UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA

Programa de Ps-graduao em Engenharia Qumica

Mestrado em Engenharia Qumica
Engenharia Bioqumica
Estudo de Caso VI:
Autochthonous microbial responses and hydrocarbons degradation in polluted soil during
biostimulating treatments under different soil moisture. Assay in pilot plant
Gloria Andrea Silva-Castro, Alfonso Rodriguez-Calvo, Jaime Laguna, Jess Gonzalez-Lopez a , Concepcion Calvo

Estudo de Caso VI:

Respostas microbianas autctonas e degradao de hidrocarbonetos em solo poludo durante
tratamentos bioestimulantes sob diferentes umidades do solo. Ensaio em planta piloto
Gloria Andrea Silva-Castro, Alfonso Rodriguez-Calvo, Jaime Laguna, Jess Gonzalez-Lopez a , Concepcion Calvo

Professor: Anne Katherine de Carvalho Lima Lobato

Aluno: Alvaro Marcelo PORCEL

Salvador, 2016

SUMRIO

1. INTRODUO
2. OBJETIVO
3. ESTUDO DO ARTIGO
a. Produto e importncia, setor de atuao e etapas de produo.
b. Biocatalisador: caractersticas e formas de obteno.
c. Meio de cultivo: caractersticas, fontes, tipo de meio de cultivo e estratgias.
4. CONCLUSES

1. INTRODUO: Poluio por petrleo

1. INTRODUO: Importncia dos solos na ecosfera

Representam a base sobre a qual pode existir vida.

Responsveis direitos do armazenamento, filtragem
transformao de gua atmosfrica, e
Responsveis indiretos da produo de O2.
Produtores da biomassa terrestre.
Armazenamento de CO2.
Ciclos biogeoqumicos: C,N, P, K,S.

1. INTRODUO: Degradao microbiana de HAPs do petrleo em solos

Solo poludo com THP.

Microbiota do solo encargada do ciclo de

nutrientes e produo agrcola.

Solo depois tratamento.

2. OBJETIVO

Medir cmbios na atividade biolgica (Dinmica da

populao, atividade desidrogenasse e taxa de
respirao) da microbiota autctone de um solo poludo
com diesel mediante bioestimulao (fertilizante e
biosurfactante).

3. ESTUDO DO ARTIGO
A1. Identificao do produto /servio e importncia
Produto/ servio:
Reduo de [THP] em solos.
Importncia:
Reduo de transporte do poluente.
Melhoria das propriedades fsico-qumicas
do solo.
Reduo de riscos na Sade.

A2. Identificao do setor de atuao

Setor meio ambiente:
Biotecnologia ambiental
Biotecnologia de solos

3. ESTUDO DO ARTIGO
A3. Etapas de produo

Materiais e esquema do experimento

20 ppm Diesel

Solo

Cascalho

0,89 % M.O.
Solo
limoarenoso

1.111,0 ppm N-total

40,66 ppm P2O5
56 % A; 15% A; 2%L

3. ESTUDO DO ARTIGO
A3. Etapas de produo

Materiais e esquema do experimento

Superfcie 10 cm 15 %
20 ppm Diesel

Solo

Cascalho

No saturada 10 a 45cm 25 %

Saturada 25cm 30 %
Piezmetro

1,0m x 1,0m x 1,5m

3. ESTUDO DO ARTIGO
A3. Etapas de produo

Materiais e esquema do experimento

20 ppm Diesel

Solo

Piezmetro

1,0m x 1,0m x 1,5m

Cascalho

0,3 g/Kg fertilizante NPK

18:8:17 Agroblem SA

52 g/Kg IVEY
Biosurfactante

3. ESTUDO DO ARTIGO
A3. Etapas de produo
Tratamentos

Atenuao
natural

+ 0,3 g/Kg NPK

+52,0 g/Kg Ivey

+ 0,3 g/Kg NPK

+52,0 g/Kg Ivey

Tratamento 1

Tratamento 2

Tratamento 3

Tratamento 4

3. ESTUDO DO ARTIGO
A3. Etapas de produo
Anlise microbiano: hetertrofos e degradadores de THP
1g de solo diludo
9 mL em sol. Salina
0,1 mL de solo em sol. Salina em 1/10 em gar
1% diesel

Bactrias
hetertrofas
aerbicas
Bactrias
degradadoras

Trypticase Soy
agar

28C e 48 h para contagem

das colnias de MO

3. ESTUDO DO ARTIGO
A3. Etapas de produo
Atividade biolgica: Test de respirao e atividade hidrogenasse
Produo
CO2

Atividade da
Hidrogenasse

28 C
24 h
Recipiente fechado

2,3,5-Cloreto
trifeniltetrazlio
(TTC)

Trifenil formazan
(TPF)

