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Srie Tcnica Floresta e Ambiente
MTODOS DE ANLISE EM QUMICA DA MADEIRA
(Mtodos de anlise qumica utilizados no Laboratrio de Qumica da Madeira do Departamento de Produtos
Florestais do Instituto de Florestas da UFRRJ)
Heber dos Santos Abreu, Alexandre Monteiro de Carvalho, Maria Beatriz de Oliveira
Monteiro, Regina Paula Willemen Pereira, Hulda Rocha e Silva, Kelly Carla de
Almeida de Souza, Kelysson de Freitas Amparado, Daniel Bastos Chalita
Departamento de Produtos Florestais do Instituto de Florestas/UFRRJ
BR 465, Km 07 - Seropdica
Cep. 23890-000
APRESENTAO
A presente publicao tem o objetivo de dar suporte metodolgico aos usurios de laboratrios
de Qumica da Madeira, relacionando mtodos e procedimentos utilizados em qumica da madeira,
principalmente nas aulas prticas e no desenvolvimento de pesquisas. Os mtodos descritos visam
facilitar professores, pesquisadores, estudantes, laboratoristas e interessados que desenvolvem
pesquisas relacionadas madeira e outros materiais lignocelulsicos, principalmente com relao
obteno de celulose, hemicelulose, lignina e seus produtos de transformao. Alguns mtodos foram
ajustados s condies de trabalho do laboratrio, melhorando assim os resultados obtidos.
INTRODUO
A madeira ou qualquer outro material
lignocelulsico constitui um acervo qumico e
bioqumico cuja constituio e organizao
ainda reveste-se de segredos e
desconhecimentos, apesar do grande avano
tecnolgico nas ltimas dcadas. A constituio
qumica dos materiais lignocelulsicos
abrangente e diversificada, com relao s
substncias que nelas se traduzem em um
sistema multimolecular de alta complexidade
estrutural, de ligaes cruzadas e de grande
importncia na preservao e nas propriedades
dos materiais lenhosos. Hoje a qumica da
madeira toma novos rumos e novos desafios
com o aprimoramento tecnolgico das anlises
e ao surgimento de madeiras modificadas por
transgenia, mutao e melhoramento gentico,
portanto, novos conhecimentos havero de
advir com novas fontes de informaes at
ento desconhecidas. Esta complexidade e
progresso tecnolgico fascinam, o especialista
em busca de metodologias mais adequadas na
rotina de um laboratrio de qumica da
madeira. Os mtodos descritos neste artigo so
comumente usados em laboratrios de qumica
da madeira, alguns na forma originalmente
descritos, outros modificados. A inteno do
grupo de Qumica e Bioqumica da Lignina do
Departamento de Produtos Florestais ser o
lanamento continuado de outros artigos sobre
mtodos em qumica e bioqumica da madeira.
2
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Srie Tcnica Floresta e Ambiente
1. PREPARO DA MADEIRA LIVRE
DE EXTRATIVOS
1.1. Aparelhagem
a) Aparelho de extrao tipo Soxhlet;
b) Erlenmeyer ou balo de 1000mL;
c) Banho-maria;
d) Equipamento para filtrao: funil de placa
sinterizada de porosidade mdia, kitasato e
fonte de vcuo;
e) peneira granulomtrica.
1 .2. Solventes
a) Ciclohexano;
b) Soluo lcool etlico:ciclohexano (1:2);
c) Etanol 95%;
d) gua destilada.
1.3.Procedimento
- Utilizar a frao que atravessa a peneira
nmero 16 internacional (malha 40 ASTM)
e a que fica retida na peneira nmero 24
internacional (malha 60 ASTM).
- A partir da amostra seca ao ar, transferir uma
dada quantidade para o tubo de extrao,
de maneira que a serragem no atinja a
extremidade superior do sifo.
- Extrair seguindo a srie eluitrpica na ordem:
ciclohexano, lcool etlico:ciclohexano (1:2)
e lcool etlico 95%, durante 4-6 horas para
cada extrao.
- Transferir a serragem para o funil de placa
sinterizada, remover o excesso de solvente,
por suco e ao final de cada extrao
remover o tubo de extrao at evaporao
total do solvente.
- Aps a extrao com etanol, transferir o
material para o erlenmeyer ou balo de vidro
e extrair sucessivamente com 3 pores de
1000mL de gua destilada, aquecendo o
frasco em cada extrao durante 1 hora em
banho-maria a 100C.
- Filtrar, lavar com 500mL de gua destilada
quente e deixar o material secar
completamente ao ar.
2. PREPARAO DO MATERIAL
LIGNOCELULSICO LIVRE DE
PROTENA
- Tratamento para solubilizar protena total de
materiais lignocelulsicos de tecidos jovens
de plantas, folhas, cascas, frutas.
2.1. Procedimento
- Pesar 1g do material livre de extrativos e
colocar em um Erlenmeyer de 250mL,
contendo 40mL de soluo de pepsina (1%
em cido clordrico 0,1N).
- Manter em banho-maria a 40C por 13
horas. Aps este perodo a amostra deve
ser filtrada sob vcuo em um funil de placa
sinterizada. Deve ser realizada lavagem
utilizando 48mL de gua bidesionizada
quente e 12,8mL de cido sulfrico (5%)
por duas vezes. Em seguida a amostra deve
ser transferida para um balo de vidro
contendo 240mL de cido sulfrico (5%) e
colocada em refluxo por uma hora. Filtrar
utilizando um funil de placa sinterizada e
realizar a lavagem com 48mL de gua
bidesionizada quente por duas vezes. Em
seguida, realizar mais duas lavagens com
