menores flutuaes e so favorveis ao crescimento de plantas durante todo o ano. Este fato, alm de ter um efeito positivo direto sobre a populao do patgeno, indiretamente permite a presena constante de plantas hospedeiras. Por outro lado, em regies temperadas, as populaes dos fitopatgenos so reduzidas significativamente devido as temperatura baixas do solo durante o inverno e ausncia de hospedeiros. Outra caracterstica de boa parte dos solos tropicais o maior grau de intemperizao. Geralmente, estes solos apresentam baixo teor de matria orgnica e menor diversidade biolgica. Dessa forma, uma vez introduzidos, os patgenos se estabelecem com facilidade, pois encontram menor competio e poucos inimigos naturais (Lima et al., 2001). Na agricultura de pequena escala ou de subsistncia, em que os agricultores normalmente produzem e selecionam suas sementes durante vrias geraes na propriedade, as plantas conseguem atingir bons nveis de produtividade sob condies sub-timas de desenvolvimento. Com exceo de algumas infeces de sementes, normalmente, as doenas no constituem um fator importante em sistemas de produo com baixa utilizao de insumos at que cultivares e mtodos melhorados sejam adotados. Quando as culturas so desenvolvidas nos trpicos sob sistemas de manejo intensivo, as doenas so problemas mais srios que em zonas temperadas (Thurston, 1998). As doenas radiculares com maiores informaes de pesquisa so geralmente aquelas afetando importantes culturas exportadas para centros desenvolvidos. Com a crescente necessidade de aumento da produo de alimentos nos pases em desenvolvimento, torna-se imprescindvel a alocao de recursos para as investigaes sobre o papel dos patgenos radiculares na reduo do rendimento de culturas em sistemas de produo tropical (Tabela 2.1).

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Tabela 2.1 Principais doenas radiculares em culturas nos trpicos.

Cultura Abacate Doena Tombamento de pntulas Gomose Podrido radicular Murcha de verticlio Podrido negra Podrido radicular Patgeno Rhizoctonia solani Phytophthora cinnamomi Rosellinia necatrix Verticillium albo-atrum Verticillium dahliae Thielaviopsis paradoxa P. cinnamomi Phytophthora parasitica Pythium spp. R. solani Pythium spp. Sclerotinia sclerotiorum Sclerotinia minor R. solani Erwinia carotovora R. solani Pythium spp. Sclerotium rolfsii Thielaviopsis basicola Fusarium oxysporum f.sp. vasinfectum V. dahliae V. albo-atrum Macrophomina phaseolina Meloidogyne spp. R. solani Pythium spp. Phytophthora spp. Pyrenochaeta terrestris F. oxysporum f.sp. cepae Fusarium solani Sclerotium cepivorum R. solani Pythium spp. Phytophthora spp. E. carotovora Ditylenchus dipsaci Aspergillus niger S. rolfsii R. solani Cylindrocladium crotalariae S. rolfsii R. solani Pythium spp. Ralstonia solanacearum F. oxysporum f.sp. cubense Radhopholus similis

Abacaxi

Alface

Tombamento de plntulas Mofo branco Queima da saia Podrido mole

Algodo

Tombamento de plntulas

Podrido negra Murcha de fusrio Murcha de verticlio Podrido cinzenta do caule Meloidoginose Alho e cebola Tombamento de plntulas

Raiz rosada Podrido basal Podrido seca Podrido branca Tombamento de plntulas

Podrido mole Nematide do bulbo Amendoim Podrido do colo Murcha de esclercio Rizoctoniose Podrido negra Podrido do caule Rizoctoniose Podrido radicular Moko Mal do Panam Nematide caverncola

Arroz

Banana

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Tabela 2.1 Continuao ...

Cultura Batata Doena Murcha de verticlio Podrido seca Rizoctoniose Podrido cinzenta do caule Podrido de tubrculos Murcha bacteriana Sarna comum Podrido mole e canela preta Meloidoginose Nematide das leses radiculares Batata-doce Murcha de fusrio Podrido do colo Podrido do p Podrido do caule Podrido radicular Podrido de tubrculos Murcha de verticlio Podrido branca Tombamento de plntulas Patgeno V. dahliae V. albo-atrum Fusarium spp. R. solani M. phaseolina Rhizopus oryzae R. solanacearum Streptomyces scabies E. carotovora Erwinia chrysanthemi Meloidogyne spp. Pratylenchus spp. F. oxysporum f.sp. batatas S. rolfsii Plenodomus destruens M. phaseolina Lasiodiplodia theobromae Rhizopus stolonifer V. dahliae V. albo-atrum S. sclerotiorum R. solani Pythium spp. Phytophthora spp. R. solanacearum E. carotovora Meloidogyne spp. R. solani Pythium spp. Phytophthora spp. Phoma betae S. rolfsii R. solani Phytophthora spp. Rosellinia spp. Ganoderma philippii Fommes lignosus L. theobromae V. dahliae V. albo-atrum Rosellinia spp. F. solani R. solani Meloidogyne spp. S. rolfsii T. paradoxa Pythium spp. S. rolfsii Meloidogyne spp. Pratylenchus spp.

Berinjela e jil

Murcha bacteriana Podrido mole Meloidoginose Beterraba Tombamento de plntulas

Podrido branca Rizoctoniose Cacau Podrido parda Podrido negra Podrido vermelha Podrido branca Cancro de Lasiodiplodia Murcha de verticlio Podrido radicular Podrido do caule Rizoctoniose Meloidoginose Podrido de esclercio Podrido abacaxi Podrido radicular Podrido de esclercio Meloidoginose Nematide das leses radiculares

Caf

Caju Cana-de-acar

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Tabela 2.1 Continuao ...

Cultura Caupi Doena Murcha de fusrio Podrido cinzenta do caule Podrido do colo Podrido do caule Tombamento de plntulas Tombamento de plntulas Patgeno F. oxysporum f.sp. tracheiphilum M. phaseolina S. rolfsii Phytophthora vignae R. solani R. solani Pythium spp. Phytophthora spp. E. carotovora Meloidogyne spp. Phytophthora spp. F. solani S. sclerotiorum R. solani S. rolfsii E. carotovora S. sclerotiorum R. solani F. solani f.sp. pisi Cylindrocladium clavatum P. parasitica R. solani F. oxysporum f.sp. pisi Meloidogyne spp. F. oxysporum f.sp. phaseoli F. solani f.sp. phaseoli M. phaseolina S. sclerotiorum S. rolfsii R. solani Pythium spp. R. solani Pythium spp. S. rolfsii S. sclerotiorum P. parasitica F. oxysporum f.sp. nicotianae S. sclerotiorum R. solanacearum Meloidogyne spp. A. niger Rhizopus spp. L. theobromae F. oxysporum F. solani S. rolfsii Scutelonema bradys Pratylenchus spp. Meloidogyne spp.

Cenoura

Podrido mole Nematide das galhas Citros Couve comum, couvechinesa, couve-flor e repolho Ervilha Podrido do p Podrido de fusrio Podrido branca Tombamento de plntulas Podrido do colo Podrido mole Podrido branca Podrido do colo Podrido radicular

Murcha de fusrio Meloidoginose Feijo Murcha de fusrio Podrido radicular seca Podrido cinzenta do caule Podrido branca Murcha de esclercio Tombamento de plntulas Tombamento de plntulas

Fumo

Caule preto Murcha de fusrio Podrido de esclerotinia Murcha bacteriana Meloidoginose Inhame Podrido de tubrculos

Podrido do colo Casca preta Meloidoginose

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Tabela 2.1 Continuao ...

Cultura Mamo Mandioca Doena Podrido do p Podrido seca Podrido radicular seca Podrido radicular mole Podrido de ramas Podrido do colo Podrido negra Podrido branca Podrido seca Murcha de fusrio Podrido do p Podrido radicular Meloidoginose Murcha de fusrio do pepino Murcha de fusrio do melo Murcha de fusrio da melancia Murcha de fusrio do pepino Crestamento gomoso Podrido do caule Podrido do colo Podrido seca Podrido de fusrio Podrido de dipldia Podrido do colmo Queima de plntulas Patgeno Phytophthora palmivora F. solani F. solani Phytophthora drechsleri L. theobromae S. rolfsii Rosellinia spp. F. lignosus L. theobromae F. oxysporum f.sp. passiflorae P. cinnamomi F. solani Meloidogyne spp. F. oxysporum f.sp. cucumerinum F. oxysporum f.sp. melonis F. oxysporum f.sp. niveum F. oxysporum f.sp. cucumerinum Didymella bryoniae S. sclerotiorum M. phaseolina F. solani f.sp. cucurbitae F. moniliforme Fusarium graminearum Diplodia maydis M. phaseolina Pythium spp. R. solani F. moniliforme Phytophthora capsici S. rolfsii S. sclerotiorum R. solanacearum E. carotovora E. chrysanthemi Phytophthora spp. Phellinus noxius F. lignosus R. solani Pythium spp. F. oxysporum f.sp. glycines S. rolfsii M. phaseolina F. solani S. sclerotiorum F. solani f.sp. sojae Phytophthora megasperma f.sp. glycinea Diaporthe phaseolorum f.sp. meridionalis Meloidogyne spp. Heterodera glycines

Manga Maracuj

Melo, melancia, pepino, chuchu e abbora

Milho

Pimento

Requeima ou murcha Podrido de esclercio Podrido de esclerotinia Murcha bacteriana Talo oco e podrido mole Cancro do tronco Podrido radicular Tombamento de plntulas Murcha de fusrio Murcha de esclercio Podrido cinzenta do caule Podrido radicular vermelha Podrido branca Podrido radicular seca Podrido radicular mole Cancro da haste Meloidoginose Nematide de cisto

Seringueira

Soja

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Tabela 2.1 Continuao ...

Cultura Sorgo Tomate Doena Podrido do colmo Murcha de fusrio Murcha de verticlio Requeima Podrido de esclercio Podrido de esclerotinia Tombamento de plntulas Murcha bacteriana Talo oco e podrido mole Meloidoginose Nematide das leses radiculares Uva Declnio Fusariose Podrido radicular Galha na coroa Meloidoginose Nematide das leses radiculares Patgeno M. phaseolina F. oxysporum f.sp. lycopersici V. dahliae V. albo-atrum P. parasitica S. rolfsii S. sclerotiorum R. solani R. solanacearum E. carotovora E. chrysanthemi Meloidogyne spp. Pratylenchus spp. Eutypa lata F. oxysporum f.sp. herbemontis Phytophthora spp. Agrobacterium tumefaciens Meloidogyne spp. Pratylenchus spp.

Fonte: Hillocks & Waller (1997a), Kimati et al. (1997),Vale & Zambolim (1997) e Zambolim et al. (2000).

INCULO DE PATGENOS RADICULARES Conceitos de inculo

Inculo qualquer estrutura do patgeno capaz de causar infeco, incluindo estruturas vegetativas e reprodutivas (Amorim, 1995). Alguns conceitos envolvendo inculo de patgenos radiculares, incluindo fungistase do solo, potencial de inculo, densidade de inculo e eficincia de inculo, necessitam ser caracterizados antes de uma anlise das estratgias de manejo de doenas radiculares.
Fungistase do solo

O entendimento do conceito de fungistase do solo crtico para a compreenso da sobrevivncia e ecologia de fitopatgenos habitantes do solo e da epidemiologia de doenas radiculares (Benson, 1994). Fungistase refere-se s propriedades de natureza bitica e/ou abitica de solos naturais que inibem a germinao de propgulos germinveis dentro ou em contato com o solo (Bruehl, 1987). Falha para germinar dentro ou sobre o solo na ausncia de acares, aminocidos ou outros estimulantes liberados pelo
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hospedeiro potencial (sementes, razes, etc.), um atributo essencial de propgulos de muitos fungos habitantes do solo. Sob condies desfavorveis, os fungos apresentam maneiras para restringir a germinao de propgulos, tendo em vista que so heterotrficos (dependentes de nutrientes produzidos por outros organismos) e a germinao na ausncia de alimento potencial poderia levar morte. Em combinao com substncias inibitrias, a fungistase propicia um mecanismo biolgico que assegura o sucesso da infeco de propgulos de patgenos habitantes do solo. A fungistase causada por um complexo de inibidores e estimulantes no solo, motivo pelo qual a investigao desses fatores separadamente leva a falhas para caracterizar adequadamente o fenmeno. Mudanas na concentrao de inibidores ou estimulantes afetam o balano fungisttico no solo e resultam na induo, manuteno ou liberao da fungistase (Watson & Ford, 1972).
Potencial de inculo

Procurando contemplar vrias abordagens envolvendo patgenos radiculares, Lockwood (1988) conceituou potencial de inculo como: a energia de crescimento do organismo patognico que est disponvel para a infeco na superfcie do rgo do hospedeiro, resultante de quatro componentes: (1) densidade de inculo ou nmero de propgulos; (2) energia exgena e endgena dos propgulos por unidade; (3) virulncia dos propgulos; (4) fatores ambientais, biticos e abiticos, determinantes da atividade do inculo. Para efeito de anlise quantitativa, Baker (1978) expressou potencial de inculo em termos matemticos como: log s = m (log x + log v + log n + log f), onde s o nmero de infeces com sucesso, m a inclinao da curva densidade de inculo x infeco, x a densidade de inculo, v a virulncia do patgeno, n o estado nutricional do propgulo e f o efeito das influncias ambientais na eficincia da germinao e penetrao. Crticas a essa proposio foram efetuadas por Benson (1994), ao considerar que existem vrias limitaes nos estudos envolvendo patgenos radiculares. Mensuraes absolutas do grau de virulncia, estado nutricional e influncias ambientais na germinao e penetrao so difceis, se no impossveis, de serem determinadas. Embora o conceito de potencial de inculo seja questionado devido impossibilidade de quantificar a energia no sistema, pode incorporar ou integrar aspectos do inculo ainda pouco entendidos, enquanto conceitos baseados em termos quantificveis sejam escassos ou indisponveis (Hornby, 1998).

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Densidade de inculo

Densidade de inculo a medida do nmero de propgulos por unidade de peso ou volume de solo. O termo conveniente para expressar a quantidade de inculo no solo, pois as chances de infeco de plantas por patgenos radiculares relacionam-se quantidade de inculo disponvel. Essa relao muito importante para patgenos radiculares devido baixa capacidade de redistribuio. Patgenos radiculares existem no solo em estdios mltiplos e desconhecidos, motivo pelo qual a densidade de inculo pode ser expressa como unidades formadoras de colnias (ufc) por grama de solo ao invs de propgulos por grama (Benson, 1994). A densidade de inculo constitui uma maneira prtica de verificar mudanas no nmero de propgulos em um perodo de tempo. Como existem excelentes publicaes sobre mtodos de deteco e quantificao do inculo de patgenos radiculares (Davet & Rouxel, 2000; Dhingra & Sinclair, 1995; Johnson & Curl, 1972; Singleton et al., 1992), esse aspecto no ser abordado com detalhes. Exemplos de altas densidades de inculo de fungos fitopatognicos detectados no solo so apresentados na Tabela 2.2. Tabela 2.2 Exemplos de densidades mximas de inculo de fungos fitopatognicos detectados no solo, em condies de campo.
Patgeno Fusarium oxysporum f.sp. cubense Fusarium oxysporum f.sp. melonis Fusarium oxysporum f.sp. niveum Fusarium oxysporum f.sp. tracheiphilum Fusarium oxysporum f.sp. vasinfectum Fusarium solani f.sp. phaseoli Thielaviopsis basicola Verticillium dahliae Macrophomina phaseolina Rhizoctonia solani Sclerotium cepivorum Sclerotium rolfsii Sclerotinia minor Sclerotinia sclerotiorum Phytophthora parasitica Phytophthora parasitica var. nicotianae Phytophthora palmivora Hospedeiro banana melo melancia caupi algodo feijo fumo batata soja soja alho amendoim alface girassol citrus fumo mamo Propgulos/g de solo 760 3.300 3.388 361 5000 1.420 577 106 1.000 8,5 12,8 7,8 2 1,7 11.320 1.000 5.000

Fonte: Davis & Everson (1986), Hall (1996), Harris & Ferris (1991), Holley & Nelson (1986), McFadden et al. (1989), Meyer & Shew (1991), Mihail (1989), Neher et al. (1993), Paplomatas et al. (1992) e Subbarao et al. (1996).

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Eficincia do inculo

A eficincia do inculo uma medida do sucesso do propgulo para incitar uma infeco. Em termos de populao de propgulos, eficincia do inculo a porcentagem de propgulos que tem xito em iniciar uma infeco. Tendo como base um propgulo individual, eficincia do inculo a probabilidade que um nico propgulo teria para causar uma infeco. A forma do inculo, seu estado nutricional, a distncia do stio de infeco e as condies ambientais afetam a eficincia do inculo. Com o passar do tempo, a eficincia do inculo de propgulos sujeitos fungistase do solo pode ser aumentada, diminuda ou inalterada, dependendo das flutuaes ambientais e dos nveis de nutrientes no solo. Contudo, essas mudanas na eficincia do inculo no se manifestam at o hospedeiro estar presente (Benson, 1994). Como exemplo, Bowers & Mitchell (1991) analisaram a relao entre densidade de oosporos de Phytophthora capsici e a mortalidade em pimento. A eficincia do inculo dos oosporos foi estimada atravs dos dados de porcentagem de mortalidade aps transformao para infeco mltipla e calculo por regresso (y = a + b.x) do nmero estimado de infeces, como ln[l/(1 - y)], onde y incidncia de doena, em relao ao nmero de oosporos por grama de solo. Assim, a eficincia do inculo foi estimada pela inclinao da linha de regresso (b) do nmero estimado de xitos nas infeces por planta em relao ao nmero de oosporos por grama de solo. Para P. capsici, a eficincia de inculo foi de 0,011, ou seja, eram necessrios cerca de 91 oosporos por grama de solo para que ocorresse xito na infeco. No patossistema P. capsici-pimento, os oosporos germinam indiretamente para formar esporngios que liberam zoosporos que infectam os tecidos de planta. A baixa eficincia do inculo para oosporos era esperada, pois os oosporos no infectam o hospedeiro diretamente, mas atravs de um processo indireto de mltiplas fases.

Formas de inculo
Patgenos radiculares existem no solo em formas especficas relacionadas s caractersticas de desenvolvimento de cada patgeno. O inculo pode ser constitudo de clulas unicelulares com poucos micrmetros de tamanho, para bactrias habitantes do solo, variando at estruturas multicelulares de aproximadamente 10 mm, para fungos formadores de esclercio. O entendimento da natureza e forma do inculo que sobrevive no solo e sua habilidade para iniciar infeces primrias so indispensveis para o desenvolvimento de estratgias de manejo de doenas radiculares. Fungos podem existir no solo sob a forma de esporangiosporos, oosporos, clamidosporos, esporngios, zoosporos, condios, esclercios,
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microesclercios ou miclios associados com restos culturais. Em relao s bactrias, as clulas unicelulares e aglomeradas de clulas associados com restos de plantas so os principais meios de sobrevivncia no solo. As estruturas de resistncia constituem os propgulos bsicos para infeco dos hospedeiros por muitos patgenos do sistema radicular. O conhecimento do tipo de estrutura determina a forma de sobrevivncia do patgeno, a tcnica mais apropriada para efetuar a amostragem e a quantificao do inculo, bem como as medidas a serem adotadas visando o controle. Na Tabela 2.3 so apresentados exemplos de formas de inculo e as estruturas e/ou processos responsveis pela sobrevivncia de patgenos radiculares em solos tropicais. Tabela 2.3 Tipos de inculo produzidos por patgenos radiculares e estruturas de resistncia no solo.
Patgeno Fungos Phytophthora Fusarium oxysporum Fusarium solani Macrophomina Lasiodiplodia Pyrenochaeta Rhizoctonia Sclerotium Bactrias Agrobacterium Streptomyces Erwinia Ralstonia Xanhtomonas Nematides Ditylenchus dipsaci Globodera Heterodera Meloidogyne Tipo de inculo Estrutura e/ou mecanismo de resistncia clamidosporo, oosporo clamidosporo clamidosporo, esclercio picndio, microesclercio picndio, esclercio picndio, microesclercio esclercio esclercio

miclio, esporngio, zoosporo, clamidosporo, oosporo miclio, microcondio, macrocondio, clamidosporo miclio, microcondio, macrocondio, clamidosporo, esclercio miclio, picndio, condio, microesclercio miclio, picndio, condio, esclercio miclio, picndio, condio, microesclercio miclio, esclercio miclio, esclercio

clula clula, esporo de resistncia (endosporo) clula clula clula

hipobiose (clula) endosporo hipobiose (clula) hipobiose (clula) hipobiose (clula)

juvenis, adultos, juvenis de 3o. e 4o. estdio juvenis, adultos, ovos, cistos juvenis, adultos, ovos em massa juvenis, adultos, ovos em massa

anidrobiose (juvenis de 3o. e 4o. estdio) cistos criptobiose (ovos em massa) criptobiose (ovos em massa)

Fonte: Bruehl (1987) e Singleton et al. (1992).

O aumento da populao de um agente patognico est intimamente relacionado sua capacidade de reproduo, forma e natureza dos propgulos e ao modo como estas unidades infecciosas so dispersas. Para
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alguns microrganismos patognicos, a reproduo ocorre uma nica vez durante o perodo em que o seu hospedeiro est na rea, enquanto para outros se reproduzem mltiplas vezes ao longo desse perodo cultural. Se a reproduo ocorre uma nica vez, cada propgulo participa somente em um nico ciclo de patognese ao longo do perodo em que o hospedeiro se desenvolve. Cada ciclo equivalente a uma gerao do agente patognico que compreende a disseminao dos propgulos, sua deposio e germinao na superfcie do hospedeiro, penetrao e estabelecimento do agente patognico nos tecidos e, finalmente, a produo de novos propgulos (Ferraz, 1990). Muitos fitopatgenos habitantes do solo causam doenas radiculares que so monocclicas, ou seja, concluem parcial ou completamente no mximo um ciclo de patognese por perodo de cultivo da planta hospedeira, desenvolvendo infeces resultantes de inculo primrio. Outros patgenos, como Aphanomyces spp., Phytophthora spp., Rhizoctonia solani e Sclerotium rolfsii, podem induzir doenas policclicas, ou seja, o inculo secundrio produzido durante o desenvolvimento da doena resulta em infeces adicionais ou novas infeces em outro hospedeiro (Benson, 1994).
Inculo primrio

A forma de inculo existente no solo que inicia a infeco de tecidos do hospedeiro direta ou indiretamente chamada inculo primrio. A formao do inculo primrio pode acontecer em tecidos do hospedeiro durante a patognese ou como resultado de colonizao saproftica de tecidos mortos do hospedeiro. Microesclercios de V. dahliae so um exemplo de inculo primrio formado saprofiticamente em tecidos do hospedeiro aps a patognese. Em outros casos, o inculo primrio pode ser formado como resultado da converso de propgulos no solo. Macrocondios de F. solani, formados em esporodquios sobre os tecidos do hospedeiro, so convertidos a clamidosporos quando introduzidos no solo. O inculo primrio est sujeito a vrias adversidades durante a fase de sobrevivncia. Os fatores ambientais podem influenciar o estado nutricional do inculo primrio durante a sobrevivncia e, conseqentemente, afetar o potencial e a eficincia do inculo (Benson, 1994). Esclercios e microesclercios so dois outros exemplos de inculo primrio que persistem por longos perodos no solo. Esclercios de Sclerotium spp. e Sclerotinia spp. desenvolvem-se de hifas na superfcie externa de tecidos de plantas infectados. Determinado cultivo pode introduzir esclercios no solo e quando os resduos culturais se decompem, os esclercios sobrevivem como inculo primrio. Esclercios podem ser organizados em tecidos distintos como casca e medula ou formar uma massa
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compacta de hifas emaranhadas, como so os casos de Sclerotium rolfsii e Rhizoctonia solani, respectivamente. Compostos volteis produzidos de restos culturais em decomposio podem estimular os esclercios e microesclercios para germinar e infectar tecidos hospedeiros (Punja, 1985). Microesclercios so formas efetivas de inculo primrio para fitopatgenos habitantes do solo como Macrophomina sp., Cylindrocladium sp. e Verticillium sp. Normalmente, microesclercios so formados em tecidos corticais do hospedeiro pelo desenvolvimento saproftico seguindo a atividade parastica do patgeno. Portanto, microesclercios ficam envolvidos no tecido hospedeiro at a decomposio do tecido na morte da planta ou aps a colheita. O inculo primrio de bactrias incluem clulas simples e aglomerado de clulas no solo em restos culturais ou razes de plantas suscetveis ou imunes como ervas daninhas. Devido s bactrias serem organismos unicelulares, a infeco do tecido hospedeiro ocorre diretamente a partir do inculo residente no solo por ferimentos, tais como ponto de emergncia e razes laterais.
Inculo secundrio

Em doenas radiculares, o inculo secundrio pode ser produzido dentro ou sobre as plantas infectadas. O inculo secundrio pode induzir infeces adicionais durante o ciclo da cultura e resultar num aumento da doena. Para culturas perenes, como rvores, no difcil visualizar a importncia do inculo secundrio em infeces secundrias do sistema radicular. Em alguns casos, o inculo secundrio pode tambm exercer uma funo em epidemias de culturas anuais. A importncia do inculo secundrio na canela preta do fumo, causada por Phytophthora parasitica var. nicotianae, foi demonstrada por Campbell & Powell (1980). Neste experimento, provavelmente, esporngios e/ou zoosporos formados nas razes de fumo, como resultado da infeco pelo inculo primrio, foram disseminados por irrigao ou chuva nos sulcos, resultando em novas infeces em plantas previamente no infectadas, evidenciando a importncia do inculo secundrio em doenas de juros simples, o que foi contestado durante muito tempo.

Influncias sobre o inculo

No ambiente do solo, o inculo pode ser estimulado a germinar e infectar o tecido do hospedeiro de zonas de influncia prximas s razes e s sementes germinando. O termo rizosfera refere-se a zona do solo em torno da raiz que influncia a microbiota. Na rizosfera, a populao microbiana e

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as relaes so diferentes de solos no rizosfricos, sendo que a grande atividade microbiana, incluindo de fitopatgenos, devida aos efeitos estimulantes de nutrientes exsudados na rizosfera. Muitos patgenos dependem de nutrientes da rizosfera para proporcionar a energia para germinao e infeco das razes do hospedeiro. Outra importante zona de influncia sobre inculo de fitopatgenos habitantes do solo a rea prxima semente germinando, denominada espermosfera. Exsudatos podem influenciar a germinao de esporos, o crescimento micelial, quimiotaxia de zoosporos e outros processos patognicos envolvidos no reconhecimento inicial e infeco de tecidos do hospedeiro. Padres de exsudao so hospedeiro-especficos e, algumas vezes, cultivarespecficos, podendo ser alterados por mudanas no ambiente e outros fatores fsicos que afetam o crescimento do hospedeiro. Alteraes nos padres de exsudao podem influenciar subsequente germinao de esporos e infeco na rizosfera. Germinao de propgulos na rizosfera, como resultado de nutrientes que superam a fungistase do solo, apenas um passo na infeco do tecido hospedeiro. Os nutrientes que favorecem a germinao podem no ter o mesmo efeito na penetrao e no desenvolvimento de leses. O efeito de nutrientes sobre a patognese na rizosfera pode ser analisado sob diferentes pontos de vista. Carbono e nitrognio so requeridos para germinao de esporos, mas efeitos indiretos envolvendo microrganismos saprofticos do solo mediados pela qualidade e quantidade dos exsudatos na espermosfera e rizosfera podem afetar a subsequente penetrao e desenvolvimento da doena.

Dinmica do inculo
A atividade de todos os seres vivos que integram o ecossistema determinada pelo fluxo de energia que flui por esse sistema. O solo um ecossistema que integra os organismos que nele e dele vivem, recebendo energia das mais variadas formas. Nesse sentido, a incorporao de fertilizantes qumicos ou orgnicos no solo e o plantio de determinada cultura so exemplos de fontes de energia introduzidas no agroecossistema. Durante o processo de decomposio da matria orgnica, so liberados nutrientes necessrios atividade da microbiota do solo e, em particular, dos microrganismos fitopatognicos. Alm disso, fontes de acares e aminocidos so exsudadas pelas sementes germinando e pelas razes de plantas jovens, constituindo plos de grande atividade microbiana. Considerando outros fatores ambientais constantes, o fluxo de energia que atravessa o ecossistema que o solo constitui determina, em ltima anlise, a atividade dos microrganismos que nele vivem e, por conseguinte, controla a
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dinmica dessas populaes. Nesse contexto, o potencial de inculo algo dinmico, cujo aumento ou reduo controlado pela variao do fluxo de energia que chega ao ecossistema (Ferraz, 1990). Os dois principais fatores na dinmica do potencial de inculo de fitopatgenos habitantes do solo so (1) a natureza da resposta de crescimento que pode servir para aumentar a biomassa mediante a introduo de energia no sistema e (2) a eficincia de utilizao da energia na preservao da populao. O primeiro determina o aumento na inclinao da curva da dinmica de potencial de inculo quando a energia disponvel e a segunda determina a extenso na qual a curva poder declinar entre perodos de disponibilidade de energia (Mitchell, 1979). A dinmica do potencial de inculo caracteriza-se por apresentar quatro fases, cuja durao varia com os hbitos de infeco e sobrevivncia do agente patognico, bem como com a natureza e suscetibilidade do hospedeiro. As circunstncias fsicas, qumicas e biolgicas predominantes no solo em cada momento constituem os fatores determinantes desse declive e regulam a atividade da populao do agente fitopatognico. Por conseguinte, a taxa de utilizao da energia disponvel determina a dinmica no potencial de inculo no solo (Mitchell, 1979). Em excelente compilao de informaes, Ferraz (1990) caracterizou as diferentes fases da dinmica do potencial de inculo de um agente fitopatognico no solo, representada por uma curva. Essa sequncia de fases encontra-se representada na Figura 2.2, em que o declive em cada ponto da curva constitui a caracterstica mais importante. O incio da atividade de um microrganismo fitopatognico no solo ocorre no momento em que a raiz entra em contato com um propgulo ou unidade infecciosa. At esse instante, o microrganismo encontra-se numa fase inativa, na forma de estruturas de resistncia que apresentam atividade metablica nula ou reduzida. Condies exgenas, impostas por fatores ambientais, ou condies endgenas, reguladas geneticamente pela prpria constituio dos propgulos, determinam a durao dessa fase. Segue uma fase de pr-colonizao, durante a qual um propgulo germina e entra em contato com as razes do hospedeiro que cresce nas suas proximidades. Um maior ou menor declive da curva nessa fase significa uma maior ou menor capacidade de resposta do agente patognico presena do hospedeiro, traduzida na rapidez de germinao dos seus propgulos e na taxa de crescimento mais ou menos elevada do seu miclio. Aps a penetrao no hospedeiro, ocorre a fase de colonizao, que se caracteriza pela invaso progressiva dos tecidos do hospedeiro e conseqente aumento da produo de biomassa do agente patognico. O declive da curva nessa fase traduz o grau de eficincia da relao agente patognico-hospedeiro, que ser tanto

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mais elevado quanto maior for a capacidade do parasita para extrair a mxima energia possvel.

Figura 2.2 Curva da dinmica do potencial de inculo de um agente fitopatognico no solo, com indicao das fases mais importantes [segundo Ferraz (1990)]. No momento em que a disponibilidade de energia diminui e atinge valores mnimos, como resultado das perturbaes funcionais causadas no hospedeiro pelo agente patognico, ocorre a reduo na produo de biomassa, iniciando a fase de sobrevivncia. Essa fase caracteriza-se por uma diminuio da atividade do agente patognico, prolonga-se para alm da morte do hospedeiro, pela colonizao dos tecidos vegetais mortos ou pelos propgulos do patgeno que sero liberados para o solo. Essa fase termina no momento em que esses propgulos entram em contato com uma nova fonte de energia que estimule sua germinao. Um maior ou menor declive da curva nessa fase significa que o perodo de sobrevivncia do agente patognico no solo ser mais ou menos longnquo. Quanto mais longo for esse perodo, mais elevado ser o risco a que uma cultura fica sujeita quando instalada numa rea, o que explica a grande nfase ao fenmeno da sobrevivncia quando o objetivo o manejo integrado de patgenos radiculares.

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A sobrevivncia dependente do modo como a energia conservada ao longo do tempo atravs de mecanismos que reduzem a atividade metablica dos organismos patognicos. Vrias estratgias determinam o perodo de sobrevivncia e, conseqentemente, a manuteno da populao de um organismo no solo, sendo possvel agrupa-los em duas categorias: (a) fatores inerentes ao agente patognico; (b) fatores inerentes aos propgulos. As caractersticas intrnsecas do agente patognico so fatores crticos aps a morte do hospedeiro, cuja resistncia invaso por outros microrganismos vai reduzindo at que cessa, no restando ao agente patognico, outra alternativa que no seja sobreviver ou resistir de outras maneiras. Trs caractersticas so fundamentais para a sobrevivncia de um agente patognico: (a) gama de hospedeiros; (b) capacidade de competio saproftica; (c) capacidade de produo de estruturas de resistncia. Os agentes patognicos que tm uma vasta gama de hospedeiros alternativos, independentemente de quaisquer outros mecanismos de sobrevivncia que possuam, esto melhor preparados para se perpetuarem, alongando assim o perodo em que os nveis das suas populaes no solo so elevados. A capacidade de competio saproftica a faculdade que um agente patognico tem de manter ou mesmo aumentar a sua biomassa por colonizao saproftica dos tecidos mortos do seu hospedeiro e/ou pela utilizao de substratos indiferenciados presentes no solo. Os atributos determinantes da capacidade para competio saproftica foram destacados por Garrett (1970), como: (a) rpida germinao dos propgulos; (b) elevada taxa de crescimento; (c) capacidade enzimtica para degradar celulose e lignina; (d) capacidade para produzir substncias biostticas; (e) tolerncia s substncias fungistticas produzidas por outros microrganismos. Os atributos que um agente patognico possui determina a maior ou menor capacidade para utilizar a energia disponvel no substrato. Quanto maior a capacidade para produzir estruturas de resistncia, maior ser o nmero de propgulos presentes no solo e, por conseguinte, o nvel da populao de um agente patognico. Duas caractersticas determinam a longevidade dos propgulos: (a) capacidade para resistir a condies adversas; (b) suscetibilidade a fatores biticos. O efeito negativo de fatores fsicos e qumicos do solo, principalmente temperatura, umidade, pH e concentrao de oxignio, na preservao da viabilidade dos propgulos como unidades infecciosas so evidentes e no sero analisados em detalhes. Mais marcante a influncia negativa dos fatores biticos na viabilidade das estruturas de resistncia dos patgenos, cujo fenmeno designado genericamente de antagonismo. Este se manifesta de diversas formas, tais como parasitismo, predao, competio, antibiose e biostase.
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A anlise dos fatores que determinam a sobrevivncia dos microrganismos no solo permite a distino de dois tipos de comportamento entre os patgenos radiculares: (a) aqueles cuja perpetuao ocorre sob a forma de miclio ativo, quer parasitando diversos hospedeiros quer colonizando saprofiticamente os mais variados substratos; (b) aqueles cuja sobrevivncia ocorre, preferencialmente, na forma de propgulos. Uma vez que esses modos de comportamento tm implicaes diretas na dinmica do potencial de inculo, importante distinguir duas sub-fases aps a morte do hospedeiro: a sub-fase de sobrevivncia ativa e a sub-fase de sobrevivncia passiva. Um declive reduzido na sub-fase de sobrevivncia ativa significa que o agente patognico apresenta uma vasta gama de hospedeiros alternativos e/ou uma elevada capacidade de competio saproftica. Na sub-fase de sobrevivncia passiva, o declive pouco acentuado da curva indica que a viabilidade dos propgulos como unidades infecciosas longa, tanto maior quanto mais elevada for a suscetibilidade fungistase que, como visto, prolonga a fase de dormncia. Na anlise do comportamento dos fungos habitantes do solo causadores de doenas radiculares, foram considerados aspectos gerais comuns a vrias espcies, embora esses microrganismos sejam diferentes entre si e apresentem formas de comportamento especficas. Portanto, necessrio considerar, caso a caso, o que ocorre com os agentes patognicos que apresentam hbitos de infeco e sobrevivncia distintos e verificar de que maneira tais diferenas de comportamento influem na dinmica dos seus inculos.

MANEJO SUSTENTVEL DE DOENAS RADICULARES

Considerando que muitas das doenas causadas por patgenos radiculares no so eficientemente controladas por produtos qumicos, ou se so, tal estratgia est associada a riscos ecolgicos, a busca por medidas alternativas de controle prioritria (Maffia & Mizubuti, 2001). Alm disso, embora um patgeno especfico possa, em certos casos, ser controlado por uma nica medida de controle, a complexidade dos fatores que envolvem o ciclo das relaes patgeno-hospedeiro requer o uso de mais de um mtodo para o controle satisfatrio da doena. Portanto, h necessidade da concentrao de esforos para combinar vrios mtodos de controle visando a obteno de sucesso na reduo da intensidade das doenas, resultando num alcance do mximo em produtividade sem reflexos negativos no meio ambiente, mas que sejam aceitveis pela sociedade e economicamente viveis (Zambolim & Vale, 2000).

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Princpios e estratgias de manejo de doenas

O controle de doenas de plantas pode ser agrupado em sete princpios biolgicos gerais: evaso - preveno da doena pelo plantio em pocas ou reas quando ou onde o inculo ineficiente, raro ou ausente; excluso preveno da entrada de um patgeno numa rea ainda no infestada; erradicao - eliminao do patgeno de uma rea em que foi introduzido; proteo - interposio de uma barreira protetora entre as partes suscetveis da planta e o inculo do patgeno, antes de ocorrer a deposio; imunizao - desenvolvimento de plantas resistentes ou imunes ou, ainda, desenvolvimento, por meios naturais ou artificiais, de uma populao de plantas imunes ou altamente resistentes, em uma rea infestada com o patgeno; terapia restabelecimento da sanidade de uma planta com a qual o patgeno j estabelecera uma ntima relao parastica; regulao modificaes do ambiente, tornando-o desfavorvel ao patgeno ou ao desenvolvimento da doena (Kimati & Bergamin Filho, 1995). Esses princpios de controle fundamentam-se, essencialmente, em conhecimentos epidemiolgicos, pois atuam no tringulo hospedeiro-patgeno-ambiente, impedindo ou retardando o desenvolvimento seqencial dos eventos do ciclo das relaes patgeno hospedeiro. Entretanto, o fator tempo, essencial para a compreenso de epidemias, s foi explicitamente considerado a partir de 1963, pelas anlises epidemiolgicas baseadas na taxa de infeco e na quantidade de inculo inicial (Vanderplank, 1963). Essa relao aparece simplificada na equao: y = y0 exp r.t onde a proporo y de doena em um tempo t qualquer determinada pelo inculo inicial y0, pela taxa mdia de infeco r e pelo tempo t durante o qual o hospedeiro esteve exposto ao patgeno. Baseado nessa abordagem, trs estratgias epidemiolgicas podem ser utilizadas para minimizar os prejuzos de uma doena: a) Eliminar ou reduzir o inculo inicial (y0) ou atrasar o seu aparecimento b) Diminuir a taxa de desenvolvimento da doena (r) c) Encurtar o perodo de exposio (t) da cultura ao patgeno Os princpios de controle sob os pontos de vista biolgico e epidemiolgico, atuando nos mesmos fatores que compem a doena, esto intimamente relacionados (Figura 2.3).

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Figura 2.3 Estratgias e princpios de controle de doenas de plantas, com indicao do modo de atuao de cada princpio no ciclo das relaes patgeno-hospedeiro [adaptado de Roberts & Boothroyd (1984)]. Nesse contexto, manejo integrado de doenas de plantas pode ser conceituado como o "conjunto de princpios e medidas que se aplica visando o patgeno, o hospedeiro e o ambiente, pela reduo ou eliminao do inculo inicial, reduo da taxa de progresso da doena e manipulao do perodo de tempo em que a cultura permanece exposta ao patgeno em condies de campo" (Berger, 1977). Considerando a abordagem anterior e as particularidades associadas s doenas radiculares, principalmente quanto importncia do inculo inicial como um dos fatores determinantes da intensidade das doenas, podemos destacar como principais estratgias de manejo de doenas radiculares: 1. Evaso do inculo 2. Excluso do inculo 3. Reduo da densidade de inculo 4. Reduo da taxa de infeco primria e secundria 5. Reduo da sobrevivncia do inculo 6. Reduo do estresse da planta 7. Aumento da resistncia da planta ao patgeno 8. Manuteno das condies fsicas, qumicas ou biolgicas do solo desfavorveis para um ou mais estdios do ciclo de vida do patgeno

Estratgias de manejo de doenas e sustentabilidade

Doenas radiculares so de controle difcil, pois os fitopatgenos habitantes do solo so bem adaptados e os fungicidas apresentam baixa eficincia, alm do potencial efeito deletrio ao ambiente. Prticas de controle devem ser integradas, para estabelecer um sistema de manejo efetivo e que seja o mais sustentvel possvel (Maffia & Mizubuti, 2001). Portanto, o manejo de doenas envolve a seleo e o uso de tcnicas apropriadas para manter a doena a um nvel tolervel. A adequao de determinada tcnica de controle depende de vrias informaes: o patgeno envolvido, as caractersticas epidemiolgicas do patossistema, as caractersticas do agroecossistema e a eficincia da tcnica especfica. A doena pode atingir nveis intolerveis se houver falha na obteno de uma dessas informaes (Fry, 1982).

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A determinao do nvel tolervel de determinada doena radicular complexa e de difcil aplicao. Fatores relacionados dinmica da doena, bem como aspectos econmicos, sociais e sanitrios influenciam a definio do nvel tolervel de doena (Fry, 1982). Por outro lado, o limiar de dano econmico, definido como o nvel de intensidade da doena ou do patgeno que provoca um prejuzo maior do que o custo de controle, embora seja a base do manejo integrado de doenas de plantas, raramente tem sido estimado na prtica, inclusive para doenas foliares. As principais razes para esse fato incluem, dentre outras, a pequena disponibilidade de estimativas confiveis de danos decorrentes da presena ou ao dos patgenos e a dificuldade no monitoramento do patgeno (Kimati & Bergamin Filho, 1995). Alm da integrao das prticas de controle, um importante questionamento no manejo de doenas radiculares relaciona-se ao nvel de sustentabilidade dessas prticas. Considerando que sustentabilidade refere-se habilidade para manter o sistema em existncia por um longo perodo de tempo (Thurston, 1992), as prticas adotadas no manejo de doenas radiculares, alm de serem eficientes na manuteno da intensidade das doenas em nveis aceitveis, devem propiciar: - mnima dependncia externa de insumos - uso de processos biolgicos - aumento da biodiversidade em espao e tempo - manuteno da estrutura fsica, qumica e biolgica do solo - ciclagem de nutrientes e o equilbrio nutricional das plantas - estabilidade fisiolgica das plantas, evitando situaes de estresse - reaproveitamento de subprodutos agropecurios - baixo ou nenhum risco de degradao ambiental - baixo ou nenhum risco toxicolgico aos seres vivos - capacidade de manuteno por longo perodo de tempo - balano energtico positivo do sistema produtivo Na Tabela 2.4 so apresentadas vrias prticas sustentveis de controle de doenas radiculares e os efeitos predominantes sobre as estratgias de manejo. Tabela 2.4 Relao entre prticas sustentveis de controle de doenas radiculares e seus efeitos predominantes sobre as estratgias de manejo.
Prticas de controle 1 Escolha do local de plantio Estratgia* / Efeito predominante 2 3 4 5 6 7 8

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Escolha da poca de plantio Quarentena Inspeo e certificao de materiais propagativos Pousio Solarizao do solo Inundao do solo Arao profunda Ajuste do pH do solo Aplicao de matria orgnica no solo Ajuste do espaamento e da densidade de plantio Plantio a pouca profundidade Uso de materiais propagativos livres de patgenos Desinfestao de ferramentas e implementos Tratamento trmico de substratos Tratamento trmico de materiais propagativos Tratamento biolgico de solo e substratos Tratamento biolgico de sementes e mudas Uso de cultivares resistentes Rotao de culturas Uso de multilinhas Consorciao de culturas Emprego de cultivares de ciclo precoce Uso de gua de qualidade Evitar ferimentos no colo e razes das plantas Eliminao de plantas doentes ou partes de plantas doentes Eliminao de hospedeiros alternativos Remoo e destruio de restos culturais Modificao da nutrio Alterao de tipo e/ou freqncia de irrigao Drenagem adequada do solo

*Estratgias de manejo: 1. Evaso do inculo; 2. Excluso do inculo; 3. Reduo da densidade de inculo; 4. Reduo da taxa de infeco primria e secundria; 5. Reduo da sobrevivncia do inculo; 6. Reduo do estresse da planta; 7. Aumento da resistncia da planta ao patgeno; 8. Manuteno das condies fsicas, qumicas ou biolgicas do solo desfavorveis para um ou mais estdios do ciclo de vida do patgeno.

As doenas radiculares causam elevadas perdas, tornando necessria a adoo de vrias medidas, antes mesmo do plantio da primeira semente ou muda, atravs de um planejamento adequado da cultura. Para tanto, deve-se buscar informaes sobre o histrico de plantios e doenas da regio, ser criterioso na escolha da rea de plantio, variedade e procedncia das sementes ou mudas, entre outros. A agricultura sustentvel impe certas limitaes na utilizao de alguns mtodos de controle de doenas, devendo ser priorizadas medidas baseadas nos mtodos culturais, biolgicos, genticos e fsicos e, preferencialmente, excluindo mtodos qumicos, como o uso de agrotxicos. O controle cultural das doenas radiculares consiste basicamente na manipulao das condies de pr-plantio e desenvolvimento do hospedeiro em detrimento do patgeno, objetivando a induo da supressividade do solo, a supresso do aumento e/ou a destruio do inculo existente, escape

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das culturas ao ataque potencial do patgeno e a regulao do crescimento da planta direcionado a menor suscetibilidade (Palti, 1981). A prtica cultural mais empregada pelos agricultores a rotao de culturas, que se caracteriza pelo cultivo alternado de diferentes espcies vegetais no mesmo local e na mesma estao anual e cujo efeito principal relaciona-se fase de sobrevivncia do patgeno. Nesta fase, os patgenos so submetidos a uma intensa competio microbiana, durante a qual, geralmente, levam desvantagem. Correm, tambm, o risco de no encontrar o hospedeiro, o que determina, geralmente, sua morte por desnutrio. Isto ocorre no perodo entre dois cultivos de uma planta anual, durante a fase saproftica. A rotao de culturas uma medida que pode ser adotada para reduzir a quantidade de inculo do patgeno e as condies do ambiente do solo. A rotao pode ser utilizada em reas extensas, como tambm, em reas menores, como canteiros e estufas plsticas. Apesar do grande potencial, a utilizao da rotao de culturas no efetiva no controle de patgenos que apresentam: grande habilidade de competio saproftica; estruturas de resistncia com alta longevidade e viabilidade; ampla gama de hospedeiros; esporos pequenos que podem ser transportados pelo vento a longas distncias (Palti, 1981; Reis et al., 2001). Alm da rotao de culturas, outras prticas culturais podem ser empregadas com sucesso, em determinadas situaes, para controlar doenas radiculares, destacando-se: seleo de reas de plantio, preparo do solo, escolha de pocas de plantio, uso de material propagativo sadio, inundao, ajuste do pH, fertilizao adequada, incorporao de matria orgnica no solo, ajuste da densidade de plantio, manejo da irrigao, consorciao de culturas, eliminao de plantas vivas doentes ("roguing") e destruio de restos culturais (Palti, 1981). O preparo do solo como uma medida de controle cultural tambm tem suas limitaes, devido aos altos gastos de energia no sistema de preparo convencional do solo aliado s perdas por eroso hdrica, que tm ameaado a sustentabilidade da atividade agrcola. Todavia, deve-se considerar que a exposio das estruturas dos fitopatgenos ao direta deve ter um efeito positivo na destruio da fonte de inculo da doena. Alm disso, os sistemas de preparo de solo interferem diretamente em vrios estdios do ciclo de vida de patgenos do sistema radicular, enquanto afetam pouco algumas propriedades do solo, como pH e textura (Norton, 1979), determinando maior ou menor viabilidade de propgulos, pois a sobrevivncia pode depender da profundidade onde se encontram. A escolha de poca de plantio atua sobre patgenos radiculares em decorrncia da temperatura e da umidade do solo. Conforme a poca de plantio, podem ser evitados estresses hdricos em perodos crticos para a cultura, o que predispe s plantas ao ataque de vrios patgenos radiculares.
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A inundao do solo por determinado perodo, por ciclos sucessivos, pode resultar o controle eficiente de alguns patgenos radiculares, com exceo dos produtores de zosporos, que so favorecidos por solos midos. Durante o encharcamento do solo, desenvolvem-se os microrganismos anaerbicos e a produo de cidos e gases txicos que vo atuar nos microrganismos fitopatognicos (Reis et al., 2001). A inundao tem sido empregada em pequenas reas cultivadas, viveiros e casas-de-vegetao, tendo seu potencial restrito s situaes em que esto disponveis equipamentos para irrigao e as condies geogrficas so favorveis, pois as grandes extenses de rea e a topografia do terreno podem limitar esse procedimento como prtica de controle de doenas. O manejo do pH do solo pode interferir no desenvolvimento de doenas radiculares, sendo mais freqente o emprego de calcrios dolomticos e calcticos para a correo em solos cidos, e do gesso agrcola em solos alcalinos. No entanto, com poucas excees, os limites de pH favorveis ao melhor desenvolvimento das plantas so os mesmos para a atividade de patgenos e desenvolvimento de doenas radiculares. O manejo de doenas pela nutrio equilibrada de plantas deveria receber maior ateno pela pesquisa. A fertilizao adequada do solo um componente essencial no manejo de patgenos radiculares, pois o estado nutricional da planta pode favorecer ou limitar o processo de infeco e de colonizao por patgenos radiculares, determinando a resistncia ou suscetibilidade doena, bem como a virulncia e a habilidade do patgeno sobreviver. A imobilizao de nutrientes necessrios sntese de barreiras fsico-qumicas ou reduo da concentrao dos elementos ao redor dos stios de infeco podem tornar a planta suscetvel doena. Por outro lado, a resistncia pode ser devida ausncia de nutrientes essenciais para a atividade patognica (Huber, 1994). No contexto de uma agricultura orgnica, pode-se utilizar adubos de diferentes origens, como rochas de fosfato, compostos orgnicos, esterco de animais, tortas de materiais diversos, entre outros, os quais devem ser melhor avaliados quando ao potencial no controle de doenas. A incorporao de matria orgnica no solo tem efeito marcante na dinmica populacional dos microrganismos. A qualidade e quantidade de material orgnico acrescentado ao solo determinaro o aumento da densidade de uma, ou de vrias espcies de microrganismo selecionada(s) por este substrato. Caso a espcie beneficiada seja antagnica de um fitopatgeno, os danos provocados pelo patgeno nos hospedeiros podero ser minimizados (Reis et al., 2001). A adio de matria orgnica ao solo tem sido realizada pelo uso de esterco de curral, cama de avirio, esterco de suno estabilizado, adubao verde, bagao de cana-de-acar, casca de

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arroz, p de concha de ostra, uria, superfosfato de clcio, cinza mineral, composto de resduos vegetais ou de esgoto municipal (Summer, 1994). A densidade de plantio pode exercer um efeito sobre o mesoclima no dossel das plantas, principalmente sobre a durao do molhamento dos stios de infeco que ocorre nos cultivos mais adensados. A irrigao pode influir positiva ou negativamente as doenas do sistema radicular. A irrigao fornece alto potencial de umidade, interferindo na microbiota do solo, incluindo patgenos e antagonistas. No Brasil, a irrigao por piv-central tem sido empregada intensivamente para algumas culturas, o que mantm a umidade do solo sempre elevada alto, sendo importante averiguar em estudos de longo prazo as implicaes que o cultivo contnuo, sob essas condies de irrigao, possa trazer para as doenas do sistema radicular. A eliminao dos restos culturais tem como princpio a destruio do substrato nutricional ao patgeno, podendo ser efetuado pela incorporao no solo, queima ou remoo de plantas doentes e de restos culturais.
Controle gentico

A resistncia gentica representa uma grande esperana no controle de diversas doenas radiculares, alm de proporcionar o aumento significativo da produtividade. Em pases subdesenvolvidos, onde os agricultores freqentemente no dispem de recursos, assistncia tcnica, instrumentos de poltica agrcola ou incentivos governamentais para adotar outros mtodos de controle, a disponibilidade de cultivares resistentes assume importncia ainda maior. O plantio desses cultivares alinha-se tambm crescente presso da sociedade pela reduo no uso de agrotxicos e por tcnicas que conduzam uma agricultura sustentvel.
Controle biolgico

O biocontrole de doenas radiculares a rea mais desenvolvida de biocontrole de doenas de plantas, com exemplos clssicos como o controle de A. tumefaciens, agente da galha em coroa em diversas culturas, por Agrobacterium radiobacter. A introduo de microrganismos adaptados ao microhabitat do patgeno um dos aspectos mais relevantes para o sucesso de um programa de controle biolgico de doenas de plantas. Neste contexto, diversos microrganismos so isolados, selecionados e utilizados como agentes biocontroladores de doenas. Muitos fungos e bactrias tm sido testados no controle de doenas radiculares, alguns com sucesso comprovado, e muitos outros com grande potencial de uso. Neste caso, temse descrito como potenciais agentes de biocontrole: Trichoderma sp.,
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Gliocladium virens, Talaromyces flavus, Pythium oligandrum, Coniothyrium minitans, Sporidesmium sclerotivorum, Peniophora gigantea, Penicillium spp., Bacillus subtilis, Pseudomonas putida, Pseudomonas fluorescens, Agrobacterium radiobacter e Pasteuria penetrans. Alguns desses microrganismos apresentam especializao, parasitando um determinado microrganismo patognico, enquanto outros so capazes de inibir uma variada gama de patgenos (Melo, 1998).
Controle fsico

Os mtodos fsicos, que incluem vrias formas de energia fsica para o controle de patgenos radiculares. Contudo, novas tcnicas surgem em razo de novas descobertas cientficas e avanos tecnolgicos. O tratamento trmico com vapor foi um dos primeiros a ser adotado e, posteriormente, a solarizao foi desenvolvida, onde temperaturas mais amenas so atingidas, causando alteraes menos drsticas nas comunidades do solo. Recentemente, at a utilizao de microondas tem sido testada na desinfestao de solos (Ghini & Bettiol, 2001). Apesar de ter sido desenvolvido h mais de um sculo, o uso de vapor para a desinfestao de solo est restrito a pequenas reas devido ao custo dos equipamentos necessrios para sua aplicao. Dessa forma, o vapor tem sido praticado em estufas, canteiros para produo de mudas ou campos de culturas altamente rendosas. O solo coberto por uma lona plstica e o vapor a 80-100C, produzido por uma caldeira, injetado, promovendo o controle de patgenos, plantas daninhas e pragas, por meio da elevao da temperatura do solo. A vantagem do uso de vapor consiste no fato de no se tratar de um mtodo qumico, com ausncia de resduos, embora as altas temperaturas muitas vezes aumentem o teor de mangans a nveis fitotxicos (Ghini & Bettiol, 2001). A tcnica da solarizao consiste na utilizao da energia solar para a desinfestao do solo, por meio da cobertura com um filme plstico transparente, antes do plantio. A solarizao pode ser utilizada, tanto em condies de campo, quanto em extensas reas, como em cultivo protegido, e deve ser realizada preferencialmente durante o perodo de maior incidncia de radiao solar. Aps a cobertura do solo, as camadas superficiais apresentam temperaturas superiores s do solo descoberto, sendo que o aquecimento menor quanto maior for a profundidade. A inativao trmica de diversos patgenos apresenta, de modo geral, uma relao inversa entre tempo de exposio e temperatura, de forma que quanto menor a temperatura, um tempo maior de exposio necessrio para inativar as estruturas e vice-versa (Viana & Souza, 1997). Por esse motivo, o filme plstico deve ser mantido por um perodo de tempo suficiente para que haja a inativao das estruturas localizadas nas camadas mais profundas do solo.
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Outra aplicao prtica do calor a termoterapia. Seu sucesso reside no fato de que o patgeno eliminado por tratamentos em determinadas relaes tempo-temperatura que produzem poucos efeitos deletrios no material vegetal. Nesse caso, quanto maior for a diferena entre a sensibilidade trmica do hospedeiro e do patgeno, maiores sero as chances de sucesso da termoterapia. Vrios fatores podem afetar a sensibilidade trmica, como o teor de umidade do material vegetal; a dormncia; a idade e o vigor, especialmente das sementes; a condio das camadas externas do material a ser tratado; as condies de temperatura durante o desenvolvimento da planta; o tamanho do material e a suscetibilidade varietal (Baker, 1962). Assim, devido ao efeito de diversas variveis, a relao tempo-temperatura no pode ser reduzida a uma frmula geral aplicvel a todos os casos. O mecanismo de ao da temperatura, tanto no controle de patgenos quanto na injria do hospedeiro complexo, sendo que um ou vrios fatores podem estar envolvidos, como desnaturao de protenas, liberao de lipdeos, destruio de hormnios, asfixia de tecidos, destruio de reservas e injria metablica com ou sem acmulo de intermedirios txicos. Cada alternativa disponvel apresenta vantagens e desvantagens, sendo que os problemas tm que ser analisados caso a caso para a escolha do melhor mtodo a ser aplicado. Porm, a integrao de diferentes mtodos parece ser a estratgia mais atraente, visto que pode resultar em um controle mais eficiente e duradouro.

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PATGENOS RADICULARES E MANEJO SUSTENTVEL DE DOENAS

Considerando as particularidades de cada patgeno radicular, principalmente quanto aos tipos de doenas causadas e aos fatores predisponentes ocorrncia dessas doenas, a seguir so listadas algumas prticas sustentveis de controle aplicadas a cada patgeno, visando servir como guia prtico na soluo de problemas no campo. FUNGOS

Pythium
Espcies de Pythium so saprfitas ou parasitas, de distribuio mundial, estando presentes em habitats bastante diversificados. Espcies parasticas foram relatadas em algas e em outros organismos de ambiente aqutico, tanto em gua doce ou salgada. Alm disso, podem tambm ser parasitas de mais de 80 espcies de fungos, ovos de crustceos e larvas de mosquito (Agrios, 1997).
Doenas causadas

Muitas espcies de Pythium so saprfitas facultativos ou parasitas em diversas culturas, causando tombamento de pr e ps-emergncia, que podem resultar em perdas econmicas significativas. Embora sejam considerados primariamente como patgenos de sementes e plntulas, como pode ser observado na Tabela 2.1, algumas espcies de Pythium podem causar queima de folhas, podrido de caules e razes em plantas maduras e podrido mole em frutos e vegetais maduros, no campo ou em ps-colheita (Martin, 1992). Espcies de Pythium sobrevivem no solo saprofiticamente ou por meio de estruturas de sobrevivncia. O mecanismo principal de sobrevivncia por perodos curtos ou intermedirios atravs de zosporos e esporngios e por perodos longos, por osporos (Agrios, 1997).
Fatores predisponentes

Alta umidade do solo favorece a atividade saproftica Temperaturas do solo amenas em torno de 22oC Elevada concentrao de gs carbnico Alta quantidade de matria orgnica

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Manejo sustentvel

Seleo de rea de plantio livre do patgeno Utilizao da vaporizao ou calor seco no solo e substratos Uso de material de propagao livre do patgeno Tratamento biolgico de sementes Rotao de culturas Manuteno de boa drenagem do solo Manuteno de boa circulao do ar entre as plantas Evitar a aplicao excessiva de fertilizantes, principalmente nitrognio na forma de nitrato - Solarizao do solo

Phytophthora
O gnero Phytophthora constitudo em grande parte por espcies patognicas e responsveis por severos danos em culturas de grande importncia econmica no Brasil e no mundo. Embora as espcies de Phytophthora sejam importantes patgenos da parte area das plantas, , principalmente, como patgeno habitante do solo, atacando as razes e o coleto de plantas de inmeras culturas, que o gnero tem se notabilizado. De uma forma genrica as espcies de Phytophthora patognicas s razes so polfagas e cosmopolitas atacando uma grande variedade de plantas de extensa distribuio geogrfica (Erwin & Ribeiro, 1996).
Doenas causadas

Phytophthora capsici causa a podrido das razes e murcha do pimento, da pimenta, do pepino, da berinjela, da moranga, da abbora, da abobrinha e da podrido do p da pimenta-do-reino, P. palmivora causa podrido da base do estipe da pupunheira, podrido das razes do mamoeiro, coqueiro e cupuauzeiro, P. citrophthora, P. citricola e P. nicotianae, provoca a podrido das razes e gomose dos citrus em geral, P. sojae (P. megasperma f.sp. glycinea) causa a podrido das razes da soja, P. cinnamomi causa a podrido radicular do abacaxizeiro, do abacateiro, do pinheiro e de outras conferas, e P. parasitica causa a podrido radicular, talo preto e a requeima em vrias culturas (Erwin & Ribeiro, 1996), como pode ser observado na Tabela 2.1.

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Fatores predisponentes

Phytophthora capsici - Umidade do solo prximo capacidade de campo e em algumas fases encharcamento - Temperaturas do solo entre 10-24C - Solos pouco arejados, mal drenados e pouco profundos - Alta precipitao pluvial - Plantas com crescimento vegetativo abundante - Altos nveis de nitrognio no solo - pH alto - Estresse da planta, tanto hdrico quanto por salinidade Phytophthora cinnamomi Temperaturas entre 24-30C Alta umidade Solos baslticos, permanecendo midos por um longo perodo Solos pouco arejados, mal drenados e pouco profundos Ocorrncia de chuvas pH entre 6,0 e 6,5 Adubao excessiva com nitrognio e fosfro Estresse da planta, tanto hdrico quanto por salinidade Phytophthora parasitica Solo com alta umidade Temperatura entre 24-30C Solos pouco arejados, mal drenados e pouco profundos Ocorrncia de chuvas Excessiva adubao nitrogenada pH elevado Aplicao de clcio Estresse da planta, tanto hdrico quanto por salinidade

Manejo sustentvel

Seleo de rea de plantio livre do patgeno Uso de material de propagao livre do patgeno Tratamento trmico de sementes com gua quente a 52C por 10 minutos Preparao do solo para deix-lo permevel, leve e bem drenado

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- Instalao de drenos superficiais ou sub-superficiais para remover os excessos de chuvas ou irrigao - Tipo e controle da irrigao - Reduo do excesso de sombra - Solarizao do solo - Rotao de culturas - Uso de variedades resistentes - Utilizao de microorganismos antagnicos e hiperparasitas - Remoo e destruio de plantas infectadas - Destruio dos restos culturais

Rhizoctonia
O gnero Rhizoctonia consiste de uma coleo bastante diversificada de teleomorfos que so componentes de diferentes famlias e classes, sendo R. solani (teleomorfo Thanatephorus cucumeris) a principal espcie representante desse gnero (Sneh et al., 1996). As doenas causadas por Rhizoctonia so amplamente distribudas pelo mundo, com os danos variando de acordo com a cultura afetada e as condies do ambiente.
Doenas causadas

Rhizoctonia solani um habitante do solo que comumente causa doenas nas razes, no entanto sob certas condies, como alta umidade relativa do ar, ataca partes areas de plantas. A infeco do fungo R. solani nos diversos hospedeiros ou rgos podem resultar em diferentes sintomas como as podrides e cancros de caules e razes, tombamentos de pr e psemergncia, queima e morte de plantas, podrides em tubrculos, degenerao de frutos e gros, alm de manchas e queima das folhas e brotos, na parte area, como pode ser observado na Tabela 2.1. Rhizoctonia solani pode estar presente em qualquer ambiente nas formas de miclio ou microesclercios, sendo estes as principais estruturas de sobrevivncia e a fonte de inculo primria (Ogoshi, 1987).
Fatores predisponentes

- Solos midos, mas no encharcados - Manuteno de restos culturais no campo - Solos arenosos, desestruturados e pobres em outros microrganismos - Plantio profundo de sementes - Plntulas de crescimento lento ou estioladas
Manejo sustentvel

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Seleo de rea de plantio livre do patgeno Realizao de calagem e adubao profunda Adubao equilibrada Uso de material de propagao livre do patgeno Realizar plantio em pocas favorveis ao rpido crescimento da planta Plantios em pocas quentes desfavorecem o patgeno Aumento do espaamento de plantio Adubao verde utilizando vrias espcies Uso de variedades resistentes quando disponvel Solarizao do solo Uso de antagonistas no controle biolgico Controle da umidade do solo Remoo e destruio de plantas infectadas Destruio dos restos culturais

Sclerotium
A espcie-tipo deste gnero Sclerotium rolfsii Sac., que possui uma gama de hospedeiro muito extensa, em torno de 500 espcies botnicas, incluindo dicotiledneas e monocotiledneas, encontrando-se distribuda em vrias partes do mundo. Outra espcie importante S. cepivorum, que possui uma gama de hospedeiros bem reduzida (Punja, 1985; Punja & Rahe, 1992).
Doenas causadas

Sclerotium rolfsii um fitopatgeno causador de tombamento em plntulas, cancros, queima, podrides em caule, razes, bulbos e tubrculos, enquanto S. cepivorum causa podrido branca em alho e cebola, como pode ser observado na Tabela 2.1. Estes patgenos predominam em regies tropicais e subtropicais do mundo (Punja & Rahe, 1992).
Fatores predisponentes

- Alta luminosidade e oxigenao - Solo com alta umidade, mas no encharcado - Temperatura elevada (20-36oC) - Manuteno de restos culturais no campo - Solos arenosos - Plantas com injrias de natureza diversa
Manejo sustentvel

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Seleo de rea de plantio livre do patgeno Uso de material de propagao livre do patgeno Rotao de culturas Fertilizao do solo com compostos a base de amnia Aplicao de compostos de clcio e nitrognio Solarizao do solo Uso de antagonistas como fungos e bactrias Adio de matria orgnica ou compostos orgnicos Remoo e destruio de plantas infectadas Destruio dos restos culturais

Macrophomina
Macrophomina phaseolina a nica espcie representante do gnero Macrophomina. Este fungo habitante do solo apresenta ampla distribuio geogrfica, podendo ser encontrado desde os pases de clima tropical at os desrticos e temperados quentes (Dhingra & Sinclair, 1978; Mihail, 1992). No Brasil, os maiores danos ocorrem na regio Nordeste, devido s condies climticas favorveis, chegando a causar prejuzos considerveis em diversas culturas.
Doenas causadas

Macrophomina phaseolina ataca vrias espcies vegetais cultivadas, causando principalmente a podrido cinzenta do caule, no entanto, provoca tambm tombamentos de pr e ps-emergncia, nos estgios iniciais de desenvolvimento das culturas, a podrido de razes e as podrides do colmo de gramneas, como pode ser observado na Tabela 2.1. A sobrevivncia no solo ocorre na forma de esclercios, com estes constituindo-se na fonte de inculo primrio (Dhingra & Sinclair, 1978).
Fatores predisponentes

- Cultivos sucessivos - Solos arenosos, com baixa capacidade de reteno de gua e alta capacidade de absoro do calor - Solos pobres em matria orgnica e com baixos nveis de potssio - Alta temperatura (tima entre 28 e 30oC) e baixa umidade do solo nas fases de plntula, na formao ou maturao de gros/sementes - Estresse na planta pelo ataque de outros patgenos, fatores ambientais ou nutricionais

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Manejo sustentvel

Seleo de rea de plantio livre do patgeno Uso de semente livre do patgeno Uso de cobertura morta Arao profunda Uso de cultivares resistentes Rotao de culturas Cultivo mnimo e cobertura morta Controle da gua de irrigao Utilizao de antagonistas sozinhos ou em mistura Solarizao do solo Remoo e destruio de plantas infectadas Destruio dos restos culturais

Sclerotinia sclerotiorum
Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) De Bary um patgeno de importncia mundial por sua ampla gama de plantas hospedeiras, longa sobrevivncia no solo por meio de esclerdios (estruturas de resistncia), e indisponibilidade de fontes de resistncia em materiais comerciais, tornando as doenas causadas por este patgeno de difcil controle (Purdy, 1979).
Doenas causadas

As doenas provocadas por S. sclerotiorum so conhecidas principalmente como mofo-branco, podrido-de-esclerotnia, podrido-dahaste, murcha-de-esclerotnia, ou simplesmente como esclerotnia, de acordo com os seus sinais, ou sintomas que causa em suas hospedeiras, como pode ser observado na Tabela 2.1. Sclerotinia sclerotiorum pode sobreviver em sementes infectadas por mais de trs anos, causando falhas na germinao e morte de plntulas (Hall & Steadman, 1991).
Fatores predisponentes

- Temperatura entre 18-25oC, tima de 23oC - Molhamento foliar de 7 a 26 horas - Rotao de cultura de soja com outros hospedeiros suscetveis, como feijo e girassol - Plantio adensado, que aumenta a umidade e diminui o arejamento abaixo da copa - Irrigaes pesadas, coincidindo com baixas temperaturas, na fase de crescimento
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- Alta umidade e baixa temperatura, que favorecem a germinao miceliognica e a infeco - Manuteno de restos culturais no campo - Presena de luz para formao de apotcio - Monocultura e plantios intensivos
Manejo sustentvel

- Seleo de rea de plantio livre do patgeno - Pr-incorporao dos residuos vegetais e arao profunda com tombamento da leiva - Uso de material de propagao livre do patgeno - Plantio em solos com boa drenagem - Manejo racional da irrigao, evitando o acmulo de gua no solo - Evitar perodos longos de molhamento foliar - Evitar plantios adensados - Adubao nitrogenada em excesso deve ser evitada - Rotao de culturas - Uso de variedades resistentes, quando disponvel - Uso de variedades de crescimento determinado, que permitem a formao de vagens ou frutos longe da superfcie do solo - Plantio direto - Solarizao do solo - Controle biolgico atravs do uso de antagonistas - Remoo e destruio de plantas infectadas - Destruio dos restos culturais

Fusarium
Dentre as espcies fitopatognicas de Fusarium, somente as formadoras de clamidosporos so consideradas habitantes do solo, em que se destacam F. oxysporum e F. solani. Por outro lado, entre as espcies fitopatognicas que no formam clamidosporos e so consideradas no habitantes do solo, destaca-se F. monilifome (Nelson et al., 1981).
Doenas causadas

Essencialmente, o gnero Fusarium causa dois tipos de doenas em plantas: murchas vasculares e podrides corticais. As partes de plantas atacadas e os tipos de doenas envolvem: murchas vasculares, podrides radiculares, podrides de sementes e frutos, podendo tambm ser causados tombamentos, queimas de plntulas, podrides de espigas e colmos (Nelson

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et al., 1981). Os tipos de doenas so caractersticos de determinadas espcies, como exemplo, F. oxysporum causa murchas vasculares, enquanto F. solani causa podrides corticais, como pode ser observado na Tabela 2.1.
Fatores predisponentes

Fusarium oxysporum - Solos arenosos, pouco estruturados e pobres em matria orgnica - Incorporao de matria orgnica com baixa relao C/N - Altos teores de nitrognio, principalmente quando aplicado na forma amoniacal - Baixos teores de potssio - Altos nveis de umidade no solo, sem encharcamento - Baixo pH - Dias curtos e baixa intensidade luminosa - Nutrio desbalanceada - Solos infestados com nematides - Manuteno de restos culturais no campo Fusarium solani Clima ameno Solos arenosos ou calcreo-arenosos Solos midos, mas no encharcados Manuteno de restos culturais no campo Alta precipitao pluviomtrica Solos irrigados Estresse do hospedeiro pelo ataque de outros patgenos

Manejo sustentvel

Seleo de rea de plantio livre do patgeno Uso de material de propagao livre do patgeno Uso de variedades resistentes, quando disponveis Manipulao da fertilidade do solo, visando reduzir o crescimento, esporulao e virulncia do patgeno Adio de calcrio para obter pH no mnimo 7,0 Evitar o uso de micronutrientes Evitar o uso excessivo de solo com fsforo e magnsio Uso de nitrognio na forma de nitrato e evitar a forma de amnia Aplicao de fertilizantes em bandas prximo s razes, no aplicar na cova Permitir que o solo repouse antes do plantio (alqueive)
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Uso da rotao de culturas com plantas no hospedeiras Uso da solarizao do solo com polietileno transparente Uso de agentes de controle biolgico, integrados com prticas culturais Prevenir a disseminao do patgeno eliminando o movimento de solo infestado para reas livres de doena - Remoo e destruio de plantas infectadas - Destruio dos restos culturais

Verticillium
As principais doenas causadas por Verticillium so incitadas por cinco espcies: V. albo-atrum Berth., V. dahliae Kleb., V. nigrescens Pethybr., V. nubilum Pethybr. e V. tricorpus Isaac. Sendo, no entanto, as causadas pelas duas primeiras espcies, as mais importantes (Schnathorst, 1981). As doenas causadas por Verticillium so de distribuio mundial sendo, no entanto, mais comuns nas zonas temperadas. Nos trpicos midos e nas reas semitropicais muito midas, as murchas de Verticillium tm, geralmente, importncia secundria (Agrios, 1997).
Doenas causadas

As espcies de Verticillium incitam murchas vasculares em diversas culturas, como pode ser observado na Tabela 2.1. As infeces ocorrem de maneira tardia, no entanto, algumas vezes, a infeco se desenvolve em plntulas, que normalmente morrem logo aps a infeco (Schnathorst, 1981).
Fatores predisponentes

Monocultura Clima frio e mido, principalmente em reas irrigadas Manuteno de restos culturais no campo Manuteno de ervas daninhas

Manejo sustentvel

Seleo de rea de plantio livre do patgeno Uso de material de propagao livre do patgeno Uso de cultivares resistentes, quando disponveis Solarizao do solo Rotao de culturas Eliminao de ervas daninhas

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Incorporao de resduos vegetais Utilizao de microrganismos antagnicos Fertilizao adequada do solo Escolha do mtodo de irrigao Remoo e destruio de plantas infectadas Destruio dos restos culturais

BACTRIAS

Agrobacterium
O gnero Agrobacterium Conn amplamente distribudo em todo o mundo, possuindo representantes que causam doena em mais de 600 espcies botnicas, sendo as culturas mais freqentemente afetadas a videira, roseira, macieira, nogueira e ameixeira (Kerr, 1992).
Doenas causadas

Agrobacterium um patgeno habitante do solo, onde sobrevive por longos perodos na ausncia de plantas hospedeiras, causando as doenas de plantas conhecidas como galhas em coroa e razes em cabeleira. Ambos os sintomas so induzidos por desequilbrios hormonais nos tecidos dos hospedeiros infectados (Clare & McClure, 1995).
Fatores predisponentes

- Temperatura favorvel para formao das galhas oscila entre 25-30oC - Temperatura favorvel para formao das razes em cabeleira oscila entre 20-26oC

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Manejo sustentvel

Seleo de rea de plantio livre do patgeno Termoterapia Solarizao do solo Utilizao de variedades resistentes Rotao de culturas Uso de antibiticos (penicilina, estreptomicina e oxitetraciclina + estreptomicina) - Controle biolgico da galha, usando isolados no patognicos de A. radiobacter - Remoo e destruio de plantas infectadas - Destruio dos restos culturais

Erwinia
O gnero Erwinia dividido basicamente nos grupos carotovora, amylovora e herbicola (Prombelon, 1992). O grupo carotovora tem espcies bioquimicamente ativas que causam podrido mole, sendo formado por E. carotovora subsp. carotovora, E. carotovora subsp. atroseptica, E. carotovora subsp. betavasculorum, E. chrysanthemi, E. rhapontici, E. cypripedii e E. ananas. O grupo amylovora possui espcies que causam necrose seca ou murcha em hospedeiros especficos, sendo a principal representante E. amylovora. O grupo herbcola bastante complexo, aprersentando espcies variadas. A importncia econmica das perdas causadas por esses patgenos pode ser muito grande, dependendo do valor da cultura, severidade do ataque, subspcie ou patovar da espcie envolvida, condies ambientais, potencial de inculo e manejo da cultura.
Doenas causadas

As espcies E. carotovora e E. chrysanthemi induzem sintomas de murcha, podrido mole, canela preta, talo oco e tombamento de plntulas, como pode ser observado na Tabela 2.1. Estas espcies de Erwinia ocorrem praticamente em todo mundo, infectando uma variada gama de hospedeiros de diversas famlias botnicas, no campo ou nas fases de armazenamento e comercializao. E. amylovora causa murchas vasculares em algumas frutferas (Agrios, 1997).

