05/03/2018 Combined Analysis of IFN-γ, IL-2, IL-5, IL-10, IL-1RA and MCP-1 in QFT Supernatant Is Useful for Distinguishing

ng Active Tuberculosis fro…

A Análise Combinada de IFN-γ, IL-2, IL-5, IL-10, IL-1RA e MCP-1 em

Supernatante QFT é Útil para Distinguir Tuberculose Ativa de Infecção
Latente
Maho Suzukawa , 1 Shunsuke Akashi , 1 Hideaki Nagai , 1 Hiroyuki Nagase, 2 Hiroyuki Nakamura , 3 Hirotoshi
Matsui , 1 Akira Hebisawa , 1 e Ken Ohta 1, *

Katalin Andrea Wilkinson, Editor

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Este artigo foi citado por outros artigos no PMC.

Introdução Vamos para:

A tuberculose ainda está entre as doenças infecciosas transmissíveis mais perigosas do mundo. Embora a
incidência de tuberculose diminua lentamente a cada ano, a OMS estimou que havia nove milhões de novos
casos de tuberculose em 2013 [ 1 ]. Desde ensaios de liberação de interferon-γ (Igras), incluindo
QuantiFERON®-TB Gold teste In-Tube (QFT) (Cellestis Inc., Victoria, Austrália), tornou-se prontamente
disponível para os profissionais clínicos, diagnóstico de Mycobacterium tuberculosis ( M . Tuberculose )
infecção tornou-se muito mais fácil e rápido em comparação com quando o diagnóstico dependia de métodos
microbiológicos como a cultura de micobactérias, esfregaço ácido-rápido e teste de pele de tuberculina de
Mantoux (TST).
Hoje, apesar do alto nível de cuidados de saúde social do Japão, a tuberculose ativa ainda é vista. Outro
problema é que os novos casos são muitas vezes (multi-) resistentes a medicamentos. Outros fatores de
complicação incluem prescrição aumentada de medicamentos imunossurpresivos para doenças específicas
como câncer e doenças reumáticas, aumento do número de imigrantes e viajantes de países em
desenvolvimento com maior incidência de TB ativa e aumento da prevalência de distúrbios imunológicos
adquiridos, como a infecção pelo HIV. Estes múltiplos fatores fazem diagnóstico e tratamento
da M . infecção tuberculosa ainda mais complexa e desafiadora do que antes [ 2 , 3 ]. Assim, há uma
necessidade de diagnóstico mais preciso, mais rápido e mais fácil de M .tuberculose , o que permitiria o
tratamento precoce.
Uma profunda preocupação dos médicos em relação aos IGRAs, incluindo a QFT, é sua incapacidade de
discriminar TB ativa de LTBI [ 4 , 5 ]. Além disso, QFT muitas vezes dá um resultado positivo para
pacientes com história passada de infecção tuberculosa, mesmo que tenham recebido terapia curativa para a
doença. Quando um paciente é QFT-positivo, ele / ela é diagnosticado como infectado com tuberculose e
pode ser iniciado no tratamento, mesmo na ausência de outros dados clínicos e sintomas. Se o paciente não
mostrar nenhuma outra evidência de TB ativa, então ele / ela pode ser colocado em um regime de fármaco
único usando isoniazida (INH) por pelo menos 6 meses, com visitas mensais à clínica. Se o paciente não
tiver sintomas clínicos, a adesão pode diminuir devido a razões psicológicas, econômicas ou físicas
[ 6]. Além disso, o uso diário de INH pode causar efeitos colaterais desnecessários, como lesões hepáticas ou
reações alérgicas, bem como selecionar micobactérias resistentes aos medicamentos [ 7 ]. Portanto, seria útil
identificar outras citocinas além de IFN-γ que poderiam ser medidas em sobrenadantes de QFT, aumentando
assim a sensibilidade e especificidade de QFT e facilitando a discriminação de TB ativa de LTBI. Aqui,
relatamos os resultados do nosso desempenho de análise de citocinas multiplex de sobrenadantes de QFT de
amostras de 31 pacientes com TB ativa e 29 pacientes com LTBI. Identificamos IL-2, IL-5, IL-10, IL-1RA e
MCP-1 como novos candidatos a serem medidos em sobrenadantes de QFT para melhor diferenciação de TB
ativa de LTBI.