32mL de etanol e duas lavagens com 24mL
de ter.
3. LIGNINA DE KLASON (INSOL-
VEL)
3.1. Aparelhagem
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Srie Tcnica Floresta e Ambiente
a) Banho - maria;
b) Vidro de relgio;
c) Tubo de ensaio;
d) Pipetas;
e) Cadinho de porcelana;
f) Estufa ou dessecador de vidro;
g) Balana analtica;
h) Basto de vidro.
3.2. Reagente
a) cido Sulfrico
3.3. Procedimento
- Transferir aproximadamente 300mg de
amostra seca de madeira livre de extrativo para
um tubo de ensaio, e adicionar lentamente 3mL
de cido sulfrico (72%).
- A amostra deve ser homogeneizada por
agitao contnua durante 1 minuto. Conservar
a mistura por 1 hora entre 25 e 30C, agitando
freqentemente se necessrio.
- Transferir o material para um balo de 250mL
e diluir a soluo de cido sulfrico, adicio-
nando 84mL de gua destilada.
- Deixar o material em refluxo por 4 horas,
depois em repouso para sedimentao do
resduo. Retirar a soluo por meio de pipeta.
- Em seguida lavar o resduo com 500mL de
gua destilada quente em um funil de placa
sinterizada. Retirar a soluo por meio de
pipeta.
- Secar em estufa a 105C ou em dessecador
de vidro com anidrido fosfrico, at peso
constante.
- Proceder a anlise por duas vezes.
- Devem ser realizadas duas pesagens com
variao de 0,2mg.
- A porcentagem de lignina calculada pela
seguinte frmula:
% lignina = (Peso Seco do resduo (mg) /
peso da amostra de madeira) x 100
4. LIGNINA DE WILLSTTTER OU
DE CIDO CLORDRICO
4.1. Procedimento
- Tratar 1g de madeira moda livre de extrativo
(partculas superiores a 40 mesh) com 20mL
de cido clordrico (40 - 42%), sob
temperatura de 1 a 5C.
- A suspenso obtida deve ser agitada
freqentemente durante 2 horas
temperatura ambiente. Aps esse processo,
adicionar gelo picado (aproximadamente
6,5g). Em seguida, a soluo deve
permanecer em repouso durante 18 horas a
temperatura ambiente.
- Logo aps, adicionar 6,5mL de gua
destilada e centrifugar a mistura final. Lavar
o precipitado formado com cido clordrico
(1:1; 20mL), depois com gua destilada
promovendo novamente uma centrifugao.
- Aquecer o resduo proveniente da
centrifugao em 20mL de gua destilada,
temperatura de ebulio, com gradual adio
de carbonato de sdio, at neutralizao do
pH da soluo.
- O precipitado deve ento ser removido por
centrifugao e novamente tratado com
20mL de gua destilada em ebulio, por 10
minutos e em seguida centrifugar. Este ltimo
processo deve ser repetido trs vezes.
5. LIGNINA DE BJRKMAN
5.1. Procedimento
- Moer a madeira.
- Homogeneizar as partculas para 40 mesh.
- Extrair com acetona ou outro solvente.
- Secar at obter peso constante com anidrido
fosfrico ou cloreto de clcio em um
4
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Srie Tcnica Floresta e Ambiente
dessecador de vidro.
- Moer em um moinho de bolas giratrio ou
outro tipo de moinho correspondente.
- Extrair com dioxano (800 mL/42mL de gua)
por 4 dias sob agitao magntica.
- Filtrar a soluo de dioxano por duas vezes
em um funil de porcelana, utilizando papel
de filtro, consecutivas.
- Evaporar a soluo a 40C em 55mbar de
presso negativa. No incio da operao, a
presso deve ser inferior a este valor.
- Evaporar completamente a soluo dioxano/
gua.
- Aps a evaporao, adicionar 100mL de
cido actico/gua 9:1 para dissolver a
lignina. Esta soluo deve ser adicionada sem
aquecimento para evitar a formao de
steres.
- Observao: Preparar, pelo menos,
200mL de cido actico. Usar 10mL para
limpar os funis.
- Aps dissolver o material por completo,
filtrar, primeiramente, em um funil de vidro
sinterizado de placa porosa nmero 5 e
depois no funil de nmero 4.
- Transferir a soluo de cido actico, filtrada,
para um funil de separao. Gotejar a
soluo em uma poro de 1600mL de gua
destilada ou 10 vezes o volume da soluo
de cido actico usada, sempre com
agitao.
- Filtrar a soluo aquosa em um funil de
porcelana com papel de filtro.
- Recolher este material filtrado em uma placa
de petri.
- Este material deve permanecer em um
dessecador de vidro com KOH.
- Aps seco, dissolver em uma soluo de 1,2-
dicloroetano + etanol (2:1), no mais do que
100mL.
- Gotejar em ter etlico por duas vezes,
alternado com duas operaes de
centrifugao. A lavagem constitui a ltima
etapa deve ser realizada com ter de
petrleo.
6. LIGNINA DIOXANO
6.1. Material
a) Uma certa quantidade de madeira;
b) 200mL (dioxano/H
2
O): 9/1;
c) 180mL de dioxano;
d) 20mL de H
2
O destilada
e) Balo de 1000mL com trs sadas;
f) Condensador de bolas;
g) Funil de decantao de 200mL;
h) 1,46mg HCl ou 1,23mL de HCl.
i) Chapa de aquecimento;
j) Evaporador rotatrio;
l) Centrfuga;
m) Dessecador e fonte de vcuo.
6.2. Procedimento
- Adicionar lentamente em um balo de
1000mL de trs sadas e contendo amostra
de lignina, uma soluo de (dioxano e H
2
O
(9:1)) + HCl.
- A mistura reacional adquirida deve ser
aquecida em uma chapa de aquecimento a
90-95C, em atmosfera de nitrognio, por