6 g solo
1mL TTC (3%)
2,5 mL H2O

20 g solo
0,2 g
CaCO3

37C e 24h
TPF por fotogrametria
485 nm

3. ESTUDO DO ARTIGO
A3. Etapas de produo
Anlise de hidrocarbonetos do petrleo
Hexano: acetona
1:1 (v/v)

40C e 1min
4C/min at 310C (1,5 min)

THP
Fraes de HC
Cromatografia de massas e gases

Anlise estatstico
Experimentos triplicados
Mdia, varincia e desvio padro

ANOVA p < (0,05)

HAP
N-alcanos

3. ESTUDO DO ARTIGO
A3. Etapas de produo
CO2

Atividade
hidrogenasse

N NO3
P PO5

TPH
K KO2
Biosurfactante

Bactrias hetertrofas
Bactrias degradadoras

H
H22O
O
Nalcanos

Ramificados

HAPs

3. ESTUDO DO ARTIGO
B1. Identificao do biocatalisador

DESIDROGENASSE

3. ESTUDO DO ARTIGO
B2. Caracterizao do biocatalisador
Gnese intracelular

Processos oxidoredutivos

No acumulvel no solo

DESIDROGENASSE
Maior representante Classe
de Oxido reeducasse

Indicador da atividade
microbiolgica do solo

Reflete a atividade metablica dos microrganismos do solo e

proporcional biomassa (microbiota) do solo
Atividade oxidativa total de microorganismos
Transferncia de H-MO a aceitadores inorgnicos.

3. ESTUDO DO ARTIGO
B3. Formas de obteno
Gerado pelos microrganismos do solo

Atividade da
Hidrogenasse

2,3,5-Cloreto trifeniltetrazlio (TTC)

Corante
Indicador do transporte de eltrons

Trifenil formazan (TPF)

TPF foi degradado por DHA
Insolvel, vermelho, quantificvel
em espectrofotmetro (485 nm)

6 g solo
1mL TTC (3%)
2,5 mL H2O

20 g solo
0,2 g
CaCO3
Soluo
buffer

37C e 24h
TPF por fotogrametria
485 nm

3. ESTUDO DO ARTIGO
C1. Meio de cultivo: Fontes de nutrientes

0,3 ppm fertilizante NPK

18:8:17 Agroblem SA

20 ppm Diesel

NPK

3. ESTUDO DO ARTIGO
C1. Meio de cultivo: Tipo de meio utilizado

Trypticase Soy
agar

TSA

Gel
Sinttico: Caseina, AA, Glicose, NaCl,
K2PO3

3. ESTUDO DO ARTIGO
C1. Meio de cultivo: Caractersticas e estratgias do meio que influenciaram a cultura
Atividade enzimtica da desidrogenasse

0 a 10 cm
10 a 45 cm
45 a 70 cm

15 %
25 %
30 %

Humidade do solo

<Humidade do solo
< potencial hdrico intracelular
<hidratao
<atividade enzimtica
<DHA

Oxignio do solo

> O2
< humidade do solo
< DHA

MO do solo

Profundidade do solo

> MO
> Atividade microbiana
> Degradao
>Respirao celular
>DHA

>Z
< populao microbiana
< atividade microbiana
< DHA

4. CONCLUSES

A bioremediao uma ferramenta til e econmica na degradao do solo por TPH.

O biocatalisador foi a enzima desidrogenasse, quem esta presente no solo por atividade microbiana.
As fontes energticas no meio de cultivo foi o fertilizante (NPK), quem tive maior influencia na
degradao de N-alcanos.
A atividade biolgica foi influenciada principalmente pela humidade e profundidade.
A estratgia utilizada foi: controle de diferentes teores de humidade do solo, diferentes profundidades, 4
e tratamentos, utilizao de bioestimulantes (fertilizante e biosurfactante) e quantificao de bactrias
hetertrofas e degradadoras, para avaliar a concentrao final de TPH no solo poludo.

UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA

Programa de Ps-graduao em Engenharia Qumica
Mestrado em Engenharia Qumica
Engenharia Bioqumica
Estudo de Caso VI:
Autochthonous microbial responses and hydrocarbons degradation in polluted soil during
biostimulating treatments under different soil moisture. Assay in pilot plant
Gloria Andrea Silva-Castro, Alfonso Rodriguez-Calvo, Jaime Laguna, Jess Gonzalez-Lopez a , Concepcion Calvo

Estudo de Caso VI:

Respostas microbianas autctonas e degradao de hidrocarbonetos em solo poludo durante
tratamentos bioestimulantes sob diferentes umidades do solo. Ensaio em planta piloto
Gloria Andrea Silva-Castro, Alfonso Rodriguez-Calvo, Jaime Laguna, Jess Gonzalez-Lopez a , Concepcion Calvo

Professor: Anne Katherine de Carvalho Lima Lobato

Aluno: Alvaro Marcelo PORCEL

Salvador, 2016