Pesquisas Ecolgicas de Longa Durao

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Captulo

10
PELD

A Plancie Alagvel do Alto Rio Paran - Stio 6

2008

DIVERSIDADE NUCLEOTDICA MITOCONDRIAL ENTRE AS POPULAES DE ZUNGARO (SILURIFORMES, PIMELODIDAE) DAS BACIAS DO RIO PARAN E DO RIO TOCANTINS
Alberto Jos Prioli (Coordenador) Snia Maria Alves Pinto Prioli Laudenir Maria Prioli Horcio Ferreira Jlio Jnior Carla Simone Pavanelli Leia Carolina Lcio Rodrigo de Mello Slvia Aparecida Machado Talge Aiex Boni Thas Souto Bignotto Thiago Cintra Maniglia Vivian Nunes Gomes

RESUMO Peixes do gnero Zungaro so conhecidos como ja e so apreciados na alimentao humans e na pesca esportiva. um dos maiores peixes migradores do Brasil, podendo atingir at 150 Kg. Esto distribudos nas bacias do Paran-Paraguai e Amaznica e h um conflito taxonmico em relao s populaes dessas duas bacias. Nas ltimas dcadas o ja tem enfrentado um severo declnio populacional na bacia do alto rio Paran. Neste trabalho foram caracterizadas molecularmente as populaes de Zungaro das bacias do ParanParaguai e do rio Tocantins. A anlise de sequncias mitocondriais D-loop oferece suporte para a interpretao de que as populaes das bacias do Paran-Paraguai e Amaznica so de espcies diferentes. Os resultados representam forte evidncia em favor de alguns autores que sugerem que o ja do Paran-Paraguai deve ser identificado como Zungaro jahu e que na amaznia ocorre a espcie Zungaro zungaro.

