2014/2015

1) Para a cultura de clulas animais e produo em biorreactores de tanque

agitado muitas vezes necessrio recorrer utilizao de micro-suportes
(microcarriers). Diga porqu e indique as vantagens de produo em
sistema agitado.
2) Diga se as expresses so verdadeiras ou falsas:
i. A produo de protenas recombinantes pode ser realizada por
vrios sistemas biolgicos de expresso nomeadamente em
bactrias, leveduras, clulas animais, ou plantas ou animais
transgnicos. A produo de vectores virais para terapia gnica
geralmente realizada utilizando bactrias como sistema de expresso.
ii. Os sistemas de expresso de protenas recombinantes em clulas
animais podem ser estveis ou transientes. Um sistema de produo
estvel aquele em que o DNA recombinante integrado no genoma
das clulas o que permite a produo permanente do produto de
interesse.
iii. Os vectores retrovirais foram os primeiros vectores virais a serem
utilizados em ensaios clnicos de terapia gnica, estes apresentam a
caracterstica de serem de fcil produo.
iv. Para a produo de protenas recombinantes como a eritropoietina
ou anticorpos monoclonais geralmente utilizam-se linhas celulares
imortalizadas, enquanto as culturas primrias so muito utilizadas
como modelos celulares
3) As clulas de mamfero so usadas como plataforma para a produo de
diversas protenas recombinantes utilizando sistemas de expresso estveis
ou transientes. Qual a maior desvantagem associada produo por
sistemas estveis de expresso? Indique a resposta correcta justificando
sucintamente.
i. O longo perodo de tempo necessrio para gerar a linha celular e
produzir o produto a grande escala
ii. As baixas produtividades obtidas.
iii. A grande heterogeneidade do produto de diferentes lotes de
produo. iv. A necessidade de grandes quantidades de plasmdeo
para a transfeco.
4) As clulas estaminais humanas so uma fonte de clulas muito
promissora para aplicaes de terapia celulares e para desenvolvimento de
modelos de doena. O principal desafio conseguir produzir quantidades
suficientes destas clulas mantendo as suas caractersticas. Indique qual
das seguintes afirmaes sobre clulas estaminais falsa justificando
sucintamente. i. Apresentam diversos potenciais de diferenciao; ii. Tm
como caracterstica principal poder originar todos os tipos de clulas que
constituem o organismo adulto; iii. A sua capacidade de auto-renovao
ilimitada; iv. Tm a capacidade de se dividir dando origem a clulas
semelhantes s progenitoras e, em condies especficas, clulas de
diferentes tipos com caractersticas e funes especializadas.
2012/2013
1. As culturas primrias de hepatcitos so o modelo in vitro de escolha
para screening no desenvolvimento de novos frmacos. No entanto estas

clulas perdem a sua funcionalidade ao fim de 4-5 dias em cultura quando

cultivadas em sistema esttico de monocamada. Recentemente estratgias
de cultura 3D em bioreactores mostraram que (seleccione a resposta
correcta) a) possvel manter durante mais tempo (at 2 semanas), e at
mesmo aumentar, a funcionalidade celular devido monitorizao e
controle de parmetros crticos tais como o pH e pO2. b) que a actividade
do citocromo P450 diminui devido ao aumento do fluxo de outras vias
bioqumicas activadas pelo contacto clula-clula. c) Que a manuteno da
viabilidade celular aumenta mas a funcionalidade celular diminui devido
acumulao de albumina no reactor.
2. As variveis temperatura, pH e percentagem de oxignio dissolvido so
monitorizadas e controladas nos biorreactores de clulas de mamfero. Em
geral, a temperatura mantida a 37C e o pH a 7.2. Por outro lado,
diferentes set-points so usados para a percentagem de oxignio dissolvido,
dependendo da linha celular. Explique sucintamente como feito o controlo
destas trs variveis em biorreactor, detalhando as variveis manipuladas
em cada caso.
3. Para a cultura de clulas animais e produo em bioreactores de tanque
agitado muitas vezes necessrio recorrer utilizao de microcarriers.
Diga porqu e indique as vantagens de produo em sistema agitado?
4. As VLP's, utilizadas em vacinao, podem ser produzidas em diferentes
sistemas de expresso. a) Explique sucintamente o que so VLPs e quais as
suas principais vantagens relativamente s vacinas tradicionais b) D
exemplo de uma vacina VLP que esteja aprovada e comercializada.
2011/2012
1. As vacinas de VLPs so eficazes em doses mais baixas que as vacinas
convencionais (2 valores)
a) O que significa VLP? (cotao: 0.2 val)
b) D um exemplo de uma vacina de VLP utilizada em Humanos.
(cotao: 0.3 val)
c) Diga as principais vantagens na utilizao de VLPs para vacinao.
(cotao: 1.0 valores)
d) D exemplo de um tipo de clulas animais utilizado para produzir
VLPs (cotao: 0.5 val.)
2. As plataformas para produo de protenas onde so utilizadas clulas
animais podem ser classificadas de plataformas de produo transiente e de
plataformas de produo estvel. Descreva sucintamente estes dois
sistemas de produo de protenas e indique as vantagens e desvantagens
de cada um deles (1,5 valores)
3. Para se propagarem clulas anchorage-dependent em Bioreactores de
tanque agitado podem imobilizar-se as clulas em suportes poroses ou
no porosos (denominados microcarriers) ou recorrer a tcnicas de
encapsulamento utilizando polmeros como o alginato. Explique
sucintamente a diferena entre os mtodos de imobilizao e
encapsulamento e indique algumas vantagens e desvantagens de cada um
(1 valores)