Universidade Paulista – UNIP

Campus Flamboyant – Goiânia

Enzimas Introdução

Aula 2
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Conceitos Enzimas
Enzimas
• São catalisadores biológicos específicos, na
grande maioria de estrutura protéica, que
atuam em condições de pH e temperatura  São proteínas.
fisiológicos.
• Aumentam a velocidade das reações sem
alterar a constante de equilíbrio da reação;  Exceção das ribozimas de um pequeno grupo
de moléculas de RNA.
• Enzimas são proteínas especializadas,
com exceção de um pequeno grupo de
moléculas de RNA com propriedades
catalíticas, chamadas de RIBOZIMAS.

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Enzimas - Propriedades
Enzimas
Atuam como catalisadores das reações químicas
nas células.
Catalisador - Substância que aumenta a
Catalisadores
velocidade de uma reacção química sem sofrer
qualquer alteração durante o processo. Não
afetam a constante de equilíbrio; diminuem a
energia de ativação. Aumentam a velocidade da
reação
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 Enzimas - Propriedades Gerais Enzimas - Propriedades Gerais
 Apresentam alto grau de especificidade;
 São produtos naturais biológicos;
As enzimas diferem dos catalisadores químicos em  Estão quase sempre dentro da célula, e
diferentes aspectos: compartimentalizadas;
 Velocidades de reação mais elevadas;  Podem ter sua atividade regulada;
 Condições de reação mais suaves;  São altamente eficientes, acelerando a
velocidade das reações (108 a 1011 + rápida);
 Especificidade reacional elevada;
 São econômicas, reduzindo a energia de
 Regulação da reação. ativação;
 Condições favoráveis de pH, temperatura,
polaridade do solvente e força iônica.
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Enzimas - Propriedades Gerais Diminuição da energia de ativação

E

Energia
de
Atuam diminuindo a energia de ativação ativação
sem
enzima

Energia Caminho da reação

Energia de ativação sem enzima
E
S Energia de ativação
P
com enzima Energia
de
ativação
com
C.R. enzima
Caminho da reação
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Enzimas Enzimas

Propriedades Catalisador
1. Aceleram reações químicas

 Aceleram reações químicas; Catalase

H2O2 H2O + O2
 Não são consumidas na reação;
 Atuam em concentrações muito pequenas; Ex: Decomposição do H2O2
 Não alteram o estado de equilíbrio.

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 Enzimas Enzimas
3. Atuam em pequenas concentrações
2. Não são consumidas na reação

decompõe
Catalase
1 molécula de Catalase 5 000 000 de moléculas de
H2 O 2 H2O + O2
H2O2
pH = 6,8 em 1 min

E+S E+P
Número de renovação = n° de moléculas de substrato convertidas
em produto por uma única molécula de enzima em uma dada unidade
de tempo.

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Enzimas Atividade Enzimática

4. Não alteram o estado de equilíbrio
•Abaixam a energia de ativação; Atividade de uma enzima é a capacidade de
•Keq não é afetado pela enzima. catalisar uma reação.

5. Não apresenta efeito termodinâmico global

•G não é afetada pela enzima.
•Enzima muito ativa
•Enzima pouco ativa
Energia de ativação sem enzima
Energia de ativação com
•Enzima inativa
Diferença entre S enzima
a energia livre P
de S e P

Caminho da Reação
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Enzimas - Estrutura

 Peso molecular elevado;

 Formadas somente por proteínas ou
proteínas + parte não protéica.
Estrutura das Enzimas
apoenzima
Ativador
Proteína Cofator Coenzima
Holoenzima Grupo prostético
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 Enzimas - Estrutura Enzimas - Estrutura
Estrutura Holoenzima
Enzimática
Cofator. Molécula pequena, orgânica ou
Proteína Cofator inorgânica, requerida para que uma apoenzima
adquira atividade:
Ribozimas
Apoenzima ou Pode ser:
Apoproteína • íon inorgânico Substrato. Molécula sobre a qual a enzima atua;
• molécula orgânica
RNA
Isoenzimas. Enzimas que catalisam a mesma
Coenzima
reação.
Se covalente
Grupo Prostético

