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Engenharia Química
2013
2. Objetivo
Este experimento tem o objetivo de ensinar aos alunos como encontrar os
parâmetros da cinética enzimática por métodos gráficos, estudar o comportamento da
equação de Michaelis-Menten e a inibição enzimática.
3. Introdução
Muitas reações cotidianas são catalisadas pelas enzimas, nos quais são os
catalisadores biológicos. Elas são proteínas de elevada massa molar e podem
apresentar estruturas simples ou complexas. Uma das características inerentes à ela é
a sua alta especificidade, isto é, cada enzima tem afinidade pelo seu substrato e o
converte com alto grau de produção do produto almejado e a rapidez com que obtenha
o mesmo. Hoje em dia, também existem catalisadores sintéticos, porém, apresenta
uma especificidade menor, ou seja, pode ocorrer a formação de compostos
indesejados, mas em compensação, apresenta uma faixa maior de tolerância aos
fatores que influenciam na cinética enzimática, que não é tão tolerante para um
catalisador biológico1,2.
A enzima é uma espécie de molécula que facilita a interação entre os
substratos, assim então, formando produtos. A região do espaço que ocorre esse
fenômeno é o sítio ativo, no qual é extremamente pequeno e apresenta conformação
tridimensional. O substrato é ligado à enzima por meio de múltiplas forças fracas e a
sua especificidade da ligação depende do arranjo precisamente definido no sítio ativo
da enzima.
Os catalisadores biológicos não interferem no equilíbrio da reação, eles
diminuem a barreira da energia de ativação, isto é, a energia necessária que se deve
fornecer ao sistema para que o reagente se transforme em produto. A enzima participa
da reação, no entanto, ela não é cosumida, ou seja, a sua concentração se mantém
inalterada e o equilíbrio termodinâmico de um sistema químico é mantido, ou seja,
tanto o estado inicial e final se mantém constante1.
Gráfico 1. Um gráfico mostrando a mesma reação química, porém, uma com enzima
(reação 2) e outro não (reação 1)2.
Sabe-se que a enzima reduz a energia de ativa de uma reação química, logo,
pode-se utilizar a equação de arrhenius em forma logaritimica:
𝐸𝑎 1
ln(𝐴) = ln(𝐴∗ ) − 𝑅 . 𝑇 (Eq.4)
Onde: A → Atividade enzimática
A* → Fator de frequência para a reação
Ea → Energia de ativação
T → Temperatura
Durante uma reação química, pode haver outros fatores que influenciam na
cinética enzimática, além dos citados anteriormente, que são a presença de inibidor,
no qual é uma substancia que reduz a taxa de uma reação. Os inibidores podem ser
classificados em irreversíveis ou reversíveis.
● Inibição reversível
Este tipo de inibição é subdividido ainda em competitiva, não competitiva e
acompetitiva.
- Competitiva
Um inibidor competitivo é uma substância que se combina com uma enzima
livre de uma forma tal que impede a ligação do substrato. Isto é, o inibidor e o
substrato são mutuamente exclusíveis, em geral, porque há uma verdadeira
competição pelo mesmo sítio. A combinação do inibidor com a enzima provoca uma
mudança na conformação da mesma que deforma o sitio do substrato, sendo assim,
impede o substrato de se ligar. A seguir está alguns desenhos desse tipo de inibição:
Figura 1. (1) modelo clássico , S e I competem pelo mesmo sitio de ligação. (2) I e S
são mutuamente excludentes por causa de impedimento estéreo. (3) I e S possuem um
sitio comum de ligação. (4) os sítios de ligação para I e S são distintos, mas se
sobrepõem. (5) a ligação de I em um sitio inibidor distinto causa uma mudança
conformacional na enzima que não permite a ligação do substrato2.
Esse tipo de inibição, afeta a afinidade da enzima pelo seu substrato (Ks), sem
afetar a reatividade di complexo ativo enzima-substrato (Vmax). Esse problema pode
ser resolvido ao aumentar a concentração do substrato. O grafico típico dessa inibição
está a seguir:
- Não competitivo
Um inibidor não competitivo clássico não tem efeito na ligação do substrato e
vice-versa. Substrato e inibidor se ligam reversível, aleatório e independentemente em
sítios diferentes. Isto é, inibidor se liga a enzima e ao complexo enzima-substrato;
substrato se liga a enzima e ao complexo enzima-inibidor. Entretanto, o complexo ESI
resultante é cataliticamente inativo. O inibidor pode impedir o posicionamento
adequado do centro catalítico.
Esta inibição afeta a reatividade da enzima pelo seu substrato (Vmax), sem
afetar a afinidade do complexo ativo enzima-substrato (Ks). A seguir estão um
esquema da inibição não competitiva e gráfico da mesma.
- Acompetitivo
É uma inibição mista, isto é, afeta tanto a afinidade de enzima por substrato
como a reatividade de enzima-substrato. A seguir estão um esquema da inibição
acompetitiva e gráfico da mesma.
Bibliogradia