Estudar População e Métodos Vamos para:

População de estudo
O protocolo para este estudo foi revisado e aprovado pelo Conselho de Avaliação Ética Institucional do
Instituto Nacional do Hospital Nacional de Tóquio (IRB). O consentimento verbal informado foi obtido de
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4817970/ 1/7
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todos os participantes do estudo e documentado nos prontuários médicos. O IRB aprovou este procedimento
de consentimento informado verbal para este estudo porque os participantes precisavam submeter-se a QFT
como parte de seus exames clínicos necessários ou exames médicos de rotina, independentemente da
participação neste estudo, e espécimes sobrantes foram utilizados para este estudo. A população estudada
compreendeu 31 pacientes diagnosticados como TB ativa, 29 pacientes com LTBI e 10 indivíduos com
controle saudável. Pacientes e sujeitos que foram examinados pela QFT no Hospital Nacional de Tóquio de
fevereiro de 2010 a dezembro de 2012 e tinham QFT positivo, de 21 a 55 anos de idade, HIV-negativos e não
utilizaram medicamentos imunossupressores e não apresentaram complicações clínicas, foram
consecutivamente matriculados neste estudo. A população foi então especificada em TB ou LTBI ativo. Os
pacientes de controle foram examinados pela QFT como parte dos exames anuais de rotina de profissionais
de saúde no Hospital Nacional de Tóquio. Todos os pacientes ativos de TB e LTBI foram submetidos à QFT
no momento do diagnóstico, antes do início da terapia.
Pacientes com TB activas foram definidos como os doentes com achados anormais radiológicos sugestivos
de tuberculose pulmonar activa com confirmação microbiológico de infecção com M . tuberculose por
cultura micobacteriana, exame de esfregaço ácido-rápido e transcrição transcrição reversa amplificação
concertada (TRC) de sputa. Todos os pacientes ativos de TB foram casos não tratados. TL é
convencionalmente definido como a presença de sinais de infecção com M . tuberculosemas sem evidência
de doença ativa. Neste estudo, os pacientes LTBI eram positivos para QFT, mas não apresentavam achados
clínicos ou físicos, nem sintomas de TB ativa nem achados anormais de raios-X no tórax. Nenhum espécime
de escarro foi examinado para LTBI ou sujeitos de controle, porque eles quase não tinham escarro. Todos os
sujeitos de TLBI e controle foram selecionados de nossos funcionários hospitalares.

QFT
O QFT foi realizado de acordo com as instruções do fabricante. Resumidamente, o sangue foi desenhado
pela punção venosa. As alíquotas de sangue foram então incubadas a 37 ° C durante 16-24 horas com uma
mistura de ESAT-6, CFP-10 e TB7.7 como antigénios específicos da tuberculose (TBAg) ou um mitógeno
como um controlo positivo, ou sem estimulação como um controle negativo (Nil). Os sobrenadantes de
cultura foram recolhidos e utilizados para quantificar IFN-γ por ensaio de imunoabsorção enzimática
utilizando o sistema QFT. QFT foi julgado de acordo com as instruções do fabricante.

