Biosseguranca Laboratorios Biomedicos Microbiologia

MINISTRIO DA SADE Secretaria de Vigilncia em Sade Departamento de Vigilncia Epidemiolgica
Biossegurana em Laboratrios Biomdicos e de Microbiologia

Ttulo original: Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4th edition May of 1999
3.a edio revista e atualizada 2.a reimpresso Srie A. Normas e Manuais Tcnicos
Braslia DF 2006
2000 Ministrio da Sade. Todos os direitos reservados. permitida a reproduo parcial ou total desta obra, desde que citada a fonte e que no seja para venda ou qualquer fim comercial. A responsabilidade pelos direitos autorais de textos e imagens desta obra da rea tcnica. A coleo institucional do Ministrio da Sade pode ser acessada, na ntegra, na Biblioteca Virtual em Sade do Ministrio da Sade: http://www.saude.gov.br/bvs O contedo desta e de outras obras da Editora do Ministrio da Sade pode ser acessado na pgina: http://www.saude.gov.br/editora Direitos patrimoniais de autor cedidos ao Ministrio da Sade pelos editores para edio desta obra em portugus. Edio original em ingls: Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories Editada pelo CDC Prevention and Control Center of Diseases and INS National Institute of Health Washington United States 4th edition May of 1999, 1st edition 1994. Srie A. Normas e Manuais Tcnicos Tiragem: 3. edio em portugus revista e atualizada 2. reimpresso 2006 1.500 exemplares Organizao, distribuio e informaes 3. edio revista e atualizada 2004: MINISTRIO DA SADE Secretaria de Vigilncia em Sade
Departamento de Vigilncia Epidemiolgica Coordenao-Geral de Laboratrios de Sade Pblica Setor de Autarquias Sul, quadra 4, bloco N, sala 712 CEP: 70070-040, Braslia DF Tels.: (61) 3314-6352 / 3314-6550 / 3314-6556 E-mail: svs@saude.gov.br Home page: www.saude.gov.br/svs Responsvel tcnico: Mrio Cesar Althoff 1. edio em portugus 2001: MINISTRIO DA SADE Fundao Nacional de Sade Centro Nacional de Epidemiologia Coordenao Nacional de Laboratrios de Sade Pblica Setor de Autarquias Sul, quadra 4, bloco N, 6. andar, sala 619 CEP: 70070-040, Braslia DF Tels: (61) 3314-6550 / 3314-6556 Reviso tcnica da traduo: Ncleo de Biossegurana (NuBio) Vice-Presidncia de Tecnologia Fundao Oswaldo Cruz Av. Brasil, n.o 4.036 7.o andar, sala 716 CEP: 21040-961, Rio de Janeiro RJ Tels.: (21) 2590-9122 ramal 257/258 Fax: (21) 2590-9122 Impresso no Brasil / Printed in Brazil
Ficha Catalogrfica Brasil. Ministrio da Sade. Secretaria de Vigilncia em Sade. Departamento de Vigilncia Epidemiolgica. Biossegurana em laboratrios biomdicos e de microbiologia / Ministrio da Sade, Secretaria de Vigilncia em Sade, Departamento de Vigilncia Epidemiolgica. 3. ed. em portugus rev. e atual. Braslia: Ministrio da Sade, 2006. 290 p.: il. (Srie A. Normas e Manuais Tcnicos) ISBN 85-334-0777-7 Traduo do ingls: Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories ISBN 017-040-00547-4 1. Laboratrios de sade pblica. 2. Tcnicas e procedimentos de laboratrio. I. Ttulo. II. Srie. NLM QY 25 Catalogao na fonte Coordenao-Geral de Documentao e Informao Editora MS OS 2006/0694
Ttulo para indexao: Em espanhol: Biosecuridad en laboratorios biomdicos y de microbiologa
EDITORA MS Documentao e Informao SIA, trecho 4, lotes 540/610 CEP: 71200-040, Braslia DF Tels.: (61) 3233-1774 / 3233-2020 Fax: (61) 3233-9558 E-mail: editora.ms@saude.gov.br Home page: www.saude.gov.br/editora
Equipe editorial: Normalizao: Leninha Silvrio Reviso: Mara Pamplona e Paulo Henrique de Castro Capa e projeto grfico: Fabiano Bastos
DEDICATRIA*
Esta quarta edio de Biossegurana em Laboratrios Biomdicos e de Microbiologia dedicada vida e s realizaes de John H. Richardson, D.V. M., M. P. H. Dr. Richardson foi pioneiro e incessante defensor da segurana para a educao biolgica. Ele foi o co-editor das duas primeiras edies da BLBM, cujas normas so agora aceitas como o padro ouro internacional para a conduo segura de uma pesquisa microbiolgica. Ele adaptou os programas de quarentena de animais importados para os Estados Unidos e o de manejo de organismos biolgicos perigosos em laboratrios de pesquisas. Ele foi sciopresidente e ex-presidente da Associao Americana de Segurana Biolgica (American Biological Safety Association) e auxiliou no desenvolvimento do programa de qualificao dos profissionais da rea de segurana biolgica. Aps uma longa e ilustre carreira no Servio de Sade Pblica (Public Health Service), ele atuou como diretor de Segurana do Meio Ambiente e na Secretaria de Sade da Universidade de Emory, antes de se tornar um renomado consultor de Biossegurana. Talvez o aspecto mais importante, por ter sido um cavalheiro e defensor da sade pblica, os muitos amigos e associados que tiveram o privilgio de conhec-lo e trabalhar ao seu lado sentiro muito a sua falta.
* Traduo fiel ao texto publicado na 4a edio da obra impressa em Washington United States.
sumrio
relao DE tabelas, FIGURAS e listas......................................................... APRESENTAO. ......................................................................................................................................
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PREFCIO.......................................................................................................................................................... 11 SEO I................................................................................................................................................................. 13 Introduo. ......................................................................................................................................................... 13 SEO II.............................................................................................................................................................. 19 Princpios de Biossegurana............................................................................................................ 19 Seo III............................................................................................................................................................ 29 Nveis de Biossegurana Laboratorial. ................................................................................. 29 SEO IV............................................................................................................................................................ 65 Critrios para os Nveis de Biossegurana para Animais Vertebrados. ................................................................................................................ 65 SEO V............................................................................................................................................................... 89 Avaliao dos Riscos................................................................................................................................. 89 SEO VI............................................................................................................................................................ 97 Nveis de Biossegurana Recomendados para Agentes Infecciosos e Animais Infectados............................................................................................... 97 SEO VII.......................................................................................................................................................... 101 Relao dos Agentes................................................................................................................................. 101 Seo VII-A: Agentes Bacterianos. .................................................................................. 101 Seo VII-B: Agentes Fngicos............................................................................................ 127 Seo VII-C: Agentes Parasitrios.................................................................................... 132 Seo VII-D: Prons.......................................................................................................................... 138 Seo VII-E: Agentes Rickettsiais..................................................................................... 149 Seo VII-F: Agentes Virais (No Incluindo o Arbovrus). .................... 153 Seo VII-G: Arbovrus e Vrus Zoonticos Relacionados. ................... 178
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ...................................................................................... 195 Referncias e Lista de Notas. .......................................................................................................... 195 APNDICE A.................................................................................................................................................... 235 Conteno Primria: Cabines de Segurana Biolgica........................................ 235 APNDICE B.................................................................................................................................................... 247 Imunoprofilaxia. ........................................................................................................................................... 247 APNDICE C.................................................................................................................................................... 249 Transporte e Transferncia de Agentes Biolgicos. ............................................... 249 APNDICE D................................................................................................................................................... 255 Patgenos Animais.................................................................................................................................... 255 APNDICE E.................................................................................................................................................... 257 Fontes de Informaes.......................................................................................................................... 257 APNDICE F.................................................................................................................................................... 259 Segurana do Laboratrio e Resposta de Emergncia para Laboratrios Biomdicos e de Microbiologia.................................................. 259 APNDICE G. .................................................................................................................................................. 265 Gerenciamento Integrado de Roedores e de Insetos............................................ 265 APNDICE H................................................................................................................................................... 271 Trabalhos com Clulas e Tecidos Humanos e de Outros Primatas. ...... 271 APNDICE I. .................................................................................................................................................... 273 Normas para o Trabalho com Toxinas de Origem Biolgica. ....................... 273 NDICE REMISSIVO. ............................................................................................................................. 279 EQUIPE TCNICA E EDITORIAL........................................................................................... 287
relao DE tabelas, FIGURAS e listas