um perodo de 0,5-48horas.
- Em seguida, deixar esfriar a mistura reacional
ainda em atmosfera de N
2.
Depois filtrar e
lavar utilizando um funil de placa sinterizada
com 12mL da mesma soluo.
- O extrato (soluo cida) deve ser
concentrado, em um evaporador rotatrio,
at o aparecimento de um material viscoso.
- Precipitar este material em um grande volume
de H
2
O destilada sob agitao permanente.
- O precipitado deve ser separado por
centrifugao e, em seguida, lavado
totalmente com gua destilada por trs
vezes.
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Srie Tcnica Floresta e Ambiente
- A amostra, em seguida, dever ser seca em
um dessecador com anidrido fosfrico sob
vcuo.
7. DETERMINAO DO TEOR DE
LIGNINA UTILIZANDO
BROMETO DE ACETILA
7.1.Procedimento
- 5g de madeira livre de extrativo devem ser
colocados em um trap de vidro de 15 mL
contendo uma soluo de 25% (p/p) de
brometo de acetila em cido actico (5mL)
contendo cido perclrico (70%) (0,2 mL).
- Os traps devero ser fechados e colocados
em uma estufa a 70
o
C por 30 minutos.
- Durante a digesto o mesmo, dever ser
agitado em intervalos de 10 minutos.
- Aps a digesto a soluo dever ser
transferida quantitativamente para um balo
volumtrico de 100mL contendo NaOH 2M
(10mL) e cido actico (25mL).
- Em seguida o material restante no trap dever
ser lavado com cido actico e adicionado
ao balo volumtrico at completar 100mL.
- O espectro no UV dever ser registrado
tendo uma soluo branca e uma amostra
de lignina como padro. A absoro da
lignina ser medida em 280nm.
- Uma curva de calibrao deve ser realizada.
% de lignina= 100 (As-Ab)V/aw
As e Ab= Absorbncia da amostra e do
padro, respectivamente.
V= Volume da soluo
a=Absorvidade da lignina padro 1g
-1
cm
-1
(pode ser uma lignina conhecida)
w=Peso da amostra
8. DETERMINAO DO TEOR DE
CELULOSE POR REAO COM
CIDO NTRICO
8.1. Aparelhagem
a) Manta de aquecimento;
b) Chapa de aquecimento;
c) Funil de vidro simples;
d) Funil de placa perfurada;
e) Becher;
f) Kitasato;
g) Condensador de refluxo;
h) Balo de fundo chato ou fundo redondo.
8.2. Reagente
a) cido ntrico;
b) Etanol P.A.;
c) Soluo de cido actico 1%;
d) Soluo de NaOH 4%.
8.3. Procedimento
- Refluxar 5g de madeira moda por 1 hora em
uma soluo alcolica de cido ntrico
(densidade 1,4).
- Filtrar o material e aquecer com gua
destilada durante 30 minutos.
- Extrair o resduo com uma soluo aquosa
de NaOH (4%) durante 40 minutos. Este
resduo deve ser lavado com gua destilada,
depois com cido actico e novamente com
gua. Posteriormente, deve ser levado
estufa a 105C e seco at peso constante.
Obs.: Preparar a soluo em capela, na
proporo de 100mL de etanol e 25mL
de cido ntrico. O etanol pode ser
substitudo pela gua.
9. DETERMINAO DO TEOR DE
6
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Srie Tcnica Floresta e Ambiente
METOXILA DE LIGNINA E DE
MATERIAIS LIGNOCELULOSI-
COS ATRAVS DO MTODO DE
SEIZEL MODIFICADO
9.1. Produtos
a) Cristais de fenol;
b) Fsforo vermelho;
c) cido ioddrico d = 1.7;
d) Amido e bicarbonato de sdio = 1:1;
e) Soluo de acetato de sdio + cido
actico;
f) Bromo;
g) Acetato de sdio cristalino;
h) Iodeto de potssio;
i) Amido;
j) Soluo de tiossulfato de sdio N/10;
k) CO
2
ou N
2.
9.2. Aparelhagem
a) Recipiente para a lignina (cpsula
gelatinosa ou um pequeno tubo de vidro
com uma das extremidades fechada);
b) Aparelho para determinao de metoxila;
c) Pipeta de 5mL;
d) Esptula;
e) Pipeta de 10mL;
f) Pissete;
g) Vidro de relgio de 6 cm de dimetro;
h) Bureta de 50mL (1/100mL).
9.3. Procedimento A
- No balo (K), como mostra a figura 1,
adicionar uma poro de fsforo vermelho,
utilizando apenas a ponta de uma esptula,
alguns cristais de fenis, 0,5mL de anidrido
actico e logo depois 10mL de cido
ioddrico (d=1,7). O balo deve ser
conectado ao resto do aparelho, j com o
condensador refrigerado pela circulao de
gua. Tambm deve ser controlada a vazo
de CO
2
ou N
2
em, aproximadamente, 30
borbulhas por minuto.
- Deixar refluxar o contedo deste balo por
30 minutos em banho de leo, temperatura
de ebulio do sistema (140-150C), e
depois deixar esfriar, utilizando a corrente de
CO
2
.
Figura 1. Aparelho de vidro para determinao
de metoxila.
9.4. Procedimento B
- Na parte W do aparelho (Figura 1)
adicionar uma soluo de amido/bicarbonato
de sdio. O recipiente de absoro V
1
deve
ser completado com 10mL de uma soluo
de acetato de sdio e cido actico. Em V
1
adicionar 12 gotas de bromo e promover a
passagem de 1/3 da parte do volume de V
1
para V
2
, de maneira que o recipiente V
1
mantenha o dobro do volume de V
2
. Aps
isso, o aparelho estar apto para o
funcionamento.
- Pesar 20-30mg de lignina (0,02mg) em um
pequeno recipiente de vidro e colocar no in-
terior do balo.
- Aquecer rapidamente o balo (140-150C),
mantendo a gua fria em circulao no
condensador durante 45 minutos.
- Depois, retirar o produto e transportar
quantitativamente para um Erlenmeyer.

