Coloração de GRAM

Diferencia as bactérias GRAM positivas das GRAM negativas.

Admite-se que a diferença de comportamento das bactérias ao GRAM,

deve-se à estrutura e composição da parede celular das bactérias.

Composição da parede celular: mucopéptido (glicopéptido) formado

por moléculas de acetilglucosamina e ácido acetilmurâmico unidas
alternadamente numa cadeia.

GRAM positivas: ácido teitóico e glicina.

GRAM negativas: lípidos, polissacáridos, proteínas, lipopolissacáridos.

Método

1. Fixar a suspensão à lâmina;

2. Corar com solução de cristal violeta: 1 minuto
3. Lavar rapidamente em água;
4. Cobrir o esfregaço com solução iodada (lugol): 1 minuto
5. Lavar em água corrente;
6. Descorar em álcool-acetona;
7. Lavar em água corrente;
8. Cobrir o esfregaço com solução de safranina ou fucsina de Gram.
9. Lavar, secar e observar.

Bactérias GRAM negativas: tratamento com o álcool-acetona extrai os

lípidos aumentando a permeabilidade da parede celular. O complexo
cristal violeta-iodo é extraido pelo álcool a bactéria descora e toma a
cor do corante de contraste. Cor: vermelha.

Bactérias GRAM positivas: o teor de lípidos na parede é menor e a

parede celular torna-se desidratada durante o tratamento com álcool-
acetona o que diminui a permeabilidade e o complexo cristal-violeta
iodo não pode ser extraído. Cor: violeta escuro.