Ensaio de citoquina múltipla

Os sobrenadantes remanescentes da QFT foram congelados a -20 ° C durante 5 anos no Hospital Nacional de
Tóquio e posteriormente utilizados para este estudo. Os níveis de citocinas nos sobrenadantes de TBAg e os
sobrenadantes de Nil foram analisados usando um painel Bio-Plex Pro Cyokine Humano, 27-Plex (BioRad) e
LUMINEX 200 (Luminex, Austin, TX) de acordo com as instruções do fabricante. As citocinas analisadas
foram FGF básico, eotaxina, G-CSF, GM-CSF, IFN-γ, IL-1β, -1RA, -2, -4, -5, -6, -7, -8, -9, - 10, -12, -13,
-15 e -17A, IP-10, MCP-1, MIP-1α, MIP-1β, PDGF-BB, RANTES, TNF-a e VEGF. Antes de medir as
amostras, os sobrenadantes foram diluídos 4x de acordo com as instruções do fabricante, ou diluíram 40x
para medir IL-8, IP-10, MCP-1, MIP-1α,

Análise estatística
As variáveis contínuas foram expressas como medianas com intervalos interquartil. Comparações gerais
entre os três grupos foram realizadas com ANOVA de 1 via. Em seguida, as comparações pos hoc Bonferroni
foram realizadas entre os grupos e os valores de P foram determinados. Os valores de P inferiores a 0,05
foram considerados significativos. Construímos as curvas características operacionais do receptor (ROC), e a
área sob cada curva ROC (AUC) foi calculada.
Nós selecionamos as quatro principais citocinas com base em suas AUCs TBAg-Nil, ou seja, IL-10, IFN-γ,
MCP-1 e IL-1RA, e então selecionamos o valor da citocina com o índice Youden mais alto como valor de
corte para o nível de cada citocina no sobrenadante. Nós atribuímos uma pontuação de 0 ou 1 para cada
resultado de ensaio, dependendo se estava abaixo ou acima do valor de corte para a citocina. Em seguida,
calculou-se a soma das quatro pontuações de citoquinas (pontuação total) [ 8 ] e as porcentagens de TB ativa
foram calculadas para ver a precisão de distinguir TB ativa de LTBI.

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Em seguida, as análises discriminantes lambda stepwise Wilk foram realizadas como análises discriminantes
gerais (GDA) para determinar as citocinas candidatas que contribuíram mais para a discriminação entre TB
ativa e LTBI. Os procedimentos passo a passo foram guiados por uma probabilidade de valor F de 0,05 para
inclusão e 0,20 para exclusão. Os coeficientes para as citocinas incluídas no último passo foram calculados.
Todas as análises estatísticas foram realizadas usando GraphPad Prism versão 5.0 (GraphPad Software, San
Diego, CA) e SPSS versão 23.0 (IBM, Armonk, NY).

Resultados Vamos para:

Estudar assuntos
Todos os 70 sujeitos matriculados, constituídos por 31 pacientes ativos de tuberculose, 29 pacientes LTBI e
10 indivíduos controle saudáveis, foram analisados. tabela 1mostra as características demográficas e clínicas
de todas as disciplinas. Todos os pacientes ativos de TB foram diagnosticados com TB pulmonar por
pneumologistas com base em resultados positivos de raios-X no tórax e exames microbianos
positivos. Selecionamos os pacientes ativos de TB e LTBI entre os indivíduos QFT-positivos, e todos os
indivíduos controle foram QFT-negativos. Nenhum dos LTBI ou participantes de controle saudáveis tiveram
comorbidades ou história de TB ativa. Nenhum dos participantes foi infectado pelo HIV. Os pacientes ativos
de TB e LTBI incluíram mais pacientes do sexo masculino e pacientes mais velhos em comparação com
indivíduos saudáveis de controle, mas não houve diferença estatística entre pacientes ativos de TB e LTBI
em relação ao gênero ou idade.

tabela 1
Características do paciente.

Diferenças nos níveis de citoquinas sobrenadantes de QFT entre TB ativo e pacientes LTBI
Sobrenadante TBAg-Nil Os níveis de citocinas nos sobrenadantes QFT TBAg e Nil foram medidos pelo
ensaio Luminex. Como QFT no cenário clínico é sempre julgado com base em
TBAg-Nil, também determinamos esse valor ( Tabela 2 e Fig. 1 ). IFN-γ, IL-1RA, IL-8 e MCP-1 foram
significativamente maiores nos pacientes ativos de TB em comparação com pacientes LTBI. Curiosamente,
IL-5 e IL-10 foram significativamente menores nos pacientes ativos de TB em comparação com os pacientes
LTBI, embora as diferenças reais em seus valores sejam bastante pequenas. Os dados TBAg-Nil também
descobriram que várias citoquinas (IL-2, IP-10 e PDGF) mostraram uma diferença significativa entre os
pacientes LTBI e os indivíduos controle saudáveis.