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Fatores predisponentes

Temperaturas favorveis oscilam entre 25-35C Umidade relativa prxima a 100 % Alta precipitao pluviomtrica Pouca aerao Presena de ferimentos e estresse fisiolgico da planta Danos causados por insetos e nematides Excesso de adubao nitrogenada Irrigaes leves e constantes Baixa concentrao de O2 no armazenamento

Manejo sustentvel

Seleo de rea de plantio livre do patgeno Variedades resistentes Plantio de material vegetal (tubrculos, sementes, etc) certificados Desinfestao de tubrculos sementes No armazenar tubrculos ou frutos doentes e sadios conjuntamente Armazenagem em local bem ventilado, seco e frio Desinfestao de facas e utenslios usados no campo Rotao de culturas por 3 a 4 anos com milho e soja Evitar ferimentos durante o plantio e tratos culturais Controle de insetos mastigadores Desinfestao de depsitos e armazns com sulfato de cobre Evitar o plantio em solos de baixada mal drenados Usar gua de irrigao livre de contaminao Usar o maior espaamento possvel entre plantas Manter um sistema de drenagem Efetuar adubao equilibrada e rica em clcio Aplicao de espcies antagonistas de Pseudomonas Remoo e destruio de plantas infectadas Destruio dos restos culturais

Ralstonia solanacearum
Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al. possui hospedeiros em cerca de 53 famlias botnicas incluindo mono e dicotiledneas, onde ocasiona elevadas perdas em vrias culturas a nvel mundial e nacional. No Brasil, por ser nativa na maioria dos solos, tem sido assinalada em diversas culturas por todo o pas causando grandes prejuzos em condies de alta temperatura e umidade (Lopes & Quezado-Soares, 1997). O controle dessa bactria
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extremamente difcil, principalmente devido ampla gama de hospedeiros, alta variabilidade gentica e sobrevivncia no solo por longos perodos, alm da localizao do patgeno no xilema onde se acha protegido contra medidas convencionais de controle.
Doenas causadas

A murcha bacteriana, causada por R. solanacearum, uma das mais importantes doenas no mundo, sendo particularmente limitante em climas midos, com altitudes baixas e mdias, em regies tropicais e subtropicais (Hayward & Hartman, 1994). Na maioria dos hospedeiros, a doena conhecida como murcha bacteriana, murchadeira, gua quente e dormideira, enquanto em cultivo de banana denomina-se moko (Reifschneider et al., 1983), como pode ser observado na Tabela 2.1.
Fatores predisponentes

Alta temperatura do ar e do solo Alta umidade do solo Luminosidade e comprimento do dia Estresse da planta Altas populaes de nematides das galhas (Meloidogyne spp.)

Manejo sustentvel

Seleo de rea de plantio livre do patgeno Uso de cultivares resistentes, quando disponveis Uso de material de propagao livre do patgeno Plantio em solos bem drenados, livres do patgeno ou supresssivos Rotao de culturas por 2 a 5 anos com cana-de-acar, cereais, milho, sorgo ou soja Cultivos consorciados com caupi, feijo e milho, no caso da batata e com cana-de-acar, no caso do tomate Manipulao da data de plantio Controle de nematides e resistncia aos mesmos Solarizao do solo Manejo da umidade e do fluxo de gua No utilizar gua contaminada para irrigao Evitar injrias durante o plantio, transplantio e tratos culturais Restringir o uso de equipamentos oriundos de reas infestadas Desinfestar equipamentos com NaClO (12,5% de cloro ativo) Alterar horas de drenagem de reas infestadas para longe de reas isentas da doena

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- Usar espaamento adequado para reduzir a possibilidade de transmisso de raiz para raiz - Proteger a inflorescncia da bananeira para evitar a disseminao por insetos - Enxertia de tomate sobre espcies como jurubeba (Solanum jurubeba) e juna (S. toxicarium) - Correo do solo com mistura S-H, CaO com uria - Uso de microrganismos antagonistas - Remoo e destruio de plantas infectadas - Destruio dos restos culturais

Streptomyces
Espcies de Streptomyces fitopatognicas causam doenas em rgos subterrneos de diversas plantas (Agrios, 1997).
Doenas causadas

As sarnas comum e cida so causadas respectivamente por Streptomyces scabies e S. acidiscabies, so importantes doenas em tubrculos de batata, como pode ser observado na Tabela 2.1. Essas doenas ocorrem na maioria das regies produtoras do mundo, onde causam leses elevadas ou deprimidas nos tubrculos, no ocorrendo sintomas na parte area. A sarna da batata-doce causada por S. ipomoeae (Souza Dias & Iamauti, 1997).
Fatores predisponentes

Baixa umidade do solo pH prximo neutralidade (S. scabies) e cido (S. acidiscabies) Temperatura em torno de 30oC Uso de esterco animal

Manejo sustentvel

Seleo de rea de plantio livre do patgeno Uso de batata-semente certificada Desinfestao dos tubrculos-semente Utilizao de cultivares resistentes Solarizao do solo Irrigao por 4 a 6 semanas no incio da formao do tubrculo Rotao de cultura com gramneas por pelo menos 3 anos Acidificao do solo com enxofre at pH 5,2 Evitar excesso de calcrio na correo do solo

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- Manuteno da alta umidade do solo - No plantar em solos com alto teor de matria orgnica

NEMATIDES

Ditylenchus
O gnero Ditylenchus constitudo por um grande nmero de espcies dentre essas se destacam D. angustus, D. destructor, D. radicicolus e D. dipsaci, sendo este ltimo um dos nematides mais destrutivos, em razo de sua capacidade de suportar condies adversas (anidrobiose), polifagia e ciclo vital curto, atingindo altas populaes em curto espao de tempo (Becker, 1995). Ao contrrio da maioria dos fitonematides, que so parasitos de razes e rgos subterrneos, as espcies patognicas de Ditylenchus parasitam principalmente a parte area das plantas. Algumas espcies so ectoparasitas, parasitas obrigatrias e, outras, endoparasitos migradores de caules, folhas e flores, raramente aparecendo em tecidos de razes (Luc et al., 1990).
Doenas causadas

Na maioria das culturas, Ditylenchus causa grandes perdas por causar a morte de plntulas, enfezamento de plantas, destruio de bulbos, tornandoos imprprios para propagao ou consumo, desenvolvimento de caules e folhas distorcidas, entumescidas e enroladas, o que reduz bastante a produo (Agrios, 1997).
Fatores predisponentes

Alto teor de argila no solo Presena constante de filme de gua no solo Alta pluviosidade Excesso de irrigao Hospedeiro suscetvel Temperatura do solo em torno de 21oC

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Manejo sustentvel

Seleo de rea de plantio livre do patgeno Alqueive Inundao da rea Utilizao de sementes certificadas Plantio em solo no infestado Tratamento de bulbilhos-sementes com agentes de controle biolgico Termoterapia para bulbilhos de alho Eliminao de plantas hospedeiras Solarizao do solo Rotao com culturas no hospedeiras por no mnimo dois anos e meio Uso de variedades resistentes Remoo e destruio de plantas infestadas Destruio dos restos culturais

Meloidogyne
O gnero Meloidogyne Goeldi engloba as espcies de nematides formadoras de galhas em plantas, destacando-se M. incognita, M. javanica, M. exigua, M. hapla, entre outras. Os nematides desse gnero apresentam marcante dimorfismo sexual e parasitam mais de 2.000 espcies de plantas, incluindo praticamente todas as plantas cultivadas e vrias ervas daninhas (Agrios, 1997).
Doenas causadas

As doenas provocadas pelos nematides desse gnero so denominadas comumentes de galhas, como pode ser observado na Tabela 2.1, devido aos sintomas caractersticos da doena serem as galhas formadas, que so engrossamentos das razes. O tamanho das galhas varivel, dependendo da espcie do nematide, grau de infestao e planta hospedeira. O principal sinal da doena a presena de massa de ovos sobre as razes parasitadas. Alm do efeito direto sobre a planta hospedeira, as alteraes promovidas pelos nematides das galhas, tambm so exibidas na parte area das plantas (Whitehead, 1998).

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Fatores predisponentes

Temperatura relativamente elevada pH na faixa de 4,0 a 8,0 Baixa precipitao Solos arenosos ou com alto teor de matria orgnica Solos com nveis de umidade de 40 a 60% da capacidade de campo

Manejo sustentvel

Seleo de rea de plantio livre do patgeno Uso de resistncia gentica Rotao de culturas com Crotalaria juncea, Tagetes spp. ou Mucuna spp. Controle da poca de plantio Preparo do solo com arao para exposio dos nematides a radiao solar Alqueive Solarizao do solo Introduo de agentes de biocontrole Remoo e destruio de plantas infestadas Destruio dos restos culturais

Pratylenchus
No gnero Pratylenchus Filipjev encontram-se os nematides endoparasitos migradores, compreendendo espcies polfagas como P. brachyurus, P. coffeae, P. zeae, P. penetrans, P. scribneri e P. vulnus, que apresentam ampla distribuio geogrfica e afetam vrias culturas de importncia econmica (Moura, 1997). No Brasil, nas regies Centro-oeste, Norte e Nordeste, onde predominam temperaturas elevadas, as espcies P. brachyurus, P zeae e P. coffeae so as mais freqentes, enquanto espcies mais adaptadas a temperaturas baixas, como P. pseudofallax e P. jordanensis mostraram distribuio restrita regio Sul.
Doenas causadas

Esses nematides so conhecidos como nematides das leses radiculares em razo dos sintomas que incitam nas razes, causando a reduo drstica no crescimento e produo de culturas perenes em reas infestadas. No Nordeste brasileiro, P. coffeae e P. brachyurus causam a casca preta do inhame (Moura, 1997).

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Fatores predisponentes

- Temperaturas timas para as diferentes espcies so extremamente variveis: P. indicus (23-30oC), P. penetrans (20-24oC), enquanto P. zeae, P. brachyurus e P. hexincisus (em torno de 30oC) - Alta umidade do solo, entretanto reduo gradual da umidade do solo pode induzir a anidrobiose e favorecer a sobrevivncia - Solos arenosos favorecem o desenvolvimento do nematide
Manejo sustentvel

- Seleo de rea de plantio livre do patgeno - Utilizao de mudas certificadas ou qualquer outro material propagativo sadio - Tratamento trmico em gua a 35 a 54C por 15 a 60 min., a 45C por 45 min., a 51C por 35 min. ou a 50C por 40 min antes do plantio - Limpeza de rizomas de bananeira e tratamento trmico - Reduo de temperatura de 22-31C para 12C em locais de armazenamento - Enxertia de Coffea arabica ou C. excelsa, suscetveis a P. coffeae, sobre porta-enxertos resistentes como C. conuga ou C. canephora - Uso de variedades resistentes ou tolerantes a Pratylenchus spp. - Rotao de culturas - Plantio intercalar na cultura de plantas no hospedeiras - Introduo de matria orgnica - Adubao verde com Tagetes sp., alfafa, Crotalaria juncea e Coriandrum sativum L. - Solarizao do solo - Remoo e destruio de plantas infestadas - Destruio dos restos culturais e hospedeiros alternativos

Radopholus
Os nematides do gnero Radopholus Thorne so endoparasitos migradores causadores de leses nas razes e rgos de reserva subterrneos de seus hospedeiros. As leses podem evoluir para extensas galerias, razo pela qual receberam a denominao de nematides caverncolas. Embora o gnero Radopholus compreenda 29 espcies, apenas uma, R. similis, apresenta importncia econmica, primariamente em razo de sua distribuio mundial em associao com o seu principal hospedeiro, a bananeira. Embora seu principal hospedeiro seja a bananeira, a gama de hospedeiros de R. similis inclui mais de 250 espcies de plantas distribudas em diferentes famlias (Whitehead, 1998).
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Doenas causadas

A nematose da bananeira causada por R. similis apresenta como sintoma principal o tombamento de plantas com exposio do rizoma necrosado, observado principalmente na fase de produo, em razo do peso dos cachos. Na parte area, os sintomas so caracterizados pela clorose foliar, reduo do crescimento, pseudocaules finos e reduo no tamanho dos cachos, como conseqncia da diminuio da absoro de gua e nutrientes.
Fatores predisponentes

Alta umidade do solo Solos arenosos favorecem o desenvolvimento do nematide Hospedeiro suscetvel Temperatura do solo em torno de 22oC

Manejo sustentvel

Seleo de rea de plantio livre do patgeno Uso de mudas sadias, preferencialmente produzidas por cultura de tecidos Plantio em reas no infestadas Tratamento biolgico do material propagativo Descortiamento do rizoma (eliminao com faca ou faco do tecido doente das partes externas do rizoma, at expor o tecido branco do rizoma), seguido de tratamento trmico em gua a 55C por 20 minutos Replantio do bananal Alqueive (ausncia de rizomas vivos e plantas daninhas hospedeiras, por 6 meses a um ano) Inundao por 3 a 7 semanas Rotao com culturas no hospedeiras Remoo e destruio de plantas infestadas Destruio dos restos culturais e hospedeiros alternativos

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BACTRIAS PROMOTORAS DE CRESCIMENTO DE PLANTAS E BIOCONTROLE DE DOENAS
ELINEIDE BARBOSA DA SILVEIRA

INTRODUO
Com o desenvolvimento da agricultura moderna, atualmente mais de 1.600 pesticidas esto no mercado e o seu uso continua em crescimento, em funo do aumento da rea cultivada e, consequentemente, do controle de doenas, pragas e ervas daninhas. Embora o uso de pesticidas, sem dvida, tenha contribudo para o aumento da produtividade, criou tambm srios problemas nos ecossistemas, incluindo o amplo acmulo de resduos com danos ao homem, vida selvagem, piscicultura, a insetos e aos microrganismos benficos. Assim, o grande desafio da agricultura mundial aumentar a produo das culturas e diminuir a poluio ambiental. Nesse contexto, as bactrias promotoras de crescimento de plantas surgem como uma alternativa potencial para auxiliar a atingir esse objetivo. Bactrias com capacidade de promover o crescimento de plantas so mundialmente conhecidas como Plant Growth-Promoting Rhizobacteria PGPR (Rizobactrias Promotoras de Crescimento de Plantas), sendo definidas como bactrias que colonizam razes de plantas e promovem um aumento no desenvolvimento e na produo do hospedeiro, devido a promoo de crescimento (efeito direto) ou biocontrole de doenas e pragas (efeito indireto). Bashan & Holguin (1998) propuseram uma nova terminologia para melhor classificar essas bactrias. O termo rizobactrias seria substitudo por bactrias, uma vez que nem todas as bactrias colonizam a raiz, surgindo duas novas denominaes: "biocontrol plant growth-promoting bacteria - biocontrol-PGPB" (bactrias promotoras de crescimento de plantas biocontroladoras) e "plant growth-promoting bacteria-PGPB" (bactrias promotoras de crescimento de plantas). No entanto, essa terminologia ainda no vem sendo utilizada pela maioria da comunidade cientfica, embora represente bem a atual compreenso do potencial dessas bactrias.
Michereff, S.J. & Barros, R. (Eds.) Proteo de Plantas na Agricultura Sustentvel. 2001. Recife, UFRPE

Direitos de edio reservados aos editores ISBN 85-87459-06-6

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As PGPR podem ser tanto bactrias epifticas como endofticas. Bactrias epifticas so encontradas na superfcie de rgos vegetais, onde sobrevivem em locais protegidos utilizando exsudatos e nutrientes de fontes externas, sem causar doena. Bactrias endofticas so aquelas que podem ser isoladas de tecidos vegetais desinfestados ou extradas de dentro da planta e no causam prejuzo visvel a mesma (Hallmann et al., 1997). Bactrias epifticas e endofticas fazem parte da populao residente da planta. Os principais efeitos observados na promoo de crescimento das plantas so aumento da taxa de germinao, crescimento das razes, crescimento de colmos ou caules, aumento do nmero de folhas e rea foliar, crescimento de tubrculos, aumento de flores e aumento de rendimento. As PGPR biocontroladoras atuam no crescimento, infectividade, virulncia e agressividade do patgeno, bem como nos processos de infeco, desenvolvimento de sintomas e reproduo.

CARACTERSTICAS DE BACTRIAS ENDOFTICAS E EPIFTICAS

A populao de microrganismos em razes, folhas, frutos e ramos tem variaes quantitativas e qualitativas de acordo com a fase do ciclo vegetativo. Essas variaes so resultado do efeito diferencial da interao do ambiente fsico, qumico e biolgico sobre cada organismo componente do meio (Valdebenito-Sanhueza, 1997). As bactrias so as primeiras colonizadoras dos tecidos vegetais e os fungos leveduriformes e filamentosos aumentam medida que as culturas se aproximam da maturao e senescncia (Fokkema, 1988).

Bactrias epifticas
As bactrias epifticas so encontradas principalmente na superfcie de razes, folhas, frutos e sementes, sendo facilmente isoladas desses habitats. No causam prejuzo visvel planta e so utilizadas na promoo de crescimento de plantas e biocontrole de doenas. Os principais gneros e espcies de bactrias epifticas envolvidos na promoo de crescimento de plantas ou biocontrole so Pseudomonas spp. do grupo fluorescente, Bacillus spp. e Streptomyces spp. A colonizao de bactrias epifticas na raiz, compreende as etapas de migrao em direo s razes, aderncia, distribuio ao longo das razes, crescimento e estabelecimento da populao. A colonizao um processo ativo pelo qual as bactrias sobrevivem inoculao nas sementes ou nas
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razes, multiplicam-se na espermosfera em resposta aos exsudatos das sementes, associam-se com a superfcie das razes e colonizam o sistema radicular em desenvolvimento, no solo.

Bactrias endofticas
As bactrias endofticas, em geral, so originadas de comunidades bacterianas epifticas do rizoplano e filoplano, bem como, de populaes endofticas principalmente de sementes ou material propagativo. Mais de 129 espcies bacterianas representando cerca de 54 gneros j foram encontradas colonizando endofiticamente estruturas vegetais, destacando-se os gneros Pseudomonas, Bacillus, Enterobacter e Agrobacterium (Hallmann et al., 1997). Essas bactrias penetram nas plantas atravs das sementes, aberturas naturais (hidatdios, lenticelas, etc.), ferimentos que naturalmente ocorrem como resultado do crescimento da planta (emergncia de razes laterais), ferimentos em geral induzidos por fatores biticos (fungos, nematides, insetos) e abticos (manejo da cultura, variaes extremas de temperatura, transplantio, etc.) e ativamente pela produo de enzimas hidrolticas (celulase e pectinase). Aps atravessar a barreira da endoderme, as endofticas podem colonizar todos os tecidos da planta (Agarwal & Shende, 1987). A colonizao pode ser localizada, penetrando nos espaos intercelulares da epiderme e crtex da raiz, ou sistmica, penetrando na raiz e colonizando at a parte area da planta atravs dos vasos condutores ou apoplasto. Poucos relatos demonstram a colonizao localizada intracelular no crtex da raiz de bactrias endofticas. A colonizao parece ser um fenmeno natural e os principais gneros de bactrias endofticas j foram detectados em vrios rgos da planta tais como: caules (McInroy & Kloepper, 1994); razes (Agarwal & Shende, 1987; McInroy & Kloepper, 1994); sementes (Fisher et al., 1992) e tberas (Sturz, 1995). A bactria endoftica dever penetrar e colonizar eficazmente a hospedeira. Existem vrias formas de demonstrar esta colonizao, como: colorao de colnias por imunofluorescncia (Mahafee et al., 1994) e visualizao das bactrias no interior das plantas pelo uso do microscpio eletrnico ou pela combinao da microscopia com imunologia. Alm desses mtodos, tambm podem ser utilizadas as tcnicas de ELISA e hibridao de cido nucleico (Quadt-Hallmann et al., 1997). Tanto as bactrias epifticas quanto as endofticas podem ser transmitidas de uma planta outra atravs das sementes ou material propagativo. A

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comunidade bacteriana epiftica e endoftica influenciada por fatores biticos e abiticos que compem o seu nicho ecolgico, estando a populao endoftica mais protegida do que a epiftica, o que confere a endoftica vantagem ecolgica sobre a epiftica (Quadt-Hallmann et al., 1997). Fatores abiticos, tais como temperatura, umidade, solo, radiao, pH, cargas de superfcie, presso parcial de gases, ons e elementos, bem como compostos de carbono, variam com o tempo e espao, interagem entre si e podem afetar diretamente as bactrias ou afetar o hospedeiro e, dessa forma, indiretamente a comunidade bacteriana. A populao epiftica bacteriana aumenta quando ocorrem longos perodos de molhamento da parte area e alta umidade relativa mo ambiente das plantas (Fokkema, 1988). Com relao aos fatores biticos, as caractersticas do hospedeiro, a presena de patgenos e outros microrganismos associados planta (interaes microbianas) e, nematides e pragas podem tambm influenciar a populao de epifticas e endofticas. Os pesticidas utilizados no campo tambm causam modificaes na composio da microflora, uma vez que afetam a sobrevivncia e desenvolvimento da populao de patgenos, a populao natural dos antagonistas e ainda o estabelecimento de agentes de promoo de crescimento e biocontrole.

ISOLAMENTO DE BACTRIAS EPIFTICAS E ENDOFTICAS

O isolamento de PGPR epifticas e endofticas pode ser realizado de diversas estruturas da planta, tais como raiz, caule, folha, flor, fruto e semente. As bactrias devem ser isolados preferencialmente do hospedeiro e no ambiente em que vo ser utilizadas para promoo de crescimento e biocontrole, embora sabe-se que bactrias isoladas de certos hospedeiros so capazes de exercer promoo de crescimento e biocontrole em outros. A poca de amostragem e, portanto, o estdio fisiolgico das estruturas vegetais estudadas pode influir na composio da microflora epiftica e endoftica. O monitoramento da ocorrncia dos microrganismos nas culturas durante todo o seu desenvolvimento poder auxiliar na seleo de organismos com potencial antagnico aos patgenos e com adaptao aos stios de infeco durante os estdios mais suscetveis da cultura. Para isolar bactrias epifticas, ou seja, aquelas presentes na superfcie da planta, os mtodos incluem agitao das amostras em gua ou homogeneizao dos tecidos, podendo-se ou no fazer a desinfestao prvia do material. Na literatura existem diversos protocolos para isolamento de bactrias epifticas, como o descrito abaixo por Mariano et al. (2000b): 1.Remover fragmentos de rgo sadio da planta (folha, caule, ramo, semente, fruto, raiz, etc.) e lavar com gua corrente;
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2.Transferir para tubos de ensaio contendo 10 mL de gua de torneira esterilizada (ATE) ou soluo salina e submeter a banho de ultra-som por 10 minutos, na potncia 10 (aproximadamente 40Kz); 3.A partir da suspenso assim obtida, efetuar diluies em srie, utilizando-se tubos de ensaio com 4,5 mL de gua destilada esterilizada (ADE), at a diluio 10-2; 4.Plaquear em meio de cultura adequado (meio de Kimg B- KMB para Pseudomonas spp. fluorescentes ou batata dextrose gar- BDA, gar nutritivo- AN, gar nutritivo-dextrose-levedura-NYDA, Trypict Soy Agar- TSA para bactrias eutrficas) 0,1 mL das suspenses 100, 10-1 e 10-2, com trs repeties cada, efetuando o espalhamento com ala de Drigalski; 5.Aps 48-72 horas de incubao, em condies de laboratrio, repicar as colnias bacterianas, apresentando caractersticas morfolgicas diferentes dentro de uma mesma amostra, para meio adequado, pelo mtodo de estrias, visando obteno de colnias puras; 6.Transferir as bactrias para tubos de ensaio com meio adequado, para posterior uso. Vrias tcnicas tm sido empregadas para o isolamento de bactrias endofticas, e em todas, a desinfestao superficial do material imprescindvel e deve ser realizada exaustivamente, at que seja comprovada pelo teste de esterilidade. Os tecidos de plantas podem ser desinfestados com hipoclorito de sdio (Quadt-Hallmann et al., 1997), etanol (Dong et al., 1994), perxido de hidrognio (McInroy & Kloepper, 1994), cloreto de mercrio (Sriskandarajah et al., 1993), ou a combinao de dois ou mais destes, seguida de vrias lavagens em gua esterilizada ou soluo tampo. Dependendo da espcie de planta, idade, e partes da planta (raiz, caule, folha ou semente), a concentrao do desinfetante pode variar e necessita ser otimizada para cada situao. Outra adaptao da tcnica de desinfestao envolve imerso do tecido em etanol e flambagem da superfcie (Dong et al., 1994). Seguida a desinfestao, podem ser utilizadas vrias tcnicas para isolamento de endofticas, tais como: triturao de qualquer estrutura vegetal em gua esterilizada, solues tampes ou meio lquido, podendo o material ser submetido ao ultra-som; extrao vcuo ou presso para isolamento de bactrias presentes nos vasos ou espaos intercelulares adjacentes, sendo utilizada principalmente para isolamento de bactrias de razes e caules de plantas perenes e; centrifugao para coleta de fluido intercelular e vascular de tecidos de plantas (Quadt-Hallmann et al., 1997). Para qualquer uma das tcnicas utilizadas, a suspenso obtida pode ser diluda e plaqueada em meio de cultura adequado. Para comprovar a eficincia da desinfestao, o teste de esterilidade pode consistir na imerso de razes em caldo nutritivo,
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plaqueamento da soluo final de lavagem em meio de cultura apropriado ou impresso do tecido de planta desinfestado sobre o meio de cultura. Se o teste de esterilidade for positivo, no se deve utilizar as bactrias isoladas, por no se ter certeza de sua caracterstica de endoftica (McInroy & Kloepper, 1994). A seguir so mostrados dois protocolos para isolamento de bactrias endofticas.
Protocolo 1 (Mariano et al., 2000b):

1. Remover fragmentos de rgo sadio da planta (folha, caule, ramo, semente, fruto, raiz, etc.), tratar com lcool a 50%, por 30 segundos e hipoclorito de sdio (NaClO) a 0,7%, por trs minutos, lavar duas vezes com ADE; 2. Transferir para tubos de ensaio contendo 10 mL de ATE pH = 0,7 e submeter a banho de ultra-som por 10 minutos, na potncia 10 (aproximadamente 40Kz); 3. Macerar os fragmentos em 10 mL de ATE ou soluo salina e novamente submeter a banho de ultra-som por 10 minutos; 4. A partir da suspenso assim obtida, efetuar diluies em srie, utilizando-se tubos de ensaio com 4,5 mL de ADE, at a diluio 10-2; 5. Plaquear em meio de cultura adequado (Meio KMB para Pseudomonas spp. fluorescentes ou BDA/NA/NYDA/TSA para bactrias eutrficas) 0,1 mL das suspenses 100, 10-1 e 10-2, com trs repeties cada, efetuando o espalhamento com ala de Drigalski; 6. Plaquear em meio adequado 0,1 mL da suspenso proveniente da lavagem dos fragmentos aps o primeiro banho de ultra-som, para comprovar a ausncia de organismos epifticos (teste de esterilidade); 7. Aps 48 horas de incubao, em condies de laboratrio, repicar as colnias bacterianas, apresentando caractersticas morfolgicas diferentes dentro de uma mesma amostra, para meio adequado, pelo mtodo de estrias, visando obteno de colnias puras; 8. Transferir as bactrias para tubos de ensaio com meio adequado, para posterior uso

Protocolo 2 (Pillay & Novak, 1997):

1. Desinfestar razes e caules em hipoclorito de sdio 1% + 0,05% triton X-100 (v/v) por 1 minuto (razes) ou 2 minutos (caules), lavar duas vezes com ADE, submergir por 30 segundos (razes) ou 1 minuto (caules)em H2O2 15% e lavar duas vezes com ADE;

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2. Homogeneizar os tecidos com triturador em 10 mL de sulfato de magnsio 0,1 M (MgSO4) (pH 6,5); 3. A partir da suspenso assim obtida, efetuar diluies em srie, e plaquear alquotas de 20 l em meio KMB; 4. Incubar as placas em temperatura ambiente por 48 horas e determinar o nmero de unidades formadoras de colnias por grama de tecido fresco (ufc/g); 5. Para o teste de esterilidade, plaquear pedaos de razes e caules esterilizados, bem como alquotas da ltima gua de lavagem em meio KMB. O meio de cultura utilizado para isolamento est relacionado finalidade do trabalho e pode ter efeito diferencial na populao obtida. Os meios de cultura mais utilizados para isolamento de bactrias epifticas e endofticas so: TSA para isolamento de bactrias totais; KMB para bactrias do gnero Pseudomonas do grupo fluorescente e; BDA para as espcies de Bacillus. As condies de armazenamento das amostras podem afetar quantitativamente e qualitativamente as estimativas da populao epiftica e endoftica. As amostras, de maneira geral, devem ser incubadas em condies ambientais ou em temperatura controlada, em torno de 25 3 C. A populao microbiana pode ser estimada pela contagem de colnias crescidas na superfcie do meio de cultura, aps considerar o fator diluio, e relacionada ao peso ou superfcie de segmentos dos rgos vegetais, expressando-se em nmero de unidades formadoras de colnias por grama de tecido ou cm2 da amostra (ufc/g ou ufc/ cm2). Em geral, a mdia da densidade populacional de bactrias endofticas varia de 1 x 103 e 1 x 105 ufc/g de tecido, com maiores densidades observadas nas razes e decrescendo do caule para as folhas (Lamb et al., 1996; Quadt-Hallmann & Kloepper, 1996). A identificao poder ser baseada em um conjunto de testes bioqumicos e nutricionais realizados de maneira usual, ou atravs de sistemas de identificao como o Biolog (Bochner, 1989) ou cidos graxos (Sasser, 1990). Em geral, espcies Gram-negativas predominam em relao as Gram positivas. No isolamento de PGPR biocontroladoras, estas devem ser isoladas preferencialmente de locais onde: a) o patgeno incapaz de se estabelecer ou, se est presente no causa doena; b) o potencial do patgeno diminui com monocultura contnua; c) o hospedeiro e parasita so nativos; d) suspeita-se da presena de antagonistas e; e) preferencialmente do hospedeiro e no ambiente em que vai ser utilizado (Bettiol, 1991).

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BACTRIAS PROMOTORAS DE CRESCIMENTO DE PLANTAS

Bactrias promotoras de crescimento de plantas (efeito direto) tm sido estudadas e aplicadas com muito sucesso. Na China, onde so conhecidas como bactrias que aumentam o rendimento (YIB- yield increasing bacteria) estas bactrias em 1987 j eram aplicadas em larga escala, em 48 diferentes culturas, atingindo 3,35 milhes de hectares (Wenha & Hetong, 1997). Nesse pais, tm sido obtidos aumentos significativos de rendimento para diversas culturas tais como tomate e pimento (10%), batata-doce (23%), hortalias folhosas (15%), hortalia de razes, (20%), melancia (15,5%) e beterraba (16,9%) (Zhang et al., 1996).

Mecanismos para promoo de crescimento

Os principais mecanismos que tm sido propostos para as PGPR de ao direta no crescimento das plantas so: produo de cido ciandrico (HCN), fitohormnios e enzimas, mineralizao de nutrientes, solubilizao de fosfatos e fixao de nitrognio.
cido Ciandrico (HCN)

O HCN produzido pelas PGPR promove o crescimento das plantas pelo aumento do desenvolvimento dos pelos radiculares (Luz, 1996). As Pseudomonas do grupo fluorescentes so importantes microrganismos produtores de HCN.

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Produo de fitohormnios

A produo bacteriana de hormnios vegetais tem sido encontrada em algumas PGPR. Esses hormnios desempenham funes importantes no crescimento de plantas, como o desenvolvimento da parte area, aumento do crescimento das razes e nmero de plos absorventes (Luz, 1996; Cattelan, 1999). Estudos evidenciaram que Pseudomonas fluorescens produz auxina e Pseudomonas. putida sintetiza particularmente a auxinas denominada cido indol-3-actico (Boroni et al., 1993). Bacillus subtilis e Azotobacter chroococum produzem giberelinas, enquanto Azotobacter brasiliense capaz de promover aumento no numero de plos absorventes e razes laterais em milheto atravs da produo de cido indol actico (AIA), giberelinas e citocininas (Luz, 1996).
Enzimas

Para a maioria dos vegetais o etileno quebra a dormncia e estimula a germinao de sementes (Esashi, 1991), porm se a concentrao desse hormnio aps a germinao for muito alta, o alongamento das razes assim como a fixao simbitica do nitrognio em plantas leguminosas podem ser inibidos (Jackson, 1991). Algumas bactrias utilizam o composto 1aminociclopropano-carboxilato (ACC) como nica fonte de nitrognio, atravs da ao da enzima ACC deaminase produzida por elas. Sabe-se que o composto ACC o precursor imediato de etileno, e o sequestro e hidrlise desse composto nas sementes em germinao pela enzima ACC deamisase produzida pela PGPR diminui a concentrao de etileno nas sementes e consequentemente pode estimular o crescimento vegetal e o comprimento das razes (Glick et al., 1995). Glick (2000) observou que isolados de Pseudomonas que produziam ACC deaminase desempenham vrias funes na promoo de crescimento de plantas, como desenvolvimento precoce de razes, aumento do tempo de corte de flores, proteo de plantas contra estresses ambientais e produo de compostos volteis responsveis por aroma.
Mineralizao de nutrientes

A mineralizao de nutrientes um processo de substituio, no solo, dos constituintes orgnicos por inorgnicos. Algumas PGPR podem, atravs da mineralizao, prover a elevao da disponibilidade de nutrientes tais como fsforo e ferro, aumentando o crescimento da planta pelo estmulo da absoro desses elementos.

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Solubilizao de fosfatos

ons de nutrientes se movem no solo em direo s razes por fluxo de massa com a gua presente no solo e por difuso. Esses nutrientes nem sempre esto prontamente disponveis s plantas: o fsforo, por exemplo, encontra-se no solo combinado em compostos de ferro, alumnio, clcio e na matria orgnica, sendo de baixa solubilidade. Vrios grupos de microrganismos que vivem na rizosfera so capazes de extrair e solubilizar o fsforo, causando elevao da disponibilidade deste nutrientes, destacandose certas PGPR que promovem o crescimento de plantas por estmulo absoro desse elemento. Na solubilizao de fosfatos por microrganismos os principais mecanismos envolvidas so a produo de CO2 e cidos orgnicos, resultantes da mineralizao do C inorgnico, exercendo ao solubilizadora direta sobre os fosfatos inorgnicos; reduo de compostos de Fe3+ para compostos Fe2+, uma vez que o Fe2+ mais solvel e facilmente assimilvel pelas razes e; produo de H2S sob bixas concentraes de O2, que em condies redutoras favorece a solubilizao de fosfatos de ferro (Siqueira & Franco, 1988; Cattelan, 1999). Jiang & Sato (1994) estudando bactrias rizosfricas de trigo, observaram que existia correlao linear positiva entre o crescimento das plantas e o nmero de bactrias solubilizadoras de fsforo, quando estavam presentes espcies de Pseudomonas do grupo fluorescente.
Fixao de nitrognio

Um nmero reduzido de bactrias possui a capacidade de fixao biolgica de nitrognio simbioticamente, como Rhizobium spp. e Bradyrhizobium spp., ou assimbioticamente, como Azospirillum spp. e Azotobacter spp., e teoricamente essas bactrias podem fornecer parte do nitrognio que as plantas necessitam para seu desenvolvimento. Na rea de fixao biolgica de nitrognio, alguns trabalhos tm indicado a importncia do estudo de bactrias endofticas. Muitas das novas bactrias fixadoras de N2, tais como Acetobacter diazotrophicus e Herbaspirilum sp., isoladas de culturas diversas (cana-de-acar, batata doce, sorgo), no foram isoladas do solo e podem ser consideradas endofticas de plantas. O gnero Frankia constitui o nico actinomiceto endoftico simbitico que realiza o processo de fixao do nitrognio em plantas no leguminosas, e tem sua importncia restrita a regies dos trpicos e subtrpicos. Benson & Silvester (1993) demonstraram o papel relevante deste gnero como fixador de nitrognio atravs de ndulos das razes de certas plantas no leguminosa como Almus, Myruca e Casuarina.

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Vrios mtodos para determinao quantitativa da maioria das caractersticas bioqumicas e fisiolgicas dos mecanismos de ao das bactrias promotoras de crescimento de plantas podem ser encontrados na literatura, dentre as quais pode-se indicar o manual "Mtodos qualitativos para determinao de caractersticas bioqumicas e fisiolgicas associadas com bactrias promotoras do crescimento vegetal" de Cattelan (1999) e "Manual de prticas em fitobacteriologia" de Mariano (2000).

Seleo de bactrias para promoo de crescimento de plantas

A seleo de PGPR pode ser realizada em laboratrio com plantas micropropagadas, em casa de vegetao e no campo. A inoculao geralmente realizada por tratamento de sementes e rgos de propagao vegetativa, ou infestao de substratos. A utilizao de agentes bacterianos nesses processos chamado bacterizao (Brown, 1974). A bacterizao de sementes considerado o mtodo mais econmico, prtico e rpido e, segundo Musson et al. (1995), muito eficiente para a introduo de endofticas. Na seleo deve ser testado o maior nmero possvel de bactrias, para aumentar as chances de sucesso, bem como os experimentos devem ser repetidos para que tenham confiabilidade. Pode-se tambm realizar a bacterizao conjunta de sementes e substrato. A avaliao da promoo de crescimento pode ser realizada em plntulas ou plantas adultas no final da produo. As variveis a serem analisadas podem ser: germinao, comprimento das razes, altura da planta, nmero de folhas, rea foliar, dimetro de caule, peso fresco e seco da raiz e parte area, bem como, vigor vegetativo, maturao de gros, teores de protenas, aminocidos totais, lisina, fibra, acar e leo. Podem ser utilizados diversos mtodos para seleo de bactrias promotoras de crescimento de plantas, como os descritos por Mariano et al. (2000c).

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 Bacterizao da semente

1.Preparar suspenso das bactrias a testar (0,52 A ou 108 ufc/ml) a partir de cultura pura com 24-48 h em meio adequado. Se as bactrias produzirem siderforos utilizar meio pobre em ferro (KMB); 2.Imergir as sementes (no mnimo 100 sementes por tratamento) na suspenso bacteriana adicionada de um espalhante adesivo (Tween 80 a 0,05% ou MgSO4 a 0,1 M) por 30 min. Tratar a testemunha com ADE; 3.Retirar as sementes e espalhar para secagem sobre papel toalha overnight (12 h); 4.Plantar em substrato adequado contido em bandejas de poliestireno, etiquetando os diversos tratamentos e colocar em casa de vegetao; 5.Observar a velocidade de emergncia e porcentagem de germinao para cada tratamento; 6.No momento do transplante avaliar ainda as variveis: altura da planta (colo at meristema apical), comprimento da raiz, peso seco da parte area e da raiz, nmero de folhas e rea foliar; 7.Submeter os dados anlise estatstica de agrupamento para escolher os melhores tratamentos dando continuidade ao estudo, agora j observando as plantas at estgios mais avanados de crescimento, se possvel, at a frutificao.
Bacterizao do substrato

1.Preparar suspenso das bactrias a testar (0,52 A ou 108 ufc/ml) a partir de cultura pura com 24-48 h em meio adequado. Se as bactrias produzirem siderforos utilizar meio pobre em ferro (KMB); 2.Adicionar as suspenses bacterianas ao substrato prprio contido em bandejas de poliestireno, 5 mL por clula da bandeja, etiquetando os diversos tratamentos. No precisa utilizar espalhante adesivo. Ao utilizar a mesma bandeja para tratamentos (bactrias) diferentes, ter cuidado no manuseio da suspenso e deixar no mnimo duas fileiras de clulas vazias entre tratamentos. As bandejas devem ter sido previamente desinfestadas em soluo de hipoclorito de sdio (0,7%). Colocar as bandejas em casa de vegetao. Tratar a testemunha com ADE; 3.Plantar as sementes (no mnimo 100 sementes por tratamento) no substrato bacterizado imediatamente ou 3 dias aps a bacterizao; 4.Observar a velocidade de emergncia e porcentagem de germinao para cada tratamento;
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5.No momento do transplante avaliar ainda as variveis: altura da planta (colo at meristema apical), comprimento da raiz, peso seco da parte area e da raiz, nmero de folhas e rea foliar; 6.Submeter os dados anlise estatstica de agrupamento para escolher os melhores tratamentos dando continuidade ao estudo, agora j observando as plantas at estgios mais avanados de crescimento, se possvel, at a frutificao.

BACTRIAS PROMOTORAS DE CRESCIMENTO DE PLANTAS POR BIOCONTROLE

Controle biolgico pode ser definido como a reduo da soma de inculo ou das atividades determinantes da doena provocada por um patgeno, realizada por ou atravs de um ou mais organismos que no o homem (Cook & Baker, 1983). Este um conceito amplo que abrange muito mais que a utilizao de antagonistas, na realidade inclui qualquer controle obtido atravs de uma sistema vivo, exceto o homem. No entanto, o controle biolgico utilizado principalmente com o significado de controle de um organismo por outro organismo. Ambos os conceitos envolvem a reduo da densidade populacional do patgeno, a proteo biolgica da superfcie de plantas e o controle dentro da planta. Embora o foco do controle biolgico seja o patgeno, o objetivo do controle biolgico de patgenos a supresso dos prejuzos econmicos que eles causam, ou seja da doena. Microrganismos so considerados como ideais para uso no controle biolgico quando possuem uma ou mais das seguintes caractersticas (Bettiol, 1991): - Boa capacidade de colonizao (exceto para aqueles que induzem resistncia sistmica) e competitividade no ambiente do patgeno; - Requerimentos nutricionais semelhantes aos patgenos-alvo; - Adaptao ao meio ambiente do patgeno; - Resistncia a fatores ambientais como temperatura, dessecao, radiao, qumicos; - Fcil cultivo ou multiplicao, aplicao e formulao; - No ser patognico ao homem ou animais; - No ser fitopatognico virulento; - Capacidade de atuar em diferentes plantas hospedeiras e amplo espectro de ao, contra diferentes patgenos; - Compatibilidade com agrotxicos para uso em controle integrado e com outros antagonistas para uso em misturas;
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- Boa sobrevivncia, persistncia e capacidade de redistribuio e; - Baixa freqncia de mutaes. Diversos gneros e espcies compem o grupo de PGPR que atuam por biocontrole, tendo destaque os isolados de Pseudomonas do grupo fluorescente, Bacillus e Streptomyces. A capacidade destas rizobactrias de colonizarem o sistema radicular de fundamental importncia para o seu uso efetivo como agentes de biocontrole. Bactrias endofticas utilizadas no biocontrole de doenas apresentam como principais vantagens, possurem nicho ecolgico similar ao do patgeno e estarem protegidas das diversas influncias abiticas. O tratamento de sementes o mtodo mais comum de aplicao destes antagonistas (Hallmann et al., 1997). Os fitopatgenos so controlados pela ao de medidas que atuam destruindo os propgulos, prevenindo a formao do inculo ou destruindo o inculo presente em resduos infestados, reduzindo o vigor e a virulncia do patgeno, assim como promovendo o desenvolvimento das plantas. As estratgias de biocontrole de doenas de plantas fazem parte de um manejo integrado constitudo por medidas que visam a diminuio da densidade populacional do patgeno, no apenas atravs do uso de microrganismos antagnicos, mas tambm pelo uso de mtodos culturais que forneam ambiente favorvel ao desenvolvimento dos antagonistas.

Mecanismos de biocontrole
Os mecanismos de biocontrole so as interaes antagnicas atravs das quais os antagonistas ativamente expressam oposio aos patgenos e reduzem a ocorrncia das doenas. Na maioria dos casos, os antagonistas so empregados com sucesso, como agentes de biocontrole sem, no entanto, haver o conhecimento dos mecanismos de ao envolvidos, os quais so de fundamental importncia, quando se deseja empregar mtodos racionais de melhoramento gentico e aumentar a vantagem competitiva no ambiente (Melo, 1996). Os principais mecanismos que podem atuar no controle biolgico de doenas so classificados em: produo de cido ciandrico (HCN), antibiticos, bacteriocinas, competio por substrato, parasitismo, induo de resistncia e proteo cruzada.
cido Ciandrico (HCN)

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A produo do metablito voltil HCN por PGPR alm de ser um mecanismo de ao direta de promoo de crescimento de plantas, considerado principalmente um mecanismo de biocontrole. Dfago et al. (1990) apresentaram evidncias de que o HCN benfico para o controle microbiolgico. Eles estudaram o sistema P. fluorescens x Thielaviopsis em fumo causando supresso da podrido preta das razes. Nehl et al (1996) verificaram que um isolado com alta produo de HCN, mutante construdo a partir de P. putida BK8661, resultou num pequeno, mais significativo, aumento na supresso dos sintomas causados por Septoria tritici e Puccinia recondita f.sp. tritici em trigo sob condies axnicas.
Antibiose

a interao entre organismos, na qual um ou mais metablitos produzidos por um organismo tm um efeito danoso sobre o outro, inibindo a germinao e crescimento ou inativando a clula por toxicidade qumica. Os antibiticos so compostos orgnicos de baixo peso molecular que, em baixas concentraes, so deletrios ao crescimento ou a outras atividades metablicas de outros organismos (Fravel, 1988). So conhecidas produtoras de antibiticos espcies de bactrias dos gneros Bacillus, Pseudomonas fluorescentes e Streptomyces, entre outros (Melo, 1998). Por exemplo, Bacillus subtilis pode produzir os antibiticos bulbiformina, micosubtilina, bacilomicina, bacilizina, funginicina; Pseudomonas cepacia, os antibiticos pirolnitrina, altericidina e; P. fluorescens, os antibiticos pirolnitrina, pioluteorina, oomicina A, 2,4-diacetilfloroglucinol, fenazina-1-carboxilato. Streptomyces o gnero de actinomicetos mais estudado e produz cerca de 60% dos 5.000 antibiticos conhecidos. Em funo do habitat de crescimento desses microrganismos, sua habilidade para colonizar superfcie de razes de plantas, e seu vasto potencial antibitico, eles funcionam como potenciais agentes de controle biolgico contra muitos patgenos de plantas economicamente importantes tais como Fusarium oxysporum, Rhizoctonia solani, Aphanomyces euteichos, Gaeumannomyces graminis, Pythium ultimum, Sclerotium cepivorum, Pyrenochaeta terrestris, Macrophomina phaseolina, Heterobasidium annosum, Streptomyces scabies, Ralstonia solanacearum e Pythum aphanidermatum . Devido aos mltiplos metablitos produzidos pelos actinomicetos e variados mecanismos de controle, esses microrganismos podem inibir ou matar patgenos resistentes a fungicidas, e ainda limitar a habilidade dos patgenos desenvolverem resistncia (Roberts, 2000) O uso de agentes de biocontrole que produzem biosurfactantes (ramnolipdeos) altamente eficientes contra zosporos de patgenos de plantas est sendo estudado em aplicaes prticas nos sistemas hidropnicos recirculantes. Controle biolgico dos patgenos radiculares P.
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aphanidermatum, Phytophthora capsici e Plasmopara lactucae-radicis neste sistema foi alcanado, embora os resultados no tenham sido consistentes, utilizando as bactrias do grupo das Pseudomonas spp. fluorescentes (Stanghellini & Miller, 1997).
Bacteriocinas

So substncias contendo protenas como principal constituinte (embora algumas sejam um nucleotdeo adenosina modificado, como por exemplo a Agrocina 84) que inibem ou so ativas contra outros isolados da mesma espcie ou espcies estreitamente relacionadas. A capacidade de produzir bacteriocinas chamada bacteriocinogenia. A bactria Agrobacterium radiobacter (estirpes K84 e K1026) produz as bacteriocinas Agrocina 84 e Agrocina 434, que so produzidas por plasmdios e so eficientes contra Agrobacterium tumefaciens, agente causal da galha em coroa de diversas culturas (Kerr, 1980).
Competio por substrato

Envolve a interao entre dois ou mais organismos na disputa por nutrientes e por espao, tanto na espermosfera quanto na rizosfera e filosfera. A competio por espao se d, principalmente, pela ocupao dos stios de colonizao e a competio por nutrientes, pelos trs elementos essenciais para a maioria dos patgenos: carbono, nitrognio e ferro (Paulitz, 1990). A competio por carbono e por nitrognio, aparentemente, pode ocorrer com todos os grupos de PGPR. Entretanto, as bactrias do gnero Pseudomonas fluorescentes so os principais microrganismos que apresentam a competio pelo Fe+3, realizada por siderforos, como mecanismo de biocontrole de diversas doenas (Buysens et al., 1996), tais como murcha vascular em cravo (Fusarium oxysporum f.sp. dianthi), tombamento de plntulas em algodo (Pythium ultimum) e murcha do pepino (Fusarium oxysporum f.sp. cucumerinum) (Melo, 1998). Essas bactrias produzem siderforos, como a pioverdina, cujo nome comum pseudobactina, que apresenta alta afinidade por Fe+3 e transporta esse elemento para o interior das clulas. Dessa maneira, os microrganismos fixam o Fe+3, tornando-o menos disponvel ao patgeno que incapaz de produzir agentes similares de transporte de ferro (Alabouvett et al., 1998). Siderforos so substncias de baixo peso molecular produzidas por alguns microrganismos em condies limitantes de ferro, com grande afinidade por ons Fe+3.
Parasitismo

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 a interao entre dois organismos, onde um parasita o outro. O parasitismo baseia-se em enzimas lticas produzidas pela espcie parasita, que degradam a parede celular dos fungos fitopatognicos (Luz, 1996). O parasitismo pode ocorrer sobre estruturas vegetativas, reprodutivas e de sobrevivncia, reduzindo a infeco e o inculo do patgeno. Em fungos chamado micoparasitismo, que pode ser necrotrfico ou biotrfico. Um micoparasita necrotrfico mata seu hospedeiro, algumas vezes sem infect-lo, atuando atravs de substncias txicas, enzimas que degradam a parede celular ou outros efeitos e ento utiliza os nutrientes liberados pela hifa morta. Um micoparasita biotrfico obtm seus nutrientes diretamente das clulas vivas do fungo hospedeiro, tanto pelo crescimento em contato ntimo com esse hospedeiro quanto pela penetrao e crescimento dentro deste hospedeiro. Portanto, os biotrficos afetam pouco o hospedeiro, pelo menos nos estgios iniciais de parasitismo. Isto explica porque a maioria dos exemplos de biocontrole envolvem o micoparasitismo necrotrfico. As fases do micoparasitismo envolvem localizao, reconhecimento, contato, penetrao e aquisio de nutrientes. A penetrao pode ocorrer por presso mecnica e/ou produo de enzimas lticas degradadoras de parede celular. Enterobacter cloacae, por exemplo, degrada o miclio de Pythium e enzimas quitinolticas de Serracia marcescens podem tambm desempenhar um papel importante na bioproteo (Luz, 1996).
Induo de resistncia

a ativao de mecanismos de defesa no hospedeiro aps exposio a um microrganismo como agente indutor. Os principais mecanismos de defesa exibidos pela planta aps o contato com a PGPR e a induo da resistncia sistmica so aumento da produo de PR protenas (protenas relacionadas a patognese) (Zdor & Anderson, 1992), acmulo de fitoalexinas (Hoffland & Bik, 1993; van Peer et al., 1991), lignificao (Hoffland & Bik, 1993) e estmulo da atividade da peroxidase (Wei et al., 1992). Os sinais podem ser etileno, cido jasmnico, jasminatos e seus derivados, cido saliclico, salicilatos e anlogos. Esta ativao ocorre no apenas no stio de induo mas distncia, de forma mais ou menos generalizada. Certas bactrias promovem uma resistncia sistmica generalizada, ou seja, proteo mltipla contra vrios patgenos (Romeiro, 1999), como Pseudomonas putida 89B-27 e Serratia marcescens 90-166 x Colletotrichum orbiculare, Fusarium oxysporum f.sp. cucumerinum e Pseudomonas syringae pv. lachrymans em pepino.
Proteo cruzada

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 a infeco de uma clula por um patgeno, reduzindo a possibilidade da infeco por outro patgeno relacionado ou seja, o patgeno no infecta o hospedeiro porque os stios de infeco esto ocupados pelo isolado protetor. Inicialmente criada para as infeces virais, a proteo cruzada ou premunizao pode ser utilizada para fungos e outros patgenos. Exemplo deste mecanismo o controle da A. tumefaciens, agente causal da galha em coroa em diversos hospedeiros, atravs da A. radiobacter, que se liga aos stios receptores na clula do hospedeiro tornando-os indisponveis ao patgeno (Cook & Baker, 1983). Apesar de ocorrer a proteo cruzada, o principal mecanismo de controle da A. radiobacter tido como a produo da bacteriocina. Um biocontrolador pode exercer mais de uma forma de antagonismo, sendo esta caracterstica desejvel no controle biolgico. Isolados de Pseudomonas fluorescentes competem por nutrientes, pelo ferro atravs de siderforos, e ainda produzem antibiticos. Da mesma forma, uma nica substncia pode ter diversas funes como os siderforos, que competem pelo ferro frrico (Fe+3) na rizosfera, inibindo o crescimento do patgeno e podem ainda ser considerados antibiticos, quando so txicos a outros organismos. Misturas de isolados tambm j so utilizadas visando o aumento da supressividade de doenas. Pierson & Weller (1994), dentre tantos outros pesquisadores, mostraram que combinaes de vrias microrganismos tm um potencial para uma maior atividade de biocontrole, quando comparado a alguns isolados aplicados individualmente, devido a interao positiva dos mecanismos de ao. Deve-se levar em considerao tambm que a capacidade das PGPR de colonizarem o sistema radicular de fundamental importncia para o seu efetivo uso como agentes de biocontrole. No entanto, tem sido sugerido que uma colonizao varivel seja, provavelmente, uma razo para que o controle seja inconsistente (Weller, 1988). A colonizao compreende uma srie de passos: migrao em direo s razes, ataque, distribuio ao longo das razes, crescimento e estabelecimento da populao. Aps o contato inicial, vem a fase crucial que a manuteno ou persistncia, onde a bactria utiliza exsudatos das razes para se multiplicar e sobreviver.

Seleo de bactrias para biocontrole de doenas de plantas

O sucesso de todo programa de controle biolgico est no isolamento e seleo de microrganismos antagonistas, que visam obter isolados com potencial de biocontrole em curto espao de tempo e com baixo custo. Na seleo de microrganismos antagnicos podem ser utilizados isolados obtidos de colees de culturas ou atravs de isolamento, sendo esta baseada
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nas relaes entre antagonista e patgeno em contato com o hospedeiro, inicialmente em condies controladas e, posteriormente, nas condies normais de ocorrncia da doena. Estes testes in vivo, podem ser realizados em condies controladas em laboratrio (discos de folhas, folhas destacadas, plantas micropropagadas) e casa de vegetao ou em campo, sendo o campo considerado uma etapa fundamental e definitiva para seleo. As bactrias antagonistas podem ser aplicadas atravs da pulverizao da suspenso do antagonista, bacterizao de sementes, razes ou substrato, e aplicao mista. Uma seleo realizada inicialmente em condies de laboratrio, na ausncia do hospedeiro, pode, na maioria das vezes, resultar em insucesso no campo pela diferena das condies entre os dois ambientes. Na avaliao de biocontrole podem ser analisadas a incidncia (porcentagem de plantas doentes, ou de suas partes, em relao a amostra ou populao) e severidade da doena (porcentagem da rea ou do volume do tecido coberto por sintomas da doena, em relao a rea ou volume total). A seleo depende de diversos fatores tais como: tipo de patgeno a controlar, hospedeiro no qual sero aplicados, condies ambientais, modos e perodos de aplicao do antagonista, concentrao do antagonista e do patgeno, agressividade e virulncia do patgeno, entre outros (Mariano et al., 2000a). Dentre os diversos mtodos que podem ser empregados para seleo de PGPR biocontroladoras, podem ser utilizados os descritos por Mariano et al.(2000a).
Bacterizao da semente

1.Preparar suspenso das bactrias a testar (0,52 A ou 108 ufc/ml) a partir de cultura pura com 24-48 h em meio adequado. Se as bactrais produzirem siderforos utilizar meio pobre em ferro (KMB); 2.Imergir as sementes (no mnimo 100 sementes por tratamento) na suspenso bacteriana adicionada de um espalhante adesivo (Tween 80 a 0,05% ou MgSO4 a 0,1 M) durante 30 min. Tratar a testemunha com ADE; 3.Retirar as sementes e espalhar para secagem sobre papel toalha overnight (12 h); 4.Plantar em substrato adequado contido em bandejas de poliestireno, etiquetando os diversos tratamentos e colocar em casa-de-vegetao; 5.Transplantar as plntulas para vasos contendo solo natural que: i)j dever ter sido infestado com o patgemo 3 dias antes (10 mL da suspenso 108 ufc/ml por cova de plantio); ii) ser inoculado no momento do transplantio colocando-se 10 mL de suspenso sobre o substrato, 2 h antes do transplante, ou; iii) colocando-se 5 mL de suspenso sobre a plntula dentro da cova de plantio, no momento do transplante;
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6.Observar diariamente o surgimento dos sintomas, avaliando incidncia e severidade da doena; 7.Submeter os dados anlise estatstica de agrupamento para escolher os melhores tratamentos dando continuidade ao estudo, em condies de campo.
Bacterizao do substrato

1.Preparar suspenso das bactrias a testar (0,52 A ou 108 ufc/ml) a partir de cultura pura com 24-48 h em meio adequado. Se as bactrias produzirem siderforos utilizar meio pobre em ferro (KMB); 2.Adicionar as suspenses bacterianas ao substrato para sementeira contido em bandejas de poliestireno, 5 mL por clula da bandeja, etiquetando os diversos tratamentos. No precisa utilizar espalhante adesivo. Ao utilizar a mesma bandeja para trata mentos (bactrias) diferentes, ter cuidado no manuseio da suspenso e deixar no mnio duas fileiras de clulas vazias entre tratamentos. As bandejas devem ter sido previamente desinfestadas em soluo de hipoclorito de sdio (0,7%). Colocar as bandejas em casa de vegetao. Tratar a testemunha com ADE; 3.Plantar as sementes no substrato bacterizado imediatamente ou 3 dias aps a bacterizao; 4.Transplantar as plntulas para vasos contendo solo natural que: i)j dever ter sido infestado com o patgeno 3 dias antes (10 mL da suspenso 108 ufc/ml por cova de plantio); ii) ser inoculado no momento do transplantio colocando-se 10 mL de suspenso sobre o substrato, 2 h antes do transplante, ou; iii) colocando-se 5 mL de suspenso sobre a plntula dentro da cova de plantio, no momento do transplante; 5.Observar diariamente o surgimento dos sintomas, avaliando incidncia e severidade da doena; 6.Submeter os dados anlise estatstica de agrupamento para escolher os melhores tratamentos dando continuidade ao estudo, agora j observando as plantas at estgios mais avanados de crescimento, se possvel, at a frutificao. Observao: os procedimentos acima podero ser adaptados dependendo do tipo mais adequado de inoculao do patgeno e manejo do hospedeiro. Os dois mtodos so utilizados, principalmente para patgenos que causam doenas radiculares.
Pulverizao do antagonista

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1.Preparar suspenso das bactrias a testar (0,52 A ou 108 ufc/ml) a partir de cultura pura com 24-48 h em meio adequado. Se as bactrias produzirem siderforos utilizar meio pobre em ferro (KMB); 2.Pulverizar esta suspenso na parte area das plantas em estudo que sero posteriormente inoculadas , tambm por pulverizao com o patgeno. O perodo que antecede a inoculao de geralmente 3 dias para que o antagonista possa se estabelecer e iniciar a colonizao. No entanto, podem ser testados vrios perodos para escolha do mais adequado; 3.Observar diariamente o surgimento dos sintomas, avaliando incidncia e severidade da doena; 4.Os dados obtidos pela comparao com a testemunha no tratada porm inoculada (testemunha relativa) serviro de escolha dos melhores antagonistas. Observao: este mtodo utilizado para testar antagonistas contra patgenos que causam doenas em parte area de plantas. Uma vez selecionados os antagonistas, cujo biocontrole dever ser confirmado pela repetibilidade dos resultados dos testes, os seus mecanismos de ao devem ser analisados atravs de testes em laboratrio, seguindo-se os estudos de formulao para a comercializao. A vantagem seletiva competitiva de um agente de biocontrole pode ser aumentada atravs da manipulao do ambiente ou do prprio agente, incluindo modificao gentica atravs de mutao e seleo e/ou engenharia gentica, principalmente, quando se conhece o tipo de antagonismo (Melo, 1996). Alm disso, misturas de antagonistas compatveis podem aumentar a diversidade gentica de sistemas de biocontrole, resultando em tratamentos mais persistentes na rizosfera, compreendendo diferentes mecanismos de controle, efetivos sob uma ampla gama de condies ambientais (Pierson & Weller, 1994). Deve-se ter em mente que para o sucesso do controle biolgico de doenas da parte area e de doenas radiculares, importante o conhecimento da sinecologia desses habitats. O ambiente da folhagem constitudo pelo filoplano e filosfera. Podemos definir filoplano como a verdadeira superfcie das folhas e filosfera como o ambiente sob a influncia das mesmas As dificuldades do biocontrole de patgenos na parte area podem ser explicadas pela diversidade de eventos desse habitat resultantes da interao dos seguintes fatores: complexidade estrutural das folhas; exposio da superfcie foliar a um ambiente dinmico; natureza endgena e exgena dos nutrientes; quantidade desses nutrientes; origem dos microrganismos residentes; sucesso de colonizao e; a quebra do equilbrio da comunidade microbiana pela interferncia humana (Andrews,
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1992; Bettiol, 1997). Assim como o ambiente da folhagem formado pelo filoplano e filosfera, o ambiente das razes constitudo pelo rizoplano e rizosfera. Podemos definir rizoplano como a verdadeira superfcie das razes e rizosfera como o ambiente sob a influncia das mesmas. O microclima existente nas razes tamponado pelo solo ao seu redor e consequentemente torna-se mais estvel do que o ambiente da folhagem, o que determina uma maior eficincia dos mtodos de biocontrole neste habitat. A rizosfera um ambiente mais facilmente manipulvel atravs da destruio do inculo do patgeno, evitando a recolonizao pelo patgeno e protegendo o rizoplano (Andrews, 1992).

PRODUO, FORMULAO E APLICAO DE AGENTES MICROBIANOS

Trabalhos com promoo de crescimento e biocontrole esto sendo bastante desenvolvidos, embora sejam poucos os produtos microbianos que chegam escala comercial. Isso vem ocorrendo pela dificuldade de desenvolver o agente microbiano em quantidade suficiente para aplicao em grandes reas cultivadas, nas concentraes adequadas, principalmente no biocontrole. Pesquisas sobre aplicaes prticas de PGPR tm tido sucesso na medida em que j existem produtos comerciais a base dessas bactrias nos Estados Unidos, na China, na Austrlia, Pais de Gales e Nova Zelndia (Luz, 1996), embora no Brasil, at o momento, no existem produtos desta natureza registrado no Ministrio da Agricultura. Na Tabela 3.1 so mostrados produtos comerciais base de PGPR, onde destaca-se a grande utilizao no controle de doenas radiculares. Com relao as PGPR que atuam atravs da fixao simbitica do nitrognio (Rhizobium e Bradyrhizobium), existem diversos produtos comerciais no mercado, tais como Biomax, Gold e Soil Implant, bem como inoculantes produzidos e comercializados por empresas pblicas e privadas, como a Empresa Pernambucana de Pesquisa Agropecuria - IPA. Tabela 3.1 Bioprodutos comerciais base de bactrias promotoras de crescimento de plantas.
Produto BioYieldTM Organismo biocontrolador Paenobacillus maceran + Bacillus amyloliquefaciens Pseudomonas Alvo Promoo de crescimento em pimento e tomate Pseudomonas spp. ativas para Modo de aplicao Substrato

BlighaBan A506

Pulverizao de flores e

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fluorescens, A560 Cedomon Companion Pseudomonas chlororaphis Bacillus subtilis GBO3 Pseudomonas fluorescens Burkholderia cepacia tipo Wisconsin

nucleao de gelo-INA+ Fusarium sp.; patgenos foliares Rhizoctonia; Pythium; Fusarium; Phytophthora Pseudomonas tolassii

frutos Tratamento de sementes Molhamento no plantio e transplantio ou pulverizao Pulverizao

Conquer Deny (ex BlueCircle, Percept)

Rhizoctonia spp., Pythium spp. Tratamento de sementes e Fusarium spp. (tombamento) Nematides: Pratylenchus; Belonolaimus; Rotylenchus; Helicotylenchus; Hoplolaimus Agrobacterium tumefaciens Tratamento de sementes, plntulas, estacas, razes, caules; molhamento do solo Tratamento de sementes Tratamento de sementes; tratamento de caixas de colheita

Galltrol A

Agrobacterium radiobacter isolado 84 B. subtilis B. cepacia B. subtilis

Histicknit Intercept Kodiak; Kodiak HB; Kodiak AT

Fusarium; Rhizoctonia; Aspergillus R. solani, Fusarium spp., Pythium spp. R. solani, Fusarium spp., Alternaria spp. e Aspergillus spp. que atacam razes

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Tabela 3.1 Continuao ....

Produto Mycostop Organismo biocontrolador Streptomyces griseovirides K61 Alvo Fusarium spp., Alternaria brassicicola, Phomopsis spp., Botrytis spp., Pythium spp., Phytophthora spp. causando podrides de sementes, razes e caules; murchas A.tumefaciens A.tumefaciens Modo de aplicao Molhamento, pulverizaes ou atravs da irrigao

Nogall; Diegall Norbac 84C

A. radiobacter A. radiobacter

Tratamento de razes Tratamento de razes, caules, estacas ou pulverizaes Tratamento de sementes, molhamento do solo e adio a solues nutritivas Pulverizao Pulverizao Tratamento de sementes Tratamento de sementes

Rhizo-Plus; RhizoPlus Konz

B. subtilis FZB24

R. solani, Fusarium spp., Alternaria spp., Sclerotinia, Verticillium, Streptomyces scabies Mldio, odio, mancha de Cercospora e outros Antracnose; Pythium aphanidermatum Patgenos de plntulas R. solani, Fusarium spp., Alternaria spp. e Aspergillus spp. que atacam razes Promoo de crescimento em diversas culturas

Serenade Spot-Less System 3 Subtilex (Epic)

B. subtilis Pseudomonas aureofaciens Tx-1 B.subtilis GB03 + agroqumicos B. subtilis

YIB (BARs)*

B. cereus + B. brevis + B. firmus + Bacillus spp.

Tratamento de sementes e mudas

*YID = "yield increase bacteria; BARs = bactrias aumentadoras de rendimento [adaptado de Fravel (2001), Melo (1998) e TICorp (1999)].

Na produo massal de microrganismos, em todos os casos, deseja-se obter um grande nmero de clulas com caractersticas uniformes, que devem crescer sob condies definidas e controladas. Os processos fermentativos, em sua forma mais simples, podem ser apenas a mistura de microrganismos com um meio de cultura nutritivo. Os processos em larga escala, mais sofisticados, exigem controle total do ambiente para que a fermentao se processe eficientemente e possa ser repetida exatamente com as mesmas quantidades de matria-prima, meio de cultura e inculo, produzindo exatamente a mesma quantidade de produto final quer sejam enzimas, antibiticos, clulas ou esporos. Os processos, desde a escala piloto, so executados em bio-reatores, os quais tm a funo principal de minimizar o custo de produo enquanto se tenta ampliar a velocidade de produo e melhorar a qualidade do produto.

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A formulao de produtos biolgicos a arte industrial de transformar um microrganismo biocontrolador em um produto comercial para uso em campo. Essas formulaes devem possuir um alto padro de durabilidade, viabilidade e estabilidade, mesmo na ausncia de refrigerao (-5oC a 30oC), durante o perodo de prateleira, visando facilitar a utilizao e distribuio. Uma formulao contendo uma ou mais bactrias benficas em um carreador de fcil uso, econmico, orgnico, inorgnico ou sinttico denominado de inoculante. Os inoculantes mistos so combinaes de microrganismos que interagem sinergisticamente aumentando o crescimento e produo de plantas pelo melhor balano de nutrientes (Fravel, 1999). O carreador o veculo de transporte da bactria desde o local de produo at a planta viva no campo e deve apresentar capacidade de liberar o nmero certo de clulas viveis, em bom estado fisiolgico, no tempo adequado. Os carreadores so divididos em quatro categorias: a) solos - turfa, carvo, argila, solo inorgnico; b) resduos de plantas - compostos, esterco, farinha de soja, leos de soja e amendoim, farinha de trigo; c) materiais inertes - vermiculita, perlita, sulfato de clcio, gel de poliacrilamida, contas de alginato e; d) culturas liofilizadas ou em leo. O material inerte do diluente o carbonato de clcio. As formulaes encontradas nos produtos comerciais utilizados para controle biolgico de doenas so: grnulos, p molhvel, pelets, biomassa seca em turfa, suspenso aquosa, p seco, esporos, microgrnulos, placa de Petri com cultura em gar e suspenso de culturas (Fravel, 1999). A formulao em p, utilizada para tratamento de sementes, sendo o tipo de inoculante mais comum, tanto em pases desenvolvidos quanto em desenvolvimento; em calda, aplicada diretamente no tratamento de sementes antes do plantio ou no sulco; em grnulos, aplicado diretamente no sulco junto as sementes e; em lquido, utiliza principalmente gua, mas tambm leo mineral ou orgnico, para imerso de sementes (Bashan, 1998). Os mtodos de aplicao utilizados para controle de doenas so: tratamento de sementes, plntulas, estacas, gramados, razes e caules; tratamento do solo por molhamento, incorporao, pulverizao; mistura com substrato e; tratamento da parte area da planta por pulverizao e deposio. Para comercializar um produto deve se levar em considerao: eficincia dos isolados, otimizao das formulaes, baixo custo, incuo ao ambiente, aplicao prtica e eficiente, fcil armazenamento, ser compatvel com os produtos qumicos e ser de fcil manuseio. Os produtos biolgicos desenvolvidos para o controle de doenas e promoo de crescimento de plantas, devem ser bem avaliados, no apenas com relao aos benefcios que oferecem, mas sobretudo quanto segurana, ou seja, o potencial de risco envolvido em seu emprego. Os testes envolvem anlise de toxicidade aguda e crnica, alergenicidade e patogenicidade. O uso prtico de agentes de biocontrole requer mtodos de aplicao e dosagens adequadas dos produtos formulados, a fim de garantir proteo da
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planta ao ataque dos fitopatgenos. No se pode esquecer que a resistncia devido a mutaes, transferncia de genes ou imunizao representa um desafio para uso do biocontrole no campo.

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UTILIZAO DE MICORRIZAS NO MANEJO DE DOENAS DE PLANTAS
DELSON LARANJEIRA

INTRODUO
O termo micorriza foi inicialmente proposto pelo botnico alemo Albert Bernard Frank, em 1885 (Siqueira & Franco, 1988), para descrever a ntima associao de fungos com razes de rvores (Bruehl, 1987). Atualmente micorriza definida como simbiose mutualista entre certos grupos de fungos do solo e razes de plantas (Agrios, 1997; Sieverding, 1991; Siqueira & Franco, 1988). Tradicionalmente, as micorrizas tm sido agrupadas, com base na anatomia das razes colonizadas, em trs grupos principais: ectomicorrizas, ectendomicorrizas e endomicorrizas. As endomicorrizas podem ser de trs tipos: orquidides, ericides e arbusculares (Colozzi-Filho & Balota, 1994). Entre os diferentes tipos de micorrizas, as endomicorrizas arbusculares (MA) so as de melhor distribuio e ocorrncia nos trpicos, alm da capacidade de colonizar vrias espcies de plantas de importncia econmica. Portanto, neste captulo, trataremos especificamente das MA. Os fungos micorrzicos arbusculares (FMA) tm ocorrncia generalizada, estando presentes em regies tropicais, temperadas e rticas, incluindo densas florestas, reas cultivadas, dunas e desertos (Abe & Katuya, 1995; Abe et al., 1994; Al-Agely & Reeves, 1995; Cabello et al., 1994; Jasper et al., 1989; Lopes et al., 1983), apresentam a capacidade de colonizar as razes da maioria das plantas, desde Brifitas e Pteridfitas at Gimnospermas e Angiospermas com exceo de algumas monocotiledneas como Commelinaceae e Juncaceae, bem como dicotiledneas das famlias Brassicaceae, Fumariaceae e Urticaceae (Silveira, 1992). A atuao dos fungos micorrzicos ampla e, em muitos casos, vantajosa para os hospedeiros, possibilitando inclusive a sua sobrevivncia em ambientes submetidos a estresses de ordem abitica ou bitica, entre os quais se incluem os produzidos por organismos fitopatognicos (Maia et al., 2001). Os benefcios da simbiose para o hospedeiro resultam de melhorias no estado nutricional da planta, melhor utilizao e conservao de nutrientes no sistema, reduo de perdas por estresses de natureza bitica (pragas e
Michereff, S.J. & Barros, R. (Eds.) Proteo de Plantas na Agricultura Sustentvel. 2001. Recife, UFRPE

Direitos de edio reservados aos editores ISBN 85-87459-06-6

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doenas) ou abiticas (desbalano nutricional, dficit hdrico, e modificaes fisiolgicas e bioqumicas como maior taxa fotossinttica e produo de razes (Colozzi-Filho & Balota, 1994). Estudos em condies edficas e espcies vegetais diversas, em vrias partes do mundo, mostram que plantas micorrizadas geralmente absorvem maiores quantidades de macro e micronutrientes, destacando-se o fsforo como o nutriente de maior afinidade. O fsforo o elemento que mais frequentemente limita a produo agrcolas nas regies tropicais e subtropicais, apesar das plantas exigirem quantidades relativamente pequenas. Esta observao justifica o fato das micorrizas arbusculares serem consideradas com maior potencial de utilizao na agricultura da regio tropical do que na de clima temperado (Colozzi-Filho & Balota, 1994), onde o fsforo encontrado em maior disponibilidade. Os FMA tm sido indicados como candidatos utilizao no controle de doenas de plantas, pois apresentam ampla distribuio e estabelecem relacionamentos de longa durao com as razes da maior parte das plantas (Traquair, 1995). Nesse sentido, um nmero crescente de pesquisas tem sido realizadas visando a utilizao desses organismos em plantas de interesse agrcola (Klironomos & Kendrick, 1993).

TAXONOMIA DE FUNGOS MICORRZICOS ARBUSCULARES

Os FMA pertencem classe dos Zygomycetes, ordem Glomales, com seis gneros conhecidos: Acaulospora, Entrophospora, Gigaspora, Glomus, Sclerocystis e Scutellospora, que englobam em torno de 150 espcies (Morton & Benny, 1990). A diferenciao entre os gneros dos FMA feita com base nas caractersticas externas dos esporos e sua formao (Tabela 4.1), enquanto que a classificao das diferentes espcies se baseia em caractersticas morfolgicas como: forma, cor e dimetro do esporo, ornamentao, nmero, espessura, arranjamento e elasticidade das paredes e reaes ao reagente de Melzer, dos esporos coletados no solo (Siqueira & Franco, 1988).

102

Tabela 4.1 Principais diferenas entre gneros de fungos micorrzicos arbusculares (Silveira, 1992).
Caractersticas Clamidosporos Azigosporos Esporos ectocrpicos Esporos em esporocarpos Hifa de sustentao persistente Presena de bulbo Formao atravs de vescula me Clulas auxiliares + presente; - ausente. Glomus + + + + Sclerocystis + + Acaulospor a + + + Entrophospora + + + Gigaspora Sclerospora + + + + + + + + + +

INTERAO DE FUNGOS MICORRZICOS ARBUSCULARES COM FITOPATGENOS

A reduo da severidade de doenas de plantas pode ser fortemente influenciada por fungos micorrzicos arbusculares, atravs de um ou mais mecanismos incluindo: a) aumento no fornecimento de nutrientes; b) competio por fotossintatos do hospedeiro e stios de infeco; c) modificaes morfolgicas em razes e nos tecidos radiculares; d) modificaes nos componentes qumicos dos tecidos da planta; e) reduo do estresse abitico; f) modificaes microbianas na micorrizosfera (Linderman, 1994). Em geral, ao se instalar, o fungo micorrzico capaz de produzir modificaes as quais induzem maior resistncia ao estabelecimento de doenas na raiz, determinando planta uma posio privilegiada frente ao patgeno que, desse modo, tem o seu efeito reduzido ou anulado (Maia et al., 2001).