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Enzimas - Estrutura Centro Catalítico

E+S ES E+P  Conjunto de componentes da molécula

enzimática que participam da reação com o
substrato

+ +  Aminoácidos auxiliares e de contato

 Componentes não protéicos

Enzima se une ao Centro Catalítico = Centro Ativo
substrato num local ( proteínas simples)
específico chamado Enzimas podem conter um ou mais centros ativos
Centro Ativo
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Enzimas - Estrutura Enzimas - Estrutura

• Emil Fischer (1894): alto grau de especificidade das enzimas • Koshland (1958): Encaixe Induzido, enzima e o o substrato
originou  Chave-Fechadura , que considera que a enzima sofrem conformação para o encaixe. O substrato é distorcido para
possui sitio ativo complementar ao substrato. conformação exata do estado de transição.

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 Enzimas - Histórico
• Catálise biológica  início séc. XIX
– digestão da carne: estômago;
– digestão do amido: saliva.

• Década de 50
– Louis Pasteur - concluiu que a fermentação do
açúcar em álcool pela levedura era catalisada
Histórico por “fermentos” = enzimas

• Eduard Buchner (1897)

– extratos de levedo podiam fermentar o açúcar
até álcool;
– enzimas funcionavam mesmo quando removidas
da célula viva.

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Enzimas - Histórico
• James Sumner (1926)
– Isolou e cristalizou a urease;
– Cristais eram de proteínas;
– Postulou que “todas as enzimas são proteínas”.

• John Northrop (década 30)

– Cristalizou a pepsina e a tripsina bovinas; Nomenclatura e
• Década de 50 – séc. XX
– 75 enzimas  isoladas e cristalizadas;
Classificação
– Ficou evidenciado caráter protéico.

• Atualmente + 2000 enzimas são conhecidas.

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Enzimas - Nomenclatura Enzimas - Nomenclatura

• Século XIX - poucas enzimas identificadas

 Nome recomendado - As enzimas

• Adição do sufixo “ASE” ao nome do tem seu nome adicionado do sufixo
substrato: “ase”, precedido pelo nome do
Ex: - gorduras (lipo - grego) – LIPASE substrato sobre o qual atuam.
- amido (amylon - grego) – AMILASE Ex. ATPase, Peptidase, glicosidase,
urease, DNApolimerase.
Nomes arbitrários:
- Tripsina e pepsina – proteases
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 Enzimas – Nomenclatura Enzimas - Nomenclatura
• 1955 - Comissão de Enzimas (EC) da União
Internacional de Bioquímica (IUB)  nomear
e classificar.
• Cada enzima  código com 4 dígitos que Nome Sistemático: fornece
caracteriza o tipo de reação catalisada: informações precisas sobre a função
metabólica da enzima.
•1° dígito - classe
Ex: ATP-Glicose-Fosfo-Transferase.
•2° dígito - subclasse
•3° dígito - sub-subclasse
•4° dígito - indica o substrato
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Enzimas - Classificação
Segundo a União Internacional de Bioquímica (IUB),
6 classes:
CLASSE FUNÇÃO EXEMPLO

Óxido-redutases Reações de óxido-redução Isocitrato-desidrogenase

Transferases Transferência de grupos fosfotrutoquinase

químicos Fatores que Influenciam a
Hidrolases Reações de hidrólise glicosidades

Liases Adição a ligações duplas Citrato-liase

Atividade Enzimática
Isomerases Reações de isomerização Fosfotriose-isomerase

Ligases Reações de agregação, AcilCoA- sintetase

com energia do ATP

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Enzimas – Fatores que Influenciam a Enzimas – Fatores que Influenciam a Atividade

Atividade pH
• O efeito do pH sobre a enzima deve-se às
variações no estado de ionização dos componentes
• pH; do sistema à medida que o pH varia.

