Procedimento de Anlises Microbiolgicas - PAM Aula Prtica - Pesquisa de contagem total de mesfilos viveis Objetivo: Identificar o numero de contagem

total de bactrias mesfilas em leite, obtendo assim as condies higinicas do produto. Dominar a tcnica de diluio em serie.

Materiais: - PCA (Plate Count Agar) - gua peptonada Equipamento e vidrarias: - Pipetas 10mL - Ponteiras 1mL - Pipetador - Pra - Frascos de vidro

- Tubos de Ensaio - Placas de Petri - Bico de Bunsen - Contador de colnias - Estufa a 35C

Procedimento: - Pipetar 10mL do leite a ser analisado em 90mL de gua peptonada (soluo 10-1); - Colocar 1mL dessa soluo em uma placa de Petri esterilizada, e 1mL em um tubo de ensaio contendo 9mL de gua peptonada, obtendo assim uma soluo 10-2; - Adicionar 1mL da soluo 10-2 em uma placa de Petri esterilizada e 1mL em um tubo de ensaio contendo 9mL de gua peptonada, obtendo assim uma soluo 10 -3; - Adicionar 1mL da soluo 10-3 em uma placa de Petri; - Colocar o meio de cultura fundido e resfriado a + ou 45C. Fazer movimentos com as placas de Petri em formas rotativas, para uma boa homogeneizao do meio de cultura com o inoculo. Incubar a 35C por 48 hs Interpretao dos resultados: - Nenhuma placa atingiu 25 colnias: Contar as colnias nas placas com nmero mais prximo de 25, calcular o numero de UFC e apresentar o resultado como contagem estimada ex: 1,3 x 102 - Nenhuma placa com crescimento: Apresentar o resultado como menor do que1/diluio, valor estimado <10. - Todas as placas com mais de 250 colnias: se for possvel contar as colnias de pelo menos uma das placas. No sendo possvel contar todas as colnias da placa, mas se o n de colnias/cm2 estiver abaixo de 10, contar as colnias em 12 quadrados consecutivos (6 na horizontal e 6 na vertical), calcular a media e multiplicar pela rea total da placa (65 cm2 para placas de dimetro externo 100mm). Usar esse n para o calculo de UFC. Ex: digamos que nos quadradinhos temos 10+9+9+8+7... tiro a mdia dos 12 quadradinhos, por ex 8, multiplico esse valor pelo fator de correo 65 e finalmente multiplico pela diluio da placa. 8 .65 = 520x102 = 5,2x104. - Placas em que o crescimento proporcionalmente maior nas maiores diluies: reportar como acidente de laboratrio, caso no seja possvel repetir a analise.