Dia aberto dedicado s plantas aromticas e medicinais na Universidade de vora

Estratgias de Valorizao de Plantas

Aromticas e Medicinais
Cynara cardunculus

Ftima Duarte
14 de Dezembro 2011
CEBAL (Centro de Biotecnologia Agrcola e Agro-Alimentar do Baixo Alentejo e Litoral)

Privada, sem fins lucrativos, localizada em Beja

Incio das actividades de I&D em Junho de 2008

 REAS DE INVESTIGAO

BIOTECNOLOGIA ENGENHARIA BIOTECNOLOGIA ENGENHARIA

AGRO-ALIMENTAR AGRO-ALIMENTAR AGRO-FLORESTAL QUMICA

GRUPOS DE INVESTIGAO

COMPOSTOS VALORIZAO DE GENMICA ENGENHARIA DE

BIOACTIVOS AGRO-ALIMENTOS AGRONMICA PROCESSOS
IP:Ftima Duarte IP:Xavier Malcata IP: Snia Gonalves IP: Lusa Neves
Psdoc: a contratar Psdoc: Eliana Jernimo Psdoc: Teresa Ribeiro Psdoc: Conceio Fernandes
PhD:Patrcia Ramos PhD:Tnia Almeida Teresa Brs
ngela Guerra PhD: Tiago Capote
Laura Felcio PhD: Ana Ferro
Olinda Guerreiro Sara Valente

I&D COLABORAO TRANSVERSAL ENTRE OS VRIOS GRUPOS DE INVESTIGAO Valor

VALORIZAO DE BIOMASSA AGRO-FLORESTAL E AGRO-ALIMENTAR Acrescentado
 Ameixa

Valorizao Prunus domestica

Biomassa Esteva
Resduos e
sub-produtos agrcolas e
Cistus ladanifer
agro-industriais

Cardo

Bagao da
Azeitona
Cynara cardunculus
Cortia Outras culturas
Olea europaea Quercus suber
e/ou resduos
 Funding:
BI0ECOS Valorizao Integrada da Biomassa

AGRO-FOOD
Cardoon PHARMACEUTICAL
Extraction NF/RO Formulation
extract INDUSTRY
APPLICATIONS

Reverse Biological Evaluation of

Genetics Activity Antitumoral
(EcoTilling) Screening Potential

Anti-Tumorigenic
Potential

NF/RO Bioetanol
Production

Inhibitors
remotion
Cynara cardunculus

Planta herbcea perene, pertencente famlia das Asteraceae compositae, originria
da regio do Mediterrneo

Duas variedades botnicas:

cultivada - Cynara cardunculus var. altilis
selvagem ou silvestre - Cynara cardunculus var. sylvestris

Ampla utilizao do cardo na indstria farmacutica, devido s quantidades

considerveis de diferentes fitoqumicos:
Triterpenides
Fenis
(Petrovic et al., 2008)
Actividade biolgica da fraco fenlica de extractos de
Cynara cardunculus

Anti-oxidante

Anti-fibrtica

Anti-inflamatria

Anti-microbiana

Anti-hepatotxica

Anti-tumoral
(Fernndez et al., 2006)
 Caracterizao do potencial biolgico de extractos de CC

Folhas Folha cultivada fresca (FCF)

Captulo
Caules

Razes

Adaptado de
http://www.soc-botanical-
artists.org/

Quantificao dos compostos fenlicos totais em extractos metanlicos de Cynara cardunculus variedade
cultivada e selvagem
Velez et al. submitted 2011
 Caracterizao do potencial biolgico de extractos de CC

Actividade anti-oxidante

Cellular growth during 16 hours of S. cerevisiae in YPD medium (filled circles), YPD medium with 0.1 mM H2O2 (filled squares), YPD
medium with 0.1 mM H2O2 + 25 g GAE mL-1 of GWL (filled triangles), GWS (inverted filled triangles), GWC (filled diamond), GCR (open circles) and 25 g mL-1 BHA (open
squares). Each value represents the meanS.D. of three determinations.

