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Adriano Mariano
University of Campinas
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Development of a bioprocess with high energy efficiency for the flexible production of butanol/ethanol
integrated to a Kraft pulp mill View project
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La utopa est en el horizonte. Camino dos pasos, ella se aleja dos pasos y el horizonte se
corre diez pasos ms all. Entonces para que sirve la utopa? Para eso, sirve para caminar
(Eduardo Galeano)
On ne voit bien qu'avec le coeur. L'essentiel est invisible pour les yeux
(Saint-Exupry)
We live in a world where we have to hide in order to make love, while violence is
practiced in broad daylight
(John Lennon)
___________________________________
AGRADECIMENTOS
Ao Prof. Dr. Daniel Marcos Bonotto por toda confiana depositada em mim em todas as
etapas desse trabalho.
Profa. Dra. Dejanira de Franceschi de Angelis, no apenas pela orientao, mas tambm por
todo seu carinho, apoio e oportunidades. Um exemplo a ser seguido.
Ao Prof. Dr. Dimas Dias Brito, coordenador do PRH-05, pela bolsa de estudos e confiana.
Aos membros das bancas de Exame de Qualificao (Dr. Lus Tadeu Furlan e Dra. Aurora
Mariana G. de Frana Souza) e de defesa de Tese (Prof. Dr. Carlos Renato Corso, Prof. Dr.
Bruno Coraucci Filho, Profa. Dra. Cassiana Maria R. Coneglian e Dra. Aurora Mariana G. de
Frana Souza) pelas sugestes e correes.
Ao Prof. Dr. Jonas Contiero pelo uso das instalaes do Laboratrio de Microbiologia
Industrial (LMI).
Aos professores Edrio Dino Bidia, Jos Carlos Marconato e Sandra Mara Martins
Franchetti, pela oportunidade de trabalho como professor bolsista e pela orientao e ajuda.
Ao Bruce Tessari por sua ajuda nos trabalhos de campo e pela amizade.
Michely Perez pelo seu carinho e pela grande ajuda na coleta de solo.
Aos amigos Edi, Di, Allan e meu irmo, pelos momentos de descontrao.
E por fim, mas o mais importante, minha famlia, pelo apoio incondicional.
SUMRIO
ndice.......................................................................................................... i
ndice de Figuras........................................................................................ iv
Resumo....................................................................................................... vi
Abstract...................................................................................................... vii
1 Introduo e Objetivos.......................................................................... 1
2 - Reviso da Literatura............................................................................. 7
3 - Material e Mtodos................................................................................ 45
4 - Resultados e Discusso......................................................................... 70
5 - Concluses............................................................................................. 123
1 INTRODUO E OBJETIVOS................................................................................................................... 1
1.1 Introduo............................................................................................................................................ 1
1.2 Objetivos............................................................................................................................................. 5
2 REVISO DA LITERATURA...................................................................................................................... 7
2.1 Combustveis derivados do petrleo .................................................................................................. 7
2.2 Hidrocarbonetos como fonte de contaminao da subsuperfcie........................................................ 8
2.2.1 Origens e conseqncias........................................................................................................ 8
2.2.2 Dinmica dos hidrocarbonetos em subsolo .......................................................................... 10
2.3 Tcnicas de remediao aplicadas a reas contaminadas.................................................................... 13
2.3.1 Conceitos envolvidos na biorremediao.............................................................................. 16
2.3.1.1 Ao dos microrganismos.................................................................................... 16
2.3.1.2 Processos de biorremediao in situ................................................................. 17
2.3.1.3 Caracterizao do local para implementao da biorremediao in situ.......... 27
2.3.1.4 Condies hidrogeolgicas que influenciam a biorremediao ...................... 28
2.4 Biodegradabilidade dos hidrocarbonetos BTEX................................................................................. 30
2.5 Microrganismos degradadores de hidrocarbonetos............................................................................. 34
2.6 Mtodos de avaliao da biodegradao em laboratrio..................................................................... 38
2.7 Processo de intemperizao do leo diesel......................................................................................... 40
2.8 Produo de biossurfactantes utilizando-se matrias primas alternativas........................................... 42
2.9 Vinhaa................................................................................................................................................ 43
3 MATERIAL E MTODOS............................................................................................................................ 45
3.1 Avaliao da biorremediao natural da gua subterrnea no posto de combustveis SB.................. 45
3.1.1 Descrio da rea................................................................................................................... 45
3.1.2 Amostragem de gua subterrnea.......................................................................................... 47
3.1.3 Anlises fsico-qumicas........................................................................................................ 48
3.1.4 Anlises microbiolgicas....................................................................................................... 49
3.2 Amostragem de solo nos postos de combustveis............................................................................... 50
3.2.1 Postos de combustveis ASP e SB......................................................................................... 50
3.2.2 Posto de combustveis RC..................................................................................................... 50
3.3 Anlises realizadas nos solos.............................................................................................................. 51
3.3.1 Caracterizao fsico-qumica............................................................................................... 51
3.3.2 Anlise cromatogrfica.......................................................................................................... 52
3.3.3 Contagem de bactrias heterotrficas totais.......................................................................... 52
3.4 Respirometria...................................................................................................................................... 52
3.5 Avaliao de diferentes tcnicas de biorremediao aplicadas ao solo ASP...................................... 55
3.5.1 Preparo do inculo................................................................................................................. 55
3.5.2 Testes de toxicidade aguda.................................................................................................... 56
3.6 Avaliao da tcnica de bioaumento aplicada a solos......................................................................... 56
3.6.1 Microrganismos..................................................................................................................... 58
3.6.2 Preparo dos inculos.............................................................................................................. 58
3.7 Avaliao do efeito da adio da vinhaa na biorremediao de solos e guas subterrneas............. 59
3.7.1 Caracterizao da vinhaa..................................................................................................... 59
3.7.2 Experimento respiromtrico.................................................................................................. 59
3.7.3 Experimentos com gua subterrnea................ .................................................................... 60
3.8 Comparao da biodegradabilidade de leo diesel comercial e intemperizado.................................. 62
i
3.8.1 Microrganismos..................................................................................................................... 63
3.8.2 Preparo dos inculos.............................................................................................................. 64
3.8.3 Preparo do teste...................................................................................................................... 65
3.8.4 Experimento respiromtrico.................................................................................................. 65
3.8.5 Composio dos leos diesel................................................................................................. 66
3.9 Produo de biossurfactante utilizando-se leo diesel intemperizado................................................ 66
3.9.1 Preparo dos inculos.............................................................................................................. 66
3.9.2 Condies de cultivo.............................................................................................................. 66
3.9.3 Medidas de tenso superficial................................................................................................ 67
3.9.4 Verificao de bioemulsificadores........................................................................................ 67
3.9.5 Aplicao de ultrasom........................................................................................................... 68
4 - RESULTADOS E DISCUSSO..................................................................................................................... 70
4.1 Avaliao da biorremediao natural da gua subterrnea no posto de combustveis SB.................. 70
4.2 Caracterizao das amostras de solos.................................................................................................. 76
4.3 Avaliao de diferentes tcnicas de biorremediao aplicadas ao solo ASP...................................... 77
4.4 Avaliao da tcnica de bioaumento aplicada a solos......................................................................... 84
4.4.1 Teste de biodegradabilidade do leo diesel........................................................................... 84
4.4.2 Experimentos respiromtricos............................................................................................... 85
4.5 Avaliao do efeito da adio da vinhaa na biorremediao de solos e guas subterrneas............. 100
4.5.1 Experimento respiromtrico.................................................................................................. 101
4.5.2 Experimentos com gua subterrnea..................................................................................... 106
4.6 Comparao da biodegradabilidade de leo diesel comercial e intemperizado.................................. 110
4.6.1 Composio dos leos diesel................................................................................................. 110
4.6.2 - Teste de biodegradabilidade: indicador redox DCPIP........................................................... 114
4.6.3 Experimento respiromtrico.................................................................................................. 116
4.7 Produo de biossurfactante utilizando-se leo diesel intemperizado................................................ 120
5 CONCLUSES............................................................................................................................................... 123
ii
NDICE DE TABELAS
iii
NDICE DE FIGURAS
Figura 2.1 Diferentes fases presentes na zonas insaturada e saturada do solo (Fonte: GUIGUER, 2000)......... 11
Figura 2.2 Evoluo da contaminao por hidrocarbonetos de combustveis em subsuperfcie
(Fonte: USEPA, 2003b) .................................................................................................................. 13
Figura 3.1 Mapa da rea e localizao dos poos de monitoramento (Posto SB)............................................. 47
Figura 3.2 Coleta de amostra de gua subterrnea com amostrador bailer descartvel (posto SB)................... 48
Figura 3.3 Realizao da sondagem com trado rotativo manual (Posto SB)...................................................... 50
Figura 3.4 Coleta de solo no posto RC............................................................................................................... 51
Figura 3.5 Esquema de um respirmetro de Bartha e Pramer............................................................................ 53
Figura 3.6 Respirmetros de Bartha e Pramer.................................................................................................... 53
Figura 3.7 Experimento com gua subterrnea (condio no aerada) ............................................................. 61
Figura 3.8 Experimento com gua subterrnea (condio aerada) .................................................................... 62
Figura 3.9 Fase livre (leo diesel) na gua subterrnea do posto ASP............................................................... 63
Figura 3.10 Tensimetro Krss K6..................................................................................................................... 67
Figura 4.1 Diagrama de Piper efetuado a partir de dados obtidos com a coleta de amostras de gua
subterrnea realizada em Abril de 2005 (2 coleta)........................................................................ 73
Figura 4.2 Contagem de bactrias heterotrficas totais nas amostras de gua subterrnea coletadas entre
Maio de 2004 e Abril de 2006. ........................................................................................................ 75
Figura 4.3 Produo acumulada de CO2 durante a incubao. Cada barra de erro representa 1 desvio padro
de trs rplicas................................................................................................................................... 77
Figura 4.4 Produo diria de CO2 durante a incubao.................................................................................... 77
Figura 4.5 Eficincia de biodegradao os experimentos obtida atravs de dados respiromtricos. Cada
barra de erro representa 1 desvio padro de trs rplicas............................................................ 79
Figura 4.6 Diagrama de Pareto gerado a partir das condies experimentais.................................................... 79
Figura 4.7 Eficincia de remoo de hidrocarbonetos........................................................................................ 82
Figura 4.8 Populao de bactrias heterotrficas totais presentes no solo nos tempos inicial e final do
experimento respiromtrico.............................................................................................................. 83
Figura 4.9 Produo diria de CO2 durante a incubao dos tratamentos (ASP parte 1) ............................... 86
Figura 4.10 Produo acumulada de CO2 durante incubao dos tratamentos (ASP parte 1).
