FUNDAMENTOS DA CROMATOGRAFIA

Pofa. Dra. Rosileide Fontenele da Silva Andrade

Recife, 2020
 CROMATOGRAFIA
 É um método físico-químico de
separação dos componentes de
uma determinada mistura;
 A cromatografia permite a separação
de componentes por interação
diferencial (fase móvel e
estacionária)
 Algumas análises cromatográficas
podem identificar e quantificar;
substâncias.
 TERMOS UTILIZADOS EM CROMATOGRAFIA

Fase móvel: liquido (solvente polar ou apolar ou sistema)

ou gás ( Helio, argonio, nitrogenio)

Fase estacionária: liquido e sólido

Soluto: mistura de componentes da amostra

Eluição:Deslocamento do soluto na fase móvel

 HISTÓRICO DA CROMATOGRAFIA

 1900 – Mikhail Tsweet: Separação de misturas de

pigmentos vegetais em coluna de vidro.
ORIGEM DA PALAVRA: CROMATOGRAFIA
 Conjunto de técnicas de separação, que
permitem purificar compostos presentes em
uma determinada amostra.
COMO OCORRE A SEPARAÇÃO DOS COMPONENTES EM

UMA MISTURA?
 COMO OCORRE A SEPARAÇÃO DOS COMPONENTES EM
UMA MISTURA?

Ocorre por diferença do tempo de Rf

migração do composto (fator de

retenção= Rf) devido a interação da
amostra com a fase móvel e a fase
estacionária. Rf
PRINCIPIO DA CROMATOGRAFIA
CLASSIFICAÇÃO DA CROMATOGRAFIA
 CLASSIFICAÇÃO DA CROMATOGRAFIA

Planar
Tipo de suporte
Coluna

Adsorção
Partição
Modo de separação Troca iônica
Exclusão por tamanho
Afinidade
 CLASSIFICAÇÃO DA CROMATOGRAFIA

Cromatografia Gasosa
Natureza da fase móvel
Cromatografia Líquida

- Analitica (identificar e quantificar)

Objetivo da separação
- Preparativa (Purificação)
MECANISMOS DE SEPARAÇÃO
CROMATOGRAFIA POR ADSORÇÃO
CROMATOGRAFIA POR PARTIÇÃO
CROMATOGRAFIA POR TROCA IÔNICA
CROMATOGRAFIA POR EXCLUSÃO MOLECULAR
TIPOS DE CROMATOGRAFIA
CROMATOGRAFIA PLANAR EM

PAPEL
CROMATOGRAFIA PLANAR EM
CROMOPLACA
CÁLCULO DE MIGRAÇÃO CROMATOGRÁFICA
Fator de retenção (Rf)
CÁLCULO DE MIGRAÇÃO CROMATOGRÁFICA
Fator de retenção (Rf)
 CROMATOGRAFIA EM COLUNA
(Cromatografia líquida e gasosa)
 CROMATOGRAFIA LÍQUIDA
Na cromatografia liquida os componentes de uma amostra são
separados em consequência da distribuição deles entre uma FASE
MÓVEL LÍQUIDA e uma FASE ESTACIONÁRIA LÍQUIDA OU SÓLIDA
dentro de uma coluna.

A CROMATOGRAFIA LIQUIDA SE DIVIDE EM DOIS TIPOS:

Cromatografia líquida clássica (CLC)

Cromatografia liquida de alta eficiência (CLAE)
CROMATOGRAFIA LÍQUIDA CLÁSSICA (CLC)
CROMATOGRAFIA LÍQUIDA DE ALTA
EFICIÊNCIA- CLAE/HPLC
 CROMATOGRAFIA LÍQUIDA DE ALTA
EFICIÊNCIA
CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTA EFICIENCIA (CLAE
OU HPLC) é o tipo mais versátil e mais amplamente
empregado de cromatografia.

O tipo de CLAE é definido pelo mecanismo de separação ou

pelo tipo de fase estacionaria.
CROATOGRAFO (CLAE/HPLC)
INSTRUMENTAÇÃO
CROMATÓGRAFO (CLAE/HPLC)
MECANISMO DE SEPARAÇÃO EM CROMATÓGRAFO
(CLAE/HPLC)
 COLUNA DE CROMATOGRAFIA LÍQUIDA DE ALTA
EFICIÊNCIA (CLAE/HPLC)

COLUNAS
CROMATOGRAFIA GASOSA- CG
 CROMATOGRAFIA GASOSA- CG
É uma técnica de separação dos componentes da mistura

através de uma fase gasosa (fase móvel).

A Cromatografia gasosa (CG) é um tipo de cromatografia

usada para compostos que possam ser vaporizados (gás,

sólidos e líquidos) sem decomposição.

 CROMATOGRAFIA GASOSA- CG

 Fase móvel: Gás (gás de arraste)

Gás de arraste não interage com a amostra,

apenas passa pela coluna;

 Propriedades:
-Gás inerte
- Isentos de impurezas ( N2, He, H2, Ar)
 CROATOGRAFO (CLAE/HPLC)
INSTRUMENTAÇÃO
CROMATÓGRAFO GASOSO (GC)
 INSTRUMENTAÇÃO
CROMATÓGRAFO GASOSO (GC)
 COLUNA CROMATOGRAFICA- GC

Coluna empacotada Coluna com fino filme

CROMATOGRAMAS
 CROMATOGRAMAS
Cromatograma da superfície planar é a
cromoplaca.
 PARÂMETROS CROMATOGRÁFICOS- CLAE E GC

Tempo de retenção (tR): é o tempo gasto por um

componente desde a sua injeção até a sua detecção na saída
na coluna.

Tempo morto (tM): Tempo que a fase móvel leva para

chegar ao final da coluna
CROMATOGRAMA (CLAE/GC)
Dentre suas aplicações à cromatografia pode:

Separar compostos (moléculas de proteínas,

aminoácidos, vitaminas, etc);
Purificar compostos (separa compostos
indesejadas como também os componentes
desejados) .
Identificar compostos através de comparação
com padrão.
FIM!