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INTRODUO A ordem Siluriformes inclui 37 famlias de bagres amplamente distribudos em guas doces (Sullivan et al., 2006). A famlia Pimelodidae inclui o gnero Zungaro, antigamente identificado como Paulicea. So peixes de couro, podendo chegar a 144 cm e 150 Kg (Agostinho et al., 2003). So piscvoros, de hbito migratrio e preferem guas profundas de ambientes lticos. Popularmente so conhecidos como ja e apreciados na alimentao humana e na pesca esportiva. O ja ocorre nas bacias do rio Paran-Paraguai e Amaznica. Entretanto, as populaes dessas duas bacias foram caracterizadas morfologicamente como duas espcies diferentes. At o incio da dcada de 90, o ja era identificado como Paulicea luetkeni, mas Silfvergrip (1992) reconheceu que o gnero Pauliceia sinnimo jnior de Zungaro. De acordo com Lundberg e Littmann (2003) a espcie Zungaro jahu (Ihering, 1898) encontrada na bacia do rio Paran-Paraguai. Segundo os mesmos autores, na bacia do rio Amazonas e Orinoco ocorre a espcie Zungaro zungaro (Humboldt, 1821). Por outro lado, em reviso feita por Graa e Pavanelli (2007) foi adotada a interpretao de que todas as populaes de ja so da espcie Zungaro zungaro, em conformidade com Silfvergrip (1992) e Silvano et al. (2001). O ja ainda no se encontra nas categorias criticamente em perigo, ou em perigo, mas corre o risco de extino a mdio prazo, em funo do declnio populacional e da fragmentao da sua rea de ocupao. Segundo Alves (2006), o ja pode ser considerado localmente extinto em vrios trechos das bacias dos rios Grande e Paranaba devido s cascatas de reservatrios nesses rios. Informaes sobre a produo da pesca profissional no reservatrio de Itaipu revelam a diminuio da pesca de ja desde o incio da dcada de 90 (Okada et al., 2005). Alm disso, informaes sobre a biologia da espcie so escassas (Agostinho et al., 2003). Vrias regies do DNA mitocondrial so utilizadas para estudos populacionais e filogenticos. Por acumular mutaes rapidamente, a regio controle (D-loop) est entre as mais utilizadas para avaliaes de espcies prximas (Avise, 2004; Oliveira et al., 2006; Perdices e Doadrio, 2001; Panarari-Antunes et al., 2008; Prioli et al., 2002). Nesse trabalho, as populaes de ja das bacias do Paran-Paraguai e Tocantins foram caracterizadas molecularmente. As informaes podem auxiliar na resoluo de problemas taxonmicos e contribuir para o conhecimento, hoje praticamente inexistente, da diversidade gentica das populaes naturais do gnero Zungaro. 232
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MATERIAL E MTODOS As coletas de peixes identificados como Zungaro foram realizadas nas bacias do Paran-Paraguai e na bacia Amaznica, como mostrado na Figura 1. Na bacia do alto rio Paran as coletas ocorreram na regio de Porto Rico (PR) e na bacia do rio Paraguai as coletas foram no rio Manso. Na bacia amaznica, os exemplares de Zungaro foram capturados no rio Tocantins. Imediatamente aps a coleta, de cada indivduo foi retirada uma amostra de tecido muscular, que foi fixada em lcool etlico comercial, e armazenada a -20 oC. Para a extrao do DNA total das amostras foi utilizada a metodologia baseada em fenol/clorofrmio (Monesi et al., 1998), com pequenas modificaes. A quantificao e avaliao da qualidade do DNA foi realizada em gel de agarose, por comparao com quantidades conhecidas de DNA . Os fragmentos de DNA mitocondrial foram amplificados via PCR, a partir de amostras de DNA total, de acordo com Prioli et al. (2002). Foi amplificado uma sequncia nucleotdica parcial da regioD-loop, correspondente regio hipervarivel 5 da fita pesada. O produto final de cada reao de PCR foi utilizado diretamente para sequenciamento em plataforma MegaBace (Amersham), seguindo instrues do fabricante. As sequncias nucleotdicas, sob o formato de cromatograma, foram editadas manualmente com o programa BioEdit e alinhadas utilizando-se o CLUSTAL W. Alm das sequncias de Zungaro obtidas neste trabalho, foram utilizadas sequncias de espcies dos gneros Pseudobagrus e Hypostomus da ordem Siluriformes disponvies no GenBank (www.ncbi.nlm.nih.gov/Genbank/index.html), como mostrado na Tabela 1. Para garantir maior confiabilidade nas anlises, as sequncias foram alinhadas e s aproximadamente os primeiros 355 pb da extremidade 5da fita pesada foram considerados. Ainda, apenas as sequncias disponibilizadas que faziam parte de artigos j publicados em peridicos indexados na base Thompson-ISI (www.webofscience.com) foram selecionadas para as comparaes. Todos os nomes cientficos das espcies do GenBank foram pesquisados na base de dados www.fishbase.org para evitar comparaes entre espcies sinnimas. Essas espcies foram utilizadas como grupo externo e referncia para distncias interespecficas.

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Figura 1 - rea de coleta de ja Zungaro. Os nmeros correspondem aos pontos de coleta: (1) Rio Paran, regio de Porto Rico-PR; (2) Rio Manso, na bacia do rio Paran-Paraguai; (3) Rio Tocantins, na bacia Amaznica. Tabela 1 Sequncias regio D-loop de espcies dos gneros de Siluriformes, Pseudobagrus e Hipostomus, obtidas no GenBank. Famlia Espcie
Pseudobagrus taeniatus Pseudobagrus aurantiacus Pseudobagrus nudiceps Pseudobagrus ichikawai Pseudobagrus tokiensis

Acesso Genbank
AB097696 AB097694 AB097693 AB097692 AB097691

Bibliografia

Bagridae

Watanabe e Nishida, 2003.

Loricariidae

Hypostomus affinis Hypostomus punctatus Hypostomus commersoni Hypostomus nigromaculatus Hypostomus watwata Hypostomus plecostomus Hypostomus fonchii Hypostomus boulengeri

AJ318358 AJ318357 AJ318356 AJ318355 AJ318352 AJ318351 AJ318350 AJ318344

Montoya-Burgos, 2003.