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Srie Tcnica Floresta e Ambiente
- Em seguida, adicionar duas pores de
acetato de sdio (ponta de esptula) e
algumas gotas de cido frmico, at a
soluo se tornar totalmente transparente.
Nesse momento, adicionar 1g de KI e deixar
o recipiente tampado com vidro de relgio
por 5 minutos em ausncia de luz.
- Aps este procedimento, titular com
tiossulfato de sdio N/10. O contedo
reacional do balo poder ser utilizado para
5 determinaes.
0,517 x V x 100 = % OCH
3
E
V= Volume em mL de tiossulfato de sdio N/
10 consumido
E= Peso da lignina em mg
10. PREPARO DE SOLUO PARA
DETERMINAO DO TEOR DE
METOXILA
10.1. Soluo aquosa de amido
- Utilizar 5g de amido para 1 litro de gua des-
tilada.
- Agitar a soluo durante 5 minutos em aque-
cimento e depois filtrar em papel de filtro.
10.2 Soluo aquosa de bicarbonato de
Sdio
- Utilizar 100g de bicarbonato de sdio para
1 litro de gua destilada.
10.3. Soluo amido/bicarbonato de sdio
- Juntar 500mL da soluo de amido com
500mL de soluo de bicarbonato de sdio.
106.4 Soluo de acetato de sdio e cido
actico
- Utilizar 28g de cido actico e 8g de acetato
de sdio.
- Juntar ambos em um frasco e agitar at
solubilizar completamente o acetato de sdio.
11. METILAO DE HIDROXILA
FENLICA
11.1. Procedimento
- Em um balo de vidro, em gelo, dissolver 2g
de p-toluilsulfonil-metil-nitrosamida em
30mL de ter etlico, em seguida adicionar
10mL de uma soluo de etanol (96%) e
KOH a 4% (w/v), deixando em banho de
gelo durante 5 minutos. Com o aparecimento
de um precipitado amarelo, torna-se
necessrio adicionar mais etanol para
dissolv-lo.
- Em seguida, destilar a mistura reacional em
banho-maria a 40C para liberao de
diazometano-ter. O destilado deve ser re-
colhido em um Erlenmeyer contendo 1g de
lignina, dissolvida em uma soluo de
dioxano-metanol (10:2 v/v) resfriado a 0C.
Aps 40 horas a 4C, evaporar a soluo e
dissolver o resduo em 10mL de dioxano. A
lignina deve ser precipitada em ter etlico e
recuperada por centrifugao.
- Observao: o material reacional explosivo,
no devendo ser agitado. O uso de aparelho
de vidro com juntas esmerilhadas deve ser
tambm evitado.
12. METILAO TOTAL
12.1. Procedimento
- Dissolver 200mg de lignina em 15mL de
dioxano/H
2
O a 96%(v/v) concentrao co-
mercial, acrescentar 3g de NaOH modo, em
2mL de sulfato de metila. Aps 4 horas de
agitao, temperatura ambiente, neutralizar
a mistura com HCl 1N. Precipitar, a lignina
inteiramente metilada em ter etlico e,
8
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Srie Tcnica Floresta e Ambiente
depois, recolher por centrifugao.
Observao: O sulfato de metila requer
cuidados especiais, no devendo entrar em
contato com a pele.
13. OXIDAO DA LIGNINA POR
NITROBENZENO
13.1. Procedimento
- Fibras: Colocar em uma microbomba de ao
inox de 45mL o material livre de extrativo
(700mg), NaOH (10mL) 2 N e nitrobenzeno
1mL. Aquecer a mistura em 170C por duas
horas e depois esfriar com gua fria. Lavar a
mistura reacional com gua (2mL), para
depois, o filtrado, mais o produto da lavagem,
serem extrados com ter (5x50mL). Acidificar
o licor extrado a pH 3 com cido sulfrico 2
N e extrair novamente com ter (4x50mL).
- Secar o segundo extrato etrico por 24 horas
em sulfato de sdio anidro, evaporar, secar e
armazenar em um dessecador de vidro com
anidrido fosfrico. Dissolver o resduo etrico
em metanol (10mL), e usar o 3,4,5-
trimetilbenzaldedo como referncia interna,
como padro, para traar a curva de
calibrao que antecede a aplicao da
cromatografia de gs. Este mtodo tambm se
aplica a amostra pura de lignina. O nitrobenzeno
requer cuidados especiais, no devendo entrar
em contato com a pele.
14. REDUO DE GRUPOS ALDE-
DO TERMINAIS DA LIGNINA
POR NaBH
4
14.1. Procedimento
- Dissolver 100mg de lignina em uma soluo
de etanol (2mL) e (1mL) de NaOH 0,1N
em atmosfera de nitrognio. Adicionar 20mg
de N
a
BH
4
e 2mL de gua destilada. Aps 2
dias, a soluo deve ser acidificada a pH 4
com HCl diludo e, o produto da reao, deve
ser precipitado em gua destilada,
centrifugado e recentrifugado por 2 vezes
com gua (2x12mL) e seco a frio.
15. SAPONIFICAO DA LIGNINA
- Dissolver 20mg de lignina em NaOH 5%
(0,5mL), temperatura ambiente, em atmos-
fera de N
2
, e deixar em repouso durante 24
horas. Precipitar a lignina por acidificao a
pH 6-7, depois centrifugar, lavar duas vezes