Interao de fungos micorrzicos arbusculares com fungos fitopatognicos

Os estudos sobre a atuao dos FMA na reduo de doenas radiculares produzidas por fungos tm enfocado principalmente as podrides causadas por espcies de Pythium, Phytophthora, Fusarium, Verticillium, Pyrenochaeta, Gaeumannomyces, Sclerotium e Rhizoctonia (Linderman, 1994). Davis et al. (1979) estudaram a influncia de Glomus fasciculatum na murcha de Verticillium do algodoeiro (Gossypium spp.) e concluiram que a
103

severidade da doena foi maior em plantas micorrizadas e fertilizadas com 20 g de P, do que naquelas no micorrizadas. Davis (1980) observou que a inoculao com G. fasciculatum em mudas de laranja doce, no foi capaz de reduzir a podrido radicular causada por Thielaviopsis basicola (Berk. & Br.) Ferr. No entanto, Davis & Menge (1980) observaram que mudas de laranja doce inoculadas com G. fasciculatum apresentaram reduo na severidade da podrido de raiz induzida por Phytophthora parasitica Dastur, quando adubadas com 600 g P/g de solo. Nas pesquisas conduzidas por Caron et al. (1986), foi constatado que Glomus intraradices Schenck & Smith foi efetivo no controle de Fusarium oxysporum f. sp. radicislycopersici Jarvis & Shoemaker, responsvel pela podrido de raiz em tomateiro. As pesquisas conduzidas por Cordier et al. (1996) e Trotta et al. (1996) mostraram que plantas de tomateiro (Lycopersicon esculentum Mill.) micorrizadas com Glomus mosseae (Nicol. & Gerd.) Gerdemann & Trappe apresentaram menor incidncia da podrido de raiz causada por Phytophthora nicotianae var. parasitica Dastur. Plantas de morangueiro micorrizadas com Glomus etunicatum Becker & Gerdemann e inoculadas com Phytophthora fragariae Hickman, apresentaram reduo de at 60% da doena (Norman et al., 1996). Morangueiros selvagens (Fragaria vesca L.) micorrizados com Glomus fistulosum Skou & Jakobsen tambm apresentaram resistncia a P. fragariae (Mark & Cassells, 1996). No entanto, a utilizao de FMA como agentes protetores de razes contra os patgenos causadores de podrides radiculares e de murchas, tem apresentado resultados contraditrios (Laranjeira, 2001).

Interao de fungos micorrzicos arbusculares com nematides fitopatognicos

Nematides parasitas de plantas e FMA podem estar simultaneamente associados s razes, motivo pelo qual deve ser considerado o efeito combinado dos dois grupos de organismos sobre o desenvolvimento da planta (McGlohon, 1982). Nos estudos de interao entre estes organismos, destacam-se em importncia a densidade de inculo do nematide, a espcie do FMA simbionte, o tempo da micorrizao em relao inoculao do nematide, a resistncia natural da planta ao patgeno e a cultivar da planta testada (Maia, 2001). So conhecidas trs tipos de interaes: a) neutra quando nenhuma alterao no FMA, hospedeiro ou nematide evidente; b) positiva quando o FMA compensa os danos causados planta pelo patgeno e o desenvolvimento e reproduo dos nematides so suprimidos; c) negativa quando a esporulao do FMA, o desenvolvimento e/ou a produo da planta so suprimidos e a reproduo do nematide aumentada (Hussey & Roncadori, 1982). A maioria destas interaes envolvem nematides endoparasitas sedentrios, provavelmente devido a
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importncia mundial que estes apresentam como fitopatgenos e por serem facilmente propagados. Varios autores comprovaram que a associao micorrzica leva reduo dos danos produzidos por nematides fitopatognicos em diversas culturas de interesse econmico, entre as quais: algodo (Smith et al., 1986), caupi (Santhi & Sundarababu, 1995), citros (Smith & Kaplan, 1988), feijo (Oliveira & Zambolim, 1986), tomate (Sundarababu et al., 1995) e soja (Price et al., 1995). No entanto, em experimentos com videiras, Atilano et al. (1981) registraram aumento dos danos causados por nematides em plantas micorrizadas. Os efeitos da micorrizao sobre a reproduo de nematides fitopatognico em diversas plantas hospedeiras, encontram-se na Tabela 4.2.

Tabela 4.2 Efeitos da micorrizao sobre a reproduo de nematides fitopatognicos (Maia et al., 2001).
Nematide Reduo da Reproduo Heterodera cajani Heterodera solanacearum Meloidogyne hapla Meloidogyne incognita Hospedeiro Fungo micorrzico

Melodogyne javanica Prathylenchus brachyurus Prathylenchus vulnus Radopholus citrophylus Radopholus similis Rotylenchulus reniformis Aumento da Reproduo Heterodera glycinis Meloidogyne arenaria Meloidogyne incognita Pratylenchus coffeae Efeito Nulo Heterodera cajani Meloidogyne incognita Pratylenchus vulnus Radopholus similis Tylenchulus semipenetrans

Caupi Fumo Cenoura Algodo, aveia, banana, caupi, feijo, fumo, pssego, soja, tomate soja, tomate Abacaxi, algodo ma, pera, pssego Citros Banana Caupi

Glomus fasciculatum Gigaspora gigantea Glomus mosseae Glomus etunicatum, G. mosseae, G. fasciculatum, Glomus macrocarpum, Gigaspora margarita G. etunicatum, G. macrocarpum Glomus sp., G. margarita Glomus intraradices, G. mosseae G. intraradices G. intraradices G. fasciculatum

Soja Amendoim, uva Algodo, soja Caf

G. etunicatum G. margarita, G. etunicatum, G. fasciculatum G. margarita, G. macrocarpum, Scutellospora calospora, S. heterogama Acaulospora mellea, Glomus clarum

Caupi Algodo, caupi, pssego, soja, tomate cereja, marmelo Citros Citros

Glomus epigaeus G. margarita, G. etunicatum, G. epigaeus, G. mosseae G. intraradices G. etunicatum G. fasciculatum, G. mosseae

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Interao de fungos micorrzicos arbusculares com bactrias fitopatognicos

O efeito de FMA em relao s bactrias fitopatognicas no tem sido explorado em grande extenso, quando comparado a outros patgenos que ocorrem no sistema radicular (Linderman, 1994). Entretanto, alguns trabalhos relatam a influncia benfica dessa simbiose na cultura do tomateiro (Silveira & Maia, 1996). Avaliando o efeito de espcies nativas de fungos micorrzicos em relao a Ralstonia solanacearum em plantas de tomateiro, Halos & Zorilla (1979) observaram que plantas micorrizadas apresentaram menor incidncia da murcha bacteriana. Por outro lado, Garcia-Garrido et al. (1992) verificaram que plantas de tomateiro micorrizadas e inoculadas com Pseudomonas syringae pv. syringae, apresentaram maior crescimento do que plantas no micorrizadas. Avaliando os efeitos da interao entre FMA e bactrias no patognicas da rizosfera, principalmente bactrias fixadoras de nitrognio, solubilizadoras de fosfato e promotoras de crescimento de plantas, diversos autores constataram a existncia de interao aditiva ou sinrgica entre esses organismos, possibilitando um incremento da microbiota da rizosfera (Alten et al., 1991; Bagyaraj & Menge, 1978; Dar et al., 1997; Yuri et al., 1994). Esses resultados revestem-se de grande importncia, visto que os organismos da rizosfera exercem efeito significativo sobre a sanidade da planta (Maia et al., 2001).

FATORES QUE AFETAM O DESENVOLVIMENTO DOS FUNGOS MICORRZICOS ARBUSCULARES

As micorrizas so influenciadas por fatores inerentes planta, ao fungo e ao ambiente (solo e clima), que atuam sobre os propgulos ou sobre as diferentes fases da simbiose, exercendo grande influncia sobre a formao, o funcionamento e as relaes ecolgicas dessas associaes (Siqueira & Franco, 1988).

Interao com outros organismos

Interaes entre fungos micorrzicos e outros organismos do solo ocorrem na raiz, na rizosfera e no prprio solo, produzindo efeitos inibidores ou estimuladores; alguns so claramente competitivos, outros podem ser mutualsticos (Fitter & Garbaye, 1994). Determinados componentes da microbiota do solo tais como fungos, bactrias e actinomicetos, podem atuar como parasitas, antagonistas e comensalistas, em relao aos fungos

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micorrzicos (Siqueira & Franco, 1988). A participao destes componentes pode influenciar o funcionamento da simbiose atuando na translocao de nutrientes pelo miclio externo, ou atravs da competio por nutrientes, inclusive os fosfatos (Hayman, 1982). Diversos micoparasitas como Trichoderma harzianum, T. pseudokoningii Rifai, Wardomyces inflatus (Marchal) Hennebert, Paecilomyces farinosus (Dick. & Fr.) Brown & Sm., Gliocladium roseum (Link.) Bainier, Anguillospora pseudolongissima Ranzoni, Humicola fuscoatra Traaen e Phlyctochytrium knieppii Gaerthner so encontrados parasitando esporos, tubo germinativo e miclio, inviabilizando propgulos de FMA no solo (Fracchia et al., 1998; Rousseau et al., 1996; Siqueira & Franco, 1988; Wyss et al., 1992).

Fatores qumicos
Estudos em condies edficas e espcies vegetais diversas, em vrias partes do mundo, mostram que plantas micorrizadas geralmente absorvem maiores quantidades de macro e micronutrientes, como tambm de outros elementos como bromo, iodo, cloro, sdio, alumnio, silcio e metais pesados (Siqueira & Franco, 1988).
Macronutrientes

Alguns micronutrientes tais como mangans e zinco inibiram a germinao de esporos dos FMA (Hepper, 1979). Em Plantas de trevo (Trifolium repens L.), cebola (Allium cepa L.), milho (Zea mays L.), soja e gro-de-bico (Cicer arietinum L.), a colonizao micorrzica foi inibida por zinco e cobre (Gildon & Tinker, 1983). A presena de outros metais, quando em excesso, pode afetar negativamente o crescimento de plantas e de fungos micorrzicos (Nogueira, 1996). O aumento da biodisponibilidade do alumnio afeta a germinao de esporos, o crescimento do tubo germinativo e o crescimento micelial de FMA (Siqueira et al., 1984). Os estudos relativos ao efeito txico de alumnio e mangans sobre os FMA tm sido restritos ao impacto do excesso de metais sobre as estruturas desses organismos (esporos, miclio, arbsculos) e colonizao e funcionalidade na simbiose (Siqueira, 1996).

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Micronutrientes

A disponibilidade de nutrientes no solo, principalmente a de fsforo, exerce efeitos sobre a micorrizao. De acordo com Siqueira & Franco (1988), a elevao do fsforo disponvel no solo alm de reduzir a colonizao das razes, pode diminuir a esporulao e a diversidade dos fungos micorrzicos. Mecanismos como explorao de maior volume de solo, movimento rpido de fsforo dentro da hifa micorrzica e solubilizao de fsforo do solo, tm sido sugeridos para explicar o aumento na absoro deste nutriente pelas plantas micorrizadas (Bolan, 1991). Por outro lado, elevadas concentraes de fsforo so capazes de causar efeitos prejudiciais aos FMA podendo: reduzir ou impedir a colonizao; diminuir o crescimento do tubo germinativo; suprimir a ligao da hifa com a raiz e a formao de apressrios; reduzir o nmero de clamidosporos; influenciar a taxa de disseminao do fungo e o crescimento do miclio extra radicular (Smith & Read, 1997; Suriyapperuma & Koske, 1995). A expressividade destes efeitos Influenciada pela espcie vegetal e pelos fatores ambientais (Smith & Read, 1997).
pH do solo

O potencial hidrogeninico (pH) exerce influncia qualitativa e quantitativa sobre os FMA, interferindo no ndice de ocorrncia das espcies, na proporo de diferentes fungos micorrzicos nas razes e na germinao dos esporos (Siqueira & Franco, 1988). O pH timo para germinao de esporos varia de acordo com a espcie de FMA envolvida e o ambiente onde esta se encontra (Powell & Bagyaraj, 1984). Espcies de Glomus, com poucas excees, preferem solos com pH prximo do neutro a alcalino, enquanto que a maioria das espcies de Acaulospora, Gigaspora e Entrophospora, tm preferncia por pH na faixa cida (Siqueira & Franco, 1988).
Matria orgnica

A quantidade de matria orgnica influencia a estrutura do solo, pH, composio de nutrientes e a capacidade do solo armazenar gua, o que pode influenciar direta ou indiretamente o desenvolvimento e a eficincia dos FMA (Bagyaraj, 1991). Para Sheikh et al. (1975), no Paquisto as populaes de esporos de FMA parecem estar relacionadas ao nvel de matria orgnica contida no solo. No entanto, nenhuma correlao foi observada em solos temperados contendo nveis elevados (213%) de matria orgnica (Bagyaraj, 1991). Rives et al. (1980) sugeriram que em
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reas onde a precipitao anual baixa, o contato entre restos de razes colonizadas e razes de plantas no infectadas pode se constituir numa forma eficiente de disseminao de micorrizas. Por outro lado, Sinz et al. (1998) constataram que a colonizao micorrzica em razes de pepino (Cucumis sativus L.) e trevo (Trifolium repens L.) foi reduzida quando se fez a adio de resduos de composto urbano no solo.
Biocidas

Os efeitos dos agroqumicos sobre FMA so pouco conhecidos, e a aplicao destes produtos pode gerar resultados inesperados ou no reconhecidos (Kurle & Pfleger, 1994). Nas pesquisas sobre a atuao desses compostos sobre os FMA tm sido avaliados: fumigantes do solo, fungicidas, herbicidas, inseticidas e nematicidas. A fumigao do solo com biocidas tais como brometo de metila, cloropicrina, formaldedo, Vapam e Vorlex efetivamente matam os endfitos na zona de tratamento (Trappe et al., 1984), causando atrofia em vrias culturas (Kurle & Pfleger, 1994). Esta reduo no desenvolvimento das plantas causada pela baixa incidncia de FMA, o que resulta num pobre fornecimento de nutrientes (Hetrick et al., 1988). A fumigao do solo com brometo de metila, foi capaz de reduzir a colonizao dos FMA nativos (Bendavid-Val et al., 1997). Para An et al. (1993), a fumigao destruiu a maioria dos propgulos de FMA que se encontravam a uma profundidade de at 15cm no solo, porm aps o cultivo da rea com soja, a populao da maioria das espcies de Glomus recuperou as densidades anteriores fumigao, enquanto que as populaes de G. margarita e G. gigantea no apresentaram esta capacidade. Menge et al. (1978) verificaram que G. fasciculatum e Glomus constrictum Trappe apresentaram maior sensibilidade ao brometo de metila do que a maioria dos patgenos do solo. Os fungicidas incluem uma enorme variedade de compostos que diferem em seus efeitos sobre a fisiologia dos hospedeiro, modo de ao, mtodo de aplicao e formulao (Kurle & Pfleger, 1994). Geralmente so menos danosos aos fungos micorrzicos do que outros biocidas, podendo ser txicos, produzir pouco ou nenhum dano e at aumentar a colonizao micorrzica (Menge, 1982). Quanto aos fungicidas sistmicos, so de particular interesse devido persistncia sobre os organismos que competem com os FMA por stios de infeco, ou pelos efeitos diretos sobre os fungos micorrzicos. Dicarboximida (captan) um fungicida utilizado na pulverizao foliar e no tratamento de sementes e do solo, sendo capaz de produzir vrios efeitos sobre os FMA dependendo da espcie envolvida e da planta hospedeira (Kurle & Pfleger, 1994). Quando utilizados no tratamento de sementes de

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feijo, os fungicidas benomyl e captan no reduziram a colonizao de Glomus macrocarpum (Gonalves et al., 1991). Plantas de cedro tratadas com benomyl apresentaram reduo na colonizao micorrzica (CadeMenun & Berch, 1997). Os fungicidas etilenobisditiocarbamatos zineb, mancozeb e maneb, e o ditiocarbamato thiram em geral reduzem a esporulao e a colonizao micorrzica (Kurle & Pfleger, 1994). Os herbicidas so utilizados para impedir o crescimento de plantas superiores. No entanto, possvel que estes possam afetar diretamente a eficincia e a densidade dos FMA atravs da interferncia nos processos fisiolgicos da micorriza, ou indiretamente por modificaes na populao ou na fisiologia da planta hospedeira (Kurle & Pfleger, 1994). Estudos realizados por Sieverding & Liehner (1984), em casa de vegetao e no campo, indicaram a existncia de efeitos diretos e indiretos de herbicidas sobre a populao de FMA que estavam colonizando plantas de mandioca. Os inseticidas carbaril e diazinon no apresentaram efeitos adversos sobre a colonizao de razes do amendoimzeiro por Glomus mosseae (Parvathi et al., 1985), enquanto que carbofuran e aldicarb aumentaram a ocorrncia de FMA em diversas culturas (Sieverding, 1991; Sreenivasa & Bagyaraj, 1989).

Fatores fsicos
Temperatura do solo

A temperatura exerce influncia significativa sobre a colonizao e a esporulao dos FMA no campo (Bagyaraj, 1991) e sob condies de casade-vegetao (Bagyaraj, 1991; Haugen & Smith, 1992). Em algumas regies tropicais, a temperatura pode atingir de 40-450C durante o dia, o que poderia causar reduo no desenvolvimento dos FMA. No entanto, a profundidades superiores a 5cm no solo, estas altas temperaturas no so usualmente encontradas e, portanto, no afetam as micorrizas ali existentes (Sieverding, 1991). Temperaturas entre 25-350C foram relatadas como sendo timas para o crescimento de razes e para a colonizao micorrzica (Schenck & Schroeder, 1974). Por outro lado, temperaturas abaixo de 17-180C, comuns nas montanhas tropicais, so capazes de reduzir a eficincia dos fungos micorrzicos (Sieverding, 1991).

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Luz

O desenvolvimento dos FMA pode ser fortemente afetado pela luz (Bagyaraj, 1991). Para Redhead (1975), os efeitos da luz sobre os FMA dependem da fotossensibilidade das espcies de plantas hospedeiras. Furlan & Fortin (1977) demonstraram que a luz exerce efeito estimulatrio no desenvolvimento dos FMA. A intensidade luminosa (Furlan & Fortin, 1977) e os dias longos (Johnson et al., 1982) so capazes de aumentar a porcentagem da colonizao micorrzica. Por outro lado, o sombreamento capaz de reduzir a colonizao da raiz, a produo de esporos e a resposta da planta aos FMA (Gerdemann, 1968).
Umidade do solo e estresse hdrico

Solos com elevado teor de umidade ou sujeitos inundao, portanto com aerao deficiente, so geralmente desprovidos de micorrizas, porque os fungos micorrzicos so aerbios obrigatrios (Siqueira & Franco, 1988). A umidade do solo considerada tima para o desenvolvimento e eficincia dos FMA encontra-se entre 40 e 80% (Sieverding, 1991). A alternncia entre ciclos de umedecimento e secagem parece estimular a esporulao dos FMA, enquanto que os nveis elevados de umidade no solo favorecem o desenvolvimento de hiperparasitas dos seus esporos reduzindo sua viabilidade como propgulo (Siqueira & Franco, 1988).

AVALIAO DE PROPGULOS E RECUPERAO DE ESPOROS DO SOLO

Os propgulos de FMA podem consistir de hifas e esporos (clamidosporos e azigosporos), alm de vesculas ou razes infectadas (Colozzi-Filho & Balota, 1994). Os esporos so considerados estruturas estratgicas de sobrevivncia para suportar perodos de adversidades (Gerdemann, 1968; Hetrick, 1985) Vrios mtodos so usados para a avaliao e recuperao de propgulos de FMA. Esses mtodos incluem: decantao e peneiramento mido (Gerdemann & Nicolson, 1963); centrifugao e flutuao em sacarose (Jenkins, 1964); centrifugao e flutuao em gradiente de sacarose (Ohms, 1957); flutuao e adeso (Sutton & Barron, 1972); centrifugao diferencial gua/sacarose (Allen et al., 1979); sedimentao diferencial em coluna de gelatina (Mosse & Jones, 1968) e separao seca de microrganismos (Tommerup & Carter, 1982). Aps a recuperao dos esporos do solo, a

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quantificao pode ser feita em microscpio estereoscpico. Todos esses mtodos, porm, variam quanto sensibilidade de avaliao e recuperao dos esporos em cada condio especfica (Colozzi-Filho & Balota, 1994). Apesar da importncia de cada um dos mtodos citados anteriormente, descreveremos a seguir aqueles que so, rotineiramente, utilizados.

Mtodo da decantao e peneiramento mido

(Gerdemann & Nicolson, 1963) A amostra de solo (50 mL a 250 mL) suspendida em 1 L ou 2 L de gua, em um bquer e agitada vigorosamente, seguida de decantao, por alguns segundos, para que ocorra sedimentao das partculas maiores e/ou mais densas que os esporos. O sobrenadante passado atravs de um conjunto de peneiras de aberturas 710 m a 45 m, sobrepostas em um bquer, na sequncia da menor abertura de malha para a maior. Nas peneira ficam retidos os esporos e algum solo e material orgnico. Os Sedimentos recolhidos no fundo do bquer podem ser ressuspendidos diversas vezes, para aumentar a chance de maior nmero de esporos. Esse mtodo relativamente fcil e rpido, mas a purificao adicional do material retido nas peneiras necessria, se o nmero de esporos no solo for baixo. A associao de mtodos importante quando se trabalha com solos que possuem grande quantidade de matria orgnica e alto teor de argila, que condicionam a obteno de peneirados com grande quantidade de fragmentos orgnicos e partculas de solo, dificultando a contagem dos esporos. Normalmente, o mtodo da decantao e peneiramento mido associado com o mtodo da centrifugao em sacarose (Jenkins, 1964). O material retido nas peneiras recolhido em bquer e, posteriormente, feita a contagem dos esporos em placa com anis concntricos.

Mtodo da centrifugao e flutuao em sacarose

(Jenkins, 1964) Esta metodologia utilizada como complemento ao peneiramento mido (Gerdemann & Nicolson, 1963), eliminando restos de solo e material orgnico da amostra. O material retido nas peneiras transferido para tubos de centrfuga com capacidade para 50 mL, adicionando-se gua. Os tubos so balanceados e centrifugados por 4 a 5 min a 1750 rpm ( 1000 g ). Depois da centrifugao o sobrenadante cuidadosamente descartado, adicionando-se soluo de sacarose a 50%. Para o preparo da soluo de sacarose pode-se utilizar acar comum. O material (solo+esporos) sedimentado ressuspendido com o auxlio de uma esptula e centrifugado

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novamente por 1 min. O sobrenadante, contendo os esporos, vertido em peneiras, lavado abundantemente com gua corrente e recolhido em bquer para avaliao. A associao destes dois mtodos (peneiramento mido e centrifugao em sacarose) tem sido muito utilizada, pela sua simplicidade e pelos resultados que apresenta.

AVALIAO DA COLONIZAO MICORRZICA

A avaliao da colonizao micorrzica baseada na observao da presena de estruturas fngicas dentro das razes. Para isso necessria a preparao das razes, o que consiste basicamente no clareamento e colorao (Colozzi-Filho & Balota, 1994).

Clareamento e colonizao de razes

O mtodo, seguramente, mais utilizado pelos pesquisadores de todo mundo, para a preparao das razes para avaliao da colonizao micorrzica, aquele descrito por Phillips & Hayman (1970), no qual, basicamente, faz-se o clareamento das razes pelo aquecimento em soluo de KOH a 10%, a acidificao com HCl diludo e a colorao com azul de tripano a 0,05%. O clareamento das razes com KOH tem como objetivo remover o citoplasma e o ncleo das clulas hospedeiras, deixando-as claras e transparentes, com o cilindro central visvel. Recentemente, tem sido muito utilizado o corante em glicerol ou lactoglicerol (Kormanik et al., 1980), em sustituio ao lactofenol, que extremamente perigoso porque libera gs txico. O corante (0,05 g de azul tripano) colocado em 100 mL de uma mistura de cido ltico, glicerina e gua (1:1:1). O corante em lactofenol, glicerol ou lactoglicerol pode ser reutilizado.

Determinao da colonizao micorrzica

A determinao da colonizao micorrzica feita basicamente pela observao da presena de estruturas fngicas dentro das razes na regio do crtex, onde ocorre o desenvolvimento inter e intracelular de hifas, podendo estender-se pela rizosfera; de arbsculos, originrios de ramificaes dicotmicas de hifas internamente s clulas; e de vesculas, glbulos mais ou menos esfricos que ocorrem intra e extracelularmente.

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As vesculas so estruturas morfolgicas facilmente distinguidas. Os arbsculos so estruturas delicadas que apresentam ramificaes dicotmicas visveis apenas em aumento maiores. Estes arbsculos possuem vida curta, sendo prontamente disponveis absoro. Para observao da colonizao micorrzica podem ser preparadas lminas temporrias com lactofenol ou lactoglicerol, ou permanentes com PVA (resina de lcool polivinil) em lactofenol ou lactoglicerol. Na avaliao da colonizao micorrzica, podem ser usados procedimentos no sistemticos como o mtodo visual, onde a avaliao feita com base em escala de notas recomendada pelo Institute for the Mycorrhizal Research and Development, USDA Forest Service, Athens, Georgia, onde: 1= 0 a 5%; 2 = 6 a 25%; 3 = 26 a 50%; 4 = 51 a 75% e 5 = 76 a 100%, ou procedimentos sistemticos, como os mtodos da lmina ou da placa quadriculada. Apesar do mtodo da placa quadriculada ser o mais exato dos disponveis atualmente, a avaliao em lmina um mtodo muito utilizado.

Mtodo da lmina
Neste mtodo, seguimentos de razes de aproximadamente 1 cm de uma amostra corada so selecionados ao acaso e montados paralelamente em uma lmina de microscpio em grupos de 10. So sugeridos de 30 a 100 segmentos de razes para avaliao por este mtodo. A extenso da colonizao radicular avaliada (aumento: 100 a 250) medindo o comprimento em mm para cada segmento e expressado como porcentagem do comprimento de razes colonizadas. O mtodo pode ser simplificado avaliando-se apenas a presena e ausncia de colonizao em cada segmento, e o resultado expresso em porcentagem de razes colonizadas.

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MTODOS ALTERNATIVOS PARA O CONTROLE DE DOENAS DE PLANTAS
WAGNER BETTIOL

INTRODUO
O A sociedade exige, cada vez mais, a produo de alimentos sem resduos de pesticidas e com menor contaminao do ambiente. Essas exigncias so devidas ao maior conhecimento pelo homem das conseqncias advindas do uso dos pesticidas, causando, em muitos casos, graves impactos ambientais e intoxicaes. A preocupao da sociedade com a contaminao do ambiente por pesticidas se expressa atravs de segmentos do mercado vidos por produtos agrcolas diferenciados, tanto aqueles produzidos sem uso de pesticidas, como por aqueles portadores de selos de que os pesticidas foram utilizados adequadamente. Dessa forma, vem se buscando alternativas aos pesticidas, entre eles os fungicidas, que so usados para o controle de doenas de plantas. Dentre as alternativas, o controle biolgico o que vem sentindo os maiores avanos e, possivelmente, o mais estudado. Entretanto, diversas outras alternativas vem sendo estudadas e utilizadas. Nesse trabalho sero apresentados e discutidos o controle biolgico; o uso de leite de vaca cru e do resduo da fermentao glutmica do melao no controle de odio da abobrinha; a solarizao do solo; a biofumigao; o uso de coletor solar para desinfestao de substratos; o uso de extratos aquosos de matria orgnica e biofertilizantes; o uso de extratos de plantas e de fungos e sais no controle de odios, e o uso de conservadores alimentares para o controle de doenas em ps-colheita. Apesar da apresentao dessas alternativas para o controle de doenas de plantas, um dos aspectos importantes para evitar problemas com doenas aumentar a biodiversidade da propriedade. Alm disso, h necessidade de se produzir tomando todos os cuidados para que a planta no fique doente. Portanto, devemos trabalhar com a sade da planta. E, a sade da planta conseguida com tcnicas que evitem qualquer tipo de estresse.

Michereff, S.J. & Barros, R. (Eds.) Proteo de Plantas na Agricultura Sustentvel. 2001. Recife, UFRPE

Direitos de edio reservados aos editores ISBN 85-87459-06-6

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CONTROLE BIOLGICO
O controle biolgico definido por Cook & Baker (1983) como a reduo da soma de inculo ou das atividades determinantes da doena, provocada por um patgeno, realizada por ou atravs de um ou mais organismos que no o homem. Nas atividades determinantes de doenas esto envolvidos o crescimento, a infectividade, a virulncia e outras qualidades do patgeno, ou processos que determinam a infeco, o desenvolvimento de sintomas e a reproduo. Nos organismos so includos os indivduos ou as populaes avirulentas ou hipovirulentas, dentro das espcies patognicas; a planta hospedeira manipulada geneticamente ou por prticas culturais, ou microrganismos, para maior ou mais efetiva resistncia contra o patgeno; e os antagonistas dos patgenos, definidos como os microrganismos que interferem na sobrevivncia ou nas atividades determinantes de doenas causadas por fitopatgenos. Assim, segundo esses autores, o controle biolgico pode ser acompanhado por: prticas culturais para criar um ambiente favorvel aos antagonistas e resistncia da planta hospedeira ou ambas; melhoramento da planta para aumentar a resistncia ao patgeno ou adequar o hospedeiro para as atividades dos antagonistas; introduo em massa de antagonistas e linhagens no patognicas ou outros organismos ou agentes benficos. A definio de Cook & Baker (1983) a mais aceita pela comunidade cientfica. Entretanto, a introduo massal de antagonistas a forma mais praticada e estudada de controle biolgico. Assim, muitos definem controle biolgico como o controle de um microrganismo por meio de outro microrganismo. Comercialmente essa a definio utilizada, estando disponveis no mercado, os seguintes produtos comerciais e seus respectivos agentes: AQ10 (Ampelomyces quisqualis), Aspire (Candida oleophila), Binab T (Trichoderma harzianum e T. polysporum), Biofox C (Fusarium oxysporum-no patognico), Bio-Fungus (Trichoderma), Bio-Save 100, Bio-Save 110 e Bio-Save 1000 (Pseudomonas syringae), BlightBan A506 (Pseudomonas fluorescens), Blue Circle (Burkholderia cepacea), Conquer (Pseudomonas fluorescens), Contans (Coniothyrium minitans), Deny (Burkholderia cepacea), Epic (Bacillus subtilis), Fusaclean (Fusarium oxysporum), Galltrol-A (Agrobacterium radiobacter), Intercept (Pseudomonas cepacia), Kodiak, Kodiak HB e Kodiak AT (Bacillus subtilis), Koni (Coniothyrium minitans), Mycostop (Streptomyces griseovirides), Nogall, Diegall (Agrobacterium radiobacter), Norbac 84C (Agrobacterium radiobacter), Phagus (bacteriofagos), Polygandron (Pythium oligandrum), Promote (Trichoderma harzianum e T. viride), PSSOL (Pseudomonas solanacearum-no patognica), Rhizo-Plus e RhizoPlus Konz. (Bacillus subtilis), RootShield T-22G (Trichoderma harzianum),

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Rotstop, P.g. (Phlebia gigantea), Serenade (Bacillus subtilus), SoilGard (Gliocladium virens), Supresivit (Trichoderma harzianum), System 3 (Bacillus subtilis GB03), T-22G, T-22 Planter Box (Trichoderma harzianum), Trichodex (Trichoderma harzianum), Trichopel, Trichoject, Trichodowels e Trichoseal (Trichoderma harzianum), Trichoderma 2000 (Trichoderma sp. e Victus (Pseudomonas fluorescens) (Fravel, 1998). No Brasil, nenhum desses produtos est disponvel no mercado. Entretanto, muitos desses e outros agentes so utilizados em escala comercial, sendo normalmente multiplicados pelos prprios usurios. Com uso em larga escala no Brasil, podem ser citados diversos exemplos discutidos por Bettiol (1996):

Controle da tristeza dos citros por premunizao com estirpes fracas do vrus da tristeza. Mudas de laranja Pra previamente inoculadas com estirpes fracas do vrus (premunizadas) se desenvolvem normalmente, sem apresentar sintomas da doena e com produo normal. O custo das mudas premunizadas o mesmo das no premunizadas. Perto de 100 milhes de plantas de laranja Pera premunizadas esto sendo cultivadas no estado de So Paulo; Controle do mosaico da abobrinha por premunizao com estirpe fraca do vrus. So distribudas folhas de abobrinha infectadas com o vrus fraco e aps macerao so inoculadas mudas de abobrinha antes de serem transplantadas no campo. Para premunizar cerca de 500 mudas bastam, em mdia, quatro folhas novas. Rezende & Mller (1995) afirmam que a maioria das plantas de abobrinha tipo moita, premunizada no estdio de folha cotiledonar e expostas no campo, no apresenta sintomas severos da doena durante um perodo de 60 a 70 dias aps a inoculao de premunizao, contra 25 a 30 dias das no premunizadas; a produo das plantas premunizadas foi bem superior s no premunizadas; Controle da lixa do coqueiro com Acremonium. Uma aplicao do antagonista no perodo do florescimento efetiva para controlar a doena, sendo que em muitos casos no h necessidade de reaplicao do Acremonium, pois ele se instala na rea. O custo de uma aplicao do antagonista aproximadamente cinco vezes menor que a de fungicidas; Controle do mofo cinzento do morango com Gliocladium roseum. Esse antagonista recomendado para ser pulverizado uma vez por semana em morango, sob cultivo protegido, durante o perodo do florescimento, sendo o controle to efetivo quanto os fungicidas; Trichoderma para o controle da podrido do colo da macieira. O Trichoderma utilizado para colonizao do substrato das covas de replantio da macieira, que foi previamente desinfestado com formaldeido;

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Trichoderma para controle de tombamento em fumo. O antagonista incorporado nos substratos para a produo de mudas de fumo, com controle efetivo dos agentes causais do tombamento. Trichoderma para o controle de tombamento de plntulas em geral. Vem sendo comercializado um produto base de Trichoderma multiplicado em gros de arroz para a incorporao em substratos e solos utilizados na produo de mudas.

Os diferentes bioagentes de controle agem basicamente por meio dos seguintes mecanismos: antibiose, competio, parasitismo, predao e induo da defesa do hospedeiro. Apesar da diviso, um antagonista pode agir por um ou mais mecanismos de interaes antagonsticas. Inclusive quando age por mais do que um mecanismo, as chances de sucesso so aumentadas. Antibiose uma interao entre organismos na qual um ou mais metablitos (antibiticos) produzidos por um organismo tm efeito prejudicial sobre o outro. Competio a luta entre duas ou mais populaes de nichos semelhantes por um fator limitante, como alimento e espao; onde as duas populaes so prejudicadas, embora freqentemente a mais apta acabe predominando. Parasitismo usado em referncia ao fenmeno de um microrganismo parasitar o outro, isto viver s custas de outro organismo; uma interao morfolgica e fisiolgica ntima entre duas populaes, onde o parasita beneficiado e o hospedeiro prejudicado. Predao o ato de um organismo caar outro organismo, onde o predador beneficiado e a presa prejudicada. Enquanto para esses mecanismos as aes esto direcionadas para o patgeno, na induo de defesa do hospedeiro, a ao dos organismos ou seus metablitos direcionada ao hospedeiro. Nesse caso ocorrem alteraes bioqumicas de resposta de resistncia da planta.

CONTROLE DE ODIO DA ABOBRINHA COM LEITE

A eficincia do leite de vaca no controle do odio da abobrinha foi demonstrada por Bettiol et al. (1999). Nos ensaios com leite cru, pulverizado duas vezes por semana, nas concentraes de 5, 10, 20, 30, 40 e 50%, o controle da doena foi de 62, 82, 90, 91, 94 e 93, respectivamente, enquanto o fungicida apresentou controle de 85%, 29 dias do incio das pulverizaes (Tabela 5.1). Os ensaios foram repetidos trs vezes com resultados semelhantes aos anteriores. Quando da realizao da anlise de regresso no linear, dos resultados obtidos nas avaliaes aos 22 dias aps o incio das pulverizaes, foi verificado, para os trs ensaios, que as tendncias foram semelhantes; sendo a severidade da doena negativamente correlacionada com a concentrao de leite pulverizada (Figura 6.1). Esses mesmos autores
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verificaram que o leite, pulverizado uma vez por semana, apresentou as mesmas tendncias de controle que a aplicao duas vezes por semana, sendo que a aplicao de leite em concentraes superiores a 20% apresentou o mesmo controle que o fungicida. Aos 38 dias, aps o incio das pulverizaes, as porcentagens de controle da doena nos tratamentos com leite a 5; 10; 20; 30; 40 e 50%, e fungicida foram de 38; 66; 81; 82; 83; 84 e 80%, em relao a testemunha, respectivamente. A anlise de regresso no linear, realizada com os resultados obtidos aps 24 dias do incio das pulverizaes, conforme descrito anteriormente, mostrou que a severidade da doena foi negativamente correlacionada com a concentrao de leite pulverizada (Figura 6.1). Tabela 5.1 Efeito do leite de vaca cru, pulverizado duas vezes por semana, sobre a porcentagem de rea foliar lesionada por folha lesionada de abobrinha por Sphaerotheca fuliginea [adaptado de Bettiol et al. (1999)].
Tratamento 1 Ensaio Dias aps o incio das pulverizaes 22 dias 29 dias 50,7 a 21,7 b (57) 11,5 cd (77) 7,5 d (85) 6,6 d (87) 4,6 d (91) 4,2 d (92) 15,7 bc (69) 2 Ensaio Dias aps o incio das pulverizaes 15 dias 22 dias 53,3 a 10,5 b (80) 7,1 bc (87) 2,8 cd (95) 1,8 cd (97) 0,8 d (98) 0,5 d (99) 7,5 bc (86) 3 Ensaio Dias aps o incio das pulverizaes 15 dias 22 dias 40,0 a 6,3 b (84) 3,0 c (93) 1,3 c (97) 1,2 c (97) 0,5 c (99) 0,6 c (98) 15,1 b (62) 64,2 a 7,1 bc (79) 1,9 c (97) 1,3 c (98) 1,3 c (98) 0,8 c (99) 1,0 c (98) 15,6 b (75)

Testemunha Leite 5% Leite 10% Leite 20% Leite 30% Leite 40% Leite 50% Fungicida

56,9 a 32,5 a 17,5 b (62) 11,0 b (66) 10,0 c (82) 8,0 bc (75) 5,4 c (90) 2,8 c (91) 5,1 c (91) 1,2 c (96) 3,5 c (94) 0,9 c (97) 3,8 c (93) 0,5 c (98) 8,8 c (85) 1,0 c (91)

Cada valor representa a mdia de 5 repeties. Mdias seguidas de mesma letra na linha no diferem entre si (Tukey 5%). Os nmeros entre parnteses referem-se porcentagem de controle dos tratamentos em relao testemunha. No primeiro e no terceiro ensaios o fungicida utilizado foi o fenarimol (0,1 ml/l), enquanto que no segundo ensaio foi o benomyl (0,1 g/l). O tratamento fungicida foi pulverizado uma vez por semana.

Nos cinco ensaios realizados, tanto com uma como, com duas pulverizaes por semana, todos os tratamentos com leite diferiram da testemunha. Entretanto, foi em concentraes acima de 10% que o leite controlou a doena semelhantemente aos fungicidas (Tabelas 5.1, Figura 5.1). Nas condies de cultivo os produtores de pepino, abobrinha e pimento esto utilizando o leite a 5 e 10% para o controle do odio dessas culturas, com resultados superiores aos fungicidas padres.

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rea infectada da folha por folha infectada (%)

70
exp. 1 exp. 2
exp. 3 exp. 4
exp. 5

60 50 40 30 20 10 0 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
Concentrao de leite (%)

Figura 5.1 Relao entre a severidade de odio (Sphaerotheca fuliginea) em folhas de abobrinha com a concentrao de leite pulverizado duas vezes na semana aps 22 dias da primeira pulverizao (R2=0.94; 0.96 e 0.94, para o primeiro, segundo e terceiro experimento, respectivamente), e uma vez na semana aps 24 dias da primeira pulverizao (R2=0.89 e 0.96, para o quarto e quinto experimentos, respectivamente) (Bettiol et al., 1999).

RESDUO DA FERMENTAO GLUTMICA DO MELAO

O resduo da fermentao glutmica do melao (RFGM) contm em sua composio nitrognio (5%), fsforo (0,18% de P2O5), potssio (1,57% de K2O), enxofre (4,0%), clcio e sdio (0,3%), magnsio (0,5%), ferro, mangans, molibidnio, zinco e aminocidos (prolina, asparagina, treonina, serina, cido glutmico, glicina, alanina, valina, metionina, isoleucina, leucina, triptofano, fenilalanina, lisina, histidina e arginina), sendo comercializado pela Ajinomoto Interamericana Industria e Comrcio Ltda., como fertilizante foliar ou rao animal. Como o produto possui diversos sais, reconhecidamente efetivos no controle do odio, Bettiol & Astiarraga (1998) testaram esse resduo, fermentado ou no com Bacillus subtilis, para

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o controle do odio (S. fuliginea) da abobrinha. O produto foi eficiente no controle da doena quando pulverizado a 1,5 e a 2,5%, fermentado ou no com B. subtilis (Tabela 5.2). Os autores tambm demonstraram que os sais presentes no resduo so mais eficientes do que os aminocidos, quando pulverizados individualmente. Os tratamentos com resduo fermentado por B. subtilis, apesar de serem mais eficientes, no diferiram do produto sem a fermentao. Nos tratamentos onde o RFGM foi fermentado por B. subtilis, a concentrao final do produto foi semelhante aos tratamentos sem fermentao. Para tanto, o meio de cultura a ser fermentado pelo Bacillus, continha 5% do RFGM. Uma das vantagens desse produto, apontada por Bettiol & Astiarraga (1998), o seu baixo custo. Tabela 5.2 Efeito do resduo da fermentao glutmica do melao (RFGM) sobre a porcentagem de rea foliar lesionada por folha lesionada de abobrinha por Sphaerotheca fuliginea [adaptado de Bettiol & Astiarraga (1998)].
Tratamento Testemunha (gua) Fungicida (fenarimol-0,1 ml/l)) Suspenso de sais 2,5%* Suspenso de aminocidos 2,5%** RFGM 1,5% RFGM 2,5% RFGM Esterilizado 1,5% RFGM Esterilizado. 2,5% RFGM fermentado por Bacillus subtilis 30% RFGM fermentado por B. subtilis 50% Porcentagem de rea foliar lesionada/folha lesionada 1 Experimento 2 Experimento 3 Experimento 51,0 a 0,3 b (99) 4,4 b (91) 1,0 b (98) 5,6 b (89) 2,7 b (95) 1,0 b (98) 0,5 b (99) 59,2 a 16,5 c (72) 50,4 b (15) 8,9 c (85) 67,9 a 13,3 c (81) 40,8 b (40) 13,8 c (80 -

Os valores so dados das avaliaes realizadas aos 27, 31 e 29 dias aps o incio das pulverizaes, para o 1, 2 e 3 experimentos, respectivamente. Mdias seguidas de mesma letra no diferem entre si (Tukey 5%). Os nmeros entre parnteses referem-se a porcentagem de controle obtida em relao testemunha. *Sais 2,5% uma suspenso de: (NH4 NO3 -37,1g/l; (NH4 )2 SO4 - 139,6 g/l; K2HPO4 - 10,1 g/l; KNO3 - 26 g/l; Ca(NO3)2 . 4H2O - 17,7 g/l; MgSO4 .7H2O - 50,7 g/l; NaNO3 - 1,1 g/l; FeSO4. 7H2O - 0,5 g/l; MnCl2 .4H2O -0,072 g/l; ZnSO4 .7H2O - 0,044 g/l; Na2 MoO4 . 2H2O - 0,0025 g/l). **Aminocidos 2,5% uma suspenso de: (aspargina-5,99 g/l; cido glutmico - 42,0 g/l; glicina - 1,65 g/l; alanina 1,0 g/l; metionina - 0,45 g/l; isoleucina - 1,84 g/l; triptofano - 0,69 g/l; fenilalanina - 1,33 g/l; lisina - 1,17 g/l; arginina 1,11 g/l; prolina - 3,65 g/l e tirosina - 2,0 g/l). (-) Tratamentos no efetuados.

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SOLARIZAO DO SOLO
A tcnica consiste na utilizao da energia solar para a desinfestao do solo, por meio da cobertura com um filme plstico transparente, antes do plantio. A solarizao pode ser utilizada, tanto em condies de campo, em extensas reas, como em cultivo protegido e deve ser realizada preferencialmente durante o perodo de maior incidncia de radiao solar (Ghini & Bettiol, 1995; Katan & Devay, 1991; Souza, 1994). A solarizao se mostra eficiente no controle de diversos fitopatgenos habitantes do solo, como: Rhizoctonia, Fusarium, Verticillium, Sclerotium, Sclerotinia, Pseudomonas e Meloidogyne entre outros. Aps a cobertura, as camadas superficiais do solo apresentam temperaturas superiores s do solo descoberto, sendo que o aquecimento menor quanto maior for a profundidade. O filme plstico deve ser mantido por um perodo de tempo suficiente para que haja a inativao das estruturas dos patgenos localizadas nas camadas mais profundas do solo. Parte da populao de patgenos morta pela exposio s maiores temperaturas, que geralmente ocorrem nas camadas superficiais do solo solarizado. A sensibilidade ao calor apresentada por diversos patgenos de plantas pode indicar a possibilidade de controle atravs da solarizao. Porm, apesar da exposio do patgeno ao calor ser um importante fator, no o nico mecanismo envolvido no controle. Os processos microbianos induzidos pela solarizao contribuem para o controle da doena, j que o aquecimento do solo tambm atua sobre organismos no-alvo. Esses processos podem ter especial importncia quando os efeitos acumulativos do calor so insuficientes para o controle do patgeno como, por exemplo, nas camadas mais profundas do solo ou em climas menos favorveis solarizao. Os propgulos dos patgenos, enfraquecidos pelas temperaturas sub-letais, do condies e estimulam a atuao de antagonistas. Devido ao fato das temperaturas atingidas pelo solo durante a solarizao serem relativamente baixas quando comparadas com o aquecimento artificial (vapor), os seus efeitos nos componentes biticos so menos drsticos, evitando a formao de vcuos biolgicos. Durante a solarizao, as temperaturas atingidas permitem a sobrevivncia de alguns grupos de microrganismos. De modo geral, os microrganismos parasitas de plantas so eliminados por temperaturas inferiores quelas necessrias para controlar os saprfitas, dentre eles muitos antagonistas, como Bacillus, Pseudomonas, Trichoderma, actinomicetos e fungos termotolerantes. Como conseqncia, h uma alterao na composio microbiana, em favor de antagonistas, estimulando a supressividade do solo a patgenos e no criado, portanto, o chamado vcuo biolgico. A atividade microbiana que ocorre durante a solarizao promove um controle biolgico, em adio ao efeito trmico. Por

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esse motivo, a reinfestao de um solo solarizado mais difcil do que um solo que sofreu um tratamento esterilizante, como no caso do vapor ou um biocida qumico, como por exemplo, a fumigao com brometo de metila. Assim, a solarizao dura perodos maiores do que os demais tratamentos. A principal caracterstica do filme plstico utilizado a transparncia, que permite a passagem dos raios solares e promove de forma eficiente o efeito estufa e, assim, o maior aquecimento do solo. Os filmes pretos e de outras cores no so recomendados por no serem to eficientes na elevao da temperatura do solo. A espessura do plstico tem influncia sobre sua durabilidade e custo. Por esse motivo, plsticos com 25 a 50 m tm sido recomendados. A instalao do filme plstico em grandes reas pode ser feita por mquinas especialmente desenvolvidas para tal finalidade ou manualmente, em reas menores ou estufas. O terreno deve ser preparado de forma usual, isto , por meio de arao e gradagem, eliminando-se galhos e outros materiais pontiagudos, que possam perfurar o plstico. A fixao do filme plstico feita enterrando-se as suas bordas em sulcos no solo, de forma que permanea sobre o terreno sem a formao de bolsas de ar, cobrindo toda a rea a ser tratada. A emenda de dois filmes deve ser feita enterrando-se as bordas de ambos num nico sulco. Alm de controlar eficientemente fitopatgenos habitantes do solo, a solarizao do solo eficiente no controle de plantas invasoras, sendo que diversos agricultores utilizam a tcnica com essa finalidade para substituir o uso de herbicidas (Ghini & Bettiol, 1995).

BIOFUMIGAO DO SOLO
Biofumigao o termo utilizado para indicar a supresso de fitopatgenos veiculados pelo solo por compostos biocidas liberados no solo quando glicosinolatos de brssicas utilizadas como adubo verde ou rotao de culturas so hidrolizados (Kirkegaard & Sarwar, 1998). Esses compostos possuem a capacidade de inativar diversos fungos fitopatognicos habitantes do solo. interessante combinar a solarizao do solo com a incorporao de brssicas, pois o plstico retm por um perodo maior os gases liberados na decomposio. A biofumigao tem sido eficiente no controle de Fusarium. Alm de brssicas, diversos autores vem realizando a biofumigao com outras fontes de matria orgnica, como Schoenmaker & Ghini (dados no publicados) que obtiveram sucesso no controle de Pythium do pepino.

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COLETOR SOLAR PARA A DESINFESTAO DE SUBSTRATO

O coletor solar consiste, basicamente, de uma caixa de madeira que contm tubos de ferro galvanizado e uma cobertura de plstico transparente, que permite a entrada dos raios solares. O solo colocado nos tubos pela abertura superior e, aps o tratamento, retirado pela inferior, por meio da fora da gravidade. Os coletores devem ser instalados com exposio na face norte (no hemisfrio sul) e um ngulo de inclinao semelhante latitude local acrescida de 10, para garantir a maior incidncia de radiao solar durante o ano todo. A colocao de isolantes trmicos (isopor, l de vidro) no fundo do coletor (entre a chapa de alumnio e a madeira) pode auxiliar a reteno do calor no interior da caixa. Alguns patgenos habitantes do solo, como fungos, bactrias e nematides, podem ser inativados no coletor em algumas horas de tratamento, devido s altas temperaturas atingidas, porm recomenda-se o tratamento por um ou dois dias. Ghini (1993) verificou que um dia de tratamento foi suficiente para o controle de Sclerotium rolfsii, Sclerotinia sclerotiorum, Fusarium solani f.sp. phaseoli e Pythium aphanidermatum. Em outros testes com o coletor solar, Ghini et al. (1998) verificaram o controle de Meloidogyne arenaria em substratos para a produo de mudas de tomateiro. Em um trabalho de avaliao econmica da substituio do brometo de metila pelos coletores em um viveiro comercial, Ghini et al. (1998) estudaram os custos referentes substituio no Ncleo de Produo de Mudas da CATI, situado em So Bento do Sapuca/SP. O volume de substrato tratado de 400 m3/ano, demandando 200 latas de brometo (300 mL) ou 20 coletores solares (0,1 m3 de substrato/coletor/dia; 200 dias ao ano). A diferena para os custos anualizados de tratamento a favor do brometo de metila varia de R$0,42 a R$0,52/m3 de substrato, dependendo da taxa de juros usada. Porm, o trabalho no contempla as externalidades decorrentes de ambos os mtodos, quanto sade do aplicador, qualidade ambiental e problemas de resduos. Quanto ao controle de fitopatgenos, foi verificado que um dia de tratamento nos coletores foi suficiente para erradicar a populao de Fusarium spp., Phytophthora sp., Meloidogyne sp., Helicotylenchus sp. e nematides no parasitos. O equipamento apresenta diversas vantagens: no consome energia, de fcil manuteno e construo, no apresenta riscos para o operador e tem baixo custo. Alm disso, o uso do coletor permite a sobrevivncia de microrganismos termotolerantes benficos que impedem a reinfestao pelo patgeno, o que no ocorre nos tratamentos com brometo de metila e autoclaves que esterilizam o solo, criando um vcuo biolgico.

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EXTRATOS AQUOSOS DE MATRIA ORGNICA E BIOFERTILIZANTE

Uma opo econmica e de baixo impacto o uso de extratos aquosos de matria orgnica e biofertilizantes para o controle de doenas de plantas do filoplano. Essa nova abordagem do controle biolgico passou a ser considerada vivel aps observaes de uso prtico por agricultores orgnicos. As principais vantagens desta tcnica, quando comprovadamente eficaz, so o custo e a disponibilidade do produto. O custo basicamente o relacionado ao preparo do material pelo prprio agricultor. Como existem relatos da eficincia de extratos aquosos de diferentes fontes de matria orgnica, o agricultor no depende da compra deste material mas sim apenas do aproveitamento de material disponvel na propriedade. Esses extratos e os biofertilizantes possuem uma complexa e elevada comunidade microbiana, com presena de bactrias, fungos leveduriformes e filamentosos e actinomicetos. Alm da comunidade microbiana original, esses extratos podem ser bioativados com reconhecidos agentes de biocontrole. Weltzien & Ketterer (1986) induziram o aumento da resistncia de folhas de videira contra mldio (Plasmopara viticola), quando essas foram mergulhadas ou pulverizadas com extratos aquosos de uma mistura de composto de esterco de cavalo, palha de trigo e solo. Esses autores prepararam o extrato usando 250 g da mistura em 750 ml de gua e temperatura entre 18 a 22C. O extrato no apresentou fitotoxicidade e ao fungicida direta sobre o patgeno. Weltzien (1989) obteve controle de P. viticola, Uncinula necator e Pseudopeziza tracheiphila em videira; Phytophthora infestans em batata e tomate; Erysiphe graminis em cevada; Erysiphe betae em beterraba aucareiro; Sphaerotheca fuliginea em pepino e B. cinerea em morango e feijo com aplicaes de extratos aquosos da mistura contendo esterco de cavalo, palha e solo compostados por 8-12 meses. A induo de resistncia foi um dos mecanismos envolvidos, porm o autor observou inibio direta dos fungos pelo extrato. McQuilken et al. (1994), utilizando extratos aquosos obtidos da mistura de esterco e palha compostada, obtiveram supresso do desenvolvimento de leses de B. cinerea em folhas de feijo. Os extratos inibiram a germinao dos condios e reduziram o crescimento micelial do fungo. Tambm trabalhando com B. cinerea, Elad & Shtienberg (1994) obtiveram o seu controle em tomate, pimento e uva, pulverizando-os com extratos aquosos de compostos produzidos a partir da mistura de esterco de vaca e de galinha, e a partir de bagao de uva. Esses extratos controlaram parcialmente o Odio (Leveillula taurica) de folhas de tomate. O biofertilizante, produzido pela digesto anaerbia de esterco bovino, vem sendo recomendado para o controle de diversas doenas (Santos, 1992). Castro et al. (1991) verificaram inibio de Colletotrichum gloeosporioides, Thielaviopsis paradoxa, Penicillium digitatum, Fusarium e Cladosporium
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pelo biofertilizante. Tratch & Bettiol (1997) observaram inibio do crescimento micelial de Alternaria solani, Stemphylium solani, Septoria licopersici e B. cinerea e inibio da germinao de esporos de B. cinerea, A. solani, Hemileia vastatrix e Coleosporium plumierae. Zhang et al. (1996) induziram o controle de antracnose (Colletotrichum orbiculare) em folhas de pepino com substrato supressivo a Pythium. Entretanto, o mecanismo de aquisio de resistncia sistmica desconhecido. O uso de substrato capaz de induzir a resistncia sistmica tem como vantagens a facilidade de aplicao e a no necessidade de preparo do extrato. Esses produtos apresentam como caracterstica principal uma complexa comunidade microbiana, sendo essa, a possvel responsvel pelo controle dos patgenos. Pela complexidade da comunidade microbiana, so relatados a ao de todos os mecanismos de ao dos agentes de controle biolgico conhecidos agindo no controle, quando de sua incorporao no filoplano. Alm do controle de patgenos existe referncia sobre seu efeito nutricional na planta (McQuilken et al., 1994; Santos, 1992). Contudo, como se trata de uma tcnica que vem sendo expandida, h necessidade de realizao de estudos para a determinao dos impactos no ambiente e na sade pblica. Para minimizar os possveis problemas sugere-se o uso de matria orgnica livre de metais pesados e de agentes nocivos sade pblica. No caso dos extratos aquosos, a indicao de uso de matria orgnica compostada.

EXTRATOS DE PLANTAS E DE FUNGOS

O uso de extrato de plantas no controle de doenas de plantas vem sendo amplamente estudado, mas ainda continua sendo pouco utilizado na prtica, exceo feita aos agricultores que praticam a agricultura orgnica e que utilizam normalmente esses extratos. Um dos motivos de seu baixo uso a dificuldade em se obter os tecidos vegetais a serem processados e tambm o preparo propriamente dito do extrato, pois existe a cultura de se adquirir o produto pronto. Entretanto, sucesso, inclusive comercial, vem sendo obtido. Um dos melhores exemplos de uso comercial de extratos de plantas o produto comercial Milsana, obtido de folhas de Reynoutria sachalinensis. Daayf et al. (1995) observaram que Milsana controlou o odio de pepino, causado por S. fuliginea, de forma semelhante ao fungicida benomyl. Os autores verificaram que aplicaes semanais do extrato induziram as folhas a se tornarem mais verdes e brilhantes, porm mais quebradias. O efeito do extrato no controle da doena est relacionado com o aumento de compostos fenlicos nas folhas. Assim, Milsana deve estar relacionada com a induo de resistncia em pepino. Os autores sugerem a possibilidade de utilizar esse
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produto em programas de manejo da doena. Em uma coletnea de receitas sobre prticas alternativas para controle de doenas, Abreu Junior (1998) recomenda a mistura de 2 kg de folhas e hastes secas e moidas de Reynoutria sachalinensis em 98 litros de gua, e aplicar a extrato coado em intervalos de 7 a 10 dias para o controle de odio das cucurbitceas. No controle do odio da roseira, Passini et al. (1997) verificaram que Milsana foi parcialmente efetivo. Outra planta que vem despertando muita ateno o Nim (Azadirachta indica), principalmente para controle de pragas. Entretanto, diversos trabalhos vem mostram a sua efetividade no controle de odio. Passini et al. (1997) verificaram que extrato de nim apresentaram um controle satisfatrio do odio da roseira. Jayme et al. (1999) estudaram a eficincia de alguns produtos naturais no controle do odio do feijoeiro (Erysiphe polygoni) e verificaram que Nimkol-L, OleoNim e Ace-Nim-EC (produtos obtidos de Nim), pulverizados duas vezes em plantas altamente infestadas com a doena, apresentaram controle do odio, determinado pela porcentagem de folha lesionada, em 81, 98 e 86%, respectivamente. Os dados sobre o potencial dessa planta so contrastantes. Volf & Steinhauer (1997) observaram que S. fuliginea no foi controlado por extratos de folhas de nim, mas sim estimulou o crescimento do mesmo. Diversas outras plantas so reconhecidamente efetivas e utilizadas. Stadnik & Bettiol (2001) avaliaram a eficincia de extratos de basidiocarpos de Ganoderma sp., originados de rvores urbanas de alecrim (Holocalyx glaziovii), flamboyamt, sibipiruna e ip-rosa, para o controle do Odio (Sphaerotheca fuliginea) do pepino (Cucumis sativus). A eficincia dos extratos em controlar o odio foi varivel. A maior frequncia de extratos ativos foi obtida com basidiocarpos crescidos em flamboyamt e alecrim, enquanto que os de sibipiruna e ip-rosa mostraram pouco ou nenhum efeito sistmico. A utilizao de extratos de plantas e de fungos depende principalmente da disponibilizao desses produtos no mercado, seguindo a tendncia do Milsana. Caso isso no ocorra, a sua utilizao ficar restrita aos produtores orgnicos ou alternativos. importante salientar que esses extratos podem tanto ser produzidos diretamente pelos agricultores, portanto considerados como produtos alternativos, como serem utilizados para a sntese de um fungicida.

SAIS
O estudo com sais est principalmente restrito ao grupo de patgenos causadores dos odios. Homma et al. (1981) demonstraram que o bicarbonato de sdio (NaHCO3) foi efetivo no controle do odio do pepino,
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pois inibiu de 80 a 100% a germinao de condios, reduziu o nmero de condios formados nos conidiforos, causou ruptura da parede celular dos condios e anomalias morfolgicas nos condios, inibiu a formao de conidiforos, bem como controlou a elongao das hifas de Sphaerotheca fuliginea. Alm desse, o bicarbonato de sdio e de potssio so efetivos no controle de odio de diversas culturas: Sphaerotheca pannosa var. rosae em roseira (Horst et al., 1992), Erisiphe sp. do tomateiro cultivado em estufa (Garibaldi et al., 1994), como exemplos. Outros sais, como o monofosfato de potssio (KH2PO4), polifosfato de sdio, fosfato dibsico de potssio (K2HPO4), fosfato tribsico de potssio (K3PO4), cloreto de potssio e outros tambm apresentam potencial para o controle de diversos tipos de odios. Muitos sais estudados para o controle de odio, como o bicarbonato de sdio, so utilizados na alimentao humana, portanto sem problemas toxicolgicos. Alm disso, o custo desses sais baixo, podendo tambm ser utilizados em adubao foliar.

INDUO DE RESISTNCIA A DOENAS DE PLANTAS

Os produtos que induzem a planta a se tornar resistente s doenas esto sendo os mais procurados na natureza, pois de modo geral so incuos aos seres vivos e podem ser de originrios de microrganismos, de vegetais e de animais. Esse tema vem sendo amplamente discutido em diversos congressos e publicaes.

USO DE CONSERVADORES ALIMENTARES PARA O CONTROLE DE DOENAS EM PS-COLHEITA DE FRUTOS

Como o uso de fungicidas em ps colheita est sendo amplamente questionado, busca-se a obteno de novos produtos para proteger principalmente os frutos aps a colheita. Uma tendncia estudar o uso de conservadores alimentares, aminocidos, extratos de plantas e leos de plantas para o controle dessas doenas. Assim, Franco & Bettiol (2000) elaboraram um trabalho com o objetivo de selecionar produtos alternativos aos fungicidas para o controle do bolor verde (Penicillium digitatum) em ps colheita de citros, tendo sido testados mais de 100 produtos em frutos de laranja Pera. Os resultados mostraram que bicarbonato de sdio a 1, 2 e 3% (p/v), carbonato de sdio a 1% (p/v), cido brico a 1 e 2% (p/v), sorbato de potssio a 1% (p/v), metabissulfito de sdio a 1% (p/v), alanina a 1% (p/v), glutamato monossdico a 1% (p/v) e Gliocladium roseum (8,6 x 106 condios.mL-1) foram os produtos que apresentaram melhor desempenho

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para o controle de P. digitatum em laranja Pra, com nveis de controle semelhantes aos fungicidas thiabendazole, prochloraz e imazalil, utilizados como padres.

CONSIDERAES FINAIS
O desenvolvimento e a seleo de produtos alternativos fundamental para a reduo da contaminao causada pelos pesticidas. Assim, os produtos ou fungicidas biocompatveis, de baixo impacto ambiental e toxicidade aos organismos colaboraro para o caminho da sustentabilidade dos agroecossistemas. Uma das maiores dificuldades para ampliar o uso de mtodos alternativos que normalmente esses produtos no so disponveis no mercado, exigindo que o produtor prepare o seu prprio material a ser pulverizado. Essa apesar de ser uma dificuldade, uma vantagem para o agricultor, pois diminui a necessidade de insumos externos.

BIBLIOGRAFIA
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6
DIAGNOSE E MANEJO DE FITOBACTERIOSES DE IMPORTNCIA NO NORDESTE BRASILEIRO
ROSA DE LIMA RAMOS MARIANO ELINEIDE BARBOSA DA SILVEIRA SAYONARA MARIA PAULINO DE ASSIS ANDRA MARIA ANDR GOMES IDJANE SANTANA OLIVEIRA ANA ROSA PEIXOTO NASCIMENTO

INTRODUO
As doenas bacterianas em plantas tm importncia relevante pelos grandes prejuzos que causam em todas as reas agricultveis do mundo. As bactrias fitopatognicas so facilmente disseminadas, tm grande capacidade de sobrevivncia e alta variabilidade gentica, o que dificulta a utilizao de medidas eficientes de controle. No Nordeste, diversas fitobacterioses so responsveis por elevadas perdas na produo, produtividade e qualidade do produto. Dentre elas destacam-se a podrido negra das crucferas, a podrido mole de hortalias, a murcha bacteriana em solanceas, musceas e heliconiceas, a sarna comum e cida da batata, a mancha-aquosa do melo e o cancro da videira. Estas doenas sero discutidas com relao importncia, distribuio geogrfica, etiologia, ciclo das relaes patgeno-hospedeiro, sintomatologia e controle, com nfase ao diagnstico e manejo.

PODRIDO NEGRA DAS CRUCFERAS

O repolho a espcie mais importante da famlia Brassiccea possuindo elevado valor nutricional. Esta cultura pode ser severamente comprometida devido ocorrncia de doenas, dentre as quais se destaca a podrido negra, causada pela bactria Xanthomonas campestris pv. campestris (Pammel) Dowson, considerada a principal doena em crucferas no mundo e que ocorre em todos os continentes (Williams, 1980). No Brasil, a podrido negra foi registrada pela primeira vez em repolho, em 1935, em So Paulo
Michereff, S.J. & Barros, R. (Eds.) Proteo de Plantas na Agricultura Sustentvel. 2001. Recife, UFRPE

Direitos de edio reservados aos editores ISBN 85-87459-06-6

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(Silveira, 1949), sendo a doena mais comum em repolho e outras brssicas, principalmente em cultivos de vero (Lopes & Quesado-Soares, 1997). Em Pernambuco, esta fitobacteriose ocorre em todos os municpios produtores de couve, couve-chinesa, couve-flor, rabanete e repolho (Mariano & Michereff, 1994). Os sintomas da podrido negra manifestam-se em qualquer idade da planta. Nas sementeiras, observam-se murcha e queima de uma ou de ambas as folhas cotiledonares, geralmente iniciando-se nas margens, progredindo para o interior das mesmas, que se tornam secas e caem. Nas folhas, a leso apresenta-se em forma de "V", inicialmente amarelada com nervuras enegrecidas, tendo o vrtice voltado para o centro do limbo. Com o progresso da doena, a leso avana para a nervura principal e torna-se marrom-clara, podendo apresentar halo amarelo e secamento da folha. A cabea do repolho pode apresentar-se coberta por leses necrticas. O patgeno torna-se sistmico invadindo as nervuras secundrias e principal da folha, que enegrecem progressivamente, enquanto a bactria atinge a raiz, o caule e, posteriormente, as sementes (Maringoni, 1997; Tokeshi & Salgado, 1980). Infeco latente pode ocorrer em plntulas, facilitando a disseminao pelo plantio de mudas supostamente sadias no campo. A infeco latente em folhas pode ser detectada pela tcnica da imerso em soluo a 0,1% do corante Eosina Y (Assis et al., 1996). A bactria X. campestris pv. campestris apresenta-se como bastonetes retos medindo de 0,4-0,7 x 0,7-1,8 m, Gram negativos e mveis por um flagelo polar (Tabela 6.1). Tem bom crescimento em meios de cultura de rotina como Agar nutritivo e Agar nutritivo-extrato de levedura-dextrose, formando colnias de colorao amarela com 1 a 2 mm de dimetro em 48 h. A colorao amarela devido produo do pigmento xantomonadina. So aerbicas obrigadas e no usam asparagina como fonte de carbono e nitrognio. Tm o crescimento inibido por 0,1% de cloreto de trifeniltetrazlio e 2-5% de NaCl. Hidroliza fortemente o amido e liquefaz moderadamente a gelatina. Sementes contaminadas, perfilhos infectados, restos culturais, solo infestado e ervas daninhas constituem as principais fontes de inculo de X. campestris pv. campestris (Alvarez & Cho, 1978; Dzhalilov & Tiwari, 1995; Schaad & Dianese, 1981) (Figura 6.1). A disseminao do inculo ocorre principalmente por sementes contaminadas externamente ou internamente na regio do folculo, sendo que essa contaminao varia de 6 a 8% nas sementes comerciais. Por ocasio da germinao, a bactria facilmente disseminada para as plntulas vizinhas provocando a queda dos cotildones. No campo, a gua da superfcie, respingos de chuva, tratos culturais, roupas dos operrios, insetos, animais e outros agentes disseminam a bactria dentro da rea de cultivo. A disseminao a longa distncia feita principalmente

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por sementes e mudas contaminadas (Sugimori, 1987; Yokoyama & Silva Jnior, 1987). A bactria penetra atravs de aberturas naturais da folha, principalmente pelos hidatdios, e por ferimentos, multiplica-se intensamente nos espaos intercelulares e atinge o sistema vascular, sendo levada a todos os rgos da planta (Tokeshi & Salgado, 1980). Tabela 6.1 Algumas caractersticas morfolgicas e culturais das bactrias que causam fitobacterioses importantes no Nordeste brasileiro.
Bactria Forma e motilidade Bastonete reto monotriquia Bastonete reto peritriquia Bastonete reto lofotriquia Cor, brilho e tamanho da colnia em meio NYDA Creme, translcida com 1-2 mm aps 48 h Creme, opaca com 2-3 mm aps 48 h Branco-leitoso, opaca com 3-4 mm aps 48 h Miclio cenoctico, bem desenvolvido, ramificado, de cor cinza com cadeias de esporos em espiral Amarela, brilhante com 2-3 mm aps 48 h Creme, opaca com 1-2 mm aps 48 h Gram Oxidase Oxidao/ Fermentao + + + n.d.1 Oxidativa Fermentativa Oxidativa Oxidativa

Acidovorax avenae subsp. citrulli Erwinia carotovora Ralstonia solanacearum

Streptomyces scabiei Micelial imvel

Xanthomonas campestris pv. campestris Xanthomonas campestris pv. viticola

1

Bastonete reto monotriquia Bastonete reto monotriquia

Oxidativa

Oxidativa

n.d. = no determinado.

No Brasil, X. campestris pv. campestris adapta-se a diversas condies ambientais, durante todos os perodos agrcolas (Tokeshi & Salgado, 1980). As epidemias podem ser favorecidas por solos midos e temperaturas elevadas, acima de 20oC, com um timo de 30oC (Conceio et al., 1975; Yokoyama & Silva Jnior, 1987).

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Figura 6.1 Ciclo da podrido negra causada pela Xanthomonas campestris pv. campestris em crucferas. As principais medidas preconizadas para o controle da podrido negra das crucferas so: uso de sementes sadias ou certificadas; tratamento de sementes com antibiticos ou tratamento trmico a 50oC, por 25 a 15 minutos, respectivamente para repolho e outras crucferas, seguido por proteo com os fungicidas captan ou thiran; uso de cultivares resistentes (Tabela 6.2); eliminao de plantas suscetveis; destruio de restos de culturas; rotao de cultura por 2 a 3 anos com leguminosas, solanceas ou gramneas; desinfestao da sementeira com cloropicrina ou soluo de formol a 40%, controle de insetos e pulverizao com produtos a base de cobre e antibiticos (Tabela 6.3).

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Tabela 6.2 Cultivares comercializadas no Brasil resistentes podrido negra das crucferas, causada por Xanthomonas campestris pv. campestris.
Hospedeira Brcolis Couve-flor Repolho Cultivares Condor, Precoce Piracicaba Vero, Ramoso Santana, Flrida, Baron Verona AG-184, Verona AG-284, Ikuta, Jaragu, Miyai, Shiromaru II, Shiromaru III, Silver Streak Fuyutoyo SK, Louco, Mster AG-325, ESALQ-84, Mogiano, Saiko, Caribe, Astrus, Saturno, XPH5909, Louco de Vero, Unio de Vero, Unio

Tabela 6.3 Fungicidas, bactericidas e antibiticos indicados para o controle das principais fiobacterioses que ocorrem no Nordeste brasileiro1.
Hospedeira Repolho Tomate Fitobacteriose Podrido mole Podrido negra Talo oco, podrido mole Patgeno2 Ec Xcc Ec Nome tcnico Oxicloreto de cobre Oxicloreto de cobre Hidrxido de cobre Oxicloreto de cobre xido cuproso Oxitetraciclina + Sulfato de estreptomicina Cloreto de kasugamicina Oxitetraciclina Cloreto de kasugamicina Oxicloreto de cobre3 Oxicloreto de cobre3

Batata

Canela preta

Ec

Cenoura Melo Videira

1 2

Podrido mole Mancha-aquosa Cancro bacteriano

Ec Aac Xcv

Adaptado do Agrofit (1998) e do Guia de fungicidas (Kimati et al., 1997) Ec = Erwinia carotovora, Xcc = Xanthomonas campestris pv. campestris, Ss = Streptomyces scabiei, Aac = Acidovorax avenae subsp. citrulli, Xcv = Xanthomonas campestris pv. viticola 3 Recomendado para mancha angular em melo causada por Pseudomonas syringae pv. lachrymans e para doenas fngicas em videira.

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PODRIDO MOLE
A podrido mole causada por Erwinia carotovora (Jones) Bergey et al. em diversas culturas, j foi assinalada praticamente em todo mundo, podendo ocorrer durante o crescimento das plantas no campo, na colheita, no armazenamento, no transporte e na comercializao. Essa espcie apresenta cinco subspcies (E. carotovora subsp. atroseptica (van Hall) Dye, E. carotovora subsp. betavasculorum Thomson et al., E. carotovora subsp. carotovora (Jones) Bergey et al., E. carotovora subsp. odorifera Gallois et al., E. carotovora subsp. wasabiae Goto & Matsumoto), sendo que no Brasil s ocorrem E. carotovora subsp. carotovora e E. carotovora subsp. atroseptica. A importncia econmica das perdas causadas por essa bactria pode ser muito grande, dependendo do valor da cultura, da severidade do ataque, subespcie envolvida, condies ambientais, potencial de inculo, manejo da cultura, transporte e comercializao dos produtos (Jabuonski et al., 1986). Erwinia carotovora subsp. carotovora patognica acelga, batata, beterraba, cenoura, couve, pimento, rabanete, repolho e tomate, dentre outros hospedeiros. Entretanto, a gama de hospedeiros de E. carotovora subsp. atroseptica restrita geralmente a batata, embora isolados idnticos ou relacionados possam ser encontrados, ocasionalmente, em outras culturas (Dickey, 1979). Uma mesma espcie do grupo Carotovora pode incitar, isolada ou concomitantemente, dependendo das condies, sintomas como podrido mole, canela preta, talo oco e tombamento de plntulas. O sintoma inicial de podrido mole o aparecimento de pequenas leses encharcadas, que aumentam rapidamente e causam extensiva macerao (Goto, 1992) e apodrecimento do tecido parenquimatoso do rgo afetado. No entanto, sintomas iniciais podem ser completamente diferentes, especialmente dependendo do crescimento da planta (Stanghellini & Meneley, 1975). Em batata, bem como em outras culturas, folhas podem murchar e se tornarem amarelas em estgios adiantados do ataque, quando a gua abundante. Observa-se deteriorao da batata-semente antes da emergncia ou infeco e morte dos brotos aps emergncia. O sintoma comum de podrido na base do caule conhecido como canela preta (Stanghellini & Meneley, 1975). Talo oco e canela preta ocorrem, freqentemente, ao mesmo tempo em batata e tomate como conseqncia de infeco por E. carotovora. No caso do talo oco, o caule fica literalmente vazio, com aspecto tubular, uma vez que a bactria encontra mais facilidade de exercer sua atividade pectoltica na regio central no lenhosa. O sintoma da canela preta conseqncia da colonizao da casca com produo e acmulo de melanina e de outros pigmentos escuros (Romeiro, 1995).
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Os isolados de Erwinia do grupo Carotovora so anaerbios facultativos, Gram negativos, bastonetiformes e altamente mveis (Tabela 6.1). Em meio de cultura Nutriente-dextrose-gar a 28-30C, formam colnias pigmentadas de colorao creme, opacas, circulares ou amebides, com bordos irregulares e de aproximadamente 1,5 a 3,0 mm de dimetro (Jabuonski et al., 1986). Para distinguir E. carotovora subsp. carotovora de E. carotovora subsp. atroseptica, a formao ou no de cido a partir de -metil-glucosdeo e de substncias redutoras a partir de sacarose so consideradas as propriedades bioqumicas mais especficas e importantes (Prombelon & Kelman, 1980). Essas subespcies so sorologicamente relacionadas e classificadas em cerca de 50 sorogrupos, com base em teste de imunodifuso (De Boer et al., 1987). As fontes de inculo primrio de E. carotovora so bactrias que sobrevivem como epifticas na filosfera de plantas hospedeiras, como saprfitas no solo, em resduos de plantas doentes, ou em material de plantio (Goto, 1992) (Figura 6.2). A bactria pode tambm sobreviver em associao com ervas daninhas ou na rizosfera de outras plantas cultivadas (Prombelon & Kelman, 1980). A disseminao ocorre facilmente pela gua, razes e tubrculos infectados, insetos, tratos culturais, homem e implementos agrcolas (Tokeshi & Carvalho, 1980). Uma vez que essa bactria penetra na planta por ferimentos, a incidncia da doena aumenta marcadamente quando as hospedeiras so feridas em funo de prticas culturais, ventos fortes, contato de plantas ou por insetos (Goto, 1992). Aps a penetrao, a bactria coloniza o rgo vegetal produzindo pectinases que degradam a lamela mdia das clulas vegetais, fazendo com que o tecido perca sua rigidez, ocasionando os sintomas de podrido mole (Goodman et al., 1986). Subsequentes fermentaes e concomitante invaso do tecido em colapso por saprfitas, ocasionam o desprendimento de gases com odor desagradvel (Romeiro, 1995). Estas bactrias dependem em grande parte de fatores ecolgicos como temperatura e concentrao de oxignio, para iniciar a infeco, bem como para a produo e severidade dos sintomas (Hayward & Mariano, 1997). Alm das enzimas pectolticas, celulases e proteases podem tambm estar envolvidas na patogenicidade.

