Quim. Nova, Vol. 35, No.

2, 435-437, 2012

REDUO ENZIMTICA DO 4-(DIMETILAMINO)BENZALDEDO COM PEDAOS DE CENOURA (Daucus

carota): UM EXPERIMENTO SIMPLES NA COMPREENSO DA BIOCATLISE

Educao
lvaro Takeo Omori*, Viviane Barbosa Portas e Camila de Souza de Oliveira
Centro de Cincias Naturais e Humanas, Universidade Federal do ABC, R. Santa Adlia, 166, 09210-170 Santo Andr - SP,
Brasil

Recebido em 19/5/11; aceito em 8/8/11; publicado na web em 26/9/11

ENZYMATIC REDUCTION OF 4-(DIMETHYLAMINO)BENZALDEHYDE WITH CARROT BITS (Daucus carota): A SIMPLE

EXPERIMENT FOR UNDERSTADING BIOCATALYSIS. The present paper describes a simple, low-costly and environmentally
friendly procedure for reduction of 4-(dimethylamino)benzaldehyde using carrot bits in water. This interdisciplinary experiment can
be used to introduce the concepts of biocatalysis and green chemistry to undergraduate students.

Keywords: biocatalysis; reduction of carbonyl compounds; green chemistry.

OH
INTRODUO
NaBH4

A abordagem interdisciplinar na gerao do conhecimento um MeOH, t.a. R+S

dos grandes desafios na educao em todas as reas das Cincias
Naturais. Porm, na qumica orgnica, por exemplo, grande parte
dos experimentos aplicados em laboratrios didticos para alunos de
graduao no consegue integrar conhecimentos de outras disciplinas.
Alm disso, existe tambm a dificuldade de aquisio de reagentes
qumicos especficos em um laboratrio didtico de qumica orgni-
ca. O alto custo, as taxas de importao e a possibilidade de atrasos
so alguns entraves que podem prejudicar o sucesso da disciplina
experimental. Desta maneira, torna-se bastante atrativa a aplicao de
experimentos com materiais de baixo custo e de alta disponibilidade.1
De forma simplificada, apresentado um experimento de baixo
custo, facilmente executvel e contextualizado em diversas reas,
como Bioqumica, Qumica Orgnica e Qumica Verde. Consiste
basicamente em uma reao de reduo de um aldedo a um lcool
utilizando enzimas provenientes de uma leguminosa altamente dis-
ponvel (Daucus carota), cenoura. Esta prtica visa familiarizao
dos alunos com os conceitos da biocatlise.2
A biocatlise consiste no uso de catalisadores naturais as enzi-
mas para realizar transformaes qumicas em compostos orgnicos.
uma ferramenta bastante verstil e est cada vez mais presente na
indstria qumica.3 A princpio, todos os seres vivos so fontes de
biocatalisadores e as enzimas presentes podem ser utilizadas nos mais
diversos tipos de reaes orgnicas.4
Os biocatalisadores apresentam caractersticas que os diferen-
ciam dos catalisadores qumicos, e esto intrinsecamente ligados aos
princpios da Qumica Verde.5 Dentre estas caractersticas podem-se
citar como exemplos: condies brandas de reao, pois o solvente
utilizado geralmente a gua; o uso de reagentes degradveis, uma
vez que os catalisadores so enzimas de plantas, animais, ou so
micro-organismos e podem ser decompostos no ambiente aps o uso.
Alm disso, a biocatlise oferece uma grande seletividade do
ponto de vista estereoqumico.6 Por exemplo, analisando a reao
de reduo de cetonas pr-quirais (que levam a produtos contendo
centros quirais). Um dos agentes redutores mais utilizados na reduo
de cetonas o boro-hidreto de sdio (NaBH4). A Figura 1 ilustra a
reduo da acetofenona ao 1-feniletanol por dois mtodos.
*e-mail: alvaro.omori@ufabc.edu.br
O 1-feniletanol racmico
OH
Acetofenona Daucus carota
(pr-quiral) (cenoura)
H2O, t.a., 2 dias (S)-(-)
1-feniletanol opticamente ativo
99% e.e.
Figura 1. Reduo da acetofenona utilizando boro-hidreto de sdio e com
cenoura
O NaBH4 um agente redutor aquiral e, quando reage com
cetonas pr-quirais, leva formao de um lcool racmico (dois
ismeros com 50% cada). No entanto, a mesma transformao qu-