com gua e secar a frio.
16. SOLUBILIDADE DA MADEIRA
EM HIDRXIDO DE SDIO 1%
16.1. Aparelhagem
a) Balana analtica com preciso de 1mg;
b) Estufa com temperatura mantida a
105C;
c) Banho-maria;
d) Equipamento para filtrao: funil de placa
sinterizada, 50mL de capacidade,
porosidade mdia; pesa-filtro; kitassato
com anel de borracha e fonte de vcuo;
e) Becher de 250 mg;
f) Pipeta volumtrica de 100mL;
g) Vidro de relgio;
h) Basto de vidro.
16.2. Reagentes
a) Hidrxido de sdio 1% (0,25 N);
b) cido actico 10%.
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Srie Tcnica Floresta e Ambiente
16.3. Amostragem
- A serragem utilizada ser aquela que atra-
vessar a peneira de n 16 internacional (malha
40 ASTM).
16.4. Procedimento
- A partir da amostra seca, pesar em um vidro
de relgio, uma quantidade equivalente a 2,0
g 0,1 g absolutamente seca.
- Transferir para um Becher de 200mL e adi-
cionar, com pipeta, 100mL de soluo de
NaOH e agitar com basto.
- Colocar o becher em banho-maria e cobrir
com vidro de relgio.
- Conservar em banho-maria exatamente por
uma hora, agitando rapidamente o contedo
do Becher aps 10, 15 e 25 minutos do
incio.
- Secar em estufa a 105C at peso constante.
- Transferir o funil de placa sinterizada para
um pesa filtro previamente tarado, deixar
esfriar em um dessecador e, em seguida,
pesar.
- A porcentagem dos produtos solubilizados
ser dada por:
X% = (Pi-Pf / Pf) X 100
E = Porcentagem de produto solubilizado
Pi = Peso inicial da amostra a.s. em g
Pf = Peso da amostra aps o ensaio
- Os resultados em duplicao no devem
variar mais de 5% do valor mdio. Com
cuidado possvel conservar a variao
dentro de 2%.
17. UMIDADE DA MADEIRA POR
SECAGEM EM ESTUFA
- Este o mtodo usado para a determinao
da umidade da madeira, atravs de secagem
em estufa a 105 3C, na madeira reduzida
a serragem.
- O presente mtodo no deve ser aplicado
quelas madeiras que contenham substncias
volteis que no a gua.
17.1. Aparelhagem
a) Balana analtica com preciso de
0,1mg;
b) Estufa com temperatura controlada a 105
3C;
c) Pesa-filtro com tampa esmerilhada ou cp-
sula de alumnio com tampa;
d) Dessecador com desidratante e
indicador de saturao (utilizar alumina
ou slica-gel).
17.2. Procedimento
- Aquecer o pesa filtro com a tampa a 105
3C, esfriar em dessecador e pesar com
preciso de 0,1mg. Repetir a operao at
obter o peso constante.
- Pesar 1 a 2g da amostra diretamente no pesa
filtro previamente tarado, secar em estufa a
105 3C por 4 horas.
- Tampar, transferir para o dessecador e deixar
esfriar at temperatura ambiente. Pesar com
preciso de 0,1mg. Repetir estas operaes
at obter peso constante, aquecendo por
perodos de 2 horas.
- O resultado expresso em porcentagem, pela
frmula:
U = (P-Pa.s./ P) x 100%
U = Umidade expressa em porcentagem
do peso inicial da amostra.
P = Peso inicial da amostra.
Pa.s. = Peso absolutamente seco da
amostra
- Observaes: Os resultados em duplicao
10
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Srie Tcnica Floresta e Ambiente
no devem diferir mais do que 0,2%.
Se conveniente, expressar esta determina-
o em termos da porcentagem absoluta-
mente seca (% a. s. = 100 U).
18. DETERMINAO DE HOLOCE-
LULOSE POR CLORAO
18.1. Aparelhagem
a) Funil de placa sinterizada
b) Erlenmeyer (250 e 25mL)
c) Banho-maria
d) Papel Filtro
e) kitasato e fonte de vcuo
18.2. Reagentes
a) cido actico
b) Clorito de sdio (80%)
18.3. Procedimento
- A amostra de madeira deve estar completa-
mente livre de extrativos e totalmente seca.
- Para 2,5g de amostra deve-se adicionar 8mL
de gua destilada quente, 0,5mL de cido
actico e 1g de clorito de sdio em um
Erlemmeyr de 250mL. Recomenda-se
tampar o Erlenmeyer.
- A mistura deve ser aquecida em um banho-
maria a 70
o
C. Aps 60 minutos, 0,5mL de
cido actico e 1g de clorito de sdio deve
ser adicionado. Aps sucessivas horas,
0,5mL de cido actico e 1g de clorito de
sdio devem ser readicionados sob agitao.
Essa etapa deve ser repetida at as fibras
mostrarem-se completamente separadas da
lignina. Normalmente so necessrias 6 horas
de clorao.
- Aps esse perodo, a amostra reacional deve
ser mantida em repouso sem adio de qual-
quer reagente durante 24 horas.
- Esfriar o material e em seguida filtrar lavando
com gua destilada at a cor amarela e odor
de cloro desaparecerem completamente.
Essa etapa deve ser realizada sob vcuo.