147

Figura 6.2 Ciclo da podrido mole causada por Erwinia carotovora subsp. carotovora em couve chinesa. Temperaturas entre 25 e 35 C, umidade relativa prxima a 100%, alta precipitao pluviomtrica e pouca aerao so condies extremamente favorveis ao desenvolvimento de infeco por E. carotovora subsp. carotovora. J a incidncia de E. carotovora subsp. atroseptica favorecida por tempo frio, nublado, com elevada pluviosidade, seguindo-se elevao de temperatura. As principais medidas preconizadas para o controle de Erwinia carotovora incluem: evitar plantio em solos de baixada mal drenados; plantar apenas tubrculos sementes certificados; rejeitar tubrculos sementes deteriorados; erradicar plantas doentes; destruir restos culturais; fazer rotao de culturas por 3 a 4 anos utilizando milho; desinfestar tubrculos sementes (Tabela 6.3); no armazenar produto doente e sadio conjuntamente; armazenar produto em local bem ventilado, seco e frio; desinfestar facas e utenslios usados no corte de tubrculos; evitar ferimentos durante o plantio

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e tratos culturais; controlar insetos mastigadores; desinfestar depsitos e armazns com sulfato de cobre; empregar gua de irrigao livre de contaminao; evitar o excesso de umidade com o maior espaamento possvel entre plantas; efetuar adubao equilibrada e rica em clcio; utilizar cloro na gua de lavagem. Erwinias causadoras de podrido mole em batata podem ser controladas biologicamente pela aplicao de espcies antagonistas de Pseudomonas (Xu & Gross, 1986) e tambm atravs da infiltrao a vcuo com Ca(NO3)2 (0,1; 0,6 e 1,2 %) (McGuire & Kelman, 1984).

MURCHA BACTERIANA EM SOLANCEAS, MUSCEAS E HELICONICEAS

A murcha bacteriana, causada por Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al., uma das mais importantes doenas de plantas no mundo. Esta bactria ocasiona elevadas perdas em vrias culturas a nvel mundial e nacional, possuindo hospedeiros em cerca de 53 famlias botnicas. No Brasil, R. solanacearum nativa na maioria dos solos. Em tomate, tem sido assinalada em todo o pas, causando grandes prejuzos em condies de alta temperatura e umidade. Em batata, a murcha bacteriana constitui uma das mais importantes doenas, observando-se perdas de at 50% na produo quando no se utiliza batata-semente certificada. Em pimento, R. solanacearum de importncia limitada na regio Centro-Sul, embora constitua fator limitante para o cultivo na regio amaznica e em reas de baixa altitude na regio Nordeste. Em banana, R. solanacearum est amplamente disseminada pelas principais reas de produo na Regio Norte, nos Estados do Amap, Amazonas, Par e Rondnia (Silva, 1997). No Nordeste foram detectados focos da doena nos Estados da Paraba, Cear, Sergipe, Pernambuco e Bahia (Silveira et al., 1996). Recentemente, foi relatada a presena desta bactria, no Estado de Pernambuco infectando helicnias (Assis et al., 2000). De modo geral, o primeiro sintoma em solanceas a murcha das folhas mais novas, nas horas mais quentes do dia, normalmente em plantas no incio da frutificao. Em condies favorveis ao desenvolvimento da doena, como alta temperatura e umidade, a murcha atinge toda a planta sendo irreversvel e causando a sua morte. A intensidade dos sintomas varia com o isolado do patgeno e a cultivar. Em condies desfavorveis ao desenvolvimento da doena pode ocorrer infeco latente ou as plantas infectadas podem apresentar amarelecimento e subdesenvolvimento sem a ocorrncia de murcha. comum a formao de razes adventcias nos caules de plantas afetadas. Internamente, alm da descolorao e colapso dos vasos
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do xilema que ocorrem a nvel macroscpico, so tambm observadas tiloses, dissoluo de substncias pcticas na lamela mdia e degradao da celulose nas paredes celulares. O sinal caracterstico da murcha a exsudao bacteriana a partir do tecido vascular em cortes de rgos infectados. Na cultura da batata, alm dos sintomas da parte area acima descritos, os tubrculos podem ou no apresentar ligeira depresso e necrose na regio do estolo com escurecimento de gemas que, geralmente, exsudam pus bacteriano. Num corte transversal, o tubrculo revela escurecimento do sistema vascular e, aplicando-se ligeira presso, ocorre exsudao bacteriana. Estes sintomas podem ser seguidos de podrido e so praticamente os nicos observados em regies de clima temperado, onde a murcha caracterstica da parte area da planta dificilmente ocorre (Prombelon, 1996). Na cultura da banana, a doena manifesta-se principalmente por murcha, amarelecimento e necrose das folhas, iniciando-se pelas folhas mais centrais e evoluindo para as demais, podendo curvar-se dorsalmente provocando a quebra do pecolo, sendo a folha vela a ltima a sucumbir, em plantas que ainda no entraram em produo. Em brotaes novas, surgem sintomas de enegrecimento e distoro, com folhas de colorao amarelada e escura. A descolorao vascular na parte interna do pseudocaule concentra-se prxima ao centro e os frutos apresentam um amarelecimento externo acompanhado, internamente, por uma podrido seca, firme e de colorao parda. Cachos de plantas infectadas mostram amadurecimento prematuro em frutos isolados, seguindo-se escurecimento e apodrecimento. Em helicnias, os sintomas so semelhantes aos observados em bananeiras ocorrendo murcha, amarelecimento e necrose das folhas, iniciando-se geralmente pelas folhas mais novas. Fazendo-se cortes no pseudocaule prximos a regio do colo, constata-se descolorao dos vasos seguida de escurecimento da parte central, que cortada transversalmente evidencia exsudao bacteriana. Estes sintomas e sinais no so observados na parte superior do pseudocaule. Nas brotaes ocorre deformao foliar com enrolamento das folhas at necrose total. A bactria R. solanacearum apresenta-se como baciliforme, Gram negativa, no forma endosporos e move-se por meio de um tufo de flagelos polares (Tabela 6.1). Forma colnias esbranquiadas em meio Nutriente gar, e em meio de Tetrazlio as colnias virulentas apresentam-se fludas com colorao rsea e centro esbranquiado A grande variabilidade desta bactria torna necessria a utilizao de sistemas de classificao a nvel sub-especfico. So conhecidas a nvel mundial cinco raas e cinco biovares de R. solanacearum. As raas so definidas pela gama de hospedeiros. A raa 1 afeta um maior nmero de culturas (batata, tomate, berinjela, fumo, solanceas em geral e outras plantas). A raa 2 afeta banana e Helicnias,
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enquanto a raa 3 considerada especfica da batata, ocorrendo geralmente em regies mais frias, embora tambm infecte algumas solanceas. As raas 4 e 5 infectam o gengibre e a amoreira, respectivamente (Hayward, 1994). As biovares so definidas atravs da utilizao de acares e lcoois como nica fonte de carbono e formao de cidos a partir destes carboidratos, alm da produo de nitrito e gs a partir de nitrato (Hayward, 1995). A existncia das trs raas e trs das cinco biovares (1, 2 e 3) de R. solanacearum no Brasil, aliada ao vasto ciclo de hospedeiros, torna os aspectos epidemiolgicos relativos a esta bactria extremamente complexos. Levantamentos conduzidos nas diversas regies brasileiras, com nfase em solanceas, indicam a existncia da biovar 1 em todas as regies, da biovar 2 com predominncia em climas amenos (Sul, Sudeste e Centro-Oeste) e da biovar 3 no Norte e Nordeste. J a biovar N2 ocorre nas regies Centro-Oeste e Sudeste (Braslia, Goiania, Minas Gerais e So Paulo). Os isolados de helicnia encontrados em Pernambuco pertencem raa 2, biovar 1 (Assis et al., 2001). A disseminao de R. solanacearum pode ser realizada pelo solo, gua de superfcie, contato entre razes, transmisso mecnica por diversos tratos culturais (desbrota, poda, colheita e cultivo), mudas infectadas, rgos de propagao vegetativa (rizomas, tubrculos), sementes (em algumas culturas como o amendoim), implementos agrcolas, insetos, nematides e homem (Kelman et al., 1994) (Figura 6.3). Em helicnia, o grande intercmbio de germoplasma fator preponderante para disseminao, tanto a curta como a longa distncia. Em bananeira, os insetos visitadores de inflorescncias tambm constituem eficientes vetores, principalmente das estirpes que exsudam o pus bacteriano pelas brcteas florais e por outros ferimentos em partes da planta onde a bactria esteja presente. A penetrao de R. solanacearum no hospedeiro ocorre atravs de ferimentos ou aberturas naturais, principalmente nas razes. O corte da flor no cultivo de helicnia favorece a penetrao do inculo levado pelo instrumento de corte, e tambm daquele proveniente do solo, pois o corte da haste realizado bem na base da planta. Aps a penetrao, a bactria coloniza os vasos do xilema, dificultando o fluxo de gua e seiva, e provocando o sintoma externo de murcha. A colonizao tambm provoca degradao das paredes e clulas do parnquima adjacente, originando cavidades no floema, medula e tecido cortical, principalmente em rgos suculentos (Kurozawa & Pavan, 1997). A sobrevivncia e disseminao de R. solanacearum favorecida por condies de umidade elevada do solo, enquanto perodos secos reduzem a viabilidade do patgeno e diminuem a intensidade da doena. Em cultivo de banana, a sobrevivncia do patgeno diminui com o tempo, na ausncia do hospedeiro suscetvel, no dependendo do tipo de solo (Pereira & Normando, 1993). A multiplicao e a sobrevivncia de R. solanacearum por muitos anos no solo permitida devido a presena de plantas daninhas hospedeiras e plantas
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voluntrias que contribuem como fonte alternativa de inculo e para a manuteno dos nveis da bactria no solo (Jabuonski & Hidalgo, 1987).

Figura 6.3 Ciclo da murcha bacteriana causada por Ralstonia solanacearum em helicnia. A murcha bacteriana particularmente limitante em climas midos, com altitudes baixas e mdias, em regies tropicais e subtropicais. O controle de R. solanacearum extremamente difcil, principalmente devido a ampla gama de hospedeiros, alta variabilidade gentica e sobrevivncia no solo por longos perodos a grandes profundidades tornando o
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controle qumico invivel e anti-econmico. As principais medidas para o controle do patgeno incluem: uso de sementes e rgos de propagao vegetativa sadios; plantio em solos bem drenados, livres do patgeno ou supressivos; eliminao de plantas doentes, voluntrias e ervas daninhas utilizando-se roagem ou herbicidas; rotao de culturas por 2 a 5 anos; uso de cultivares com resistncia ou tolerncia; controle de nematides e resistncia aos mesmos; solarizao; manejo da umidade e do fluxo de gua; no utilizar gua contaminada para irrigao; evitar injrias durante o plantio, transplantio e tratos culturais; desinfestar equipamentos com NaClO (12,5% de cloro ativo); usar espaamento adequado para reduzir a possibilidade de transmisso entre razes; proteger a inflorescncia da bananeira para evitar a disseminao pelos insetos; enxertia de tomate sobre espcies como jurubeba e juna e correo do solo (Hayward, 1994; Kurozawa & Pavan, 1997; Lopes & Quezado-Soares, 1997; Robbs et al., 1994).

SARNAS COMUM E CIDA DA BATATA

As sarnas comum e cida, causadas respectivamente por Streptomyces scabiei (Thaxter) Lambert & Loria corrig. Truper & DeClari e S. acidiscabies Lambert & Loria, so importantes doenas em tubrculos de batata, causando grandes prejuzos devido a depreciao do valor comercial do tubrculo para consumo in natura, para processamento e produo de tubrculos-semente. A sarna comum j foi relatada em todos os continentes do mundo, sendo considerada a quarta doena mais importante da batata na Amrica do Norte (Slack, 1991). Alm da batata, ocorre em berinjela, beterraba forrageira, cebola, cenoura, couve-nabo, espinafre, nabo, pastinaca, rabanete, repolho, salsifis e salsa (Goto, 1992; Hooke, 1981; Souza Dias & Iamuti, 1997). J S. acidiscabies tem distribuio geogrfica mais limitada tendo sido relatada nos Estados Unidos e no Canad (Howard et al., 1996; Loria et al., 1997). A sarna comum ocorre na maioria das regies produtoras sendo mais severa em solos com pH acima de 5,2. A sarna cida importante em solos cidos com pH em torno de 4,5. No Nordeste, a sarna comum ocorre em batata nos estados de Pernambuco e Paraba , enquanto a sarna cida foi observada na Paraba em solos com pH = 4,7 e 4,9 (Mariano et al., 1992). Os sintomas da doena no so observados na parte area da planta, podendo ocorrer nas razes, tubrculos e estoles em contato com o solo. No entanto, os sintomas mais importantes ocorrem nos tubrculos, onde S. scabiei pode causar leses dos tipos elevada e deprimida e mais raramente superficial (Figura 6.4). Leses elevadas so as mais comuns, tendo a aparncia spera e corticosa (Loria et al., 1997). As leses tm de 5 a 10 mm e podem unir-se, possuindo colorao que varia de pardo-clara a escura. As
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leses tm superfcie irregular, chegando a ficar mais elevadas que o tecido sadio. Os sintomas da sarna cida, causada por S. acidiscabies, so idnticos aqueles produzidos por S. scabiei. Streptomyces scabiei e S. acidiscabies produzem toxinas denominadas taxtominas, que atualmente so conhecidas como Taxtominas 1-5. A aplicao destas toxinas, individualmente, a tubrculos imaturos pode causar a formao de uma leso tipo sarna aps 24 h (Lawrence et al., 1990). Entre outras funes, a taxtomina pode afetar direta ou indiretamente a biossntese da suberina no local da infeco e tem um papel crtico na formao da leso sendo importantes determinantes de patogenicidade na sarna comum da batata (Schottel, 1995). Leses elevadas em tubrculos de batata resultam da hipertrofia das clulas enquanto que a morte celular induzida por toxinas resulta em leses deprimidas. O tipo de leso produzida pode ser funo da concentrao da taxtomina no local de infeco. Plantas e tubrculos adultos adquirem resistncia taxtomina A (Loria et al., 1997). Streptomyces scabiei assemelha-se a um fungo na sua morfologia micelial, porm difere nos filamentos miceliais muito finos, areos, cinza, com cadeias em espiral de esporos soltos, com 1 m de dimetro (Tabela 6.1).O lado reverso da colnia de colorao dourada a castanho. O miclio tem poucos septos que podem ser ausentes. Os esporos so cilndricos, medindo 0,5 x 0,9 a 1,0 m (Howard et al., 1994), apresentam-se lisos e o organismo produz pigmentos melanides em meios apropriados (Davies & Williams, 1970). Contudo, existem relatos de que alguns isolados possuem esporos equinulados e ainda que outros isolados tm esporos lisos em cadeias retas a curvas e no produzem pigmentos melanides. O pH mais baixo para o crescimento deste organismo 5,0. Utiliza L-arabinose, Dfrutose, D-glucose, D-manitol, ramnose, sacarose, D-xilose e rafinose, porm no usa xantina como nica fonte de carbono. Essa espcie susceptvel a 20 g/mL de estreptomicina e 0,5 a 20 g/mL de cristal violeta. J S. acidiscabies, produz colnias de colorao branca, laranja-palha, amarelopalha ou laranja-cinza-palha com cadeias flexuosas de esporos. O lado reverso da colnia de cor amarela escura. Essa espcie no produz pigmentos melanides e possui cadeias flexuosas formadas por 20 ou mais esporos, com 0,4 x 0,5-0,6 ou 0,9-1,1 m, retos e brancos, sendo avermelhados em certos meios com pH alto. O pigmento solvel vermelho em pH 8,3 porm amarelo-dourado abaixo de 8,3. Este organismo utiliza L-arabinose, D-frutose, D-glucose, D-manose, ramnose, sacarose e D-xilose porm no usa rafinose como nica fonte de carbono. O pH mais baixo para o crescimento 4,0, sendo tolerante a 20 g/mL de estreptomicina e 0,5 g/mL de cristal violeta. A espcie S. acidiscabies distingue-se de outros Streptomyces patognicos pela produo de pigmento vermelho, massa de esporos branco a avermelhado e ser cido-resistente (Goto, 1992).

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Streptomyces scabiei e S. acidiscabies sobrevivem saprofticamente no solo e em restos de cultura na forma vegetativa micelial ou de esporos, podendo ser disseminados pela chuva, vento, tempestades de areia e tubrculos infectados (Howard et al., 1994) (Figura 6.4). Em batata, penetram atravs das lenticelas, geralmente, durante as primeiras cinco semanas do desenvolvimento do tubrculo. Se os tubrculos esto secos durante o perodo, as bactrias antagnicas aos patgenos, normalmente presentes nas lenticelas, desaparecem, facilitando a infeco. Alm disso, em solos secos, durante o crescimento do tubrculo so produzidos ferimentos pelos quais os patgenos penetram. Em outros hospedeiros, a penetrao ocorre pelas lenticelas imaturas de tecidos jovens e ferimentos causados pelos insetos. Aps a penetrao, os patgenos colonizam inicialmente os espaos intercelulares e logo aps os intracelulares e em seguida forma-se uma camada corticosa ao redor do tecido infectado, que ao intensificar-se empurra a periderme para o exterior tornando a superfcie spera e suberificada, resultando no sintoma da sarna. Solos midos com elevada taxa de crescimento de antagonistas e concentraes reduzidas de oxignio so fatores capazes de inibirem os agentes da sarna (Howard et al., 1994). As principais prticas adotadas no controle da sarna so: evitar plantio em solos com alto teor de matria orgnica; irrigao por 4 a 6 semanas no perodo inicial de formao do tubrculo; uso de batata-semente certificada; desinfestao do solo com cloropicrina, PCNB ou solarizao; rotao de cultura com cereais ou gramneas por pelo menos trs anos; utilizao de cultivares resistentes; desinfestao dos tubrculos-semente com os compostos tiofanato metil-estreptomicina, compostos de cobre ou PCNB; acidificao do solo com enxofre at pH 5,2, sendo a lenta acidificao pela adubao nitrogenada mais aconselhvel e evitar excesso de calcrio na correo do solo (Goto, 1992; Lopes & Quezado-Soares, 1997; Souza Dias & Iamauti, 1997). O controle biolgico da sarna comum da batata parece ser uma grande promessa, principalmente pelo uso de isolados do gnero Streptomyces antagnicos a S. scabiei. Isolados desse antagonista foram obtidos de tubrculos, em solo que se tornou supressivo sarna aps 23 anos de monocultura de batata (Lorang et al., 1989). Liu et al. (1995) verificaram que isolados de Streptomyces diminuram a severidade da sarna em experimentos de campo.

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Figura 6.4 Ciclo da sarna comum causada por Streptomyces scabiei em batata.

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MANCHA-AQUOSA DO MELO
O melo uma espcie da famlia Cucurbitaceae, cuja produo uma atividade de grande importncia econmica para o Nordeste do Brasil. Essa regio responsvel por aproximadamente 74% da produo nacional, principalmente nos estados do Rio Grande do Norte e Cear. O Agropolo RN-CE responsvel por 95% do melo produzido no Nordeste, sendo sua produo direcionada principalmente para o mercado externo. Esta cultura pode ser comprometida devido ocorrncia de vrias doenas, destacando-se a mancha-aquosa, causada pela bactria Acidovorax avenae subsp. citrulli (Schaad et al.) Willems et al., sobretudo durante o perodo chuvoso. Esta doena foi descrita primeiramente em melancia nos EUA em 1965, depois em melo e abbora. A mancha-aquosa ou mancha bacteriana dos frutos ocorre nos EUA, Austrlia, ndia e Brasil. No Brasil, esta doena ocorre nas regies Nordeste, Sudeste e Centro-Oeste (Robbs et al., 1992). Em 1997 a A. avenae subsp. citrulli foi detectada no Rio Grande do Norte (Assis et al., 1999) e, posteriormente, no Cear (Santos & Viana, 2000) e Pernambuco (Comunicao pessoal, Daniel Terao - EMBRAPA) com altos ndices de infeco, depreciando comercialmente o fruto. Todos os tipos de melo apresentam susceptibilidade, incluindo Amarelo, Orange, Pele de Sapo, Charantais e Glia. Os sintomas da mancha-aquosa manifestam-se em qualquer fase de desenvolvimento da planta. As leses podem ocorrer em plntulas, folhas, ramos e frutos, sendo mais comuns e facilmente visualizadas nos frutos. Plntulas oriundas de sementes infectadas quando no entram em colapso total, apresentam extensas manchas encharcadas que progridem para verdeescuras e marrons nos cotildones e s vezes necrose no hipoctilo. Nas folhas, as manchas so inicialmente pequenas, com aspecto oleoso. Posteriormente, tornam-se necrticas (marrom-escuras) com ou sem halo e em alguns casos apresentam-se como manchas angulares, estendendo-se at a nervura central da folhas (Hopkins et al., 1996). No h evidncias de infeco sistmica com murcha ou desfolhamento da planta. Os sintomas mais tpicos da doena apresentam-se nos frutos maduros antes da colheita, embora a infeco ocorra durante a florao e formao destes (Isakeit, 1999). As leses nos frutos so inicialmente pontos oleosos com 1 a 3 mm de dimetro, os quais se expandem e se tornam manchas marrons, necrticas com ou sem rachaduras no centro. Essas rachaduras podem servir como porta de entrada para outros microrganismos que aceleram o apodrecimento do fruto. As leses necrticas localizam-se na superfcie do fruto que no entra em contato com o solo, progredindo rapidamente (7 a 10 dias) para uma maior rea, antes da colheita. A bactria,

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em geral, coloniza a polpa do fruto, onde causa podrido seca, contaminando as sementes externa e internamente atravs da regio do hilo, o que dificulta a erradicao (Isakeit, 1999). Acidovorax avenae subsp. citrulli apresenta-se como bastonetes Gram negativos, aerbicos e mveis por um flagelo polar (Tabela 6.1). Apresenta bom crescimento em meio de cultura de rotina como gar nutritivo-extrato de levedura-dextrose onde forma colnias pequenas com 0,7 a 1,0 mm, brancas ou cremes. Cresce a temperatura de 41C, mas no a 4C. No hidrolisa a arginina e apresenta reao positiva para os testes de catalase, oxidase, urease e lipase, bem como reao de hipersensibilidade a fumo, variando de acordo com o isolado. Sementes contaminadas, plntulas infectadas e restos culturais, constituem as principais fontes de inculo da bactria (Hopkins et al., 1996) (Figura 6.5). A disseminao do inculo, a longa distncia, ocorre principalmente por sementes contaminadas. Aps a germinao, a bactria facilmente disseminada para plntulas/plantas vizinhas atravs de respingos de gua de chuva, irrigao por asperso e tratos culturais. As leses nas folhas das plantas so importante fonte de inculo para os frutos, que por sua vez, quando maduros servem como inculo para o prximo plantio. A penetrao da bactria ocorre tanto na folha como no fruto atravs de aberturas naturais e/ou ferimentos. Frutos em estdio inicial de formao so mais susceptveis, uma vez que frutos maduros apresentam a sua superfcie coberta por uma espessa camada de cera que dificulta a penetrao da bactria pelos estmatos (Frankle, 1993). Aps a penetrao no fruto, a bactria, possivelmente, permanece em estado latente at o incio do amadurecimento quando se multiplica intensamente, atingindo a polpa e as sementes (O' Brien & Martin, 1999). Aparentemente, a A. avenae subsp. citrulli no sobrevive no solo mais do que algumas semanas, na ausncia de uma planta hospedeira (Isakeit, 1999). No entanto, as sementes oriundas de frutos infectados abandonados no solo e, posteriormente, incorporados ao mesmo, servem de fonte de inculo primrio para o prximo plantio, j que as mesmas germinam resultando em plantas espontneas ou voluntrias infectadas. A bactria sobrevive tambm em hospedeiras alternativas como as cucurbitceas nativas: melo-de-so-caetano, bucha (Santos & Viana, 2000) e maxixe (Comunicao pessoal, Prof. Rui Sales - ESAM), todas presentes em reas de cultivo de melo. No entanto, a semente o veculo mais importante na sobrevivncia da bactria, havendo relatos de transmisso da doena aps armazenamento da semente por 12 meses (Hopkins et al., 1996).

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Figura 6.5 Ciclo da mancha-aquosa causada por Acidovorax avenae subsp. citrulli em melo.

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O progresso da doena favorecido por temperatura e umidade altas. Infeces bem sucedidas podem ocorrer com perodo de 30 min de molhamento foliar a temperatura de 26C (Latin, 2000). A principal medida de controle preconizada para a mancha-aquosa do melo o uso de sementes sadias ou certificadas. No entanto, a desinfeco de sementes com hipoclorito de sdio 0,5% por 20 min, cido clordrico 1,8% por 5 min (Rane & Latin, 1992) ou cido ltico 2% por 20 min (Santos & Viana, 2000), tem diminudo consideravelmente a transmisso no campo, embora no tenha conseguido erradicar a bactria dos lotes de sementes infectadas natural e/ou artificialmente. O tratamento hidrotrmico das sementes a 52C por 10 min uma medida recomendada pela EMBRAPA, uma vez que no interfere na fisiologia da semente e consegue diminuir a transmisso no campo (Santos & Viana, 2000). Para a proteo, recomendam-se pulverizaes preventivas semanais com fungicidas a base de cobre (Tabela 6.3), logo no incio da formao dos frutos prolongando-se at o incio de maturao dos mesmos. No entanto, esta medida tem pouca eficincia em perodos chuvosos e pode causar problemas de fitotoxidez. Outras medidas de controle, principalmente aps a entrada da bactria no campo so: rotao de culturas com espcies de outras famlias botnicas por, pelo menos, 1 a 2 anos; erradicao de plntulas/plantas com sintomas, bem como plantas voluntrias; evitar plantio na poca chuvosa; destruir restos de culturas, principalmente em campos infectados e evitar movimentao de pessoas ou implementos no campo quando as plantas estiverem molhadas por orvalho, irrigao ou chuva e evitar plantio direto (Isakeit, 1999; O' Brien & Martin, 1999; Latin, 2000). Esta ltima medida serve para evitar a entrada de fitopatgenos em cultivo comercial, sendo as plntulas doentes eliminadas ainda na bandeja.

CANCRO BACTERIANO DA VIDEIRA

A videira pode ser cultivada, praticamente, em todo o territrio nacional. Alm dos estados do Rio Grande do Sul, Santa Catarina, Paran, So Paulo, Minas Gerais, Bahia e Pernambuco onde a cultura j est estabelecida, a viticultura se expandiu para outras regies no decorrer dos ltimos anos (Kuhn et al., 1986). O Vale do So Francisco a principal regio produtora e exportadora de uvas de mesa do Brasil, onde a videira possui uma grande importncia scioeconmica pelo rendimento de divisas e grande nmero de empregos gerados. A intensificao do cultivo de videira, o plantio de variedades suscetveis, alm das condies climticas prevalentes na regio, tm propiciado o surgimento de problemas fitossanitrios, afetando diretamente a

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produo e a produtividade, principalmente nos perodos aps a poda (Tavares, 1995). No Brasil, o cancro bacteriano causado pela bactria Xanthomonas campestris pv. viticola (Nayudu) Dye foi detectado, pela primeira vez em 1998, em parreirais do Submdio do Vale do So Francisco, onde a doena vem causando prejuzos em cultivares suscetveis (Malavolta et al., 1999). Esta bactria, anteriormente assinalada apenas na ndia (Nayudu, 1972), tambm patognica a plantas de neem, Phyllanthus maderaspatensis e manga (Chand & Kishun, 1990b). Em inoculaes artificiais, X. campestris pv. viticola foi patognica mangueira, cajueiro, umbuzeiro, caj-manga e aroeira (Arajo et al., 1999). A bactria tambm foi detectada em porta-enxertos assintomticos de IAC 572 e sintomticos de IAC 766, ambos enxertados com a cultivar suscetvel Red Globe (Lima & Ferreira, 2000; Nascimento et al., 2000), o que sugere a sobrevivncia da bactria nesses porta-enxertos. Nas folhas, os sintomas so caracterizados por leses escuras, pequenas (1-2 mm de dimetro) e angulares, distribudas de forma esparsa, mas podendo se concentrar em grande nmero nos bordos da folha ao redor de ferimentos e das nervuras. Essas leses, quando coalescem, causam crestamento e a destruio de extensas regies do limbo foliar. Pode ocorrer tambm, nas folhas, a formao de manchas setoriais e pardacentas. Nos ramos, observam-se externamente o escurecimento de extensas reas, muitas vezes acompanhado de necrose e formao de cancros, que chegam a 3-5 cm de extenso. Na regio de ocorrncia dos cancros, nota-se descolorao vascular, que se estende por vrios centmetros. Sintomas semelhantes podem ser observados na rquis. Nas bagas, visualizam-se leses escuras e grosseiramente arredondadas, com dimetro de 1-3 mm, semelhantes a cancros (Malavolta et al., 1999). A bactria X. campestris pv. viticola, anteriormente denominada de Pseudomonas viticola sp. nov. (Desai et al., 1966) Gram negativa, com dimenses de 0,6 x 1,2 - 2,5 , possui um flagelo polar e metabolismo aerbico (Tabela 6.1). As colnias so arredondadas, convexas, brilhantes com bordos lisos e colorao esbranquiada em meio gar nutritivo, pois no produz xantomonadina. No utiliza o nitrato como fonte de nitrognio, mas cresce bem em sais de amnio e cido glutmico, tendo melhor crescimento, entretanto, em casena hidrolisada (Nayudu, 1972). Xanthomonas campestris pv. viticola pode ser introduzida em parreirais, onde a doena ainda no ocorre, veiculada em mudas ou bacelos infectados, os quais iro originar plantas doentes. A disseminao da bactria pode ocorrer atravs de restos de cultura infectados espalhados pelo pomar ou aderidos em roupas, veculos, mas principalmente em contentores, tesouras e luvas no desinfestadas utilizadas na colheita de frutos de plantas doentes. Tratos culturais como desbrota, poda, raleio de bagas, colheita, toro de
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ramos, capina, gradagem, roagem e, at as pulverizaes, favorecem a disseminao da bactria no parreiral. Dentro de um talho, a bactria disseminada por respingos de gua de chuva ou de irrigao, principalmente do tipo sobre-copa, como asperso convencional e piv central. Apesar da curta estao chuvosa da regio do Vale do So Francisco, nesse perodo a disseminao da bactria ocorre mais rapidamente e a infeco pode ser mais intensa. O vento seco no dissemina a bactria, sendo necessrio sempre a presena de gua. A disseminao do cancro bacteriano dentro do pomar pode ocorrer mais rapidamente que a transmisso entre pomares. Em condies de umidade e temperaturas elevadas a bactria sobrevive apenas em restos culturais mas no isoladamente no solo. Todos os agentes de ferimentos so importantes para a penetrao de bactria destacando-se os tratos culturais e ventos fortes. Aps a penetrao, a bactria multiplica-se rapidamente colonizando os espaos intercelulares e atingindo os vasos, sendo transmitida a todos os rgos da planta (Figura 6.6). Temperaturas em torno de 25-30C e alta umidade relativa do ar proporcionam condies favorveis ao desenvolvimento do patgeno (Chand & Kishun, 1990a). Estratgias para o manejo do cancro bacteriano em campo incluem: uso de material propagativo sadio e certificado na instalao do parreiral; evitar as variedades mais suscetveis como a Red Globe; realizao de inspees peridicas no pomar, se possvel semanalmente, para a deteco de focos iniciais de infeco; eliminao de plantas vivas doentes (plantas severamente infectadas devem ser arrancadas, inclusive as razes, e incineradas imediatamente no local), nas reas erradicadas, aconselhvel no plantar videira por um perodo de at seis meses; destruio dos restos de cultura; poda drstica e posterior pincelamento dos cortes com pasta cprica; programao da poda do pomar de modo a evitar que os estdios compreendidos entre brotao e chumbinho coincidam com o perodo de ocorrncia de chuvas; eliminao das plantas suscetveis; desinfestao de veculos, equipamentos e materiais de poda, raleio e colheita com amnia quaternria (Quatermon 1 litro/1000 litros de gua) (Nascimento et al., 2000) e proteo do pomar com fungicidas cpricos, principalmente no perodo das chuvas (Tabela 6.3) (Chand et al., 1994).

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Figura 6.6 Ciclo do cancro bacteriano causado pela bactria Xanthomonas campestris pv. viticola em videira.

BIBLIOGRAFIA Agrofit. Sistema de produtos fitossanitrios do Ministrio de Agricultura e Abastecimento. [online]. Braslia. 1998. Disponvel na internet: < http://www.agricultura.gov.br/agrofit/>. Acesso em: 08 ago. 2001.
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ESTRATGIAS E MTODOS APLICADOS AO CONTROLE DE FITOVIROSES
GENIRA PEREIRA DE ANDRADE GILVAN PIO-RIBEIRO

INTRODUO
As doenas de plantas causadas por vrus tm despertado grande interesse entre as pessoas envolvidas com a agricultura, no somente pelos elevados danos causados produo de importantes culturas em todo o mundo, como tambm pelas dificuldades encontradas para realizao de diagnoses seguras e implementao de medidas eficientes de controle. Normalmente, na elaborao de um programa de controle amplo para uma fitovirose, procuram-se reunir diferentes medidas pertencentes aos princpios gerais de excluso, erradicao, proteo, imunizao, terapia, evaso e regulao, que atuam nos componentes do tringulo da doena: planta, patgeno e ambiente. Na seleo e implementao das medidas, so levadas em considerao as caractersticas tpicas do patgeno, quanto s suas propriedades intrnsecas, biolgicas e epidemiolgicas, alm de fatores de carter econmico e demais componentes includos na equao de produo como: cultivar, tratos culturais, controle de outras doenas, ervas daninhas e pragas, etc. Desta maneira, visa-se o controle das fitoviroses como um componente da agricultura sustentvel, a qual tem como base, no somente a relao custo/benefcio, como tambm a minimizao dos efeitos danosos ao agroecossistema.

ESTRATGIAS BSICAS DE CONTROLE

Segundo sua natureza, as medidas de controle das fitoviroses podem ser reunidas em quatro grupos, formando um conjunto de estratgias bsicas: Obteno e utilizao de material propagativo livre de vrus Eliminao de fontes de vrus Atuao contra vetores de vrus
Michereff, S.J. & Barros, R. (Eds.) Proteo de Plantas na Agricultura Sustentvel. 2001. Recife, UFRPE

Direitos de edio reservados aos editores ISBN 85-87459-06-6

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 Uso de material resistente a vrus, obtido por melhoramento gentico e/ou por induo de resistncia A formulao e aplicao dessas estratgias em casos especficos requerem a identificao dos pontos chaves onde se deve atuar, com base no conhecimento dos aspectos ecolgicos do vrus e epidemiolgicos da fitovirose.

Obteno e utilizao de material propagativo livre de vrus (MPLV)

Esta estratgia de controle de vrus baseia-se no princpio geral de excluso, sendo de fundamental importncia para manuteno e intercmbio de germoplasma, plantio de culturas propagadas vegetativamente, implementao de culturas perenes e nos cultivos de plantas anuais na presena de altas densidades populacionais de vetores, que transmitem eficientemente os vrus a partir de plantas foco.
Obteno de material sadio por meio de seleo ou da produo de matrizes, atravs de limpeza clonal

A seleo de material sadio se faz por meio de inspeo de campo e anlise clnica, amostragem de material para anlise laboratorial e indexao em relao a vrus. Esta metodologia pode ser aplicada para batatinha (Solanum tuberosum L.) batata-doce (Ipomoea batatas (L.) Lam.), pimenta do reino (Peper niger L.), amendoim (Arachis hypogaea L.), etc. A eliminao de vrus visando limpeza clonal pode ser obtida atravs de termo e/ou quimioterapia, cultura de meristema (ou pices caulinares), cultivo de embrio, clones nucelares (embries somticos) e sementes botnicas. A quimioterapia feita pela utilizao de anlogos de purinas e pirimidinas (8-azaguanina e 2-1-tiouracil) como adjuvantes para a tcnica de cultura de meristema apical, com a qual clones preferidos pelos produtores se tornam livres de infeces virais. A termoterapia consiste em manter por vrias semanas as plantas infectadas e em crescimento ativo em ambiente com 35-40 C. Adota-se para o tratamento a temperatura mais elevada tolerada pelo vegetal. Em alguns casos o(s) vrus desaparece(m) do material propagativo, e em outros no, sendo detectados nos repetidos testes de averiguaes posteriores. Estes testes so imprescindveis, pois permitem revelar infeco onde aparenta no existir.

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Em sementes verdadeiras o tratamento trmico eficiente apenas para os vrus veiculados externamente, uma vez que, para os localizados no embrio, o tratamento trmico inviabilizaria a semente. A aplicao de cultura de meristema (ou pices caulinares) na obteno de plantas livres de vrus se baseia no fato de que a distribuio dos vrus no hospedeiro suscetvel herbceo ou perene no uniforme. H tecido preferencialmente infectado, enquanto outros contm quantidades nfimas ou esto livres do patgeno. Clulas meristemticas nos pices das brotaes permanecem sem vrus por algum tempo, dando ensejo a se desenvolverem plntulas avirticas, uma vez transferidas da planta para meios de cultura apropriados. A cultura de meristema apical largamente usada para produzir estoque de plantas propagadas vegetativamente. Matrizes sadias provenientes de plantas doentes podem ser obtidas pelo uso de cultura de embries nucelares. Esta tcnica bastante utilizada em citricultura, baseia-se no fenmeno da poliembrionia observado no processo de germinao das sementes, no qual os embries so originados do ncleo do vulo ao lado do embrio gamtico. Os embries nucelares copiam, essencialmente, a totalidade das caractersticas da planta original, enquanto o gamtico se desenvolve numa planta que mostrar as variaes decorrentes da recombinao de fatores. J que nos vrus de plantas ctricas, as sementes de plantas virticas normalmente originam plantas avirticas, utilizam-se os embries nucelares como um meio de revitalizar os clones, livrando-os de viroses, atravs da obteno de matrizes bsicas livres de vrus. A obteno e propagao de material pelo processo de limpeza clonal so realizadas em larga escala em laboratrios denominados de biofbricas.
Programa de certificao de sementes e material de propagao vegetativa

Um programa de certificao de sementes e material de propagao vegetativa em escala comercial utiliza procedimentos baseados em dois aspectos: Exame visual para a constatao da ausncia de sintomas especficos: na cultura que produziu o material (inspeo de campo), no eventual produto (inspeo a granel), e em plantas retiradas de amostras ao acaso do produto. Indexao de rotina para a constatao da ausncia de vrus por testes de infectividade, sorologia ou moleculares: em amostras de cultura de planta-me que produziu o material (inspeo de campo), em amostras de material comercial e em plantas obtidas dessas amostras.
Servios de quarentena
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Os servios de quarentena possuem uma importncia inestimvel para a agricultura, os quais so consolidados atravs de legislaes fitossanitrias promulgados por rgos governamentais com vigncia em nvel regional, nacional e internacional. As medidas quarentenrias so executadas atravs de proibio, fiscalizao e interceptao do trnsito de plantas ou produtos vegetais.

Eliminao de fontes de vrus

Alm da eliminao de vrus realizada para obteno de material propagativo sadio, caracterizada como medida de Excluso, vrias outras formas podem ser efetivadas dentro e fora do campo da cultura, como medida de Erradicao. A erradicao de hospedeiros silvestres, plantas voluntrias (remanescentes) e fontes de inculo primrio na cultura (rouguing), embora possa contribuir para o controle de fitovrus, possui limitaes decorrentes da possibilidade de ocorrer plantas com sintomas tardios, infeces latentes ou mascaradas, alm de hospedeiros silvestres que atuam como fonte contnua dos vrus. A desinfestao de ferramentas usadas em podas e de outros implementos agrcolas, muitas vezes necessria. Uma outra medida evitar cultivos seqenciados e eliminar insetos vetores, nos casos de vrus persistentes no vetor, especialmente quando propagativo.

Atuao contra vetores de vrus

Alm So vrias as formas de reduzir a ao dos vetores: Uso de determinados defensivos agrcolas, dependendo do tipo de vetor envolvido na transmisso do vrus: aplicaes de inseticida sistmico (vrus persistentes) e leo mineral (vrus no persistentes); nematicidas, fungicidas, acaricidas; Uso de cultivares resistentes aos vetores (antibiose e/ou no preferncia); Cultivo em determinadas reas e/ou pocas, visando a fuga em relao presena de vetores ou a coincidncia de alta populao durante a fase inicial do ciclo de culturas anuais; Destruio de hospedeiros hibernantes de insetos vetores e nematides, prximos ou na rea cultivada; Uso de barreiras vegetais que impedem o movimento dos insetos vetores dentro da cultura e uso de telado para cultivo intensivo;

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 Aplicao de repelentes ou superfcies reflectivas, tais como cobertura morta, folha de alumnio e uso de armadilhas.

Uso de material resistente a vrus, obtido por melhoramento gentico e/ou por induo de resistncia
Melhoramento gentico

Muitas variedades comerciais de plantas tm sido deliberadamente ou impropositadamente selecionadas para minimizar a incidncia e efeito de doenas, incluindo aquelas causadas por vrus. Genes de resistncia, hipersensibilidade ou imunidade tm sido procurados, encontrados e incorporados s variedades comerciais, contudo, muitas dificuldades so constatadas nessa incorporao, principalmente por razes de ordem tcnica e econmica. Na impossibilidade de localizar a fonte de imunidade ou resistncia, a soluo para o problema de viroses pode consistir no uso de cultivares tolerantes ao vrus, ou ento, de combinaes enxerto/portaenxerto resistentes, em se tratando de fruteiras. A diversidade gentica encontrada em materiais silvestres, incluindo resistncia a vrus, tem sido utilizada em programas de melhoramento, atravs de cruzamentos e seleo de prognies, fuso de protoplastos (quando no h compatibilidade para o cruzamento), entre outros. A durabilidade da resistncia tem sido varivel dependendo principalmente do surgimento de estirpe nova do vrus na rea de cultivo. Na Tabela 7.1 so apresentados os possveis comportamentos varietais de plantas em relao a um determinado vrus. Tabela 7.1 Possveis comportamentos varietais de plantas em relao a um determinado vrus.
Tipo de comportamento Imunidade* Suscetibilidade Hipersensibilidade Resistncia Tolerncia Sintomas no sim (severo) sim (leso locais ou morte) sim (suave) sim (suave) Replicao viral no sim (alta) sim (baixa) sim (baixa) sim (mdia ou alta)

*Difcil de ser determinada, uma vez que, baixos nveis de replicao viral sem sintomas podem ocorrer sem serem devidamente detectados

Induo de resistncia

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A induo de resistncia pode ser obtida atravs da inoculao de estirpes fracas de vrus, processo conhecido como premunizao ou proteo cruzada e por transformao de plantas com transgenes. Quando se utiliza transgene viral, a semelhana da premunizao, este processo enquadra-se na categoria de resistncia derivada do patgeno. A premunizao um mtodo utilizado com sucesso na citricultura para o controle da tristeza dos citros (Citrus tristeza vrus - CTV) e em maracuj, na Austrlia, contra o endurecimento dos frutos (Passionfruit woodiness vrus PWV). Em diversos casos em que a premunizao mostrou-se eficiente no incio, como por exemplo, contra o mosaico do mamoeiro (Papaya ringspot vrus - PRSV), a resistncia foi quebrada devido o surgimento e/ou predominncia de estirpes fortes. So citadas como desvantagens da proteo cruzada: baixa eficincia devido a escape, mutao de estirpe fraca, sinergismo com outro vrus, estirpe fraca pode infectar outras culturas e inoculao difcil em muitos casos. Atualmente, grande esforo est sendo aplicado no sentido de produzir plantas transgnicas com genes do genoma viral, as quais apresentam elevado grau de resistncia. Semelhantemente a premunizao, tm sido observados casos de quebra de resistncia. No processo de transformao, so empregados vrios tipos de cultivo in vitro (cultivo de clulas, protoplastos, caules, etc.), alm de diferentes mtodos de transferncia dos transgenes.

EXEMPLOS DE CONTROLE DE DOENAS CAUSADAS POR VRUS Mosaico do mamoeiro

O mosaico do mamoeiro tambm conhecido como mancha anelar do mamoeiro, mancha em anel do mamoeiro, deformacion foliar, manchas en anillos, Papaya distortion ringspot, Faint mottle ringspot e Mancha en anel de la papaya. A doena tem como agente causal o Papaya ringspot virus PRSV do gnero Potyvirus, famlia Potyviridae, vulgarmente conhecido como vrus da mancha anelar do mamoeiro , que apresenta como sinonmias: vrus do mosaico do mamoeiro, papaya (papaw) mosaic virus, e watermelon mosaic virus 1. O mosaico do mamoeiro foi reconhecido, pela primeira vez, no Brasil em 1967, na regio de Monte Alto, em So Paulo. Mais tarde, foi relatado no Cear, Paran, Pernambuco, Rio de Janeiro, Distrito Federal, Rio Grande do Sul, Esprito Santo e Bahia, estando, atualmente, disseminado por todas as reas produtoras do pas.

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O vrus apresenta dois tipos de isolado: o tipo P que infecta mamo e algumas cucurbitceas e o tipo W que causa doena em melancia e outras cucurbitceas, no infectando o mamo. O mosaico do mamoeiro pode ser considerado como um fator limitante da cultura em reas tropicais e subtropicais, na medida em que afeta diretamente a produo em termos quantitativos, havendo, ainda, diminuio do valor comercial dos frutos doentes por apresentarem manchas. Sua ocorrncia pode induzir o abandono da cultura ou da rea, bem como diminuir o perodo de produo econmica. Em 1969, constatou-se, em So Paulo, algumas plantaes com 50 a 100% de plantas infectadas, o que reduziu consideravelmente a produo. Em pomares de Pernambuco foi observado mais de 90% de plantas infectadas, num perodo de 7-10 meses, causando uma reduo de cerca de 70% na produo.
Controle Excluso

- Implantao do pomar com mudas sadias, e distante de outras plantaes onde a doena ocorra. - Evitar o crescimento de cucurbitceas nas proximidades do pomar.
Erradicao

- Eliminao sistemtica de plantas doentes e mamoeiros velhos de plantaes abandonadas. - Rotao de cultura e formao de barreiras com outras plantas, como pinheiro, milho, arroz, cana-de-acar, etc.
Proteo

- Controle de afdeos vetores, inclusive fazendo a manuteno do pomar limpo para evitar a formao de colnias de afdeos nas plantas daninhas.
Imunizao

- A variedade IAC-98 apresentou, em testes de campo, alto nvel de tolerncia. - O controle do mosaico do mamoeiro atravs de premunizao (proteo cruzada) vem sendo utilizado, experimentalmente, com alguns resultados positivos, porm no tem sido uma alternativa adequada devido estabilidade das estirpes fracas selecionadas, havendo quebra da proteo. O uso de cultivares transgnicos, transformados com o gene da capa protica do PRSV, abre novas perspectivas de controle.

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Evaso

- Plantio em reas onde no ocorra a virose. - Plantio em reas de menor populao de afdeos.

Mosaico severo do caupi

O mosaico severo caupi tambm conhecido como mosaico severo do feijo macassar e cowpea severe mosaic. causado pelo Cowpea severe mosaic virus - CPSMV, do gnero Comovirus, famlia Comoviridae e apresenta as seguintes sinonmias: vrus do mosaico da Vigna, subgrupo severo do vrus do mosaico da Vigna, cowpea mosaic vrus - Severe Strain, cowpea mosaic severe subgrupo, Arkansas cowpea mosaic virus e Trindad cowpea mosaic virus. Esta doena, constitui-se em um dos principais problemas fitopatolgicos da cultura no Brasil, pelo fato de encontrar-se disseminado em todas as regies produtoras e induzir uma reduo na produo de gros de at 80 %, dependendo da idade da planta na poca da infeco, nmero de plantas infectadas, susceptibilidade e ciclo de cultivar. Em plantas inoculadas mecanicamente, pode ocorrer morte, dependendo da cultivar envolvida e da concentrao de partculas de vrus no inculo. O vrus infecta naturalmente espcies silvestres e cultivadas da famlia leguminosa e, experimentalmente, pode infectar poucas espcies de outras famlias.
Controle Erradicao

- Diminuio do inculo e retardamento ao mximo da disseminao do patgeno, atravs da eliminao de plantas de caupi remanescente de cultivos anteriores e de outros hospedeiros naturais.
Proteo

- Controle de insetos vetores de vrus.

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Imunizao

- Utilizao de cultivares resistentes, como, por exemplo, a cv. Macaibo, Roxo-r, TVU-1250, CNCx87-7E, TVU-612, CNCx11-9D, CNC-0434, BR 10 Piau, BR 14 Mulato.
Evaso

- Plantio em reas onde no ocorra a virose.

Endurecimento dos frutos do maracujazeiro

O Endurecimento dos frutos do maracujazeiro que tambm conhecido como Woodiness do maracuj, tem como agente causal o Passionfruit woodiness virus - PWV, do gnero Potyvirus, famlia Potyviridae. A doena foi inicialmente relatada na Austrlia, causando grandes prejuzos cultura. No Brasil, a partir da dcada de 1970, foi constatada na Bahia e em Pernambuco, encontrando-se atualmente disseminada nas principais reas produtoras do Nordeste. O PWV causa srios danos cultura, reduzindo significativamente a produtividade, a longevidade da planta atacada e a qualidade dos frutos. A forma de introduo do PWV no Brasil ainda desconhecida. Cogitase que este patgeno j ocorria no pas de uma forma menos severa, mas com a rpida expanso da cultura do maracuj nas ltimas dcadas, houve condies para o aparecimento de estirpes mais severas.
Controle Excluso

- Evitar a entrada do vrus em regies que ainda no ocorra, impedindo a introduo de mudas doentes. A produo de mudas deve ser efetivada fora das regies de cultivo do maracuj, onde foi constatada a virose.
Erradicao

- Eliminao de plantas doentes e renovao da cultura e eliminao de hospedeiros alternativos do patgeno.

Proteo

- O controle da doena pelo combate aos insetos vetores tem demonstrado pouca eficincia.
Imunizao

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- A premunizao das plantas com estirpes fracas do vrus empregada como forma de controle na Austrlia.

- Utilizao de maracujazeiros hbridos (P. edulis x P. edulis f. flavicarpa) tolerantes ao PWV.

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DIAGNOSE E MANEJO DE DOENAS DAS FRUTEIRAS TROPICAIS NO NORDESTE BRASILEIRO
SNIA MARIA ALVES DE OLIVEIRA SELMA CAVALCANTI CRUZ DE HOLANDA TAVARES SUZANA ALENCAR FREIRE DANTAS

INTRODUO
A fruticultura assume posio de destaque na agricultura brasileira, contribuindo com 10% da produo mundial, estimada em 30 milhes de toneladas em uma rea plantada de 2,3 milhes de hectare. Esse percentual confere ao Brasil o ttulo de maior produtor de frutas do mundo. As condies brasileiras para o mercado interno, como para o mercado externo, conferem-lhe vantagens comparativas em relao aos pases concorrentes devido as condies climticas favorveis, grande disponibilidade de rea e acervo razovel de tecnologias. O Nordeste, que produz 29% do total nacional, representa a regio com maior potencial para a produo de frutas tropicais, sendo o primeiro lugar na produo de abacaxi, banana, caju, cco, mamo, maracuj e melo, estando a produo de manga com mais de 51% do que se produz no pas. A viticultura, um desafio vencido no Nordeste, compete com a manga em rea plantada, exportao e rentabilidade. Contudo, a expanso de reas cultivadas em toda regio agrcola estimula o favorecimento de doenas que tem despertado nos produtores buscarem na pesquisa alternativas que minimizem os prejuzos por elas causados, alm da pesquisa tambm oferecer caminhos alternativos de controle cada vez menos agressivos ao ambiente e considerar a necessidade de se aprimorar os processos principalmente ligados organizao e ps-colheita, a fim de que se explorem convenientemente os recursos e se diminuam as perdas, estimadas entre 15 a 40% de produo.

Michereff, S.J. & Barros, R. (Eds.) Proteo de Plantas na Agricultura Sustentvel. 2001. Recife, UFRPE

Direitos de edio reservados aos editores ISBN 85-87459-06-6

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BANANEIRA
O Brasil destaca-se como segundo maior produtor mundial de bananas, sendo cultivada em quase todos os Estados brasileiros. considerada uma das fruteiras mais populares no Brasil, consumida em sua maioria in natura ou ainda industrializada. A bananeira cultivada comercialmente pertence ao gnero Musa sp. ordem Stilaminales, famlia Musacea. Essa cultura est sujeita a um grande nmero de doenas que afetam diversas partes da planta (raiz, rizoma, pseudocaule, folha, fruto) causadas por fungos, bactrias, vrus e nematides. Os fungos so os principais causadores de doenas da bananeira, tanto pelo nmero como pela importncia. Dentre as doenas fngicas e bacterianas, destacam-se mal do Panam, Sigatoka amarela e negra e o moko ou murcha bacteriana.

Mal do Panam, murcha de fusrio ou fusariose

No Brasil, a murcha de fusrio foi descrita pela primeira vez em 1930, no municpio de Piracicaba-SP, sobre a cultivar Ma. A doena limitante ao cultivo dessa cultivar, afetando ainda a Prata, Prata-an, Pacovan e Figo. As cultivares do grupo Cavendish mostram-se resistentes a murcha. Ocorre de forma endmica em todas as regies produtoras dessa fruteira, causada pelo fungo Fusarium oxysporum f.sp. cubense, possuindo quatro raas fisiolgicas, porm apenas as raas 1, 2 e 4 so importantes para a bananeira. A infeco ocorre sempre via sistema radicular, principalmente atravs das razes secundrias, posteriormente atingem o xilema, onde ocorre bastante esporulao, sendo os condios transportados pelo fluxo de seiva. Rizomas e pseudo caules de plantas doentes e ou mortas so importantes fontes de inculo, responsveis pela infestao do solo, onde o patgeno pode sobreviver na ausncia do hospedeiro por longo perodo. Pode ser tambm disseminado pela gua de irrigao, drenagem, de inundao, solo aderido a mquinas, implementos, ferramentas utilizadas nos tratos culturais e mudas infectadas. Externamente, observa-se nas folhas um amarelecimento progressivo das folhas mais velhas comeando pelos bordos do limbo foliar em direo a nervura principal. Observa-se tambm rachaduras prximo ao solo, murcha e quebra das folhas junto ao pseudocaule e, em alguns casos, estreitamento de limbo das folhas mais novas. Internamente verifica-se descolorao do sistema vascular das razes, rizoma, pseudocaule e nervura principal das folhas. A descolorao vascular no pseudocaule, concentra-se mais perifericamente, mantendo-se o centro claro. No rizoma, a descolorao mais pronunciada na rea de densa vascularizao, onde o estelo junta-se ao crtex, podendo-se observar o caminhamento dos sintomas do rizoma para as brotaes a ele aderidas. Os sintomas de fusariose pode ser confundido com os sintomas do moko, uma caracterstica que distingue os
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dois sintomas que na fusariose no h uma descolorao interna do fruto, e plantas jovens com menos de 4 meses e 1,5m de altura, no desenvolvem os sintomas. O controle deve ser feito de forma preventiva, baseado em medidas culturais como: plantio em reas isentas da ocorrncia do patgeno; uso de mudas sadias; correo do solo; manuteno da cultura bem nutrida; controle dos nematides e da broca do rizoma e erradicao das plantas doentes. A melhor alternativa para conviver com a doena tem sido o uso de cultivares resistentes como Nanica, Nanico e Grande Naine, por outro lado so susceptveis a raa 4 do patgeno, que at o momento no foi constatada no pas. Outras cultivares resistentes so Terra, Terrinha, Dangola e Prata Ma. E com mdia susceptibilidade Prata An, Prata, Pacovan e Pioneira.

Sigatokas amarela e negra

A Sigatoka amarela foi relatada no Brasil primeiramente no Estado do Amazonas, em 1944, e posteriormente em todos os Estados brasileiros. A nvel nacional as perdas esto estimadas na faixa de 50% da produo, e eventualmente, perda total. causada por Mycosphaerella musicola (Pseudocercospora musae), produzindo esporos de origem sexuada (ascsporo) e assexuada (condio) e os pseudotcios encontram-se distribudos em ambas as faces da folha, quando ocorre massiva infeco. Em leses espalhadas sobre toda a folha, a maior concentrao se verifica na face superior. A Sigatoka negra, constatada no Brasil em 1998, tambm no Estado do Amazonas e recentemente no Acre, causada por Mycosphaerella fijiensis (fase sexuada) ou Paracercospora fijiensis (fase amrfica). A primeira descrio dessa espcie foi feita em 1963, nas Ilhas Fiji, distrito de Sigatoka, como agente casual da doena conhecida como raia negra. Em 1972, foi descrita em Honduras e denominada Sigatoka negra, causada por M. fijiensis var. difformis. A fase assexual (P. fijiensis) est presente durante a fase de estrias ou manchas jovens da doena, onde se observa a presena de conidiforos, emergindo de forma isolada ou em baixo nmero, a partir dos estmatos foliares. So visveis, principalmente, na face inferior da folha. A fase sexuada do fungo considerada mais importante no aumento da infeco, uma vez que um alto nmero de ascsporos so produzidos em estruturas denominadas pseudotcios. As duas espcies, M. musicola e M. fijiensis, podem ser diferenciadas somente durante a fase anamrfica do patgeno e podem, tambm, ser separadas por marcadores moleculares tipo RAPD, tanto pela utilizao do DNA, extrado de culturas puras do patgeno, como pela utilizao direta do tecido da folha infectada. Os sintomas de ambos os patgenos ocorrem nas folhas jovens da planta, incluindo geralmente as folhas de nmero zero (vela), 1, 2 e 3. O desenvolvimento das leses das Sigatokas foi dividido em nmeros de cinco a seis estdios, dependendo do autor. Estdios da Sigatoka amarela: estdio I
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 a fase de ponto ou risca de no mximo 1 mm de comprimento, com leve descolorao; estdio II a risca j apresenta vrios milmetros de comprimento e um processo de descolorao mais acentuado; estdio III mancha nova tem forma oval alongada e colorao levemente parda, de contornos mal definidos; estdio IV caracteriza-se pela paralisao de crescimento do miclio, pelo aparecimento de um halo amarelo em volta da mancha e pelo incio de esporulao do patgeno; estdio V a fase final da mancha, cuja forma oval alongada se expande, atingindo de 12 a 15 mm de comprimento por 2 a 5 mm de largura, o centro totalmente deprimido, de tecido seco e colorao cinza. Sigatoka negra: estdio I pequena descolorao ou despigmentao s observada na face inferior da folha. Inclui uma pequena estria de cor caf dentro da rea descolorida. No visvel atravs da luz; estdio II pequena estria de cor caf visvel nas faces superior e inferior da folha; estdio III a estria aumenta em dimetro e comprimento, mantendo-se de cor caf; estdio IV a estria muda da cor caf para preto, sendo considerada como mancha; estdio V a mancha negra est rodeada por um halo amarelo; estdio VI a mancha muda novamente de cor, deprime-se e nas reas mais claras (cinza-claro) so observados pontos negros (peritcios). marcante a agressividade da Sigatoka negra, caracterizada por massiva infeco, visvel, principalmente na face inferior da folha na fase de estrias jovens, ocorrendo o coalecimento das leses, antes de atingirem o estdio final de mancha, caracterizando o efeito mais drstico da mesma, que a morte prematura das folhas. A disseminao e o desenvolvimento de leses de Sigatoka so influenciados por umidade relativa do ar, temperatura e ventos. O esporo uma vez depositado sobre as folhas de cultivares suscetveis, germinar na presena de um filme de gua. A durao desse processo depende da temperatura. O perodo de incubao tem se mostrado extremamente varivel, dependendo do ambiente. Na Sigatoka negra h uma maior produo de esporos, conseqentemente, uma maior taxa de progresso da doena, comparando com a amarela, razo pela qual, esta desaparece em cerca de trs anos, aps o surgimento da Sigatoka negra. A disseminao e liberao de esporos se d atravs do vento e respingos de chuva. Outra importante via de disseminao da Sigatoka negra na Amaznia, tem sido as folhas doentes utilizadas para proteo dos frutos durante o transporte, assim como bananeiras levadas pelo rio durante o perodo de cheia. As Sigatokas so de difcil controle, recomendando-se manejo integrado atravs do controle gentico, qumico e cultural. Embora o controle gentico seja a principal linha no controle da Sigatoka, at o momento s temos cultivares resistente Sigatoka amarela do tipo vertical, que facilmente quebrada devido a grande variabilidade M. musicola, como as cultivares Pioneira e Misore. Para o controle de ambas as Sigatokas so recomendadas as cultivares Misore e a Figo e ainda os gentipos Caipira, PV03-44, FHIA-01 e FHIA-18 podero ser recomendados

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como alternativa para Sigatoka negra. O controle qumico ainda considerado o principal mtodo de controle da Sigatoka. Entre os principais fungicidas de contatos recomendados temos mancozeb e clorotalonil (este no deve ser utilizado com leo mineral, pois a mistura fitotxica) e entre os sistmicos, os grupos qumicos principais so os benzimidazis (benomyl, metiltiofanato e thiabendazol) e os triazis, devendo ser usados sempre em mistura ou alternncia com outros produtos com mecanismo de ao diferente. J no controle cultural so destacadas a drenagem do solo; combate as plantas invasoras e eliminao de folhas doentes, bem como fatores como densidade populacional, nutrio adequada e sombreamento podem contribuir ou exercer o controle da doena.

Moko ou murcha bacteriana

Essa doena foi constatada no Mxico, Amrica Central e do Sul, Andes, Filipinas, Sul da ndia e no Brasil em vrios municpios produtores de banana da Amaznia, tanto em regies de vrzea como em terra firme, bem como no Estado de Sergipe, sendo o foco desse Estado controlado satisfatoriamente. Considerada uma doena grave da bananeira, pois acarreta perdas de at 100% da produo em plantios infestados, causada pela bactria Ralstonia solanacearum raa 2. Cinco estirpes desta raa so patognicas bananeira. As mesmas tm sido separadas atravs de hospedeiros diferenciais, aspecto de colnias em meio tetrezlio, pelo habitat e pela maior ou menor capacidade de ter como vetores, os insetos visitadores de inflorescncias. A bactria pode ser disseminada de planta a planta, atravs de contatos inter-radiculares; ferramentas utilizadas nos tratos culturais e insetos vetores que visitam as inflorescncias da bananeira. Apresenta uma ampla gama de hospedeiros alternativos que pode ser fator decisivo na manuteno do patgeno no campo. A murcha bacteriana uma doena vascular sistmica podendo atingir todas as partes da planta, desde o estdio de brotao jovem at plantas em produo. Os sintomas geralmente iniciam-se com amarelecimento e murcha das folhas mais baixas, podendo ocorrer quebra do pecolo, mesmo antes do amarelecimento. Nas plantas jovens, pode ocorrer m formao das folhas, com necrose da folha vela. No rizoma e pseudocaule, observa-se uma descolorao (escurecimento nos feixes vasculares, onde, logo aps o corte transversal, aparecem pequenas gotas de cor branco prola (exsudados bacterianos). O engao, frutos e rquis tambm so afetados pelo patgeno, provocando uma descolorao pardo avermelhada dos vasos lenhosos. Seccionando os frutos infectados, observa-se escurecimento da polpa, com distribuio ao acaso no cacho. Os rgos afetados exibem exsudao de pus bacteriano aps o corte. R. solanacearum uma bactria extremamente varivel no aspecto fisiolgico e na patogenicidade. Os sintonas ocasionados podem diferir de acordo com
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strain envolvido na interao, variando desde o enfezamento ou distoro at um murchamento rpido. O tipo de disseminao tambm ocasiona diferentes sintomas. Strains disseminados por insetos causam diferente sintomas daqueles provenientes do solo ou pelo corte de faces, pois as flores e frutos tornam-se doentes antes de ocorrer murcha das folhas. As medidas de controle so de carter preventivo, baseando-se na excluso por meio de fiscalizao e certificao de mudas; inspees peridicas nas reas de plantio; e interdies, pela erradicao, onde as planta doentes e vizinhas num raio de 10 metros so eliminadas. Alm de cuidados nos tratos culturais e desinfestao das ferramentas. A cultivar FHIA-3, que tem caractersticas semelhantes a Pacovan, relatada como resistente ao patgeno.

Antracnose
A antracnose ocorre em todas as regies produtoras de banana, podendo ser considerada uma das mais importante doena que afeta frutos da bananeira. problema em pr e ps-colheita, pois parte da infeco ocorre em frutos verdes no campo, permanecendo latente at o incio da maturao, e posteriormente manifestar-se durante o transporte e/ou maturao dos frutos, alm das infeces no latentes que podero se estabelecer nessa fase. causada pelo fungo Colletotrichum musae. As leses grandes so originadas de infeces no latentes, ocasionada pela entrada do patgeno atravs de injrias fsicas durante a colheita e armazenagem, enquanto as manchas circulares resultante de infeces latentes iniciadas com o fruto imaturo no injuriado. Os esporos so liberados por respingos de chuva ou gua de irrigao e dispersados por correntes de ar e insetos e so depositados sobre os frutos verdes ainda no campo, e em presena de filme de gua, germinam e fornam apressrio dentro de 4 a 20 horas e aps 24 a 72h penetram, permanecendo a infeco latente at o incio da maturao. Supe-se que os taninos presentes na casca verde do fruto, possam estar envolvidos na latncia do patgeno. Os sintomas nos frutos verdes so geralmente leses castanho escura a preto com a margem plida, levemente encharcada e com dimenso de vrios centmetros. No fruto maduro o sintoma tpico so leses circulares, escuras e deprimidas, que aumentam, coalescem e tornam-se encharcadas e em condies de alta umidade, aparece uma massa de esporos rosada sobre as leses. O patgeno tambm infecta brcteas, flores, pecolos e folhas. C. musae produz etileno que pode induzir o amadurecimento prematuro do fruto. As medidas de controle devem ter incio no campo, com boas prticas culturais, fazendo-se eliminao de folhas velhas, brcteas e restos culturais, que so fontes de inculo do patgeno; cobertura do cacho com saco de polietileno perfurado, preferencialmente antes da abertura das pencas; higienizao dos tanques de despencamento, com troca peridica da gua do tanque para evitar altas
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concentraes de inculo; evitar ferimentos nos frutos; tratamento qumico dos frutos atravs de pulverizaes ou imerso com tiabendazol, benomyl ou tiofanato metlico, em concentraes que pode variar de 200 a 400 ppm, dependendo da distncia que separa a colheita do mercado consumidor.

Mosaico
O mosaico em bananeira tem sido descrito em praticamente quase todos os locais onde se cultiva essa fruteira, usualmente considerado de pouca importncia econmica, mas eventualmente pode causar perdas considerveis. Sua ocorrncia maior nas cultivares do subgrupo Cavendish, embora ocorra tambm nas cultivares dos subgrupos Prata, Terra, Nanica, Nanico, Ma e outros. causado pelo vrus do mosaico do pepino Cucuber mosaic virus CMV, do gnero Cucumovirus, famlia Bromoviridae. transmitido por pulges principalmente Aphis gossypii de maneira no persistente e possui uma extensa gama de hospedeiros. Os sintomas variam com o isolado envolvido na infeco, pode aparecer em forma de placas (SP, MG, PR, PA) ou em riscas (CE, PE, RJ). Geralmente causa clorose, mosaico e espessamento intermitente da nervura, separao da bainha foliar externa do intermitente do pseudocaule, nanismo, m formao dos frutos e, algumas vezes, morte prematura da planta. Para controle da doena recomenda-se utilizar mudas sadias e erradicar as plantas com sintomas no campo.

Nematoses
Diversas espcies de fitonematodes tm sido associada a bananeira, mas somente as espcies Radopholus similis, Helicotylenchus multicinctus, Pratylenchus coffeae e Meloidogyne spp. so consideradas de importncia econmica para a cultura. Dentre eles, R. similis se destaca pelos danos causados e pela ampla distribuio nas principais regies produtoras do mundo. Esta espcie conhecida como nematide caverncola, devido ao sintoma que causa no crtex das razes e rizomas da bananeira. R. similis um endoparasita migratrio, vermiforme em ambos os estdios (larval e adulto), com marcante dimorfismo sexual. Entretanto, as larvas fmeas que so infectivas, o macho apresenta estilete degenerativo e incapaz de penetrar nas razes ou se alimentar. Os sintomas ocorre em qualquer estdio de desenvolvimento da planta, mas mais comum quando a planta est prximo a frutificao. Radopholus similis penetra atravs das razes primrias e se alimentam exclusivamente de clulas do crtex, que posteriormente tornam-se necrosadas, por terem suas paredes danificadas e o seu contedo exaurido, agravado pelo movimento do nematide no tecido, formando grandes reas necrticas de colorao avermelhada em torno das
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leses. Invariavelmente, a infeco pode ocorrer no rizoma, escurecendo a superfcie do mesmo e induzindo a formao de razes adventcias. O controle deve ser feito atravs de medidas de excluso; tratamentos das mudas; alqueive; inundao; rotao de culturas; uso de escoras e amarrao das plantas; resistncia varietal e tratamento qumico do solo.

COQUEIRO
Cocus nucifera uma das 2600 espcies da famlia Palmae, originria do sudeste asitico. A planta exibe caule ereto, sem ramificaes e com folhas terminais, sendo composta por duas variedades an e gigante. A primeira mais recomendada para explorao comercial de gua de coco, com trs espcies dentro da variedade, a amarela, verde e vermelha, onde no Brasil a verde a nica explorada at a presente data. O coqueiro considerado uma das mais importante cultura perene, onde todas as suas partes como raiz, caule, folha, inflorescncia e fruto so utilizadas com fins alimentcios, medicinais, industriais e artesanais. uma rica fonte de leo o qual no possui colesterol, porm rico em aminocidos saturados, tambm usado na produo de sabonetes, cosmticos, margarinas e como fonte alimentcia. Considerando a importncia do coqueiro, este tambm acometido por inmeras doenas de grande expresso econmica, alguns so comuns no nosso pas, enquanto outras como o cadang-cadang, freqentemente encontrada nas Filipinas um dos maiores produtores de coco, totalizando mais de 50% da produo mundial, na qual esta doena destruiu mais de trs milhes de rvores, assim como o amarelecimento letal causado por Phytoplasma palmae, no tem relatos no Brasil.

Anel vermelho
A doena foi descrita pela primeira vez por Stockdale em Trinidad no ano de 1906, sendo encontrada em outros lugares como Caribe, Colmbia, Suriname, Guiana, Equador, Venezuela, Brasil e Amrica Central, podendo causar perdas considerveis. O sintoma caracterstico desta doena causada pelo nematide Bursaphelenchus cocophilus a formao de um anel vermelho alaranjado ou marrom avermelhado quando corta-se a estipe do coqueiro, com 2-4cm de largura x 3-5cm afastado da periferia. A posio, tamanho e cor do anel pode variar dependendo da variedade, idade e condies ambientais. Externamente, observa-se as folhas mais velhas amareladas, em seguida, secam e necrosam quebrando-se na base da rquis, ficando penduradas presas ao estipe. Com o desenvolvimento da doena ocorre apodrecimento do meristema apical, seguindo a seca da folha mais jovem. Geralmente quando as plantas so infectadas entre 3-10 anos de
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idade, estas podem morrer aps 2-4 meses. As plantas mortas apresentam-se com o topo desnudo e o estipe ereto por muito tempo. Este nematide pode completar seu ciclo de vida de 9-10 dias, sendo considerado um ciclo curto para um fitonematide. O Rhynchophorus palmarum parece ser o maior disseminador deste nematide, onde ovos, larva e formas imaturas de B. cocophilus podem servir como inculo. Quando este inseto deposita seus ovos, o nematide tambm injetado dentro dos tecidos da planta hospedeira. Ocasionalmente, pode ser disseminado por implementos agrcolas, solo, mudas contaminadas, gua de irrigao e homem. Aps penetrao, o nematide migra para o sistema vascular onde ir se multiplicar rapidamente, sendo encontrado nos espaos inter e intracelular dos vasos. Estes podem sobreviver por sete dias aproximadamente em solo esterilizado e at 80 dias em tecidos de tronco do coqueiro. de difcil controle, recomenda-se como medidas de controle a eliminao de plantas doentes, uso de mudas sadias, desinfestao dos equipamentos utilizados na despalma e colheita com formol comercial a 10%, eliminao do inseto vetor quando este estiver em alta densidade populacional com aplicao de inseticidas a base de carbaryl ou metomyl, evitar ferimentos durante a colheita e despalma, evitar o corte desnecessrio de folhas que ainda no estejam completamente secas. Um programa de controle integrado envolvendo o cultural, biolgico, qumico e variedades resistentes poder ser designado para cada localidade e assim prevenir a introduo do nematide em outras reas onde ainda no ocorra a doena.

Podrido do olho ou do topo

A doena foi descrita no ano de 1834 nas Antilhas, sendo mais severa em reas com alta precipitao, ocorrendo em todas as regies produtoras de coco. Causada por um fungo, Phytophthora palmivora, este requer para o seu pleno desenvolvimento umidade relativa elevada, temperatura entre 2528C, reas mal drenadas, alta pluviosidade podendo servir como fonte de inculo oosporos presentes em tecidos infectados e outras hospedeiras como cacaueiro, mamoeiro, entre outros, sendo disseminados pelos zoosporos atravs de respingos de chuvas seguido de ventos fortes. Quando o coqueiro encontra-se infectado observa-se clorose nas folhas mais novas (folha flecha), seguido de murcha e amarelecimento e o topo da planta fica curvo. As leses estendem-se para o interior da estipe, e, em conseqncia, os tecidos do palmito apodrecem. Neste ponto as folhas novas so facilmente destacadas e os frutos caem com bastante facilidade. Drenagem adequada, maior espaamento entre plantas, controle das ervas daninhas e insetos, eliminao de restos culturais, assim como injees de metalaxil, fosetil Al e fosfonato de potssio so medidas de controle que visam minimizar os prejuzos ocasionados por esta doena sobre o coqueiro.
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Queima das folhas

A doena causada pelo fungo Botryosphaeria cocogena (Lasiodiplodia theobromae (=Botryodiplodia theobromae) que penetra na planta por ferimentos ocasionados pelo patgeno da lixa ou por rachaduras presentes nas folhas, sendo muito importante no Nordeste brasileiro, pois reduz a rea foliar em at 50% e reflete diretamente na produo de coco. O L. theobromae favorecido por baixa umidade relativa do ar, temperaturas e precipitaes elevadas, sendo disseminado pelo vento e sobrevivendo nas folhas infectadas ou no solo. Ocorre de forma epidmica nos Estados de Alagoas, Pernambuco, Bahia, Sergipe, Paraba, Rio Grande do Norte e Par. Os sintomas iniciam geralmente pelas folhas mais inferiores formando leses necrticas na extremidade das mesmas em forma de V, comeando pela ponta ou margem dos fololos. Com o progresso da doena esta se desenvolve no sentido da base da rquis, causando morte prematura das folhas e provoca queda dos cachos antes da maturao, podendo observar exsudao de goma. Em estdios mais avanado da doena, muitas folhas secas podem encontrar-se dobradas e presas ao estipe. Recomenda-se a utilizao de medidas de controle como a eliminao das folhas doentes; aplicao em pulverizaes de mistura dos fungicidas carbendazim + benomyl, aliado aos tratos culturais como roa, coroamento e uso de uma adubao equilibrada.

