ARGENE @ CELL Control r-gene® Controlo celular para PCR em tempo real REF| 71-106 Apresentagao do dispositive NUMERO DE-TESTES 100 reagées, assumindo um volume de pipetagem de 15 pL Volume de reagao final 25k composicho: Get_Pré-mistura de ampliicagso para o control celular 2xO75OmL- (i) Corn aX, MgC, Tag Porat, ode arte, yars sonds QS! Pedro de quantiicagéo 1(10" ep), 10300. (052 Padrdo de quantiicagao 2 (10° cplul), 1x0:300m.. Folheto informative: 1 Folheto informative fomecido na ‘emioalagom ou a parte de won biomerioux.comfochiio 4. Ambito de utizagio Apresentago do disposiivo Intoresse do teste Principio do test Matoriais © reagentes nacessérios nao fornecisos. Inctupdes de seguranga e de utllzagao 08 contrlos Colheta, transporte e preparacto das amosiras. Protocolo de extragdo das amostas. 10. Protocolo de PCR Tempo Real 11. Andlse dos resultados 12, Validagdo e interpretagao dos resultados 13. Resolugdo de problemas. 14. Desempenhos. 15. Referéncias 16. Produtos anexos 17. Quadro de simboles. 20683 -C - pt- 2016105 cE Conservar, antes e apés a abertua inci, a 15 °C-31 °C 2 a0 abrigo da luz no local reservado & preparacdo das pré-misturas| ‘até a0 prazo de vaisade impresso no raul. ‘A rotrotranscriptase nao 6 fomecida neste dispositive, ota: A retrotranserptase fomecida como dispositive INELUENZA Au, Group & HN; 2009 rgone® (rel: 71-200) contém o volume de reagente. suliionte para. sor utizado com © ‘ispostive 71-106. Pagina 1/1620683 -C - pt- 2016105 ARGENE @ 1. Ambito de utilizagao ‘+ Autlzacao do dispostivo CELL Conta r-gene" na dlagnéstice in vio & valida apenas no émbite de utlizago do deposive INFLUENZA Ay Group & HN; 2009 r-gane® rot: reagente 71-200, + OCELL Control r-gone® - et: 71-108 pade igualmente ser ullizado noutras aplicagdes. Neste caso, o dispositive sera utizado apenas na investigacto. N Apresentagao do dispositive “+ No fimbito do diagnéstco das infegtes respratérias, as amostras normalmente tastadas sio as secregGes nasais @ brénquicas, bem come lavagens broncoalveolares. A colheita destas amosiras pode revelar-se delicada, em especial nos idosos. De facto, em certos 3805, a amosira lestada pode nao contercélulas. Em alguns destes virus, sendo esiriamente iniracelulares, uma amostra destituida Ge células pode dar um resultado falso negative, nao pela qualidade ao teste, mas pela qualidade da calheita (Heikkinen, 2001 LeruezVile, 2006), ‘+ _Em-caso de ausencia de células na amostra,ainterpretacao poderia conduzir a resultados falsos negativos. 0 CELL Control gene permite controlar a presenca de células na amostra e, consequentemente, a validagao da negatividade dos resultados, + Com abjativa de validar cortetamente os resultados, cada amosta deve ser amplficada com uma pré-mistura epecifica(drecionada contra o agente patogénico) o.com uma pré-mistura CELL Control r-gene” (direcionada contra o ADN celular) 3. Interesse do teste +O CELL Control -gene® permite vaidar os resutados obtidos apés a ampliicagao de PCR em tempo real veriicando a presenga de células na amostra extaida, ‘+ OCELL Control r-jone permite igualmente determinar o nimero do células presentes ra amostra, gragas a utlkzagao dos padcbes do ‘quantiicagao fomeeddos na dlspostvo. 4. Principio do teste 4c, Extragio: 1+ Os métodos de extragdotestatose valdados com o dispositive CELL Conta rgone® ef: 71-106 s8o os seguintes: 2) NuliSENS® aasyMAG™ 9 MagNA Pure LC System Instrument © BioRbot Mae ‘© Versant KPCR Molecular Systom SP 9 AlAcube © QlAamp® MinElut® Virus Spin kit © QlAamp® Val RNA Min kt 42. Amplificaglo e detecdo em tempo real: +O pticipio da detegao de PCR om tempo real decorre através da tecnologia de 5! nuclease (ns de patente 5210015, 5487972), também designada por sondas TaqMan. A mistura de amplitcacdo pronta usar inci: eNTPs, Taq Polimerase, tamp3o oe ampiicagao 8 sondas primers espaciticas de um gone celular e do seu transcrit, ‘+ As retrotranscriptases testadas e validadas com o dispositive CELL CoNTROL rgene® (ef: 71-106) s80 as seguintes: RT Omnisert® 4 Wut © _ RT fomecide no dispositive INFLUENZA Ay Group & HyNy 2008 r-gene® of: 71-300 + As plataformas ce PCR em tempo real que se saguem foram validadas com o disposiivo CELL CONTROL r-gene® (et: 71-106) ‘© LightCyeter 2.0, LightCyeler 489 System It 2 Sistema de PCR om tempo real Applied Biosystoms 7500, 7500 Fast, 7500 Fast Ox, ViA™ (blacos para placas de 96 posos © placas Fast de 96 pagos) 2 Smartcyeter 20 2 Slratagene Mx300SP ou Versant PCR Molecular System AD 5 Rotor-Gene + Apré-mistura Cet & uma pré-mistura otinizada para a amplicagao om tempo real do gene HPRT! alravés da Wonca 5 nuclease. (Oragmento ampliicado stus-se no gene HPRTI, que codfca para a hioxariina fosfo-rbositransfease 