O nmero de nucleotdeos polimrficos e as distncias-p (porcentagem de diferenas nucleotdicas) foram calculados com o programa MEGA 4.0. A matriz de distncia-p, foi utilizada para o agrupamento com o algoritmo neighbor-joining. Anlises de bootstrap basearam-se em 10.000 reamostragens.
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RESULTADOS Para a regio do D-loop, foram analisados quatro indivduos do Rio Manso e trs do Tocantins. Nas sequncias (A = 36,7; C = 17.7; G = 13.7; T = 31,9%) foi encontrada uma alta proporo de nucleotdeos AT, o que esperado para a regio D-loop. O alinhamento dessas seqncias apontou 20 pontos de substituies nucleotdicas, sendo 15 transverses e quatro transies. Essa maior taxa de transio (R = si/sv = 3.7) concorda com o esperado para o fragmento correspondente regio D-loop (Nei e Kumar, 2000). Dessas substituies 16 esto associadas aos indivduos coletados no rio Tocantins. As demais substituies no caracterizam nenhuma regio. Alm disso, os indivduos do rio Tocantins apresentam um indel correspondente a uma citosina. Na Tabela 2 so apresentados os polimorfismos da regio hipervarivel do D-loop, em nmero e em porcentagens, entre sequncias de indivduos dos rios Paran, Manso e Tocantins, comparadas duas a duas. Entre as sequncias dos rios Paran e Manso as diferenas foram de, no mximo, trs stios polimrficos (distncia-p = 0,008 ou 0,8%). Em contraste, a comparao entre as sequncias dos indivduos da bacia Paran/Manso com as sequncias do indivduos do rio Tocantins revelou 16-17 stios polimrficos Isso representa, em porcentagem, uma distncia-p de 4,5 a 4,8%. Tabela 2 Nmero (abaixo da diagonal) e porcentagem (acima da diagonal) de stios nucleotdicos da regio do D-loop (~355 pb) que discriminam espcies de Zungaro das bacias dos rios Paran (PR), Manso (MS) e Tocantins (RT). Espcie PR05 PR08 PR13 MS04 MS05 MS06 MS09 RT02 RT03 RT05 PR05 PR08 PR13 MS04 MS05 MS06 MS09 RT02 RT03 RT05 3 2 4 3 3 3 17 17 17 0,8 1 1 0 0 0 16 16 16 0,6 0,3 2 1 1 1 17 17 17 1,1 0,3 0,6 1 1 1 17 17 17 0,8 0,0 0,3 0,3 0 0 16 16 16 0,8 0.0 0,3 0,3 0,0 0 16 16 16 0,8 0.0 0,3 0,3 0,0 0,0 16 16 16 4,8 4.5 4,8 4,8 4,5 4,5 4,5 0 0 4,8 4.5 4,8 4,8 4,5 4,5 4,5 0,0 0 4,8 4.5 4,8 4,8 4,5 4,5 4,5 0,0 0,0 235

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Entre espcies congenricas, para a regio D-loop frequentemente so encontrados valores da ordem de 4-5%, semelhantes aos registrados entre as bacias do Paran/Paraguai e do rio Tocantins. Nas Tabelas 3 e 4 tambm so mostrados os valores, em nmero e em porcentagem, de stios polimrficos, do segmento correspondente da regio D-loop, entre espcies dentro dos gneros Pseudobagrus e Hypostomus, da ordem Siluriformes. Como pode ser constatado, as diferenas entre Zungaro do Paran/Paraguai e do Tocantins mantiveram-se nos mesmos patamares, de aproximadamente 5%, de muitas das distncias entre espcies congenricas de Pseudobagrus e Hypostomus.