Figura 1
Principais citocinas em
sobrenadantes TBAg-Nil de
pacientes com TB ativa, LTBI e
controles saudáveis.

mesa 2
Concentrações de citocinas nos três
grupos (TBAg-Nil).

Nenhum sobrenadante Ao contrário do caso de TBAg-Nil ( Tabela 2 e Fig. 1 ), Nil sobrenadantes

apresentou maiores diferenças entre TB ativo e LTBI em termos de número de
citocinas que apresentaram significância estatística ( Tabela S1 e S1 Fig .). Curiosamente, mesmo nos
sobrenadantes de Nil, muitas das citocinas foram significativamente aumentadas nos pacientes ativos de TB
em comparação com pacientes LTBI ( Tabela S1 e S1 Fig.). Entre as 25 citocinas testadas, FGF básico, G-
CSF, IFN-γ, IL-1β, IL-1RA, IL-2, -4, -5, -10, -12, -13, -15, -17A, MCP-1, PDGF, TNF-α e VEGF foram
significativamente elevados nos pacientes ativos de TB em comparação com os pacientes LTBI. Por outro

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lado, nenhuma das citocinas mostrou uma diferença significativa entre os pacientes LTBI e os indivíduos
com controle saudável.

Precisão de cada marcador de citocinas na diferenciação entre TB ativa e LTBI

Sobrenadante TBAg-Nil Para elucidar a precisão desses marcadores no diagnóstico de TB ativa, foram
criadas as curvas ROC e suas AUCs foram calculadas. Sensibilidades e
especificidades também foram calculadas usando o valor com o índice Youden mais alto como valor de corte
( Tabela 3 e Tabela S2). As AUC mais elevadas obtidas para sobrenadantes TBAg-Nil foram mostradas por
IL-10, IFN-γ, MCP-1 e IL-1RA ( Fig. 2 ). Várias outras citocinas, ou seja, IL-5, -8, -12, -15, -17A, PDGF e
RANTES, também mostraram significância estatística na diferenciação de TB ativa de LTBI ( Tabela 3 ).

Figura 2
Principais curvas de ROC que
comparam a precisão diagnóstica
de citocinas em sobrenadantes de
TBAg-Nil para diferenciar TB
ativa de LTBI.

Tabela 3
AUCs para discriminar
tuberculose ativa de LTBI (TBAg-
Nil).

Nenhum sobrenadante Por outro lado, nos sobrenadantes de Nil, IL-1RA, MCP-1, IL-15, IL-12 e IL-10
apresentaram maiores AUCs do que IFN-γ ( S2 Table e S2 Fig ). Muitas das outras
citocinas também apresentaram AUC elevadas, com significância estatística na discriminação de TB ativa de
LTBI ( S2 Table e S2 Fig ).

Precisão das combinações de citoquinas na diferenciação entre TB ativa e LTBI

Em seguida, foram analisadas combinações de marcadores de citocinas múltiplas para ver se isso melhoraria
a precisão na diferenciação de TB ativa de LTBI. Para as combinações, escolhemos as quatro melhores
citocinas com base em suas AUC TBAg-Nil, nomeadamente, IL-10, IFN-γ, MCP-1 e IL-1RA ( Tabela 3
). Conforme mostrado na Fig. 3 , a taxa de identificação da TB ativa aumentou com o escore total. A
pontuação total de 4 para os sobrenadantes TBAg-Nil mostrou 100% de identificação da TB ativa ( Fig. 3 ).

Fig. 3
Taxas de identificação da TB ativa
com base na pontuação total para
a combinação de quatro citocinas
(IL-10, IFN-γ, MCP-1 e IL-1RA)
em sobrenadante TBAg-Nil.

