AGRONOMIA

HIDRLISE CIDA DO AMIDO

Disciplina: Bioqumica Professora: XXXXXXXXXXXXXXX Data da experincia: XXXXXXXX Nomes: Jessica Varjo Jhessica Bortolotti Larissa Corradi Voss

Turma: XXXXXXXXX Data da entrega: n: Aula 4

NOTA:

Dois Vizinhos 1 semestre/2013

1. RESUMO

Para que se possa comprovar a hidrlise cida do amido, so utilizados mtodos de colorao com reagentes DNS e Lugol. Para que essa reao acontea necessrio aquecer a soluo em banho-maria, desta forma o amido hidrolisado transformandose em glicose como produto final e obtendo como produtos intermedirios dextrinas e oligossacardeos, sendo que estes obtm coloraes diferentes com relao ao tempo em que permanecem em banho-maria. A colorao ideal obtida gradual crescente nos tons de amarelo/laranja/vermelho para o mtodo DNS de determinao de aucares redutores (glicose) e tons de azul/roxo para o mtodo com Lugol (pigmentao das dextrinas). O experimento prtico obteve erros de execuo no mtodo Lugol, a colorao no mtodo DNS obteve sucesso, sendo possvel comprovar experimentalmente a hidrlise cida do amido.

2. INTRODUO O amido um homopolisacardeo no-redutor constitudo essencialmente por resduos de glicose unidos por ligaes alfa-1,4 (amilose e amilopectina) e alfa-11,6 (amilopectina). Entre as peculiaridades deste polissacardeo, est diferena entre as molculas que o compe, a amilose alm de apresentar estrutura linear, mais hidrossolvel que a amilopectina, a qual apresenta altamente ramificada, tornando-se possvel a separao destes componentes aps aquecimento. Desta forma, quando uma soluo de amido tratada com cido quente, ocorrem sucessivas hidrlises at que suas molculas sejam convertidas totalmente em sua ose fundamental, a glicose. Durante esse processo, so encontrados como produtos intermedirios dextrinas e oligossacardeos. Para comprovao da hidrlise cida do amido, utiliza-se como prova a mudana de colorao da soluo durante o processo. Sendo utilizados como reagentes a soluo de cido 3,5-Dinitrosaliclico, conhecido como mtodo DNS para determinao de aucares redutores (glicose) e a soluo de Lugol (iodo-iodeto de potssio) para reao com as dextrinas produzidas durante a hidrlise.

3. OBJETIVOS Demonstrar que um polissacardeo pode ser hidrolisado com a produo de aucares redutores; Verificar atravs de reaes especifica o desaparecimento do amido e o concomitante aparecimento de aucares redutores durante o curso da hidrlise;

4. HIPTESES Quando realiza-se uma hidrlise cida de uma soluo de amido, deve-se obter como produtos intermedirios dextrinas e oligossacardeos e como produto final a glicose. Com a utilizao das solues de reagentes, sendo estes o lugol e o mtodo DNS, espera-se que a mudana de colorao dos tubos possa ser observada aps o tempo de banho-maria especifico para cada tubo, conforme descrito abaixo. Mtodo DNS : apresenta colorao em tons de amarelo, laranja e vermelho; Mtodo Lugol: Apresenta colorao em tons de azul forte e roxo. O Mtodo DNS o responsvel pela determinao de aucares redutores, a glicose como produto final da hidrlise ir reagir com o DNS, e obter colorao laranja/vermelho aumentando de forma gradual. O mtodo Lugol, ir reagir com as dextrinas, produzidas durante a hidrlise como produtos intermedirios. As dextrinas dependendo do seu tamanho e complexidade molecular desenvolvem diferentes coloraes com o iodo. A colorao obtida no experimento possui tom azul/roxo e aumenta de forma gradual assim como a colorao do mtodo DNS.
Tempo (min.) Tubos Alquota e amostra 0 0 (branco) 0,5mL gua destilada 0 1 0,5 mL soluo de amido com cido clordrico 10 2 0,5 mL soluo de amido com cido clordrico em banho maria
Pequena mudana colorao Tom forte

20 3 0,5 mL soluo de amido com cido clordrico em banho maria

J se nota mudana para tom mais forte Diminuio gradual cor

30 4 0,5 mL soluo de amido com cido clordrico em banho maria

Tom forte

40 5 0,5 mL soluo de amido com cido clordrico em banho maria

Tom forte

DNS + NaOH Lugol

Sem colorao

Sem colorao (sem quebra amido) Tom forte

Sem colorao

Diminuio gradual cor

Praticamente sem colorao

Quadro 1. Distribuio de amostras e tempos com os respectivos tubos para observao da hidrlise do amido, hipteses reais.

5. MATERIAS E MTODOS

5.1 MATERIAIS UTILIZADOS 1. 2. 3. 4. Erlenmeyer de 125 mL; Tubos de ensaio e estante para tubos de ensaio; Micropipeta e Pipeta; Banho-Maria.

5.2 REAGENTES UTILIZADOS 1. 2. 3. 4. 5. Soluo de Amido 1% (m/v); Soluo de Lugol (iodo-iodeto de potssio); Soluo de cido 3,5- Dinitrosaliclico; Soluo de Hidrxido de sdio 50%; cido Clordrico concentrado.