Recomenda-se por ltimo adicionar acetona
e em seguida o material deve ser seco em
uma estufa a 105
o
C durante 24 horas.
- O material deve ser esfriado em um
dessecador por 1 hora para proceder a
pesagem.
19. DETERMINAO DO TEOR DE
-CELULOSE
19.1. Aparelhagem
a) Banho-maria ou chapa de aquecimento
b) 3 Bechers de 250mL
c) Filtro de porosidade mdia
19.2. Reagentes
a) Hidrxido de sdio 17,5% e 8,3%
b) cido actico 10% (misturar uma parte
por peso de cido glacial com 9 partes de
gua destilada).
19.3. Procedimento
- A amostra deve ser preparada a partir da
holocelulose.
- Pesar aproximadamente 2g de holocelu-
lose seca e colocar dentro de um Becher de
250 mL e cobri-lo com vidro de relgio.
- Medir 25mL de uma soluo de NaOH
17,5% em uma proveta e mant-la a 20
o
C.
- Adicionar 10mL da soluo de NaOH 17,5%
a holocelulose em um Becher de 250mL e
cobrir com um vidro de relgio mantendo a
temperatura a 20
o
C em um banho-maria.
- Manipular a holocelulose com um basto de
vidro, aps 2 minutos promover a macerao
at perceber que as partculas esto total-
p.01-20, Jan/2006 11
Srie Tcnica Floresta e Ambiente
mente separadas.
- Aps 5 minutos adicionar mais 5mL de NaOH
17,5% e agitar a mistura rigorosamente com
um basto de vidro at dissolver todo o ma-
terial
- Manter a mistura reacional a 20
o
C por 30
minutos perfazendo um total de tempo de
tratamento de 45 minutos.
- Adicionar 33mL de gua destilada a 20
o
C.
- Agitar o material contido no Becher mantendo
a temperatura 20
o
C durante 1 hora.
- Sob vcuo, filtrar o material reacional em um
filtro de porosidade mdia.
- Lavar o material com 100mL de NaOH 8,3%
e 20
o
C e em seguida lavar duas vezes com
gua destilada a mesma temperatura.
- No prprio filtro colocar 15mL de cido
actico 10% (temperatura ambiente),
aguardar 3 minutos e em seguida utilizar vcuo
para retirar todo cido actico.
- Lavar com gua destilada a 20
o
C por vrias
vezes at o resduo celulsico ficar livre com-
pletamente do cido actico.
- Lavar novamente com 250mL de gua des-
tilada e em seguida secar o material em uma
estufa a 105
o
C durante 24 horas.
- Esfriar o material em um dessecador por 1
hora, e em seguida pes-lo.
% de celulose = P
2
/P
1
x 100
P
2
= peso do resduo celulsico
P
1
= peso da amostra holocelulsica original
20. REDUO DO CONIFERALDE-
DO E SINAPALDEIDO
20.1. lcool coniferlico (Mtodo 1)
- Dissolver o coniferaldedo (50mg; 0,28mmol)
em acetato de etila (10mL). Adicionar
hidreto de boro e sdio (21mg; 0,56mmol;
2 equiv.) soluo e manter agitando por 1h
em temperatura ambiente. Durante este
tempo, deve ocorrer formao de um
precipitado amarelo. A mistura reacional
deve ser purificada em gua (50mL), a fase
orgnica separada e a fase aquosa extrada
com acetato de etila (2 x 50mL).
- As fases orgnica e aquosa devero ser com-
binadas em uma nica fase, e depois seca
em MgSO
4
anidro e evaporada a baixa
presso (40C) para obter lcool
coniferlico. Um slido branco/amarelo ou
algumas vezes um leo amarelo deve ser
formado (49,9mg; 99%). O lcool
coniferlico possui ponto de fuso de 78,2C.
20.2. lcool sinaplico
- O aldedo sinaplico reduzido conforme des-
crito para o lcool coniferlico. O rendimento
do lcool (leo) poder alcanar o valor de
94%. A cristalizao poder ser feita em
cloreto de metila/ter de petrleo.
20.3. lcool coniferlico (Mtodo 2)
20.3.1. Preparao do triacetoxihidreto
de boro e sdio.
- Preparar uma suspenso de NaBH
4
(74mg)
em acetato de etila (15mL) sob refrigerao
em um banho de gelo e gua. Adicionar
cido actico glacial (3,05eq), atravs de
uma seringa, gotejando por mais 5 min, at
a formao de uma soluo clara. A soluo
corresponde ao agente e pode ser usada
imediatamente.
Para larga escala (3,5g), a adio de cido
actico feita por gotejamento durante 30min,
e a agitao continuada por mais 30min.
20.3.2.lcool Coniferlico
12
p.01-20, Jan/2006
Srie Tcnica Floresta e Ambiente
- O coniferaldedo (134mg;0,753mmol) deve
ser adicionado ao triacetoxihidreto de boro
e sdio (3,0eq) preparado em acetato de
etila. A reao deve ser monitorada por CCD
(Cromatografia em camada delgada 5%
CH
3
OH em CH
2
CL
2
). O material inicial
desaparece completamente em 7hs.
Entretanto o meio reacional deve ser
mantido em repouso durante a noite e ento
diludo em acetato de etila e extrado com
gua (20mL). A fase orgnica deve ser
separada e a frao aquosa extrada com