Cada barra de erro representa um desvio padro de trs rplicas................................................... 86
Figura 4.11 Produo diria de CO2 durante a incubao dos tratamentos (SB parte 1) ............................. 87
Figura 4.12 Produo acumulada de CO2 durante incubao dos tratamentos (SB parte 1).
Cada barra de erro representa um desvio padro de trs rplicas................................................. 87
Figura 4.13 Eficincia de biodegradao obtida com os dados respiromtricos dos tratamentos
(ASP parte 1) Cada barra de erro representa um desvio padro de trs rplicas............ 88
Figura 4.14 Eficincia de biodegradao obtida com os dados respiromtricos dos tratamentos
(SB parte 1) Cada barra de erro representa um desvio padro de trs rplicas............... 89
Figura 4.15 Anlise cromatogrfica (HTP) no tempo final dos tratamentos com os solos
ASP (1 ao 3) e SB (4 ao 5). Fatores de diluio: 50x (1; 2 e 3); 20x (4 e 6); 10x (5)................. 92
Figura 4.16 Produo diria de CO2 durante a incubao dos tratamentos (RC parte 2)................................ 93
Figura 4.17 Produo acumulada de CO2 durante a incubao dos tratamentos (RC parte 2).
Cada barra de erro representa um desvio padro de trs rplicas.................................................. 93
Figura 4.18 Eficincia de biodegradao obtida com os dados respiromtricos dos tratamentos
(RC parte 2). Cada barra de erro representa um desvio padro de trs rplicas.................. 94
Figura 4.19 Anlise cromatogrfica (HTP) nos tempos inicial e final dos tratamentos com o solo RC (8 ao
11). Fatores de diluio: 20x (inicial e 8); 10x (9 ao 12).............................................................. 95
Figura 4.20 Produo diria de CO2 durante a incubao dos tratamentos (ASP parte 3)........................... 97
Figura 4.21 Produo acumulada de CO2 durante a incubao dos tratamentos (ASP parte 3). Cada barra
97
de erro representa um desvio padro de trs rplicas.......................................................................
Figura 4.22 Eficincia de biodegradao obtida com os dados respiromtricos dos tratamentos (ASP
parte 3). Cada barra de erro representa um desvio padro de trs rplicas................................. 98
Figura 4.23 Contagem de bactrias heterotrficas totais no incio e final dos experimentos respiromtricos... 98
Figura 4.24 Anlise cromatogrfica (HTP) no incio e final dos tratamentos com o solo ASP (13 e 14).
Fatores de diluio: 10x (inicial); 1x (13 e 14)................................................................................ 99
Figura 4.25 Produo diria de CO2 durante incubao dos tratamentos 1 (solo RC) e 2 (solo RC + vinhaa) 102
iv
Figura 4.26 Produo diria de CO2 durante incubao dos tratamentos 3 (solo RC + leo diesel
intemperizado) e 4 (solo RC + leo diesel intemperizado + vinhaa). .......................................... 102
Figura 4.27 Produo diria de CO2 durante incubao dos tratamentos 5 (solo RC + leo diesel comercial)
e 6 (solo RC + leo diesel comercial + vinhaa)............................................................................ 103
Figura 4.28 Produo diria de CO2 durante incubao dos tratamentos 7 (solo ASP) e 8 (solo ASP +
vinhaa) .......................................................................................................................................... 103
Figura 4.29 Produo diria de CO2 durante incubao dos tratamentos 9 (solo SB) e 10 (solo SB+ vinhaa) 104
Figura 4.30 Contagem de bactrias heterotrficas totais nos tempos inicial e final do experimento
respiromtrico................................................................................................................................. 104
Figura 4.31 Anlise cromatogrfica (BTEX) dos leos diesel (a) comercial e (b) intemperizado.
Fator de diluio: 1x....................................................................................................................... 113
Figura 4.32 Anlise cromatogrfica (HPA) dos leos diesel (a) comercial e (b) intemperizado.
Fator de diluio: respectivamente:1x e 10x................................................................................... 113
Figura 4.33 Anlise cromatogrfica (HTP) dos leos diesel (a) comercial e (b) intemperizado. Fator de
diluio: 50x.................................................................................................................................... 114
Figura 4.34 Descolorao do indicador redox DCPIP durante teste de biodegradabilidade do leo diesel
comercial pela bactria P. aeruginosa LBI (frasco 2). Frasco 1: controle do substrato (sem
inculo) ..........................................................................................................................................
116
Figura 4.35 Produo diria de CO2 durante a incubao (experimento 1). ..................................................... 117
Figura 4.36 Produo acumulada de CO2 (experimento 1) durante a incubao. Cada barra de erro
representa um desvio padro de trs rplicas.................................................................................. 118
Figura 4.37 Produo diria de CO2 durante a incubao: 48 dias (experimento 1) e 92 dias (experimento 2) 118
Figura 4.38 Produo acumulada de CO2 nos experimentos 1 (48 dias) e 2 (92 dias) durante incubao.
Cada barra de erro representa um desvio padro de trs rplicas.................................................... 119
Figura 4.39 Contagem de bactrias heterotrficas totais nos tempos inicial e final do experimento
respiromtrico 1.............................................................................................................................. 120
v
Resumo
vi
Abstract
In this research, different aspects related to the bioremediation technique of soils and
groundwaters contaminated with hydrocarbons were considered. From soil and groundwater
samples collected at different petrol stations, the natural bioremediation of the groundwater,
where a diesel oil leakage took place, was evaluated by monitoring geochemical indicators for
2 years. Different bioremediation techniques (biostimulation with addition of nutrients and a
surfactant and bioaugmentation (injection of microorganisms)) were compared when applied
individually or grouped to contaminated soils with diesel oil and the capability of different
microorganisms to biodegrade commercial and weathered diesel oil was compared.
Considering the current environmental management practice of reusing residues, the effects of
the vinasse in the bioremediation of soils and groundwaters contaminated with diesel oil was
evaluated and the capability of different bacterial cultures to use weathered diesel oil as raw
material to produce biosurfactant was investigated. The Bartha & Pramer respirometric
method was employed in the biodegradation experiments with soils, and, in the case of the
groundwater, BOD flasks and aerated reactors. The experiments testing the biodegradability
of diesel oils were carried out using the DCPIP redox indicator technique and the monitoring
of the biosurfactant production by superficial tension measurements, according to the De
Nuy ring method, and employing the Krss K6 tensiometer. From the monitoring of the
geochemical indicators, it was possible to identify factors that support the efficiency of the
natural bioremediation technique for the treatment of the groundwater at the area of study.