Análise GDA de combinações de citoquinas na diferenciação entre TB ativa e LTBI

Para testar a precisão das combinações de citoquinas na diferenciação entre TB ativa e LTBI, realizamos
análise de GDA usando sobrenadantes TBAg-Nil. Selecionamos idade, sexo, IFN-γ, IL-1RA, -5, -8, -10,
-17A, MCP-1 e PDGF como fatores e realizamos análise GDA usando lambda de Wilk. A análise passo a
passo final selecionou IL-5 e MCP-1 com lambda de Wilk = 0,718 (p <0,001) e os coeficientes foram de
-0,655 para IL-5 e 0,821 para MCP-1.

Precisão das proporções de citocinas e diferenças de citoquinas para o diagnóstico

diferencial de TB ativa e LTBI
Os níveis de várias citocinas, ou seja, IL-2, -5, -10 e -15, foram maiores em sobrenadantes TBAg-Nil de
pacientes LTBI em comparação com pacientes com TB ativa, que é a tendência oposta de outras

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citocinas. Por essa razão, calculamos os índices e as diferenças dessas citocinas em relação ao IFN-γ, IL-
1RA e MCP-1. Como resultado, as AUC maiores foram mostradas pela diferença entre duas citocinas do que
pela sua proporção. Nossos dados mostram uma AUC maior para a diferença (0.8910) entre IFN-γ e IL-2 em
comparação com a proporção (0.7164). As proporções dos outros pares de citocinas não apresentaram AUC
acima de 0,8, mas suas diferenças por subtração apresentaram grandes AUCs, como 0,8443 para IL-1RA-IL-
2 ( Fig. 4 ).

Fig. 4
Curvas de ROC que comparam a
precisão diagnóstica das diferenças
entre duas citocinas em
sobrenadantes de TBAg-Nil para
diferenciar TB ativa de LTBI.

Discussão Vamos para:

Descobrimos que várias citocinas em Nil, bem como os sobrenadantes de QFT estimulados por TBAg, foram
úteis na diferenciação de TB ativa de LTBI. Embora o IFN-γ seja considerado incapaz de distinguir TB ativa
de LTBI, nosso estudo atual descobriu que IL-1RA, IL-2, IL-5, MCP-1 e IL-10, além de IFN-γ, são bons
candidatos; especialmente quando analisados em combinação, eles aumentam o potencial diagnóstico de
QFT para discriminar a TB ativa de LTBI.
Atualmente, os imunoensaios mais específicos para o diagnóstico de infecções micobacterianas são
provavelmente IGRAs, incluindo QFT. No entanto, um problema no uso de IGRAs é que eles não
conseguem discriminar TB ativa de LTBI. Na verdade, para pacientes com esfregaço negativo, estima-se que
QFT tenha sensibilidade de 75% e especificidade de apenas 37%, sugerindo que a precisão diagnóstica da
QFT é especialmente baixa nesses pacientes [ 9 ]. TST também é amplamente utilizado em testes de
diagnóstico para LTBI [ 10 ], mas TST tem baixa sensibilidade de 80% [ 11] em indivíduos que foram
vacinados com BCG, o que é comum no Japão. Portanto, nosso objetivo aqui foi elucidar se pudéssemos
melhorar o diagnóstico de TB ativa simplesmente por análise de um maior número de citoquinas no
sobrenadante QFT usado para detectar IFN-γ. As principais vantagens na utilização do sobrenadante QFT
para o diagnóstico diferencial de TB ativa são a especificidade microbiana e a conveniência metodológica
para o teste direto de citocinas induzidas pela estimulação de TBAg. A capacidade de discriminar TB ativa
de LTBI medindo citoquinas múltiplas em uma pequena quantidade de sangue em um ensaio noturno seria
uma grande vantagem em relação aos exames atualmente disponíveis, incluindo a cultura microbiana.
Várias citocinas mostraram uma diferença significativa entre TB ativa e LTBI no sobrenadante TBAg-
Nil. Curiosamente, algumas dessas citocinas mostraram o padrão inverso em sobrenadantes TBAg-Nil entre
TB ativa e LTBI, ou seja, maior em LTBI em comparação com a TB ativa. De acordo com outro estudo que
mostra que a IL-10 estimulada por TBAg é baixa em TB ativa [ 12], descobrimos que a IL-10 possuía a
melhor AUC para discriminar a TB ativa de LTBI, sendo maior na LTBI do que na TB ativa. A IL-10 é
produzida por várias células hematopoiéticas, e seu papel principal é suprimir as funções das células
macrógicas e dendríticas [ 13 ]. IL-10 também foi relatado como inibindo a formação de granulomas
fibrótica madura durante M . infecção por tuberculose [ 14]. Nós e outros [ 12 ] mostraram que os linfócitos
de pacientes ILTB produzir mais de IL-10 em resposta a in vitro exposição tbag, sugerindo que linfócitos TL
pode contribuir para a atenuação de inflamação durante M . infecção tuberculosa .