acetato de etila (2x20mL).O acetato de etila
deve ser lavado com gua destilada (20mL),
NH
4
CL (20mL) e seco em MgSO
4
. A
evaporao do solvente produzir um
xarope amarelo ainda contendo cido
actico. O cido actico residual deve ser
removido por coevaporao com etanol
absoluto.
- A cristalizao deve ser realizada com
CH
2
CL
2
/ter de petrleo. Para preparao
em larga escala (5g), seguindo o mesmo
procedimento por aproximadamente 10hs
temperatura ambiente.
21. SNTESE DE DHP-POTENA
PELO MTODO CONTNUO
-50mg de lcool coniferlico, mp 73-75C,
deve ser dissolvido em uma soluo tampo
de fosfato (88mL) pH 5,5. Uma soluo de
peroxidase (300 unidades 275 unidades)
de 2,4mg dissolvida em 24mL de soluo
tampo de fosfato pH 5,5.
- 0,076mL de perxido de hidrognio deve
ser dissolvido em 88 mL de uma soluo
tampo de fosfato pH 5,5. O colcho de
soluo protica deve manter em agitao
constante para receber por gotejamento as
solues de peroxidase, perxido de
hidrognio e a soluo contendo o lcool
coniferlico.
- O material deve ficar em agitao durante 4
dias. Todo procedimento deve ser realizado
sob atmosfera de Nitrognio.
- Observao: dissolver 10mg de protena em
88mL de soluo tampo de fosfato.
- Aps 48 horas de reao, a soluo deve
ser centrifugada em 30.000rpm sob
refrigerao e lavado com H
2
O
bidesionizada por trs vezes
22. PREPARO DE SOLUO
TAMPO
- Dissolver 1,98g/L de KH
2
PO
4
e 5,3 g/L
de NaHPO
4
em H
2
O bidesionizada.
Ajustar o pH adicionando NaOH ou HCl.
23. PURIFICAO DO DHP-PRO-
TENA
- 10mg de DHP deve ser dissolvido em 800L
de 100mM de TRIS-HCl pH 8,8 ou 7,5 e
agitado por 5min. Depois 200L de uma
soluco tampo de fosfato pH 5.5 com
tripsina (5mg/mL) deve ser adicionada sob
forte agitao e em seguida deixada em
incubao durante 1 hora a 37
o
C tambm
sob agitao 960rpm). Aps isto o produto
reacional deve ser centrifugado a 15800rpm
(10 minutos) em uma centrfuga e o
sobrenadante retirado. O resduo deve ser
novamente suspenso em gua destilada e la-
vado por 4 vezes por centrifugao. A
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Srie Tcnica Floresta e Ambiente
amostra ser ento suspensa em gua desti-
lada (250 L) e depois resfriada e seca a frio.
24. ACETILAO DA LIGNINA
- Dissolver 300mg de lignina em 5mL de
piridina, em seguida, adicionar 5mL de
anidrido actico, ou usar a proporo (1:1)
durante 48 horas. Depois, a lignina deve ser
recuperada, por precipitao, da mistura
reacional em ter etlico e lavado cuidado-
samente por trs vezes com este mesmo
solvente usando a centrifugao. Posterior-
mente, secar a frio durante trs dias em um
dessecador de vidro, com KOH sob pres-
so reduzida.
25. DESACETILAO
- Dissolver 100mg de lignina acetilada em
NaOH 0,5 N a 2-5C e deixar em repouso
por 48 horas. A soluo deve ser neutralizada
em amberlite IR (120) (H
+
) e concentrada.
26. TESTE DE MULE
- O teste de Mule um procedimento analti-
co de reao de cor sobre o tecido lenhoso
ou lignina, para verificao da presena de
unidades de siringila.
- Na reao de Mule, o permanganato de
potssio reduzido pela madeira a dixido
de mangans, que depositado sobre a fibra,
reage com cido clordrico, formando cloro
em seguida reagindo com a lignina
26.1. Procedimento
- Preparar um corte citolgico de 20m de
espessura.
- Inserir em placa de Petri em soluo de
permanganato de potssio (1%) por cinco
minutos.
- Lavar por duas vezes com gua bidesionizada
e tratar com soluo de cido clordrico (3%)
at a cor passar de marrom escuro marrom
claro.
- Descartar a soluo de cido clordrico e la-
var a amostra com gua por duas vezes.
- Tratar com hidrxido de amnio concentra-
do.
27. TESTE DE WIESNER
- O reagente preparado atravs de uma com-
binao de 50mL de uma soluo de
floroglucinol 2% em etanol 95% e 25mL de
cido clordrico concentrado. A soluo deve
ser armazenada em vidro mbar devidamente
fechado at o momento da utilizao, quando
misturado ao cido clordrico.
- No momento da aplicao sobre o tecido
lenhoso imediatamente deve-se evidenciar a
cor violeta-avermelhada.
28. DETERMINAO DO TEOR DE
PROTENA TOTAL EM
ANALISADOR AUTOMTICO
KJELDAHL
28.1. Aparelhagem
a) Tubos de digesto de 80mL;
b) Erlenmeyer de 125mL;
c) Analisador automtico Kjeldahl;
d) Balana de preciso de 1mg;
28.2. Reagentes
a) cido sulfrico;
b) Soluo de hidrxido de sdio ( 44,4%);
c) Soluo indicadora de cido brico
(2%);
d) Soluo de THAM ( Tri-hidrxi-amino-
metano) 0,03N.
1
Z