mica, utilizando pedaos de cenoura (Daucus carota) leva formao
majoritria de um dos produtos.6
A cenoura tem sido usada com sucesso nas redues de cetonas
pr-quirais, apresentando como resultados, em alguns casos, uma
converso de 97% e um excesso enantiomrico (e.e.) acima de 99%,
sendo um dos biocatalisadores conhecidos mais eficientes.7 (Nota:
as enzimas que catalisam estas reaes so chamadas de desidroge-
nases, pertencentes a uma subclasse das oxidorredutases, enzimas
responsveis pelas reaes de oxidao-reduo).8
O crescente interesse no uso das plantas em biocatlise pode
ser demonstrado no recente artigo de reviso de Cordell e colabo-
radores.1
Em resumo, proposta uma prtica que visa avaliar qualitati-
vamente a atividade cataltica da cenoura na reduo do reagente
de Ehrlich (CAS [100-10-7]). Esta deteco pode ser feita atravs
de uma anlise de CCD (cromatografia em camada delgada) ou at
mesmo atravs de tcnicas espectroscpicas (RMN). No fim da reao
o produto pode ser isolado atravs de uma extrao lquido-lquido,
seguida de uma purificao por cromatografia em coluna.
PARTE EXPERIMENTAL
O 4-(dimetilamino)benzaldedo (ACS 99%, Sigma-Aldrich) e
os solventes empregados (hexano, acetato de etila e metanol padro
P.A. Vetec) foram utilizados sem prvia purificao. As anlises de
436
CCD foram efetuadas em cromatofolhas de alumnio (gel de slica
60), com espessura de 0,2 mm, contendo indicador para 254 nm.
Reduo do 4-(dimetilamino)benzaldedo
O reagente 4-(dimetilamino)benzaldedo comumente utilizado
na determinao espectrofotomtrica de hidrazinas9 e, tambm, na
deteco de urobilinognio na urina.10 Outras aplicaes incluem
seu uso como bloco de construo de molculas mais complexas,
por exemplo, na sntese da tricostatina A feita por Fleming e cola-
boradores.11
J o produto obtido da reduo, o lcool 4-(dimetilamino)ben-
zlico, tambm bastante utilizado como bloco de construo de
molculas mais complexas.12
Procedimento para a reao biocataltica
Este procedimento est ilustrado na Figura 2.
O OH
Daucus carota
(cenoura)
N
H2O, t.a., 3 horas
N
lcool
p-dimetilamino
benzaldedo
p-dimetilamino
benzlico
(reagente de Ehrlich)
Figura 2. Reduo do reagente de Ehrlich utilizando pedaos de cenoura
Uma cenoura fresca foi adquirida em um mercado local, lavada
com gua corrente e, em seguida, cortada em fatias de aproximada-
mente 0.5 cm (no necessrio descascar). Os pedaos foram pesados
em um Erlenmeyer de 125 mL com uma balana semianaltica at
obter-se aproximadamente 10 g de catalisador. Em seguida, foram
adicionados 40 mL de gua destilada e 50 mg do para-(dimetilamino)
benzaldedo (Figura 3).
Figura 3. Sistema reacional usando pedaos de cenoura
O Erlenmeyer foi levado ao agitador rotativo (temperatura am-
biente, 200 rpm), onde permaneceu pelo tempo disponvel de aula
(no nosso caso, 3 h). Decorrido este tempo, uma alquota de 2 mL
foi retirada da reao e transferida para um tubo tipo Falcon de 15
mL. A este tubo foi adicionado 1 mL de acetato de etila (AcOEt).
O tubo foi agitado em um vortex e levado para centrfuga por
5 min, a aproximadamente 2500 rpm. Esta extrao tambm pode
Omori et al. Quim. Nova
ser feita manualmente, sem necessidade de vortex e/ou centrfuga.
Uma alquota tambm foi retirada e os componentes orgnicos
extrados aps 24 h de reao. Estes tubos contendo as fases orgni-
cas foram diretamente utilizados para a anlise de CCD junto com o
produto padro preparado durante o perodo de agitao.
Procedimento para a sntese qumica do produto (padro)
Durante o intervalo de 3 h de agitao da reao com a cenoura,
foi feita a sntese qumica do produto (padro).
Aproximadamente 10 mg do reagente de Ehrlich foram adicio-
nados a um balo de 15 mL munido com barra magntica. Metanol