Murcha de Phytomonas
A doena foi relatada pela primeira vez no Brasil em 1982, sendo encontrada no Estado do Par, Pernambuco, Paraba, Alagoas e Espirito Santo. O agente causal desta doena um protozorio triponossomatdeo, Phytomonas sp. que fica restrito ao floema da planta hospedeira, facilmente visualizado sob microscpio tico colocando-se uma gota de seiva de planta infectada. O sintoma inicial da doena consiste de murcha iniciando nas folhas mais baixas. Aps a murcha, estas adquirem uma colorao marrom, dobrando-se junto ao estipe, que permanecem penduradas por algum tempo. Algumas vezes antes das folhas dobrarem, ocorre a quebra da raque sem afetar as folhas mais jovens. Com o desenvolvimento da doena as folhas jovens ou terminais so afetadas e, em seguida, observa-se uma podrido ftida que causa a destruio do meristema apical atingindo o palmito e partes jovens do estipe. Nas inflorescncias ocorre uma necrose que inicia-se nas extremidades das rquis foliares e os botes florais ficam necrticos. Manchas necrticas surgem nas inflorescncias ainda no abertas. Cachos apodrecem e os frutos caem facilmente. As razes de plantas doentes apresentam-se parcialmente necrosadas. Este protozorio transmitido e
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disseminado por percevejos da famlia Pentatomidae, sendo a espcie Licus lobulliger o principal vetor a nvel de Brasil. Sobrevive, este inseto, em ervas daninhas, dendezeiro, piaava, palmeira real, inaj e a palmeira rabo-depeixe-an, sendo mais severa a doena em reas onde predomina uma alta populao do inseto vetor, umidade relativa elevada. O controle dessa doena deve ser feita com a eliminao de coqueiros doentes; manter o coqueiral limpo retirando-se folhas velhas e bainhas mortas que abrigam o inseto vetor. Recomenda-se tambm a utilizao de inseticida como o deltametrina na dose de 2g/L para eliminao do inseto vetor.

Lixas pequena e grande

A lixa do coqueiro era conhecida pelo nome de verrugose das folhas. A lixa pequena foi relatada em 1940 no Estado de Pernambuco, atualmente encontra-se disseminada em quase todas as regies onde se cultiva o coqueiro. Todas as variedades e hbridos so suscetveis, causando prejuzos que podem passar despercebidos ou serem bastante prejudiciais a produo, principalmente quando associadas a queima das folhas. A lixa pequena causada pelo fungo Phyllachora torrendiella (=Catacauma torrendiella) e Sphaerodothis acrocomiae (=Coccostroma palmicola) o fungo responsvel pela lixa grande. So favorecidos por alta pluviosidade, temperaturas amenas e elevada umidade relativa do ar, disseminado pelo vento, principalmente, e sobrevivendo sobre folhas infectadas. A lixa pequena caracteriza-se por pequenos pontos negros (estromas), coriceos, speros conhecidos por verrugas. Ocorre sobre fololos, rquis e frutos, podendo ser encontrado isoladamente, em linhas ou em forma de losango. Estes pontos sobre os fololos podem ocorrer em ambas as faces da folha, seguido por um halo amarelado e, em seguida, necrtico. Com o progresso da doena ocorre a necrose das folhas mais baixas, onde estas amarelecem, secam e pendem, fazendo com que o cacho fique sem suporte, refletindo diretamente na produo final. A diferena no sintoma entre a lixa pequena e a grande esta no fato de que a lixa grande possui estromas maiores, marrons, no causam necrose nos tecidos infectados (fololos e rquis foliares), soltando-se com facilidade do tecido infectado. Recomenda-se como medidas de controle principalmente para a lixa pequena, corte e queima de folhas infectadas, junto com tratos culturais da cultura como roa, coroamento e utilizao de uma adubao equilibrada. O controle qumico para estas doenas no apresentou resultados satisfatrios, porm recomenda-se como preventivo o uso da mistura de benomyl + PCNB ou benomyl + carbendazim. Tambm utilizado no controle das lixas os fungos hiperparasitas, Acreconium alternatum, A. strictum, Septofusidium elegantulkum, Cladosporium cladosporioides, C. spongiosum entre outros, sendo os dois primeiros mais usados como biocontroladores.
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MAMOEIRO
Carica papaya considerada uma das mais importantes fruteiras tropicais. Seu provvel centro de origem a Amrica Central, sendo subseqentemente transportado para todas as regies tropicais do mundo. No Brasil cultivado, praticamente, em todo territrio nacional, excetuando-se as regies com inverno rigorosos. As regies Sudeste e Nordeste somam em mdia 87,5% da produo nacional, destacando-se os Estados do Esprito Santo e Bahia como os principais produtores. Atualmente, o Brasil destacase como o maior produtor mundial de mamo, com uma produo anual de 1.700.000t, seguido da Nigria 748.00t, Mxico 636.119t, India 450.000t, Indonsia 379.823t e Peru 165.000t. As cultivares mais exploradas comercialmente so dos grupos Solo e Formosa. O grupo Solo, so materiais geneticamente uniforme amplamente utilizadas no mundo e no Brasil destacando-se as cultivares Sunrise Solo e Improved Sunrise Solo cv. 72/12. As cultivares do grupo Formosa no tm a mesma importncia econmica daquelas do grupo Solo, j que o mercado consumidor prefere frutos pequenos com peso mdio de 500g de polpa consistente e boa colorao, caractersticas essas oferecidas pelas cultivares do grupo Solo. O manoeiro est sujeito a diversas doenas, ocasionadas por fungos, bactrias, micoplasmas, vrus e nematides. Entre as quais as viroses constituem o maior entrave para a explorao desta cultura.

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Mancha anelar
A mancha anelar tambm conhecida como mosaico do mamoeiro, apareceu pela primeira vez no Hava em 1937, e no Brasil como fator econmico limitante para a cultura em 1968 no Estado de So Paulo, e atualmente esta disseminada por todas as reas produtoras do pas. Esta doena causada pelo Papaya ringspot virus PRSV, da famlia Potyviridae, gnero Potyvirus. O quadro sintomatolgico da mancha anelar do mamoeiro varia com a idade da planta por ocasio da infeco, vigor, temperatura e estirpe do vrus. Os sintomas so inicialmente, amarelecimento das folhas mais novas no tero superior da copa, seguido de clareamento das nervuras, rugosidade e intenso mosqueado. Distores foliares podem ser observadas, e em estdio avanado a lamina foliar desaparece, ficando a folha reduzida nervura central, sintoma conhecido como fio de sapato. Nos pecolos e na parte superior do caule aparecem manchas oleosas e alongadas e sobre os frutos anis oleosos, que constituem o principal sintoma da doena. A planta apresenta tambm nanismo e a produo afetada sensivelmente, ocorrendo alteraes no sabor e aroma dos frutos. Incluses citoplasmticas cilndricas (catavento) e amorfas na clula hospedeira so visveis ao microscpio tico. A sobrevivncia do vrus se d em plantas hospedeiras das famlias Caricaceae e Cucurbitaceae, sendo transmitido de forma no persistente por afdeos. So condies favorveis a ocorrncia de epidemia altas densidades populacionais desses vetores, alm da presena de mamoeiros e hospedeiros alternativos infectados. Como medidas de controle deve-se fazer a implantao do pomar com mudas sadias e distante de plantaes onde ocorra a doena, tambm evitar o crescimento de cucurbitceas nas proximidades de pomar. Fazer eliminao de plantas infectadas, rotao de cultura e formao de barreiras com plantas, como pinheiro, milho, arroz, cana-de-acar, entre outras.

Meleira (Sticky disease)

A doena foi relatada primeiramente no Estado da Bahia e, em seguida no Esprito Santo e a partir de 1989 disseminou-se rapidamente atingindo 100% em algumas plantaes. O agente causal da doena de origem viral, tratando-se de partculas isomtricas de 50nm de dimetro semelhantes a vrus, distribudos em massas amorfas ou formando agregados e presena de dsRNA. A forma de disseminao do agente etiolgico dessa doena ainda no conhecida. Os sintomas se caracterizam por apresentar intensa exsudao de ltex nos frutos. Esse ltex apresenta uma menor viscosidade, no coagula, escorrendo facilmente. Com o tempo oxidao do ltex, d um aspecto borrado e melado. Esses sintomas tambm so observados
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nos pecolos e margens das folhas novas, antes da frutificao, que se tornam necrticos aps a exsudao do ltex. Os frutos afetados apresentam manchas claras na casca, e na parte interna, manchas escuras, alterando sabor e consistncia, depreciando o valor comercial.

Amarelo letal
Essa doena at o momento, somente foi constatada no Nordeste brasileiro, ocorrendo pela primeira vez no Estado de Pernambuco em 1983, e posteriormente nos Estados da Bahia, Rio Grande do Norte, Cear e Paraba. A procedncia desse vrus desconhecida, podendo ter-se originado de plantas nativas da regio de ocorrncia do mesmo ou ser resultante de uma possvel mutao de outros vrus. O agente causal dessa doena o vrus Papaya lethal yellowing virus - PLYV de partculas isomtricas de 25-30nm de dimetro, que ocorre em alta concentrao nos tecidos de plantas afetadas. Plantas infectadas com este vrus apresentam as folhas ligeiramente retorcidas e com aspecto clortico, geralmente iniciando nas folhas do tero superior da copa. Posteriormente, as folhas amarelecem, murcham e morrem, levando a planta morte. Nos frutos surgem manchas circulares inicialmente esverdeadas e depois, com o amadurecimento, tornam-se amareladas na casca. O vrus do amarelo letal disseminado mecanicamente, quer pelo mtodo de transmisso mecnica, quer por pedaos do pecolo ou nervuras de plantas doentes e ferramentas utilizadas no corte de plantas infectadas. No se conhece outras espcies hospedeiras at o momento. As medidas de controle devem ter carter preventivo, como produo de mudas em reas isoladas e distantes de plantaes antigas de mamoeiro; fazer rouguing das plantas com sintomas tpicos da doena; e eliminao de pomares velhos e improdutivos.

Antracnose
considerada a principal doena dos frutos do mamoeiro no Hava, Brasil e muitos outros pases. Sua importncia para a economia expressiva, pois os frutos atacados pela antracnose tornam-se imprestveis para a comercializao, ocasionando perdas substanciais na ps-colheita. A doena causada por Colletotrichum gloeosporioides, e o estgio sexual conhecido como Glomerella cingulata. O fungo sobrevive de um ano para outro em restos de cultura, principalmente nas folhas e pode penetrar atravs da cutcula intacta, ocasionando infeco latente nos frutos imaturos. Os ferimentos nos frutos provocados por insetos ou por via mecnica, favorecem a penetrao do fungo. Condies ambientais que favorecem o patgeno so temperatura e umidade relativa altas. A disseminao se d atravs de vento e principalmente pelos respingos de chuva, ocorrendo a
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liberao dos esporos na presena de muita umidade. A disseminao da doena aps a colheita de fruto para fruto no significativa, sendo a severidade da doena menor em perodos secos e temperaturas baixas. Sintomas nas folhagem aparecem como pequenas manchas encharcadas de forma irregular que aumenta e torna-se castanha, podendo coalecer. Em leses velhas o centro torna-se branco acinzentado e caem. No centro das leses pode ser observados numerosos acrvulos, que aparecem como pequenos pontos pretos. Nos frutos os sintomas podem apresentar dois tipos de leses. O primeiro tipo o sintoma de antracnose em mamo que surgem na casca do fruto, inicialmente como manchas encharcadas, as quais aumentam de tamanho formando manchas circulares, deprimidas, com margem marron-clara, produzindo na parte central, massas de esporos de cor rsea ou laranja. Quando em grande quantidade as manchas podem coalescer, espalhar-se pela superfcie do fruto e penetrarem, ocasionando podrido mole. O segundo tipo de leso conhecido como mancha chocolate, que aparece como leses circulares a irregulares, com 1-10mm em dimetro, levemente deprimida de colorao castanho avermelhado. Nos frutos maduros as leses aumentam rapidamente chegando at a 20mm de dimetro. O controle da antracnose deve ser feito de forma preventiva com pulverizaes quinzenais, utilizando produtos a base de cobre, benzimidazol mais chlorotalonil ou mancozeb. Frutos e folhas infectados, onde h uma fonte de inculo muito grande, devem ser retirados das plantas e destrudos. A colheita deve ser feita com os frutos ainda verdoengos e devem ser aplicadas medidas de sanitizao nos locais de armazenamento e transporte dos frutos, alm de tratamentos ps-colheita pela imerso dos frutos com gua quente ou fungicidas (thiabendazole ou benomyl). O controle torna-se mais eficiente quando suspenses fungicidas so associados ao tratamento trmico (imerso dos frutos em suspenso fungicida, aquecida a 48C sob agitao continua, durante 20 minutos).

Varola
A varola tambm conhecida como pinta preta ou bexiga, ocorre comumente em regies produtoras de mamo, principalmente em culturas mal conduzidas. A importncia dessa doena se baseia na freqncia de ocorrncia e danos que pode causar. Tem como agente etiolgico o Mycosphaerella caricae (Asperisporium caricae). O mamoeiro o nico hospedeiro desse fungo e os esporos so disseminados pelo vento, respingos de chuva e orvalho. Os sintomas se iniciam nas folhas inferiores da planta, mas algumas vezes pode comear nas folhas novas e frutos. O desenvolvimento da planta, principalmente as mais novas, pode ser afetado quando a incidncia da doena for muito elevada. Nas folhas ocorrem manchas pardo-clara (marrom) de forma arredondada, de no mximo 4mm
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de dimetro, circundada por um halo clortico. Na parte inferior das folhas, o fungo desenvolve frutificaes pulverulentas, circulares e levemente angulosas com aspecto cinza a preto. Nos frutos, primeiramente surgem reas circulares encharcadas, que evoluem para pstulas marrons e salientes, podendo atingir at 5mm de dimetro. Essa leses causam endurecimento na casca, no atingindo a polpa do fruto. Entretanto o mau aspecto do fruto ocasiona grande desvalorizao na comercializao. Medidas de controle devem ser tomadas logo que apaream os primeiros sintomas nas folhas velhas, com aplicaes de fungicidas que so utilizados no controle da antracnose.

Gomose ou podrido das razes e dos frutos

A gomose do mamoeiro foi relatada primeiramente nas Filipinas, em 1916 e no Brasil em 1946 em mamoeiros nos Estados da Bahia e Pernambuco, ocorrendo posteriormente em quase todas as reas produtoras de mamo no territrio nacional. considerada uma das principais doenas da cultura, com danos econmicos variando de uma regio para outra. Phytophthora palmivora o agente causal da podrido das razes e dos frutos. A doena mais severa em perodos chuvosos e com temperaturas variando entre 25 e 30C e solos mal drenados. O patgeno pode ser introduzido a partir de mudas infectadas, gua de irrigao e esporngios disseminados pelo vento. Clamidosporos formados em frutos cados no cho constituem em importante estrutura de resistncia, agindo como fonte de inculo para infeco de razes, enquanto os esporngios e zosporos somente sobrevive no solo por curtos perodos. Zosporos so atrados pelos exsudados das razes, que aps contato com as mesmas encistam, germinam, infectando-as. Nos frutos a doena tem incio quando esporngios disseminados pelo vento em dias chuvosos chegam superfcie dos frutos. Os frutos atacados caem e as estruturas do fungo passam para o solo, contribuindo para a infeco das razes. As medidas de controle devem ser tomadas desde a formao das mudas, utilizando solo tratado por calor ou com produtos qumicos ou mesmo obter o solo de reas nunca antes cultivado com mamoeiro ou outros hospedeiros de P. palmivora. O viveiro deve localiza-se longe de plantios antigos de mamoeiro e ter boa insolao e ventilao, alm de ser irrigado com gua isenta de contaminaes, evitandose excesso de umidade. Para controle no campo dessa doena deve-se evitar o plantio em solo mal drenado, especialmente em regies de alto ndice pluviomtrico; evitar rea cultivada sucessivamente com mamoeiros; erradicar plantas doentes e destru-las pelo fogo; aplicar preventivamente fungicidas base de cobre ou metalaxil + mancozeb para proteo do caule e frutos.

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Odio
O odio foi primeiramente relatado no Brasil, e posteriormente na Austrlia, Hava, Bermuda, e Sul dos Estados Unidos, bem como na Amrica Central. Esta doena raramente provoca grandes perdas em plantas adultas, ocasiona cicatrizes e mal formao nos frutos. Enquanto em plntulas os danos podem ser mais drsticos. Geralmente a planta supera a doena, entretanto quando o ataque intenso pode causar prejuzos nas folhas e frutos, ocorre enfraquecimento da planta devido retirada de nutrientes das clulas da superfcie das folhas. Conseqentemente, as folhas caem, deixando os frutos descobertos e sujeitos a queimaduras provocadas pelos raios solares. O agente etiolgico dessa doena Oidium caricae. Este patgeno ocorre principalmente em pocas de temperaturas moderadas e pouca chuva. Para a germinao de condios necessrio um breve perodo de alta umidade relativa, mas no gua livre. O mamoeiro o nico hospedeiro conhecido de O. caricae. Os sintomas aparecem primeiro nas folhas como leses apresentando uma leve descolorao verde-amarelada, de contornos irregulares. Posteriormente, nestas reas descoloridas surge uma massa pulverulenta esbranquiada, podendo aumentar rapidamente de tamanho, at 7cm de dimetro. As folhas podem tornar-se amareladas, com aparncia de secamento generalizado, resultando em queda das mesmas. Frutos imaturos so susceptveis a infeco, embora as leses aumentem mais vagarosamente do que nas folhas. O miclio externo desaparece nos frutos maduros, ficando uma cicatriz e este tambm pode ficar mal formado. Folhas de todas as idades so suscetveis. Medidas de controle geralmente no so adotadas, embora fungicidas base de enxofre so recomendados. Pulverizaes visando o controle das podrides dos frutos controlam esta doena. As pulverizaes com enxofre no devem ser feitas com temperaturas acima de 20C para no queimar os frutos, pois este produto fitotxico em temperaturas altas e no muito eficiente quando a doena apresenta-se muito severa.

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Podrides pedunculares
As podrides pedunculares podem ser consideradas um complexo de doenas, que incluem vrios fungos como Colletotrichum sp, Phoma sp., Lasiodiplodia sp. Phomopsis sp., Fusarium sp, e. Alternaria sp, entre outros. Os sintomas, quando causado por Phomopsis caricae-papayae, so obervaddos comumente no pednculo, ocorrendo tambm em qualquer parte da superfcie do fruto, caracterizado por podrido mole e mida. Esse patgeno s penetra atravs de ferimentos. A doena usualmente ocorre com o fruto maduro, raro ocorrer com o fruto verde ou no campo. A podrido causada por L. theobromae, causa sintomas nos frutos e pednculo do mamo aps a colheita. Entretanto frutos em desenvolvimento tambm so infectados, atravs de ferimentos. A casca ao redor do pednculo torna-se descolorida formando uma ampla margem encharcada, translcida e rugosa, seguida de crescimento micelial, cinzento a preto, que torna-se impregnado de picndios. Fusarium sp. normalmente encontra-se associado a outros patgenos causadores de podrido peduncular em mamo, sendo F. solani a espcie mais freqente, considerado um patgeno fraco, requerendo algum fator de pr disposio, antes de estabelecer-se. freqentemente visto como invasor secundrio em leses ocasionadas por outros patgenos como C. gloeosporioides, o qual apresenta leses pequenas (at 15mm de dimetro) e deprimidas. Elas so comumente cobertas por miclio branco e massa rosada de condios, podendo ocorrer nos frutos e pednculo. As medidas de controle empregadas para as podrides pedunculares incluem reduo de inoculo; preveno e erradicao de infees no campo; evitar ferimentos e supresso do desenvolvimento e disseminao da doena, podendo estas serem realizadas atravs de pulverizaes com fungicidas no campo; tratamento ps-colheita e imerso dos frutos em gua quente e/ou fungicidas alm de armazenamento em condies que retardem ou diminuam o apodrecimento de frutos sem afetar a qualidades dos mesmos.

Podrido negra
Esta doena importante no Hava, Brasil, ndia, Austrlia e frica. No Brasil e ndia as leses nos frutos so mais comuns e no Hava mais comum causando podrido peduncular ps-colheita, sendo considerada a segunda doena mais importante ps-colheita. O agente etiolgico Phoma carica-papaya e tem como forma perfeita Mycosphaerella caricae. O patgeno coloniza folhas senescentes e pecolos, produzindo abundantes estruturas de frutificao em plantas mortas, servindo como fonte de inculo primrio no campo. Condios e ascsporos so depositados na superfcie do fruto durante as chuvas e permanecem at ocorrer ferimento, que so
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produzidos durante a colheita e manuseio ps-colheita. Os sintomas surgem em forma de podrido escura, seca e firme, estendendo-se desde o pednculo ao fruto. Alternativamente pequenas manchas encharcadas podem aparecer em qualquer parte do fruto, tornando-se mais tarde escura, deprimida e irregular. As medidas de controle empregadas so as mesmas adotadas para as podrides pedunculares.

Mancha foliar bacteriana

Esta doena foi primeiramente relatada no Brasil em 1955, e posteriormente na Austrlia e Hava. Tem como agente etiolgico a bactria Pseudomonas carica papayae. Caracterizada por ser gram negativa, com trs a seis fragelos polares, mas no produz esporos nem cpsulas. Colnias em gar so circulares, rala, branca acinzentada e florescente em soluo Claras. Temperatura tima para crescimento in vitro 23-29C. O patgeno se dispersa durante tempo mido com muito vento, sendo favorecida por condies mida quente. Os primeiros sintomas surgem nas folhas em forma de pequenas manchas, angulares, com aspecto encharcado. Posteriormente, assumem uma colorao marrom claro, translcida com tamanho de 3 a 6mm de dimetro. As manchas podem coalescer e formarem grandes reas necrticas irregulares. Medidas de controle especficas no so esto estabelecidas.

MANGUEIRA
O Brasil um dos poucos pases tropicais que produz manga na chamada entre safra mundial que se estende de outubro a maro. Os Estados produtores desta fruta participam deste contexto, destacando-se as reas irrigadas da regio do Semi-rido, com aproximadamente dez mil hectares de manga sendo uma das principais responsveis por este destaque, apresentando duas colheitas anuais, alm do marketing de qualidade de seus frutos. A intensificao no cultivo de manga e aquisio de mudas de So Paulo vm aumentando o potencial de inculo de patgenos no Vale do So Francisco, que, somadas s condies climticas e conduo fitotcnica realizadas nos pomares com produo induzida, vm tornando as doenas uma constante ameaa s reas de cultivo, pelos danos e conseqentes prejuzos que ocasionam. Visando assegurar as conquistas at ento obtidas, e contribuir para uma mangicultura mais racional e estvel, estes relatos enfocam, de forma sintetizada, algumas das doenas de importncia econmica na cultura da manga do Vale do So Francisco.

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Morte descendente ou podrido seca

Esta doena, tambm conhecida por seca de ponteiros, podrido basal do fruto, podrido do pednculo e cncer do tronco e ramos, causada pelo fungo Lasiodiplodia theobromae (=Botryodiplodia theobromae) cuja fase perfeita o Physalospora rhodina. Esse fungo sobrevive na atmosfera, nos tecidos vegetais vivos ou mortos. disseminado pelo vento, insetos e instrumentos de poda e penetra na planta atravs de aberturas naturais e, principalmente, ferimentos. Temperaturas altas e umidade relativa amena favorecem o seu desenvolvimento. Torna-se mais agressivo quando a planta encontra-se predisposta, principalmente onde se verifica estresse hdrico, falta ou excesso de gua, deficincia de clcio, falta de poda de limpeza, no proteo aps a poda, nos ferimentos naturais das bifurcaes e quando da permanncia no solo de tecidos vegetais da planta. A doena ocorre em vrios pases produtores de manga no mundo, como ndia, Paquisto, Austrlia, Egito, frica do Sul, El Salvador, Porto Rico, Barbados e Mxico causando grandes prejuzos. No Brasil, alta incidncia foi evidenciada, principalmente, em Petrolina-PE, em 1990. Atualmente, a doena ocorre em todas as reas irrigadas da regio Nordeste e em outras culturas de importncia socioeconmica, como: videira, abacateiro, goiabeira, citrus, coqueiro, tamareira e bananeira. Ocorrncia em mangueira tem sido verificada tambm nos Estados do Piau, Rio Grande do Norte, Minas Gerais, So Paulo, Gois e no Distrito Federal. A sintomatologia da morte descendente em planta adulta caracterizada pela presena de podrides secas, que iniciam nos ponteiros da copa, principalmente na pancula da frutificao anterior, progredindo para os ramos, atingindo as gemas vegetativas, que reagem com a produo de exsudados gomosos de colorao clara a escura. Em seguida, observa-se morte de ramos com folhas de colorao palha e com pecolo necrosado. A penetrao nas folhas tambm pode ocorrer atravs dos bordos, causando necrose de cor palha com halo escuro. Nos ramos podados e sem proteo, a podrido inicia-se pelo ferimento, avanando de forma progressiva e contnua, podendo, tambm, se observar necrose e abortamento de flores e frutos. Nesses casos, o fungo penetra atravs do pednculo, causando desidratao, tornando-o ressequido e quebradio, provocando, portanto, queda prematura dos frutos ou apodrecimento escuro sobre a polpa, apresentando, inicialmente, uma fenda variando de marrom escuro a preto. Nos ramos mais grossos e no tronco, a infeco acontece de fora para dentro do lenho, iniciando nas rachaduras naturais do tronco e das bifurcaes e sob o crtex, onde so observadas leses escuras, que progridem para o interior do lenho, causando anelamento do rgo afetado, sobrevindo a morte da planta. Essa forma de infeco exige bastante ateno, uma vez que, quando os sintomas so exteriorizados, a infeco sob o crtex j est bastante avanada, e no tronco, pode ser fatal para a planta. O sintoma em muda evidenciado de vrias formas,
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dependendo da conduo recebida no viveiro. Este fungo no sistmico, portanto sua infeco localizada e progressiva, destruindo clula por clula, at penetrar no interior do lenho. Segundo levantamentos da predisponibilidade da planta ao fungo na regio e estudos de proteo e controle realizados, verificou-se que os cuidados com a sanidade do pomar em relao a esse fungo necessitam ser preventivos e em conjunto utilizando-se controle cultural como podas de limpeza; desinfestar as ferramentas de poda; eliminar todas as plantas mortas ou que apresentam a doena em estdio avanado; irrigar adequadamente o pomar; evitar submeter a planta a estresse hdrico ou nutricional prolongado; qumico pela pulverizaes com thiabendazole (240mL/100L) ou benomyl (100g/100L) nos perodos crticos da cultura; tronco e bifurcaes da planta devem ser pincelados com thiabendazole ou benomyl + um espalhante adesivo a partir de dois anos de idade da planta ou antes do aparecimento de rachaduras.

Odio
Doena tambm conhecida como odio pulverulento, mldio pulverulento ou cinza, causada pelo fungo Erysiphe polygoni (Oidium mangiferae), que sobrevive na atmosfera e nos tecidos vivos da planta. Sua disseminao se d pelo vento e insetos, principalmente pelos polinizadores, como a mosca domstica, parasitando as clulas epidrmicas de onde retira as substncias nutritivas de que necessita para se desenvolver. favorecido por ambientes secos e temperaturas amenas com o timo entre 20 e 25C. Torna-se mais agressivo quando se verifica perda de gua nos tecidos da planta, causada por forte calor e grande queda de umidade. Os esporos do fungo podem germinar tanto em condies de alta umidade como na ausncia de gua livre. Os maiores ndices de germinao ocorrem nos nveis de umidade relativa de 20-65%. As chuvas no so necessrias para o desenvolvimento do odio, pelo contrrio, as precipitaes fortes so desfavorveis doena, uma vez que as estruturas do fungo encontram-se praticamente expostas no tecido vegetal. A doena ocorre em vrios pases produtores de manga, como: ndia, Austrlia, frica do Sul, Israel e Mxico. No Brasil, a doena encontra-se amplamente difundida nos pomares das regies produtoras do Centro-Sul e Nordeste. Nesta ltima regio, nas reas semi-ridas irrigadas, a doena pode ocorrer durante todo o ano, devido s condies climticas favorveis e estveis o ano inteiro. A planta infectada caracterizada pela presena das estruturas do fungo (miclio, conidiforo e condio) sobre a superfcie vegetal, visvel a olho nu, na forma de intenso crescimento pulverulento de cor branca que, em seguida, deixa a rea afetada com aspecto ferruginoso. Os sintomas so observados nas folhas, inflorescncias e frutos novos. Nas folhas, podem causar manchas, deformaes, escurecimento e queda. Nas inflorescncias, causam abortamento de flores
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prejudicando a frutificao. Em frutos, sua presena marcante sobre os pednculos, os quais ficam mais finos e quebradios, favorecendo queda dos mesmos, sobretudo quando sob ao de ventos fortes. No seu controle, resultados positivos vm sendo obtidos nos tratamentos com enxofre, na concentrao de 0,2%, intercalados com produtos sistmicos como tebucunazole a 0,05% e triadimenol a 0,1%, com intervalos de quinze dias. Deve-se efetuar quatro pulverizaes, sendo duas antes da abertura das flores e duas na formao dos frutos, evitando-se a aplicao nas horas mais quentes do dia, pois pela manh, perodo mais fresco, h uma melhor reteno na planta, dos produtos aplicados.

Malformao (embonecamento) floral e vegetativo

Esta doena, tambm conhecida por anomalia, deformao ou vassoura de bruxa causada por Fusarium subglutinans onde sua ocorrncia foi registrada pela primeira vez no ano de 1891, na ndia. Inicialmente, pensouse ser causada por vrus, depois, por distrbios fisiolgicos, caros ou deficincia de alguns micronutrientes. Em 1966 foi mencionado o F. moniliforme como agente causal, contudo, em 1977, foi comprovado que o agente etiolgico era o F. oxysporum. Em 1992, no Congresso Internacional de Manga realizado na Venezuela, este fungo foi mais uma vez apontado como responsvel pela infeco, tendo o caro das gemas (Eriophyes mangifera) como agravante e disseminador, e recentemente identificou-se o agente como sendo o F. subglutinans. O fungo sobrevive na planta, nos tecidos vivos ou mortos, principalmente nos rgos infectados. Sua disseminao ocorre por caro, insetos e instrumentos de poda. Penetra na planta por ferimentos e inoculado quando a seiva da planta infectada transferida para a seiva da planta sadia. Temperaturas amenas favorecem seu desenvolvimento e a menor incidncia da anomalia ocorre em variedades de florao tardia. Torna-se evidente nos perodos em que a planta emite suas brotaes e/ou inflorescncias. A idade das plantas tambm parece influir na propagao da doena, as de cinco a dez anos de idade so as mais afetadas. O ndice de ocorrncia decresce medida que a planta vai envelhecendo. A doena ocorre em vrios pases produtores de manga, causando prejuzos na ndia, Egito, Israel, Paquisto, frica do Sul, Estados Unidos e Mxico. No Brasil, sua presena constatada nos Estados de So Paulo, Minas Gerais, Pernambuco, Bahia, Gois, e no Distrito Federal. Plantas infectadas com a estirpe do fungo da malformao podem manifestar ou no sintomas. O fungo afeta as inflorescncias e as brotaes vegetativas da mangueira, aumentando os nveis endgenos das substncias reguladoras do crescimento, principalmente as giberelinas. O desequilbrio provocado por esse aumento determina o desenvolvimento de brotaes florais e vegetativas malformadas. Esta hiptese vem sendo confirmada, pelos
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resultados positivos alcanados no controle da doena, mediante a pulverizao com substncias como cido naftaleno-actico, que compensam esse desequilbrio. O sintoma caracterizado da malformao floral a aparncia que a inflorescncia adquire de um cacho compacto, pela massa de flores estreis, com eixo primrio mais curto e ramificaes secundrias da pancula. O nmero de flores alterado, trs a quatro vezes mais, assim como as de seus tipos. As flores hemafroditas so substitudas por flores masculinas. Em conseqncia, as inflorescncias afetadas geralmente no produzem frutos e, quando produzem, podem perd-los prematuramente. A inflorescncia apresenta, inicialmente, um crescimento vigoroso, para, em seguida, murchar, convergindo-se numa massa negra, que permanece nas plantas por longo tempo. A malformao vegetativa pode ser observado em planta adulta, porm mais freqente em mudas no viveiro, onde observado superbrotamento das gemas terminais e axilares ou auxiliares na extremidade do ramo principal e dos secundrios, em virtude da inibio da dominncia apical. Estudos de pesquisa mostram resultados positivos quando so adotadas vrias medidas de controle integrado como porceder vistorias peridicas do pomar, formao de mudas com material sadio, fazer a desinfestao dos instrumentos de poda, eliminar ramos e mudas doentes, utilizar variedades como a Haden com resistncia a esta doena, utilizao de produtos base de enxofre molhvel e quinomethionate, pulverizaes com benomyl ou com outros produtos destinados ao controle de outras doenas, como odio e podrido seca, pode diminuir as causas da malformao.

Antracnose
O fungo causal da antracnose Glomerella cingulata (Colletotrichum gloeosporioides) pode penetrar na planta atravs das aberturas naturais, ou por ferimentos, podendo incidir nos rgos da planta e permanecer inerte at que as condies favorveis de alta temperatura e alta umidade relativa ocorram. A intensidade da doena varia conforme o perodo de permanncia com condies climticas ideais (temperatura >25C e umidade relativa >90%), e se constituir numa das mais importantes doenas da mangueira na pr e ps-colheita. O fungo sobrevive em ramos secos, frutos velhos no pomar, hospedeiros silvestres (nativos ou plantas daninhas) e outras culturas hospedeiras, como mamoeiro, abacateiro e cajueiro. disseminado, principalmente, pelo vento. Encontra-se distribudo no mundo com registro de grandes prejuzos na ndia, Filipinas, Autrlia, frica, Amrica do Sul e Caribe. Os danos so menos expressivos a nvel de Brasil apenas nas regies semi-ridas do Nordeste. No Mdio So Francisco, por exemplo, com umidade relativa do ar, geralmente baixa, em torno de 60%, a doena ocorre periodicamente apenas quando a umidade se eleva um pouco mais,
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contribuindo para a depreciao de frutos, porm, em nveis no significativos. A antracnose ocorre em ramos, folhas, frutos e inflorescncias. Os frutos podem apresentar manchas ou leses escuras um pouco deprimidas por toda sua superfcie, desde o pednculo, e com aspecto mido. A casca pode se romper e os frutos infectados chegam ao mercado, geralmente apodrecidos. Quando ocorre em frutos novos, estes podem cair prematuramente ou pode o fungo permanecer em latncia at que amaduream. As inflorescncias afetadas enegrecem e secam prejudicando a frutificao. As folhas afetadas ficam manchadas de marrom, de forma oval ou irregular e tamanho varivel. As leses aparecem no pice, margem ou centro da folha, podendo esta se romper quando a incidncia da doena muito alta. Os ramos so os primeiros a serem infectados, apresentando reas escuras, que secam do pice base, com possvel ocorrncia de desfolha. Seu controle depende muito das condies climticas. Primeiramente, o produtor deve adotar o sistema de inspeo freqente no pomar, quando as condies de temperatura e umidade forem favorveis doena, principalmente nos perodos de florao, frutificao e colheita, de modo a estabelecer um controle adequado utilizando espaamento maior entre copas; podas de limpeza; eliminao de restos culturais; e pulverizaes com fungicidas a base de cobre, mancozeb e benomyl e para frutos na pscolheita imerso destes em suspenso de thiabendazole a 0,01%.

Seca da mangueira ou mal do Recife

uma das mais graves enfermidades da mangueira, podendo provocar sua morte em qualquer idade da planta e no tem controle quando a infeco se inicia pelo sistema radicular. O fungo causal Ceratocystis fimbriata sobrevive no solo, ramos secos e em vrias espcies vegetais. disseminado por uma pequena broca (Hypocryphalus mangiferae), que s vetor quando o fungo se encontra no pomar. Este inseto comumente encontrado em pomar de manga, sendo hospedeiro natural do fungo. disseminado, tambm, atravs do solo aderido em implementos agrcolas, por gua de irrigao e atravs de mudas levando a doena para outros pomares e regies. Condies climticas que o favorecem so, principalmente, perodos de maior precipitao e calor. A doena foi constatada pela primeira vez em Jardinpolis (SP), em 1940. Presume-se, porm, que nessa poca, a doena j ocorria no Recife, onde foi designada de "Mal-do-Recife" e, posteriormente, na Bahia, Rio de Janeiro, Gois e Distrito Federal, onde a doena passou a ser chamada "Murcha ou seca-da-mangueira". Ocorre, tambm, nas culturas de caf, fumo, mamona, seringueira, cacau, figo, batata-doce, crotalria, feijo, guandu, Cassia fistula e Cassia negra. uma doena especfica do Brasil na cultura da manga. J foi, tambm, constada em outras culturas nos EUA, Colmbia, Venezuela, Guatemala e Costa Rica.
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Hoje, no Brasil, sua ocorrncia generalizada no Estado de So Paulo, dizimando pomares e colocando em risco outras regies produtoras, devido ao fornecimento de mudas ali produzidas. O Submdio So Francisco, em Pernambuco, por exemplo, atual plo da mangicultura brasileira, um dos receptores dessas mudas, passando, portanto, por ameaas constantes quanto introduo desse problema em seus pomares. O fungo no tem ao sistmica na planta e progride lentamente, clula por clula. A doena caracterizada pelo bloqueio da circulao de seiva, o que s externado na fase adulta da planta, quando na infeco via sistema radicular. Dessa forma, uma muda adquirida infectada pode apresentar os sintomas aps quatro anos. A infeco pode acontecer de duas formas: atravs da copa e das razes. Quando atravs da copa, a seca da planta inicia-se pelos galhos finos da parte externa, progredindo lentamente em direo ao tronco, at atingi-lo, matando toda a planta. O fungo s consegue infectar a copa se for introduzido. Os sintomas so amarelecimento, murcha e seca dos galhos, que geralmente tm incio num ramo da extremidade da copa. O fungo nessa fase j contaminou o ramo, causando sua morte e j foi disseminado para outros ramos vizinhos. O ramo afetado perde sua cor normal, escurecendo e exsudando goma, geralmente pelos orifcios de ferimentos causados pela broca. Em cortes transversais ou longitudinais nos ramos infectados, observam-se manchas azuladas ou marrons no interior dos tecidos do lenho. Com o progresso da doena o tronco principal afetado, atingindo todas as bifurcaes, causando morte dos ramos e de toda a planta. Quando a infeco inicia-se atravs das razes, o fungo vai progredindo lentamente em direo ao tronco. Na maioria das vezes, isto acontece sem que nenhum sintoma seja externado, levando anos para atingir as bifurcaes. Quando neste estdio, observa-se a seca de ramos e morte rpida da planta. Em cortes longitudinais no tronco, tambm so observadas manchas escuras no interior do lenho, como tambm exsudados gomosos. Os sintomas da seca da mangueira podem ser confundidos com os causados por Botryodiplodia theobromae e vice-versa. A diferena est na infeco de fora para dentro do lenho, causada pelo ltimo, e de dentro do lenho para fora, quando causada pelo primeiro. O controle preventivo mais coerente atravs da excluso, impedindo que a doena entre em reas ou regies isentas do problema. Tambm so recomendadas aquisio de mudas de locais ou regies onde no ocorra a doena; eliminao da planta infectada; pincelamento do local de poda com pasta cprica + carbaril a 0,2%; eliminao do inseto vetor com inseticidas especficos. Estudos de resistncia tm apontado as cultivares Carabao e Manga D'agua. A variedade Espada um pouco tolerante e a Coquinho, bastante suscetvel.

MARACUJAZEIRO
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O maracujazeiro apresenta cerca de 60 espcies do gnero Passiflorae, sendo uma das mais cultivadas a P. edulis. Os maiores produtores mundiais de maracuj encontra-se na Amrica do Sul, sendo o Brasil dentre dos pases produtores como Colmbia, Peru e Equador, o maior produtor mundial, destacando-se o Par (43%) como maior Estado produtor desta fruta, seguido da Bahia (17,7%), Sergipe (10%) e Cear (8%). Esta cultura possui propriedades medicinais, sendo utilizada no tratamento de insnia, verminoses e calmante, como fonte de vitamina A, B2 e C, glicdeos e ferro, podendo ser comercializada in natura e na forma de doces, sucos, pudins, sorvetes, entre outros. Esta cultura esta exposta a diversas enfermidades de ordem biticas e abiticas, onde as biticas podem ser provocadas por fungos, bactrias e vrus, as quais dependendo das condies edafoclimticas e suscetibilidade da espcie podem ocasionar grandes perdas de produo ou at mesmo impossibilitar o cultivo em determinadas reas.

Antracnose
uma doena que causa perdas severas quando ocorre entre colheita e comercializao da fruta, em todas as regies produtoras do pas. Causa rpida deteriorao do fruto durante o transporte, principalmente quando a temperatura encontra-se por volta dos 26-28C, favorecendo ao fungo Glomerella cingulata (Colletotrichum gloeosporioides) responsvel pela doena. Tambm apresenta-se sobre folhas e ramos, causando sobre as folhas manchas claras pequenas com aspecto oleoso inicialmente, em seguida estas manchas evoluem tornando-se pardo escuras de formato irregular, abrangendo grandes pores das mesmas, que resulta em queda de folha e provoca um desfolhamento na planta. No centro dessas leses, desenvolvem-se reas acinzentadas ocorrendo rachaduras, observando-se formaes mais ou menos concntricas de pontos escuros que representam a frutificao do patgeno. Dependendo da intensidade da doena sobre as folhas, acontece uma grande queda de folhas podendo ocasionar morte dos ponteiros, flores abortam e os frutos pequenos ou ainda em formao caem prematuramente. Os ramos apresentam manchas alongadas no sentido longitudinal que evoluem para cancros expondo os tecidos do lenho, resultando no secamento e morte de ponteiros. Facilmente so visualizados sobre os tecidos infectados, pontos pequenos escuros semelhante aos das folhas. J nos frutos em desenvolvimento, as manchas so de aspecto oleoso evoluindo a pardacenta e nos desenvolvidos as manchas oleosas so maiores, tornando-se em seguida necrticas, deprimidas de cor escura. Grande rea do fruto enruga, dando a este uma aparncia encarquilhada. O agente causal facilmente disseminado atravs de ventos e respingos de chuva, assim como pelas sementes contaminadas. favorecido por temperaturas entre 26 a 28C, alta umidade relativa na presena de chuvas freqentes e abundantes,
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sobrevivendo em restos culturais e sobre os tecidos infectados. O controle indicado atravs do uso de mudas sadias; eliminao de restos culturais; e aplicao de fungicidas a base de cobre e ditiocarbamatos.

Cladosporiose ou verrugose
Cladosporium herbarum o fungo causador desta doena sendo importante por preferir tecidos jovens em desenvolvimento. Ocorre sobre toda a parte area da planta de maracujazeiro, prejudicando o desenvolvimento da mesma e reflete diretamente na produo. Temperaturas moderadas (22C), condies de clima seco, assim como plantas cultivadas em condies adversas (desfavorveis), tornam-se mais suscetveis ao patgeno. Este disseminado por ventos, respingos de chuvas, mudas contaminadas, sobrevivendo em restos culturais. No Brasil encontra-se disseminado nos Estados de Pernambuco, Rio de Janeiro e So Paulo. Afeta folhas, ramos e frutos, exibindo pequenas manchas circulares, translcidas sobre as folhas e com o desenvolvimento da leso e em condies favorveis de alta umidade relativa ficam cobertas por uma massa acinzentada representando os esporos do fungo. Frutos e ramos ocorre manchas similares as das folhas, porm nos frutos com o desenvolvimento das mesmas, o tecido torna-se corticoso e saliente, rompendo a epiderme e formando pstulas de colorao amarelo claro, que cobre o fruto depreciando-o para a comercializao, embora no afete a parte interna dos frutos. Nos ramos formam cancros alongados e estes tornam-se fracos, quebrando-se facilmente pela ao de vento mais forte. So recomendadas como medidas de controle a utilizao de mudas sadias na implantao de um novo pomar. Quando ocorre em pomares j implantados, deve-se realizar poda de limpeza e pulverizaes com fungicidas a base de cobre ou ainda ditiocarbamatos como maneb ou zineb.

Murcha de Fusarium
Esta doena de grande expresso econmica pois uma vez detectada sobre a hospedeira, leva a morte pois no existe um controle eficiente para evitar a morte da planta. A doena, causada pelo fungo Fusarium oxysporum f.sp. passiflorae, pode ocorrer em qualquer fase de desenvolvimento da planta. Quando jovem observa-se nas plantas mudana de colorao das folhas de um verde lustroso normal para um verde mais plido seguido de murchamento e desfolha e nas adultas amarelecimento de folhas novas, seguindo de um colapso total em um ou dois dias e morte da planta. Procedendo-se um corte longitudinal ou transversal no caule, verifica-se uma descolorao marrom a marrom avermelhado dos vasos condutores de gua e nutrientes. O fungo penetra preferencialmente por ferimentos provocados
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nas razes, depois atinge os tecidos lenhosos at os vasos do xilema. Ocorre em todo o campo ou concentra-se em reas isoladas (reboleira), sendo encontrado em campos de cultivo assim como em reas recm desbravadas. O fungo pode sobreviver no solo em forma de clamidosporos por muitos anos, sendo disseminado atravs de sementes e mudas infectadas, gua de superfcie e contato direto entre razes de plantas doentes com plantas sadias. O controle realizado com a utilizao de variedades resistentes de maracujazeiro como porta enxerto tendo como exemplo as espcies P. alata, P. quadrangularis, P. macrocarpa, P. incarnata, alm de evitar danos ao sistema radicular das plantas realizando o controle de nematides e ervas daninhas, assim como queima das plantas afetadas, incluindo as circunvizinhas, mesmo que aparentemente estejam sadias.

Septoriose
O fungo Septoria passiflorae considerado de grande importncia em vrios pases produtores de maracuj, porm no Brasil a ocorrncia da doena incitada por este patgeno de baixa freqncia. Ocorre em viveiros e campo causando desfolha e inibe o crescimento das plantas, tornando-se mais freqente quando as condies climticas predominantes so de clima quente e mido. Os sintomas so visualizados principalmente sobre as folhas como manchas marrons, com dimetro em torno de 3-5mm, levemente arredondadas, exibindo em seu contorno um halo amarelado. Sob condies de elevada umidade relativa, estas leses coalescem podendo ocasionar queda de folhas, levando ao desfolhamento e, consequentemente, morte da planta. Manchas similares ocorrem ocasionalmente sobre ramos e nos frutos as leses apresentam-se marrons claras, podendo coalescerem e ocuparem grandes reas dos frutos, prejudicando o seu desenvolvimento ou maturao. Sobre as leses, verifica-se pontuaes pretas que representam os picndios do fungo. Os esporos so facilmente disseminados pelo vento, sendo favorecido por temperaturas amenas e umidade relativa elevada. Recomenda-se como forma de controle a utilizao de poda de limpeza; reduo da densidade de plantio; e uso de fungicidas como mancozeb ou oxicloreto de cobre em pulverizaes.

Alternarioses
As manchas de Alternaria no maracujazeiro so provocadas pelos fungos A. alternata e A. passiflorae, tendo sido encontrada em vrias regies produtoras do pas, ocasionando perdas severas, principalmente em perodos de alta umidade relativa e temperaturas elevadas, sendo disseminados atravs de ventos e chuvas, sobrevivendo saprofiticamente em restos culturais. A doena ocorre sobre folhas, ramos e frutos provocando pequenas manchas
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circulares com anis concntricos, circundadas por um halo amarelado e quando a infeco severa pode causar grande desfolhamento na planta. Nos ramos os sintomas so semelhantes as folhas, sendo observado mais prximo ao pecolo das folhas, podendo ocasionar seca e morte de ramos sob condies favorveis ao patgeno. As manchas nos frutos apresentam-se ligeiramente circulares, cor pardo avermelhada, as quais podem tomar uma parte do fruto, depreciando a qualidade dos mesmos para a comercializao. Normalmente acontece sobre os frutos em fase adiantada de desenvolvimento. Para o controle recomenda-se reduzir a densidade de plantio; poda de ramos afetados; pulverizaes de fungicidas protetores como mancozeb e oxicloreto de cobre.

Bacteriose
A mancha bacteriana provocada por Xanthomonas campestris pv. passiflorae ocorre em todo o pas, tendo sido descrita pela primeira vez por Pereira no Brasil em 1968, responsvel por grandes perdas no maracujazeiro. As leses so facilmente visualizadas sobre as folhas como pequenas manchas translcidas, de aspecto oleoso, verde escuras, bem delimitadas evoluindo para manchas marrons, sob diversos formatos, com tamanho mdio de 3-4mm, podendo coalescer e com isso tomar grande rea do limbo foliar, ocasiona seca e desintegrao do mesmo, causando severa desfolha e morte da planta. A infeco pode estender-se ao pecolo e ramos. Se a bactria penetra pelo pecolo, provoca a queda da folha e pode ocorrer o avano da infeco atravs dos vasos do pecolo e ramos, os quais podem apresentar caneluras longitudinais, causando seca do pice para a base dos mesmos. Em frutos observa-se pequenas manchas oleosas, pardas, com contornos esverdeados, margens bem definidas, circulares ou irregulares, podendo penetrar no interior do fruto atingindo as sementes. A disseminao da bactria realizada atravs de ventos, mudas contaminadas, sementes, sendo favorecida por chuvas, temperatura em torno dos 35C e umidade relativa elevada e sobrevive em sementes infectadas. As medidas de controle so de carter preventivo atravs do tratamento de sementes; plantar mudas sadias; arrancar e destruir as plantas doentes; e desinfestar ferramentas.

Endurecimento dos frutos

A doena provocada por um vrus pertencente ao gnero Potyvirus, famlia Potyviridae, Passion fruit woodiness virus PWV, sendo considerada a virose mais importante do maracujazeiro, pois reduz a produtividade, valor comercial dos frutos e o perodo produtivo da cultura. Descrita pela primeira vez por Noble em 1928, porm na Austrlia j era conhecida desde 1891. O maracuj-roxo, P. edulis altamente suscetvel,
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podendo exibir grande nmero de frutos deformados e imprprios a comercializao. O vrus facilmente transmitido de forma no persistente por espcies de afdeos e por meios mecnicos especialmente tesoura de poda. Muitas cultivares da famlia Leguminosae e espcies de Passiflorae so hospedeiras deste vrus, sendo a abundncia destas, assim como alta populao dos vetores, condies favorveis ao patgeno e com isso ao desenvolvimento da epidemia. Uma vez a planta infectada no tem forma eficiente de controle, apenas recomenda-se a utilizao de mudas sadias oriundas de viveiros localizados em reas isentas do vrus, bem como eliminao dos hospedeiros que servem de reservatrios do vrus e hibrdos tolerantes. O principal sintoma consiste na formao de frutos pequenos, deformados, com um espessamento anormal e endurecimento do pericarpo, causando uma reduo da sua cavidade central, com uma pequena cavidade de polpa. As folhas mostram bolhosidades, mosaico, manchas anelares, rugosidade e deformaes. Plantas doentes apresentam retardamento do crescimento.

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VIDEIRA
No Nordeste, o cultivo da videira hoje uma realidade no semi-rido brasileiro. Com aproximadamente dez mil hectares no Vale do So Francisco, continua em expanso e desta vez investindo em uvas sem sementes e uvas para vinhos, destacando a qualidade do Botchele fabricado na regio, onde a potencialidade para o cultivo da videira tem sido comprovada por iniciativas pblica e privada. Contudo, o grande avano da rea plantada, a exemplo do bipolo Petrolina-PE/Juazeiro-BA tem favorecido a ocorrncia de doenas como Odio, Mldio, Antracnose, e o surgimento de outras doenas como Morte Descendente e o cancro da videira.

Podrido seca
O Lasiodiplodia theobromae (=Botryodiplodia theobromae) o agente da doena Podrido seca, tambm conhecida por Morte descendente sendo considerado um fungo muito agressivo nas fruteiras, principalmente em regies semi-ridas. No Vale do So Francisco, este no momento, um dos maiores problemas fitossanitrios da videira, devido aos altos nveis de infeco que pode causar. Este patgeno ocorre comumente nas regies tropicais da frica, sia e Amrica, sendo sua primeira descrio na literatura mundial em 1892 por Patouillard em frutos de cacau. Sua primeira ocorrncia foi relatada no Brasil por Tavares et al. em 1990. Em outros pases, como no Oeste de Bengala, ndia, o L. Theobromae citado como agente de podrido ps-colheita, provocando perdas na ordem de 25%. O aumento de sua incidncia em reas irrigadas da regio Nordeste brasileira, desde 1990, tem sido motivo de grande preocupao, principalmente nas reas do Submdio So Francisco, onde vem afetando no s a uva, mas tambm a manga, abacate, goiaba, citrus, coco, tmara, banana e acerola, o que tem aumentado o potencial de inculo do fungo nos pomares de uva adjacentes a outras culturas hospedeiras. Em outras regies brasileiras, o L. theobromae j foi citado tambm em amendoim, cana-de-acar, caf, fumo, mamo, mamona, algodo e seringueira. Sua sintomatologia pode ser observada externamente e atravs de vrias formas quando a planta de videira infectada apresentar sintomas associados ou independentes, como por exemplo, queima ou seca de ponteiros e folhas; necrose de cor escura; manchas escuras geralmente longitudinais e salteadas, medindo de 0,5 a 2cm na extenso de ramos produtivos; diminuio do vigor ou crescimento vegetativo; diminuio da produtividade, perda de turgescncia e morte. Sob o crtex, pode ser observado uma colorao marrom que estende-se pelo floema, caracterizando morte de clulas, e que se desenvolve em todas as
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direes, ou seja, para cima, para baixo at a raiz e na lateral, at causar o anelamento e, conseqente morte da planta, podendo ser observado em qualquer parte do tronco. A penetrao do fungo em sua maioria, ocorre atravs dos ferimentos causados planta ou atravs das aberturas naturais do tecido vegetal. Como esse fungo no sistmico, ou seja, no disseminado pela seiva no interior da planta, a infeco localizada e progressiva, destruindo clula por clula, at penetrar no interior do lenho. Sobrevive principalmente em restos de cultura e plantas hospedeiras (mangueira, goiabeira, abacateiro, coqueiro, bananeira, limoeiro, entre outras), em tecidos vegetais infectados. Sua disseminao faz-se principalmente, atravs do vento. As condies favorveis so temperaturas altas, em torno de 27-33oC, umidade relativa do ar baixa, menor que 60%; a no proteo qumica das partes podadas da planta; os ferimentos; a nutrio desbalanceada e estresse hdrico. As medidas de controle precisam ser, necessariamente preventivas em virtude das condies fitotcnicas predispondo a planta infeco. A pesquisa tambm revela que as medidas de controle qumico por si s no funcionam no controle deste patgeno, sendo indispensvel o manejo integrado. Pulverizar a planta, mesmo quando em repouso, com produtos do grupo dos benzimidazois alternando com fungicidas a base de cobre; manter a superfcie do solo do pomar sem restos da cultura, mesmo que sadios, uma vez que esse fungo coloniza tambm alm dos rgos da planta, os tecidos e mantm-se vivo, mesmo quando o tecido se decompe. Com relao a variedades resistentes, ainda no se tem germoplasma de videira com tais caractersticas, portanto, faz-se necessrio um empenho neste sentido a fim de melhorar a resistncia das variedades comerciais.

Mldio
A primeira ocorrncia dessa doena foi nos Estados Unidos em 1834, depois Europa, frica, sia, Austrlia e Amrica do Sul. No Brasil, ela ocorre na maioria dos pomares vitcolas do pas. No Vale do So Francisco, sua ocorrncia mais acentuada no primeiro semestre do ano, quando as condies climticas so favorveis ao desenvolvimento do fungo, devido a ocorrncia de chuvas. Esse patgeno de difcil controle, principalmente quando ocorre durante a fase de florao. Os sintomas ocorrem em todas as partes verdes da planta. Nas folhas, inicialmente, podem ser observadas na face ventral manchas pequenas arredondadas, de bordas indefinidas e de aspecto encharcado. Na face dorsal as manchas correspondem frutificao do fungo Plasmopara viticola, de cor esbranquiada, que evoluem para pardo-avermelhada. Por fim as leses tornam-se necrticas e irregulares e podem coalecer, formando grandes reas mortas, com conseqente seca e queda das folhas. Observa-se, tambm a paralisao do desenvolvimento dos cachos e bagas infectados, apresentando sintomas semelhantes aos descritos
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nas folhas. Nos cachos, observam-se, ainda, a seca e queda de flores, podrido cinzenta a azulada nas bagas ainda verdes. Estas endurecem e, posteriormente, enegrecem. Nas bagas em fase de maturao, a penetrao do fungo d-se pelo pednculo, causando a paralisao da passagem de seiva e gua. As bagas vo perdendo gua atravs de sua cutcula, formando reas deprimidas, que, em seguida, tornam-se murchas e escurecidas. Todas as fases fenolgicas da planta so sensveis a essa doena, principalmente todo o perodo da fase de crescimento vegetativo e incio da fase reprodutiva. Nessas fases, os tecidos so mais tenros, facilitando a penetrao e colonizao do fungo. Este, ao externar, j possui suas toxinas agindo no interior da planta, dificultando assim o controle. Apesar de ser diagnosticado como um parasita obrigatrio, o miclio pode sobreviver saprofiticamente, de um ano para outro, nos tecidos vegetais infectados. Quanto a disseminao, os esporos do fungo so propagados principalmente pelo vento e pela gua, por meio de material infectado transportado de um local para outro. As condies de temperaturas em torno de 18 a 25oC, umidade relativa do ar acima de 70%, e a presena de chuvas constantes, so condies ideais para o desenvolvimento desse fungo. Sua penetrao na planta ocorre atravs das aberturas naturais. Quando a umidade do solo ultrapassar 20% da capacidade de campo, pode ocorrer infeco mesmo que a umidade relativa do ar seja baixa (60%) e nos intervalos favorveis de temperaturas. Os danos de necrose irreversveis e o desfolhamento acarretam prejuzos na produtividade, pela reduo da rea fotossinttica e, consequentemente, diminuio da produo de carboidratos, alm dos danos diretos em frutos afetados, que so perdidos ainda na fase de pr-colheita. O mldio pode resultar em perdas totais para o viticultor, se no controlado preventivamente. O manejo cultural deve ser realizado a cada perodo de repouso onde convm retirar o crtex sem causar ferimentos a planta e retirar do solo todo o material como restos da cultura deixados por ocasio da poda. O controle qumicos recomendado sendo utilizado produtos sistmicos como folpet, metalaxyl, tiofanato metlico + clorotalonil e protetores a base de cobre.

Odio
A doena ocorre em todas as regies vitcolas do pas, sendo que sua importncia econmica muito mais expressiva na regio semi-rida do Nordeste brasileiro, onde causa danos considerveis devido s constantes condies climticas favorveis ao patgeno. Quando da infeco precoce, esta interfere na produtividade e na formao e desenvolvimento dos frutos, conforme observaes de campo. As manchas causadas nos frutos so irreversveis, tornando-os imprprios para comercializao. A infeco acontece em toda a parte area da planta, principalmente nos rgos tenros e
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suculentos. Nas folhas, aparecem manchas de cor branca e tamanho pequeno, que mais tarde adquirem uma aparncia pulverulenta. Folhas jovens, quando severamente afetadas, tornam-se torcidas, de cor marrom e que eventualmente caem. Os maiores danos so observados nos cachos e brotos. Nos cachos afetados, no incio do desenvolvimento, ocorre aborto das inflorescncias, resultando numa baixa frutificao ou perda total da produo. Quando infectados, na fase de desenvolvimento do fruto, provoca rachaduras das bagas, devido a perda de elasticidade da membrana que envolve o fruto. Provoca, tambm, em bagas verdes e maduras, manchas externas irreversveis, semelhante ferrugem. O estudo epidemiolgico do odio revela conhecimentos que so fundamentais para melhor direcionar seu manejo e controle. Sua sobrevivncia ou conservao de um ano para o outro, d-se por meio do miclio do Oidium tuckeri, que fica nas gemas e escamas dos sarmentos e por meio de ascosporos produzidos pelo fungo Uncinula necator. disseminado principalmente pelo vento, face a grande produo de esporos na superfcie vegetal. O desenvolvimento desse patgeno pode ocorrer em intervalos de temperatura entre 7-33C, sendo destacado a faixa entre 23-27C, como a mais favorvel. Na regio do Vale do So Francisco, a temperatura mdia de 27C oferece condies satisfatrias para ocorrncia desta doena durante o ano todo. O controle do odio deve ser adotado de forma preventiva no perodo do ano em que as condies climticas so mais favorveis, envolvendo o cultural com a remoo de restos culturais; qumico com pulverizaes com pirozophos, fenarimol, tiofanato metlico, alternados com fungicidas a base de enxofre; biolgico com o uso de espcies de Trichoderma; e gentico com uso de variedades resistentes como Isabel, Battero de Beirouth; Himrod Seedless; H-4-49-69; Sauvignon Blane; Feher Szapas; Semillon; Baco Blanc; Seara Nova; Tibouren; Aramon; Dattier de Saitn Valler; Museatde Saint Vallier e Reliance.

Mofo cinzento
Em condies climticas favorveis ao desenvolvimento do fungo Botrytis cinerea responsvel por esta doena, as perdas chegam a mais de 50% nas variedades suscetveis. Alm da reduo na colheita, so considerveis os prejuzos indiretos em razo do fungo desenvolver-se s custas do acar, tanino e nitrognio solveis na uva. Danos nos viveiros so tambm elevados. A podrido cinzenta afeta todos os rgos da parreira de forma significativa em regies com alta umidade relativa (70%) e temperaturas por volta dos 25C, deteriorando os frutos na pr e/ou pscolheita, principalmente em variedades de uva vinferas brancas. No Vale do So Francisco, essa doena s ocorre em pomares mais densos com pouca aerao e muito sombreado. A sobrevivncia de um ano para o outro ocorre
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atravs da formao de estruturas de resistncia denominada esclerdios, assim como tambm em outros hospedeiros suscetveis como: eucalipto, fava, feijo-comum, roseira, alface, cebola, crisntemo, cenoura, ma, pepino, fumo, tomateiro, repolho e muitos outros. disseminado pelo vento, respingos de chuva e insetos. A intensidade dos sintomas podem ir de baixa a alta, causando apodrecimento e at perda total dos cachos. A presena do patgeno na planta acontece ainda na fase de florao, permanecendo em estado de latncia at a maturao dos frutos, quando acontece sua penetrao. Portanto, seu controle preventivo, devendo ser iniciado na fase de florao, seguido de mais dois tratamentos: um durante o desenvolvimento dos cachos e um outro no incio do amadurecimento das bagas. Os fungicidas utlizados vinclozolin, iprodione ou benomyl, nas doses de 200 g; 200 g e 100 g/100 L dgua, respectivamente. Na ps-colheita, os frutos so frequentemente afetados, principalmente, quando das oscilaes de temperaturas e umidade relativa. Nos cachos observa-se uma descolorao na pele das bagas, que ficam flcidas e adquirem uma cor cinza, apodrecendo em seguida. Quando a infeco precoce, em frutos ainda verdes, a baga fica azeda, podendo cair do cacho. Nas folhas, a doena pode se manifestar formando margens extensas de cor cinza esverdeada, que torna-se de cor castanha provocando a seca completa da mesma. Em ambiente com umidade relativa em torno de 80%, aparece na superfcie dos rgos afetados, uma abundante crescimento de cor cinza, constituda pelo miclio do patgeno. No campo, algumas vezes, os sintomas quando em fase mais avanada podem ser confundidos com o mldio. Por esta razo, aconselhvel o exame microscpico das estruturas do patgeno em laboratrio, para uma diagnose mais precisa.

Antracnose
Esta uma das mais importantes doenas da cultura da videira em regies onde se tem alta umidade relativa do ar, chuvas abundantes, ventos frios e temperaturas entre 15 e 18C, causada por Elsinoe ampelina (Sphaceloma ampelinum). Ocorre no Rio Grande do Sul, Santa Catarina, Paran, Esprito Santo, Rio de Janeiro, Minas Gerais e So Paulo. Em condies favorveis ao seu desenvolvimento pode ser responsvel por menor produtividade da planta e por perdas diretas no fruto. No Nordeste brasileiro, as reas irrigadas produtoras de uva, oferecem boas condies ao desenvolvimento desse fungo em funo do microclima favorvel proporcionado pela irrigao, principalmente no primeiro semestre do ano, quando se tem temperaturas mais amenas. A antracnose pode ser observada em todas as partes areas da planta. No limbo da folha so observadas manchas pequenas irregulares e arredondadas, de cor pardo escura e levemente deprimida, que com o avano da necrose pode secar e cair. Nos brotos novos e nas gavinhas, formam-se
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manchas necrticas pardo-escura que aumentam de tamanho e progridem para o centro da leso aprofundando-se e transformando-se em cancros com bordos levemente salientes. Nas bagas a doena observada sob a forma de manchas circulares necrticas deprimidas, de cor cinza escuro no centralizadas e um halo avermelhado, sendo conhecida como olho de passarinho. So disseminados pelos respingos de gua, orvalho, chuvas e da irrigao. O manejo integrado e preventivo sempre o melhor caminho a seguir a fim de se obter maiores chances de sucesso, minimizando os prejuzos econmicos tais como: recuperao da casca ou crtex do tronco sem causar ferimentos; a limpeza da cultura com retirada de partes infectadas da planta; eliminao dos restos de cultura; aplicao de fungicidas como o clorotalonil, benomyl, mancozeb, tiofanato metilico, entre outros, aplicados alternadamente.

Fusariose
No Brasil, a doena responsvel por morte de plantas, tendo sido constatada em parreirais nos vrios Estados produtores. Sua primeira ocorrncia natural foi em 1940 no Rio Grande do Sul, mas somente em 1953 o fungo Fusarium oxysporum f.sp. herbemontis foi isolado e identificado como agente causal. Uma das primeiras referncias a fusariose da videira, em outros pases foi feita por Rives em 1924 na Frana e em 1929 na Unio Sovitica. No Rio Grande do Sul, a incidncia de fusariose alta na maioria das variedades cultivada, a exemplo da Herbemot altamente suscetvel. O mesmo tem sido observado em Santa Catarina. Nos Estados de Pernambuco, Bahia, Piau, Minas Gerais e de Mato Grosso, a fusariose pode vir a ser problema, uma vez que tem-se registro de ocorrncia desta em 16 amostras de parrerais, entre 359 amostras analisadas no perodo de 1998 e 1999, nos laboratrios da Embrapa/Semi-rido. Externamente, a planta infectada pode apresentar vrios sintomas como murchas vasculares, reduo no crescimento, amarelecimento, seca dos bordos, queda das folhas e escurecimento vascular. Como sintomas principais, tem-se a seca rpida dos bordos das folhas, o escurecimento da regio dos vasos condutores e a morte dos ramos, culminando com a morte da planta. As folhas da planta infectada, chegam a cair, e nesta situao, o patgeno emerge do hospedeiro atravs de lentiolas na superfcie da planta, produzindo esporodoquio de colorao salmo ou alaranjada, quando em condies de alta umidade. Este fato pode suportar a hiptese de disseminao area de F. oxysporum f.sp. herbemontis.

Cancro bacteriano

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No Brasil, at o ano de 1997, as doenas bacterianas no possuam expresso na cultura da videira, apenas a formao de galhas havia sido detectada, sem causar grandes prejuzos em parreirais da regio Nordeste, Minas Gerais, alm de So Paulo. Entretanto, em 1998, foi identificado a Xanthomonas campestris pv. vitcola, responsvel por morte de plantas e eliminao de pomares do Submdio So Francisco. A ocorrncia do cancro bacteriano foi primeiro relatada na ndia. Outras bacterioses da mesma importncia econmica e mesmos sintomas tambm podem estar presentes na regio semi-rida, como por exemplo X. ampelina, de ocorrncia na Grcia, Frana, Espanha, Itlia, Portugal, Turquia e frica do Sul e provavelmente, na ustria, Sua, Iuguslvia, Bulgria, Tunsia, Ilhas Canrias e Argentina. A bacteriose tem ocorrncia generalizada nos pomares vitcolas da regio do Submdio So Francisco incidindo principalmente nas variedades de uva sem semente e na Red Globe, provocando maiores prejuzos no primeiro semestre do ano. Os sintomas so de manchas necrticas pequenas (1-2 mm de dimetro), com ou sem halo ou necrose setorial nas folhas, necrose de formao de cancros nas nervuras, manchas escuras alongadas e irregulares no pecolo, engao e nos ramos, evoluindo a cancros. Estes sintomas foram observados, inicialmente, em plantios novos com dois a trs anos ps-enxertia e posteriormente em plantios mais velhos, tambm observando a coalescncia para formao de manchas maiores e persistncia das folhas infectadas na planta, quando aps podas severas. A planta que chega a produzir, alm da baixa produo, tambm pode apresentar sintoma na forma de manchas clorticas e necrticas nos frutos. Sobrevive na planta afetada reincidindo nos ciclos posteriores, mesmo quando aps podas severas. So poucas as informaes sobre a doena, inclusive mundialmente. Contudo, as condies climticas da regio semirida com sistemas de irrigao, tm favorecido, principalmente no primeiro semestre do ano quando se tm temperaturas entre 25-28C, umidade relativa entre 54-72% e precipitaes pluviomtricas entre 306.9-1023.5mm. Doenas de plantas causadas por bactrias so de difcil controle e a maioria das medidas disponveis at o momento, so de carter preventivo. Os fungicidas cpricos e alguns diocarbamatos podem atuar na proteo de plantas infeco causada por bactrias, os quais podem atuar retardando, inibindo ou bloqueando a multiplicao do patgeno. Em parreirais infectados, o manejo para controle tem sido feito mediante a poda e queima dos ramos infectados e em alguns casos, erradicao de plantas, quando da constatao de altos nveis de infeco, com a concomitante aplicao de produtos base de cobre.

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DIAGNOSE E MANEJO DE DOENAS EM CULTIVOS HIDROPNICOS
ANDRA MARIA ANDR GOMES VIVIANE JUREMA LOPES BORGES RODRIGUES

INTRODUO
O cultivo hidropnico realizado na ausncia do solo, em substratos isentos de patgenos e em soluo nutritiva, onde a ocorrncia de doenas minimizada, mas no eliminada. Neste sistema podem ocorrer doenas fngicas, bacterianas e virticas, sendo as causadas por fungos as mais comuns (Martinez & Silva Filho, 1997). As principais doenas atingem principalmente as razes da planta hospedeira e devem ser evitadas, pois seu controle dificultado em sistemas que utilizam soluo nutritiva. Doenas que atacam a parte area podem ser controladas mais facilmente de forma convencional, contudo no h registros de defensivos agrcolas para hidroponia. As principais culturas produzidas em sistemas hidropnicos so: alface (a mais cultivada), almeiro, agrio, arroz, berinjela, brcolis, cebolinha, chicria, couve, espinafre, feijo-vagem, melo, morango, pepino, pimento, plantas ornamentais, repolho, rcula, salsa, tomate, entre outras de menor cultivo (Lopes et al., 2000). A Tabela 9.1 mostra os patgenos j relatados como causadores de doenas em cultivo hidropnico. Essas doenas so de grande importncia, pois, so capazes de causar srios prejuzos no referido sistema.

FONTES DE INCULO PARA CULTIVOS HIDROPNICOS

Substrato, semente, muda, inseto vetor, ar/vento e soluo nutritiva, so as principais fontes de inculo em cultivos hidropnicos. O sistema de cultivo em substrato (l de rocha, espuma fenlica, brita, etc.) o mais propcio para contaminao de plantas, quando comparado com os sistemas hidropnicos recirculantes, pois mesmo na ausncia de solo, este o principal reservatrio de patgenos. Espcies de Pythium e de Phytophthora
Michereff, S.J. & Barros, R. (Eds.) Proteo de Plantas na Agricultura Sustentvel. 2001. Recife, UFRPE

Direitos de edio reservados aos editores ISBN 85-87459-06-6

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e Rhizoctonia solani, so exemplos de patgenos veiculados por diferentes substratos. Apesar de existirem poucos relatos a respeito de sementes como fontes de inculo em sistemas hidropnicos, estas so efetivamente importantes em qualquer cultivo. Fungos (Septoria lactucae, Bremia lactucae), bactrias (Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis, Xanthomonas axonopodis pv. vesicatoria) e vrus (LMV vrus do mosaico da alface) so capazes de causar doenas de parte area j nos primeiros estdios de desenvolvimento da planta. Mudas infectadas podem conter patgenos causadores de doenas de parte area, tais como, vrus, espcies de Erwinia, Pythium, Phytophthora e Fusarium, sendo os dois primeiros patgenos tambm veiculados por insetos vetores. Colletotrichum coccodes, Cercospora longissima, Septoria lactucae, Bremia lactucae, Alternaria solani, Phytophthora infestans, Leveillula taurica, Xanthomonas axonopodis pv. vesicatoria, Stemphylium solani, Erwinia spp. so os principais patgenos veiculados pelo ar. Condios de Fusarium oxysporum f. sp. radicis-lycopersici disseminados pelo ar/vento foram capazes de infestar a soluo nutritiva provocando podrido da raiz e do colo em tomateiro. A soluo nutritiva que considerada livre de patgeno, pode conter bactrias como Erwinia. sp. e Ralstonia solanacearum, e fungos aquticos como Phytium e Phytophthora (Lopes et al., 2000). Tabela 9.1 Patgenos causadores de doenas de plantas em sistemas hidropnicos.
Patgeno Fungos Alternaria solani Bremia lactucae Cercospora longissima Colletotrichum coccodes Didymella lycopersici Erysiphe cichoracearum Fusarium oxysporum f.sp. dianthi Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici Fusarium oxysporum f.sp. radicis-lycopersici Leveillula taurica Olpidium brassicae Phytophthora infestans Phytophthora nicotianae Plasmopara lactucae-radicis Pythium aphanidermatum Cultura tomate alface alface tomate tomate pepino cravo tomate tomate tomate alface tomate tomate alface tomate, espinafre

Tabela 9.1 Continuao ...

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Patgeno Pythium debaryanum Pythium dissotocum Pythium sylvaticum Pythium ultimum Rhizoctonia solani Sclerotinia sclerotiorum Septoria lactucae Spongospora subterranea Stemphylium solani Verticillium albo-atrum Verticillium dahliae Verticillium tricorpus Bactrias Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis Erwinia carotovora Erwinia spp. Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas cichorii Ralstonia solanacearum Xanthomonas campestris pv. vesicatoria Vrus Lettuce mosaic virus Tospovirus

Cultura tomate espinafre tomate alface, tomate, pepino tomate alface alface tomate alface tomate tomate tomate tomate tomate alface alface alface tomate tomate alface alface

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PRINCIPAIS DOENAS RADICULARES EM CULTIVO HIDROPNICO

As culturas hidropnicas esto sujeitas a diversas doenas que afetam as razes das plantas. Essas doenas so especialmente importantes, pois o patgeno de uma planta infectada transmitido para plantas sadias, pela soluo nutritiva que circula entre o sistema radicular, causando tombamento, murchas, podrido de raiz e colo e podrido mole. Apesar da importncia desse sistema na agricultura sustentvel, existem poucos trabalhos relacionados diagnose e epidemiologia de doenas, ficando os mesmos restritos a ocorrncia e controle.