1 (letura do sinal a 530 nm). + 0 dispositive CELL Cont! r-geno” contém 2 padrées do quantiicagdo: QS1 © QS2, respetivamente, a 10' cépiasiuL (60 000 células/PCR) © 10° copiasipL (5000 célulasiPCR) de ADN padrao, a amolficar com a prémmistura Cc’. Estes reagentes permitem avaliaro ndmero de eéluls contidas numa amostra desconhecida ATENCAO: ‘As catateristicas do desompenho descrito foram valldadas ¢ estio garantidas $0 0 dispositive for lutlizado com as técnicas de extragdo e os aparelhos de amplificagao recomendados na ficha técnica, Pagina 2/1620683 -C - pt- 2016105 ARGENE @ 5. Materiais e reagentes necessarios nao fornecidos BA Para a extragio das amostras: Com ‘QlAamp? MinElute® Virus Spin kit ‘Outros métodos: xtragio validados com o dispositive Se ee CELL Controlragena™= rat: 71-108. Disposivos Tnsvumonios de wxragio tana 961005 NuclBENS? easyMAG® Magntc oxvacon NuclSENS® saya? reagents Segui as inccagées Go fbrcane Conttuga (8000 9-12 0009) sgNA Pure LC Total Nucleic Aa mR High Pertormance Mag Pure Lc System Veron MagNA Pure LC Total Nicole Acidteoaon it SSBF ASindicagbes do fabricanto Tubos de asa (1.5 ml, 2m) mionobota Barto tarmontion 8 +55°C agatact ies PAA MAS seguir as indcagbes do fabricate copes esetzads com poria com ta Ganda de | [J ‘Versant POR Motecular System SP sbi) ou pores de ceslocaeta poe, arts orsant Sample Preparation verre Wrcn Meter tren ‘ipa Melua” Virus Spin laa? laueuve Wit RNA Mit Jseguiras inccapbes do fabricate 52, Para a pré-mistura de amplficagio CELL Control r-gone®, ret: 71-106 [As retrotranscriptasestestadas e validadas com o cispasive CELL Control -gene® -ref: 71-108 sao as seguintes: fo RT Omniserip 4 Ui © _ RT fomecido ne cisposivo INFLUENZA Ay, Group & HyNy 2008 -gene® - of: 71-200 Micropipatas (P20 e P10) com pontas com fire © barrira de aerosssis ou pontas de daslocamento positive Termocicladores LightGyclr, Agplies Biosystems, Rotor-Gene, SmartGyele 2.0, Stratagene, Versant KPCR Molecular System AD: CContrituga de agitadorrotatvo LC para aparalhos LightCycler 20 ou microcentrituga de bancada para tubos de reagda de 2 mL. ou centrifuga de placa para aparelhos Applied Biosystems e Stratagene, Versant KPCR Molecular System AD; LLuvas de latex descartavals ou semelhantes; Bloco de arrefecimento adaptado a0 termocicladorselecionado validado com o dispositive CELL. Control. gene"; Lampada UV; stag de trabalho ou tela om plexiglass para a dstibuigao das amostras e pré-misturas, 62, Instrugées de seguranga e de utilizagao ‘Avisos e precaugées para a biologla molecular © dispositive deve ser manipulado por pessoal cualifcado, segundo as boas praticas laboratorials @ as insbugdes do manipulagdo para a bologia molecular. (0s procodimentos de ampificagso exigem as seguintes precaugbes a fim de evtar qualquer risco de contaminagdo das amostras: © Ullizar espagos de trabalho separades para a preparacdo das amostras e para as reagbes de ampliicagdo. O sentido de Circulagdo no laboratrio deve ser unidiecional desde a zona de preparagéo dos reagentes até 8 zona de ampiiicagso. Aibuir 2 cada zona um conjunto de balas de pipelas. Em casa algum os pradulas amplifeades devem ser intoduzidos nas zonas de preparacdo dos reagentes elou das amostras, 2 Asamostzas wtlzadas devem ser exclisivamente reservadas a esta andlise, © AS amosiras devem ser preparadas numa sala de seguranca micrbialégica. Os tubos das diferentes amostras nunca devem ser aberios em simulaneo, As pipetas utlizadas para manipular as amosttas devem ser reservadas para esse fim, Trata-se de plpetas de deslocamento positvo ou de pipetas munidas de pontas com fro estércs, As ppetas uilzadas para alquotar os reagentes davem ser reservadas para esse fim, Os reagentes nacessérios para a ampliicagdo devem ser aliquolados e ullizados apenas num ensaio, Precaugées gerais de manipulagao (0s reagentes nao utiizagos devem ser considerados como residuos quimicos perigosos ¢ eliminados em conformidade, Proceder @ liminagao dos reagentes utllzados, bem como de quaisquer outros materais descartavels contaminados seguindo os procedimantos para produtos infeciosos ou potencialmenteinfeciosos. E'da responsablidade de cada laboratora go 0s residuos e 08 elluentes que este produz consoante a sua nalureza e 0 seu perigo ‘2 assegurar (ou fazer assegurar) 0 tratamento @ a elminagao em conformidade com a legislagso apicavel Ler todas as instrupées antes de realizar este ensaio, [Nao uilizar reagentos apds o prazo de validade (impresso nos rétulos). Usilzar apenas os reagentes fornecidos no dispostivo, [Nao tocar reagontes entre dspositves com diferentes nimeros de lote ou do outros fabricantes. "Nunes pipetar com a boca Nao furar, comer ou baber nas areas de trabalho, Pagina 3/16