foi adicionado (5 mL) ao balo e o sistema foi resfriado sob agitao
a 0 C. Uma pequena quantidade de boro-hidreto de sdio (ponta de
esptula) foi adicionada reao e o sistema foi agitado por mais 15
min de 0 C temperatura ambiente. Aps este tempo, j foi possvel
retirar uma alquota para servir como padro para anlise de CCD.
Anlise de cromatografia em camada delgada (CCD)
Para anlise de CCD, foi utilizada uma soluo de hexano e aceta-
to de etila na proporo 1:4 como fase mvel. Foram aplicados quatro
pontos (Reagente, produto da sntese qumica e as alquotas de 3 e
24 h de reao). Aps marcao da distncia percorrida pelo eluente,
foram marcadas sob luz UV as distncias percorridas pelas amostras
e, em seguida, foram calculados os Rf do reagente e do produto.
Isolamento do produto (opcional)
Aps o trmino da reao, a fase lquida foi transferida para
dois tubos tipo Falcon de 50 mL e, em seguida, foram adicionados
15 mL de acetato de etila. Os tubos foram agitados em vortex por
alguns minutos e, ento, levados centrfuga por 10 min, a aproxi-
madamente 2500 rpm.
A fase orgnica foi separada e transferida a um Erlenmeyer de 125
mL e, em seguida, foi adicionado sulfato de sdio (Na2SO4) anidro. A
fase foi filtrada em um balo de fundo redondo de 50 mL e levado para
a destilao sob presso reduzida. O resduo foi purificado atravs de
cromatografia em coluna em slica, utilizando uma mistura gradiente
de hexano:acetato de etila (2:1 a 1:4) como eluente.
RESULTADOS E DISCUSSO
A Figura 4 mostra a cromatografia de camada fina aps contato
com o eluente (hexano:acetato 1:4) com as amostras de reagente,
produto da reduo qumica, reao com cenoura aps 3 e 24 h, nesta
ordem. Pela figura, observa-se a formao de um produto da reduo
enzimtica com o mesmo Rf do produto da reduo qumica.
Observou-se uma baixa converso em 3 h de reao apesar de
que, neste tempo de reao, j foi possvel visualizar a formao
do produto por CCD. A alquota de 24 h de reao j mostrou uma
melhor converso, apesar de ainda haver reagente. Esta observao
corrobora com o trabalho de Yang e colaboradores em que, aps o
estudo mais aprofundado desta reao com acetofenona, foi observado
que o tempo ideal para a reao de reduo com pedaos de cenoura
de aproximadamente 48 h.13
A fim de avaliar a repetibilidade desta reao, aplicou-se este
experimento em uma disciplina de Prticas de Qumica Verde e foi
observado que, em 12 experimentos, apenas dois deles apontaram
a no formao do produto, provavelmente devido inatividade
do catalisador empregado, no qual vrios fatores como mtodo de
cultivo, espcie utilizada, procedncia e validade da cenoura podem
estar associados.
Vol. 35, No. 2 Reduo enzimtica do 4-(dimetilamino)benzaldedo com pedaos de cenoura
Figura 4. Placa de CCD contendo amostras sob luz UV: 1. reagente (Rf =
0,7), 2. produto padro (Rf = 0,4), 3. reao enzimtica aps 3 h, 4. reao
enzimtica aps 24 h
Um dos grandes questionamentos sobre esta reao de reduo de
grupos carbonilcos mediada por cenoura se refere fonte enzimtica.
Gonzalez e colaboradores levantaram a hiptese de que as enzimas
contidas em micro-organismos endofticos da cenoura seriam os
principais responsveis pela atividade biocataltica.14 Esta hiptese
foi investigada, isolando estes micro-organismos e submetendo-os
s mesmas reaes. No caso, foi observada a mesma reatividade da
cenoura; alm disso, o uso de fungicidas e bactericidas nos pedaos
de cenoura praticamente inibiu a atividade cataltica.
A caracterizao do produto foi feita atravs da anlise de RMN
de 1H e est de acordo com o publicado na literatura.15 Curiosamente,
a anlise do produto por cromatografia gasosa acoplada ao espectr-
metro de massas apresentou um nico pico com on molecular de m/z
= 254. Este valor difere do produto esperado (m/z = 151) provavel-