The respirometric experiments demonstrated the importance of the soil nutritional balance and
that no gain in terms of increasing the biodegradation efficiency was obtained with the
bioaugmentation technique. The use of the vinasse in bioremediation processes showed to be
inefficient at the studied conditions. The results from the biodegradability experiments
demonstrate the importance of considering the weathering effect of the pollutants to
determine accurately the biodegradation rates. Finally, it was not possible, at the studied
conditions, verify the biosurfactant production using weathered diesel oil as raw material.
vii
1 - INTRODUO E OBJETIVOS
1.1 - Introduo
A forte industrializao e o desenvolvimento econmico experimentados pelo Brasil
principalmente a partir da dcada de 70, exigiram grande estruturao de toda a cadeia
produtiva dos derivados do petrleo, desde novas descobertas de campos de petrleo passando
pela formao de vrios plos petroqumicos e o aumento das redes de distribuio, a ponta
dessa cadeia. Em 2004, segundo a Agncia Nacional do Petrleo (ANP, 2005), no Brasil
existiam 13 refinarias, 48 terminais aquavirios e 26 terminais terrestres, 485 bases de
distribuio, 179 distribuidoras, 33.620 postos de revenda e uma comercializao de
aproximadamente 230 mil m3/dia dos principais derivados de petrleo.
2
Introduo e Objetivos
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
dos solos e das guas subterrneas contaminadas. Vrios mtodos podem ser empregados para
remover hidrocarbonetos do solo e gua subterrnea tais como extrao de vapor do solo,
bombeamento e biorremediao. No h uma regra geral que determine o melhor tratamento
de uma rea contaminada especfica. Cada caso deve ser analisado individualmente, avaliando
suas particularidades.
Biorremediao pode ser considerada como uma nova tecnologia para tratar locais
contaminados mediante o uso de agentes biolgicos capazes de modificar ou decompor
poluentes alvos. Estratgias de biorremediao incluem: a utilizao de microrganismos
autctones, ou seja, do prprio local, sem qualquer interferncia de tecnologias ativas de
remediao (biorremediao intrnseca ou natural); a adio de agentes estimulantes como
nutrientes, oxignio e biossurfactantes (bioestimulao); e a inoculao de consrcios
microbianos enriquecidos (bioaumento) (BENTO et al., 2003). O benefcio desses processos
a mineralizao do poluente, isto , a transformao em gs carbnico, gua e biomassa.
3
Introduo e Objetivos
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Outro ponto abordado nessa tese foi a busca de meios para acelerar a biodegradao
do leo diesel presente no solo e gua subterrnea de postos de combustveis, mediante
experimentos laboratoriais.
4
Introduo e Objetivos
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
1.2 - Objetivos
Sumarizando, este trabalho possui os seguintes objetivos:
5
Introduo e Objetivos
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
6
2 - REVISO DA LITERATURA
- Quando os tanques ficam vazios ou parcialmente vazios, o lado de dentro do tanque pode
corroer rapidamente;
8
Reviso da Literatura
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
- Oscilaes do nvel fretico provocam condies mais favorveis para a corroso dos
tanques e suas conexes quando so instalados na altura ou abaixo do nvel fretico. gua
subterrnea com pH cido pode acelerar a corroso do tanque.
9
Reviso da Literatura
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
- LNAPL (light non-aqueous phase liquid ou fase lquida no aquosa leve) caracterizada
por possuir densidade menor que a gua. Os hidrocarbonetos com essa caracterstica
esto comumente associados com a produo, refino e distribuio de produtos do
petrleo, por exemplo, a gasolina, o leo diesel e o querosene.
10
Reviso da Literatura
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Figura 2.1 - Diferentes fases presentes nas zonas insaturada e saturada (Fonte: GUIGUER,
2000).
11
Reviso da Literatura
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
um sistema de quatro fases como resultado da entrada de LNAPL nesta zona, com a seguinte
ordem de grau de molhabilidade: gua > LNAPL > ar (FERREIRA e ZUQUETTE, 1998).
12
Reviso da Literatura
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
13
Reviso da Literatura
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
1
Documento em fase de concluso disponvel na pgina da CETESB na internet (www.cetesb.sp.gov.br).
14
Reviso da Literatura
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
biorremediao
carvo ativado
biorremediao
biorremediao
15
Reviso da Literatura
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
16
Reviso da Literatura
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
17
Reviso da Literatura
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Para que se possa demonstrar que a remediao natural uma forma adequada de
descontaminao de hidrocarbonetos, necessrio que se faa uma completa caracterizao
hidrogeolgica da rea contaminada, que se determine a magnitude e extenso da
18
Reviso da Literatura
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
contaminao e que se demonstre que a pluma no ir migrar para regies de risco potencial.
Para tal, necessrio que se determine as taxas de migrao e reduo de tamanho da pluma
por meio de estudos de campo e de laboratrio. No entanto, se o processo natural de
atenuao no evitar o deslocamento da pluma at locais de risco, tecnologias que aceleram a
transformao dos contaminantes devem ser implantadas (CORSEUIL e MARINS, 1997).
- Biodegradao aerbia
19
Reviso da Literatura
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Quando a quantidade de oxignio diminui e nitrato est presente (ou outras formas
oxidadas de nitrognio), alguns microrganismos anaerbios facultativos utilizam nitrato
(NO3-) ao invs de oxignio como aceptor final de eltrons. Para o tolueno, este processo pode
ser aproximado pela seguinte equao:
20
Reviso da Literatura
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benzeno sob condies desnitrificantes. Vrios trabalhos indicam o benzeno como sendo
recalcitrante (no biodegradvel) sob estas condies (HUTCHINS et al., 1991a; KUHN et
al., 1988; SILVA et al., 2002) enquanto outros estudos indicam que o benzeno degradado
(MAJOR et al., 1988; KUKOR e OLSEN, 1989).
Pesquisas demonstram que uma ampla variedade de compostos orgnicos pode ser
biodegradada pela ao de microrganismos redutores de sulfato e/ou metanognicos
(geradores de metano). Estes compostos incluem ismeros de cresol (SMOLENSKI e
SUFLITA, 1987), hidrocarbonetos mono e poliaromticos (BERRY et al., 1987),
21
Reviso da Literatura
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C6H5-CH3 + 4,5 SO4-2 + 3 H2O 2,25 H2S + 2,25 HS- + 7 HCO3-1 + 0,25 H+ (2.4)
- Bioestimulao
22
Reviso da Literatura
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
qumicas para a atividade microbiolgica, a qual pode ento ser modelada para indicar os
fatores crticos limitantes (RAMASWAMI e LUTHY, 1997).
23
Reviso da Literatura
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compostos volatilizados podem ento ser coletados da zona vadosa por um sistema de
extrao de vapores. O air sparging pode ser muito efetivo em providenciar oxignio para
microrganismos aerbios. Estes microrganismos so naturalmente encontrados nas reas
contaminadas e so freqentemente capazes de oxidar uma ampla gama de compostos
orgnicos, incluindo compostos semivolteis, que no so removidos por volatilizao. Alm
disto, microrganismos aerbios tm demonstrado capacidade em oxidar compostos
halogenados como os mono e poliaromticos halogenados.
24
Reviso da Literatura
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O transporte de nutrientes bem como de outras substncias que devem ser levadas at
um aqfero contaminado, freqentemente tem sido o fator limitante para o processo de
biorremediao (THOMAS e WARD, 1989). Normalmente essas solues so introduzidas
no aqfero por meio de tcnicas convencionais de injeo (WARD et al., 1988). Entretanto, a
hidrogeologia do aqfero geralmente dificulta esse transporte fazendo com que ele no
ocorra de maneira uniforme (MERCER e COHEN, 1990).
De acordo com Corseuil (1994), outro fator que deve ser considerado como limitante
da biorremediao a presena de biomassa autctone insuficiente para a degradao dos
contaminantes. Baixas populaes de microrganismos tipicamente presentes em sistemas
subsuperficiais podem resultar em significantes perodos de retardos antes do incio
mensurvel da biodegradao, mesmo em condies favorveis de oxignio e nutrientes. O
autor observou que estes retardos, os perodos para o desenvolvimento da populao,
variaram inversamente com o nmero de microrganismos contaminante-especficos
25
Reviso da Literatura
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- Bioaumento (bioaugmentation)
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Reviso da Literatura
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
27
Reviso da Literatura
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- Caractersticas fsicas
temperatura.
- Caractersticas qumicas
- Caractersticas biolgicas
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Reviso da Literatura
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
- Tipo de solo
- Concentrao de minerais
29
Reviso da Literatura
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aqfero requerem um potencial redox em torno de 800 mV para as suas reaes, enquanto
que os anaerbios requerem Eh de 240 mV (a 25oC e pH 7) (BITTON e GERBA, 1984).
- pH
- temperatura
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Reviso da Literatura
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devido aos efeitos malficos sade humana causados por esses compostos de fundamental
importncia estudar a capacidade de microrganismos promoverem a sua degradao.
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Reviso da Literatura
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Para Corseuil e Marins (1997) e Barker et al. (1987), todos os lcoois primrios
podem ser biodegradados em preferncia ao BTEX e consumir o oxignio disponvel, alm de
ser txico ou inibitrio ao crescimento dos microrganismos degradadores de BTEX.