Tabela 3 Nmero (abaixo da diagonal) e porcentagem (acima da diagonal) de stios nucleotdicos da regio do D-loop (~355 pb) que discriminam espcies de Pseudobagrus. Espcie P taeniatus P. aurantiacus P. nudiceps P. iehikawai P. tokiensis
P.taeniatus P. aurantiacus P. nudiceps P. iehikawai P. tokiensis

4 17 28 19

1.1 18 30 20

4.7 5.0 24 18

7.8 8.3 6.6 27

5.3 5.5 5.0 7.5

Tabela 4 Nmero (abaixo da diagonal) e porcentagem (acima da diagonal) de stios nucleotdicos da regio do D-Loop (~355 pb) que discriminam espcies de Hypostomus. Haf = H. affinis, Hpu = H. punctatus, Hco = H. commersoni, Hni = H. nigromaculatus, Hwa = H. watwata, Hpl = H. plecostomus, Hfo = H. fonchii, Hbo = H. boulengeri. Espcie Haf Hpu Hco Hni Hwa Hpl Hfo Hbo Haf 21 22 27 32 27 38 25 Hpu 5.7 16 27 22 17 31 17 Hco 6.0 4.4 26 21 22 32 19 Hni 7.4 7.4 7.2 35 29 31 24 Hwa 8.7 6.0 5.8 9.6 25 41 28 Hpl 7.3 4.6 6.0 7.9 6.8 36 17 Hfo 10.3 8.4 8.8 8.5 11.1 9.8 35 Hbo 6.8 4.6 5.2 6.6 6.1 4.6 9.5

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No dendrograma construdo com distncia-p para a regio D-loop (Figura 2), possvel a constatao da separao de dois grupos de hapltipos de ja, com suporte de bootstrap de 100%. Um haplogrupo est associado bacia do Paran-Paraguai e um hapltipo est associado com a bacia do rio Tocantins. Alm disso, as espcies dos gneros Hypostomus e Pseudobagrus, de Siluriformes, foram includas para referenciar as comparaes. No dendrograma neighbor joining, construdos com distncia-p, os comprimentos dos braos entre sequncias so proporcionais frequncia de substituies nucleotdicas. Fica evidente, portanto, que o nvel de diferenciao entre os hapltipos de Zungaro do Paran-Paraguai e o hapltipo de Zungaro do rio Tocantins de magnitude semelhante ao que entre muitas espcies congenricas de Hypostomus e Pseudobagrus.

