Coleção UAB−UFSCar

Tecnologia Sucroalcooleira

Reinaldo Gaspar Bastos

Tecnologia das fermentações

fundamentos de bioprocessos
Tecnologia das fermentações
fundamentos de bioprocessos
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Reinaldo Gaspar Bastos

Tecnologia das fermentações

fundamentos de bioprocessos

2010
© 2010, Reinaldo Gaspar Bastos
Concepção Pedagógica
Daniel Mill

Supervisão
Douglas Henrique Perez Pino

Equipe de Revisão Linguística

Ana Luiza Menezes Baldin
Clarissa Neves Conti
Francimeire Leme Coelho
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Rodrigo Rosalis da Silva

Equipe de Ilustração
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Lígia Borba Cerqueira de Oliveira
Priscila Martins de Alexandre

Capa e Projeto Gráfico

Luís Gustavo Sousa Sguissardi

Ficha catalográfica elaborada pelo DePT da Biblioteca Comunitária da UFSCar

Bastos, Reinaldo Gaspar.

B327t Tecnologia das fermentações : fundamentos de
bioprocessos / Reinaldo Gaspar Bastos. -- São Carlos :
EdUFSCar, 2010.
162 p. -- (Coleção UAB-UFSCar).

ISBN – 978-85-7600-190-4

1. Biotecnologia. 2. Bioprocessos. 3. Fermentação. 4.

Microbiologia industrial. 5. Enzimologia. I. Título.

CDD – 660.6 (20a)

CDU – 66:577.1

Todos os direitos reservados. Nenhuma parte desta obra pode ser reproduzida ou transmitida por qualquer
forma e/ou quaisquer meios (eletrônicos ou mecânicos, incluindo fotocópia e gravação) ou arquivada em qual-
quer sistema de banco de dados sem permissão escrita do titular do direito autoral.
........... Sumário
APRESENTAÇÃO. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9

UNIDADE 1: Introdução

1.1 Biomassa microbiana. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21

1.2 Enzimas microbianas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 22

1.3 Metabólitos microbianos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 22

1.4 Produtos recombinantes. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25

1.5 Biotransformação . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25

1.6 Microrganismos de interesse industrial. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25

Referências . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 27

UNIDADE 2: Metabolismo microbiano e biomoléculas envolvidas

2.1 Enzimas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 31

2.2 Metabolismo microbiano. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 35

2.2.1 Glicólise e Ciclo TCA. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37

2.2.2 Respiração. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 40
2.2.3 Metabolismo anaeróbio. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 41

Referências . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 43
UNIDADE 3: Cinética enzimática

3.1 Cinética de Michaelis-Menten. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 49

3.2 Determinação dos parâmetros cinéticos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 54

3.3 Inibição enzimática . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 55

3.3.1 Inibição enzimática irreversível . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 56

3.3.2 Inibição enzimática reversível. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57
3.3.2.1 Inibição enzimática reversível competitiva. . . . . . . . . . . . . 57
3.3.2.2 Inibição enzimática reversível não competitiva . . . . . . . . . 59
3.3.2.3 Inibição enzimática reversível incompetitiva . . . . . . . . . . . 60
3.3.2.4 Inibição enzimática reversível pelo substrato. . . . . . . . . . . 62

3.4 Efeito da temperatura na atividade enzimática . . . . . . . . . . . . . . . 63

3.5 Efeito do pH na atividade enzimática. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 66

Referências . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 67

UNIDADE 4: Balanços elementares em processos biotecnológicos

4.1 Balanços materiais . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 71

4.2 Os bioprocessos podem ser conduzidos em:. . . . . . . . . . . . . . . . 71

4.3 Estequiometria dos processos microbiológicos. . . . . . . . . . . . . . 77

4.4 Grau de redução dos substratos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 79

Referências . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 81
UNIDADE 5: Cinética dos processos biotecnológicos

5.1 Parâmetros cinéticos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 86

5.2 Fases de crescimento celular . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 92

5.3 Cinética de Monod. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 95

5.4 Modelos de crescimento celular . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 97

5.5 Influência de parâmetros físico-químicos no

crescimento celular. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 99

Referências . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 101

UNIDADE 6: Operações unitárias dos processos fermentativos

6.1 Esterilização . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 109

6.2 Agitação e mistura. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 114

6.2.1 Transferência de oxigênio. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 115

6.2.2 Agitação mecânica sem aeração. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 121

Referências . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 123

UNIDADE 7: Biorreatores

7.1 Biorreatores de mistura. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 127

7.2 Biorreatores de mistura contínuos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 131

 7.3 Biorreatores tubulares . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 133

7.4 Configurações de biorreatores. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 135

7.5 Aumento de escala de biorreatores. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 138

7.5.1 Método da constância da potência por unidade

de volume de meio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 140
7.5.2 Método da constância do coeficiente global de transferência
de oxigênio. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 140
7.5.3 Método da constância da velocidade na extremidade do
impelidor. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 141
7.5.4 Método da constância do tempo de mistura. . . . . . . . . . . . . . . . . 141
7.5.5 Método da constância do Número de Reynolds . . . . . . . . . . . . . . 142
7.5.6 Escolha do critério de scale-up. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 142

Referências . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 142

UNIDADE 8: Purificação de biomoléculas

8.1 Rompimento celular. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 149

8.2 Filtração e centrifugação . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 150

8.3 Purificação baseada na solubilidade. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 152

8.4 Extração em sistemas de duas fases aquosas . . . . . . . . . . . . . . 156

8.5 Cromatografia. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 157

8.6 Tratamentos finais. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 158

Referências . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 160
Apresentação

O principal objetivo deste livro é apresentar os princípios da engenharia de bio-

processos e da biotecnologia industrial, de forma prática, acessível e condensada.

Apesar da ocorrência de excelentes referências sobre bioprocessos em in-

glês, são escassas as bibliografias em português que abordem esse tema. Sendo
assim, esta revisão tem a proposta de atenuar esse problema encontrado em cur-
sos que abordem as áreas de bioquímica industrial.

De maneira didática procurou-se classificar esse amplo assunto em oito

Unidades. No início são apresentados os conceitos fundamentais, com a defini-
ção dos termos que serão usados amplamente durante a leitura do texto. A seguir,
procurou-se apresentar os principais modelos metabólicos utilizados por micror-
ganismos de interesse industrial. É importante salientar que o leitor interessado
em aprofundar os conhecimentos em metabolismo celular e bioenergética, por
exemplo, deve procurar as referências listadas no final de cada Unidade.

Na sequência do texto analisamos os processos enzimáticos e microbiológi-

cos por meio da estequiometria e balanços elementares. Um ponto fundamental
no estudo dos bioprocessos é a cinética das reações, abordada com a definição
dos parâmetros mais importantes e exemplo de casos. Por fim, comentamos so-
bre as principais operações unitárias utilizadas nos bioprocessos, incluindo os
princípios da purificação de biomoléculas.

O autor espera que o texto seja o primeiro passo, ou seja, um agradável im-
pulso inicial para que o leitor se interesse pelo assunto devido à facilidade de leitura
e procure aprimorar seus estudos nesta área.

Prof. Dr. Reinaldo Gaspar Bastos

DTAiSER/CCA/UFSCar