Hubbard et al. (1994) realizaram experimentos com trs tipos de combustveis: (1)
100% gasolina para o controle, (2) 10% MTBE e 90% gasolina e (3) 85% metanol e 15%
gasolina, que foram adicionados gua subterrnea. Ao final de 16 semanas de experimento,
93% e 88% dos BTEX foram degradados no controle e na pluma de gasolina com MTBE,
respectivamente, ao passo que apenas 69% dos BTEX na pluma de metanol com gasolina
desapareceram.
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Reviso da Literatura
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Chiang et al. (1989), num estudo de biodegradao aerbia de BTEX num aqfero
arenoso raso, reforaram a idia de que a quantidade de BTEX na gua subterrnea est
diretamente relacionada com a disponibilidade de oxignio dissolvido. Observaram que
quando a concentrao de oxignio dissolvido era maior que 0,9 ppm a concentrao de
BTEX estava ausente.
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Reviso da Literatura
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Reviso da Literatura
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Reviso da Literatura
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Em uma cultura mista, o produto metablico pode ser degradado por uma outra
espcie e o ataque de outros microrganismos pode levar a uma completa degradao do
produto, mesmo que dentro da comunidade no exista um microrganismo capaz de degrad-lo
totalmente (KATAOKA, 2001).
Deste modo, estudos realizados com cultura mista possuem vantagens sobre estudos
realizados com cultura pura. A primeira e mais importante que a capacidade biodegradativa
de uma comunidade muito maior quantitativa e qualitativamente. Segundo, a resistncia da
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Reviso da Literatura
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comunidade a substncias txicas pode ser muito maior porque h uma maior probabilidade
de que um organismo que possa detoxific-las esteja presente, e finalmente, o fato de que a
mineralizao de compostos xenobiticos algumas vezes requer a unio da atividade de
mltiplas enzimas (GRADY, 1985).
37
Reviso da Literatura
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usado como organismo modelo na maioria destes estudos. Embora o substrato natural
degradado por este fungo seja a lignina, o complexo enzimtico por ele secretado pode
degradar grande variedade de poluentes recalcitrantes. Esta habilidade tem sido explicada pela
similaridade estrutural destes poluentes por pores da estrutura da lignina e a baixa
especificidade das ligninases produzidas por P. chrysosporium (BRODKORB e LEGGE,
1992).
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Reviso da Literatura
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Reviso da Literatura
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Inazaki et al. (2004), Crivelaro (2005), Hencklein (2005), Guerra e Angelis (2005) e Mariano
et al. (2005, 2006a, b e c).
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Reviso da Literatura
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O leo diesel contem de 2000 a 4000 hidrocarbonetos que compem uma mistura de
compostos de cadeias lineares e ramificadas, cicloalcanos e compostos aromticos obtidos da
destilao da frao mdia do petrleo (GALLEGO et al., 2001). Alguns desses compostos
podem ser usados como indicadores na avaliao da intemperizao do leo diesel. Mudanas
na razo das concentraes de hidrocarbonetos como benzeno, tolueno, etilbenzeno e xilenos
(BTEX) so devidas principalmente a processos de evaporao e dissoluo. Estes compostos
so caracterizados pela alta presso de vapor e relativa solubilidade em gua. Benzeno e
tolueno dissolvem preferencialmente na gua subterrnea quando comparados com o
etilbenzeno e os xilenos, os quais tm menor solubilidade e so mais recalcitrantes
biodegradao (KAPLAN et al., 1997).
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Reviso da Literatura
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Reviso da Literatura
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2.9 - Vinhaa
A vinhaa um subproduto do processo de destilao do lcool, cuja disposio
representa um importante problema ambiental principalmente devido ao grande volume
gerado e sua alta demanda biolgica de oxignio (DBO). Em mdia, para produzir um litro de
lcool, 10 a 15 litros de vinhaa so produzidos, dependendo da qualidade da cana e do
processo industrial (CORTEZ et al., 1992), o que corresponde a aproximadamente 170
bilhes de litros por ano desse resduo no Brasil (AGRIANUAL, 2004). Considerando que
cada 2 litros de vinhaa so equivalentes ao esgoto domstico gerado por uma pessoa por dia
(LUKSSEMBERG et al., 1980 apud GONALVES e SILVA, 2000), a produo anual de
vinhaa corresponde a uma quantidade de esgoto domstico produzido por uma populao
estimada de 232 milhes de pessoas durante um ano.
43
Reviso da Literatura
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(CORAZZA, 1999). No Estado de So Paulo, onde a maior parte das plantaes de cana se
localiza, este procedimento controlado por uma legislao especfica que determina como
calcular a dosagem de vinhaa no solo (CETESB, 2005b). A adio de vinhaa em taxas
adequadas tem demonstrado aumentar o rendimento na produo da cana de acar, contudo,
a longo prazo, a aplicao intensiva da vinhaa pode aumentar a salinidade do solo
(CORAZZA, 1999), afetar a qualidade da cana e contaminar a gua subterrnea
(GONALVES e SILVA, 2000). Alguns trabalhos mostram que a vinhaa pode modificar
temporariamente algumas caractersticas qumicas e biolgicas do solo, como pH, carbono
orgnico, acidez trocvel (CAMARGO et al., 1987) e a atividade microbiana e biomassa
(MINHONI e CERRI, 1987). Ramalho e Sobrinho (2001) verificaram que o uso da vinhaa
em larga escala no altera significantemente a concentrao de metais pesados no solo. Fontes
(1988), Cardoso (1988) e Itamar (1987) observaram que a vinhaa aumenta as concentraes
de clcio, magnsio, matria orgnica e principalmente potssio, causando uma elevao da
condutividade eltrica do solo.
44
3 - MATERIAL E MTODOS
Bacia Sedimentar do Paran em rea onde ocorrem o Sistema Aqfero Tubaro (ou Itarar) e
os aqferos Diabsio e Cenozico, cada qual com diferentes caractersticas de circulao de
gua subterrnea (WATERLOO, 1999).
Material e Mtodos
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
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Material e Mtodos
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SB3
N
96.000
LEGENDA 95.000
94.000
93.000
SB2 SB1
posto de combustveis
local do vazamento
91.000
0 10 20 m
mo dificado de Waterlo o (1999)
Figura 3.1 - Mapa da rea e localizao dos poos de monitoramento (Posto SB).
47
Material e Mtodos
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Figura 3.2 - Coleta de amostra de gua subterrnea com amostrador bailer descartvel
(posto SB).
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Material e Mtodos
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Orion modelo 9417B e o eletrodo de referncia Orion modelo 9002 acoplados ao analisador
de ons Analion IA601. Para a calibrao foram utilizados padres de concentraes
conhecidas e compatveis com o esperado para as amostras (TONETTO e BONOTTO, 1999).
A alcalinidade total foi determinada por titulao usando uma soluo padro de
cido sulfrico (0,020 N) at que o ponto final fosse evidenciado pela mudana de cor da
soluo indicadora (HACH, 1992). Os valores obtidos correspondem a concentraes de
bicarbonato, j que nem carbonatos ou hidrxidos foram caracterizados.
49
Material e Mtodos
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Figura 3.3 - Realizao da sondagem com trado rotativo manual (Posto SB).
50
Material e Mtodos
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anlise granulomtrica;
umidade.
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Material e Mtodos
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classificadas segundo a norma ABNT NBR 6502 Rochas e Solos (ABNT, 1995), a qual de
acordo com o dimetro das partculas (Dp) considera frao areia (0,06 mm < Dp < 2,0 mm),
frao silte (0,002 mm < Dp < 0,06 mm) e argila (Dp < 0,002 mm). A umidade foi calculada
pela diferena de massa aps secagem do solo em estufa (120 C).
3.4 Respirometria
A verificao do desempenho de diferentes tcnicas de biorremediao aplicadas aos
solos contaminados foi realizada com os respirmetros de Bartha e Pramer (BARTHA e
PRAMER, 1965), os quais foram utilizados para medir a produo microbiana de CO2
(Figuras 3.5 e 3.6). Estudos de mineralizao envolvendo medidas de produo de CO2
podem prover excelentes informaes sobre o potencial de biodegradabilidade de
hidrocarbonetos (BALBA et al., 1998).
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Material e Mtodos
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Material e Mtodos
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onde:
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Material e Mtodos
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Tabela 3.1 Experimento respiromtrico. Condies experimentais geradas pelo Planejamento Fatorial
Completo - 23. Tempo de incubao de 55 dias.
tratamento NP S CB
1 +1 +1 +1
2 -1 +1 +1
3 +1 -1 +1
4 -1 -1 +1
5 +1 +1 -1
6 -1 +1 -1
7 +1 -1 -1
8 -1 -1 -1
+1 : C:N:P ajustado para 100:15:1 ou adio de surfactante (0,2% m/m) ou inculo de 105 UFC/g de solo
- 1 : C:N:P no ajustado ou no adio de surfactante ou inculo
NP: nitrognio e fsforo; S: surfactante; CB: consrcio bacteriano
55
Material e Mtodos
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
mesmo procedimento de centrifugao foi repetido. As clulas das trs espcies foram
agrupadas e a suspenso final foi preparada com a adio de 5,5 mL de soluo salina.