Tombamento de mudas

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O tombamento de mudas importante doena em sistemas hidropnicos, estando relacionado com o estabelecimento da cultura ainda nos berrios, pois ocorrem nos primeiros estdios de desenvolvimento da planta. Como conseqncia, a densidade desejvel de plantio pode ser afetada negativamente, constituindo-se, portanto num srio problema para culturas como tomate, alface, espinafre e pepino, que so suscetveis a espcies de Pythium, tais como: P. aphanidermatum e P. dissotocum (Lopes et al., 2000); P. debaryanum e P. sylvaticum (Vanachter et al., 1983) e; P. ultimum (Funck-Jensen & Hackenhull, 1983). Os sintomas causados por Pythium spp. podem ser observados no caule, prximo a regio do colo. Inicialmente as manchas apresentam-se encharcadas tornando-se de colorao escura e progridem para leses deprimidas tambm de colorao escura, provocando o fendilhamento ou constrio do caule. O enfraquecimento do caule pode levar ao tombamento da plntula que , ento, colonizada e decomposta pelo fungo. Podem ocorrer sintomas nas razes que ficam com colorao escurecida e em processo de apodrecimento. Espcies de Pythium possuem hifas no septadas, finas e delgadas, que se ramificam intensamente, formando um miclio branco e esparso. Alm da parte vegetativa, apresentam estruturas reprodutivas assexuadas, como esporngios e os esporangisporos, e estruturas reprodutivas sexuadas, como anterdios, oognio e osporos. Na reproduo assexuada, as hifas produzem os esporngios intercalar ou apicalmente, sendo seu formato varivel de lobulado a globoso. Os esporngios formam vesculas no interior das quais diferenciam-se esporngios biflagelados, denominados zosporos, sendo essa fase importante para diferenciar dos gneros Pythium e Phytophthora. Sob condies ambientais favorveis, este microrganismo se desenvolve atravs da formao de hifas, esporngios, zosporos e esclerdios e, sob condies adversas, conseguem garantir sua sobrevivncia atravs de estruturas de resistncia, como osporos e esclercios. Pythium disseminado atravs de zosporos, que devido presena de flagelos, pode se locomover na gua no sistema hidropnico recirculante. O processo de infeco ocorre quando as hifas penetram o tecido vegetal de modo direto ou atravs de ferimentos. A partir desse estdio, a colonizao do tecido atravs de presses mecnicas, toxinas e enzimas pectinolticas produzidas pelo patgeno, favorece o seu desenvolvimento inter e intracelularmente no tecido do hospedeiro formando novas estruturas vegetativas e reprodutivas, o que caracteriza a sua reproduo. Algumas condies ambientais favorecem a doena sendo a mais importante a presena de alta umidade, pois favorece a proliferao do patgeno, que normalmente vive em ambiente aqutico. Algumas espcies tais como, P. aphanidermatum desenvolvem-se melhor em temperaturas
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mais altas (acima de 30C) enquanto outras, tais como P. ultimum e P. debaryanum, so favorecidas pelas baixas temperaturas (menores que 20C) (McCarter, 1991).

Murcha bacteriana
A murcha bacteriana, causada por Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al., uma das mais importantes doenas de plantas no mundo. A bactria j foi relatada causando perdas em tomateiro cultivado em sistemas hidropnicos. aerbia, Gram negativa, bastonetiforme, possuindo um tufo de flagelos polares. O sintoma inicial da doena a murcha das folhas mais novas, nas horas mais quentes do dia. Em condies favorveis ao desenvolvimento da doena, como alta temperatura e umidade, a murcha atinge toda a planta tornando-se irreversvel e causando a sua morte. A intensidade dos sintomas varia com o isolado do patgeno e cultivar. Em condies desfavorveis ao desenvolvimento da doena pode ocorrer infeco latente ou as plantas infectadas podem apresentar amarelecimento e subdesenvolvimento sem a ocorrncia de murcha. comum a formao de razes adventcias nos caules de plantas afetadas. Internamente, alm da descolorao e colapso dos vasos do xilema a nvel macroscpico, ocorrem tiloses, dissoluo de substncias pcticas na lamela mdia e degradao da celulose nas paredes celulares. O sinal caracterstico da murcha a exsudao bacteriana a partir do tecido vascular em cortes de rgos infectados (Goto, 1992). A observao do fluxo bacteriano pode ser visto a olho nu, quando uma seo da planta infectada mergulhada em uma recipiente transparente com gua limpa (teste do copo) (Lopes & Quezado-Soares, 1997). A disseminao de R. solanacearum ocorre atravs da soluo nutritiva, contato entre razes, transmisso mecnica por diversos tratos culturais, mudas infectadas, sementes, insetos e homem. A sobrevivncia e disseminao da bactria so favorecidas por condies de alta umidade. A penetrao de R. solanacearum no hospedeiro ocorre atravs de ferimentos ou aberturas naturais, principalmente nas razes, obstruindo os vasos transportadores de gua e seiva, provocando o sintoma externo de murcha. Aps a penetrao, a bactria coloniza os vasos do xilema, obstruindo-os e dificultando o fluxo de gua. A colonizao tambm provoca degradao das paredes e clulas do parnquima adjacente, originando cavidades no floema, medula e tecido cortical, principalmente em rgos suculentos (Kurozawa & Pavan, 1997).

Murcha-de-fusrio
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A murcha-de-fusrio, causada por Fusarium oxysporum Schlech. f.sp. lycopersici (Sacc.) Snyder & Hansen uma das mais srias doenas do tomateiro. Esta doena pode se manifestar em quaisquer estdios de desenvolvimento, mas mais comum em plantas no incio de florescimento e frutificao. Sintomas nas folhas manifestam-se por amarelecimento forte, nas mais velhas, progredindo para as mais novas. Esse sintoma pode inicialmente ocorrer num lado da planta ou metade da folha. Os fololos amarelos murcham e secam, mas as folhas ficam presas ao caule. Os sintomas internos so caracterizados pelo escurecimento dos vasos lenhosos da folha e do caule. Este fungo produz macrocondios hialinos, alantides, com 2 a 4 septos, de paredes finas e microcondios hialinos, elpticos, com uma ou duas clulas. Produz ainda clamidosporos de parede espessa e lisa e esporodquios resultantes da aglomerao de conidiforos. A disseminao pode ocorrer pela soluo nutritiva, vento, tratos culturais, sementes e mudas contaminadas. Quando o patgeno entra em contato com as razes de plantas de tomateiro, as estruturas de resistncia podem germinar sob estmulo de exsudatos produzidos pela planta, dando incio infeco. A penetrao ocorre atravs da raiz principal, radicelas e plos absorventes ou por ferimentos, sendo a colonizao desenvolvida com o crescimento intercelular das hifas em direo aos vasos do xilema. O patgeno permanece confinado ao xilema e, a partir da, distribui-se por toda a planta. Com a evoluo da doena, tem incio a obstruo e o escurecimento dos vasos. Essa obstruo conseqncia do acmulo de miclio, esporos, gomas e tiloses, e a constrio do vaso provocada pela proliferao das clulas adjacentes que compem o tecido parenquimatoso. Os sintomas de murcha surgem em conseqncia deste bloqueio, impedindo a absoro da gua pelo sistema radicular da planta. Nos casos em que a planta consegue sobreviver ao ataque do patgeno, o fungo pode coloniz-la sistemicamente, comprometendo seu desenvolvimento e infectando as sementes. O diagnstico faz-se retirando as folhas com sintomas

tpicos da doena nas quais aparecem vasos com escurecimento caracterstico e diferente do normal (Moraes, 1997). O desenvolvimento
da doena favorecido por temperaturas entre 21 e 33C, sendo o timo a de 28C (Jones, 1991).

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Podrido da raiz e do colo

O fungo Fusarium oxysporum Schlech. f.sp. radicis-lycopersici Jarvis & Shoem. o agente causal da podrido da coroa e da raiz em tomateiro cultivado em hidroponia. Este patgeno pode atacar plantas desde seu estdio inicial de desenvolvimento at o estdio adulto. As plantas jovens, de modo geral, oferecem menor resistncia ao ataque do patgeno do que as mais velhas e tm sua produtividade sensivelmente reduzida. Os sintomas de podrido do sistema radicular tm inicio com o escurecimento das razes mais novas e progridem para as razes mais velhas. Este escurecimento gradual, comeando com leve tonalidade marrom ou marrom-avermelhada, acentuando-se medida que a doena progride. No final do processo, as razes atacadas apresentam-se de colorao marrom escura ou totalmente negra. O sintoma de escurecimento acompanhado pelo processo de decomposio; as razes totalmente escurecidas, de modo geral, desintegram-se quando submetidas a leves presses. Os sintomas em razes individualizadas podem ter incio pela extremidade, expressando-se tambm atravs de escurecimento. Na podrido do colo, as leses apresentam-se no caule, geralmente deprimidas, de colorao marrom, sendo que estruturas do fungo (hifas, esclerdios) podem estar associadas a elas. Em caules tenros, o desenvolvimento da leso pode levar ao enfraquecimento da regio atacada, tornando a planta suscetvel ao tombamento. comum, tambm, a ocorrncia de estrangulamento da planta. Fusarium oxysporum f.sp. radicis-lycopersici possui dois tipos de esporos assexuados, os micro e macrocondios, sendo os primeiros ovalados, uni ou bicelulados e formados em grande quantidade, nas extremidades de microconidiforos. Os macrocondios so fusiformes, multiseptados, origina-se a partir de conidiforos emergentes de esporodquios e so, em mdia, quatro vezes maiores que os microcondios. Clamidosporos tambm so produzidos abundantemente pelas hifas; variam de globosos a ovais, apresentam parede lisa ou rugosa e so formados no pice ou podem ser intercalares em relao hifa. A disseminao das estruturas fngicas pode ocorrer atravs da soluo nutritiva. As razes da planta hospedeira estimulam a germinao de estruturas dos fungos ou o crescimento de hifas, iniciando o processo de infeco. A penetrao ocorre atravs de ferimentos naturais e artificiais. As hifas crescem inter e intracelularmente e, sob condies de alta umidade e temperatura entre 25 e 35C, promovem a reproduo do patgeno, formando-se novas hifas e estruturas reprodutivas. A colonizao dos tecidos auxiliada pela ao de substncias qumicas do tipo cidos orgnicos, toxinas e enzimas, todas produzidas pelo patgeno.
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A atuao conjunta de mecanismos qumicos e mecnicos promove a morte das clulas e, posteriormente, a decomposio do tecido (Paulus, 1991).

Podrido mole
A espcie Erwinia carotovora subsp. carotovora (Jones) Bergey et al. responsvel por srias perdas econmicas nas culturas do tomateiro e alface em cultivo hidropnico. Os isolados da bactria so anaerbios facultativos, Gram negativos, bastonetiforme, com bastonetes peritrquios e altamente mveis. O sintoma inicial de podrido mole o aparecimento de pequenas leses encharcadas, que aumentam rapidamente e causam extensiva macerao (Goto, 1992) e apodrecimento do tecido parenquimatoso do rgo afetado; no entanto, sintomas iniciais podem ser completamente diferentes, especialmente dependendo do crescimento da planta (Stanghellini & Meneley, 1975). A disseminao ocorre atravs da soluo nutritiva contaminada e insetos. A incidncia da doena aumenta bastante quando plantas hospedeiras so feridas em funo de prticas culturais, contato de plantas entre si, ou por insetos (Goto, 1992). Quando a bactria penetra o rgo vegetal, produz pectinases que degradam enzimaticamente a lamela mdia, fazendo com que o tecido perca sua rigidez, tornando-se mole (Goodman et al., 1986). Subseqentes fermentaes e concomitante invaso do tecido em colapso por saprfitas ocasionam o desprendimento de gases com odor desagradvel (Romeiro, 1995). Estas bactrias dependem em grande parte de fatores ecolgicos como temperatura e concentrao de oxignio para iniciar a infeco, bem como para a produo e severidade dos sintomas (Hayward & Mariano, 1997). Alm das enzimas pectinolticas, celulases e proteases podem tambm estar envolvidas.

PRINCIPAIS DOENAS DE PARTE AREA EM CULTIVO HIDROPNICO

As doenas de parte area apresentam-se inicialmente na cultura oriunda de sementes contaminadas, de mudas doentes ou da entrada de esporos de fungos, colnias de bactrias e insetos vetores de viroses na estrutura de proteo. Uma vez presentes, encontram condies timas de desenvolvimento devido alta umidade do ambiente e a baixa ventilao do sistema fechado, condies climticas normais neste tipo de cultivo (Lopes et al., 2000).

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Requeima
A requeima, causada por Phytophthora infestans (Mont) De Bary, uma doena altamente destrutiva cultura do tomateiro, pela rapidez na colonizao de toda a parte area da planta e na disseminao do patgeno, estando relacionada persistncia de baixas temperaturas e alta umidade. O fungo ataca toda a parte area da planta, mas em geral, a doena iniciase pelos tecidos situados em sua metade superior. Nos fololos, os primeiros sintomas surgem como manchas irregulares, de tecido encharcado verdeescuro, que pode aumentar rapidamente de tamanho e tomar grandes reas. Com a evoluo da doena, essas reas passam a ter colorao pardo-escura com uma estreita faixa de tecido trgido entre o tecido necrosado e o sadio. A coalescncia das manchas pode destruir a maioria das folhas em pouco tempo. Sintomas nos ramos, pecolos e rquis so pardo-escuros no incio e pardo-claros no estdio mais desenvolvido da doena, podendo haver anelamento dos mesmos, o que acarreta a morte da parte superior. Nos frutos, em qualquer estdio, as leses so do tipo duras, de cor pardoescuras, profundas e de superfcie irregular. Em ambiente mido, sobre a superfcie afetada podem ser visualizados os sinais da doena, representados pelo surgimento de um miclio branco-cinza (Kurozawa & Pavan, 1997). O fungo produz esporngios hialinos, com formato de limo e papilados. Os esporangiforos so bem desenvolvidos, com ramificao simpodial, que emergem atravs dos estmatos num nmero varivel de 3 a 5. Os esporngios so formados durante o perodo de alta umidade relativa (91100%) e de temperaturas timas entre 18-22C. Em condies midas, podem germinar diretamente ou produzir zosporos biflagelados. Cada zosporo pode nadar na soluo nutritiva, sobre o tecido da planta, encistar, germinar e penetrar iniciando um novo ciclo (Stevenson, 1991) Contudo em ambiente protegido, a agressividade normalmente menor, pois a temperatura diurna interna sempre est acima da temperatura externa. Neste caso, o sintoma pode ser diferente do apresentado em campo, onde a leso na superfcie inferior das folhas pode no aparecer. A temperatura diurna mais elevada tambm desfavorece o desenvolvimento da doena (Moraes, 1997). A disseminao do patgeno ocorre principalmente pela soluo nutritiva, ar/vento e insetos.

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Cercosporiose
Na cultura da alface, quando as plantas atingem a maturao, tornam-se muito suscetveis cercosporiose, causada por Cercospora longissima (Cugini) Sac., limitando a produo. Cercospora longissima possui hifa septada, delgada e hialina, mas posteriormente adquire pigmentao escura. Em cultura, o miclio maduro geralmente varia de verde escuro marrom escuro. Os conidiforos so anfgenos, fasciculados, com colorao marrom olivcea, no ramificados e septados, suportando condios sobre seu pice. Os condios so grandes e conspcuos, hialinos, com formato cilndrico a obclavado com base mais alargada e pice mais fino. Eles variam de 11 a 170 m de comprimento e 7,5 a 3,8 m de largura. A infeco ocorre nas folhas mais velhas e baixas. As leses tm tamanhos variados, tornando-se irregulares ou angulares com colorao que varia de marrom claro at marrom escuro circundadas por tecido clortico. As leses podem coalescer atingindo extensas reas do tecido foliar levando a morte da planta quando a doena apresenta alta severidade. A disseminao ocorre principalmente por meio dos condios e excessivamente dependente do perodo de molhamento foliar. A germinao dos condios ocorre apenas na presena de alta umidade ou sob condies atmosfricas quase saturadas. A durao de molhamento das folhas por mais de 24 horas propicia o desenvolvimento do tubo germinativo e favorece a penetrao atravs dos estmatos, no necessitando de apressrios. Aps a germinao, o miclio ramifica-se muitas vezes, facilitando a colonizao intercelular no tecido do hospedeiro. Em temperatura tima de 25C, os tecidos suscetveis so rapidamente colonizados pelo avano das hifas e os sintomas podero aparecer dentro de trs dias aps a inoculao (Raid, 1997).

Outras doenas
O mldio da alface, causado por Bremia lactucae Regel, uma doena que ocorre em condies ambientais de alta umidade e temperatura amena a baixa. So sintomas deste fungo, manchas clorticas nas folhas, de tamanho varivel, que evoluem para necrticas de colorao parda. Na face inferior das reas afetadas, pode-se observar os sinais da doena, com frutificaes do fungo de aspecto branco, constitudas de esporangiforos e esporngios (Pavan & Kurozawa, 1997). A doena decorrente da infeco de Septoria lactucae Passerini, a septoriose, destaca-se tambm em importncia na cultura da alface, pois as leses provocadas nas folhas depreciam o valor comercial do produto. Os
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sintomas apresentam-se com contorno irregular sobre o tecido foliar que inicialmente possui aspecto desidratado, torna-se pardacento, com numerosos pontos de cor escura, os picndios (corpos de frutificao). O fungo produz condios filiformes, multiseptados e hialinos no interior de picndios. A penetrao ocorre geralmente via estmatos (Pavan & Kurozawa,1997). A bacteriose causada por Pseudomonas cichorii (Swingle) Stapp. em alface, provoca manchas necrticas isoladas no centro ou bordos do limbo foliar, podendo alcanar quase toda a nervura central. As leses inicialmente apresentam-se encharcada e com colorao escura, o tecido foliar pode murchar e apodrecer. O sistema radicular tambm afetado e pode ficar reduzido ou evoluir para podrido acompanhado de morte das folhas mais baixas. Este sintoma, no ocorre em plantios convencionais (Almeida et al., 1999). P. cichorii uma bactria Gram negativa, bastonetiforme, e em culturas contendo o meio de King B apresentam pigmento fluorescente (Hildebrand et al., 1988).

MANEJO DE DOENAS
Em cultivos hidropnicos, nos quais existe uma baixa populao de microrganismos competidores, quando um patgeno se estabelece infectando a raiz, o controle freqentemente difcil, mas pode ser alcanado algumas vezes. A escolha de uma estratgia de controle vai depender da identificao precisa do patgeno causador da podrido (Stanghellini & Rasmussen, 1994). Existem vrios mtodos de controle, dentre eles: mtodos biolgicos, culturais, fsicos e qumicos.

Mtodos biolgicos
Uso de cultivares resistentes

A primeira linha de defesa contra um fitopatgeno o uso de cultivares resistentes. A identificao precisa do patgeno, ao nvel de espcie, imprescindvel na seleo de cultivares apropriadas. Infelizmente, poucas cultivares so resistentes a Fusarium spp. enquanto que para Plasmopara lactucae-radicis elas esto disponveis (Stanghellini & Rasmussen, 1994).
Uso de microrganismos antagonistas

O uso de microrganismos antagonistas, particularmente em l de rocha, tem sido o objetivo de recentes pesquisas (Eparvier et al., 1991; Lemanceau

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& Alabouvette, 1991), e os resultados dessas pesquisas parecem promissores. Entretanto, a maioria dos produtos biolgicos no tem registro para uso em sistemas hidropnicos comerciais. O nico produto registrado o Mycostop base de Streptomyces griseoviridis. Este produto mais eficiente contra espcies de Fusarium (Stanghellini & Rasmussen, 1994). O isolado Pf15 de Pseudomonas fluorescens quando introduzido na soluo nutritiva, em condies controladas, aumentou significativamente a produo de frutos de pepino em, aproximadamente, 600% e reduziu o desenvolvimento de P. aphanidermatum (Rankin & Paulitz, 1994). A utilizao de agentes de biocontrole, como tratamento profiltico, oferece uma vantagem competitiva j que nos sistemas hidropnicos h uma baixa populao microbiana, favorecendo, assim, o estabelecimento de agentes de biocontrole. Tambm, nesses sistemas, os cultivos so feitos em ambientes controlados, eliminando a variabilidade que ocorre em condies de campo (Melo & Faull, 2000).

Mtodos culturais e fsicos

Sanitizao

A remoo de todas as plantas ou restos culturais infectados, bem como, quanto a desinfestao de equipamentos e substratos reciclado, imprescindvel para a manuteno de um sistema livre de patgenos. Isto importante no berrio, devendo estar localizado num lugar de fcil acesso, separado fisicamente da rea de produo e no deve usar a mesma soluo nutritiva empregada na produo (Stanghellini & Rasmussen, 1994).
Tratamento da soluo nutritiva infestada

Numerosos mtodos tm sido propostos para a eliminao de patgenos oriundos de solues nutritivas infestadas. Tais mtodos incluem filtragem, ozonizao, irradiao ultravioleta e inativao trmica (Ewart & Chrimes, 1980; Goldberg & Stanghellini, 1992; Runia et al., 1988; Stanghellini et al., 1984).
Filtrao da soluo nutritiva

Na Europa, Japo e USA existem no mercado filtros de membrana, finos o suficiente para reter bactrias. Tais filtros so contidos em cartuchos, que podem tratar cerca de 12 m3 de soluo por dia. Periodicamente os filtros devem ser limpos com alta presso ou produtos qumicos adequados. Sua vida til varia entre 3 e 4 anos (Martinez & Silva Filho, 1997; Goldberg & Stanghellini, 1991). A ultrafiltrao mostrou-se efetiva para F. oxysporum
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f.sp. lycopersici, Verticillium albo-atrum e P. aphanidermatum (Lopes et al., 2000).

Irradiao com luz ultravioleta

Lmpadas de ultravioleta devem ser instaladas em algum ponto de passagem da soluo nutritiva. Uma lmpada de 2,5 kW pode tratar 10 m3 de soluo por hora e tem uma vida til de 8000 horas. Por se tratar de radiao ionizante, as lmpadas de ultravioleta devem ser protegidas, de modo a no causar problemas a pessoas que manuseiem o sistema (Martinez & Silva Filho, 1997; Stanghellini et al., 1984). A radiao da soluo nutritiva com ultravioleta tem se mostrado eficiente para o controle de patgenos como P. aphanidermatum e P. cinnamomi. Entretanto, este tipo de radiao pode no reduzir a populao de outros fungos. preciso, portanto, aplicar a dose de radiao adequada para cada espcie de fungo, para obteno de resultados satisfatrios. Alm disso, a destruio de quelato de ferro aps a radiao com ultravioleta leva a planta clorose foliar (Lopes et al., 2000).
Pasteurizao

Consiste em aquecer a soluo nutritiva a 95-105oC em um perodo de 30 segundos. A soluo deve permanecer nessa temperatura por 10 a 30 segundos e em seguida ser resfriada temperatura ambiente em tempo igual ao gasto para o aquecimento. O equipamento pasteurizador deve ser colocado no canal de retorno da soluo nutritiva ao tanque de armazenamento (Martinez & Silva Filho, 1997).
Ozonizao

O ozonizador pode ser colocado entre a tubulao de retorno e o tanque de armazenamento da soluo. Neste caso, alm da destruio dos microrganismos, h a reposio de oxignio para a soluo (Martinez & Silva Filho, 1997). O borbulhamento de oznio na soluo nutritiva inibe o crescimento de P. nicotianae, V. dahliae, V. albo-atrum e F. oxysporum f. sp. lycopersici. Entretanto, destruio de quelatos de ferro tambm pode ocorrer pelo tratamento com oznio (Lopes et al., 2000).

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Calor

A esterilizao da soluo de nutrientes pelo calor, antes de sua recirculao, apresentou resultados inconsistentes, podendo ainda precipitar o clcio na soluo (Lopes et al., 2000). Embora alguns destes mtodos tenham demonstrado serem eficientes experimentalmente, a aplicao bem sucedida para grandes sistemas comerciais freqentemente de custo proibitivo. Grandes sistemas comerciais requerem soluo nutritiva corrente, freqentemente excedendo 1.000 L/minuto. A esterilizao de grandes volumes de soluo nutritiva, particularmente em sistemas fechados onde no h timer, praticamente impossvel (Stanghellini & Rasmussen, 1994).
Manipulao do ambiente

Os fatores ambientais mais importantes conhecidos por governar o ciclo de vida de patgenos que infectam razes e ciclos da doena so temperatura e umidade. A hidroponia proporciona um ambiente saturado constante. Assim, o manejo da umidade na zona da raiz ter um impacto mnimo nos patgenos. Entretanto, a temperatura da soluo nutritiva pode ser manipulada. Se as necessidades de temperatura dos patgenos de raiz so conhecidas, as temperaturas da soluo nutritiva podem ser aumentadas ou baixadas para retardar o desenvolvimento do patgeno. Por exemplo, espinafre, pepino e tomate so atacados por P. aphanidermatum. Este fungo mais destrutivo em temperaturas acima de 25oC. Da mesma forma P. lactucae-radicis, um patgeno de razes de alface, favorecido por temperaturas acima de 20oC. Assim, baixando a temperatura da soluo nutritiva resultar em controle econmico destes dois patgenos de raiz. Em contrapartida, Phytophthora cryptogea, um patgeno de raiz de tomate, favorecido por baixas temperaturas a 25oC (Kennedy & Peg, 1990; Kennedy et al., 1993). Estes exemplos ilustram a necessidade da identificao precisa do agente causal da doena.

Mtodos qumicos
Fungicidas

A adio de fungicidas na soluo nutritiva recirculante obviamente um mtodo eficiente no controle da doena. Contudo, nenhum fungicida registrado para o uso em sistemas hidropnicos. As razes para a falta de produtos registrados so numerosas: i) a maioria dos fungicidas tem um
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perodo de carncia entre a aplicao e a colheita, e a maioria dos cultivos hidropnicos comerciais colhem todo dia; ii) a rea limitada de hidroponia no garante o custo de registro e; iii) a probabilidade de desenvolvimento de resistncia do patgeno muito alta (Stanghellini & Rasmussen, 1994). Em estudos realizados por Bates & Stanghellini (1984), o fungicida metalaxil foi eficiente na preveno da podrido de raiz do espinafre; contudo este produto qumico no tem registro atualmente para uso em hortalias em estufa.
Outros biocidas

A suplementao da soluo nutritiva com silicato de potssio (Chrif & Blanger, 1992) e quitosan (El Ghaouth et al., 1994) tem sido recentemente relatado por controlar certos patgenos infectando raiz em hidroponia. Os resultados destes estudos preliminares parecem promissores, mas nenhum est atualmente registrado para uso comercial. A incorporao de silicato de potssio na soluo de nutrientes reduz a severidade de P. ultimum em pepino. O acmulo de silcio na parede das clulas da planta provavelmente reduz a penetrao das hifas do fungo e estimula os mecanismos de defesa do hospedeiro. A adio de silcio soluo hidropnica como silicato de potssio a 100 ppm proporcionou aumento da resistncia de plantas de pepino ao odio, causado por Erysiphe cichoracearum (Lopes et al., 2000). Em adio aos dois produtos qumicos citados acima, surfactantes tambm exibem promisso no controle de doenas de raiz causado por fungos zoospricos. Em 1980, Tomlinson & Faithfull demonstraram controle comercial eficiente da doena big vein da alface, a qual causada por um vrus veiculado pelo fungo Olpidium brassicae. Zosporos de O. brassicae, Pythium e Phytophthora, so rapidamente mortos, via dissoluo da membrana que encapsula os zosporos, quando expostos aos surfactantes (Stanghellini & Tomlinson, 1987). Avaliaes da eficcia dos surfactantes para o controle da podrido de raiz de pepino e tomate causado por P. aphanidermatum e duas espcies de Phytophthora, respectivamente, esto atualmente em progresso. Resultados preliminares indicam completa supresso da disperso do zosporo num sistema de l de rocha recirculante (Stanghellini & Rasmussen, 1994). A adio soluo nutritiva de agentes tensoativos no inicos, como Agral 20 mg/L, proporcionou o controle de patgenos que produzem zosporos. Estes resultados necessitam de estudos complementares nas condies brasileiras, j que foram obtidos em pases de clima temperado (Lopes et al., 2000). O aumento para 4 mg/L da concentrao de cobre na soluo, no sistema NFT, resultou no controle de algumas doenas fngicas. Deve-se levar em conta que este nvel de cobre pode ser fitotxico a algumas espcies ou cultivares (Lopes et al., 2000).

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BIOTECNOLOGIA E PROTEO DE PLANTAS
LUCIANE VILELA RESENDE MAIRON MOURA DA SILVA

INTRODUO
Desde o incio da domesticao das plantas ou da agricultura propriamente dita, a 12.000 anos atrs, tem se observado modificaes de diversas maneiras, tanto nas espcies cultivadas como no ambiente. Estas modificaes vieram por meio da seleo de caractersticas convenientemente especficas, provocando alteraes nos processos reprodutivos, bioqumicos e fisiolgicos das espcies, ora cultivadas. Isto ocasionou no surgimento de plantas mais produtivas, mais uniformes genotpica e fenotpicamente, implementando o cultivo de determinadas variedades, em grande escala. O exemplo mais marcante dessas modificaes se deu por volta de 1950, com a chamada Revoluo verde. A Revoluo verde baseou-se na alta produtividade das cultivares, em funo do elevado uso de insumos. Borlaug (1970) obteve variedades de trigo de porte ano, resistentes ao acamamento e capazes de responder a altos teores de adubao. Essas variedades, amplamente cultivadas, possuem pouca biomassa, porm produzem uma grande quantidade de gros. Em termos fisiolgicos, isto representa uma baixa relao fonte-dreno para fotoassimilados, isto , a reduo da rea foliar no supri totalmente as necessidades das plantas, deixando-as mais suscetveis ao ataque de pragas e patgenos, menos competitivas em relao as plantas ditas daninhas, bem como a variaes no ambiente (Zadoks, 1997). A associao desses dois fatores, ou seja, da padronizao das espcies cultivadas, reduzindo a variabilidade gentica e a modificao dos ecossistemas naturais proporcionou uma extrema vulnerabilidade s plantas cultivadas, deixandoas mais sensveis ao de agentes externos.Alteraes drsticas tambm foram sentidas no ambiente em funo das prticas de cultivo cada vez mais modernas e mais agressivas ao meio, e da abertura de novas fronteiras agrcola, culminando na destruio dos ecossistemas naturais.

Michereff, S.J. & Barros, R. (Eds.) Proteo de Plantas na Agricultura Sustentvel. 2001. Recife, UFRPE

Direitos de edio reservados aos editores ISBN 85-87459-06-6

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Estudos tem mostrado que danos provocados por pragas e patgenos atigem tamanha dimenso, chegando a limitar o cultivo de determondas espcies em determindas regies.Os prejuzos causados por pragas e ervas daninhas representam aproximadamente 15 e 7%, respectivamente, da produo mundial (Farah, 1997), enquanto que o ataque de fitopatgenos reduz o potencial de produo nos pases desenvolvidos em mdia de15 a 20%. Casos isolados ao longo da histria da agricultura mostram quadros alarmantes de perdas que chegam at 100% (Zambolim et al., 2000). Esses fatos levaram e continuam levando o homem a uma constante busca por novas tecnologias voltadas para uma efetiva proteo das culturas ao longo do desenvolvimento da agricultura. As primeiras medidas de proteo de plantas foram adotadas por produtores, atravs de uma seleo emprica de indivduos mais tolerantes ou remanescentes de epidemias. As sementes destes indivduos eram coletadas e utilizadas na prxima safra. No sculo XIX, agricultores britnicos e alemes passaram a cultivar batata a partir de sementes em funo da degenerescncia, hoje sabemos, causada por vrus. Com isso eles conseguiram eliminar vrias viroses e ao mesmo tempo criaram novos gentipos (Vanderplanck 1968). Aps o redescobrimento das leis de Mendel no incio do sculo XX, a seleo tornou-se mais consciente, com amplas bases cientficas, porm em alguns casos, no menos emprica, a exemplo do relato de Vanderplanck (1968), sobre a obteno do milho resistente a Puccinia polysora Underw. no Oeste Africano por produtores, por volta de 1950, a partir da seleo das melhores espigas. Atualmente, aproximadamente 50% das doenas importantes so controladas por variedades resistentes. A maioria das cultivares apresentam somente resistncia horizontal, sendo necessrio o uso de outras prticas de controle para manter baixa a populao do patgeno (Zambolim et al., 2000). O uso de variedades resistentes tem se mostrado como o mais efetivo mtodo de controle de pragas e doenas. Outras medidas de controle constituem-se nas tcnicas culturais que envolvem rotao de culturas, destruio de plantas doentes e capinas. Porm, o uso de pesticidas tornou-se massificado, em funo dos resultados imediatos e crescente nos pases em desenvolvimento, ao contrrio dos pases desenvolvidos, onde observa-se anualmente uma reduo no uso devidoas fortes presses sociais (Castro, 1992). No entanto os danos ao ambiente tem sido considerveis. Os conhecimentos obtidos nos ltimos anos possibilitou o surgimento da Biotecnologia proporcionando grandes avanos no tocante proteo de plantas. Biotecnologia, refere-se a qualquer tcnica que utilize organismos vivos ou suas partes para fazer ou modificar produtos, melhorar plantas e animais, ou desenvolver microorganismos para fins especficos (Ramalho et

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al., 2000). O termo geral, Biotecnologia tambm usado para incluir as aplicaes dos atuais mtodos cientficos e tcnicas de modificaes, bem como melhoramento de sistemas biolgicos em plantas, animais, microorganismos ou cultura de clulas (Lewin, 2000; Mantell et al., 1994). Essas tecnologias permitiram uma ampla explorao do conhecimento, at mesmo de forma revolucionria e especulativa. No mbito da proteo de plantas, a biotecnologia tem sido utilizada tanto no aspecto da cultura de tecidos vegetais, como no campo da tecnologia do DNA recombinante (r-DNA) ou engenharia gentica. Dentro deste ltimo, a transformao gentica avanou significativamente em funo do desenvolvimento da cultura de tecidos (Brasileiro & Dusi, 1999). A incorporao de genes via transfomao gentica, depende da cultura de clulas, tecidos ou rgos para a regenerao de plantas in vitro (Ferreira et al., 1999).

APLICAES DA BIOTECNOLOGIA NA PROTEO DE PLANTAS Controle biolgico de pragas

Devido aos problemas que surgem com o uso de pesticidas aumenta a necessidade de incentivos a um manejo mais racional dos agroecossistemas, com emprego de prticas integradas, incluindo a resistncia gentica de cultivares, o uso de elementos sadios de propagao vegetal, e o controle biolgico natural e aplicado. O uso de inseticidas microbianos encontra-se regulamentado em diversos pases, inclusive no Brasil. Tais medidas normativas, prescritas por entidades governamentais inclui o registro dos bionseticidas e acham-se ligados segurana oferecida aos usurios, impactos ao meio ambiente e implicaes na sade publica. Algumas dessas exigncias vm limitando o emprego dos defensivos biolgicos, inclusive aqules obtidos atravs da manipulao gentica. O primeiro registro em 1950, de um produto alternativo utilizado no controle biolgico de insetos,foi a base de uma bactria do gnero Bacillus (B. popilliae). Posteriormente em 1960, surgiram os primeiros estudos utilizando B. thuringhienses, que em funo das possibilidades de contaminao das culturas, mutaes e da potencialidade de contaminao de mamferos,retardou sua liberao para fins comerciais.Atualmente vrios produtos a base de B. thuringienses so usados em todo o mundo (Castro 1992). No Brasil, o mais conhecido o Dipel.
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Os fungos tambm preenchem um importante papel no biocontrole de insetos, principalmente aqueles dotados de aparelho bucal sugador (Hemiptera, Homoptera). Estudos tem mostrado que os fungos com maior potencial para controle biolgico aplicado, tanto o clssico (patgenos exticos regio) como o aumentativo (patgenos nativos na regio), so os Hifomicetos. Destacam-se os gneros Metarrhizium spp., Beauveria spp., Nomurea riley spp. e Verticillum lecanii, classificados dentre as Moniliceas e, Cladosporium spp., como nica Dermaticea (Robbs & Bittencourt, 1998).

Cultura de tecidos
Contribuies importantes da cultura de tecidos tem sido oferecidas proteo de plantas, principalmente na rea da fitopatologia. O desenvolvimento de diferentes tcnicas de cultivo in vitro tem permitido estudos nas relaes hospedeiro-patgeno, recuperao de planta livres de vrus e outros agentes causadores de doenas, estudo dos mecanismos de patogenicidade ao nvel celular e a obteno de plantas resistentes a diferentes doenas. Dentre algumas tcnicas utilizadas podemos citar: fuso de protoplastos, cultura de meristemas ou pices caulinares, variao somaclonal, dentre outras.
Protoplastos

A regenerao de plantas a partir de protoplastos vem sendo amplamente empregada na cultura de tecidos. Estes so clulas das quais se remove a parede celular atravs de processos mecnicos ou enzimticos (Lisei de S et al., 2000). Os primeiros protoplastos foram obtidos em 1892 por Klercker, utilizando um processo mecnico (Carneiro et al., 1998), porm apenas na dcada de 60, foram desenvolvidos mtodos enzimticos eficientes no isolamento de protoplastos. Cocking (1960), usou enzimas pectocelulolticas para obteno de protoplastos em grandes quantidades, o que abriu as perspectivas para o uso deste sistema em pesquisa. O isolamento e o cultivo de protoplastos utilizado para estudar as relaes entre hospedeiros e patgenos, sobretudo, no sistema vrus-clula. Neste sistema a infeco se inicia com a entrada da partcula viral na clula hospedeira atravs de ferimentos na aparede celular. O processo de infeco de baixa eficincia, o que dificulta os estudos de multiplicao viral em plantas. No entanto, em condies adequadas grandes quantidade de protoplastos podem ser infectados por inoculao na presena de determinadas substncias como poli-L-ornitina ou similares (Takebe, 1977), ou polietilenoglicol (PEG) (Cassels & Barlass, 1978). Essa tcnica tem sido utilizada para estudos de
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replicao e das propriedades biolgicas em vrus de plantas (Harrison e Mayo, 1983; Motoyishi, 1985). Protoplastos de cevada foram utilizados para estudos da sntese, acmulo e encapsidao de partculas do Brome Mosaic vrus (Loesh-Fries & Hall, 1980). Spencer & Kimmins, (1969) verificaram em calos de cenoura e fumo, que o movimento das partculas virais de uma clula para outra se da atravs de estruturas denominadas de plasmodematas, e Van Lent et al. (1990) localizaram duas protenas de movimento nestas estruturas em vrus do mosaico severo do caupi. A cultura de protoplastos tambm tem sido utilizada nos estudos de relaes entre fungos e clulas hospedeiras (Earle & Graven, 1982) bem como na obteno de plantas resistentes a fungos, bactrias e vrus (Duval et al., 1998). A transformao de plantas a partir de protoplastos, tem se mostrado vantajosa, pois as plantas transformadas no apresentam quimeras, por serem obtidas de um nico protoplasto. Alm disso, a seleo da planta transformada realizada aps o incio da cultura, reduzindo a probabilidade de obteno de falsos transformantes. Os protoplatos tm sido usados na transformao de plantas, tanto via Agrobacterium tumfaciens (Carneiro et al., 1998), como por eletroporao (Reich & Arago, 1998). Como desvantagem tem-se a dificuldade de obteno de uma nova planta a partir de um protoplasto (Brasileiro & Dusi, 1999; Brasileiro & Canado, 2000).
Fuso de protoplastos

No incio do sculo XX, foi constatado que clulas desprovidas de parede celular, quando em solues com sais de clcio podiam entrar em contato e eventualmente se fundir. Esse processo foi denominado de fuso de protoplastos (Ramalho et al., 2000) e amplamente utilizado na obteno de hbridos interespecficos entre espcies selvagens e cultivadas, geralmente autoincompatveis sexualmente. As espcies selvagens tem sido utilizadas para introgresso de genes de resistncia a pragas e patgenos em espcies cultivadas. Em batata, espcies selvagens de solanum so empregadas para introduzir resistncia ao vrus do enrolamento da folha (Helgeson et al., 1986); em Lycopersicon, genes para resistncia a insetos(Barbara et al., 1995; Barona et al., 1989; Schuster & Stone, 1979), virus (Hassan et al., 1984; Pilowsky & Cohen, 1990) e nematides (Yaghoobi et al., 1995). No Brasil esta tcnica empregada com sucesso no melhoramento gentico do fungo Metarhizium anisopliae, utilizado no controle biolgico de insetos (Azevedo, 1997). Para que ocorra a fuso dos protoplastos, necessrio o uso de choque eltrico, eletrofuso, ou agentes qumicos como o polietilenoglicol-PEG (Vieira, 1997). No caso da eletrofuso, submete-se os protoplastos a um
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campo de corrente eltrica alternada de alta freqncia em hemifrios positivos e negativos, criando uma fora de atrao entre clulas adjacentes. Aps o alinhamento, ocorre a fuso em funo de poros que surgem na membrana plasmtica, provocados por pulsos de corrente contnua (Carneiro & Concoi, 1990). No caso de agentes qumicos, utiliza-se solues salinas com altas concentraes de polictions (PEG, PVA ou DEAE-dextran) que em contato com os protoplastos aumentam a permeabilidade da membrana citoplasmtica devido a interao das cargas positivas com as cargas negativas do DNA e da membrana, facilitando a entrada do DNA na clula. Diversas espcies vegetais j foram transformadas por essa tcnica, porm a freqncia de transformao relativamente baixa (1/1.000 a 1/10.000). A maior limitao no uso dessa tcnica consiste na obrigatoriedade do uso de protoplastos (Aldwinckle et al., 1982; Brasileiro & Dusi, 1999). Em busca de alternativas de controle s principais doenas do maracujazeiro (Xanthomonas, murcha do Fusarium e morte precoce), verificou-se que as espcies selvagens Passiflora gilberti, P. macrocarpa, Passiflora sp. (maracuj-de-cobra), P. nitida e P. quadrangularis, apresentavam fontes de resistncia. Baseado nesses resultados, Barbosa & Vieira (1997) obtiveram quatro hbridos somticos de maracujazeiro por meio da fuso de protoplastos, Passiflora edulis f. flavicarpa (+) P. amethystina; P. edulis f. flvicarpa (+) P.alata; P. edulis f. flavicarpa (+) P. cincinnata e P. edulis f. flavicarpa (+) P. gilberti. Tendo em vista a autoincompatibilidade no maracujazeiro, a fuso de protoplastos representa uma alternativa para introgresso de genes (Vieira, 1997).
Variao somaclonal

So variaes genticas espontneas, encontradas em plantas regeneradas in vitro, em funo de estresse provocado por este tipo de cultivo, gerando distrbios durante a diviso celular. As variaes somaclonais podem ser de natureza gentica, ou seja, herdveis, ou no herdveis, nesse caso, ditas epigenticas (Lisei de S et al., 2000; Ramalho et al., 2000). Variaes somaclonais induzidas ou espontneas vem sendo amplamente explorada para obteno de cultivares resistentes patgenos. Como exemplos, podese citar a cana-de-acar, cujas respostas foram diferenciais a incidncia de Helminthosporium sacchari (Heinz et al., 1977), e a doenas virticas (Mantell et al., 1994). Plantas resistentes Fusarium oxysporium e Ralstonia solanacearum foram obtidas em variantes somaclonais de tomateiro (Toyoda et al., 1989) e aipo (Heath-Pagliuso et al., 1988).

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Na seleo para resistncia por esta tcnica, o patgeno inoculado junto com o explante, ou em casos da patogenicidade ser mediada por toxinas, esta pode ser isolada e adicionada ao meio (Scowcroft et al., 1983).
Cultura de meristemas ou pices caulinares

Em muitas espcies de plantas que so propagadas vegetativamente por meio de tcnicas convencionais como estaquia e enxertia, o cultivo de meristemas uma das maneiras mais eficientes para livrar plantas de microorganismos patognicos endgenos como vrus, micoplasmas, fungos e bactrias, causadores da degenerescncia das cultivares (Kerbauy, 1997). Os patgenos, principalmente vrus, no conseguem infectar os tecidos meristemticos devido rpida multiplicao celular. Alm do mais o sistema vascular destas regies, no se encontra completamente desenvolvido, o que dificulta o transporte de vrus para essas partes (Pasqual et al., 1998). Esta tcnica mais efetiva e mais empregada na eliminao de viroses, em funo do fato de no existirem produtos qumicos para o controle de vrus. largamente utilizada na limpeza clonal de batata (Solanum tuberosum) para eliminao dos principais vrus (PVY, PVX, PVS e PLRV) e virides (virose do broto afilado- PSTV) (Pasqual et al., 1998); de alho (Allium sativum), batata-doce (Ipomea batatas) e mandioca (Manihot esculenta) (Duval et al., 1998); de morangueiro (Fragaria x ananassa) (Kerbauy, 1997); na citricultura, atravs de microenxertia (Pasqual et al., 1998; Styer & Chin, 1983). A obteno de plantas livres de fungos empregada na cultura do abacaxizeiro para controle da gomose causada por F. moniliforme (Pescador & Koller, 1992); da bananeira para controle do mal-do-panam (F. oxysporum f.sp. cubense), sigatoka amarela (Mycosphaerella musicola) e Sigatoka negra (Mycosphaerella fijiensis) (Krikorian & Cronauer, 1984).

Engenharia gentica
A Engenharia gentica refere-se a introduo de genes entre espcies no relacionadas, pertencentes a gneros diferentes e at mesmo reinos diferentes. Com o desenvolvimento desta rea tornou-se possvel a criao de combinaes gnicas inexistentes na natureza e principalmente a transferncia de genes entre indivduos isolados reprodutivamente. Essas combinaes resultaram nos transgnicos, tambm chamados de organismos geneticamente modificados (OGM).Tcnicas de biologia molecular, cultura de tecidos e transferncia de genes, culminou com o desenvolvimento da

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transformao gentica de plantas.Esta prtica consiste na introduo controlada de um gene no genoma de uma planta e sua posterior expresso. As plantas transgnicas so atualmente consideradas como fonte adicional de variabilidade a ser incorporada aos programas de melhoramento.Apesar de apenas recentemente ter atingido o apogeu A transformao gentica se constitui numa prtica a muito tempo realizada pelo homem. Um exemplo a seleo de sementes maiores para o plantio ou a utilizao das mutaes que ocorrem casualmente em plantas e animais, como observado em bananeiras (Farah, 1997). No campo da proteo de plantas, a engenharia gentica manipula genes responsveis pela sntese dos multicomponentes de defesa presente nas espcies. As respostas so acmulo de protenas relacionadas com patogenicidade, fitoalexinas, fenis e protenas da parede celular.Vrias estratgias tem sido adotadas na manipulao desses genes, para posterior transferncia espcie receptora (Tabela 10.1).
Metodologias de transformao de plantas

Para se obter uma planta transgnica, o primeiro passo consiste na identificao no doador, do gene que confere a carcterstica de interesse, seguido da localizao e isolamento deste, dos demais genes do genoma do doador. Em seguida deve se adotar uma metodologia eficiente para proceder a transformao. Na transformao gentica apenas um fragmento definido de DNA introduzido no genoma do hospedeiro, ou genoma receptor, sendo a ele integrado. Com esse processo possvel que caractersticas agronmicas como resistncia a doenas, pragas, herbicidas e tolerncia a estresse abiticos possam ser introduzidos em plantas cultivadas (Brasileiro & Dusi, 1999). As tcnicas de transformao gentica de plantas podem ser agrupadas em duas categorias: transferncia indireta e direta de genes. Na primeira utiliza-se um vetor como Agrobacterium tumefaciens e A. rhizogenes. A transformao direta de DNA baseada em mtodos fsicos ou qumicos geralmente adaptados de outros j estabelecidos para transformao de clulas. Nessa destacam-se transformao com polietilenoglicol (PEG), eletroporao e acelerao de partculas (Chilton et al., 1977; Chilton et al., 1982).

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Tabela 10.1 Estratgias utilizadas para obteno de transgnicos para proteo de plantas [modificado de Brasileiro & Dusi (1999)].
Modificao Estratgia Utilizada RNAs satlites Seqncias antisenso Capa protica Expresso de quitinases, gluconase e osmotinas Mutao Superexpresso Detoxificao do herbicida Resistncia a insetos Inibidores de proteinases Toxinas bacterianas Cultura Nicotiana tabacum N. tabacum Solanum tuberosum N. tabacum Produto do Gene RNA satlite Anti-senso da CP de PVX Capa protica de PVX, PVY e PLRV Quitinase de Serratia marcescens Caracterstica resistncia ao CMV resistncia ao vrus resistncia ao vrus resistncia a Alternaria longipes

Resistncia a viroses

Resistncia a fungo

Resistncia a herbicidas

L. esculentum Petunia hybrida L. esculentum N. tabacum

Acetolacto sintase mutada EPSP sintase fosfinotricina acetil transferase Inibidor de tripsina do caupi Endotoxina de Bt

resistncia ao chlorsulfuron resistncia ao glyphosate resistncia ao phosphinotricn resistncia a larvas de Heliothis virescens resistncia a insetos

Gossypium hirsuntum

Transformao indireta

A A. tumefaciens provoca na planta a proliferao descontrolada das clulas formando um tumor, desviando o metabolismo da planta hospedeira, de tal forma que as clulas infectadas passam a sintetizar substncias. Aparentemente, essas substncias no interessam planta mas so fundamentais para a bactria, pois fornecem a energia requerida para seu crescimento. A capacidade de induzir tumor controlada pela informao gentica presente em um plasmdeo que a A. tumefasciens carrega, o qual conhecido como plasmdio Ti (Tumor inducing, isto , plasmdeo indutor de tumor). Esse plasmdio possui a propriedade nica de injetar um segmento de seu DNA, o T-DNA, nas clulas da planta hospedeira da bactria. Durante o processo de infeco, o T-DNA, desprendido do plasmdeo e dirige-se para o ncleo da clula hospedeira, integrando-se ao cromossomo. Em seguida o T-DNA passa a se duplicar com o cromossomo da clula hospedeira. O T-DNA possui genes que codificam enzimas responsveis pela sntese de opinas, que so aminocidos ou carboidratos modificados utilizados como fonte de energia para a agrobactria (Brasileiro & Dusi, 1999; Brasileiro & Lacorte, 2000).
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Para evitar a formao do tumor nas plantas transgnicas, os genes responsveis so retirados do T-DNA e susbstitudos pelo gene que se pretende tranferir para a planta. O plamdio Ti, carregando o T-DNA modificado dito desarmado e pode agora ser utilizado como vetor. Porm, torna-se difcil determinar se a transferncia do T-DNA realmente ocorreu, pois as clulas passam a se comportar da mesma maneira que as clulas no transformadas. Para contornar essa dificuldade outro gene que funcione como marcador inserido no T-DNA modificado (Brasileiro & Lacorte, 2000). Um exemplo so os genes que conferem resistncia a antibiticos, permitindo assim a seleo de clulas modificadas (Farah, 1997). Um protocolo generalizado de tranformao consiste no cultivo de um explante com uma linhagem desarmada de Agrobacterium , contendo um vetor com o(s) gene(s) a ser(em) introduzido(s), por um perodo de tempo varivel (de 2 horas a 3 dias). A escolha do melhor explante feita em funo da sua capacidade de regenerao in vitro. Durante o cultivo ocorrer a induo dos genes da regio vir, assim como a ligao entre a bactria e a clula vegetal, no local de ferimento do explante, com subsequente transferncia do T-DNA para o genoma vegetal. Em seguida, o explante transferido para um meio de cultura apropriado, para a induo de calos e/ou gemas, contendo antibiticos (cefotaxima, ampicilina ou carbenicilina), para eliminar as clulas de Agrobacterium indesejveis. O meio dever conter tambm um agente de seleo (antibitico ou herbicida) que ser responsvel pela inibio do crescimento das clulas no transformadas. Nas semanas seguintes, os tecidos transformados (resistentes ao agente de seleo) crescem, e ocorre a diferenciao de brotos, que so ento excisados e transferidos para meio de induo de razes. Durante todos os estgios posteriores, uma presso de seleo deve ser mantida no tecido em regenerao, para que sejam gerados apenas transformantes verdadeiros. Porm, podem ocorrer escapes, ou seja, plantas transgnicas que so regeneradas, apesar da presena do agente de seleo (Wilmink & Dons, 1993). Aps o enraizamento, as plantas potencialmente transgnicas so aclimatadas e transferidas para casa de vegetao para posterior anlise molecular e de segregao (Brasileiro & Dusi, 1999).

Transformao direta

Os mtodos de transformao direta tm como objetivo comum quebrar a barreira da parede celular e da membrana plasmtica para livre penetrao do
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DNA na clula. Esses mtodos podem utilizar protoplastos ou clulas e tecidos vegetais intactos. Tcnicas como o uso do polietilenoglicol (PEG) e d eletroporao aumentam a permeabilidade da membrana (Brasileiro & Canado, 2000; Brasileiro & Dusi, 1999). A transformao por biobalstica tambm conhecida como bombardeamento ou gene gun. O mtodo consiste na precipitao do DNA a ser transferido na superfcie de diminutas partculas de tungstnio ou de ouro (1 a 4m de dimetro), e lanamento no tecido alvo. As micropartculas so aceleradas em direo ao tecido-alvo por meio de uma onda de choque, geralmente gerada por uma descarga de gs hlio alta presso. Os microporos causados pelo bombardeamento no chegam a causar leses ou danos srios nas clulas e uma poro dos microprojties carregando o DNA atingir o ncleo das clulas causando a transformao e/ou regenerao a partir de protoplastos (Brasileiro & Canado, 2000; Sanford, 2001). Esta estratgia potencialmete permite a transformao de qualquer espcie vegetal ou gentipo, sendo considerada reativamente simples, rpida e no envolve maiores investimentos em infra-estrutura e equipamentos (Brasileiro & Canado, 2000).
Estratgias adotadas na protede plantas Patgenos

A interao planta-patgeno pode ser dividida em dois tipos bsicos: compatvel, onde o patgeno invade o tecido vegetal, se multiplica e provoca doena na planta; e incompatvel, ou seja, o patgeno ao invadir o tecido vegetal encontra as defesas da planta que so rapidamente ativadas, impedindo sua multiplicao e produzindo resistncia. Neste caso fundamental uma interao gene a gene entre a planta e o patgeno (Flor, 1947), para ocorrer a ativao do mecanismo de defesa e resistncia da planta. As principais fases da interao planta patgeno so: 1) reconhecimento gentico entre planta e o hospedeiro, 2) processo de transduo de sinal, 3) ativao de genes, 4) ativao do mecanismo de resistncia (Cordeiro & Grossi de S, 1999; Zambolim, 2000). Os patgenos so classificados em doi tipos: virulentos e avirulentos. Os patgenos virulentos no possuem gene avr, cujo produto gnico reconhecido por uma protena de resistncia da planta. J os patgenos avirulentos possuem gene avr, cujo produto reconhecido por uma protena de resistncia da planta (Dangl, 1992). O produto do gene de avirulncia (protena avr), pode ser um indutor direto e especfico, que vai interagir com o produto do gene de resistncia (protena R). Este ainda, pode ser modificado no metabolismo bacteriano
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e/ou vegetal. O produto desta modificao (indutor direto) que ir interagir com a protena de resistncia. O mecanismo de induo e amplificao da resposta de defesa em plantas chamado de eliciao. As molculas que induzem ou amplificam, so chamadas de eliciadoras, e podem ser de origem protica, lipdica ou polissacardica (Cordeiro & Grossi de S, 1999). Cerca de 30 genes avr j foram caracterizados. O produto do gene avr est relacionado no s ao mecanismo de ativao da resistncia, como tambm a especificidade por uma cultivar. Os patgenos avirulentos tambm sintetizam produtos a partir de genes chamados hrp, que esto relacionados com a hipersensibilidade e patogenicidade (Cordeiro & Grossi de S, 1999). As protenas Hrp estudadas esto transporte de molculas da planta para a fatores de virulncia, eliciao e sistema fitopatognicas (Alfano & Collmer, 1996; et al., 1993; Van Gijsegem et al., 1995). relacionadas com quimiotaxia, bactria, sntese e exportao de de secreo tipo III de bactrias Baker et al., 1997; Van Gijsegem

Na interao incompatvel a resposta de hipersensibilidade (HR) definida como uma resposta rpida, induzida no vegetal onde ocorre morte celular, localizada na rea de infeco do patgeno avirulento. Morfologicamente, a HR reconhecida como uma clorose localizada, que aparece 24 horas aps a infeco, progredindo para uma leso necrtica (Wang et al., 1996). O mecanismo de morte celular programada ocorre em diferentes processos, durante o desenvolvimento, senescncia ou durante a HR. Nas etapas iniciais desse processo, a peroxidao lipdica, o acmulo de oxignio ativo, o influxo citoplasmtico de clcio e a degradao de DNA, parecem estar presentes. Mutantes que produzem leses espontneas, similares resposta de hipersensibilidade vm sendo estudados na tentativa de melhor compreender este processo (Levine et al., 1996; Wang et al., 1996). Exemplos de genes de resistncia isolados de diferentes plantas so apresentados na Tabela 10.2.

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Tabela 10.2 Genes de resistncia com especificidade a diferentes patgenos [modificado de Cordeiro & Grossi S (1999)].
Gene de resistncia Hm1 N gene L6 M RPP5 Mi I2 Prf Rpm1 Rps2 Rps5 Pib Cf9 Cf2 HS1pro1 Pto Xa21 Fen Planta milho fumo linho Arabidopsis thaliana tomate tomate tomate tomate A. thaliana A. thaliana A. thaliana arroz tomate tomate cana-de-acar tomate arroz tomate Resistncia a: Fungo (Cochliobolus carborum) Vrus (Tobbaco Mosaic Virus) Fungo (Melampsora lini) Fungo (M. lini) Fungo Nematide/inseto Fusarium oxysporum Bactria (Pseudomonas syingae pv. tomato) Bactria (P. syingae pv. tomato) Bactria (P. syingae pv. maculicola) Bactria (P. syingae pv. tomato) Fungo (Magnaporthe grisea) Fungo (Cladosporium fulvum) Fungo (C. fulvum) Nematide Bactria (P. syingae pv. tomato) Bactria (Xanthomonas campestris pv. oryzae) Inseticida

Os mecanismos de defesa de plantas a fungos incluem a sntese de polmeros como cutina, lignina e calose, formando barreiras fsicas, sntese de fitoalexinas e sntese de protenas relacionadas com a patogenicidade (PR) como quitinases, glucanases. Essas protenas degradam os polissacardeos estruturais presentes na parede celular de fungos (Joosten & De Wit, 1989). J foram descritas 3 classes de -1,3-endoglucanases e 5 classes de endoquitinases. Vrias delas tem efeito comprovado na inibio de fungos in vitro. Portanto seus genes so candidatos a genes anti-fungicos (Leah et al., 1991). Broglie et al. (1991), relata o sucesso da expresso de um gene que codifica para quitinase em feijo, transcrito em fumo e Brassica napus, o que resultou na diminuio dos sintomas provocados por Rhizoctonia solani. Outros estudos do sucesso da expresso de genes que codificam para quitinases e glucanases em fumo, foram relatados por Jach et al. (1995), Lamb et al. (1992) e Vierheling et al. (1993). Linhagens transgnicas obtidas por Lorito et al. (1998) foram altamente tolerantes ou resistentes a Alternaria alternata, A. solani e Botrytis cinerea. O gene que codifica para endoquitinase em Trichoderma harzianum, foi transferido para fumo e batata, neste estudo. Genes que codificam para sntese de protenas inativadoras de ribossomos (RIP) tambm so utilizados em transgnicos para aumentar a defesa de plantas a fungos. Esses genes j foram isolados de sementes de cevada e trigo e sintetizam para o RNAr 28S N glicosidase, que dependendo da especificidade leva a inativao de espcies no relacionadas, incluindo
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fungos (Jach et al., 1995; Lamb et al., 1992). A expresso do RIP de cevada em plantas transgnicas de fumo conferiu resistncia a R. solani (Lamb et al., 1992). As fitoalexinas so metbolitos produzidos pelas espcies vegetais em resposta infeco causada por fitopatgenos. Diferentes famlias de plantas possuem diferentes classes de fitoalexinas. A produo transgnica de novas fitoalexinas atravs da transferncia interespecfica de genes biossintticos, constitui-se numa nova estratgia no controle parcial de doenas fngicas. A expresso de tais genes resulta no acmulo de fitoalexinas nos tecidos vegetais antes e depois da entrada do patgeno (Hain et al., 1993). A ao antifngica e anti bacteriana de protenas do grupo das tioninas, e de protenas PR-1 encontradas em plantas de fumo tem sido demonstrada por Alexander et al. (1993) e Carmona et al. (1993). Em funo da menor complexidade do genoma, da facilidade de purificao e caracterizao molecular, a virologia vegetal a que mais tem se beneficiado da engenharia, gentica bem como da biologia molecular (Zerbini et al., 2000). Aplicaes como transformao gentica, marcadores moleculares e clonagem de genes so amplamente utilizados na obteno de plantas resistentes a fitoviroses. A criao de plantas resistentes a viroses atravs da engenharia gentica se baseou no princpio da proteo cruzada. Neste caso observou-se que o uso de isolados menos agressivos ou no virulentos de determinadas espcies de vrus, protegem as plantas contra a infeco de isolados mais agressivo de vrus relacionados. A proteo cruzada, utilizada com sucesso no controle da tristeza dos Citrus, mostrou que as plantas possuem mecanismos de defesa contra o ataque de fitopatgenos. E no caso de viroses, o mecanismo sugere que a presena do vrus ou de uma de suas protenas na clula hospedeira suficiente para ativar mecanismos de defesa da planta. Essa estratgia denominada de resistncia derivada dom patgeno (RDP), impedindo a replicao viral ou produo de qualquer outra protena viral na planta, comeou a ser largamente utilizada com o desenvolvimento da engenharia gentica. A primeira planta transgnica baseada no princpio da RDP, foi para resistncia ao vrus do mosaico do fumo (TMV), expressando a protena da capa protica (Powell-Abel et al., 1986). Outras protenas como replicases, proteases e protena de movimento (Fitchen & Beachy, 1993), tambm so utilizadas para obteno de plantas transgnicas resistentes a viroses. Outra estratgia adotada na induo de RDP o uso do RNA mensageiro transgnico. Neste caso, o nvel de proteo obtido tende a ser prximo imunidade e a plantas resistente, mesmo quando a concentrao de inoculo elevada, porm o grau de especificidade maior. Nos casos onde a resistncia se deve a presena da protena, o nvel de proteo menor e
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pode ser quebrado quando a concentrao do inoculo elevada, mas o espectro maior, inclusive para mais de um vrus (Zerbini et al., 2000). Quando a expresso da protena da capa protica, a resistncia se deve ao seu acmulo no citoplasma, impedindo que o RNA viral seja traduzido pelo ribossomo (Reiman-Phillip & Beachy, 1993). A protena transgnica impede o processo de desencapsidao da maioria das partculas virais retardando o incio da infeco. A resistncia pode ser quebrada pela alta concentrao de inoculo, em funo do grande nmero de partculas virais expostas para a traduo. J na resistncia derivada de RNA, Baulcombe (1996), demonstrou que as plantas possuem um sistema interno de degradao de RNAm, que ativado sempre que RNAs mensageiros endgenos ou transgnicos atinjam um nvel excessivo no citoplasma. Esse mecanismo foi denominado de silenciamento gnico transcripcional (SGPT) e altamente especfico. Caso o RNAm transgnico exceda o limite, o SGPT atua destruindo este RNA. Assim quando o vrus penetra na clula seu RNA tambm ser degradado pois possui seqncias de nucleotdeos idnticas ou muito semelhantes do transgene, sendo reconhecido pelo sistema celular de degradao. Embora a literatura relate uma srie de RDPs existentes, apenas dois casos tem sido aplicados a nvel comercial. Plantas de Curcubita pepo (abobrinha), expressando os genes da protena da capa protica de trs vrus (ZYMV, WMV-2 e CMV), esto sendo cultivadas nos Estados Unidos (Triticoli et al., 1995) e plantas de mamoeiro (Carica papaya) resistentes ao vrus da mancha anelar (PRSV-P), expressando o gene da capa protica (Lius et al., 1997).
Insetos

As plantas possuem peptdeos que atuam como inibidores de proteinases, os quais fazem parte do mecanismo de defesa de pragas e patgenos (Richardson, 1991). Tais protenas podem ser produzidas em tecidos que so vulnerveis ao ataque de insetos, como as sementes ou podem ser induzidos por injrias mecnicas (Jouanin et al., 1998). O mecanismo de ao de um inibidor de proteinase baseia-se na inibio competitiva dessas protenas via bloqueio de sua atividade proteoltica. A ingesto de inibidores de proteinases pelos insetos herbvoros interfere no processo de degradao de proteinas no intestino mdio, levando a uma deficincia protica (Silva-Filho & Falco, 2000). O desenvolvimento das tcnicas de biologia molecular, permitindo a manipulao de genes de interesse, aliadas s metodologias de transformo gentica de plantas, tem possibiltado o surgimento de um novo conceito no controle de insetos. Os genes que codificam para protenas com atividade
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inseticida tornaram-se uma arma poderosa e com amplo potencial de utilizao (Silva-Filho & Falco, 2000). Resultados in vitro baseados na combinao de extratos intestinais com diferentes inibidores de protenas, mostraram-se efetivos na inibio das proteinases digestivas. A incorporao de inibidores de proteinases em dietas artificiais tambm mostrou-se eficiente. Desta forma, foram obtidas plantas transgnicas resistentes a pragas via expresso dos genes de inibio de proteinases (Duan et al., 1996; Gatehouse et al., 1997; Hilder et al., 1987). Porm, trabalhos demonstraram que os insetos foram capazes de adaptar-se presena dos inibidores produzidos pelas plantas (Jongsma & Bolter, 1997). Na produo de plantas transgnicas expressando inibidores de proteinases devem-se fazer algumas consideraes necessrias para o aumento das chances de sucesso. Entre estas, incluem-se os nveis de expresso dos inibidores, sua constante inibio, estabilidade dos inibidores no intestino do inseto e a capacidade de adaptao dos inseto aos inibidores via alterao da expresso gnica. Os fatores ambientais secundrios tambm podem interferir na severidade dos sintomas (Broadway & Duffey, 1988). Estudos tambm tm sido realizados com intuito de desvendar o funcionamento das -amilases e de descobrir protenas com funo inibitria a essas enzimas digestivas de insetos. As -amilases so enzimas que catalisam a hidrlise de ligaes -1,4 do amido, glicognio e outros carboidratos, sendo essenciais para o crescimento e desenvolvimento de muitos insetos, espcialmente daqueles que vivem em sementes e gros ricos em amido. A introduo de genes que codificam inibidores de -amilase em culturas economicamente importantes tem sido utilizada para aumentar a resistncia destas culturas a diferentes insetos. Shade et al. (1994) verificaram que plantas de ervilha transformadas com o gene que codifica o -AI1 (inibidor das -amilases dos bruqudeos) se apresentaram completamente resistentes ao besouro da ervilha Bruchus pisorum. Em feije azuki tambm observou-se resistncia Callosobruchus chinensis, quando utilizou-se esse mesmo gene (Franco et al., 1999). A obteno de plantas resistentes a insetos com a utilizao de genes que codificam inibidores de enzimas digestivas uma estratgia bastante promissora e amplamente estudada (Tabela 10.3). Porm, estes inibidores devem ser selecionados levando-se em considerao a fisiologia e a bioqumica de sua digesto pelo inseto. Apesar da polmica, as leguminosas transgnicas so seguras para alimentao desde que as sementes sejam cozidas ou processadas antes do consumo por seres humanos. Uma vez desnaturados, estes inibidores funcionam como aminocidos aps a digesto, assim como as protenas de armazenamento (Franco et al., 1999).

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Tabela 10.3 Plantas transgnicas expressando genes para inibidores de proteinases (Franco et al., 1999).
Planta Fumo Genes* CpTI Pot PI II CpTI NaPI CpTI Pot PI I, Pot PI II Pot PI II, CpTI Inseto Heliothis virescens Lepdotera H. virescens Helicoverpa punctifera Lacanobia oleracea Helicoverpa armigera Teleogryllus commodus Sesamia inferens Chilo suppressalis Otiorhynchus sulcatus T. commodus Coleoptera Lepdoptera, Diptera Cydia pomenela Chrysomela tremulae
Lepdoptera

Batata Tomate Arroz

Morango Alface Canola Ma lamo

CpTI Pot PI II OC-I CII CpTI OC-I CII

*CII = inibidor de proetase sernica de soja; CpTI = inibidor de tripsina de feijo-de-corda; NaPI = inibidor de protease de Nicotina alata; OC I = inibidor de cistena de arroz; PoT PI I = inibidor de proteinase I da batata; Pot PI II = inibidor de proteinase II de batata.

Os extratos da bactria Bacillus thuringiensis (Bt) tm sido lagarmente utilizado em muitas plantaes, mas a produo para uso comercial ainda restrita, e o efeito de proteo s plantas dura um curto perodo de tempo. A protena inseticida produzida pela bactria no persiste no meio ambiente nem prejudicial aos insetos no suscetveis ou aos vertebrados, possibilitando uma forma segura de proteger as plantas. Pelo fato de a toxina ser codificada por um nico gene, o gene Bt, as tcnicas modernas de DNA recombinante podem ser usadas para isolar esse gene e tranferi-lo para plantas, tornando-as resistentes a determinados insetos. A estratgia que tem sido utilizada ligar o gene que codifica para a toxina a seqncias promotoras que assegurem sua expresso nas clulas vegetais e, com o auxlio do T-DNA, introduz-se o gene em plantas que passaro a expressar grandes quantidades dessa protena, gerando um fragmento ativo txico. Esse fragmento provoca a lise de clulas do epitlio intestinal, causando a morte de larvas. Essa estratgia tem sido utilizada com relativo sucesso em vrias espcies vegetais tais como tomate, batata, algodo e fumo. A expresso do gene em todas os tecidos da planta garante proteo mesmo em

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regies de difcil acesso pulverizao de inseticidas, tais como as razes (Farah, 1997; Lemos, 1997). Algumas espcies desenvolveram mecanismos naturais de controle de insetos e quando identificados os genes que codificam esses mecanismos, pode-se transferi-los para espcies desprotegidas. Como exemplo pode-se citar a batata, tomate e fava que produzem uma protena inibidora da tripsina, fundamental no processo de digesto dos insetos e no sendo prejudicial ao homem. Outra estratgia para desenvolver plantas resistentes a insetos transferindo-se o gene que produz a protena inibidora para plantas que normalmente no o possuem. Porm, necessrio alta expresso do gene para produo de concentrao elevada para proteo satisfatria (Farah, 1997).
Herbicidas

A produo de plantas trangnicas tolerantes a herbicidas tornou-se bastante atrativa para a agricultura. Os genes que conferem essa caracterstica podem ser encontrados na natureza, ou podem ser obtidos por meio de induo de mutaes. A tolerncia poderia ser obtida utilizando-se as seguintes estratgias: 1) estimular a super-produo da enzima na qual o herbicida atua, de forma a gerar quantidade suficiente de enzima que escape a ao inibitria do herbicida; 2) tornar a enzima especfica insensvel ao herbicida na planta de interesse; 3) introduzir, na planta de interesse, uma enzima com efeito degradante ou desintoxicante, que atue sobre o herbicida (Brasileiro & Dusi, 1999; Farah, 1997). Pode-se citar como exemplo o glicosato, ingrediente ativo de um produto conhecido comercialmente como Roundup. Este princpio tem amplo espectro de ao e seu efeito txico devido a inibio da enzima EPSP sintetase, que atua da biossintese de aminocidos (tirosina, fenilalanina e triptofano). Os animais no apresentam a enzima EPSP sintetase, ou seja, o glicosato no afeta o metabolismo deles. A transferncia do gene da enzima EPSP sintetase para plantas elevou o nvel da atividade enzimtica em 20 vezes, permitindo que as plantas transgnicas suportassem concentraes de herbicida quatro vezes maiores. Porm, essas plantas apresentaram taxa de crescimento retardada. Uma segunda abordagem consiste na transferncia do gene isolado de linhagens mutantes de E. coli insensveis ao glicosato. Quando o gene que codifica a enzima mutante da bactria foi ligado a um promotor introduzido em plantas de fumo e tomate, as plantas trangnicas aumentaram siginificativamente a tolerncia ao herbicida. Outros genes que conferem tolerncia a outros tipos de herbicidas j foram isolados, e a resistncia a esses compostos qumicos j foi obtida em mais de uma dezena de espcies de plantas. Como exemplo pode-se citar o gene bar e bxn de Klebsiella ozenae cujos produtos inativam os herbicidas

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fosfonotricina (PPT) e bromoxinil, respectivamente (Brasileiro & Dusi, 1999).

Marcadores moleculares e resistncia a pragas e doenas

Nas ltimas dcadas, tcnicas moleculares tem sido usadas em grande escala em estudos e incorporao de genes de resistncia em cultivares comerciais, principalmente a fitopatgenos. Para se obter cultivares resistentes, deve-se primeiramente identificar a fonte de resistncia, ou seja o genitor resistente. comum encontrar genes para resistncia principalmente a pragas em germoplasma selvagem. O segundo passo identificar o genitor suscetvel, proceder os cruzamentos para obteno das populaes segregantes (F2, retrocruzamentos, linhagens recombinantes, etc.) e em seguida detecta-se os marcadores polimrficos entre os genitores resistente e suscetvel, analisando a segregao. Os marcadores fortemente ligados ao gene de resistncia, co-segregam com a resistncia. Para estudos de herana monognica, ou seja quando a resistncia governada apenas por gene, tem sido utilizados marcadores de RAPD, RFLP, AFLP, microssatlites,dentre outros. Para maior detalhamento destas tcnicas, consultar Milach (1998); Ferreira & Gratapaglia (1995). A utilizao da tcnica de anlise de Bulks segregantes (Michelmore et al., 1991), associada a RAPD tem facilitado a identificao de marcadores ligados a resistncia doenas. Amostras de DNA de grupos de indivduos resistentes e grupos de indivduos suscetveis da prognie, so amplificadas com vrios oligonucleotdeos (primers). Os marcadores de RAPD ligados ao gene de resistncia mostrar-se-o intensos no bulk resistente e fracos ou ausentes no suscetvel.Apenas estes sero avaliados em toda a prognie. Marcadores ligados a genes de resistncia (genes R) podem ser utilizados para seleo indireta de plantas resistentes. A introduo de genes efetivos contra difrentes raas do patgeno, originria de diversas fontes em uma mesma cultivar (piridamento de genes R) poderia ser feita sem testar uma mesma planta contra vrios isolados do patgeno. Quando a resistncia de carter quantitativo, os marcadores moleculares so utilizados para elucidar o nmero e a localizao dos locos que controlam a caracterstica quantitativa, denominada de quantitative trait loci (QTLs).A anlise de QTLs realizada em populaes segregantes obtidas a partir do cruzamento entre genitores contrastantes para a caracterstica em questo. Identifica-se os marcadores polimrficos os quais sero testados nas diferentes classes fenotpicas da populao segregante. Esta inicialmente dividida em classes genotpicas para cada loco marcador.

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No que concerne a pragas, na maioria das vezes, a resistncia governada por um ou poucos genes (Khush & Brar, 1991). J a produo de fitoalexinas, como a 2-tridecanona (isoflavonide) em Lycopersicon esculentum Miller e L. hirsutum f. glabratum (Nienhuis et al., 1987), resultado do efeito de numerosos QTLs. Marcadores moleculares como RFLP e SSR (microsatlites), tem sido utilizados para mapear QTLs ligados resistncia a pragas (Lander & Botstein, 1989). Trabalhos associando marcadores moleculares a resistncia a pragas foram realizados em tomateiro (Maliepaard et al., 1995; Mutschler et al., 1996; Nienhuis et al., 1987), soja (Chase et al., 2000), trigo (Dweikat, 1997; Nieto-Lopez & Blake, 1994), arroz (Ishii et al., 1994; Nair et al., 1996), milho (Byrne et al., 1996; Schn et al., 1993), batata (Bonierbale et al., 1994; Yencho et al., 1996). .