• temperatura; • Enzimas  grupos ionizáveis, existem em ≠

estados de ionização.
• concentração das enzimas;

• concentração dos substratos;

• presença de inibidores.

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 Enzimas – Fatores que Influenciam a Atividade Enzimas – Fatores que Influenciam a Atividade
TEMPERATURA CONCENTRAÇÃO DAS ENZIMAS
•Velocidade de transformação do S em P  qtidade de E.
•  temperatura dois efeitos ocorrem:
(a) a taxa de reação aumenta, como se observa na maioria das • Desvios da linearidade ocorrem:
reações químicas;
• Presença de inibidores na solução de enzima;
(b) a estabilidade da proteína decresce devido a desativação
• Presença de substâncias tóxicas;
térmica.
• Presença de um ativador que dissocia a enzima;
• O efeito da temperatura depende:
• Limitações impostas pelo método de análise.
- pH e a força iônica do meio;
- a presença ou ausência de ligantes.
•Recomenda-se:
A temperatura ótima para que a
enzima atinja sua atividade máxima,
• Enzimas com alto grau de pureza;
é a temperatura máxima na qual a • Substratos puros;
enzima possui uma atividade cte. por • Métodos de análise confiável.
um período de tempo.

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Enzimas – Fatores que Influenciam a Atividade Enzimas – Fatores que Influenciam a Atividade
CONCENTRAÇÃO DOS SUBSTRATOS PRESENÇA DE INIBIDORES

• [S] varia durante o curso da reação à medida que S é convertido

em P. • Inibidor é qualquer substância que reduz a velocidade de uma
• Medir Vo = velocidade inicial da reação. reação enzimática.

•[E] = cte. INIBIDORES

vo
•[S] pequenas  Vo linearmente. Vmax
•[S] maiores  Vo por incrementos cada
vez menores. REVERSÍVEIS IRREVERSÍVEIS
•Vmax  [S]  Vo insignificantes.
•Vmax é atingida  E estiverem na forma
ES e a [E] livre é insignificante, então, E
COMPETITIVOS NÃO COMPETITIVOS INCOMPETITIVOS
saturada com o S e V não  com  de [S].
[S]
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Inibidores de Enzimas Inibidores de Enzimas

Inibição competitiva Inibição não competitiva

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 Inibidores de Enzimas
Uso de inibidores enzimáticos
AIDS: Utiliza-se inibidores de uma das enzimas
fundamentais do vírus do HIV que é uma protease.
Esta protease é uma enzima essencial para a
produção de novas partículas virais nas células
infectadas.
Inibidores COMPETITIVOS das proteases do vírus
Cinética Enzimática
HIV:
- saquinavir (Hoffman-LaRoche)
- ritonavir (Abbot)
- indinavir (Merck)
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Cinética Enzimática Cinética Enzimática

Cinética Enzimática é estudada para: • Victor Henri (1903): E + S  ES
• Determinar as constantes de afinidade do S
e dos inibidores; • Em 1913:
Leonor Michaelis -Enzimologista
Maud Menten - Pediatra
• Conhecer as condições ótimas da catálise;

• Ajudar a elucidar os mecanismos de reação; K1 Kp

E+S ES E+P
K-1
• Determinar a função de uma determinada
enzima em uma rota metabólica. Etapa rápida Etapa lenta

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Característica Enzimas Catalisadores

Químicos
Especificidade ao substrato alta baixa
Natureza da estrutura complexa simples
Sensibilidade à T e pH alta baixa

Enzimas Condições de reação (T, P e pH) suaves drástica

(geralmente)
Custo de obtenção (isolamento e purificação) alto moderado
X Natureza do processo batelada contínuo
Consumo de energia baixo alto
Catalisadores Formação de subprodutos baixa alta
Separação catalisador/ produtos difícil/cara simples
Químicos Atividade Catalítica (temperatura ambiente)
Presença de cofatores
alta
sim
baixa
não
Estabilidade do preparado baixa alta
Energia de Ativação baixa alta
Velocidade de reação alta baixa
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 Enzimas - Aplicações
TIPOS DE APLIÇÕES INDUSTRIAIS
• Alimentos