Tabela 3.2 - Experimento respiromtrico: Parte 1 solos ASP e SB. Tempo de incubao de 57 dias.
56
Material e Mtodos
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Nos tratamentos 1 e 4 (controles), a umidade foi corrigida em relao aos outros tratamentos
com adio de gua destilada.
Na segunda parte dos experimentos, foi simulada uma contaminao de leo diesel
no solo RC. Assim, leo diesel comprado de um posto de combustveis local foi adicionado
ao solo. A Tabela 3.3 traz resumidamente as condies experimentais. Em relao ao
bioaumento com o consrcio bacteriano S. hominis/K. palustris, duas condies foram
simuladas: a) adio de microrganismos antes da contaminao; b) adio de microrganismos
aps contaminao. O objetivo da primeira estratgia foi avaliar o quo eficiente seria o
bioaumento se empregado como uma maneira de preparar o solo para possveis vazamentos
futuros.
Tabela 3.3 - Experimento respiromtrico: Parte 2 solo RC. Tempo de incubao de 92 dias.
57
Material e Mtodos
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Tabela 3.4 - Experimento respiromtrico: Parte 3 solo ASP (bioaumento com o inculo comercial EM).
Tempo de incubao de 48 dias.
3.6.1 - Microrganismos
As culturas bacterianas Staphylococcus hominis e Kocuria palustris foram isoladas
do solo ASP a partir do plaqueamento aps trmino da respirometria do Item 3.5 e
identificadas pelo seqenciamento do rDNA 16S (realizado pelo CPQBA/UNICAMP).
58
Material e Mtodos
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Alemanha). As placas de Petri foram incubadas durante 24 horas a 35 oC. As clulas foram
raspadas utilizando-se gua destilada estril e os inculos ajustados para uma D.O. de 1,2 a
610 nm (SHIMADZU UV-1601PC).
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Material e Mtodos
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Tabela 3.5 - Experimento respiromtrico: adio de vinhaa ao solo. Tempos de incubao de 48 dias
(tratamentos 1 a 6) e 47 dias (tratamentos 7 a 10).
- condio no aerada
Este experimento foi realizado em frascos (300 mL) que so utilizados na anlise de
Demanda Bioqumica de Oxignio (DBO), os quais foram incubados durante 20 dias a
20,00.2oC (Figura 3.7). Os tratamentos com vinhaa foram comparados com a tcnica de
biorremediao padro de injeo de nutrientes, onde a correo de nitrognio e fsforo foi
realizada usando solues de (NH4)2SO4 e KH2PO4, respectivamente. A Tabela 3.6 traz
resumidamente as condies experimentais. Nos tratamentos sem vinhaa, para se obter as
mesmas condies, 5 % do volume do meio reacional corresponde gua destilada.
60
Material e Mtodos
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
61
Material e Mtodos
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
- condio aerada
O segundo experimento com a gua subterrnea foi realizado em quatro reatores
aerados (900 mL) (Figura 3.8), cujas condies experimentais esto listadas na Tabela 3.7.
Nos tratamentos sem vinhaa, para se obter as mesmas condies, 5 % do volume do meio
reacional corresponde gua destilada. Nos mesmos intervalos de tempo do experimento com
os frascos de DBO, foi medida a concentrao de BTEX. A demanda qumica de oxignio
(DQO) e a concentrao de HPA foram determinados apenas nos tempos inicial e final.
62
Material e Mtodos
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Figura 3.9 Fase livre (leo diesel) na gua subterrnea do posto ASP
3.8.1 Microrganismos
Diferentes culturas de bactrias e consrcios de microrganismos foram testados em
relao capacidade de biodegradar os leos diesel:
63
Material e Mtodos
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- Pseudomonas aeruginosa LBI - isolada por Benincasa et al. (2002) de uma rea
contaminada com hidrocarbonetos.
- consrcio L o lodo ativado de um reator piloto que est sendo testado para o
tratamento de gua de produo no Terminal Martimo Almirante Barroso
Tebar (Petrobras), localizado em So Sebastio (SP).
As placas de Petri foram incubadas durante 24 horas a 35 oC. Ento as clulas foram
raspadas utilizando-se gua destilada estril. Os consrcios EM e L foram adicionados aos
frascos dos testes sem preparao prvia.
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Material e Mtodos
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
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Material e Mtodos
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
66
Material e Mtodos
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
PIRLLO, 2006), enquanto que o meio BH normalmente usado em estudos onde avaliada
a biodegradao de hidrocarbonetos (HANSON et al., 1993; ROY et al., 2002).
Como fontes de carbono foram testados o leo diesel intemperizado do posto ASP
(D-ASP) e comparativamente, um leo diesel comercial (D-C) comprado em um posto de
combustveis local. O meio mineral mais a fonte de carbono (diferentes concentraes de leo
diesel (Tabela 3.9)) foram esterilizados conjuntamente em autoclave a 121 C e 1 atm durante
15 minutos. Aps isto, os inculos (1 mL) foram adicionados aos frascos, que foram mantidos
sob agitao (240 rpm) durante 144 horas a 272oC.
67
Material e Mtodos
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
em vrtex durante 2 minutos. Os tubos foram deixados em repouso por 24 horas e o ndice de
emulsificao foi calculado segundo a frmula:
68
Material e Mtodos
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
69
4 - RESULTADOS E DISCUSSO
Resultados obtidos a partir das anlises efetuadas nas amostras de gua subterrnea
coletadas entre Maio de 2004 e Abril de 2006 so mostrados nas Tabelas 4.1 at 4.3.
Tabela 4.1 - Parmetros fsicos e qumicos avaliados nas amostras de gua subterrnea coletadas entre Maio
de 2004 e Abril de 2006.
poo data nvel T condutividade (25oC) OD* pH Eh
o
monit. coleta (m) ( C) (mS.cm-1) (mg.L-1) (mV)
01/mai/04 2,46 25,0 0,308 4,4 6,0 14
29/abr/05 1,80 25,6 0,241 1,1 6,2 72
SB1
08/nov/05 1,27 25,0 0,378 2,2 5,8 - 46
10/abr/06 1,17 25,7 0,860 1,1 5,8 48
01/mai/04 1,69 26,3 0,173 4,6 6,2 203
29/abr/05 1,73 27,4 0,179 2,8 6,4 117
SB2
08/nov/05 2,33 25,3 0,310 5,0 6,3 215
10/abr/06 1,80 27,0 0,620 4,6 6,1 198
01/mai/04 3,60 25,2 0,254 4,3 6,5 53
29/abr/05 3,06 25,5 0,235 1,4 5,9 89
SB3
08/nov/05 2,88 24,5 0,281 2,6 5,9 75
10/abr/06 3,02 26,0 0,260 4,5 5,8 187
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Tabela 4.1 - Parmetros fsicos e qumicos avaliados nas amostras de gua subterrnea coletadas entre Maio
de 2004 e Abril de 2006 (cont.).
poo data Na Cl Mg Ca PO43- K
-1
monit. coleta (mg.L )
01/mai/04 26,2 6,40 0,00 0,38 0,05 6,90
29/abr/05 33,2 11,4 0,07 0,36 0,53 20,6
SB1
08/nov/05 38,9 15,6 < 0,01 0,64 3,16 19,0
10/abr/06 64,5 12,7 0,05 0,58 2,86 4,55
01/mai/04 14,9 7,60 0,06 0,57 0,20 6,30
29/abr/05 14,3 3,20 0,01 0,57 0,12 18,2
SB2
08/nov/05 20,9 16,6 0,12 0,36 0,19 69,0
10/abr/06 15,9 3,20 < 0,01 0,60 0,18 4,86
01/mai/04 19,4 2,90 0,03 0,51 0,09 4,61
29/abr/05 18,8 6,00 0,07 0,41 0,11 4,57
SB3
08/nov/05 25,8 17,7 0,04 0,41 0,07 2,99
10/abr/06 27,8 9,40 < 0,01 0,51 0,14 4,55
Tabela 4.1 - Parmetros fsicos e qumicos avaliados nas amostras de gua subterrnea coletadas entre Maio
de 2004 e Abril de 2006 (cont.).