CONSIDERAES FINAIS
Com intuito de atender as necessidades da crescente populao mundial, sem destruir cada vez mais a ecologia, a biotecnologia se desponta com predies otimistas. importante frisar que uma das principais vantagens da biotecnologia moderna voltada para a proteo de plantas , que pode gerar estratgias de melhoramento aplicveis a diferentes culturas. Plantas transgnicas de mais de 20 espcies j foram produzidas com resistncia a mais de 30 viroses. Da mesma forma, plantas protegias contra insetos a partir da endotoxina de Bacillus thuringiensis foram obtias para espcies de importncia como tomate, milho, batata, algodo, fumo, cana-de-aucar e arroz. Destas o milho, o algodo e a batata transgnicos, esto sendo comercializados. Porm, o que no se pode esquecer que as metodologias do melhoramento vegetal clssico sero obrigatoriamente utilizadas com as plantas transgnicas, pois estas tero de ser adaptadas aos seus ambientes de cultivo por mtodos tradicionais de melhoramento.

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BIBLIOGRAFIA
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DESAFIOS DA BIOTECNOLOGIA APLICADA PROTEO DE PLANTAS
GERSON QUIRINO BASTOS

INTRODUO
Atualmente, o Estado de Pernambuco detm um elevado potencial de produo primria agrcola, com seus mais de 6.699.920 ha de terras cultivadas (IBGE, 1985), frente demanda crescente por alimentos, biomassa e matrias-primas na economia contempornea globalizada. Ante expectativa e insero do Nordeste, com uma populao aproximada de 42.497.540 habitantes (IBGE, 1994), correspondendo a 28,94% da demografia brasileira, e cerca de 125.200.000 ha de terras agrcolas da Classe I a VI (Pessoa, 1990), num ritmo econmico e poltico mais efetivo dentro do Mercosul (Brasil-Argentina-Paraguai-Uruguai), certamente Pernambuco fortalecer ainda mais seu papel desenvolvimentista regional. Ademais, no se pode desconhecer que os prximos desdobramentos do Brasil na participao direta ou indireta com outros blocos econmicos (ALCA, NAFTA, UE, etc.), exigiro muito mais desse Estado e dessa grande e vivel Regio. E, nesse cenrio nacional e internacional, a educao em todos os seus nveis passar a ser um fator decisivo para a formao do capital intelectual gerador de Cincia & Tecnologia (C & T) com perfil prprio, endgeno, auto-sustentvel e ajustado realidade do Pas. Sendo assim, a Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) dever ter redobrado sua responsabilidade e vocao poltico-social do ensino superior em Cincias Agrrias, pois seus qualificados recursos humanos e os diversos campi distribudos num Estado geograficamente com intermediao regional, em muito a condicionam para assumir os novos desafios da tecnologia moderna e da produo agrcola crescente. Principalmente aqueles que imprescindem das atividades acadmicas de pesquisa, ensino e extenso voltadas para as mesorregies nordestinas caracterizadas como Mata, Agreste e Serto. O atual nvel da tecnologia agronmica em implantao nos permetros irrigados do Rio So Francisco, os avanos da pecuria pernambucana de pequeno e grande porte, a expanso da floricultura estadual e a obteno de um nmero crescente de
Michereff, S.J. & Barros, R. (Eds.) Proteo de Plantas na Agricultura Sustentvel. 2001. Recife, UFRPE

Direitos de edio reservados aos editores

ISBN 85-87459-06-6

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novas variedades de cana-de-acar (Saccharum spp) com a sigla RB (Repblica do Brasil), constituem provas cabais da capacidade da UFRPE como Instituio Federal de Ensino Superior (IFES) e reconhecida componente social na dinmica desenvolvimentista regional. Seguindo-se essa projeo, seus Programas de Ps-graduao j vm acumulando, ao longo dos anos, marcas destacadas pela CAPES e CNPq como fomentadores de recursos humanos coadjuvantes para as aes de Pesquisa & Desenvolvimento (P&D) em Pernambuco e no Nordeste. Dentre os mesmos, o Programa de Ps-graduao em Fitossanidade tem sido relevado como vanguardista acadmico, principalmente agora ao postular os Desafios da Proteo de Plantas na Agricultura Sustentvel em sua Semana de Fitossanidade 2001, enfocando, entre outras matrias, a Biotecnologia e Proteo de Plantas. O presente trabalho objetivou sistematizar os conhecimentos disponveis e acumulados sobre o fitomelhoramento para a proteo fitossanitria das espcies agrcolas, durante nosso exerccio profissional da Engenharia Agronmica aplicada nas lavouras de cana-de-acar do Norte e Nordeste do Brasil.

REVISO DE CONCEITOS
Em qualquer campo do saber das civilizaes humanas, a conceituao dos termos vigentes numa determinada poca, tornou-se o referencial cognitivo mais notrio para a histria da evoluo e da herana social do conhecimento construdo entre sucessivas geraes. Considerando esse princpio, faz-se necessrio revisar a terminologia pertinente biotecnologia para proteo das plantas de espcies agrcolas. No Brasil, o termo biotecnologia catalogado como um dos mais novos vocbulos nos dicionrios nacionais, aps um perodo de domnio coloquial como mais um neologismo criado pela C&T. Em 1998, o dicionrio Michaelis conceituou a biotecnologia como Ramo da tecnologia que se ocupa da aplicao de dados biolgicos e de engenharia a problemas relacionados ajustagem mtua do homem e da mquina (sic). Uma definio mais atualizada e explicativa foi apresentada recentemente no dicionrio Aurlio (2001) pelos seguintes termos: Biotecnologia aplicao de mtodos e processos biolgicos e bioqumicos produo industrial, farmacutica, medicinal, etc. Enquanto isso, nos Estados Unidos da Amrica do Norte, como a mais influente fonte internacional de gerao de tecnologia, j em 1941, a biotecnologia era tida como um termo aplicado cincia biolgica que lidava com a bioengenharia e agora com o DNA recombinante
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(Biotechnology (1941) Aplied biological science as bioengineering or recombinant DNA tecnhnology), segundo o Collegiate Dictionary (1998). Para fins de nivelamento cultural e espelhado nos inmeros exemplos de Paulo Freire (19/09/1921 02/05/1997) para a educao como forma de libertao dos aculturados ou dominados, considere-se uma outra reviso pontual para o termo. Reconhecendo que no Brasil, o entendimento social comum da palavra Tecnologia como sendo um conjunto de conhecimentos, geralmente com base em princpios cientficos, aplicados a uma determinada atividade humana, pode-se convencionar e adotar para a presente abordagem a Biotecnologia como todo aquele conjunto de conhecimentos aplicado vida.

A DIVERSIDADE DA BIOTECNOLOGIA AGRCOLA

Na agricultura contempornea agronomicamente possvel se constatar incontveis aplicaes de prticas biotecnolgicas que atendem a contento ao termo anteriormente convencionado. Principalmente quando so consideradas as atividades, mtodos e processos de ordem fitossanitria para a proteo das plantas cultivadas contra o ataque de pragas , a incidncia de patgenos ou at mesmo no controle das plantas de espcies invasoras de lavouras e concorrentes daquelas espcies agrcolas. Bastos (2000) discorreu sobre a Tecnologia de Sementes para fins didticos, destacando que no controle da incidncia de pragas, doenas de sementes e espcies vegetais invasoras podem ser adotados tratamentos para desinfestao, desinfeco ou profilaxia das sementes agrcolas de quaisquer classes: gentica, bsica, registrada, certificada e fiscalizada. Para tanto, relaciona o mesmo autor, h uma grande disponibilidade de mtodos fsicos, como a termoterapia; mtodos qumicos, a exemplo do uso de agrotxicos com receiturio agronmico e mtodos biolgicos que contemplam vrias alternativas, desde do uso de inimigos naturais dos agentes vivos contaminantes at a adoo de cultivares (cultivated varieties) resistentes aos mesmos predadores de lavouras e dos produtos agrcolas. Considerando essa ltima alternativa biotecnolgica citada, observa-se que, historicamente, h um amplo reconhecimento de engenheiros agrnomos, biologistas e agricultores que foi o fitomelhoramento o principal responsvel pela evoluo da agricultura nos quatro cantos do Mundo. Desde dos primrdios da agricultura primitiva (Lawrence, 1980) at hoje, na mais desenvolvida das agriculturas de quaisquer pases ricos, emergentes ou subdesenvolvidos, a seleo de cultivares de maior produtividade (t/ha) e mais resistentes aos fatores biticos concorrentes da produo agrcola, ampliou significativamente a oferta de alimentos, incrementou a segurana
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das reservas alimentares em muitas naes e proporcionou melhores relaes vantajosas de custo/benefcio para esse item da atividade econmica primria. Sendo assim, o binmio da Cincia & Tecnologia, representado pela combinao da Gentica com o Melhoramento Vegetal, merece um enfoque mais detalhado, mormente agora na antevspera da incalculvel e iminente difuso do conhecimento da gentica molecular para obteno de novos organismos geneticamente modificados (ogms), destinados agricultura.

BIOTECNOLOGIA PELA GENTICA APLICADA AO FITOMELHORAMENTO

Quando Charles Darwin, em 1859, lanou seus princpios bsicos da Origem das Espcies, as muitas semelhanas entre tipos diferentes de organismos vivos configuraram a possibilidade de haver uma origem natural comum sob o efeito acumulado da evoluo pela seleo da natureza (Mettler & Gregg, 1973). Simultaneamente e por deduo lgica, ficou tambm caracterizado que a variao por diferenas individuais existentes em cada espcie ou populao seria decisiva no processamento natural da eliminao dos indivduos menos aptos. Sendo assim, a adaptabilidade das plantas cultivadas ou silvestres pde tambm ser explicada principalmente pela capacidade relativa das mesmas em deixar descendncias crescentes, herdando, entre os inmeros atributos, a aptido de escapar ou resistir a predao de inimigos naturais e s doenas. Cientificamente, foi essa uma das primeiras grandes evidncias do conhecimento humano sobre a existncia de plantas naturalmente protegidas de pragas e doenas, ou at mesmo dos efeitos alelopticos das espcies botnicas tidas como concorrentes ou invasoras.

Princpios do fitomelhoramento
Como o fitomelhoramento uma das mais antigas biotecnologias praticadas na agricultura mundial (Lawrence, 1980), torna-se necessrio reavivar parte do conhecimento dos princpios cientficos que a fundamentaram. Primeiramente, vale destacar que Gregor Mendel (18221884), contemporneo de Charles Darwin, j em 1865, viria estabelecer suas duas leis da herana gentica: a Lei da Segregao e a Lei da Distribuio Independente dos caracteres. Porm foi no final do Sculo XIX, precisamente em 1900, com a redescoberta das Leis de Mendel e, posteriormente, por ter surgido uma gerao seriada de inmeras outras pesquisas aplicadas biotecnologia, quando houve ento a combinao mais
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sedimentada do binmio gentica e obteno de organismos geneticamente modificados. Num resumo cronolgico, a partir de citaes de Frey (1966), Metter & Gregg (1973) e Gardner (1977), pode-se referenciar a seguinte evoluo inicial do conhecimento viabilizador da biotecnologia agrcola: 1865 Mendel. G. lana suas duas leis da gentica; 1900 Correns, C.; De Vries, H. e Tschermak, E, redescobrem simultaneamente, mas de forma independente, as leis mendelianas; 1902 Boveri, T. e Sutton, W.S. demonstraram que havia unidades componentes dos cromossomos; 1903 Johanssen, W. apresentou sua teoria das linhas puras em feijo e criou o termo gen; 1905 Bateson, W. lanou o termo gentica por significar gerar, na sua origem grega; 1909 Garrod, E. descobriu que os genes produziam enzimas; 1931 Wright, S. difunde seus fundamentos sobre a evoluo mendeliana em populaes; 1947 Mangelsdorf, P.C. divulgou seus estudos sobre a origem e a evoluo do milho; 1949 Anderson, E. abordou o fenmeno da hibridao introgressiva; 1952 Kempthorne, O. sugeriu os delineamentos e modelos de anlises e experimentos; 1963 Finlay, K.W. e Wilkinson, G.N. estabelecem a anlise de adaptao num programa de fitomelhoramento; 1968 Van Der Plank, J.E. expe as bases da resistncia das plantas s doenas; 1980 Maxwell, F.G. e Jennings, P.R. apresentam uma reviso detalhada sobre o fitomelhoramento para resistncia a insetos. Dessa forma, da gentica clssica do final do Sculo XIX gentica biomolecular desenvolvida at o trmino do Sculo XX, muitos progressos foram alcanados para o fitomelhoramento agrcola, destacando-se principalmente aqueles que objetivaram a obteno e seleo de cultivares mais produtivos e menos suscetveis aos agentes biticos contaminantes e predadores da agricultura e de seus produtos. Por esse estado da arte, constata-se que a biotecnologia vegetal pode ser considerada como uma das

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mais dinmicas, verstil e autotransformadora para se conseguir impulsionar a evoluo da agricultura mundial e do Brasil.

Pioneirismo biotecnolgico de Pernambuco com a canade-acar

Como a cana-de-acar no foi uma espcie botnica originada nas Amricas, certamente as primeiras variedades ou cultivares introduzidas pelos espanhis e portugueses, foram trazidas, respectivamente, das Ilhas Canrias e das Ilhas da Madeira , segundo Magalhes (1953). Pelo mesmo autor, os exemplares do Brasil Colonial tinham simplesmente o nome de Cana que, depois passaram a ser chamados de Crioula ou Cana-da-Terra, porm sem nenhuma caracterizao de seus descritores fenotpicos que possibilitassem distinguir se havia ou no uma mistura de gentipos nas populaes. Aps mais de dois sculos de explorao da Cana, o Brasil importou de Caiena (Guiana Francesa) uma variedade canavieira que em todo seu perodo de cultivo, isto , de 1810 a 1880, ficou conhecida nas regies canavieiras de Pernambuco e do Nordeste como Cana Caiana (Dantas, 1960). Entretanto, em 1869, surgiu na Bahia e, posteriormente, em Pernambuco a doena com o nome de Gomose nos canaviais, comprometendo a produtividade agrcola e condenando aquela variedade ao desuso por a mesma no ter uma proteo natural contra esta incidncia patognica. Segundo o Geran (1971), esse problema fitossanitrio induziu, no Estado de Pernambuco, a tentativa emprica de obteno de novas variedades, atravs da semeadura de cariopses formados em polinizao livre da Caiana. Portanto, caracterizando-se como o primeiro passo da biotecnologia agrcola visando a proteo de plantas, pois, das 10 plntulas obtidas por Manoel Cavalcanti, em Vitria de Santo Anto (PE), duas delas se destacaram_ a Manteiga e a Manoel Cavalcanti_ como as mais produtivas e resistentes, tendo ambas sido cultivadas comercialmente por mais de 40 anos. Novamente, em Pernambuco, j em 1913, ainda conforme registro do Geran (1971), a Estao Experimental de Escada (PE) encetou novos estudos biotecnolgicos visando a seleo de gentipos mais resistentes broca da Diatraea e ao inseto Trioriymus sacchari. E, na Dcada de 20, segundo a mesma autoria, os novos gentipos de cana-de-acar aprovados na Estao Geral de Experimentao de Barreiros (PE) e sucessora da de Escada, foram denominados de EB-4, EB-10, EB-26 e EB-53. Logo os mesmos passaram a ter aceitao comercial nos canaviais, ratificando a vocao de Pernambuco como pioneiro no incremento da produtividade agroindustrial atravs da explorao da biotecnologia agrcola. A retrocitada referncia confirma ainda que, em 1933, surgiram tambm os primeiros clones canavieiros da
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Escola de Agronomia de So Bento (PE), batizadas como SBP 28-27, SBP 28-76 e SBP 28-86. Todas elas obtidas pelo mais ilustre de seus ex-alunos, o engenheiro agrnomo Apolnio Salles, tambm reconhecido como o construtor da Hidroeltrica de Paulo Afonso (BA). Resumidamente, constata-se que, em grande parte de transcurso do Sculo XX, os diversos desafios sobre a proteo de plantas de cana-deacar em Pernambuco foram tambm confrontados com introdues contnuas, de carter nacional ou internacional, de novos gentipos mais produtivos e resistentes. Entre os principais problemas surgidos, destacaramse o mosaico, broca gigante, mal-de-raiz, podrido das estacas, podrido vermelha do colmo, cupins dos rebolos etc. Segundo Dantas (1960), a flutuao censitria das principais variedades comerciais exploradas no Estado, at depois de 1950, podem servir de demonstrativo das tentativas biotecnolgicas de introduzir mais material gentico objetivando manter ou aumentar a produtividade e tambm conferir maior proteo natural fitossanitria. Como marco valioso desse pioneirismo ora retratado, tem-se a variedade RB 72454, liberada em 1982, na Estao Experimental de Cana-de-Acar do Carpina (EECAC), pelo extinto PLANALSUCAR. Atualmente, essa variedade apresenta-se como uma das mais plantadas em todo Brasil, totalizando cerca de 20,40 % em 1.166.287 ha de canaviais do Centro-sul e Nordeste-leste (IDEA, 1999). Ademais, a mesma tem seus variados graus de resistncia s principais doenas dos canaviais, conforme pode ser constatado na Tabela 11.1. Para uma rea de 1.224.420 ha cultivados com cana-de-acar no Nordeste, Bastos (1986) registrou que havia um perfil varietal censitrio em rpida mutao na Regio. Procurando destacar aquelas variedades que estavam como as mais plantadas naquela ocasio ou com elevado potencial agroindustrial, o mesmo autor difundiu, via informao tcnica aos produtores, a Tabela 11.2 como referncia dos gentipos usuais e suas reaes particulares s principais doenas.

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Tabela 11.1 Graus de reao da variedade RB 72454, liberadas em Pernambuco, no ano de 1982, s principais doenas (PLANALSUCAR, 1987).
Doenas Carvo Escaldadura das folhas Ferrugem Mancha amarela Mancha ocular Mancha parda Mosaico Nematides Podrido da casca Podrido vermelha Raquitismo da soqueira Reaes Moderadamente resistente Intermediria Resistente Suscetvel Resistente Suscetvel Resistente Intermediria Suscetvel Resistente Intermediria

Tabela 11.2 Principais variedades canavieiras de Pernambuco, em 1986, com suas reaes ao carvo e ferrugem da cana-de-acar (Bastos, 1986).
Doenas
Carvo

Reaes*
R I S

Variedades
CB 45-15, Co 740, Co 997, RB 721012 NA 56-79, RB 72454, SP 71-6163, SP 71-799 H 32-8560, H 52-7209, CP 57-603, MEX 55-250 CB 45-3, Co 331, Co 997, RB 70194, RB 70141, RB 72454 CB 41-76, Co 419, IAC 51-205, IAC 52-150 B 4362, B 51415, RB 725828, SP 70-1143

Ferrugem

R I S

*R = resistente; I = intermediria; S = suscetvel.

Outros exemplos do fitomelhoramento no Brasil

Em todo o mundo, o binmio representado pela maior produtividade agrcola (t/ha) e resistncia aos agentes biticos contaminantes das lavouras e seus produtos, sempre esteve por trs dos principais objetivos dos programas de melhoramentos de diversos pases. O fenmeno da degenerescncia varietal condicionando a longevidade de cada gentipo comercial e a dinmica gentica evolutiva da macro e microbiota do ambiente e dos concorrentes da lavoura, condicionaram o fitomelhoramento
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como uma biotecnologia dinmica e contnua para a busca constante das melhores cultivares. Nakano (1999), ao apresentar uma crnica sobre a proteo vegetal, destacou que o intercmbio globalizado de mercadorias e produtos agrcolas aumentou as probabilidades de disseminao de pragas e doenas entre pases. Segundo ele, o Brasil precisa fortalecer sua Vigilncia Sanitria Vegetal, pois h ainda mais de uma centena de pragas potencialmente importantes no Exterior e, felizmente no confirmadas na agricultura nacional. Os exemplos vivenciados historicamente com o surgimento da lagarta rosada do algodoeiro, broca do caf, bicho mineiro do caf e mosca das frutas no devem ser olvidados to cedo. Por outro lado, se for tambm considerado o nmero de espcies ou raas de patgenos (fungos, bactrias, vrus, nematides etc.) de outras agriculturas estrangeiras ainda inexistentes no territrio nacional, h de se reconhecer como imprescindvel o controle sanitrio de portos, aeroportos e rodovias como mecanismo auxiliar importantssimo para o fitomelhoramento. Segundo ainda Nakano (1999), nos ltimos 20 anos do Sculo XX, surgiram no Brasil as seguintes novas pragas indutoras de mudanas nos atuais programas de melhoramento vegetal: Bicudo do algodoeiro Broca das axilas da soja Besouro Idi Amin Cochonilha dos capins Cochonilha da mangueira Larva minadora das folhas dos citros Mosca do sorgo Percevejo Blissus Traa do tomate Traa da macieira Considerando os problemas fitossanitrios j existentes na agricultura brasileira, Borm (1999) compilou alguns resultados genricos do fitomelhoramento bem sucedido pela hibridao artificial de plantas, conforme pde ser sintetizado na Tabela 11.3.

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Tabela 11.3 Principais espcies agrcolas e algumas de suas variedades ou clones com resistncias obtidas pela biotecnologia agrcola (Borm, 1999).
Espcies Algodo Amendoim Arroz Aveia Cacau Caf Artico Cevada Feijo Mandioca Soja Variedades ou clones com resistncia IAC-RM3, EPAMIG-4, IAC-22, EPAMIG-3 e IAC-18 IAC-Caiap, IAC-Jumbo, VRR-245, Acesso 2.117 e IAC-1075 BR-IRGA 409 e Metica 1 UFRGS 881920 e UFRGS 15 TSH 516, TSH 565 e TSH 1188 Bourbon-Amarelo, Catua e Catua-Vermelho BR 2 e EMBRAPA 43 Aroana 80, Carioca 80, Vargem Roxa, Caraota 260, Pirat 1 e Preto 2449 IM-158, IM-186, EAB-670 e EAB-81 IPAGRO 21, Renascena, Liderana, IAC-100 e IAC-17

Mecanismos fitomelhoristas para proteo fitossanitria de plantas

H muito tempo que se tem observado em campo, laboratrio e casa de vegetao a existncia de uma especializao recproca entre parasitas e espcies de plantas hospedeiras, pois sempre se constatou diferentes graus de resistncia patogenicidade de um organismo predador. Principalmente, quando se considera as diferentes cultivares ou linhagens de uma espcie agrcola. Vanderplank (1968), ao lanar seus resultados de pesquisa sobre resistncia das plantas s doenas, mencionou o tringulo da doena como a integrao dos fatores - hospedeiro x patgeno x ambiente - para desencadear uma determinada epifitia. Da depreende-se como importantes so os genomas da planta hospedeira e de seus agentes biticos contaminantes ou predadores, pois ambos interagem entre si sob os efeitos das variaes edafo-climticas reinantes nos diversos sistemas de produo agrcola. Com base nesse conhecimento, faz-se necessrio rever como um carter geneticamente diferenciado para proteo de planta interfere na adaptabilidade da espcie agrcola s condies de cultivo. Pelo fitomelhoramento, saber comum que os efeitos qualitativos ou quantitativos da resistncia podem ter, respectivamente, herana do tipo mono ou oligognica (um ou poucos genes envolvidos) ou polignica (vrios genes expressando o carter). Outro fundamento generalizado que a
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expresso gnica para qualquer carter, inclusive o de resistncia a agentes biticos, pode ser por ao intra-allica (recessiva, dominante ou semidominante) ou inter-allica (completamentar, aditiva ou episttica). Agora, considerando-se os estudos de Vanderplank (1968), pode-se levar em conta os dois tipos conhecidos de resistncia encontrados nas espcies agrcolas: a)Resistncia especfica ou vertical quando a mesma somente contra alguns biotipos de espcies de pragas ou de patgenos; sendo governada por um ou poucos genes, conferem alto grande resistncia especfica, porm de pouca estabilidade e pode se facilmente incorporada em novas cultivares pela adoo dos retrocruzamentos dirigidos; b)Resistncia geral ou horizontal que expressa igualmente contra todos os biotipos de espcie de pragas ou patgenos; apresenta maior estabilidade por ser controlada por inmeros genes, imprescidindo dos estudos de gentica quantitativa e por haver maior dificuldade para sua incorporao nas futuras cultivares. Para complementar, combinando agora os fundamentos tcnicos propostos por Vanderlank (1968) e Maxwell & Jennings (1980), pode-se sintetizar assim os mecanismos de reao em plantas cultivadas: Para insetos, os mecanismos podem ser do tipo no-preferncia, antibiose ou tolerncia aos biotipos de suas espcies; Para patgenos, os mecanismos conhecidos so por impedimento do agente causal, alta resistncia e por reao intermediria de resistncia ou tolerncia da planta. Finalmente, tem-se da gentica de populaes de seres vivos como plantas, insetos e microorganismos, que a variao gentica presente entre os genomas de cada germoplasma se perpetuaro pela herana e que as novas recombinaes gnicas, migraes, mutaes e a seleo exercero sempre uma influncia contnua sobre a evoluo artificial ou natural de todo material gentico envolvido no fitomelhoramento. Como essa reviso, depara-se com a clara evidncia de que a relao gene/hospedeiro vis--vis gene/inseto ou microorganismo muito dinmica e instvel, tanto na natureza como nos agrosistemas estabelecidos. Portanto, na modernizao da biotecnologia aplicada obteno de novas cultivares, tal relao tambm prevalecer, condicionando os resultados alcanveis. Pois, sempre haver para os genes de resistncia, nas plantas, naturais ou aliengenas com introgresso, outros genes correspondentes nos agentes biticos que se destinam a viabilizar suas sobrevivncias na infinita relao hospedeiro x predador x ambiente.

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Limiar da biotecnologia agrcola moderna

Nesse incio de Sculo XXI, reconhece-se que a velocidade dos progressos da biologia molecular, em sinergia com a bioqumica e biofsica, decuplicaram as possibilidades de avanos na biotecnologia agrcola moderna. As macromolculas tiveram suas funes mais delineadas, constatando-se que o ser vivo total a resultado final dos processos de cada clula que, como menor unidade de vida, contribui na expresso do todo pelos tecidos e rgos formados, segundo Hobbelink (1990). A expectativa da obteno rpida de cultivares promissores com maior proteo contra pragas, doenas, agroqumicos e espcies vegetais concorrentes, em muito potencializa agora a biotecnologia agrcola moderna. O III Milnio abriu um longo e prximo horizonte de avano tcnico cientfico, pois, sobre todo o conjunto de conhecimentos da Era Mendeliana, passou-se a produzir modernamente os organismos geneticamente modificados (ogms). Se antes esses organismos eram assim denominados por receber genes ou alelos diferentes, mas da mesma espcie agrcola ou daquelas com gneros aproximados, agora sero passveis de receber tambm genes de outras espcies, at mesmo daquelas mais distanciadas em filo, atravs da introgresso gnica em laboratrio e posterior avaliao agronmica das cultivares transgnicas obtidas. Uma prospeco sumria das inmeras possibilidades criadas pela biotecnologia agrcola moderna pode assim ser apresentada:

A engenharia gentica in vivo tornou possvel a fuso de protoplastos e a produo dos hbridos citoplasmticos (cbridos); A engenharia gentica in vitro para a produo tcnica do DNA recombinante visando a introduo de genes especficos em cultivares comerciais, passou a ser atividade bsica para a obteno dos novos ogms; A cultura de tecidos de planta (CTP), explorando os conhecimento sobre a cincia da morfognese e a totipotncia das clulas vegetais, regenerando novas plantas, uma prtica comum nas escolas superiores, empresas e institutos de pesquisa agropecuria; A micropropagao como forma rpida e assexuada de grande multiplicao dos melhores gentipos, fitossanitariamente limpos, passou a ser realidade na produo industrializada das biofbricas de mudas clonadas; A produo de variabilidade gentica, explorvel no fitomelhoramento, a partir das clulas no diferenciadas nos ciclos de cultura de tecidos e com a regenerao das novas plantas pelo cultivo

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de explantes, possibilitou a artificializao da mutao e o incremento da diversidade;

A descoberta e caracterizao de toda a constituio gnica de alguns genomas tm sinalizado positivamente para a identificao da biodiversidade, elaborao de mapas genticos mais precisos, marcao de blocos controladores de caractersticas quantitativas pelos poligenes e a seleo precoce de gentipos desejados.

Sabendo-se que a engenharia gentica e a biologia molecular em geral constituem o nvel de fronteira mais avanado da biotecnologia (Salles Filho, 1993), a seqncia das fases de trabalho para o desenvolvimento de uma planta geneticamente modificada pode assim ser configurada:
1o. passo - identificao do gene responsvel pela expresso da caracterstica agronmica que se deseja incorporar na cultivar, como resistncia praga, doena ou a um agroqumico especfico; 2o. passo - isolamento gentico do gene selecionado em laboratrio; 3o. passo - clonagem do gene alvejado para uso posterior na transgenia; 4o. passo - introduo do gene replicado no DNA do gentipo receptor; 5o. passo - regenerao de novas plantas a partir de explantes do material gentico transformado; 6o. passo - realizao de retrocruzamentos com genitores selecionados para fixar o novo carter agronmico desejado; 7o. passo - levantamento geral sobre o ogm, com avaliaes fenolgicas, morfolgicas, genticas e moleculares; o 8 . passo - monitoramento sobre os efeitos da toxidade eventualmente presente na nova planta ou causados pelo gene estranho; 9o. passo - apresentao formalizada do novo ogm obtido para a Comisso de Tecnologia Nacional de Biossegurana (CTNBio) para autorizao oficial dos experimentos de campo; o 10 . passo - realizao de estudos de impacto ambiental e de segurana alimentar dos produtos desse ogm; 11o. passo - requerimento da liberao s instituies oficiais para a nova cultivar transgnica, visando sua posterior produo e comercializao como sementes ou mudas fiscalizadas pelo Ministrio da Agricultura e do Abastecimento (MAA).

Em que pese as grandes possibilidades tcnicas de aproveitamento da transgenia, os resultados at ento alcanados podem ser considerados com incipientes e muito distante daqueles ndices de aumento de produtividade agrcola historicamente atingido pela gentica mendeliana e quantitativa. Seno, comparem-se os poucos exemplos das transgenia no Exterior:

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algodo do tipo Bollgard R, protegido contra diversos insetos por genes provenientes de Bacillus thuringiensis (Bt) USA; batata New Leaf R com a mesma transgenia da cultivar anterior; milho Yieldgard R tambm com a mesma transgenia das cultivares anteriores; soja Roundup Read R que geneticamente modificada, apresenta-se como tolerante ao ingrediente ativo herbicida conhecido como glifosate.

EXPECTATIVA DA TRANSGENIA NO BRASIL

semelhana das agriculturas praticadas em diversos pases, a agricultura brasileira e sua grande importncia internacional no mercado globalizado de mercadorias primrias (commodities) esto tambm no limiar da transio entre duas fases marcantes nas tecnologias agrcolas. Antes, as tecnologias eram principalmente viabilizadas pela Matriz Petrleo com o uso e dependncia crescente para os agro-qumicos propalados pela Revoluo Verde. Agora, adentra-se nas tecnologias agrcolas com a predominncia da Matriz Biotecnolgica Gnica. Entre as conseqncias mais imprevisveis a serem evitadas, releva-se a dominao da Cincia & Tecnologia transnacional, com seus patenteamentos de cultivares e sementes transgnicas estrangeiras, sobre os destinos, a rentabilidade econmica e a sobrevivncia de uma agricultura brasileira hoje muito competitiva. A biotecnologia agrcola moderna no Brasil prenuncia grandes avanos para o fitomelhoramento nacional de espcies agrcolas se forem vencidas as condies bsicas de infra-estrutura nos laboratrios biotecnolgicos brasileiros, a formao contnua de recursos humanos especializados em biotecnologia e, como condio sine qua non, se for incrementada a dinmica de seu fitomelhoramento clssico, provedor comum das novas cultivares produtivas que, provavelmente, serviro por muito tempo como veculo eficaz dos futuros genes manipulveis pela transgenia. A atualizao do acervo legal brasileiro para proteo das cultivares agrcolas (Lei n 9.456 de 25/04/97), a biossegurana para os ogms (Lei n 8.974 de 05/01/95), a proteo do direito autoral (Lei n 9.610 de 19/02/98) e a lei de proteo do meio ambiente (Lei n 9.605 de 12/02/98), pode ser considerado como o primeiro passo previdente e necessrio ao Pas para, definitivamente, entrar e competir em Pesquisa e Desenvolvimento (P&D) no campo da biotecnologia agrcola moderna.

CONSIDERAES FINAIS

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A par do conhecimento ora exposto nessa sistematizao, sobressaem as consideraes abaixo sintetizadas.

A biotecnologia, como um conjunto de conhecimentos, quase sempre embasados em fundamentos cientficos, aplicado vida pode ser considerada como uma atividade humana altamente mutante ao longo das histrias da humanidade e da agricultura. A biotecnologia agrcola clssica, com base na Gentica Mendeliana, promoveu os mais significativos aumentos de produtividades (t/ha) e de proteo fitossanitrio s novas cultivares da poca, viabilizando a economicidade, a evoluo e a sustentao da agricultura brasileira por todo o Sculo XX. A biotecnologia agrcola moderna, respaldada na biologia molecular integrada com a gentica, a biofsica e a bioqumica, constitue um novo, irreversvel e imprevisvel horizonte desenvolvimentista da agricultura do Sculo XXI e do III Milnio. Pelo estgio avanado da agricultura brasileira em diversas regies agrcolas, a expanso constante de suas fronteiras agrcolas e o crescimento recordista crescente da produo nacional de gros, justifica-se a expectativa geral do mundo sobre os passos do Brasil na gerao e difuso da biotecnologia agrcola moderna, principalmente aqueles palmilhados para o desenvolvimento das cultivares transgnicas. Em Pernambuco, a UFRPE, com seus Programas de Ps-graduao em Cincias Agrrias e detentora do Laboratrio de Genoma Tnia Falco e da Biofbrica de Cana-de-acar do Carpina, alm de ser participante produtivo no Programa de Melhoramento Gentico da Cana-de-acar ora desenvolvido pela Rede Interuniversitria para o Desenvolvimento Sucroalcooleiro (RIDESA), concentra-se um elevado potencial de gerar e difundir biotecnologia agrcola moderna para o Nordeste e, extensivamente, tambm vivel agricultura de todo Brasil.

RESUMO
A globalizao da economia mundial repassou para a agricultura brasileira o grande desafio de se modernizar para se fazer mais competitiva, auto-sustentvel e continuar como forte componente na balana comercial superavitria e significativo setor econmico viabilizador do desenvolvimento do Brasil.

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Nesse cenrio, a biotecnologia agrcola nacional j gerou novas cultivares para as diversas espcies cultivadas, destacando sempre aquelas de maior produtividade (t/ha), altos rendimentos agroindustrial e, simultaneamente, mais resistentes aos agentes biticos causadores de pragas, doenas e de competio biolgica. Os resultados alcanados na transio entre os Sculos XX e XXI, tiveram como base principal a Gentica Mendeliana aplicada ao fitomelhoramento. Considerando a longa listagem das lavouras brasileiras e suas cultivares melhoradas disponveis, a cana-de-acar desponta como a de resultados mais compensadores. Suas inmeras variedades, obtidas e selecionadas pelo fitomelhoramento canavieiro nacional, tornaram-se imprescindveis sustentao e ao incremento da produtividade sucroalcooleira do Brasil, alm de terem tido papel destacado na viabilizao inicial do Prolcool. Dentre elas, a RB 72454, liberada em Pernambuco, no ano de 1982, pela Estao Experimental de Cana-de-acar do Carpina, por ser atualmente uma das mais cultivadas no Brasil, pode ser considerada como paradigma bem sucedido da biotecnologia agrcola brasileira. E agora, no limiar da biotecnologia agrcola moderna, embasada principalmente na biotecnologia molecular; na biofsica e bioqumica, surge nesse inicio de III Milnio, uma multidiversidade de alternativas para a gerao de novas cultivares como organismos geneticamente modificados para alguma caracterstica agronmica vantajosa. Atualmente, a mais promissora e atingvel a resistncia s pragas, doenas ou aos agroqumicos da agricultura tecnificada. Sumariamente, reconhece-se a existncia de um longo e prximo horizonte de desenvolvimento da biotecnologia agrcola moderna, visando uma maior participao brasileira na economia globalizada e na gerao de pesquisa e desenvolvimento com a engenharia gentica.

RECONHECIMENTO
Que o presente trabalho sirva, por sua modesta, porm alvissareira contribuio, como homenagem aos fitomelhoristas canavieiros: Rokuro Urata por ter sido o primeiro orculo do melhoramento da canade-acar no Nordeste; Liu Shi Pin como fitopatologista testador das primeiras variedades RB (Repblica do Brasil), em Pernambuco; Antnio Maria Rocha Cardoso que, de Recife (PE) Macei (AL), representa o exemplo maior da dedicao seleo contnua de clones canavieiros para todo o Nordeste e Brasil.

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BIBLIOGRAFIA
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290

12
BIOLOGIA MOLECULAR COMO FERRAMENTA NA DETECO DE FITOPATGENOS
GAUS SILVESTRE DE ANDRADE LIMA IRAILDES PEREIRA ASSUNO

INTRODUO
O termo deteco se refere constatao de que um dado patgeno ou um produto do mesmo est presente numa amostra proveniente do tecido vegetal, do vetor, do solo ou substrato de plantio, da gua utilizada na irrigao, de implementos agrcolas, etc. A deteco de fitopatgenos pode ser feita diretamente da amostra analisada ou a partir de culturas do agente etiolgico. At recentemente a deteco era feita utilizando-se testes biolgicos, sorolgicos, morfolgicos e bioqumicos. Estes procedimentos nem sempre conduziam a resultados conclusivos, principalmente pelo fato de que espcies muito relacionadas no podiam ser diferenciadas mediante estes parmetros. Em outros casos o patgeno alcanava nveis populacionais muito baixos no hospedeiro e as tcnicas utilizadas no apresentavam sensibilidade suficiente para sua deteco. H situaes ainda mais particulares, como as infeces causadas por Agrobaterium tumefaciens e A. rhizogenes. Tais bactrias transferem um segmento de DNA que inserido no cromossomo da hospedeira. No DNA transferido h genes responsveis pela formao de tumores (hiperplasia). Uma vez que a insero tenha ocorrido, os sintomas hiperplsticos sero induzidos mesmo na ausncia do patgeno. Nesse caso, qualquer tentativa de deteco, com exceo de tcnicas voltadas para o DNA bacteriano, so ineficientes. A deteco de patgenos de grande importncia para a adoo de medidas de controle, assim como para impedir a entrada de patgenos exticos numa determinada rea. Outra aplicao na avaliao da resistncia de plantas a doenas. As plantas que no desenvolverem sintomas aps a infeco podem ser checadas para se confirmar a ausncia do patgeno. Devido preciso, sensibilidade, praticidade e versatilidade algumas tcnicas de biologia molecular vm sendo utilizadas
Michereff, S.J. & Barros, R. (Eds.) Proteo de Plantas na Agricultura Sustentvel. 2001. Recife, UFRPE

Direitos de edio reservados aos editores ISBN 85-87459-06-6

291

satisfatoriamente com essa finalidade. Destacam-se a reao em cadeia da polimerase (PCR) e a hibridizao de cidos nuclicos. Os princpios gerais destas tcnicas, bem como suas aplicaes na deteco de fitopatgenos especficos sero discutidas adiante. No momento faremos uma rpida reviso sobre a composio e a estrutura do DNA e do RNA. Isto ser indispensvel para a compreenso dessas tcnicas.

O CIDO DESOXIRRIBONUCLICO (DNA)

O DNA um polmero composto de unidades de desoxorribonucleotdeos, que por sua vez so constitudos de trs componentes: uma base nitrogenada, um acar (a desoxirribose ou 2desoxi-D-ribose) e um grupo fosfato (PO4-) (Figura 12.1). As bases nitrogenadas so derivadas de dois compostos heterociclcos relacionados, piridiminas e purinas, sendo duas bases pirimdicas principais: citosina (C) e timina (T), e duas bases pricas principais: adenina (A) e guanina (G) (Figura 12.2).

Base PO4-

22-desoxiribose

Figura 12.1 Estrutura geral de um desoxiribonucleotdeo.

Adenina (A) Guanina (G) Timina (T) Citosina (C)

Purinas

Pirimidinas

Figura 12.2 As bases que formam o DNA: citosina (C), timina (T), adenina (A) e Guanina (G). Na molcula de DNA a base nitrogenada encontra-se ligada ao carbono 1 da pentose, atravs de uma ligao glicosdica envolvendo o N1 das

292

pirimidinas ou o N9 das purinas. Por sua vez, a desoxirribose ligada ao grupo fosfato por meio de uma ligao N-glicosdica no carbono 5. Os desoxirribonucleotdeos so covalentemente ligados entre si atravs de ligaes fosfodister entre o grupo hidroxila 5 da pentose de uma unidade nucleotdica e o grupo hidroxila 3 da pentose do prximo nucleotdeo (Figura 12.3).
Extremidade 5
-O -O

P O
5 CH2 4

O Adenina O H
3 2 1

H O

H O

Ligaes fosfodiste r 35

-O

P O
5 CH2 4

G uanina O H
3 2 1

H H O

H H

Ligao glicosdica entre a 2-desoxirribose e cada base

Ligaes fosfodiste r 35

-O

P O CH2 H H O

O Timina

O H
3 2 1

H H

Ligaes fosfodiste r 35

-O

P O CH2

Citosina

O H
3 2

H H

H O

Figura 12.3 Uma poro de uma cadeia de DNA (Campbell, 2000).

293

A estrutura secundria do DNA consiste de duas cadeias helicoidais, enroladas ao longo do mesmo eixo para formar uma dupla-hlice de sentido rotacional direita. Na hlice, as duas cadeias ou fitas so antiparalelas, ou seja; suas ligaes fosfodisteres internucleotdicas ocorrem em direes opostas uma na direo 53 e a outra na direo 35. Os anis aromticos das bases nitrogenadas so hidrofbicos e ficam orientados para o interior de tal forma que as molculas das bases, aproximadamente planares, esto muito prximas e perpendiculares ao longo do eixo da dupla hlice. As bases so pareadas entre as duas fitas da molcula, mediante interaes intermoleculares (principalmente pontes de hidrognio), que mantm sua estrutura. O esqueleto acar-fosfato encontra-se voltado para o exterior da molcula. Duas caractersticas das bases nitrogenadas so importantes: sua estrutura qumica e o seu tamanho. A presena de grupos ceto (C=O) e amino (CNH2) permite a formao de pontes de hidrognio entre as bases. Desta forma, T que contm grupos ceto, podem parear com A, que contm grupo amino, atravs de uma ponte de hidrognio. Alm disso, uma ponte de hidrognio adicional pode ser formada entre os nitrognios dos anis aromticos em todos os pares. Desta forma, entre T e A so formados duas pontes de hidrognio e entre C e G so formadas trs pontes (Figura 12.4). Os pares de bases permitidos so sempre uma purina e uma piridimina, especificamente os pares AT e GC. Alm disso, as bases de cada par esto suficientemente prximas para que suas superfcies formem pontes de hidrognio entre si. Os pares AT e GC tm dimenses semelhantes. Assim, os dois pares ocupam o mesmo espao, permitindo uma dimenso uniforme ao longo da molcula de DNA. Essas caractersticas explicam o fato de que, em qualquer seqncia de DNA, a relao molar entre AT e GC seja igual a 1,0. Outros pares de bases so possveis, mas no possuem o padro de pontes de hidrognio correto (por exemplo, A-C ou G-T) ou as dimenses corretas (pares purina-purina ou pirimidina-pirimidina).

A-T

G-C

Figura 12.4 Pontes de hidrognio formadas entre A e T (duas) e C e G (trs).

294

O CIDO RIBONUCLICO (RNA)

O Assim como o DNA, o RNA um polmero de nucleotdeos ligados entre si por ligaes fosfo-dister 53. H, porm algumas diferenas bsicas entre os dois compostos, como pode ser observado na Figura 12.5. No RNA a pentose uma ribose e a timina substituda por uma outra base pirimdica, a uracila (U). As outras trs bases que ocorrem no DNA tambm esto presentes no RNA. Adicionalmente, ao contrrio do DNA, o RNA uma molcula formada por uma nica cadeia (fita simples), embora os pareamentos C-G e A-U possam ocorrer na mesma cadeia. Muitos fitovrus e todos os virides conhecidos tm o genoma formado por RNA. No caso dos fitovrus o RNA pode ser de uma molcula de fita simples ou de fita dupla, enquanto no caso de virides o RNA sempre uma molcula de fita simples.
Citosina (C) Citosina (C)

Guanina (G)

Guanina (G)

Bases Bases Adenina (A) Pares de

Pontes de H bases

Adenina (A)

Esquelo Esque leto acaracarfosfato fostato Uracila (U) Timina (T)

Bases nitrogenadas

Bases nitrogenadas

CH2 OH H H OH

O H

OH H H

CH2 OH H H H

O H

OH

H H

Ribose (RNA)

2-desoxir ibose (DNA)

Figura 12.5 Diferenas fundamentais entre o DNA e o RNA. O RNA uma molcula de fita simples. No RNA a timina substituda pela uracila (U) e a pentose a ribose.

295

TCNICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR EMPREGADAS NA DETECO DE FITOPATGENOS

Diversas tcnicas de biologia molecular tm sido empregadas na deteco de fitopatgenos, merecendo destaque a PCR e a hibridizao de cidos nuclicos. Essas tcnicas oferecem grandes vantagens em relao aos mtodos convencionais de deteco, principalmente maior preciso, sensibilidade, praticidade e versatilidade. Ao contrrio de muitas tcnicas convencionais utilizadas na deteco as tcnicas baseadas em DNA no sofrem influncia do estado fisiolgico do hospedeiro ou do patgeno ou ainda das condies ambientais.

A reao em cadeia da polimerase (PCR)

Princpios da PCR

A PCR uma tcnica baseada na sntese enzimtica in vitro de milhes de cpias de uma seqncia especfica na presena da enzima DNA polimerase. A reao se baseia no anelamento e extenso de um par de oligonucleotdeos (primer), geralmente de 20 a 30 bases, que delimita a seqncia a ser amplificada. Um ciclo de PCR envolve trs etapas: desnaturao, anelamento e extenso. Na desnaturao as fitas do DNA so separadas devido ao aumento da temperatura para 92-95 0C. Na etapa de anelamento a temperatura rapidamente reduzida (35 a 60 0C). Em seguida a temperatura elevada para 72 0C, para que a enzima realize a extenso (adio de nucleotdeos) do primer, de acordo com a seqncia codificada pela fita molde. Como a quantidade de seqncia alvo dobra a cada ciclo, a amplificao segue em progresso geomtrica de maneira que, aps 20 ciclos, so produzidas mais de um milho de seqncias alvo (Figura 12.6) (Ferreira & Grattapaglia, 1996). A especificidade da PCR proporcionada pela seqncia dos primers e pela temperatura de anelamento. Nesta fase os primers pareiam com seqncias homlogas do DNA alvo devido complementariedade de bases. Quanto maior a temperatura mais especfica a reao. Temperaturas mais baixas permitem que pareamentos menos especficos ocorram. Outra importante varivel na PCR o tempo de extenso do primer, pois em geral as polimerases incorporam aproximadamente 1000 nucleotdeos por minuto. Assim que foi desenvolvida, a PCR era um procedimento muito trabalhoso. As diferentes temperaturas necessrias para cada etapa da reao eram alcanadas utilizando-se trs banho maria regulados para diferentes temperaturas. Alm disso, cada ciclo requeria que uma nova alquota da DNA polimerase fosse adicionada, pois quando a temperatura atingia os 94
296

C a enzima era inativada. O desenvolvimento de um equipamento denominado termociclador e a descoberta de DNA polimerases termoestveis (resistentes a altas temperaturas) possibilitou a popularizao da PCR. No termociclador pode-se programar a temperatura e o tempo de cada etapa e o nmero de ciclos da PCR.
5 Regio a lvo

5
94 0C

3 94 0C 5 Separao das fitas

5 3

Separao das fitas 3 3 5 3 Ane lamento dos prim ers

1 0 ciclo

37-60 0C

Ane lamento dos pri mers 3

3 72 0C Ex tenso dos prime rs (polimeriza o) 3 5

5 3

5 3 5

Figura 12.6 Etapas principais da tcnica de PCR. Os passos fundamentais de desnaturao, anelamento e alongamento se repetem a cada ciclo. Ao final do ciclo de cada ciclo o nmero de cpias da regio alvo dobra (Ferreira & Grattapaglia, 1996). Inicialmente a DNA polimerase termoestvel utilizada nas amplificaes era purificada de uma bactria adaptada para viver em ambientes muito quentes, denominada Thermus aquaticus. Essa polimerase conhecida como Taq polimerase. Atualmente a enzima comercial purificada de Escherichia coli recombinante expressando o gene que codifica para Taq polimerase. H tambm outras DNA polimerases termoestveis provenientes de outros organismos como Pfu polimerase de Pirococcus furiosus e Tth polimerase de T. thermofilus.
Uso da PCR na deteco de fitopatgenos

297

2 0 ciclo

37-60 0C

A utilizao da PCR na deteco de fitopatgenos exige que seqncias do genoma de vrios isolados da mesma espcie e de espcies relacionadas sejam conhecidas. A disponibilidade dessas seqncias definir a seqncia de bases dos primers que sero utilizados. De um modo geral deseja-se encontrar uma regio do genoma que esteja conservada (regio com alta homologia) em todos os isolados de uma dada espcie e que esteja ausente em espcies relacionadas, mas no-patognicas. Em geral, primers especficos tm de 18 a 28 bases. A principal vantagem da PCR sua alta sensibilidade, pois a cada ciclo o nmero de sequencias alvo dobra. Considerando uma nica seqncia alvo no DNA molde e uma PCR composta de 35 ciclos espera-se alcanar, aps a reao, um nmero de aproximadamente 34.359.738.368 molculas (235). No entanto, essa grande sensibilidade pode se transformar em desvantagem em determinadas ocasies, pois qualquer contaminao da amostra com o DNA molde pode levar a falsos positivos, portanto o mximo cuidado no manuseio dos componentes da reao deve ser adotado. Um controle absoluto (amostra sem DNA molde) deve ser includo em todas as anlises. Existem programas de computador que auxiliam o pesquisador a selecionar a seqncia dos primers. Porm, muitas vezes, dentro de uma regio conservada h posies (bases) variveis. Nesses casos pode-se utilizar primers degenerados. Estes primers podem conter, nas regies variveis, uma base rara, denominada inosina (I), que tem a capacidade de parear com qualquer outra base do DNA. Alternativamente, primers degenerados podem ser obtidos pela mistura de primers praticamente idnticos, diferindo apenas na(s) posio(es) varivel(eis). A amplificao de um produto de tamanho esperado na amostra avaliada e sua ausncia nos controles negativos indica a presena do organismo na amostra da qual o DNA foi extrado. A Tabela 12.1 traz alguns exemplos de patgenos para os quais a PCR ou tcnicas derivadas foram empregadas na deteco. A partir da PCR uma srie de outras tcnicas, tambm utilizadas na deteco de fitopatgenos, foi desenvolvida, merecendo destaque RT-PCR, RAPD e PCR multiplex. As duas primeiras sero discutidas ainda neste captulo.

298

Tabela 12.1 Exemplos de fitopatgenos detectados via PCR ou tcnicas derivadas.

Patgeno Fonte do DNA ou RNA Regio de anelamento do primer Bibliografia

Vrus e viride Closterovrus* Geminivrus Tomato yellow leaf curl virus Tospovrus* Badnavrus Citrus tristeza vrus* Apple Steam Grooving Virus* Avocado Sunblotch Viroid* Fungos Plasmodiophora brassicae Diaporthe phaseolorum Phomopsis longicolla Fusarium culmorum, F. graminearum F. avenacearum Phytophthora infestans Ustilago hordei Polymyxa betae Bactrias Clavibacter michiganensis Xanthomonas campestris Acidovorax avenae subsp. citrulli Ralstonia solanacearum Fitoplasma Flavescence dore Fitoplasmas Espiroplasma Espiroplasma Nematide Meloidogyne chitwood
*Deteco baseada em RT-PCR.

videira vetor (mosca branca) tomate e vetor (mosca branca) tomateiro Ribes sp. vetor (afdeo) macieira abateiro solo e gua soja culturas puras

Homlogo a Hsp70 Routh et al. (1998) Gene da capa protica Rosell et al. (1998) Gene da capa protica Atzmon et al. (1998) RNAs: S, M e L ORF III Gene da capa protica Gene da capa protica Eiras (1997) Jones et al. (2001) Mehta et al. (1997) Marinho et al. (1996)

Gene da capa protica Schnell et al. (1997) rDNA ITS ITS Faggian et al. (1999) Zhang et al. (1999) Schilling et al. (1996)

batata e tomate esporos beterraba tomateiro gramneas melancia tomateiro vetor (cigarrinha) vrios hospedeiros milho batateira

ITS ITS

Judelson et al. (2000) Willits & Sherwood (1999) Mutasa et al. (1996) Lows et al. (1998) Maes et al. (1996) Walcott & Gitaitis (2000) Seal et al. (1992) Tanne et al. (1999) Gudersen & Lee (1996) Barros et al. (2001) Szalanski et al. (2001)

REP, ERIC, BOX ITS RDNA 16S rDNA ITS rDNA ITS rDNA

HIBRIDIZAO DE CIDOS NUCLICOS

Princpios da hibridizao de cidos nuclicos

299

A hibridizao de cidos nuclicos uma tcnica muito sensvel baseada na imobilizao do cido nuclico a ser detectado numa matriz slida (uma membrana de nitrocelulose ou de nilon, por exemplo) e na formao de hbridos com a sonda utilizada para a deteco. O termo hibridizao referese ao pareamento, devido complementaridade de bases, que ocorre entre o cido nuclico imobilizado e a sonda. A formao de hbridos estveis pode ocorrer entre duas seqncias de DNA ou RNA complementares, ou entre uma seqncia de DNA e uma de RNA, tambm complementares (Sequeira, 1992; Lambais, 1995). Diversos patgenos, dos mais variados grupos tm sido detectados por meio da hibridizao de cidos nuclicos. A Tabela 12.2 ilustra alguns exemplos. Tabela 12.2 Exemplos de fitopatgenos detectados mediante tcnicas de hibridizao de cidos nuclicos.
Patgeno Fonte do DNA ou RNA Regio de anelamento da sonda Bibliografia

Vrus Indian Peanut Clump Virus Irlavrus Bean golden mosaic virus Tospovrus Fungos Pythium spp. Phytophthora spp. Monilia fructicola Bactrias Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus Fitoplasmas Flavescence dore Fitoplasmas Fitoplasmas Nematides Meloidogyne chitwood M. fallax Meloidogyne chitwood

amendoim vrios hospedeiros feijoeiro tomateiro cultura pura pssego e nectarina batata

Gene da capa protica Wesley et al. (1996) Vrias Saade et al. (2000) Componentes A e B Gilbertsonn et al. (1991) RNAs: S, M e L Eiras (1997) ITS Regies repetitivas ITS Lvesque et al. (1998) Boehm et al. (2001) Slack et al. (1996)

vetor (cigarrinha) crisntemo e vetor (cigarrinha) vinca e pimenteira juvenis batata

ITS Vrias rDNA DNA satlite rDNA e mtRNA 16S

Tanne et al. (1999) Weeb et al. (1999) Bedendo et al. (1999) Castagnone-Sereno et al. (1999) Szalanski et al. (2001)

As condies de hibridizao podem ser ajustadas para dificultar ou facilitar a formao de hbridos, de forma que a sonda hibridize apenas com uma seqncia de alta homologia (>90%) ou possa formar pareamentos estveis mesmo com molculas de menor homologia. De que maneira podese tornar as condies de hibridizao mais ou menos especfica? A
300

temperatura e a concentrao de sais presente na soluo de hibridizao so as variveis que interferem na especificidade do pareamento. Temperaturas e concentraes de sais elevadas dificultam o pareamento de bases e, portanto, nessas condies apenas seqncias de alta homologia podem formar hbridos estveis. Mediante a hibridizao de cidos nuclicos diferenas em um nico nucleotdeo podem ser detectadas. Assim como na PCR e ao contrrio das tcnicas sorolgicas que se baseiam em protenas, que podem sofrer influncias das condies fisiolgicas do animal no qual o antissoro foi produzido ou das condies ambientais, os mtodos baseados na hibridizao de cidos nuclicos detectam a presena de seqncias do genoma e, portanto, no est sujeito a essas influncias (Lambais, 1995). Existem diferentes mtodos de deteco baseados na hibridizao de cidos nuclicos. A tcnica mais utilizada para a deteco de agentes patognicos a de dot-blot a qual consiste em ligar permanentemente o material gentico extrado a uma membrana de nilon (Figura 12.6). O mtodo consiste no seguinte: as amostras vegetais a serem testadas so maceradas em tampo e depositadas, com auxlio de uma pipeta, numa membrana de nilon. Uma vez na membrana, as amostras assumem um aspecto arredondado (dot, que significa ponto em ingls), aps a fixao blotting, em ingls. Em seguida, a membrana submetida a uma prhibridizao, com o objetivo de evitar ligaes no especficas entre a sonda e as reas da membrana que no contenha o material gentico alvo. Com esta finalidade so utilizadas uma soluo de DNA no homlogo (geralmente se utiliza DNA de esperma de salmo) e uma fonte de protena (geralmente albumina de soro bovino). Aps a pr-hibridizao, a membrana hibridizada numa soluo contendo a sonda marcada e NaCl. Freqentemente a hibridizao realizada em temperaturas em torno dos 65 0 C em soluo de NaCl variando de 0,3 a 0,9 M. As sondas so obtidas por meio da clonagem de regies do genoma do patgeno em um plasmdeo. Aps a clonagem as sondas devem ser marcadas. Esta marcao pode ser feita utilizando-se istopos radioativos (32P) ou substncias no radioativas. Atualmente as sondas radioativas so as mais utilizadas. H algumas estratgias para se marcar uma sonda. A mais comum denominada nick translation. Nessa tcnica o plasmdeo recombinante (contendo uma seqncia do genoma do patgeno) incubado juntamente com uma DNA polimerase, uma DNase e os quatro nucleotdeos que compem o DNA (dATP, dCTP, dGTP e dTTP), sendo que o fsforo de um desses nucleotdeos radioativo. A enzima DNase introduz cortes na molcula de DNA, gerando gaps ou nicks. A DNA polimerase por sua vez utiliza os nucleotdeos presentes na reao para corrigir esses nicks. Como um desses nucleotdeos radioativo, o DNA resultante marcado,

301

podendo ser detectado posteriormente, pois a radiao deixa uma impresso num filme de raio X. Esse mtodo apresenta uma desvantagem considervel que o fato de o nvel de radioatividade na sonda ser relativamente baixo. Um outro mtodo, que incorpora mais radioatividade seqncia denominado randon priming. Este procedimento baseado na PCR e utiliza primers de seis bases de seqncias aleatrias (random). O plasmdeo recombinante desnaturado (a dupla fita desfeita) e ento so adicionados os primers, a DNA polimerase e os nucleotdeos (um deles marcado com 32 P). A polimerase sintetiza seqncias complementares sonda, utilizando os nucleotdeos marcados. Dessa forma muito mais radioatividade adicionada seqncia.
Amostras (extrato vegetal) Membrana de nailon ou nitrocelulose

Placa para infiltrao

Filtrao vcuo
DNA fixado membrana

Hi bri dizao
S onda ligada seqncia homloga

S onda marcada

Amostra com seqncia homloga sonda

Autoradiografi a
Autoradiograma

Figura 12.6 A tcnica de dot-blot, utilizada da deteco de patgenos em amostras de tecidos vegetais (adaptado de Lambais et al., 1995).

302

A utilizao de sondas no radioativas segue o mesmo princpio geral, empregando um dos quatro nucleotdeos marcados. Os compostos mais comumente utilizados com esta finalidade so a biotina e a fluorescena. Sondas marcadas com biotina so detectadas com avidina ou estreptoavidina, enquanto sondas marcadas com fluorescena so detectadas com um anticorpo contra fluorescena. importante ressaltar que os mesmos cuidados que se deve ter no manuseio de nucleotdeos marcados com radioatividade devem ser adotados nos trabalhos com nucleotdeos marcados com biotina ou florescena, pois alguns compostos utilizados na deteco so cancergenos. Outra tcnica baseada na hibridizao de cidos nuclicos muito utilizada emprega enzimas de restrio. Estas enzimas so empregadas para cortar fragmentos de DNA em determinados pontos, sendo que estes fragmentos podem ter sido produzidos em reaes de PCR ou por clonagem gnica. Cada enzima reconhece uma seqncia especfica de nucleotdeos e cliva o DNA sempre que essa seqncia ocorre. Como resultado gerado um conjunto de fragmentos que so separados mediante eletroforese em gel de agarose ou poliacrilamida. Aps a colorao com brometo de etdeo, os fragmentos so visualizados na forma de bandas sob luz ultavioleta. Cada patgeno pode apresentar uma ou mais bandas especficas para uma determinada enzima. Esta srie de bandas denominada perfil eletrofortico. A execuo da tcnica simples e os componentes da reao de digesto so o DNA (fragmento de PCR ou seqncia clonada), a enzima de restrio, o tampo da enzima e gua suficiente para completar o volume para 15 a 20 L. Aps a incubao o produto da digesto submetido a eletroforese, resultando nos perfis de fragmentos (Bedendo, 1999). Esta tcnica, denominada RFLP (restriction fragment length polymorphism) pode ser utilizada para distinguir diferentes espcies de um gnero, ou raas de uma espcie ou at mesmo isolados de um patgeno. Para o emprego de tcnicas que envolvam a hibridizao de cidos nuclicos necessrio que tanto a amostra (DNA ou RNA) quanto sonda estejam na forma de fita simples. A desnaturao das fitas um processo muito simples, consistindo geralmente na incubao da membrana em uma soluo de NaOH. Algumas vezes as tcnicas de PCR e RFLP so combinadas para se obter resultados mais satisfatrios. Por exemplo, muitas vezes os primers utilizados na PCR direcionam a amplificao de fragmentos de mesmo tamanho a partir do DNA de espcies relacionadas ou de raas de um dado patgeno. Porm em determinadas situaes deseja-se determinar exatamente qual a espcie ou a raa que est presente na amostra. Isso pode ser alcanado mediante clivagem do produto de PCR ou da RT-PCR com uma ou mais enzimas de restrio.

303

Mtodos moleculares na deteco de fungos fitopatognicos

A deteco de fungos fitopatognicos por meio da PCR ou da hibridizao de cidos nuclicos em geral se baseia principalmente em regies codificadoras conservadas evolucionariamente como o rDNA (seqncias de DNA que codificam para os RNAs ribossomais), seqncias que codificam para as protenas -tubulina, actina e o fator de elongao 1 ou seqncias no codificadoras do rRNA, denominadas ITS. Nessas situaes apenas uma banda visualizada. A deteco tambm pode ser alcanada baseando-se em regies arbitrrias ou repetitivas do genoma. Nesse caso verificam-se vrias bandas (fingerprints), porm cada espcie ou at taxa infraespecfica apresenta um fingerprint caracterstico. A utilizao da PCR para a deteco de fungos diretamente do tecido vegetal, no solo ou na gua tem tido uma aplicao restrita na prtica. No entanto, tem sido grande sua utilizao na gerao de marcadores moleculares visando a identificao de fungos a partir de culturas puras (Souto et al., 2000). Como observado nas Tabelas 12.1 e 12.2 h diversos relatos em que primers ou sondas especficos para a regio que compreende ITS1, gene 5.8 S e ITS5 do rDNA foram utilizados para a deteco de fungos fitopatognicos (Figura 12.7).

ITS4
18S 5.8S 28S

ITS1

ITS2

ITS5

Figura 12.7 Regies de anelamento dos primers ITS4 e ITS5 do rDNA nuclear de fungos (adaptado de Souto et al., 2000).

Mtodos moleculares na deteco de fitobactrias

O genoma de organismos procariotos pode apresentar um pequeno percentual de DNA repetitivo. Seqncias repetitivas relacionadas (semelhantes) so denominadas famlias. No caso de bactrias fitopatognicas trs famlias de seqncias repetitivas tm sido estudadas mais detalhadamente, incluindo as seqncias REP (repetitive extragenic polindromic) com 35-40 pb, seqncias ERIC (enterobacterial repetitive intergenic consensus), com 124-127 pb e o elemento BOX com 154 pb. Geralmente tais seqncias localizam-se em posies intergnicas. O nmero de seqncias e o espaamento entre elas caracterstico de cada espcie e pode ser explorado para a deteco de bactrias fitopatognicas numa
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determinada amostra. A deteco realizada mediante PCR ou sondas complementares s seqncias REP, ERIC ou BOX (Louws et al., 1996). A tcnica de PCR tem se mostrado particularmente til na deteco de fitobactrias em sementes ou em rgos de propagao vegetativa. No entanto, a avaliao da sanidade de sementes utilizando-se a PCR apresenta uma grande limitao. Clulas inviveis ou isolados no patognicos podem ser detectados, apesar do fato que em ambas as situaes a doena no ocorreria. Para diminuir a probabilidade de se detectar isolados no patognicos mediante PCR tem se buscado seqncias que estejam presentes apenas nos isolados capazes de causar doenas. Pelo menos para o caso de determinadas fitobactrias resultados satisfatrios tm sido obtidos utilizando-se primers especficos para os genes do cluster (grupo) hrp. Tais genes so essenciais para o processo de infeco da planta hospedeira e j foram descritos para vrias bactrias gram-negativas como Ralstonia solanacearum, Erwinia amylovora, Xanthomonas campestris e Pseudomonas syringae (Alfano & Collmer, 1997).
Uso da PCR na deteco de fitovrus e virides

Fitovrus com genoma constitudo de DNA podem ser facilmente detectados mediante PCR. Para tanto, DNA total de plantas ou insetosvetores extrado e utilizado como molde numa reao de amplificao dirigida por primers especficos para determinadas regies do DNA viral. recomendvel a incluso de um controle positivo, que pode ser DNA extrado de uma planta sabidamente infectada ou um clone contendo uma determinada seqncia do vrus considerado. Deve ser preparado tambm um controle negativo relativo (DNA extrado de planta sadia) e um controle negativo absoluto (reao preparada sem DNA molde). Este ltimo tratamento indicar se algum componente utilizado na reao encontra-se contaminado com o DNA molde. At o momento pelo menos duas famlias (Geminiviridae e Caulimoviridae) e dois gneros (Badnavirus e Nanovirus) de fitovrus que apresentam DNA como material gentico foram descritos (Van Rogermortel et al., 2000). Em alguns casos, como os membros da famlia Geminiviridae e do gnero Badnavirus, a PCR consiste na principal tcnica de deteco. Para geminirrus normalmente se utilizam primers degenerados, capazes de direcionar a amplificao de seqncias do genoma de vrios membros da famlia. Para se determinar exatamente a qual espcie pertence o vrus, faz-se necessrio sequenciar o produto de PCR clonado (ligado a um plasmdeo) ou no). Fitovrus cujo genoma constitudo de RNA (grande maioria) e virides (todos) tambm podem ser detectados via PCR. No entanto, uma etapa

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adicional requerida. Consiste na obteno de uma seqncia de DNA complementar molcula de RNA alvo. Essa molcula denominada cDNA e sintetizada por uma DNA polimerase dependente de RNA ou transcriptase reversa. Uma vez obtida a molcula de cDNA, se adiciona os primers e a DNA polimerase dependente de DNA. O processo denominado RT-PCR. As transcriptases reversas comerciais so purificadas de vrus que infectam aves e mamferos (camundongos). Virides e vrus com genoma de RNA tambm podem ser detectados mediante hibridizao, porm os cuidados devem ser redobrados, pois o RNA muito menos estvel que o DNA. A principal preocupao evitar que enzimas que degradam RNA (RNases) atuem. Freqentemente, a membrana onde a amostra ser depositada previamente tratada com proteinase K, uma protease (enzima que degrada protenas, inclusive RNases).
Mtodos moleculares na deteco de fitoplasmas, espiroplasmas e fitonematides

Primers ou sondas especficas, que geralmente anelam/hibridizam em regies conservadas do DNA que codifica para os RNAs ribossomais ou em determinadas regies do DNA mitocondial (mtDNA) tm sido identificados e utilizados na deteco de fitoplasmas, espiroplasmas e fitonematides (Bedendo, 1999; Castagnone-Sereno et al., 1999; Webb et al., 1999; Barros et al., 2001; Szalanski et al., 2001). Alguns exemplos dessas aplicaes so listados na Tabela 12.2. Consideraes Finais A biotecnologia trouxe grandes benefcios para a Fitopatologia. Atualmente a utilizao de tcnicas moleculares na deteco de fitopatgenos rotina em vrios laboratrios do Brasil. No momento a PCR e a hibridizao de cidos nuclicos so as tcnicas mais utilizadas para esse propsito. Ambas as tcnicas apresentam vantagens considerveis em relao aos procedimentos convencionais de deteco. A reduo de custos de equipamentos e reagentes e o treinamento de tcnicos e pesquisadores nessas reas podero tornar o uso dessas tcnicas ainda mais difundidas. Outro fator que contribuir para isso ser a substituio de reagentes radioativos ou cacergenos utilzados atualmente por produtos que apresentem menor risco sade humana.

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13
CAROS DE FRUTEIRAS TROPICAIS: IMPORTNCIA ECONMICA, IDENTIFICAO E CONTROLE
MANOEL GUEDES CORRA GONDIM JNIOR JOS VARGAS DE OLIVEIRA

INTRODUO
A fruticultura no Nordeste brasileiro representa hoje uma excelente alternativa de mercado agrcola. Essa realidade se deve adaptao de inmeras fruteiras s condies de clima e solo da regio Nordeste, e principalmente, ao incremento das reas irrigadas (Gurovich, 1978). Somente na regio do Submdio So Francisco, h cerca de 100 mil ha de terras irrigadas, em condies de propiciar ao fruticultor altos nveis de produtividade (Gonzaga Neto & Soares, 1994). A posio de destaque que a atividade frutcola ocupa hoje na regio se deve, em grande parte, ao fato das condies locais permitirem a produo de frutas durante quase todo o ano, inclusive entre outubro e abril, perodo em que os mercados europeu, asitico e americano esto desabastecidos, o que favorece a exportao destes produtos (Codevasf, 1989). A perspectiva da fruticultura brasileira de conferir ao pas, nos prximos anos, a posio de um dos maiores exportadores mundiais de frutas frescas e processadas, tem estimulado os governos estaduais e federal a investirem nesta atividade. Isto tem dado suporte ao desenvolvimento potencial da fruticultura nordestina, com a aplicao de recursos que visam incorporar maior rea e tecnologia fruticultura tropical no Nordeste (Braga Sobrinho et al., 1998). Dentre as diversas fruteiras que so cultivadas no Nordeste, algumas tem se destacado com boas perspectivas para os mercados externo e interno, como o abacaxizeiro (Ananas comosus L.), aceroleira (Malpighia glabra L.), bananeira (Musa spp.), cajueiro (Anacardium occidentalis L.), citros (Citrus spp.), coqueiro (Cocos nucifera L.), goiabeira (Psidium guajava L.), gravioleira (Annona muricata L.), mamoeiro (Carica papaya L.), mangueira (Mangifera indica L.) e maracujazeiro (Passiflora spp.).
Michereff, S.J. & Barros, R. (Eds.) Proteo de Plantas na Agricultura Sustentvel. 2001. Recife, UFRPE

Direitos de edio reservados aos editores ISBN 85-87459-06-6

311

Apesar da alta tecnologia, normalmente utilizada nos cultivos, diversos problemas de ordem tecnolgica interferem no desenvolvimento sustentvel de um programa de fruticultura, como os relacionados s pragas. Os organismos que atingem este status, destacam-se como agentes altamente relevantes e limitantes no processo produtivo, no s por interferirem diretamente na qualidade final do produto, mas principalmente pelos severos requerimentos fitossanitrios exigidos por parte dos pases importadores, que utilizam estas restries inclusive, como artifcio para preservar sua economia e mercado. Os caros constituem um dos grupos de animais que mostra grande diversidade de formas, habitats e comportamento, sendo encontrados em quase todos os locais acessveis vida animal. Estima-se que existam pelo menos cerca de 500 mil espcies de caros no mundo. Contudo, apenas cerca de 30 mil espcies so atualmente conhecidas. Portanto, o conhecimento sobre a diversidade de espcies de caros ainda bastante incipiente (Flechtmann, 1983). notvel os problemas de importncia econmica causados por caros em plantas cultivadas (Doreste, 1988). Entre as culturas afetadas por infestaes de caros-pragas, pode-se destacar as fruteiras, devido severidade dos danos causados nestas plantas (Yaninek & Moraes, 1991). Apesar da importncia dos caros para as fruteiras, a fauna destes artrpodes pouco conhecida no Brasil, no s dos caros fitfagos (Flechtmann, 1983), como tambm a de caros predadores (Moraes et al., 1986).

MORFOLOGIA DE CAROS
caros so organismos pertencentes ao Filo Arthropoda, Subfilo Chelicerata, Classe Arachnida e Subclasse Acari. So artrpodes que geralmente apresentam quatro pares de pernas nas fases ps-larvais, ausncia de segmentao primria, apndices articulados e esqueleto externo (Flechtmann, 1975). Apesar de ser a Acarologia uma cincia relativamente recente, aproximadamente 2.000 pessoas hoje se dedicam a este estudo em todo mundo. Apenas no Brasil, cerca de 60 pesquisadores conduzem algum tipo de investigao acarolgica. Entretanto, a maioria destes pesquisadores se dedica ao estudo da Acarologia Aplicada, e poucos se interessam tambm pela Taxonomia ou outros aspectos de estudos de diversidade biolgica (Flechtmann & Moraes, 1999).

Superfamlia Eriophyoidea

312

Os representantes desta Superfamlia medem de 0,15 a 0,25 mm de comprimento e apresentam o gnatossoma geralmente pequeno, em relao ou resto do corpo, com estiletes curtos, exceto em Diptilomiopidae. Apresentam aspecto vermiforme e colorao variando do branco-leitoso ao alaranjado-claro. Tanto os estgios de ovo como os estgios ativos podem ser cobertos por cerosidade pulverulenta, que torna mais difcil ainda sua identificao, alm do seu tamanho diminuto. Muitas espcies se desenvolvem no interior de galhas, outras em meio a grande quantidade de pilosidade da planta (erinose) e outros em folhas, frutos e flores. Esta superfamlia formada por trs famlias (Diptilomiopidae, Eriophyidae e Phytoptidae), com aproximadamente 3.100 espcies conhecidas no mundo. Caracteristicamente apresentam alta especificidade em relao a planta hospedeira. A quase totalidade das espcies conhecidas ocorre em plantas pertencentes a uma nica famlia, gnero ou at mesmo espcie de planta. Apesar do tamanho diminuto, da difcil identificao e do pequeno nmero de especialistas deste grupo no mundo, a alta especificidade dos eriofdeos facilita sua identificao. Estes caros passam pelas fases de ovo, larva, ninfa e adulto, tendo em todos estgios ativos apenas dois pares de pernas (Figura 13.1). Os eriofdeos so pragas importantes de diversas culturas inclusive as fruteiras tropicais, sendo conhecidas mundialmente espcies que ocorrem em abacaxizeiro, aceroleira, anonceas, bananeira, cajueiro, citros, goiabeira, mamoeiro, mangueira, maracujazeiro e coqueiro. Nesta ltima, a espcie Aceria guerreronis Keifer, uma das pragas mais importantes.

Figura 13.1 Superfamlia Eriophyoidea.