Figura 2 - Dendrograma das distncias-p da regio D-loop de oito espcies do gnero Hypostomus, cinco espcies do gnero Pseudobagrus e de Zungaro das bacias dos rios Paran, Paraguai (Manso) e Tocantins. As seqncias despcies de Hypostomus e Pseudobagrus foram obtidas no GenBank.
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DISCUSSO Em contraposio a Lundberg e Littmann (2003), que identificam a espcie da bacia do rio Paran como Zungaro jahu, Silfvergrip (1992) e Graa e Pavanelli (2007) utilizam Z. zungaro para a mesma populao, pelo menos em carter provisrio. Portanto, a condio taxonmica da populao nativa da bacia do Paran-Paraguai, em relao espcie amaznica, est sujeita a interpretaes discrepantes. A anlise das seqncias mitocondriais D-loop de Zungaro produziu evidncias que apontam para a soluo desse conflito. Os valores de distncia-p obtidas com D-loop so consistentes em indicar diferenciao gentica entre as populaes de Zungaro das bacias do Paran/Paraguai e do rio Tocantins. Alm disso, a magnitude da divergncia encontrada est em patamar que permite concluso sobre a identificao taxonmica dos dois grupos. Como demonstrado, existe divergncia gentica entre as populaes de Zungaro das bacias Paran-Paraguai e Amaznica, mesmo que em patamar no muito acentuado. Esse seria um nvel de diferenciao que se poderia esperar entre espcies prximas, que oferecem dificuldades para a identificao em bases morfolgicas. O alto grau de semelhana morfolgica e gentica, e a associao de hapltipos com bacias hidrogrficas, podem ser explicados pela origem das populaes. As hipteses de vicarincia e disperso so plausveis para explicar a diferenciao gentica e o padro biogeogrfico. Hubert e Renno (2006) mostram que a separao das bacias Amaznica e do ParanParaguai ocorreu no final do Mioceno, nos ltimos 10 Ma. Entretanto, as diferenas genticas acumuladas esto, aparentemente, em nveis muito baixos para o que poderia ser esperado no perodo de 10 Ma. Independentemente do processo inicial, vicarincia ou disperso, o isolamento geogrfico deve ter se estabelecido em momento posterior separao das duas bacias. De acordo com Rsnen et al. (1995), as ocorrncias de captura de cabeceiras continuaram mesmo aps o estabelecimento da bacia Amaznica e do Paran-Paraguai. Portanto, o efetivo isolamento geogrfico pode ter sido estabelecido depois da separao das duas bacias. Esta interpretao parece acomodar melhor a divergncia gentica em nveis baixos, como a encontrada. O acentuado padro geogrfico na distribuio dos hapltipos D-loop, juntamente com o padro de diferenas entre espcies congenricas, demonstram claramente diferenas entre as duas populaes de Zungaro em nveis que discriminam espcies de peixes. Portanto, parece inevitvel concluir que a populao de Zungaro da bacia do Paran-Paraguai no pertence espcie de Zungaro zungaro da bacia Amaznica. 238
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Segundos os resultados do presente trabalho, as populaes de ja da bacia do ParanParaguai devem ser identificadas como Zungaro jahu. Essa concluso relevante, pois a espcie de ja encontrada na bacia do alto Paran est sob o risco de extino local (Alves, 2006). Assim, as informaes sobre a diversidade gentica de Zungaro obtidas neste trabalho representam uma contribuio para nortear propostas de aes que possibilitem a recuperao da diversidade gentica de Z. jahu. Principalmente, fica demonstrado que possveis transferncias de Zungaro da regio amaznica para as reas do alto rio Paran onde o ja est extinto no representaria repovoamento, mas sim introduo da espcie Z. zungaro. REFERNCIAS Agostinho, A.A.; Gomes, L.C.; Suzuki, H.I.; Jlio, Jr H.F. 2003. Migratory fishes of the Upper Paran River Basin, Brazil. In: Carolsfeld, J., Harvey, B., Ross, C., Baer, A. (Eds.), Migratory Fishes of South America: Biology, Fisheries and Conservation Status. World Fisheries Trust The World Bank, pp. 19-98. Alves, C.B.M. 2006. Ja (Zungaro jahu): Um peixe mais ameaado que os outros? Boletim sociedade Brasileira de Ictiologia. 83, 4-5. Avise, J.C. 2004. Molecular Markers, Natural History, and Evolution, second ed. Sinauer Associates Inc. Publisher, Sundeland, Ma. Graa, W.J.; Pavanelli, C.S. 2007. Peixes da plancie de inundao do alto rio Paran e reas adjacentes. EDUEM - Editora da Universidade Estadual de Maring, Maring. Hubert, N.; Renno, J.-F. 2006. Historical biogeography of South American freshwater fishes. J. Biogeogr. 33, 14141436. Lundberg, J.G.; Littmann, M.W. 2003. Famlia Pimelodidae, in: Reis, R.E., Kullander S.O., Ferraris, S.J. (Eds.), Check List of the Freshwater Fishes of South and Central America. EDIPUCRS, Porto Alegre, pp 432-446. Ministrio do Meio Ambiente 2007. Biodiversidade e Florestas: Espcies ameaadas. Disponvel em http://www.mma.gov.br. Monesi, N.; Jacobs-Lorena, M.; PaLarson, M.L. 1998. The DNA puff gene BhC4-1 of Bradysia higida is specifically transcribed early prepupal salivary glands of Drosophila melanogaster. Chromosoma. 10, 559-569. Montoya-Burgos, J.I. 2003. Historical biogeography of the catfish genus Hypostomus (Siluriformes: Loricariidae), with implications on the diversification of Neotropical ichthyofauna. Mol. Ecol. 12, 1855-1867.
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