poo data SO42- Fe(II) NO3- STS** alcalinidade***
monit. coleta (mg.L-1)
01/mai/04 62 < 0,01 0,50 8,0 52,0
SB1 29/abr/05 13 0,03 5,05 80 178
08/nov/05 27 1,30 1,90 10 72,0
10/abr/06 33 3,22 1,94 10 114
01/mai/04 11 0,01 0,08 8,0 39,0
SB2 29/abr/05 8,0 0,02 0,26 10 51,0
08/nov/05 8,0 0,03 0,28 20 77,0
10/abr/06 19 0,06 0,39 10 44,5
01/mai/04 17 < 0,01 1,11 80 95,0
SB3 29/abr/05 4,0 0,79 1,54 10 72,0
08/nov/05 9,0 0,01 0,38 80 67,0
10/abr/06 1,0 0,47 0,87 20 67,5
* oxignio dissolvido
** slidos totais em suspenso
*** alcalinidade expressa como HCO3-
Tabela 4.2 - Concentrao de BTEX nas amostras de gua subterrnea coletadas entre Maio de 2004 e
Abril de 2006.
poo data benzeno tolueno etil-benzeno xilenos TOTAL
monit. coleta g.L-1)
(
01/mai/04 <LD1 <LD <LD <LD <LD
29/abr/05 <LD <LD <LD <LD <LD
SB1
08/nov/05 <LD <LD <LD <LD <LD
10/abr/06 <LD <LD 4330 372 4702
01/mai/04 <LD <LD <LD <LD <LD
29/abr/05 <LD <LD <LD <LD <LD
SB2
08/nov/05 <LD <LD <LD <LD <LD
10/abr/06 49 69 90 99 307
01/mai/04 9,0 11,4 13,4 22,3 56,1
29/abr/05 <LD <LD <LD <LD <LD
SB3
08/nov/05 <LD <LD <LD <LD <LD
10/abr/06 57 <LD 914 334 1305
interveno2 5 700 300 500
referncia3 5 - - -
1
LD (limite de deteco) = 4,0 g.L-1
2
CETESB- Valores orientadores para avaliao de solos e guas subterrneas, Novembro de 2005.
3
Portaria 518, 21 de Dezembro de 2004 do Ministrio da Sade.
71
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
TOTAL 15 17 29
1
LD (limite de deteco) = 0,01 g.L-1
2
CETESB- Valores orientadores para avaliao de solos e guas subterrneas, Novembro de 2005.
3
Valor estipulado pela Portaria 518, 21 de Dezembro de 2004 do Ministrio da Sade.
A partir dos dados de concentrao dos componentes maiores (Tabela 4.1) foi feita a
classificao hidroqumica da gua subterrnea com o auxlio do diagrama de Piper. Em todas
as coletas, as amostras foram classificadas como bicarbonatada sdica, com exceo do ponto
SB1 na 1 coleta, classificada como bicarbonatada sulfatada. Assim, no geral, os resultados
obtidos em todas as coletas so semelhantes aos representados no diagrama da Figura 4.1, que
mostra os dados da 2 coleta.
72
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Posto SB - 29/Abr/05
SB1
80
80
to
SB2
itra
C 0
+N
SB3
lcio
60
6
40 loret
o
+ M 40
C
agn
+
20 lfato
si 2 0
o
S u
Mg SO4
20
20
20
80
20
80
to
40
40
4 0 bona
r
S
40
sio
ica
60
60
60
dio
60
Su
40 agn
lfa 40
60 to +
+ P 60
M
to
ona
ot
80
80
ss
80 Carb
io 8 0
20
20
Ca 80 60 40 20 Na + K 20 40 60 80 Cl
Clcio HCO3 + CO3 Cloreto + Nitrato
CTIONS % meq/L NIONS
73
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
74
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
7
SB1 SB2 SB3
6
log (UFC/mL) 4
0
01/5/2004 29/4/2005 08/11/2005 10/4/2006
75
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
76
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
(mmolc/dm3)
granulometria (%)
77
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
9000
Condies experim entais
8000 1 2 3
4 5 6
7000 7 8
CO2 produzido ( mol)
6000
5000
4000
3000
2000
1000
0
0 10 20 30 40 50
tempo (dias)
250
Condies experim entais
1 2 3
200
produo diria de CO2 ( mol.d-1)
4 5 6
7 8
150
100
50
0
0 10 20 30 40 50 60
tempo (dias)
A eficincia de biodegradao (EB) (Figura 4.5) foi calculada usando a Equao 3.3
baseada na produo total de CO2. Esta eficincia est relacionada com a mineralizao dos
78
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
19,8
20
Eficincia de Biodegradao (%)
15,2
13,5
(respirmetria)
15 13,5
0
1 2 3 4 5 6 7 8
tratamento
(1)NP 12,46453
(2)S 3,68399
1by2 3,44122
(3)CB 2,141017
1by3 1,906558
2by3 1,601737
0 2 4 6 8 10 12 14
Efeito Estimado (Valor Absoluto)
79
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
80
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
81
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
70
C8 -C11
60 C11 - C14
40 total
30
20
10
0
1 2 3 4 5 6 7 8
tratamento
82
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
12
tempo inicial
10 tempo final
0
1 2 3 4 5 6 7 8
tratamentos
83
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
84
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
85
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
250
Parte 1 - ASP
produo diria de CO2 ( mol.d )
-1
200 1 2 3
150
100
50
0
0 10 20 30 40 50 60
tempo (dias)
8000
Parte 1 - ASP
7000
1 2 3
6000
CO2 produzido (mol)
5000
4000
3000
2000
1000
0
0 10 20 30 40 50 60
tempo (dias)
86
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
50
45
2500
Parte 1 - SB
2000 4 5 6
CO2 produzido (mol)
1500
1000
500
0
0 10 20 30 40 50 60
tempo (dias)
87
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Parte 1 - ASP
30
Eficincia de Biodegradao (%)
22,9 21,2
25
(dados respiromtricos)
20
15
11,5
10
0
1 2 3
tratamento
88
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Parte 1 - SB
20
(dados respiromtricos)
15
12,0 10,3
10
0
4 5 6
tratamento
Anlises cromatogrficas de amostras dos solos ASP e SB (Tabela 4.8) revelam que
nesses locais o leo diesel sofreu um processo de intemperizao, isto , o combustvel teve
suas caractersticas alteradas por mecanismos fsico-qumicos e biolgicos devido ao longo
perodo de exposio s condies naturais.
O leo diesel contem de 2000 a 4000 hidrocarbonetos, que compem uma mistura
complexa de alcanos normais, ramificados e cclicos e compostos aromticos (GALLEGO et
al., 2001), os quais no podem ser totalmente separados pela cromatografia gasosa. De fato,
89
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
n-alcanos
solo pristano fitano HTR MCNR HTP
totais
-1
(mg.kg )
ASP <LD 266 162 2844 19763 22607
SB 81,8 65,0 43,8 941 6256 7198
LD (limite de deteco) = 0,4 mg.kg-1
HTR Hidrocarbonetos Totais Resolvidos; MCNR Mistura Complexa no Resolvida; HTP - Hidrocarbonetos Totais de Petrleo
Anlises realizadas por Analytical Technology .
90
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
n-alcanos
tratamento HTR MCNR HTP
totais
1 2 2 2 2
mg.kg-1
3620
1 4084 <LD1 20112 23732
(11)
2650
2 4084 <LD1 15970 18620
(35)
2988
3 4084 <LD1 17157 20145
(27)
565
4 877 <LD2 3287 3851
(36)
383
5 877 <LD2 2185 2568
(56)
752
6 877 <LD2 4423 5175
(14)
LD (limite de deteco) = (1) 21 mg.kg-1; (2) 8 mg.kg-1
HTR Hidrocarbonetos Totais Resolvidos; MCNR Mistura Complexa no Resolvida;
HTP - Hidrocarbonetos Totais de Petrleo;
Anlises realizadas por Analytical Technology, exceto HTR no tempo inicial (Bioagri Ambiental).
Tratamentos: (ASP parte 1) 1 controle (nenhum tratamento); 2 - bioestimulao (adio de N e
P); 3 - bioestimulao (adio de N e P) e bioaumento (consrcio bacteriano). (SB parte 1) 4
controle (nenhum tratamento); 5 - bioestimulao (adio de N e P); 6 - bioestimulao (adio de
N e P) e bioaumento (consrcio bacteriano).
91
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
(1) (4)
(2) (5)
(3) (6)
Figura 4.15 - Anlise cromatogrfica (HTP) no tempo final dos tratamentos com os solos
ASP (1 ao 3) e SB (4 ao 5). Fatores de diluio: 50x (1; 2 e 3); 20x (4 e 6); 10x (5).
Tratamentos: (ASP parte 1) 1 controle (nenhum tratamento); 2 - bioestimulao (adio de N e P); 3 - bioestimulao (adio de N
e P) e bioaumento (consrcio bacteriano). (SB parte 1) 4 controle (nenhum tratamento); 5 - bioestimulao (adio de N e P); 6 -
bioestimulao (adio de N e P) e bioaumento (consrcio bacteriano).