11
Soluo de precursor Soluo de ero dse
Soluo po
er do de dro o
14
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Srie Tcnica Floresta e Ambiente
28.3. Procedimento
- A soluo de cido sulfrico deve ser padro-
nizada pela adio de 10mL de soluo
indicadora de cido brico (2%) e 5 mL de
soluo de THAM 0,03N. Aps a titulao
com cido sulfrico efetua-se o seguinte
clculo: Normalidade do cido = N do
THAM x Volume THAM / Tit. x THAM
- Com a normalidade do cido coloca-se o
tubo de digesto com amostra, j
previamente digerida, no Kjedahl auto
analyser.
- Soluo de Hidrxido de Sdio 44,4%
- Pesar 444g de Hidrxido de Sdio e dis-
solver em 0,8 L de gua, transferir para um
balo de 1 L e aferir o balo.
- Soluo indicadora de cido brico 2%.
- Soluo de THAM (Tri-hidroxi-
minometano) 0,03N
- Pesar 3,5g de Tri-hidroxi-amino metano e
dissolver em um balo volumtrico de 1L.
Aferir o balo.
29.PREPARAO DE MATERIAL
LIGNOCELULSICO PARA AN-
LISE POR ESPECTROMETRIA NO
INFRAVERMELHO E DE RMN
13
C
NO ESTADO SLIDO
- O material lignocelulsico livre de extrativo e
de protena, deve ser modo em um moinho
de bolas at apresentar aparncia de talco.
Dependendo do tipo de moinho e do material,
o tempo de moagem dever ser ajustado.
Aps moagem o material dever ser seco
em um dessecador contendo anidrido
fosfrico. De um a dois miligramas de material
destinar-se- ao infravermelho e 500 mg ao
RMN
13
C.
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Srie Tcnica Floresta e Ambiente
ANEXO
Tabela 1. Propriedades dos solventes citados neste artigo.
s e t n e v l o S ) C ( o i l u b E
0 2 D
4
0 2 N
D
e d o t n o P
o a m a l f n i
) C (
e d s o i e M
o a t a r d i s e D
a n o t e c A 6 5 1 9 7 , 0 9 5 3 , 1 8 1 -
l C a C
2
k ,
2
O C
3
,
r a l u c e l o m a r i e n e p
3
o c i t c A o d i c
o r d i n a
6 3 1 2 8 0 , 1 0 9 3 , 1 9 4 + l C a C
2
o c i t c A o d i c
l a i c a l g
8 1 1 9 4 0 , 1 2 7 3 , 1 0 4 +
P
2
O
5
C ( g M ,
l
O
4
)
2
,
O S u C
4
e d o t e r o l c a r t e T
o n o b r a C
7 7 4 9 5 , 1 6 6 4 , 1 l e v m a l f n i o N
l C a C , o a l i t s e D
2
,
r a l u c e l o m a r i e n e p
4
o n a x e h o l c i C 1 8 9 7 7 , 0 6 2 4 , 1 7 1 -
a r i e n e p , a N
4 r a l u c e l o m
o i m r f o r o l C 1 6 0 8 4 , 1 8 4 4 , 1 l e v m a l f n i o N
l C a C
2
P ,
2
O
5
,
r a l u c e l o m a r i e n e p
4
o n a t e m o r o l c i D 0 4 5 2 3 , 1 4 2 4 , 1 l e v m a l f n i o N
l C a C
2
a r i e n e p ,
4 r a l u c e l o m
o n a x o i D 1 0 1 4 3 0 , 1 2 2 4 , 1 8 , 1 1 +
l C a C
2
a r i e n e p , a N ,
4 r a l u c e l o m
l o n a t E 8 7 1 9 7 , 0 1 6 3 , 1 2 1 +
a r i e n e p , g M , O a C
3 r a l u c e l o m
o c i l t e r e t 5 3 4 1 7 , 0 3 5 3 , 1 0 4 -
l C a C
2
a r i e n e p , a N ,
4 r a l u c e l o m
16
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Srie Tcnica Floresta e Ambiente
Tabela 1. Propriedades dos solventes citados neste artigo.
Continuao...
Tabela 2. Propriedades dos reagentes citados neste artigo.
R e a g e nte a e a nt e
Acido SuIfurico
2
S

Acido c ico IciI

2

2

idr ido d o io
SuIf o rrico
2
S

SuIf o rroo S

2

idr ido d S dio
Acido rcIrico

Acido rico

Acido od drico
ro o r
2

od o d o io
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Srie Tcnica Floresta e Ambiente
Tabela 2. Propriedades dos reagentes citados neste artigo.
Continuao....
R e age nte a e a nt e
Tissulfato de Sodio a
2
S
2

itoeeo

Sulfato de sodio a
2
S

ideto de oo e sodio a

2

ooideto de sodio a

lool oifelio

osfato de otssio aido
2 2

osfato de sodio aido a

2

idido atio

eaaato de otssio

looluiol

lool sialio

Tabela 3. Relao de unidades de medidas granulomtrica

Dimetro interior da
maa em mm
tandart

mero d
m e










18
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Srie Tcnica Floresta e Ambiente
Tabela 3. Relao de unidades de medidas granulomtrica
Continuao...
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Srie Tcnica Floresta e Ambiente
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