Velez et al. Submitted 2011

 Caracterizao do potencial biolgico de extractos de CC

Actividade biolgica da fraco fenlica de extractos de

Cynara cardunculus

 Folhas de cardo cultivado parecem ser particularmente ricas em

compostos fenlicos

 Extractos de folha de cardo cultivado apresentam um bom

potencial anti-oxidante
Caracterizao do potencial anti-tumorignico de extractos de
cardo, em clulas de cancro da mama (MDA-MB-231)
 Caracterizao do potencial anti-tumoral de extractos de CC

Efeito anti-proliferativo

Extracto de folhas cultivadas de Cc (GCL)

Dose response curve representative of the effect of green cultivated leaves (GCL) extracts on
human breast cancer MDA-MB-231 cell viability. Extracts concentration range from 0.1 to 20 g GAE mL .
-1

Velez et al. Submitted 2011

 Caracterizao do potencial anti-tumoral de extractos de CC

Estudo do ciclo celular

A) Control B) FCL extract IC50
 Caracterizao do potencial anti-tumoral de extractos de CC

A) Control B) FCL extract IC50

Anlise do Ciclo Celular

Cell cycle % of control % of treated cells

phase cells with FCL IC50
value

G1 52,8 35,0
S 28,1 22,3
G2 19,6 40,4
 Caracterizao do potencial anti-tumoral de extractos de CC

Cell monolayer
Invaso Celular
Monolayer wound healing assay

Wound

Migration (7-24h)

D=(L/2) - W1
 Caracterizao do potencial anti-tumoral de extractos de CC

Invaso Celular
Monolayer wound healing assay
Control
Control
Cc green cultivated
FCL leaves
extract 70 (GCL)
g/ml extract 70g/ml

D=(L/2) - W1

Time 0 Time 10 h Time 0 Time 10 h

Time 24 h Time
Time24
48hh Time 24 h Time 48 h
 Proliferao Apoptose

Angiognese
Regulao do
Ciclo celular
 Caracterizao do potencial anti-tumoral de extractos de CC

Cc green cultivated leaves (GCL) extract

AKT1 protein immunodetection by western blot in MDA-MB-231 cells. Cells were incubated for 48 h with 0.74g
GAE ml-1 of GCL extract. A commercial inhibitor of the PI3K pathway, LY294002, was used as an internal control. Immunoblot for -actin served as control.

Guerra et al. 2010

 Concluses

Potencial anti-tumoral do extracto da folha de Cynara

cardunculus (var. cultivada)
 Folhas de cardo cultivado parecem ser particularmente ricas em compostos fenlicos

 Extractos de folha de cardo cultivado apresentam um bom potencial anti-oxidante

 Capacidade anti-proliferativa bastante pronunciada, em clulas cancro da mama

fentipo triplo negativo
 Inibio da progresso normal do ciclo celular, em clulas tratadas com extracto de
folha de cardo cultivado
 Reduo da capacidade migratria
 Diminuio da expresso proteica do AKT
Potencial anti-tumoral do extracto da folha de Cynara
cardunculus (var. cultivada)

Caracterizao e Potencial biolgico de

identificao extractos brutos,
qumica das Estratgia defraces enriquecidas
componentes
extractavis
abordagem e/ou compostos
puros
integrada para
a valorizao
Avaliao do econonmica
potencial Modelo in vitro
anti-tumoral
das PAMsCancro da mama fentipo
triplo negativo
Potencial anti-tumoral do extracto da folha de Cynara
cardunculus (var. cultivada)
Caracterizao e Potencial biolgico de
identificao extractos brutos,
qumica das fraces enriquecidas
Biological
componentes e/ou compostos
and
extractavis puros
economic
potential
Avaliao do valorizatio
potencial Modelo in vitro n
anti-tumoral Cancro da mama fentipo
triplo negativo
Dia aberto dedicado s plantas aromticas e medicinais na Universidade de vora

Estratgias de Valorizao de Plantas

Aromticas e Medicinais
Cistus ladanifer
 COMPOSTOS
BIOACTIVOS
Alimentao Animal
VALORIZAO
AGRO-ALIMENTOS

ENGENHARIA
Produo de Bioetanol
DE PROCESSOS
 Utilizao de Cistus ladanifer na alimentao animal