92
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
100
90 Parte 2 - RC
70 10 11 12
60
50
40
30
20
10
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90
tempo (dias)
6000
Parte 2 - RC
5000
7 8 9
10 11 12
CO2 produzido (mol)
4000
3000
2000
1000
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90
tempo (dias)
93
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Parte 2 - RC
(dados respiromtricos)
29,0
28,5
30
20
10
0
8 9 10 11 12
tratamento
94
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Tabela 4.10 - Concentrao de hidrocarbonetos no incio (1) e final (2) dos tratamentos com o solo RC. Valores
entre parnteses indicam a eficincia de remoo (%)
n-alcanos
tratamento pristano fitano HTR MCNR HTP
totais
1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2
(mg.kg-1)
7 -a - - - - - 104 - - - - -
38 25 15 2717 3058
8 499 44 24 1232 341 4199 5431
(92,0) (43,2) (39,1) (35,3) (43,7)
90 22 13 2564 2903
9 499 44 24 1232 339 4199 5431
(81,9) (50,1) (45,8) (38,9) (46,5)
86 15 9 1984 2246
10 499 44 24 1232 262 4199 5431
(82,7) (66,4) (64,3) (52,8) (58,6)
186 21 11 2292 2755
11 499 44 24 1232 463 4199 5431
(62,8) (52,9) (52,5) (45,4) (49,3)
194 21 12 2449 2952
12 499 44 24 1232 503 4199 5431
(61,1) (50,8) (45,4) (41,7) (45,6)
a
no analisado
HTR Hidrocarbonetos Totais Resolvidos; MCNR Mistura Complexa no Resolvida; HTP - Hidrocarbonetos Totais de Petrleo
Anlises realizadas por Analytical Technology, exceto tratamento 7 (Bioagri Ambiental).
Tratamentos: 7 - controle 1 - (apenas solo); 8 controle 2 - (contaminao sem bioaumento); 9 - bioaumento (S. hominis / K. palustris) antes de
contaminao; 10 - bioaumento (S. hominis / K. palustris) depois de contaminao; 11 - bioaumento (Ochrobactrum anthropi) depois de
contaminao; 12 - bioaumento (consrcio - R) depois de contaminao.
(8)
(9)
(10)
(tempo inicial)
(11)
(12)
Figura 4.19 - Anlise cromatogrfica (HTP) nos tempos inicial e final dos tratamentos
com o solo RC (8 ao 11). Fatores de diluio: 20x (inicial e 8); 10x (9 ao 12).
Tratamentos: 8 controle 2 - (contaminao sem bioaumento); 9 - bioaumento (S. hominis / K. palustris) antes de contaminao; 10
- bioaumento (S. hominis / K. palustris) depois de contaminao; 11 - bioaumento (Ochrobactrum anthropi) depois de
contaminao; 12 - bioaumento (consrcio - R) depois de contaminao.
95
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Nos tratamentos 11 e 12, a adio de inculos mais concentrados fez com que a
populao microbiana inicial aumentasse para valores entre 108 e 109 UFC por grama de solo
seco. Contudo, como nos outros tratamentos, incluindo o tratamento 7 (controle sem adio
de leo diesel), a contagem foi de aproximadamente 107 no tempo final. Esta similaridade
mostra que geralmente a biomassa microbiana pode ser um indicativo fraco para se
determinar o potencial de biodegradao como observado por Hickman e Novak (1989),
principalmente porque a biomassa ativa pode diferir na composio de espcies e nos regimes
metablicos.
96
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
60
Parte 3 - ASP
produo diria de CO2 ( mol.d )
50
-1
13 14
40
30
20
10
0
0 10 20 30 40 50
tempo (dias)
2000
1600 13 14
CO2 produzido ( mol)
1400
1200
1000
800
600
400
200
0
0 10 20 30 40 50
tempo (dias)
97
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Parte 3 - ASP
(dados respiromtricos)
10
6,7
8
0
13 14
tratamento
1
tempo inicial
2
tempo final
3
4
5
6
tratamento
7
8
9
10
11
12
13
14
98
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Tabela 4.11 - Concentrao de hidrocarbonetos no incio (1) e final (2) dos tratamentos com o solo ASP (parte 3).
Valores entre parnteses indicam a eficincia de remoo (%)
n-alcanos
tratamento pristano fitano HTR MCNR HTP
totais
1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2
(mg.kg-1)
35 228 263
13 <LD 4,1 <LD 2,4 <LD 1,3 62 722 784
(43,5 ) (68,4) (66,4)
38 260 297
14 <LD 3,5 <LD 1,9 <LD 1,1 62 722 784
(38,7) (64,0) (62,1)
LD (limite de deteco) = 4,0 mg.kg-1
HTR Hidrocarbonetos Totais Resolvidos; MCNR Mistura Complexa no Resolvida; HTP - Hidrocarbonetos Totais de Petrleo
Anlises realizadas por Analytical Technology.
Tratamentos: 13 - controle (nenhum tratamento); 14 - bioaumento (inculo comercial).
(13)
(tempo inicial)
(14)
Figura 4.24 - Anlise cromatogrfica (HTP) no incio e final dos tratamentos com o solo
ASP (13 e 14). Fatores de diluio: 10x (inicial); 1x (13 e 14).
Tratamentos: 13 - controle (nenhum tratamento); 14 - bioaumento (inculo comercial).
99
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
100
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
101
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
100
90
Condies experimentais
-1
1 2
70
60
50
40
30
20
10
0
0 10 20 30 40 50
tempo (dias)
120
110
Condies experimentais
100
produo diria de CO2 ( mol.d )
-1
3 4
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
0 10 20 30 40 50
tempo (dias)
102
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
160
150
140 Condies experimentais
130
-1
120
110
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
0 10 20 30 40 50
tempo (dias)
80
Condies experimentais
70
produo diria de CO2 ( mol.d )
-1
7 8
60
50
40
30
20
10
0
0 10 20 30 40 50
tempo (dias)
103
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
80
70 Condies experimentais
50
40
30
20
10
0
0 10 20 30 40 50
tempo (dias)
1
tempo inicial
2 tempo final
4
tratamento
10
104
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Tabela 4.14 - Concentrao de hidrocarbonetos no incio (1) e final (2) dos tratamentos. Valores entre parnteses
indicam a eficincia de remoo (%)
n-alcanos
trat. pristano fitano HTR MCNR HTP
totais
1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2
(mg.kg-1)
1 -a - - - - - - - - - 104.3 -
2 -a - - - - - - - - - - -
550 4313 4864
3 <LD1 <LD2 59,0 67,0 35,7 38,0 711 4444 5155
(22,6) (2,9) (5,6)
546 4326 4872
4 <LD1 <LD2 59,0 63,0 35,7 36,0 711 4444 5155
(23,2) (2,7) (5,5)
2
<LD 38,3 22,0 519 4131 4650
5 499,2 43,5 23,8 1231 4199 5431
(>96,3) (11,5) (7,6) (57,8) (1,6) (14,4)
<LD2 35,0 21,1 502 4160 4663
6 499,2 43,5 23,8 1231 4199 5431
(>96,3) (19,5) (11,3) (59,2) (0,9) (14,1)
35,0 228 263,2
7 <LD3 4,1 <LD3 2,4 <LD3 1,3 61,9 722 784
(43,5) (68,4) (66,4)
37,4 204 241,0
8 <LD3 3,4 <LD3 2,0 <LD3 1,1 61,9 722 784
(39,6) (71,7) (69,3)
1903 2489
9 <LD4 <LD4 32,5 35,7 27,5 31,8 510 587 3277 3787
(41,9) (34,3)
5 5
<LD <LD 349 3183 3532
10 <LD4 <LD5 32,5 27,5 510 3277 3787
(>39,7) (>28,7) (31,6) (2,9) (6,7)
a
no analisado
LD (limite de deteco) = (1) 3,6 mg.kg-1; (2) 18,5 mg.kg-1; (3) 4,0 mg.kg-1; (4) 2,0 mg.kg-1; (5) 19,6 mg.kg-1
HTR Hidrocarbonetos Totais Resolvidos; MCNR Mistura Complexa no Resolvida; HTP - Hidrocarbonetos Totais de Petrleo
Anlises realizadas por Analytical Technology
Tratamentos: 1 (solo RC); 2 (solo RC + vinhaa); 3 (solo RC + leo diesel intemperizado); 4 (solo RC + leo diesel intemperizado + vinhaa);
5 (solo RC + leo diesel comercial); 6 (solo RC + leo diesel comercial + vinhaa); 7 (solo ASP); 8 (solo ASP + vinhaa); 9 (solo SB); 10
(solo SB + vinhaa).