5.3 PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL 1.Preparou-se 2 conjuntos de 6 tubos de ensaio (kit A e kit B), numerando-os de 0 a 5; 2. Foram adicionadas com pipeta duas gotas de lugol nos seis tubos do kit A; 3. Transferiu-se 1 mL do reagente DNS para cada tubo do kit B, mais 100 L da soluo de Hidrxido de sdio 50%; (foi observado que o NaOH j estava se cristalizando pelo fato da temperatura ambiente) 4. Adicionou-se 0,5 mL de gua destilada, nos tubos de ensaio nmero 0 de cada kit. 5. Colocou-se 0,5 mL de soluo de amido nos tubos 1 do kit A e Kit B; (Os itens 5 e 6 a seguir dizem respeito ao preparo da soluo, que havia sido preparada previamente pelo monitor) 6. No ernlenmeyer de 125 mL adicionou-se 100 mL da soluo de amido 1%; 7. Adicionou-se 2 mL ou 4mL de cido clordrico concentrado no erlenmeyer 8. Misturou-se e retirou-se imediatamente uma alquota de 0,5 mL para o tubo 1 de cada kit (sem aquecer, temperatura ambiente); 9. Levou-se o erlenmeyer ao banho-maria em ebulio; 10. A cada 10 minutos, foi retirada uma alquota de 0,5 mL para os tubos de cada kit conforme apresentado no quadro 2; 11. Colocou-se os cinco tubos contendo o hidrolisado contendo o reativo DNS em banho-maria em ebulio por 5 minutos. 12. Observou-se a colorao apresentada pela reao com o lugol e pela reao com o DNS, aps o banho-maria. 13. Foram anotadas as alteraes de cores apresentadas nos dois kits durante a hidrlise do amido.

6. RESULTADOS E DISCUSSO Ao realizar-se os experimentos, observou-se os seguintes resultados apresentados no quadro 2:

Tempo (min.) Tubos Alquota e amostra 0 0 (branco)
0,5mL gua destilada

0 1
0,5 mL soluo de amido com cido clordrico

10 2
0,5 mL soluo de amido com cido clordrico em banho maria

20 3
0,5 mL soluo de amido com cido clordrico em banho maria

30 4
0,5 mL soluo de amido com cido clordrico em banho maria Tom forte

40 5
0,5 mL soluo de amido com cido clordrico em banho maria

DNS + NaOH

Sem colorao

Sem colorao (sem quebra amido) Colorao fraca

Pequena mudana colorao Colorao forte ( Diferena brusca)

J se nota mudana para tom mais forte Colorao forte

Tom forte

Sem colorao

Lugol

Colorao intermediria (Pequena diferena)

Colorao intermediria (Pequena diferena)

Quadro 2. Distribuio de amostras e tempos com os respectivos tubos para observao da hidrlise do amido, experimento real.

Tendo como base os resultados esperados, apresentados anteriormente nas hipteses, com relao aos resultados obtidos na prtica do experimento, possvel notar que o experimento realizado com o reagente DNS para determinao de aucares redutores foi realizado com sucesso, pois os resultados alcanados so condizentes com o esperado. A colorao observada atendeu ao que foi proposto na teoria, sendo os primeiros tubos (0 e I) sem colorao, os tubos do meio (II e III) com colorao intermediaria, com tons de amarelo e laranja devido a quebra progressiva do amido, e os ltimos tubos (IV e V) apresentando uma colorao em tons fortes de laranja avermelhado. J a experincia com o reagente Lugol, apresentou algumas varincias em relao a hiptese apresentada anteriormente. Foi observado que no primeiro tubo (0) no houve colorao, no tubo ( I ) ocorreu uma colorao fraca de roxo, nos tubos do meio (II eIII ) houve colorao em tons fortes de azul/roxo, com mudana brusca da colorao, e nos ltimos tubos ( IV e V) a colorao observada foi em tons de azul/roxo fraca, notandose pouca diferena entre o tom dos dois ltimos tubos. O erro pode ter ocorrido por diversos fatores, dentre eles a possibilidade de troca de tubo no momento de adio dos reagentes, ou adio de uma quantidade errada de reagente em um tubo (erro de calibrao da micropipeta), troca de tubos no momento de banho-maria dos mesmos, dentre muitos outros, alguns talvez nem observados pelo grupo.

7. CONCLUSO Apesar do experimento prtico ter apresentado falhas em sua execuo, tendo em vista o erro na colorao com o reagente Lugol, foi possvel demonstrar que o amido pode ser hidrolisado e obtido como produto final da hidrlise a glicose. Sendo a glicose um acar redutor, que ao passo em que a hidrlise acontece ocorre a diminuio da quantidade de amido ao mesmo tempo (proporcional) que a glicose formada.

8. BIBLIOGRAFIA

REMIO, Jose Oscar R. et al. Bioqumica: guia de aulas prticas. Verso online, Porto Alegre, EDI-PUCRS, 2003. Disponvel em: < http://books.google.com.br/books?id=9DTwnE1dOQC&pg=PA109&lpg=PA109&dq=hidrolise+acida+do+amido&source=bl&ots=TQH u6Yyaw&sig=aiNHoMD3rxEuMLJoj8SrboRFNS8&hl=pt&sa=X&ei=WecfUeflJo2W8gSl4YGg Aw&redir_esc=y > Acessado em: 19 fev. 2013.