• Rações animais

Aplicações • Papel e celulose

• Couro

• Têxtil
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Enzimas - Aplicações Enzimas - Aplicações

ALIMENTOS
• Indústria de azeite de oliva: RAÇÕES ANIMAIS
- Aplicação de poligalacturonase e pectinesterase na
melhoria de aspectos organolépticos e estabilidade • Utilização de enzimas nas rações para leitões durante o
a longo prazo. período de lactação:

• Panificação: - Emprego de Xilanase, Beta-glucanase e Alfa-amilase

com o objetivo de digestão de amido e, em decorrência
- Melhoria de cor, sabor e estrutural através de
disso, ganho de peso e abate precoce.
preparado enzimático que contém alfa-amilase
fúngicas. Atua sobre a farinha de trigo, acelerando o
processo de fermentação devido a uma maior
formação de açúcares para o fermento.

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Enzimas - Aplicações Enzimas - Aplicações

INDÚSTRIA DE PAPEL E CELULOSE INDÚSTRIA DO COURO

• Uma das primeiras partes do processo de transformação de
uma pele em couro é a eliminação dos pêlos que ainda venham
•Remoção de depósitos em máquinas de papel:
agarrados.
• O processo usado até agora envolvia sulfureto de sódio, um
- Substituição de álcalis e ácidos fortes por enzimas
químico com um cheiro tão intenso que é impossível passar por
com o objetivo de assegurar a integridade física
uma fábrica de curtumes sem dar por ela.
dos funcionários e cumprir leis ambientais.
• Em alternativa, foi sugerido à indústria que passe a usar
enzimas – o mau cheiro desaparece e a carga poluente dos
efluentes é eliminada.

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 Enzimas - Aplicações Enzimas - Aplicações

INDÚSTRIA TÊXTIL OUTRAS APLICAÇÕES

• Indústria de Cosméticos

Usa-se a amilase bacteriana (Bacillus subtilis e

Bacillus lichenformis) estável ao calor para eliminar • Produtos de Limpeza
a goma dos produtos têxteis, substituindo os ácidos
e álcalis na hidrólise do amido.
• Inativação Enzimática

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Enzimas

 Ampla aplicabilidade da atividade enzimática;

 Vantagens frente aos catalisadores químicos;
Conclusão  Importância de fatores externos;
 Necessidade de maiores estudos para
viabilizar o uso de diversas enzimas.

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Avaliando funções orgânicas e metabólicas Marcadores de Injúria Celular

Aspartato aminotransferase AST
Transaminase glutâmico-oxalacética TGO
Pâncreas Amilase, lipase, Alanina aminotransferase ALT
glicemia Transaminase glutamato-piruvato TGP

Fosfatase alcalina (marcador de colestase;

pouco específico)
Coração TGO, CK-Mb, DHL, -Glutamiltransferase GT (marcador de doença
Mioglobina, hepatobiliar: sensível mas pouco específico)
Troponina T, Creatina fosfoquinase CPK (marcador de dano
Troponina I no músculo cardíaco)
Lactato desidrogenase (vários tecidos:
identificação de isoenzimas)
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Determinação de atividade enzimática Valores típicos de AST e ALT em doenças hepáticas
para o diagnóstico clínico
Injúria tóxica
HEPATITE AGUDA
Dano celular em órgãos ou isquêmica
pode levar a um aumento
enzimas específicas no Hepatite aguda viral
soro
Hepatite alcóolica
Interferência no metabo-
lismo celular  o potencial
energético e com isso Hepatite crônica
afeta a integridade das
estruturas de membranas Cirrose

Normal
Destruição e morte celular
10 30 100 300 1.000 3.000 10.000
Prof. MSc Yara Lúcia Marques Maia U por
Prof. L Lúcia Marques Maia
MSc Yara

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