O que Cromatografia?? O que Cromatografia?? A cromatografia um mtodo fsico-qumico de separao dos componentes de uma mistura. separao dos componentes de uma mistura. Est fundamentada na migra!o diferencia" dos componentes de uma mistura# que ocorre de$ido a diferentes intera%es# entre duas fases imisc$eis& a fase mvel (FM) e a fase estacionria (FE). International Union of Pure and Applied Chemistry (IUPAC) - '(cnica usada para a separa!o dos componentes de uma amostra# os quais se distri)uem entre duas fases# uma estacionria e a outra m*$e"+. Cromatografia& defini!o FASE MVEL FASE MVEL Lquida# gasosa# f"uido supercrtico FASE FASE ESTACIORIA ESTACIORIA ,*"ido ou "quido Passagem da fase m*$e" componentes distri)udos e retidos se"eti$amente pe"a fase estacionria se"eti$amente pe"a fase estacionria MIGRA!"ES DIFERECIAIS MIGRA!"ES DIFERECIAIS ,epara!o de misturas por intera!o diferencia"& maior intera!o com a -E . maior reten!o menor intera!o com a -E . e#$%o mais rpida CROMATOGRAFIA CROMATOGRAFIA Pr%&'(p%o )*s%'o ,epara!o de misturas por intera!o diferencia"& maior intera!o com a -E . maior reten!o menor intera!o com a -E . e#$%o mais rpida CROMATOGRAFIA CROMATOGRAFIA Pr%&'(p%o )*s%'o FASE MVEL FASE MVEL FASE ESTACIONRIA FASE ESTACIONRIA os componentes da mistura s!o separados em bandas. AFIIDADE SEPARA!+O (,%-rao .%/ere&'%a#) Por 0$e a Cro,a1o-ra/%a 2 %,por1a&1e3 Permite& ,EPARAR /0E1(/-/CAR Permite& /0E1(/-/CAR 23A1(/-/CAR ... di$ersas espcies qumicas... associada a outras tcnicas instrumentais de an"ise& associada a outras tcnicas instrumentais de an"ise& E4.& espectrofotometria# espectrometria de massas#... PRICIPAIS FATOS 4ISTRICOS Separao de pigmentos; proposio do termo Primeira publicao em fase gasosa Mar1%& e S5&-e 6789 (Pr:,%o o)e#) 6;7<-67=> Da?%. T@ Da5 Separao de proposio do termo cromatografia M%ABae# TsCe11 67=>-67=D 67>= E$B& e Le.erer romatografia romatografia em papel IF,a%#o? e SBra%)er 67>; 67G6 Mar1%& e S5&-e Particio em 6789 (Pr:,%o o)e#) 678; !ola"# colunas capilares em ! E0$%pa,e&1os CG 'o,er'%a%s 6788 Separao de $ do petrleo romatografia em coluna# Xantofilas de gema de ovo Particio em cromatografia l%&uida; Princ%pios de fase gasosa capilares em ! M%ABae# Se,e&o?%'BTsCe11 nascido em Asti 5/t"ia6 a 78 de Maio de 79:;# sendo a fam"ia PRICIPAIS FATOS 4ISTRICOS nascido em Asti 5/t"ia6 a 78 de Maio de 79:;# sendo a fam"ia originria da R<ssia. = considerado o pai da cromatografia moderna# atra$s dos $rios tra)a">os e4perimentais que efetuou. e4perimentais que efetuou. M@ TSHEET 57?@A6& ,epara!o de misturas de pigmentos $egetais em co"unas rec>eadas com adsor$ente s*"ido 5-.E.6 e so"$ente 5-.M.6. 21er .e 21er .e pe1rI#eo CaCO > ,%s1$ra .e p%-,e&1os p%-,e&1os separa.os Cro,a1o-ra/%a . 