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Outras citocinas que apresentaram boas AUCs em distinguir TB ativa de LTBI foram MCP-1 e IL-1RA, ou
seja, maior em TB ativa em comparação com LTBI. O MCP-1 induz a quimiotaxia de monócitos e
granulócitos, função que parece crítica para proteção contra infecção microbiana [ 15 ]. O fato de que um
único polimorfismo de nucleotídeos (SNP) no promotor MCP-1 se correlacionou com o aumento da
suscetibilidade à doença da TB ativa [ 16 ] sugere uma estreita relação entre MCP-1 e a patogênese da TB
ativa. Por outro lado, a IL-1RA é secretada por monócitos, neutrófilos e células estruturais como células
epiteliais e seu papel é a inibição competitiva dos efeitos pro-inflamatórios de IL-1α e IL-1β [ 17 , 18]. A IL-
1RA tem sido sugerida como biomarcador plasmático em muitas doenças inflamatórias e infecciosas,
incluindo TB [ 15 ]. Estudos têm demonstrado que IL-1RA é significativamente aumentada no soro [ 19 ],
BAL fluido [ 20 ] e QFT sobrenadante [ 21 ] na TB ativa. De acordo com os nossos dados atuais e relatórios
de outros grupos que mostram a importância da IL-1RA na diferenciação da TB ativa de LTBI em crianças
[ 22 , 23 ], IL-1RA pode ser um jogador crítico ou um subproduto na patogênese da TB ativa . No entanto,
são necessários exames mais detalhados das funções fisiológicas e dos papéis de IL-1RA e MCP-1 tanto na
TB ativa quanto no LTBI.
Vale ressaltar que Nil sobrenadantes (ou seja, sem estimulação de TBAg) apresentaram maiores diferenças
nos níveis de citoquinas entre TB ativa e LTBI do que encontrado para TBAg-Nil e apresentaram as maiores
AUCs. O principal motivo para isso é provavelmente que os casos ativos de tuberculose apresentaram maior
inflamação sistêmica em comparação com LTBI. No entanto, outra razão pode ser que as células não
sanguíneas que não são utilizadas para a medição de QFT também produzem citoquinas assasadas,
resultando em diferenças nos níveis de citocinas maiores em sobrenadantes de Nil do que em sobrenadantes
estimulados por TBAg. De fato, MCP-1 e IL-1RA são produzidos por fibroblastos, bem como por células do
sangue como monócitos, macrófagos e neutrófilos [ 24 , 25 , 26]. Uma vez que apenas as células sanguíneas
são usadas para QFT, pode não haver indução significativa de citocinas em resposta a um antígeno. Além
disso, os linfócitos e os monócitos de pacientes com TB ativa podem já ter sido estimados pelo antígeno in
vivo maximamente , de modo que sua síntese de citoquinas não pode ser aumentada adicionalmente in vitro e
resultando em diferenças nos sobrenadantes de TBAg-Nil que são insuficientes para discriminar a TB ativa e
LTBI. Também é importante que os níveis de MCP-1 e IL-1RA em Nil sobrenadantes não se correlacionem
positivamente com outros dados clínicos relacionados à inflamação (por exemplo, WBC, CRP, ESR) em
nosso estudo ( Tabela S3). Assim, essas citocinas podem ser de forma independente e única para o
diagnóstico diferencial de TB ativa e LTBI, em vez de serem elevadas devido a um estado pró-inflamatório.
Quando analisamos as combinações de citoquinas múltiplas para a sua capacidade de discriminar TB ativa de
LTBI, os sobrenadantes TBAg-Nil apresentaram bons resultados. Não apenas as combinações de quatro