SFA
cidos gordos saturados

MUFA Gordura de PUFA

cidos gordos cidos gordos
monoinsaturados Ruminantes polinsaturados

cidos gordos trans

risco de doenas cardiovasculares

 Utilizao de Cistus ladanifer na alimentao animal

Bioidrogenao Ruminal 18:3 cis-9, cis-12, cis-15

Principais C18 da dieta cido linolnico

isomerizao
18:2 cis-9, cis-12
cido linoleico
18:3 cis-9, trans-11, cis-15
isomerizao

18:2 cis-9, trans-11 hidrogenao

cido rumnico
18:2 trans-11, cis-15

hidrogenao hidrogenao

18:1 cis-9 18:1 trans-11 18:1 cis-15

cido oleico cido vacnico 18:1 trans-15
hidrogenao hidrogenao

18:0 adaptado de Harfoot e Hazelwood, 1997

cido esterico
 Utilizao de Cistus ladanifer na alimentao animal

SFA
cidos gordos saturados

MUFA Gordura de PUFA

cidos gordos cidos gordos
monoinsaturados Ruminantes polinsaturados

cidos gordos trans

ismeros conjugados do cido linoleico

CLA
 Utilizao de Cistus ladanifer na alimentao animal

Ismeros conjugados do cido linoleico (Conjugated linoleic acid CLA)

18:2 cis-9, cis-12 18:3 cis-9, cis-12, cis-15

Efeitos benficos: cido linoleico cido linolnico
Anti-carcinognico
isomerizao
Anti-adipognico
Anti-diabetgenico 18:2 cis-9, trans-11
cido rumnico
Anti-aterognico

Tecidos

Rumn
Anti-inflamatrio hidrogenao

18:1 trans-11
Origem: 9-dessaturase cido vacnico
hidrogenao
Sntese ruminal
Sntese endgena 18:0
cido esterico

Harfoot e Hazelwood, 1997; Griinari et at., 2000

 Utilizao de Cistus ladanifer na alimentao animal

Forragem/Pastagem
Santos-Silva et al., 2002, Bessa et al., 2005, Bessa et al., 2008

Suplementao com leos vegetais ricos em cidos gordos polinsaturado

Santos-Silva et al., 2004, Bessa et al., 2005, Bessa et al., 2007, Jernimo et al., 2009, Jernimo et al., 2010

CLA

Taninos condensados podem modular a bioidrogenao ruminal

Khiaosa-Ard et al., 2009, Vasta et al., 2009, Vasta et al., 2010

Harfoot e Hazelwood, 1997; Griinari et at., 2000

 Utilizao de Cistus ladanifer na alimentao animal

Ensaio Experimental
Unidade de Investigao em Produo Animal,
Instituto Nacional de Recursos Biolgicos

Animais
Borregos machos da raa Merino Branco

Dietas experimentais
Dieta base: 90% de luzerna desidratada + 10% de smea de trigo
Mistura de leos vegetais: leo de girassol e de linho (1:2)

Dieta base - C
9 % de Taninos Condensados
+ 6% de leo CO
Dieta base
+ 25% de Cistus ladanifer CL

+ 25% de Cistus ladanifer + 6% de leo CLO

Durao do ensaio 6 semanas
 Utilizao de Cistus ladanifer na alimentao animal

Desempenho produtivo

 No foi afectado

Mdia EPM

Ganho mdio dirio (g) 285 17,1

Consumo mdio dirio (g MS) 1584 105,4

ndice de Converso 5,58 0,416

Peso vivo ao abate (kg) 36,7 2,00

in Jernimo et al., Journal of Agricultural and Food Chemistry (2010) 58, 10710-10721

Harfoot e Hazelwood, 1997; Griinari et at., 2000

 Utilizao de Cistus ladanifer na alimentao animal

cidos gordos - Contedo abomasal Bioidrogenao Ruminal

18:1 cis-9, trans-11 18:0

18:0 18:1 trans-11
18:1 trans-11
0.8 70
d 60 b b
0.6 b
50
% total C 18

% total C18
40
0.4 b
20 b
a
a 15
0.2 10 a
a a a
5
0.0 0

C CO CL CLO C CO CL CLO

Dietas Dietas

in Jernimo et al., Journal of Agricultural and Food Chemistry (2010) 58, 10710-10721