'roma BcorC D grap( Bescre$erC 5Erego6 CLASSIFICA!+O DAS CLASSIFICA!+O DAS TCICAS CROMATOGRFICAS CLA,,/-/CAFGO 0A, (=C1/CA, CROMA(OERH-/CA, Cromatografia Critrios& suporte fsico# estado fsico das fases m*$eis e estacionrias P"anar Em Co"una Cromatografia S$por1e Es Lquido Lquido -"uido ,upercrticoI Fase ,I?e# I-"uido ,upercrtico& $apor pressuriJado# em temperatura e press!o acima de seu ponto crtico CLA,,/-/CAFGO 0A, (=C1/CA, CROMA(OERH-/CA, Lquido P"anar T2'&%'a Fase ,I?e# Lquido Fase ,I?e# (FM) Fase es1a'%o&*r%a (FE) Lquido -ase "igada -ase "igada ,*"ido T%po .e Cro,a1o-ra/%a CP CC0 CC0 CP . cromatografia em pape" CC0 . cromatografia em camada de"gada Cro,a1o-ra/%a e, pape# Cro,a1o-ra/%a e, 'a,a.a .e#-a.a CLA,,/-/CAFGO 0A, (=C1/CA, CROMA(OERH-/CA, Cromatografia Critrios& suporte fsico# estado fsico das fases m*$eis e estacionrias P"anar Em Co"una Cromatografia S$por1e Es Lquido Lquido -"uido ,upercrticoI Fase ,I?e# I-"uido ,upercrtico& $apor pressuriJado# em temperatura e press!o acima de seu ponto crtico CLA,,/-/CAFGO 0A, (=C1/CA, CROMA(OERH-/CA, G*s F#$%.o L(0$%.o (cnica -M Em Co"una CEL Lquido CE, ,*"ido CE-L -ase Ligada G*s C,, ,*"ido C,-L -ase Ligada F#$%.o S$per'r(1%'o CLL Lquido CL, CE ,*"ido -ase Ligada L(0$%.o -M -E (C CL-L C(/ CK CLL . cromatografia "quido-"quido CL, . cromatografia "quido-s*"ido CE . cromatografia por e4c"us!o CL-L . cromatografia "quida com fase quimicamente "igada C(/ . cromatografia por troca iLnica CK . cromatografia por )ioafinidade CLA,,/-/CAFGO 0A, (=C1/CA, CROMA(OERH-/CA, Cromatografia em co"una& de acordo com o diMmetro interno e o)Neti$o da separa!o& - preparati$a 5A-O@ mm6 - preparati$a 5A-O@ mm6 - ana"tica 5;-A mm6 - microdiMmetro 57-; mm6 - capi"ar 5P7 mm6 Press!o& - c"ssica 5so) press!o atmosfrica# co"unas de $idro6 - c"ssica 5so) press!o atmosfrica# co"unas de $idro6 - mdia press!o - a"ta press!o ... > outros critrios Cro,a1o-ra/%a e, 'o#$&a - CL Co"una a)erta CLAE - QPLC Cro,a1o-ra/%a e, 'o#$&a - CG - Colunas empacotadas ou recheadas: preenchida com partculas de suporte que contm a FE - Colunas tubulares abertas (tpicas de CGAR): FE colocada diretamente sobre a parede interior da coluna. Tipos bsicos de colunas: diretamente sobre a parede interior da coluna. CLA,,/-/CAFGO 0A, (=C1/CA, CROMA(OERH-/CA, Critrio& po"aridade re"ati$a das fases - em gasosa& fase m*$e" inerte 5'gs de arraste+6 - em "quida& -ase 1orma" 5-E R -M6 - em "quida& -ase 1orma" 5-E R -M6 -ase Re$ersa 5-M R -E6 Critrio& mecanismo de separa!o processos& - qumicos 5troca iLnica# quira"# afinidade6# - fsicos 5sor!o S adsor!o ou - fsicos 5sor!o S adsor!o ou a)sor!oTparti!o6 ou - mecMnicos 5e4c"us!o por taman>o mo"ecu"ar6 MECAISMOS DE SEPARA!+O Me'a&%s,os .e separao 6@ Pro'essos /(s%'os& foras de atra%es dipo"ares# forma!o de "iga!o de Q. - a.soro& -E s*"ida com grupos ati$os na superfcie 5e4.