citocinas apresentaram diagnóstico preciso de TB ativa: nossa análise de GDA mostrou combinação de
MCP-1 e IL-5 também pode ser um bom candidato para discriminar a TB ativa de LTBI. Outro estudo de
análise de combinações de citoquinas múltiplas em plasma não estimulado para distinguir TB ativa de
contatos domésticos (QFT positivo e negativo) descobriu que o melhor modelo era uma combinação de
fractalina, IFN-γ, IL-4, IL-10 e TNF -α [ 27 ]. Outros descobriram que a combinação de EGF, sCD40L,
VEGF, TGF-α e IL-1α era potente para discriminar TB ativa e LTBI [ 28]. Juntos, seus e nossos dados
indicam que as combinações de várias citocinas podem fornecer uma identificação mais clara da TB ativa de
LTBI do que um único teste de citocinas. No entanto, estudos prospectivos maiores são ainda necessários
para identificar a melhor combinação.
Já foi relatado que a IL-2 foi maior em LTBI em comparação com a TB ativa [ 29 , 30 ] (embora o presente
estudo tenha encontrado apenas uma tendência, sem significância estatística). Por esse motivo, IL-2 / IFN-γ
foi relatado como um valor útil para diferenciar TB ativa de LTBI [ 29 ]. Nossas análises adicionais usando
citoquinas IL-2 e IL-10-duas mais elevadas em pacientes LTBI do que na TB ativa - com base em suas
diferenças e proporções em relação a outras citocinas indicaram que essas citocinas podem ser marcadores
úteis adicionais para discriminação ativa TB da LTBI.
As limitações do presente estudo incluem o número relativamente pequeno de pacientes com LTBI e
indivíduos de controle saudáveis que todos trabalhavam em cuidados de saúde e tinham historias
desconhecidas em relação a vacinas antigas de TB e BCG. Além disso, as amostras foram coletadas e
mantidas congeladas por algum tempo. No entanto, nosso estudo encontrou uma resposta IFN-γ robusta ao
TBAg que concordou com os resultados da QFT, sugerindo que não houve deterioração das amostras ou erro
técnico. Embora houvesse diferenças de idade entre os grupos de sujeito, um estudo anterior encontrou
diferenças mínimas nos níveis de citoquinas entre diferentes grupos etários [ 31 ]. Outra limitação do nosso
estudo atual é a falta de pacientes com controle doente ou um controle de doença. Os pacientes em nosso
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estudo tinha sido diagnosticado apenas com M .tuberculose . Portanto, não é possível afirmar que os níveis
elevados de citocinas que observada na nossa população de estudo eram M . tuberculose específica. Eles
podem ter sido um fenômeno não específico observado em condições inflamatórias gerais, incluindo
infecção com outros microrganismos (s) [ 32 ]. No futuro, são necessários estudos maiores e prospectivos
para identificar as combinações ótimas de citocinas, confirmar a utilidade clínica do seu ensaio como
marcadores de diagnóstico de infecção por micobacterianos, especialmente para diferenciar a TB ativa da
infecção latente e também para confirmar o seu corte. valores. Compreender as citocinas que diferenciam TB
ativa de LTBI pode nos ajudar a elucidar as diferenças na patogênese entre infecções ativas e latentes.

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4817970/ 7/7