Harfoot e Hazelwood, 1997; Griinari et at., 2000

 Utilizao de Cistus ladanifer na alimentao animal

cidos gordos - Contedo abomasal Bioidrogenao Ruminal

18:3 cis-9, cis-12, cis-15

cido linolnico

18:2 cis-9, cis-12

cido linoleico

18:3 cis-9, trans-11, cis-15

18:2 cis-9, trans-11

18:2 trans-11, cis-15

18:1 trans-11

X
18:0

in Jernimo et al., Journal of Agricultural and Food Chemistry (2010) 58, 10710-10721

Harfoot e Hazelwood, 1997; Griinari et at., 2000

 Utilizao de Cistus ladanifer na alimentao animal

cidos gordos Gordura Intramuscular

18:1 trans-11 18:2 cis-9, trans-11

7 c

% do total de cidos gordos

6
5
4 b
3
2
2.0
a c
1.5 a
b
1.0
a a
0.5
0.0

C CO CL CLO
Dietas

in Jernimo et al., Journal of Agricultural and Food Chemistry (2010) 58, 10710-10721

Harfoot e Hazelwood, 1997; Griinari et at., 2000

 Utilizao de Cistus ladanifer na alimentao animal

Anlise sensorial

Teste triangular

Distinguiram No distinguiram

30
N. de provadores

20

10

C vs CL CO vs CLO

in Jernimo et al., 2011. Meat Science, Submetido.

 Utilizao de Cistus ladanifer na alimentao animal

Capacidade antioxidante da carne

Conservao durante 0, 3 e 7 dias a 2 C

(aps induo da oxidao lipdica)
12
mg MDA/ kg de carne

10

0 1 2 3 4 5 6 7
Dias de Conservao

C CO CL CLO
in Jernimo et al., 2011. Meat Science, Submetido.

Harfoot e Hazelwood, 1997; Griinari et at., 2000

 Utilizao de Cistus ladanifer na alimentao animal

Concluso

Incluso de esteva em dietas suplementadas com leos vegetais ricos em cidos gordos
polinsaturados

melhorar o valor nutricional da fraco lipdica da carne de

ruminantes e aumentar o seu potencial antioxidante

sem comprometer as propriedades sensrias da carne e o

desempenho produtivo dos animais

Harfoot e Hazelwood, 1997; Griinari et at., 2000

 Utilizao de Cistus ladanifer na alimentao animal

Cistus ladanifer

Modelao da Capacidade antioxidante

Bioidrogenao Ruminal da carne

Valor nutricional da
fraco lipdica da carne

Compostos secundrios das

plantas

Quais e Como??
 Caracterizao Extraco Potencial
Cistus da Compostos Biolgico da Planta e
ladanifer Planta Secundrios Compostos Secundrios

Qumica e Ensaios in vitro

actividade antioxidante e in vivo
 Caracterizao qumica e da actividade antioxidante
de Cistus ladanifer de diferentes idades ao longo do ano

Monte do Vento, Mrtola

1 ano 3 anos > 10 anos

Maro 2011 Fevereiro 2012

 Caracterizao de Cistus ladanifer de diferentes idades ao longo do ano

Fenis Totais

120

100
Fenois totais (mg/g MS)

1 ano
80 3 anos
> 10 anos
60

40

20

3 4 5 6 7 8 9 10 11
Ms
Ms Idade Ms*Idade

<0,001 0,010 <0,001

 Caracterizao de Cistus ladanifer de diferentes idades ao longo do ano

Actividade Antioxidante

2.4

IC50 (mg GAE/ml)

2.2

2.0

1.8

1.6

1.4

3 4 5 6 7 8 9 10 11
Ms
Ms Idade Ms*Idade

0,012 0,469 0,814

 Concluso Final

Compostos Secundrios
 Agradecimentos

Financiamento:

Compostos Bioactivos
Bioactivos::
- Ftima Duarte
- Olinda Guerreiro
- ngela Guerra
- Zlia Velez
- Patrcia Ramos
- Laura Felcio

Valorizao de Agro
Agro--Alimentos:
Alimentos:
- F. Xavier Malcata
- Eliana Jernimo

Genmica Agronmica:
- Snia Gonalves
- Ana Ferro
- Sara Valente

Obrigado pela vossa ateno