105
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
106
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
107
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Tabela 4.18 - Experimento com a gua subterrnea condio no aerada concentrao de HPA (g.L-1)
ASP SB
1 2 3 4 5 6
tempo (dias)
0 20 0 20 0 20 0 20 0 20 0 20
Naftaleno <LD 0,12 <LD 1,04 <LD 0,03 <LD <LD <LD 1,66 <LD 2,07
Acenaftileno <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD 0,19 <LD <LD
Fluoreno <LD <LD <LD 0,74 <LD 0,94 <LD 2,09 <LD 0,06 <LD 0,13
Antraceno <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD
Pireno <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD
Benzo[a]antraceno <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD
Criseno <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD
Benzo[k]fluoranteno <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD
Benzo[a]pireno <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD
Dibenz[a,h]antraceno <LD <LD <LD <LD <LD 0,01 <LD <LD <LD <LD <LD <LD
Benzo[g,h,i]perileno <LD <LD <LD 0,07 <LD 1,14 <LD <LD <LD <LD <LD 0,23
Indeno(1,2,3)pireno <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD
Fenantreno <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD
Fluoranteno <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD
Benzo[b]fluoranteno <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD
LD (limite de deteco) = 0,01 g.L-1
Tratamentos: (ASP) 1 - gua subterrnea (controle); 2 - gua subterrnea + nutrientes; 3 - gua subterrnea + vinhaa; (SB) 4 - gua
subterrnea (controle); 5 - gua subterrnea + nutrientes; 6 - gua subterrnea + vinhaa.
108
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Tabela 4.20 - Experimento com a gua subterrnea condio aerada concentrao de BTEX (g.L-1)
tempo (dias)
0 5 10 20
B 105,23 <LD <LD <LD
T <LD <LD <LD <LD
1
E 231,35 78,44 <LD <LD
X 290,38 111,32 996,13 3,35
ASP
B 105,23 <LD 1167,78 276,02
T <LD <LD <LD 0,08
2
E 231,35 75,76 <LD <LD
X 290,38 97,79 <LD 111,87
B <LD <LD <LD 0,07
T <LD <LD <LD <LD
3
E <LD <LD <LD 3,02
X <LD <LD <LD 10,34
SB
B <LD <LD <LD 0,21
T <LD <LD <LD <LD
4
E <LD 922,53 <LD 1,32
X <LD <LD 1051,65 123,09
B-benzeno; T-tolueno; E-etilbenzeno; X-xilenos
LD (limite de deteco) = 0,004 g.L-1
Tratamentos: (ASP) 1 - gua subterrnea (controle); 2 - gua subterrnea + vinhaa; (SB) 3 - gua subterrnea
(controle); 4 - gua subterrnea + vinhaa.
109
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
O leo diesel foi coletado de uma espessa camada acima da gua subterrnea, onde
se encontrava devido a um vazamento que ocorrera h aproximadamente dez anos. De acordo
com Kaplan (1997), nesta situao onde h uma espessa camada de produto em fase livre, a
taxa de alterao do leo lenta porque os processos responsveis por esses fenmenos
somente ocorrem nas interfaces combustvel/gua e combustvel/ar. A biodegradao na
regio interna do produto extremamente lenta devido limitao de oxignio, gua e
nutrientes. Assim, o combustvel pode permanecer relativamente inalterado por um longo
perodo de tempo, como dcadas. As alteraes mais provveis a acontecer nesta situao so
a evaporao dos hidrocarbonetos mais volteis e a dissoluo dos componentes mais
solveis. Apesar dessas consideraes, as anlises mostram que o leo diesel no posto ASP
teve algumas de suas caractersticas alteradas, e provavelmente devido a processos biolgicos
e fsico-qumicos.
O leo diesel intemperizado tem uma colorao verde escura e um odor diferente em
relao ao leo diesel comercial. A mudana de cor resultado da deteriorao dos corantes
presentes no combustvel (KAPLAN, 1997). A Tabela 4.22 mostra que o leo diesel
110
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
111
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
112
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
(a) (b)
Figura 4.31 - Anlise cromatogrfica (BTEX) dos leos diesel (a) comercial e (b)
intemperizado. Fator de diluio: 1x.
(a) (b)
Figura 4.32 - Anlise cromatogrfica (HPA) dos leos diesel (a) comercial e (b)
intemperizado. Fator de diluio: respectivamente: 1x e 10x.
113
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
(a) (b)
Figura 4.33 - Anlise cromatogrfica (HTP) dos leos diesel (a) comercial e (b)
intemperizado. Fator de diluio: 50x.
114
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
cultura descolorao
comercial intemperizado
(1) O. anthropi sim (aps 3 dias) no
no
(2) B. cereus sim (aps 3 dias)
no
(3) S. hominis sim (aps 3 dias)
no
(4) K. palustris sim (aps 3 dias)
Nos testes realizados em frascos erlenmeyer (Tabela 4.26) (Figura 4.34), novamente
P. aeruginosa LBI no demonstrou habilidade para degradar o leo intemperizado. Todos os
consrcios conseguiram degradar ambos os leos diesel, exceto o inculo comercial EM.
Como mencionado anteriormente, EM nunca havia sido testado em hidrocarbonetos. Neste
experimento, este inculo foi capaz de biodegradar somente o leo comercial, assim como os
outros microrganismos com reconhecida habilidade de biodegradao desses compostos. A
Figura 4.34 mostra o resultado do teste com a P. aeruginosa LBI (leo diesel comercial); a
colorao verde do frasco 2 caracterstica dessa espcie de bactria.
115
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
intemperizado, onde cada espcie tem uma funo especfica nas seqncias de reaes
enzimticas responsveis pela quebra de cadeias complexas de hidrocarbonetos.
cultura descolorao
comercial intemperizado
P. aeruginosa LBI sim (aps 3 dias) no
(1) (2)
116
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Os resultados do experimento 2, que foi realizado nas mesmas condies mas por um
perodo mais longo, foram colocados nos mesmos grficos contendo os resultados do
experimento 1 (Figuras 4.37 e 4.38). Esta comparao confirma que, aps 70 dias, as taxas
tornam-se iguais, indicando o consumo dos hidrocarbonetos mais facilmente assimilveis
presentes no leo comercial durante esse perodo. Alm disso, a similaridade entre as curvas
mostra que o experimento respiromtrico tem uma boa reprodutibilidade.
100
Condies experimentais
90
produo diria de CO2 ( mol.d )
intemperizado
-1
80
comercial
70
60
50
40
30
20
10
0
0 10 20 30 40 50
tempo (dias)
117
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
3500
Condies experimentais
3000
intemperizado
2000
1500
1000
500
0
0 10 20 30 40 50
tempo (dias)
100
Condies experimentais
90
intemperizado
produo diria de CO2 ( mol.d )
-1
80 comercial
70
60
50
40
30
20
10
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90
tempo (dias)
118
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
6000
Condies experimentais
5000 intemperizado
comercial
2000
1000
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90
tempo (dias)
119
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Tabela 4.27 - Concentrao de hidrocarbonetos no incio (1) e final (2) do experimento respiromtrico 1. Valores entre
parnteses indicam a eficincia de remoo (%)
leo n-alcanos
pristano fitano HTR MCNR HTP
diesel totais
1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2
(mg.kg-1)
< LD1 38,3 22,0 519 4131 4650
comercial 499 43,5 23,8 1231 4199 5431
(>96,3) (12,0) (7,6) (57,8) (1,6) (14,4)
67.0 38,0 550 4313 4864
intemp. < LD2 < LD1 58,9 35,7 711 4444 5155
(-13,8) (-6,4) (22,6) (2,9) (5,6)
LD (limite de deteco) = (1) 18,5 mg.kg-1; (2) 3,6 mg.kg-1
HTR Hidrocarbonetos Totais Resolvidos; MCNR Mistura Complexa no Resolvida; HTP - Hidrocarbonetos Totais de Petrleo
Anlises realizadas por Analytical Technology
leo diesel
intemperizado
tempo inicial
tempo final
leo diesel
comercial
120
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
121
Resultados e Discusso
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
(PIRLLO, 2006) utilizando uma fonte de carbono que pudesse ser biodegradada (leo diesel
comercial).
Outra questo a ser considerada que mesmo culturas com provada capacidade de
produzir biossurfactantes, por exemplo a P. aeruginosa LBI, pode no demonstrar uma
resposta positiva imediata a matrias primas que tenham suas caractersticas alteradas por
mecanismos fsico-qumicos e biolgicos devido ao longo perodo de exposio desses
compostos a condies ambientais, a exemplo do leo intemperizado utilizado nesse
experimento, no qual esto presentes maiores quantidade de hidrocarbonetos recalcitrantes.
Este fato pode em alguns casos diminuir a produo de biossurfactante in-situ em processos
de biorremediao baseados na adio desses microrganismos em reas onde a contaminao
ocorreu h vrios anos.
122
5 - CONCLUSES
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