& s"ica# - a.soro& -E s*"ida com grupos ati$os na superfcie 5e4.& s"ica# a"umina6U ocorre na interface com -MU dessor!o por $o"ati"idade 5CE6 ou so"u)i"idade na -M 5CL e C-,6U o processo mais comum em CC0# CE,# CL,# C,, CC0 5camada de"gada6# CE, 5gs-s*"ido6# CL, 5"quido-s*"ido6# C,, 5supercrtica com -E s*"ida6 Me'a&%s,os .e separao - a)soro (par1%o)& -E "quida e espa">ada na superfcie de um suporte s*"ido e inerte 5ou paredes do 6@ Pro'essos /(s%'os& superfcie de um suporte s*"ido e inerte 5ou paredes do tu)o cromatogrfico6U processo intrafacialU )aseia-se na so"u)i"idade dos compostos da amostra na -EU o retorno V -M depende da $o"ati"idade 5CE6 ou so"u)i"idade na -MU ocorre na CP# CEL# CLL. CP . cromatografia em pape"U CEL . cromatografia gs-"quido CLL . cromatografia "quido-"quido Me'a&%s,os .e separao Com fases estacionrias quimicamente "igadas& mistura de parti!o e adsor!o Me'a&%s,os .e separao 9@ Pro'essos 0$(,%'osJ - 1ro'a %K&%'a& -E contm grupos funcionais ioniJ$eis - 1ro'a %K&%'a& -E contm grupos funcionais ioniJ$eis 5trocadores de ons S catiLnico ou aniLnico6# -M consiste em so"u!o iLnica compat$e" 5propriedades tamponantes6 que promo$e a e"ui!o dos compostos da amostra por su)stitui!o ou des"ocamento. Me'a&%s,os .e separao 9@ Pro'essos 0$(,%'osJ - a/%&%.a.e ()%oa/%&%.a.e)& -E contm grupos qumicos com - a/%&%.a.e ()%oa/%&%.a.e)& -E contm grupos qumicos com especificidade )io"*gica quimicamente "igados ao suporte 5e4.& antgenos# enJimas6# retiram da -M somentes as su)stMncias comp"ementares da amostraU a e"ui!o ocorre por modifica!o de propriedades da fase m*$e" ou por des"ocamento. >@ Pro'esso ,e'L&%'o& - eM'#$so por 1a,a&Bo ,o#e'$#ar& -E tem composi!o inerte# com partcu"as de forma# taman>o e porosidade Me'a&%s,os .e separao inerte# com partcu"as de forma# taman>o e porosidade uniformesU mo"cu"as grandes s!o e4c"udas dos poros e e"uem com a -M intersticia"# mo"cu"as menores penetram faci"mente nos poros e e"uem com $e"ocidades $ari$eis. Acompan>amento da separa!o cromatogrfica Acompan>amento da separa!o cromatogrfica E4emp"o de cromatografia em camada de"gada& an"ise $isua"# "uJ 3W# re$e"adores Wisua"iJa!o ou detec!o de )andas& manc>as na superfcie Acompan>amento da separa!o cromatogrfica Cromatografia em co"una& co"eta de fra%es Cromatografia em co"una& co"eta de fra%es Cromatografia em co"una& co"eta de fra%es Cromatografia em co"una& uso de detectores Cromatografia "quida em co"una& uso de detectores ALISE CROMATOGRFICA ,epara!o em co"una A resposta do detector traduJida em um grfico# ou traduJida em um grfico# ou CROMA(OERAMA# que re"aciona o seu sina" com o tempo necessrio para a e"ui!o de cada componente. E#$%o 1(p%'a e, 'ro,a1o-ra/%a #(0$%.a