mente devido dimerizao do reagente no injetor do cromatgrafo
atravs de um mecanismo de condensao do tipo Mannich,16 como
mostra a Figura 5.
OH OH
-OH-
N N N
m/z = 151
HO
N N N 8. Voet, D.; Voet, J. G.; Biochemistry, 2nd ed.; Wiley, 1995, cap. 12; Mat-
HO
- H2CO + 20, 513.
- H+
N 11. Fleming, I.; Iqbal, J.; Krebs, E. P.; Tetrahedron 1983, 39, 841.
N N
m/z = 254
Figura 5. Mecanismo proposto para a formao do dmero de m/z = 254 a
partir do lcool 4-(dimetilamino)benzlico
CONCLUSO
A reduo do 4-(dimetilamino)benzaldedo utilizando pedaos
de cenoura levou ao lcool correspondente e o monitoramento desta
reao pode ser feito utilizando cromatografia de camada delgada.
Esta prtica de fcil execuo, possui custo baixo e interdisciplinar.
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Como o tempo reacional relativamente longo, este experimento
pode ser feito em etapas sucessivas. possvel discutir durante o
experimento vrios aspectos da teoria de cromatografia. Por exem-
plo, diversos eluentes poderm ser empregados e ser abordada uma
possvel discusso sobre a influncia da polaridade. Outros aspectos
importantes incluem mecanismos de reao qumica e bioqumica,
identificao de compostos por RMN, espectrometria de massas e
estereoqumica. No final, os pontos positivos desta reao podem
ser amplamente discutidos e correlacionados com os princpios da
Qumica Verde e Biocatlise.
MATERIAL SUPLEMENTAR
No material suplementar, disponvel gratuitamente em arquivo
PDF em http://quimicanova.sbq.org.br, encontram-se os espectros
de ressonncia magntica nuclear dos produtos obtidos por via qu-
mica e por via enzimtica e os espectros de massas do reagente e do
produto dimerizado.
AGRADECIMENTOS
Central Analtica do Instituto de Qumica da USP pelas anlises
de RMN e CG-EM, UFABC pela estrutura ao CNPq e FAPESP
pelo apoio financeiro.
REFERNCIAS
1. Cordell, G. A.; Lemos, T. L. G.; Monte, F. J. Q.; Mattos, M. C.; J. Nat.
Prod. 2007, 70, 478. Este foi o 3 artigo mais acessado deste peridico
em 2007.
2. Marsaioli, A. J.; Porto, A. L. M.; Biocatlise e Biotransformao
Fundamentos e Aplicaes, Schoba: Salto, 2010, vol. 1.
3. Liese, A.; Seelbach, K.; Wandrey, C.; Industrial Biotransformations, 1st
ed., Wiley-VCH: Weinheim, 2000.
4. Faber, K.; Biotransformations in Organic chemistry, 4th ed., Springer-
Verlag: Berlin, 2000.
5. Lenardo, E. J.; Freitag, R. A.; Dabdoub, M. J.; Batista, A. C. F.;
Silveira, C. C.; Quim. Nova 2003, 26, 123; Prado, A. G. S.; Quim. Nova
2003, 26, 738.
6. Zuin, V. G.; Correa, A. G.; Qumica verde Fundamentos e Aplicaes,
1 ed., Edufscar: So Carlos, 2009.
7. Yadav, J. S.; Nanda, S.; Reddy, P. T.; Rao, A. B.; J. Org. Chem. 2002,
67, 3900; Comasseto, J. V.; Omori, A. T.; Porto, A. L. M.; Andrade, L.
H.; Tetrahedron Lett. 2004, 45, 473; Lacheretz, R.; Pardo, D. G.; Cossy,
J.; Org. Lett. 2009, 11, 1245; Blanchard, N.; van de Weghe, P.; Org.
Biomol. Chem. 2006, 4, 2348.
suda, T.; Yamanaka, R.; Nakamura, K.; Tetrahedron: Asymmetry 2009,
9. Watt, G. W.; Chrisp, J. D.; Anal. Chem.1952, 24, 2006.
10. Wilson, T. M.; Davidson, L. S. P.; Br. Med. J. 1949, 884.
12. Enomoto, H.; Morikawa, Y.; Miyake, Y.; Tsuji, F.; Mizuchi, M.; Suhara,
H.; Fujimura, K.; Horiuchi, M.; Ban, M.; Bioorg. Med. Chem. Lett.
2009, 19, 442; Chou, S. P.; Yeh, Y.; Tetrahedron Lett. 2001, 42, 1309.
13. Chang, X.; Yang, Z. H.; Zeng, R.; Yang, G.; Yan, J. B.; Chin. J. Chem.
Eng. 2010, 18, 1029.
14. Rodrguez, P.; Barton, M.; Aldabalde, V.; Onetto, S.; Panizza, P.;
Menndez, P.; Gonzalez, D.; Rodrguez, S. J. Mol. Catal. B: Enzym.
2007, 49, 11.
15. Shaikh, N. S.; Junge, K.; Beller, M.; Org. Lett. 2007, 9, 5429.
16. Takahashi, H.; Kashiwa, N.; Kobayashi, H.; Hashimoto, Y.; Nagasawa,
K.; Tetrahedron Lett. 2002, 43, 5751.