313

Famlia Tarsonemidae
So caros vtreo-brilhantes, fmeas com corpo ovalado, dorso convexo, com os dois primeiros pares de pernas bem separados dos dois ltimos. As pernas IV esto constitudas de trs artculos nas fmeas, terminadas em duas longas setas. Nos machos, as pernas IV tm trs ou quatro artculos e so transformadas em rgos para fixao durante a cpula. O dimorfsmo sexual acentuado, tendo as fmeas formato ovalado e os machos, menores com o opistossoma afilado. Os tarsonemdeos apresentam um pronunciado desenvolvimento dos apdemas na regio ventral do corpo (Figura 13.2). Passam pelos estgios de ovo, larva, pupa e adulto. Os ovos so brancoprola, ovides e opacos; as larvas, de colorao branco-opaca, com opistossoma bastante dilatado, podendo nesta fase j se distinguir os sexos, de vez que, as larvas dos machos so menores e apresentam o opistossoma mais proeminente. A pupa apresenta-se afilada para ambas as extremidades. Entre as espcies de importncia agrcola destaca-se o caro branco ou tropical, Polyphagotarsonemus latus (Banks). Trata-se de uma praga polfaga e cosmopolita, ocorrendo em diversas culturas de importncia econmica como algodoeiro, feijoeiro, pimento e tambm em fruteiras como acerola, citros, graviola, mamo e maracuj.

Fmea

Macho

Figura 13.2 Famlia Tarsonemidae, Polyphagotarsonemus latus Banks. (Fonte: Flechtmann, 1983).

Famlia Tetranychidae
314

Compreende caros de colorao varivel, de branco-amarelado a verde e vermelho, tegumento delicado e sem escudos, medindo cerca de 400 m de comprimento. No gnatossoma as quelceras so transformadas em estiletes longos e os palpos apresentam uma estrutura unciforme (complexo unhadedo). Os tarsos terminam geralmente por unhas e empdio. O escudo genital da fmea caracterstico, sendo circundado por uma rea de tegumento tipicamente enrugado (Figura 13.3). Os machos apresentam edeago tpico. Em seu desenvolvimento, os tetraniqudeos passam pelos estgios de ovo, larva, protoninfa, deutoninfa e adulto. Entre os estgios ativos ocorrem estgios quiescentes denominados protocrislida, deutocrislida e telocrislida. As fmeas da maioria das espcies tecem aprecivel quantidade de teia, recobrindo parcialmente a superfcie das folhas. Podem ser encontrados tanto na face superior como inferior das folhas. Muitas espcies so polfagas e importantes pragas em fruteiras como Tetranychus urticae Koch, Tetranychus desertorum Banks, Tetranychus neocaledonicus Andr e Tetranychus mexicanus McGregor.

Figura 13.3 Famlia Tetranychidae (Fonte: Flechtmann, 1983).

Famlia Tenuipalpidae

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Os representantes desta famlia so conhecidos como caros planos, medindo entre 250 a 400 m. Tm colorao geralmente vermelha, pernas curtas, aneladas, palpos simples formados de 1 a 5 segmentos. A abertura genital transversal e pode ser guarnecida por um escudo. O corpo , via de regra, ornamentado por estrias ou reticulaes. As setas podem ser simples ou frequentemente ornamentadas (Figura 13.4). Durante o seu desenvolvimento, os tenuipalpdeos passam pelos estgios de ovo, larva, protocrislida, protoninfa, deutocrislida, deutoninfa, telocrislida e adulto. Entre as espcies de importncia agrcola destaca-se o caro da leprose dos citrus, Brevipalpus phoenicis Geijskes, sendo uma praga polfaga e cosmopolita. uma das principais pragas dos citrus, sendo responsvel por grandes perdas nesta cultura.

Figura 13.4 Famlia Tenuipalpidae (Fonte: Flechtmann, 1983).

PREPARAO E MONTAGEM DE CAROS

316

O estudo morfolgico de caros realizado, normalmente, com o auxlio de microscpio ptico, atravs de montagens em lminas. O caro inicialmente coletado e preservado em lquidos, como lccol 70%, AGA ou Licor de Keifer (Tabela 13.1). Algumas espcies necessitam de clarificao antes da montagem em lmina, que feita com lquido de Nesbitt. Em seguida, o caro montado em uma lmina com meio de Hoyer ou Berlese Modificado, especfico para Eriophyoidea. O caro deve ser distendido dorso-ventralmente no centro da lmina e depositada uma gota de meio e uma lamnula sobre o mesmo. A lmina deve ser seca em estufa a 50oC por uma semana e depois lutada com esmalte ou verniz cristal e finalmente etiquetada (Figura 13.5). Tabela 13.1 Meios de montagem e clarificao utilizados na acarologia.
Hoyer
Composio gua destilada Goma Arbica Hidrato de Cloral Glicerina Quantidade 40 ml 30 g 200 g 20 ml

Licor de Keifer
Composio lcool Isoproplico gua destilada Sorbitol Iodo Metlico Iodeto de Potssio Quantidade 20 ml 60 ml 30 g Mnimo Mnimo Quantidade 240 ml 30 ml 30 ml 23.8 g

Berlese Modificado
Composio gua Quantidade 1 ml

Lquido de Nesbitt
Composio Hidrato de Cloral gua Destilada cido Clordrico Quantidade 40 g 25 ml 25 ml

AGA
Composio Etanol cido A. Glacial Glicerina Sorbitol

Glicerina 1 ml Sorbitol 5g BDTA 3g (Misturar estes ingredientes e adicionar a segunda mistura) Composio Quantidade gua 7 ml Glicerina 4 ml cido A. Glacial 3 ml Hidrato de Cloral 70 g

Recife- PE 28.VI.2000 Ex: Cocos nucifera M.G.C. GONDIM Jr.

ACTINEDIDA PHYTOPTIDAE Retracrus johnstoni

Figura 13.5 Esquema de uma lmina montada.

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CHAVE PARA IDENTIFICAO DE FAMLIAS DE CAROS FITFAGOS

1. 1 2. Corpo anelado, vermiforme com dois pares de pernas nas fases imaturas e adulta ................................................................ Superfamlia Eriophyoidea Corpo no como acima, adultos geralmente com quatro pares de pernas .......... Gnatossoma largo em relao ao corpo; estiletes quelicerais longos e abruptamente dobrados na base, empdio normalmente fendido ao meio .............................................................................. Famlia Diptilomiopidae Gnatossoma estreito em relao ao corpo; estiletes quelicerais curtos, empdio normalmente no fendido ................................................................. Escudo prodorsal com um, trs, quatro ou cinco setas, sendo uma ou trs inseridas anteriormente; tbia anterior com solendeo. Eriofdeos primitivos geralmente associados a conferas e monocotiledneas; poucas espcies em outras plantas ............................................................... Famlia Phytoptidae Escudo prodorsal sem seta ou com duas setas (Sc), inseridas na parte posterior do escudo; tbia anterior sem solenideo .......... Famlia Eriophyidae Gnatossoma geralmente de contorno circular, com minsculos palpos; quelceras pequenas estiletiformes; rgos pseudoestigmticos presentes; perna IV da fmea com duas setas terminais flageladas; macho com a perna IV modificada para cpula ........................................ Famlia Tarsonemidae Gnatossoma varivel; palpos desenvolvidos; quelceras em estilete alongado, originando-se de um estilforo ....................................................................... Palpo simples; abertura genital transversal, com ou sem escudo ................................................................................. Famlia Tenuipalpidae Tbia do palpo com uma robusta unha, ficando o tarso deslocado lateralmente (unha-dedo); abertura genital transversal, guarnecida por um escudo tipicamente enrugado .................................... Famlia Tetranychidae 2 4

2 3.

3 4.

4 5. 5

CHAVE DE IDENTIFICAO PARA GNEROS E ESPCIES DE TETRANYCHIDAE EM FRUTEIRAS TROPICAIS

1. Empdio, quando presente, em forma de garra; tarso I apenas com setas associadas ou com um par de setas dplices; quando h dois pares de setas dplices no tarso I no h setas dplices no tarso II ......................................... Empdio presente; tarso I com dois pares de setas duplices e tarso II com um par ................................................................................................................. Dois pares de setas anais .............................................. Eutetranychus banksi Um par de setas anais ...................................................... Aponychus schultzi Dois pares de setas para-anais......................................................................... Um par de setas para-anais ............................................................................. Empdio to longo quanto os pelos proximoventrais ............ Panonychus citri Empdio mais curto que os pelos proximoventrais .... Allonychus braziliensis Empdio em forma de garra (unciforme), setas duplices do tarso I distais e adjacentes ................................................ Oligonychus spp. (ver Figura 13.6) Empdio fendido distalmente, setas duplices do tarso I bem separadas ................................................................. Tetranychus spp. (ver Figura 13.6)

2 3

1 2. 2 3. 3 4. 4 5. 5

4 5

318

Figura 13.6 Edeagos de Tetranychidae. A - Oligonychus yothersi; B Oligonychus biharensis; C Oligonychus psidii; D Tetranychus neocaledonicus; E - Tetranychus mexicanus; F - Tetranychus desertorum; G - Tetranychus urticae; H Tetranychus abacae.

CHAVE DE IDENTIFICAO DE GNEROS E ESPCIES DE TENUIPALPIDAE EM FRUTEIRAS TROPICAIS

1. 1 2. 2 3. 3 Palpo com quatro segmentos, corpo com formato oval ................. Brevipalpus Palpo com trs segmentos, corpo com formato elptico .................................... Tarso II da fmea adulta com dois solendeos (Figura 13.7B) ...... B. phoenicis Tarso II da fmea adulta com apenas um solendeo (Figura 13.7A) .................................................................................................... B. obovatus Histerossoma com trs pares de setas dorsocentrais; podossoma largo e opistossoma estreito; escudo rostral bem desenvolvido ................ Tenuipalpus Histerossoma com dois pares de setas dorsocentrais; escudo rostral ausente; corpo alongado ................................................. Dolichotetranychus 2 3

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Figura 13.7 Tarso de Brevipalpus obovatus Donnadieu, 1875 (A) e Brevipalpus phoenicis (Geijskes, 1939) (B), mostrando os solendeos (Fonte: Denmark, 1968).

CAROS DE FRUTEIRAS TROPICAIS

As fruteiras so plantas geralmente perenes ou semi-perenes, que constituem agroecossistemas mais estveis se comparados aos das culturas anuais. Em funo disto, geralmente promovem condies mais favorveis aos inimigos naturais dos caros. Talvez por isto, seja menos frequente atingirem o status de praga nestas culturas, muito embora tenham-se exemplos importantes como o caro da leprose e o da falsa ferrugem em citros, e o caro da necrose do fruto em coqueiro. A seguir so citadas as principais fruteiras tropicais para o Estado de Pernambuco, as espcies de caros que nelas ocorrem e os danos causados.

Abacaxi
caro plano do abacaxizeiro - Dolichotetranychus floridanus Banks, 1900 (Tenuipalpidae): este caro foi relatado em diversas regies produtoras do mundo, de colorao alaranjada, medindo 0,3 mm de comprimento (Figura 13.8). Ocorre na base das folhas, na regio aclorofilada, causando leses necrticas. As folhas apresentam as extremidades amareladas e murchas. Sua importncia para a cultura ainda no foi bem esclarecida,

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principalmente pelo fato de ocorrer geralmente associado a cochonilha Dysmicoccus brevipes (Hemiptera: Sternorrhyncha), que constitui uma praga reconhecidamente importante para a cultura e cujos danos iniciais assemelham-se aos causados pelo caro. Tarsonemdeo dos frutos - Steneotarsonemus ananas Tryon, 1898 (Tarsonemidae): caro de colorao branco-amarelada, medindo 0,2 mm de comprimento. Ocorre nas folhas e frutos, embora mais encontrado neste ltimo, causando deformao da coroa do mesmo (Figura 13.9).

Acerola
Eutetranychus banksi McGregor, 1914 (Tetranychidae): esta espcie ocorre em diversos pases da Amrica, desde E.U.A at a Argentina, inclusive Brasil (Figura 13.10). Tem diversas espcies de plantas hospedeiras como Acacia, Acrocomia sp., algodo, caf, citros, Ficus spp., mamoeiro, mandioca, seringueira, urucum (Bixa orellana) e diversas outras plantas. Este caro tem sido verificado na face superior das folhas de acerola, no Recife (Campus da UFRPE), causando pontuaes clorticas.

Fmea

Macho

Figura 13.8 Dolichotetranychus floridanus Banks, 1900 (Fonte: Baker & Pritchard, 1956).

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Figura 13.9 Steneotarsonemus ananas Tryon, 1898. (A) macho dorsal; (B) macho ventral (Fonte: Beer, 1954).

Figura 13.10 Eutetranychus banksi McGregor, 1914. (A) macho; (B) fmea. (Fonte: Pritchard & Baker, 1955).

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Tetranychus neocaledonicus Andr, 1933 (Tetranychidae): este caro relatado durante o perodo seco do ano, causando descolorao nas folhas, que ficam salpicadas de manchas brancas. A chuva lava os caros das folhas. (Flechtmann, 1983). (Figura 13.6-D). Polyphagotarsonemus latus Banks, 1904 (Tarsonemidae): este caro tem sido observado nas folhas novas e brotaes, causando bronzeamento na face inferior das folhas (Figura 13.2). Ocorrem durante o incio do perodo chuvoso, sendo encontrado na regio metropolitana do Recife (Campus da UFRPE). Brevipalpus phoenicis Geijskes, 1939 (Tenuipalpidae): tem sido observado nas folhas e brotos da aceroleira (Figura 13.4). Ocorre em baixas infestaes, aparentemente no causando danos.

Anonceas
Aculops flechtmanni Keifer, 1972 (Eriophyidae): na fruta-do-conde causa bronzeamento nas ptalas, podendo haver queda de flores (Figura 13.11). Nos frutos novos causa reas bronzeadas que passam a suberosas (Flechtmann, 1983).

Figura 13.11 Aculops flechtmanni Keifer, 1972 (Fonte: Keifer, 1972).

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Brevipalpus phoenicis Geijskes, 1939 (Tenuipalpidae): este caro ocorre em frutos de graviola. Tem sido encontrado no Estado de Pernambuco em altas infestaes nos frutos desta anoncea, que se apresentam bronzeados externamente (Figura 13.4).

Bananeira
caros vermelhos - Tetranychus abacae Baker & Pritchard, 1962 (Figura 6-H) e Tetranychus desertorum Banks, 1900 (Tetranychidae) (Figura 13.6-F).: ocorrem ocasionalmente nas folhas da bananeira, que ficam totalmente ou parcialmente revestidas de grande quantidade de teia (Flechtmann, 1983). T. abacae tem sido verificado no Recife em altas infestaes, causando clorose e secamento de folhas em bananeira e Heliconia spp. ).

Cajueiro
caro plano do cajueiro - Tenuipalpus anacardii De Leon, 1965 (Tenuipalpidae): so caros verde-amarelados, achatados, medindo aproximadamente 0,4 mm de comprimento. Apresentam as setas do idiossoma ornamentadas. Habitam a face inferior das folhas de cajueiro, atingindo altas populaes durante a estao seca, contudo sua importncia ainda no foi avaliada. Eriofdeos das folhas - Mesalox abathus Keifer, 1969 (Eriophyidae) (Figura 13.12A) e Rhynacus globosus Keifer, 1969 (Diptilomiopidae) (Figura 13.12B): pouco se sabe sobre estes caros. Apesar de R. globosus ser encontrado em altas infestaoes em folhas de cajueiro na regio metropolitana do Recife, aparentemente no causa danos econmicos a cultura. Eriofdeo das flores - Aceria rossetonis Keifer, 1969 (Eriophyidae): ocorre nas inflorescncias do cajueiro (Figura 13.13), provocando clorose nas spalas e pednculo floral, queda de flores e secamento da inflorescncia (Flechtmann, 1983).

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Figura 13.12 (A) Mesalox abathus Keifer, 1969 (Fonte: Keifer, 1969b); (B) Rhynacus globosus Keifer, 1969 (Fonte: Keifer, 1969a).

Figura 13.13 Aceria rossetonis Keifer, 1969 (Fonte: Keifer, 1969a).

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Citros
caro da falsa ferrugem - Phyllocoptruta oleivora Ashmead, 1879 (Eriophyidae): vermiforme, colorao amarelada, medindo 0,15 mm de comprimento (Figura 13.14A). Desenvolvem colnias nas folhas, ramos e principalmente em frutos novos, onde causa bronzeamento, (laranja mulata). Constitui uma das mais importantes pragas dos citros. caro das gemas - Eriophyes sheldoni Ewing, 1937 (Eriophyidae): este caro encontrado nas gemas, abrigando-se entre as folhas novas (Figura 13.14B). Causa deformao nos brotos e frutos novos (Flechtmann, 1983).

Figura 13.14 Phyllocoptruta oleivora (Ashmead, 1879) (A). Eriophyes sheldoni (Ewing, 1937); (B) (Fonte: Baker et al., 1996). Tegolophus brunneus Flechtmann, 1999 (Eriophyidae): este caro foi encontrado e descrito de folhas e frutos coletados no Estado de So Paulo. Causa bronzeamento nas folhas e frutos (Figura 13.15).

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Figura

13.15

Tegolophus brunneus (Flechtmann, 1999).

Flechtmann,

1999

(Fonte:

caros planos - Brevipalpus phoenicis Geijskes, 1939 e Brevipalpus obovatus Donnadieu, 1875 (Tenuipalpidae) (Figura 13.7): atacam as gemas que ficam com aspecto enrugado e podem apresentar superbrotamento. Quando atacam hastes novas podem causar fendilhamento no cortex, e consequente morte dos tecidos. As folhas atacadas apresentam manchas clorticas de aspecto circular, que podem ser confundidos com sintomas da leprose. Em altas infestaes pode acarretar queda de folhas. Os frutos apresentam manchas semelhantes as da folha e podem associar-se a leses da leprose. uma das principais pragas dos citros (Flechtmann, 1983). Tetranychus mexicanus McGregor, 1950 (Tetranychidae) (Figura 13.6E): apresentam colorao varivel, vermelho alaranjado intenso, quando se desenvolvem sobre folhas de lima e verde-pardacento com pontuaes pretas, quando se desenvolvem em laranjas. As formas jovens so geralmente esverdeadas com manchas escuras. Desenvolve-se geralmente na face inferior das folhas mais novas, as quais tornam-se levemente curvadas
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para baixo. A face superior apresenta pontuaes clorticas, que passam a bronzeadas (Flechtmann, 1983). Panonychus citri McGregor, 1916 (Tetranychidae): a fmea deste caro ovalada, medindo cerca de 0,4 mm de comprimento (Figura 13.16). Sua colorao vermelha intensa, com longas setas branco-rosadas projetando-se de robustos tubrculos dorsais brancos. Ataca os ramos mais novos, folhas e frutos, causando um prateamento que evolui para bronzeamento e desfolha da planta (Flechtmann, 1983).

Figura 13.16 Panonychus citri McGregor, 1916 (fmea) (Fonte: Pritchard & Baker, 1955). caro branco - Polyphagotarsonemus latus Banks, 1904 (Tarsonemidae): ocorre principalmente em mudas no viveiro, atacando as gemas e folhas novas causando deformaes. Em limes causa prateamento (Figura 13.2).

Coqueiro
caro da necrose do olho do coqueiro - Aceria guerreronis Keifer, 1965 (Eriophyidae): este caro foi encontrado no Brasil em 1965 no Estado do Rio de Janeiro, causando necrose em frutos, e logo depois no Estado de Pernambuco causando a morte de mudas em viveiro. Encontra-se disperso na Amrica, frica e recentemente foi introduzido na sia, onde tem provocado grandes prejuzos para cocoicultura daquele continente. Este caro se
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desenvolve sob as brcteas dos frutos novos e em formao, causando inicialmente clorose na epiderme dos frutos e posteriormente necrose (Figura 13.17). Os caros no so encontrados nos tecidos necrosados e sim sob as brcteas. Parte dos frutos caem e os que permanecem na planta ficam deformados, e com menor quantidade de albmem lquido e slido. considerado uma das mais importantes pragas do coqueiro do Estado de Pernambuco. Em mudas no viveiro, ocorre entre os fololos da flecha, causando necrose, chegando a destruir a gema apical, e consequentemente morte da muda. Figura 13.17 Aceria guerreronis Keifer, 1965 (Fonte: Keifer, 1965a).

Retracrus jonhstoni Keifer, 1965 (Phytoptidae): este caro foi descrito de uma palmeira (Chamaedorea sp.) no Mxico e relatado no Brasil em coqueiros no Estado de Sergipe e em jeriv (Syagrus romanzoffiana) no Estado de So Paulo (Santana et al., 1994) (Figura 13.18). Em coqueiro causa leses amareladas nas folhas semelhantes aos sintomas de deficincia de potssio. fcil sua identificao pelo fato de todos as formas ativas e tambm os ovos serem recobertos por cerosidade. Tem sido encontrado em diversos municpios do Estado de Pernambuco, como Igarassu, Itamarac e Recife.

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Figura 13.18 Retracrus jonhstoni Keifer, 1965 (Fonte: Keifer, 1965b).

Amrineus cocofolius Flechtmann, 1994 (Eriophyidae): este caro foi descrito a partir de material coletado em coqueiros no municpio de Jales-SP. Ocorre nas folhas do coqueiro, causando clorose e necrose (Figura 13.19). Ao contrrio da espcie anterior no apresenta o corpo coberto por cerosidade. caros do gnero Notostrix - Notostrix attenuata Keifer, 1963 (Figura 13.20B), Notostrix jamaicae Keifer, 1970 (Figura 13.20A) e Notostrix nasutiformes Gondim Jr., 2000: vrias espcies deste gnero ocorrem em palmeiras no Brasil. Estes caros so caractersticos por secretarem cera lateralmente ao corpo, em forma de placas. Aparentemente no causam danos s plantas e no so verificados em altas infestaes. Steneotarsonemus furcatus (Tarsonemidae): este caro foi encontrado em frutos do coqueiro no municpio de Igarassu-PE, associado a A. guerreronis. Os frutos infestados apresentam leses necrticas semelhantes aos danos causados pelo eriofdeo (Figura 13.21).

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Figura 13.19 Amrineus cocofolius Flechtmann, 1994 (Eriophyidae) (Fonte: Flechtmann, 1994).

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Figura 13.20 Notostrix jamaicae Keifer, 1970 (A) (Fonte: Keifer, 1970) e Notostrix attenuata Keifer, 1963; (B) (Fonte: Keifer, 1963).

Figura 13.21 Tarso do macho de Steneotarsonemus furcatus DeLeon (Tarsonemidae) (Fonte: Jeppson et al., 1975). Tetranychus mexicanus McGregor, 1950 (Tetranychidae): este caro frequentemente encontrado nas folhas do coqueiro, entretanto no causam aparentemente danos econmicos (Figura 13.6E). Brevipalpus phoenicis Geijskes, 1939 (Tenuipalpidae): esta espcie frequentemente encontrada nas folhas do coqueiro, contudo no causa aparentemente qualquer tipo de dano nesta planta (Figura 13.4).

Goiabeira
Oligonychus psidii Flechtmann, 1967 (Tetranychidae): esta espcie foi encontrada no campus da UFRPE, em folhas de goiabeira, em baixas infestaes, sem apresentar aparentemente qualquer dano econmico na planta. Segundo Flechtmann (1983), esta espcie pode causar bronzeamento e queda prematura de folhas (Figura 13.6C). Tegonotus guavae Boczek, 1960 (Eriophyidae): segundo Flechtmann (1983), este caro ocorre em folhas de goiabeira, podendo causar bronzeamento (Figura 13.22).

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. Figura 13.22 Tegonotus guavae (Boczek, 1960) (Fonte: Baker et al., 1996).

Mamoeiro
caro branco - Polyphagotarsonemus latus Banks, 1904 (Tarsonemidae): a praga mais importante do mamoeiro no Nordeste (Figura 13.2). Desenvolve-se nas folhas novas do ponteiro causando malformao, tornando as folhas pequenas e a copa da planta reduzida. Os danos se assemelham aos sintomas causados por viroses e frequentemente so confundidos. Segundo Flechtmann (1983), as plantas podem morrer com total reduo da copa e em outras vezes se recuperar. Eutetranychus banksi McGregor, 1944 (Tetranychidae): este caro de colorao verde escuro, sendo encontrado na face superior das folhas e no tece teia (Figura 13.10). Tem sido encontrado no campus da UFRPE, em altas infestaes, causando pontuaes clorticas nas folhas do mamoeiro, principalmente na estao seca. As chuvas reduzem sua populao. Aponychus schultzi Blanchard, 1940 (Tetranychidae): as fmeas deste caro ocorrem nas folhas mais velhas da planta, podendo infestar ambas as superfcies e no tecem teia.

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Tetranychus urticae Koch, 1836 (Figura 13.6G), Tetranychus desertorum Banks, 1900 (Tetranychidae) (Figura 13.6F) e Tetranychus mexicanus (McGregor, 1950) (Figura 13.6E): os caros do gnero Tetranychus ocorrem no baixeiro da planta, causando clorose e necrose nas folhas. As fmeas de T. urticae so verdes com manchas escuras no dorso, enquanto as fmeas de T. desertorum e T. mexicanus so vermelhas.

Mangueira
Aceria mangiferae Sayed, 1946 (Eriophyidae): este caro encontrado nos pontos de crescimento da planta e nas inflorescncias, so vermiformes e medem cerca de 150 m (Figura 13.23). Causam a morte das gemas terminais e posterior superbrotamento. Nas inflorescncias causam malformao. Pesquisas recentes afirmam que a malformao das inflorescncias e brotos so causadas por fungos do gnero Fusarium e que os caros podem estar envolvidos na disseminao do fungo. Cysaberoptus kenyae Keifer, 1966 (Eriophyidae): esta espcie segundo Flechtmann (1983) desenvolve hbitos minadores nas folhas. Rosseto (1972) no observou a ocorrncia de danos. Navia & Flechtmann (2000) verificaram a ocorrncia de cerosidade sobre estes caros (Figura 13.24). Neocalacarus mangiferae Channabasavanna, 1966 (Eriophyidae): este caro foi descrito de material coletado em Bangalore na ndia. Recentemente foi coletado em folhas de mangueira em Braslia (Figura 13.25A), aparentemente sem causar danos econmicos (Nvia & Flechtmann, 2000).

Figura 13.23 Aceria mangiferae (Sayed, 1946) (Eriophyidae) (Fonte: Hong & Zhang, 1996).

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Figura 13.24 Cysaberoptus kenyae Keifer, 1966 (Eriophyidae) (Fonte: Hong & Zhang, 1996).

Figura 13.25 Neocalacarus mangiferae Channabasavanna, 1966 (A); Tegonotus mangiferae Keifer, 1946 (B). (Fonte: Nvia & Flechtmann, 2000). Tegonotus mangiferae Keifer, 1946 (Eriophyidae): este caro foi descrito de material coletado no Hava e recentemente encontrado em folhas de mangueira em Braslia (Figura 13.25B), aparentemente sem causar danos econmicos (Nvia & Flechtmann, 2000). Tetraniqudeos - Oligonychus bihariensis Hirst, 1925 (Figura 13.6B), Oligonychus yothersi McGregor, 1914 (Figura 13.6A) e Allonychus brasiliensis McGregor, 1950: os adultos das espcies de Oligonychus so alaranjados com manchas escuras no dorso e ocorrem na face superior das folhas tecendo pequena quantidade de teia. As folhas atacadas apresentam-se bronzeadas. A. brasiliensis causa tambm prateamento na face inferior das folhas (Flechtmann, 1983).

Maracujazeiro
Brevipalpus phoenicis Geijskes, 1939 (Tenuipalpidae): este caro encontrado geralmente na face inferior das folhas e nos ramos (Figura 13.4). Em altas infestaes podem causar clorose, secamento e queda de folhas. Em

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seguida podem atacar os ramos causando progressivamente a sua morte (Flechtmann, 1983). Polyphagotarsonemus latus Kanks, 1904 (Tarsonemidae): ocorrem no ponteiro da planta causando deformaes (Figura 13.2), colorao vtrea nas folhas, que no se desenvolvem e podem ficar bronzeadas e cair (Flechtmann, 1983). Tetranychus mexicanus McGregor, 1950 (Figura 13.6E) e Tetranychus desertorum Banks, 1900 (Figura 13.6F) (Tetranychidae): causam manchas brancas ou prateadas na face inferior das folhas, seguido de secamento e queda. A face superior pode apresentar-se bronzeada (Flechtmann, 1983).

MTODOS DE CONTROLE DE CAROS

Muitas espcies de caros so consideradas pragas de grande expresso econmica em diferentes cultivos agrcolas. Deste modo, necessitam de serem controladas para que a sua populao seja mantida abaixo do nvel de dano econmico. A sua ocorrncia nas plantas est relacionada com o uso inadequado de agrotxicos, provocando a eliminao de predadores e competidores, a sua ressurgncia, a mudana de condio de praga primria para praga secundria e a resistncia a acaricidas; introduo de novas cultivares; ausncia ou pouca eficincia de inimigos naturais; utilizao do monocultivo; estado nutricional da planta hospedeira e fatores climticos.

Controle cultural
Ainda existem poucos estudos sobre o controle cultural de caros fitfagos, principalmente nos diversos agroecossitemas do Brasil. O controle cultural tem a finalidade de impedir a colonizao da cultura pelas pragas; criar condies biticas adversas que reduzam a sobrevivncia de indivduos ou da populao da praga; modificar o cultivo, de modo a reduzir a infestao da praga e intensificar o efeito de inimigos naturais, atravs da manipulao do ambiente. A poca de plantio pode influenciar na infestao de caros fitfagos. Veiga (1985) observou que a mandioca plantada no incio da estao chuvosa no Serto de Pernambuco, Brasil apresentava uma menor infestao e reduo de perdas na produtividade causadas pelo caro verde, Mononychellus tanajoa (Bondar). Quando havia um atraso no plantio, as perdas foram se intensificando, pois na poca crtica do ataque da praga

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(poca seca), as plantas por apresentarem um menor desenvolvimento vegetativo, eram mais vulnerveis ao ataque desta praga. O uso da grade em pomares ctricos favorece a infestao de caros fitfagos, pelo fato da poeira produzida provocar efeito abrasivo, aumentando a perda dgua pela cutcula dos caros predadores. A poeira tambm estimula uma maior produo de teia, dificultando o encontro da presa pelo predador (Gravena, 1992). Estudos desenvolvidos com o caro verde da mandioca demonstraram que a presena de faixas alternadas de vegetao nativa em plantios de mandioca provocaram reduo na densidade populao desta praga, em relao cultura mantida no limpo. No entanto, a densidade populacional de caros predadores fitosedeos no foi aumentada (Gondim Jr., 1992). Em pomares ctricos do Estado de So Paulo, a cobertura verde com mentrasto ou cambar nas entrelinhas reduz a infestao dos caros da ferrugem, P. oleivora e da leprose, B. phoenicis, em relao a plantas mantidas no limpo, devido ao plen e nctar dessas plantas servirem de alimento alternativo para os fitosedeos, Euseius citrifolius Denmark & Muma e Iphiseiodes zuluagai Denmark & Muma (Gravena, 1992). A nutrio da planta hospedeira tambm influi na infestao de caros fitfagos. Observou-se uma relao inversa entre os teores de N+P+K e a infestao do caro verde em mandioca, e direta entre os nveis de nutrientes e a produo de matria seca. Isto significa que as plantas de mandioca bem nutridas so mais tolerantes infestao da praga (Farias et. al., 1979). Em tomateiro, o aumento dos teores de N e P provocaram um aumento na infestao do microcaro, Aculops lycopersici (Massee). A infestao tambm aumentou com a elevao de P, na presena de 120 Kg de N (Moreira et al., 1999). O excesso ou deficincia de nutrientes pode afetar o tomateiro, devido a uma alterao no metabolismo da planta. Os nutrientes inibem a proteossntese, e deste modo, as plantas passam a produzir uma maior quantidade de substncias solveis e aminocidos livres, favorecendo o desenvolvimento dos caros (Chabbousou, 1987). O aumento do teor de nitrognio em plantas de algodoeiro causou uma reduo significativa na durao do perodo de pr-oviposio e um aumento no perodo de postura e no nmero de ovos/fmea do caro rajado, T. urticae. A adio do enxofre atravs de sulfato de amnio no alterou a fecundidade da praga (Maia & Bussoli, 1992). A precipitao pluviomtrica reduz a infestao de caros devido a ao mecnica das gotas de chuva, e tambm favorece a infestao de fungos parasitas.

Controle biolgico
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O controle biolgico uma ttica muito empregada no manejo de populao de pragas. Do ponto de vista ecolgico faz parte do controle natural, que consiste na regulao da populao de um organismo dentro de certos limites, superior e inferior, por qualquer combinao de fatores abiticos (temperatura, precipitao pluviomtrica, umidade relativa, etc) e biticos (competio intra e interespecfica por alimento, lugares para a oviposio, refgio, etc). Em um agroecossistema, se o nvel de equilbrio de um organismo se situa acima do nvel de dano econmico, medidas devem ser tomadas para reverter a posio relativa desses nveis. As medidas que procuram intensificar a atividade dos inimigos naturais esto enquadradas no controle biolgico aplicado, que pode ser conseguido atravs do incremento, conservao ou introduo de inimigos naturais exticos (Moraes, 1991). Os inimigos naturais de caros fitfagos so os patgenos, predadores e parasitas, que tm como funo manter as populaes destes abaixo do nvel de dano econmico. Patgenos vrus, fungos, bactrias, riqutzias, protozorios, etc mantm relaes com os caros, resultando em parasitismo ou forsia. Dentre os patgenos, os fungos sos os mais promissores, principalmente os dos gneros Hirsutella, Neozygites e Beauveria. H. thompsonii tem sido mencionado infectando o caro da ferrugem dos citros, em condies de temperatura mais elevada e umidade relativa acima de 90%. tambm muito promissor para o controle do caro da necrose do coqueiro, A. guerreronis. Neozygites sp. infecta naturalmente o caro verde da mandioca no Nordeste do Brasil, principalmente durante a estao chuvosa. Em Goiana, PE, a infeco foi de 86% em mandioca mantida no limpo e de 92% em reas com faixas alternadas de vegetao nativa (Gondim Jr., 1992) Predadores aranhas, insetos e caros so referidos como predadores de caros fitfagos. As aranhas so predadores generalistas e sua eficincia sobre caros pouco conhecida. Dentre os insetos, destacam-se os coccineldeos (Eriopis conexa, Stethorus spp), estafilindeos (Oligota spp.), tisanpteros e ceccidomdeos. Entre os caros predadores citam-se os pertencentes s famlias Bdellidae, Cunaxidae, Anystidae, Cheyletidae, Tarsonemidae, Tydeidae, Stigmaeidae e Phytoseiidae (Moraes, 1991). Esta ltima agrupa mais de 1500 espcies de caros predadores. So caros de movimentos rpidos, colorao varivel, apotele do palpo bifurcada, escudo dorsal inteiro com menos de 24 pares de setas. Utilizam uma grande variedade de estmulos para localizar a presa, como os cairomnios liberados pela mesma (fezes, ovos, exvias, teias e feromnios) e estmulos emitidos pela planta hospedeira (compostos secundrios). Os estmulos so detectados travs de qumioreceptores localizados nos palpos . Estudos desenvolvidos em macieira demonstraram que os volteis emanados pelos caros fitfagos
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so importantes fontes de informao para Neoseiulus californicus (McGregor) localizar T. urticae curta distncia. Por outro lado, somente a combinao de dois ou mais estmulos olfativos parece sinalizar a localizao de Panonychus ulmi (Koch) pelo caro predador, principalmente se os cairomnios de suas fezes, ovos e exvias estiverem includos em tal mistura (Collier et. al., 2000). Os fitosedeos durante o seu desenvolvimento passam pelas fases de ovo, larva, protoninfa, deutoninfa e adulto. Apresentam uma baixa necessidade alimentar; rpido desenvolvimento; maior habilidade na procura do alimento; maior persistncia em plantas com baixa infestao da presa e maior capacidade de sobrevivncia em substratos alternativos (plen, fungos, excrees aucaradas, exsudatos, etc). No Brasil, as espcies E. citrifolius e I. zuluagai so muito comuns em pomares ctricos do Estado de So Paulo, predando caros fitfagos, e eventualmente, se alimentando de tripes, ninfas de cochonilhas e gros de plen (Gravena, 1992). Em Vacaria, RS, Brasil, em 1992 foi iniciado um programa de controle biolgico do caro vermelho da macieira, P. ulmi, com predadores fitosedeos. Aps vrios estudos foi selecionada a espcie N. californicus, que passou a ser criada em estufas de plstico, usando-se como presa o caro rajado, e liberada regularmente nos pomares de macieira, sendo os resultados muito promissores (Monteiro, 1998). O caro verde da mandioca foi introduzido na frica no incio da dcada de 70, dispersandose por mais de 27 pases da frica Tropical e causando perdas na produtividade de at 80% (Yaninek & Herren, 1988). Efetuou-se um programa intenso de controle biolgico na frica, envolvendo vrios pases, inclusive o Brasil, que foi responsvel pela introduo de vrias espcies de fitosedeos, como Neoseiulus idaeus (Denmark & Muma), Typhlodromalus manihot (Moraes) e Typhlodromalus aripo (DeLeon) naquele continente. Watanabe et al. (1994) observou o potencial de controle do caro rajado em culturas de pepino e morango, no Estado de So Paulo, com os fitosedeos N. idaeus e Phytoseiulos macropilis (Banks). Em alguns pases da Amrica do Norte e Europa, algumas espcies de fitosedeos so criadas massalmente e comercializadas para o controle de caros fitfagos, como a espcie Phytoseiuls persimilis (Athias-Henriot) utilizada no controle do caro rajado em pepino na Europa e em moranguinho na Califrnia (Moraes, 1991). importante que o Brasil intensifique esforos para incrementar os estudos com caros fitosedeos e outros predadores de caros fitfagos em fruteiras, objetivando reduzir os custos com o uso de agrotxicos e seus efeitos indesejveis nos agroecossitemas, num sistema de Manejo Integrado de Pragas (MIP).

339

Controle qumico
No controle qumico de caros so utilizados inseticidas-acaricidas ou acaricidas, isoladamente, ou em programas de MIP. Na avaliao da necessidade do uso de produtos qumicos deve-se levar em considerao a fenologia da cultura; as fases crticas de ataque dos caros; os nveis de ao e de dano econmico; os inimigos naturais; as condies meteorolgicas e os aspectos econmicos. Por outro lado, a eficcia dos acaricidas depende da sua especificidade; modo de atuao; formulao; persistncia residual; tecnologia de aplicao; fontes de reinfestao e intervalos entre as aplicaes e condies meteorolgicas. O uso inadequado de acaricidas pode provocar ressurgncia, o surto de pragas secundrias e a resistncia de caros a esses produtos. A evoluo da resistncia tem-se tornado um dos maiores entraves nos programas de controle qumico de caros, trazendo como consequncias a aplicao mais frequente de produtos, o aumento na dosagem e a substituio por outro produto geralmente de maior toxicidade. Estes fatores comprometem os programas de manejo integrado de pragas, tendo em vista a maior contaminao do ambiente, a destruio dos organismos benficos e elevao dos custos de controle de pragas (Omoto, 1995). No Estado de So Paulo vem sendo realizados estudos sobre a deteco e monitoramento da resistncia do caro da leprose dos citros ao dicofol, bem como a resistncia cruzada entre este e outros acaricidas (Omoto et al. 2000, Alves et al., 2000). No manejo da resistncia so utilizadas as seguintes estratgias: manejo por moderao (reduo da presso de seleo para preservar os indivduos susceptveis em uma determinada populao), manejo por saturao (reduzir o valor adaptativo dos indivduos resistentes atravs do uso de sinergistas ou altas doses do produto) e manejo por ataque mltiplo (uso de dois ou mais produtos em rotao ou mistura) (Georgiou, 1983) (Tabela 13.2). Na Tabela 13.3 so apresentados acaricidas registrados para o controle de caros em fruteiras (Compndio de Defensivos Agrcolas, 1999). Tabela 13.2 Estratgias qumicas para o manejo da resistncia de pragas a agrotxicos (adaptado de Georgiou, 1983).
___________________________________________________________________ Manejo por Moderao Uso de doses reduzidas do defensivo qumico (quando apropriado) Uso menos frequente de produtos qumicos Uso de produtos qumicos de baixa persistncia Controle em reboleiras (quando vivel)

340

Manuteno de reas no tratadas para refgio de indivduos susceptveis da praga (quando vivel) Aplicao do produto nos estgios mais sensveis da praga Recomendaes de nveis de controle mais elevados (quando apropriado) Manejo por Saturao Uso de dosagens elevadas para que a resistncia seja funcionalmente recessiva Uso de compostos sinrgicos para bloquear certos processos metablicos Manejo por Ataque Mltiplo Rotao de produtos qumicos Mistura de produtos qumicos
________________________________________________________________________________________________________________________________

341

Tabela 13.2 Acaricidas e inseticidas-acaricidas registrados para o controle de caros em fruteiras tropicais (Compndio dos Defensivos Agrcolas, 1999).
Nome Tcnico Nome Comercial Formulao/ Concentrao (g/L ou g/Kg) Flufenoxuron xido de fenibutatin Dicofol Fenpropathrin Fenpropathrin Diafentiuron Abamectin Cyhexatin Bifenthrin Bromopropylate Carbosultan Lufenuron Enxofre Fenpyroximate Cascade Torque Dicofol Fersol Danimen Meothrin Polo Vertimec CE/100 SC/500 CE/185 CE/300 CE/300 PM/500 CE/18 Citros B. phoenici Citros P. oleiora, B. phoenici, P. citri Citros P. oleivora, P. latus, B. phoenicis, P. citri;, A. sheldoni Citros P. oleivora. Citros P. oleivora, P. latus; B. phoenicis Citros P. latus Citros P. oleivora, P.latus Citros B. phoenicis, P. oleivora, P. citri Citros B. phoenicis Citros P. oleivora Citros P. oleivora, P. latus. Citros P. oleivora Citros P. latus, P. oleivora, B. phoenicis, A. sheldoni Citros B. phenicis; P. oleivora; P. latus Mamoeiro P. latus; T. urticae Citros B. phoenicis Citros P. oleivora, B. phoenicis Abacaxi D. floridanus. Citros P. oleivora. Citros P. oleivora, B. Phoenicis Citros P. oleivora, B. phoenicis Citros P. oleivora, B. phoenicis Citros P. oleivora, B. phoenicis, P. latus, P. citri Cultura caro

Hokko Cyhexatin PM/500 Talstar Neoron Marshal Match Enxofre Ortus CE/100 CE/500 SC/200 CE/50 PM/800 SC/50

Hexythiazox Tetradifon + Dicofol Vamidothion Propargite Propargite Pyridaben Triazophos

Savey Acardifon Kilval Propargite Fersol Omite Sanmite Hosthathion

PM/500 CE/60+160 CE/300 CE/720 CE/720 CE/200 CE/400

Somente para a cultura dos citros em So Paulo, foram estimados gastos de 90 milhes de dlares com acaricidas para o controle dos caros da leprose e da ferrugem, o que representa cerca de 20% do custo de produo (Salvo Filho, 1997). Deste modo, a implantao do MIP-citros neste Estado veio trazer uma nova filosofia de controle das pragas-chaves, principalmente com a utilizao de produtos qumicos seletivos e tcnicas de manipulao ambiental, visando preservar os inimigos naturais. Na Figura 13.26 observa342

se uma representao esquemtica dos requisitos e princpios gerais do MIPcitros (Gravena, 1995). Informaes detalhadas sobre o MIP dos citros so apresentadas no Manual do Pragueiro (Gravena et al., 1995).

Figura 13.26 Representao esquemtica dos requisitos e princpios gerais do MIP-citros (Gravena, 1995).

343

Na cultura dos citros so recomendadas algumas tticas gerais de manejo ambiental, tais como: evitar o uso da grade; manter cobertura verde nas entrelinhas; usar herbicida ou capina nas linhas; manejo do mato com roadeira sobre o solo descompactado; copa densa; adubao qumica equilibrada; evitar excesso de nitrognio; adubao orgnica em cobertura e uso de quebra ventos. Estas tticas e outras podem ser testadas em vrias fruteiras, como acerola, mamoeiro, coqueiro, mangueira, videira, goiabeira, etc. As prticas de cultivo orgnico j iniciadas no Nordeste do Brasil tambm so muito teis na manuteno do equilbrio ecolgico entre as pragas e seus inimigos naturais, devendo ser muito pesquisadas. A seletividade de agrotxicos tambm constitui um princpio de grande relevncia para o MIP, cuja finalidade preservar os inimigos naturais contra a ao danosa desses produtos. Existem dois tipos de seletividade: a fisiolgica, quando o agrotxico apresenta uma maior toxicidade para a praga, em relao aos inimigos naturais. Na seletividade ecolgica, embora o agrotxico no seja seletivo, pode tornar-se seletivo em funo da maneira como aplicado, ou seja, sem afetar de modo drstico os inimigos naturais. Como exemplo, citam-se o uso de inseticidas sistmicos (pulverizao, granulados no solo, esguicho, tratamento de sementes, imerso de mudas); aplicao em ruas alternadas; aplicao parcial na copa; uso de subdosagens, etc. Na Tabela 13.3 constam resultados sobre a seletividade de agrotxicos ao caro predador fitosedeo, I. zuluagai, em citros (Reis et al., 1998).

344

Tabela 13.3 Toxicidade de agrotxicos a fmeas adultas de Iphiseiodes zuluagai em teste de laboratrio a 252oC, 7010 UR e 14 horas de fotofase (resduo de 2,50,05 mg/cm2 em superfcie de vidro) (Reis et al., 1998).
Nome Tcnico Concentra o i.a.1(%) 0,0054 0,0005 0,04 0,06 0,025 0,05 0,002 0,02 0,12 0,108 0,0125 0,15 0,15 0,015 0,0125 0,025 0,0384 0,4 0,04 0,015 0,005 0,2 0,0015 0,077 0,12 0,86 1,86 1,512 0,096 0,125 0,084 0,06 0,1 0,072 0,035 0,15 0,024 0,05 0,05 M2 (%) Sobreviventes 100% - M 72,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 72,22 0,00 0,00 79,31 79,55 0,00 100,00 0,00 0,00 21,67 82,61 0,00 0,00 86,67 100,00 100,00 0,00 86,67 0,00 0,00 87,50 95,83 96,00 10,34 0,00 0,00 0,00 95,83 100,00 79,31 89,66 Er3 E4(%) Classe5

Abamectin Acrinathrin Amitraz Azinphos-ethyl Azocyclotin Benomyl Bifenthrin Bromopropylate Captan Carbaryl Carbosulfan Chlorothalonil (500 g) Chlorothalonil (750 g) Chlorphenapyr Clofentezine Cyhexatin Dicofol Enxofre Fenbutatin Oxide Fenpropathrin Fenpyroximate Fosetyl Hexythiazox Hidrxido de Cobre Mancozeb Naled leo Vegetal leo Mineral Oxicloreto de Cobre (350 g) Oxicloreto de Cobre (500 g) xido Cuproso Parathion-methyl Phosmet Propargite Quinometionate Sulfato de Cobre Tetradifon Thiophanate-methyl (500 g) Thiophanate-methyl (500 g)

28,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 27,78 100,00 100,00 20,69 20,45 100,00 0,00 100,00 100,00 78,33 17,39 100,00 100,00 13,33 0,00 0,00 100,00 13,33 100,00 100,00 12,50 4,17 4,00 89,66 100,00 100,00 100,00 4,17 0,00 20,69 10,34

0,65 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,07 0,00 0,00 0,58 0,36 0,00 0,88 0,00 0,00 0,22 0,85 0,00 0,00 1,16 0,88 1,06 0,00 1,29 0,00 0,00 0,94 0,93 1,10 0,80 0,00 0,00 0,00 0,84 0,81 0,14 0,31

53,20 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 27,72 100,00 100,00 54,00 65,24 100,00 12,00 100,00 100,00 95,23 29,78 100,00 100,00 -0,54 12,00 -6,00 100,00 -11,80 100,00 100,00 17,75 10,88 5,60 91,73 100,00 100,00 100,00 54,00 19,00 88,90 72,21

2 4 4 4 4 4 4 4 1 4 4 2 2 4 1 4 4 3 1 4 4 1 1 1 4 1 4 4 1 1 1 3 4 4 4 2 1 3 2

Triazophos Vamidothion Ziram

0,06 0,024 0,15

100,00 100,00 20,00

0,00 0,00 80,00

0,00 100,00 0,00 100,00 0,86 31,20

4 4 2

1. Concentrao de ingrediente ativo na calda de pulverizao (p/v). 2. Mortalidade corrigida (Abbott, 1925). 3. Efeito na reproduo; Er=RTratamento/Rtestemunha. 4. Efeito total, E%=100% - (100% - M) x Er. 5. Classes de toxicidade segundo IOBC/WPRS (Baker et al., 1992)

345

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349

14
ATUALIZAO NA PRODUO DE AGENTES DE CONTROLE BIOLGICO DE PRAGAS DA CANA-DE-ACAR
EDMILSON JACINTO MARQUES RICARDO OTAVIANO RIBEIRO DE LIMA IRENE MARIA RAMOS MARQUES

INTRODUO
A cana-de-acar uma cultura de grande importncia econmica e social para o Brasil, ocupando atualmente mais de 5 milhes de hectares plantados, dos quais, aproximadamente 1,2 milhes esto na Regio Nordeste. Alm da produo de acar matria prima para produo de lcool, combustvel renovvel e estratgico para economia de divisas nacionais. Como sub-produtos da cana-de-acar, destacam-se ainda o bagao para produo de papel, rao animal e mais recentemente para cogerao de energia eltrica. Entretanto, a produtividade da cana-de-acar tem sido reduzida por algumas pragas, destacando-se as brocas comuns Diatraea saccharalis F., Diatraea flavipennella Box, a broca gigante Castnia licus Drury, a cigarrinha da folha Mahanarva posticata Stal, a cigarrinha da raiz Mahanarva fimbriolata Stal e cupins dos gneros Heterotermes, Syntermes, Amitermes, Nasutitermes, dentre outros. Objetivando minimizar os prejuzos ocasionados pelas principais pragas, bem como buscando uma forma de controle mais duradoura e menos agressiva ao meio ambiente, os tcnicos e Orgos do governo envolvidos com a pesquisa canavieira, estudaram os aspectos biolgicos e comportamentais das brocas e cigarrinhas, inclusive buscando nos locais de origem dessas pragas, inimigos naturais efetivos que possibilitassem sua multiplicao e utilizao no controle das mesmas. Desta forma, desde 1969 o controle biolgico da cigarrinha da folha M. posticata, vem sendo realizado em canaviais de Pernambuco pelo fungo Metarhizium anisopliae (Metschn) e posteriormente em 1974, teve incio a utilizao da vespa Cotesia flavipes, parasitide de lagartas da broca comum D. saccharalis.

Michereff, S.J. & Barros, R. (Eds.) Proteo de Plantas na Agricultura Sustentvel. 2001. Recife, UFRPE

Direitos de edio reservados aos editores ISBN 85-87459-06-6

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CONTROLE BIOLGICO DE MAHANARVA POSTICATA (HEM., CERCOPIDAE)

A cigarrinha da folha constitui um dos principais problemas entomolgicos da cana-de-acar no Nordeste do Brasil. Os adultos, ao sugarem a planta, inoculam toxinas que causam a queima das folhas, reduzindo a capacidade fotossinttica, com perdas de peso e acar. Devido facilidade de produo em laboratrio, patogenicidade e adaptao nos canaviais, o fungo Metarhizium anisopliae (Deuteromyceto, Moniliaceae) revelou-se o inimigo natural mais eficiente contra a cigarrinha da folha. Esse entomopatgeno produzido em laboratrio utilizando-se arroz cozido em sacos de polipropileno. O xito do controle depende, dentre outros aspectos, do isolado, quantidade de condios e das condies ambientais por ocasio da aplicao. Do material produzido pelo exPLANALSUCAR ou por laboratrios que utilizem metodologia afim, recomendam-se 5 x 1012 condios por ha em 100 a 200 litros de gua por via terrestre, ou 25 l de gua por via area. O fungo proporciona uma mortalidade mdia frequente, entre 25 a 43,5 %, respectivamente para ninfas e adultos, enquanto perdurar a infestao (Marques, 1992). Durante o perodo de 1970 at o presente, foram produzidos pelo exIAA/PLANALSUCAR, IPA e demais laboratrios setoriais instalados em Pernambuco, aproximadamente 40.000 kg de condios de M. anisopliae, que foram aplicados em 500.000 hectares infestados por M. posticata. A anlise dos valores de infestao da cigarrinha no perodo de 1977 a 1987, revelou uma reduo de 72% , como tambm uma queda drstica na utilizao de inseticidas para o controle da praga, ou seja, para menos de 10% da rea tratada com inseticida em 1971, praticamente o incio do programa de controle biolgico com o fungo M. anisopliae (Vilas Boas et al., 1988; Marques, 1992). A cultura do fungo M. anisopliae deve ser iniciada a partir de isolados puros devidamente caracterizados. Estes podem ser obtidos a partir de isolamentos de campo ou de outros laboratrios. Para a produo em escala semi-industrial, atualmente o melhor meio de cultura continua sendo o arroz cozido, podendo ser acondicionado em garrafas, sacos plstico de polipropileno e bandejas, sendo nas duas primeiras alternativas, autoclavados a 120oC por 30 minutos (Alves & Pereira, 1989; Alves & Pereira, 1998; Aquino,1977; Guagliumi et al., 1974; Moino Junior, 2000). O fluxograma das operaes de produo do fungo, envolvendo todas as fases do processo apresentado na Figura 14.1.

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Figura 14.1 Fluxograma de produo de Metarhizium anisopliae com as diversas fases envolvidas [adaptado de Marques et al. (1981)].

O laboratrio deve ser construdo preferencialmente em local arborizado e afastado de estradas muito transitadas, sendo que grande parte do xito da produo depender de um bom dimensionamento, equipamento e pessoal. As funes das principais reas do laboratrio so apresentadas a seguir: a) Sala de Preparao. Contm mesa, balco e pia. Aps a colocao do meio de cultura (arroz mais gua), fecham-se as garrafas ou sacolas de polipropileno com papel alumnio e cordo; b) Sala de Cozimento e Esterilizao. Onde as garrafas ou sacolas vo ser autoclavadas a uma temperatura de 120C durante 30 minutos. Deve conter autoclaves e a ventilao feita atravs de ar condicionado. Esta sala contm ainda um exaustor para retirar os vapores do autoclave; c) Sala de Inoculao. Atravs de uma janela tipo guilhotina, as unidades passam da sala de esterilizao para a de inoculao. Nesta, deve haver apenas um balco azulejado aberto. As unidades sero inoculadas, passando em seguida para a sala de germinao, tambm atravs de janela tipo guilhotina. A assepsia deve ser absoluta e a ventilao ser feita atravs de exaustor. A entrada para a sala efetuada atravs de passagem dupla, formando uma antecmara;

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d) Laboratrio. Contm um balco aberto, estufa, geladeira e microscpio. Utilizado para guardar os isolados, isolamentos de fungo, preparo de pr-matrizes, matrizes e suspenso fngica, armazenamento de pr-matrizes e matrizes, bem como para controlar a pureza do material atravs de exame microscpico. A assepsia nessa sala tambm deve ser absoluta. A ventilao deve ser feita atravs de ar condicionado; e) Sala de Germinao. Abriga as garrafas, sacolas ou bandejas acondicionadas em estantes, durante o perodo de mais ou menos 15 dias, a uma temperatura em torno de 26C. A ventilao efetuada tambm atravs de ar condicionado. Dever haver o controle dirio da temperatura, como tambm a eliminao de unidades de produo contaminadas; f) Sala de Descarte. O fungo vai para essa sala quando j est bem esporulado,sendo ento separado do arroz, atravs de uma peneira vibratria, na cmara de descarte. Aps a separao, os condios do fungo so ensacados e armazenados em freezer com 2 a 5C. Esta sala deve conter a cmara de descarte, o freezer e uma mquina de fechar sacos plsticos e ventilao natural. As paredes internas do laboratrio, inclusive os balces, devem ser revestidas de azulejo. O piso deve ser de material que se preste a lavagens constantes. Todas as portas internas devem ser de vidro em metade de sua rea.. importante um abastecimento abundante e constante de gua no laboratrio. Recomenda-se a instalao de uma caixa d'gua com capacidade para 3.000 litros. As dimenses para a construo de um laboratrio para produo de fungo esto apresentadas na Figura 14.2.

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Figura 14.2 Planta baixa de laboratrio para produo de Metarhizium anisopliae.

Funcionamento do laboratrio
Para o bom andamento dos trabalhos e conseqente obteno dos condios do fungo em quantidade e qualidade, faz-se necessrio que as tarefas sejam divididas em uma seqncia de operaes.
Primeira etapa

a) Seleo do isolado. Para que o controle das praga tenha xito necessrio que o isolado selecionado seja eficiente. Assim sendo, so efetuados bioensaios com diferentes isolados, objetivando identificar aquele que proporcione elevada mortalidade do inseto, preferencialmente no menor tempo possvel; b) Pr-matrizes. Com o material desses tubos efetua-se a multiplicao em pr-matrizes, que so tubos contendo aquele isolado inicial com 100% de pureza; c) Matrizes. Na preparao de matrizes, utilizam-se garrafas de Roux de 800 ml, previamente esterilizadas, onde so colocados 100g de arroz e 80 ml de gua destilada, fechando-as com papel alumnio e fita adesiva. Aps a
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preparao, so levadas ao autoclave para esterilizao e cozimento do arroz a temperatura de 120C durante 30 minutos, passando em seguida por um perodo de resfriamento; Para inoculao nas matrizes, so utilizados condios provenientes das pr-matrizes, transferindo-os com uma ala de platina para outros tubos de ensaio contendo gua estril e inoculando-os atravs de seringa hipodrmica. Posteriormente, as garrafas so fechadas com papel de filtro e incubadas durante um perodo de mais ou menos 15 dias temperatura ao redor de 26C. Deve ser efetuado um controle rigoroso das matrizes, a fim de se diminuir a possibilidade de contaminao durante a produo. d) Preparo da suspenso. Utiliza-se uma matriz para dois litros de gua esterilizada, contendo Tween 80 a 0,01 % a fim de homogeneizar a suspenso. Aps essa preparao, retira-se uma amostra, levando-a ao microscpio para verificao da pureza do material.
Segunda etapa

a) Preparao dos recipientes e meio de cultura. Os recipientes utilizados para produo em grande escala, so garrafas de vidro de 500 ml , sacos plstico de polipropileno ou bandejas plsticas. Colocam-se 100 gramas de arroz e 60 ml de gua destilada por garrafa ou 300 gramas de arroz e 180 ml de gua por saco de polipropileno medindo 40 por 26,5 cm de comprimento, fechando-os em seguida com papel alumnio e cordo. b) Autoclavagem. As unidades contendo o substrato so levadas ao autoclave para o cozimento-esterilizao temperatura de 120C, durante 25 a 30 minutos. Em seguida, passam por resfriamento, e so conduzidas para a cmara de inoculao, a fim de receberem a suspenso fngica e passarem para a sala de germinao. A inoculao da suspenso nas garrafas ou sacolas efetuada na cmara assptica, utilizando-se uma seringa veterinria, colocando-se 10 ml por unidade de 100g. Aps a inoculao, o orifcio fechado com papel de filtro esterilizado e cola plstica. Em seguida, so levadas para a sala de germinao, onde ficam incubadas durante 15 dias temperatura de mais ou menos 26C. Para a produo do fungo em bandejas, inicialmente o fungo inoculado em sacos de polipropileno e aps trs dias , ocasio em que o crescimento vegetativo estar bastante acentuado, o meio de cultura transferido para bandejas plsticas que sero mantidas em sala assptica com condies controladas, visando favorecer a esporulao do fungo. c) Reviso e controle na sala de germinao. Aps serem conduzidas para a sala de germinao, as unidades recebem um destorroamento do arroz,

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para que a suspenso fngica distribua-se uniformemente no substrato. A temperatura nessa sala deve ficar em torno de 26C. Nesta etapa, a observao das unidades de produo deve ser constante, para verificao do desenvolvimento do fungo, o que ocorre num perodo de aproximadamente 15 dias, ocasio em que as unidades so levadas para a sala de peneiramento ou descarte.
Terceira etapa

a) Peneiramento. Antes do peneiramento deve haver a secagem do material biolgico (arroz mais fungo) objetivando baixar a umidade para mais ou menos 15% por ocasio do armazenamento. Em seguida os condios do fungo so separados do arroz atravs de peneiramento, utilizando-se uma peneira vibratria. Aps a separao, os condios so colocados em sacos de polietileno com peso constante de 500 gramas por saco, vedados hermeticamente em mquina de fechar sacos plsticos. O arroz que foi separado dos condios tambm ensacado, com peso constante de dois quilos, a fim de ser lanado posteriormente nos canaviais. b) Armazenamento e aplicao. Tanto os sacos contendo os condios do fungo como os que contm o arroz residual so armazenados em cmaras frigorficas temperatura de 3 a 5C, at serem liberados para aplicao no campo. imprescindvel manter as melhores condies de assepsia no laboratrio, a fim de se evitar a proliferao de outros microrganismos, inconvenientes cultura do fungo. Tambm na lavagem dos recipientes, equipamentos e instrumental, a limpeza deve ser rigorosa, para ser evitado perdas na produo.

Dimensionamento e pessoal
Levando em considerao a rea fsica , o laboratrio estar em condies de proporcionar a inoculao em mdia de 500 unidades/dia com 1 (um) laboratorista na primeira etapa; 2 (dois) auxiliares de laboratrio na segunda etapa, e 1 (um) na terceira; 2 (dois) auxiliares na limpeza e 1 (um) tcnico de nvel superior na superviso, que tambm auxiliar na primeira etapa, como tambm poder ter outras obrigaes na Empresa.

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Eficincia nas operaes

O xito do laboratrio depende principalmente dos trabalhos efetuados na primeira etapa, pois envolve desde o fornecimento do material isolado, de matrizes bem esporuladas e livres de contaminao, at a inoculao da suspenso fngica nos recipientes. De um modo geral, a eficincia final no laboratrio dever ficar ao redor de 90%, sendo os 10% restantes atribudos quelas unidades que apresentaram desenvolvimento anormal e contaminao, sendo esta ltima aceitvel at 5%. A produo de condios em funo das estimativas anteriores ser de ordem de 1.000kg/ano, considerando-se um rendimento mnimo esperado de 10 gramas de condios por unidade de 100gramas de arroz.

Controle de qualidade na produo de fungos

O controle de qualidade do fungo, vai desde a seleo de um isolado patognico para a praga envolvida at a produo final, quando o patgeno estar pronto para aplicao no campo. Um isolado adequado, alm de patognico, tambm deve apresentar uma boa produtividade de condios para que o custo de produo seja mais acessvel. Aps a obteno do fungo, devem ser efetuados testes de concentrao de condios no produto final, viabilidade e patogenicidade. O nmero de repicagens contnuas do fungo produzido em meio artificial, possivelmente no deve ultrapassar a seis, para que o mesmo no perca suas caractersticas morfo-fisiolgicas desejveis, principalmente virulncia (Alves & Pereira, 1998). ).

CONTROLE BIOLGICO DE DIATRAEA SPP. (LEP., CRAMBIDAE)

As brocas Diatraea spp. so pragas de importncia econmica em todas as regies canavieiras do Brasil, a exemplo das demais reas canavieiras do mundo. Em Pernambuco e demais regies do Brasil, o controle biolgico dessa praga vem sendo efetuado desde 1974, mediante utilizao da vespa Cotesia flavipes (Hym., Braconidae), poca em que este parasitide foi introduzido de Trinidad (Mendona Filho et al., 1977). Em Pernambuco, sua criao massal efetuada sobre lagartas de Diatraea saccharalis, nos laboratrios da Estao Experimental de Cana de Acar de Carpina
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EECAC (UFRPE), e das Usinas Santa Teresa e Salgado. A liberao de 5 a 6.000 vespas por hectare recomendada para os canaviais com densidade populacional de pelo menos 10 lagartas de Diatraea / hora / homem. Em regies favorveis a aclimatao de Cotesia flavipes, verificou-se um parasitismo mdio de 30% de lagartas (Lima & Marques, 1985). Do incio do programa at o presente, foram liberadas cerca de 400 milhes de vespas em 80.000 hectares. Estudos conduzidos pela EECAC/UFRPE na safra 1996/97 revelaram aumentos significativos nos nveis de danos ocasionados por Diatraea spp, em quatro regies canavieiras do Estado de Pernambuco, em relao a safra 86/87. Esse crescimento, pode ser explicado pela substituio de variedades, no perodo considerado, como tambm pelas redues nas liberaes do parasitide C. flavipes nos canaviais infestados pela praga.

Metodologia de multiplicao massal de Cotesia flavipes em lagartas de Diatraea saccharalis

Neste captulo, pretende-se proporcionar uma atualizao sobre o processo de multiplicao do parasitide C. flavipes, principalmente nas etapas que foram modificadas em relao metodologia original, constante da publicao de Macedo et al. (1983) e Arajo (1987). Tambm sero abordadas, aquelas fases que mais frequentemente apresentam problemas, incluindo-se recomendaes de como solucion-los. As informaes foram pautadas considerando-se um laboratrio capacitado produo mensal de aproximadamente 3,5 milhes de vespas, conforme instalaes apresentadas na figura 14.3.

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Figura 14.3 Planta baixa do laboratrio para multiplicao de Cotesia flavipes.

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As etapas de produo do hospedeiro (D. saccharalis) e do parasitide (C. flavipes), bem como a maneira de como elas se integram no mtodo, como um todo, tambm sero enfocadas (Figura 14.4).

Figura 14.4 Fluxograma de multiplicao de Cotesia flavipes em Diatraea saccharalis, criada em dieta artificial (Macedo, 2000).

Descrio das atividades relativas s reas fsicas de maior importncia

Com o objetivo de facilitar o entendimento das operaes envolvidas no processo de multiplicao da vespa C. flavipes, sero apresentadas a seguir as diferentes tarefas desenvolvidas nas respectivas reas fsicas: a) Sala de Postura. Local onde so mantidas as gaiolas (cmaras de PVC) com adultos de Diatraea saccharalis, objetivando o acasalamento e posterior obteno de ovos. Estas cmaras so forradas internamente com papel sulfite, onde so depositados os ovos, sendo vedadas em sua parte superior e inferior com placas de plstico transparente ou acrlico.Os adultos so alimentados atravs de uma poro de algodo hidrfilo embebido com soluo de mel a 10%. Visando uma maior longevidade dos adultos e
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quantidade de ovos, deve-se manter um chumao de algodo umedecido na base da gaiola. Esta sala pode servir tambm, como depsito de ingredientes utilizados na dieta artificial, necessria ao processo. A temperatura durante a noite deve variar entre 20 e 22C, possibilitada por uso de condicionador de ar, com fotofase variando de 12 a 14 horas; b) Sala de dieta. Destina-se preparao das dietas artificiais que servem de alimento s lagartas da broca, podendo ainda, ser utilizada para armazenamento de componentes da dieta. Trata-se de uma das dependncias mais importantes do laboratrio, devendo ser mantida sempre fechada e sob rigorosa assepsia, a temperatura deve ser de 25C, mediante o uso de condicionador de ar e livre do acesso de pessoas estranhas aos trabalhos; c) Sala de lagartas em desenvolvimento. Destinada ao acondicionamento dos recipientes com ovos ou lagartas recm-eclodidas, at que estejam aptas para inoculao com o parasitide; d) Sala de inoculao. Local para inoculaes das lagartas de Diatraea spp. pelo parasitide Cotesia flavipes. Deve ter boa luminosidade, ventilao natural, podendo ainda ser utilizado circulador de ar; e) Sala de lagartas inoculadas. Destinada ao acondicionamento de lagartas em processos de parasitismo, bem como aquelas que esto sendo realimentadas com vistas obteno de crislidas, necessrias manuteno do ciclo do hospedeiro em laboratrio; f) Sala de reviso. Local onde so inspecionadas as lagartas inoculadas, para obteno das massas de casulos do parasitide ou de crislidas de Diatraea. As condies ideais para o perfeito funcionamento dos processos nas quatro salas referidas anteriormente, requerem temperatura de 282C, boa luminosidade e que seja evitada a incidncia de raios solares, diretamente sobre os recipientes. Compem ainda a estrutura do laboratrio, um escritrio e um almoxarifado, com suas funes essenciais, no sendo necessrio tecer consideraes sobre os mesmos. oportuno salientar, a importncia da limpeza na rotina do laboratrio, sendo recomendvel nesse sentido, evitar sempre que possvel, o trnsito de pessoas estranhas ao servio, a ttulo de visitas, aulas prticas, etc., o que poderia ocasionar indesejveis contaminaes nos processos, ocasionadas por microrganismos oportunistas. No que diz respeito mo-de-obra, a prtica do dia-a-dia tem revelado que, para a maioria das tarefas envolvidas no sistema, funcionrios do sexo feminino tm se adaptado melhor a essas funes.

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Simulao de um laboratrio para produo de aproximadamente 3,5 milhes de vespas 1. Produo do Hospedeiro

1.1. Planejamento da produo Com o objetivo de atender demanda estimada para o laboratrio, o mesmo dever ter sua produo dimensionada da seguinte forma: a) Lagartas aptas/dia = 3.200, para inocular 3.000/dia (2 a 6 feira) b) 200 lagartas/frasco = 16 frascos/dia, devem ser inoculados com ovos c) 250 ovos/frasco = 4.000 ovos/dia d) 100 ovos/fmea = 40 fmeas/dia = 2 cmaras de acasalamento e) 50 indivduos (30 machos e 20 fmeas)/cmara x 2 = 100 indivduos/dia f) 215 lagartas x 70% eficincia = 150 crislidas x 70% eficincia = 105 indivduos g) 1 frasco/dia = 215 lagartas para encrisalidar Assim sendo, para o atendimento da meta prevista, devero ser inoculados 17 frascos para a criao de brocas no laboratrio. 1.2. Obteno de ovos Para que possa ser alcanada a produo estimada, sero instaladas cmaras para postura, obedecendo formao descrita na Tabela 14.1. Tabela 14.1 Instalao de cmaras para postura de Diatraea saccharalis.
Atividades Cmaras novas Cmaras de 2 dia Cmaras de 3 dia Total de cmaras 2 xx 3 xx xx 4 4 xx xx x 5 Dias da semana 5 6 xx xx xx xx x x 5 5 Sbado xx xx x 5 Domingo xx xx x 5

Aps a obteno, os ovos devem ser desinfectados atravs da imerso por 2 minutos em soluo de formaldedo 38% a 0,2 %, em seguida gua destilada por mais 2 minutos e finalmente em soluo de sulfato de cobre a 1%, tambm por 2 minutos, sendo posteriormente colocados para secar.

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1.3. Obteno de lagartas As lagartas sero obtidas a partir de posturas colocadas em frascos de vidro transparente com capacidade para 500 ml contendo 150ml de dieta artificial de Hensley & Hammond (1968), modificada por Arajo et al. (1985) e denominada Dieta PLANALSUCAR (Tabela 14.2). Em cada frasco, aps a colocao da dieta ainda quente, os mesmos so tamponados com algodo em rama previamente esterilizado, quando utilizados frascos de boca estreita. Quando forem usados frascos de boca larga, os mesmos devem ser fechados com tampa de tela metlica (200 mesh), tendo como contra tampa, folha de papel toalha , conforme metodologia adotada por Macedo (2000). No dia seguinte, procede-se a colocao dos ovos, em nmero de 250 por frasco, em ambiente estril, onde permanecero durante aproximadamente 15 dias, ocasio em que as lagartas sero selecionadas para inoculao com o parasitide ou obteno de crislidas. Durante essa fase os cuidados devem ser intensificados, principalmente com relao ao prazo de validade dos componentes da dieta, dosagens e homogeneidade, especialmente os fagoestimulantes cido ascrbico e acar. Esses cuidados, aliados ao controle de temperatura na sala, proporcionaro o desenvolvimento normal e uniforme das lagartas. Tabela 14.2 Dieta PLANALSUCAR para criao de lagartas de Diatraea saccharalis.
Ingredientes cido ascrbico Acar Sais de Wesson Nipagin Germe de trigo Farelo de soja Cloreto de colina Wintomylon Vita gold Soluo vitamnica Formaldedo gar-agar ou caragenato cido actico Agua no liquidificador gua na panela Alimentao Tubo (220) 5g 135 g 10 g 4,5 g 80 g 105 g 1g 0,5 ml 1 ml 30 ml 2 ml 30 g 1.000 ml 1.400 ml Alimentao Frasco (4) ou 2 bandejas 5g 135 g 10 g 4,5 g 80 g 105 g 1g 4,5 ml 1 ml 30 ml 2 ml 30 g 1.000 ml 1.400 ml Realimentao 2 bandejas 2g 135 g 5g 40 g 195 g 1g 0,5 ml 1 ml 15 ml 2 ml 35 g 15 ml 1.000 ml 1.400 ml

2. Produo do Parasitide

As lagartas selecionadas para esse fim, so submetidas ao parasitismo de adultos de C. flavipes com 24 horas de emergncia, tempo necessrio para
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assegurar o acasalamento entre esses insetos. Nessa fase, deve ser observado se as fmeas introduziram o ovipositor nas lagartas, operao percebida visualmente pela abertura das asas do parasitide e permanncia destes sobre o hospedeiro, ocasio em que ocorre movimentao brusca da lagarta, como mecanismo de defesa. A fim de que seja assegurado uma boa eficincia nessa etapa, deve-se ter o cuidado de verificar tambm se no h predominncia de machos, se os adultos do parasitide foram procedentes de lagartas sadias, se as lagartas esto com aproximadamente 15 dias e 15 a 25 mm de comprimento, boa mobilidade e sem ferimentos. Posteriormente, a partir de 12 dias da inoculao, efetua-se a primeira reviso para a coleta de massas de casulo do parasitide, operao essa repetida aos 15 , 18 e 21 dias . Aps as coletas, as massas so acondicionadas em nmero de 50 em copo plstico de 320 ml de capacidade, furados com alfinete em sua parte inferior para melhorar a ventilao, onde permanecero at que ocorra 70% de emergncia dos adultos, quando sero levados ao campo para liberao. Durante o transporte ao campo, deve ser evitada insolao direta sobre as vespas, se possvel transportando os copos em recipientes de isopor. Durante a liberao, evitar choque trmico aos adultos, para tanto, essas liberaes devem ser efetuadas nas horas de temperaturas mais amenas, evitando as horas mais quentes do dia, como tambm dias muito chuvosos. 2.1. Contaminaes na dieta A fim de evitar contaminaes, deve-se tomar todos os cuidados com a assepsia do local. No entanto, se estas ocorrerem, deve-se aumentar a concentrao das substncias antibiticas que estejam sendo usadas na dieta, a exemplo de nipagin, wintomylon, dentre outras. 2.2. Causas de mortalidade de lagartas inoculadas Durante e aps a inoculao das lagartas pelo parasitide, deve-se ter o cuidado de evitar amontoamento de lagartas para no haver ferimentos, que facilitariam a mortalidade, levando a reduo na produo do parasitide. Lagartas aparentemente doentes, deformadas, com troca de cutcula incompleta, assim como, crislidas ou adultos que apresentem qualquer tipo de deformao no devem ser utilizadas na multiplicao do parasitide, devendo ser eliminados do processo de criao. 2.3. Alguns parmetros utilizados nesta estimativa:
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 3.000 lagartas inoculadas x 5 dias = 15.000 lagartas inoculadas/semana Considerando-se 4 semanas/ms = 60.000 lagartas inoculadas/ms Considerando-se 75% eficincia = 45.000 lagartas parasitadas 45.000 lagartas x 80 casulos/massa = 3.600.000 casulos = vespas/ms Para liberar = 3.420.000 vespas Para uso do laboratrio = 180.000 vespas

CONSIDERAES FINAIS
Conforme referido no incio desse trabalho, alm da broca comum e da cigarrinha da folha, existem outras pragas importantes da cana-de-acar que infestam os canaviais. Desta forma, a utilizao dos agentes de controle biolgico aqui referidos, colaboram substancialmente para o Manejo Integrado das Pragas da Cana-de-acar, atravs da reduo do uso de inseticidas qumicos, minimizando portanto a ao desses ltimos sobre os inimigos naturais das demais pragas da cultura e evitando tambm, seus efeitos danosos sobre o ambiente canavieiro. Paralelamente,buscou-se nesse trabalho reunir informaes tcnicas e prticas, referentes atualizao na produo de agentes de controle biolgico de duas importantes pragas da cana-de-acar que, at ento, encontravam-se em diversas fontes bibliogrficas especializadas.

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