RELAO DE TABELAS Tabela 1. Resumo dos nveis de biossegurana recomendados para agentes infecciosos.............................................. 64 Tabela 2. Resumo dos nveis de biossegurana recomendados para as atividades nas quais animais vertebrados infectados naturalmente ou experimentalmente so utilizados....................................................... 88 Tabela 3. As doenas causadas por prons........................................... 139 Tabela 4. Agentes causadores de infeces adquiridas em laboratrio.................................................................... 179 Tabela 5. Cepas vacinais de vrus do NB-3/4 que podem ser manipuladas em um nvel de biossegurana 2.................. 185 Tabela 6. Infeces associadas ao laboratrio ou ao laboratrio animal (1)...................................................................... 186 Tabela 7. Infeces associadas ao laboratrio ou ao laboratrio animal (2)...................................................................... 192 Tabela 8. Comparao entre as cabines de segurana biolgica.......................................................................... 239 Tabela 9. Patgenos animais ................................................................ 255 RELAO DE FIGURAS Figura 1. Cabine de segurana biolgica classe I................................. 241 Figura 2a. Cabine de segurana biolgica classe II, tipo A.................. 242
Figura 2b. Cabine de segurana biolgica classe II, tipo B1................243 Figura 2c. Cabine de segurana biolgica classe II, tipo B2................244 Figura 2d. Cabine de segurana biolgica classe II, tipo B3 ...............245 Figura 3. Cabine de segurana biolgica classe III...............................246 Figura 4. Embalagem e rotulagem de substncias infecciosas. ...........254 Figura 5. Embalagem e rotulagem de amostras clnicas.....................254 RELAO DE LISTAS Lista 1. Precaues padro para autpsias de pacientes com suspeita de doena por prons.....................................145 Lista 2. Procedimentos de descontaminao da sala de autpsia................................................................................146 Lista 3. Procedimentos de corte do crebro.........................................147 Lista 4. Preparao do tecido................................................................147 Lista 5. Arbovrus e arenavrus designados para o nvel de biossegurana 2............................................................182 Lista 6. Arbovrus e alguns outros vrus designados para o nvel de biossegurana 3 (com base em experincia insuficiente)...............................................189 Lista 7. Arbovrus e alguns outros vrus designados para o nvel de biossegurana 3........................................190 Lista 8. Arbovrus, arenavrus e filovrus designados para o nvel de biossegurana 4........................................193
APRESENTAO
O imprevisvel e diversificado comportamento das doenas infecciosas emergentes e reemergentes tem acarretado a discusso das condies de biossegurana nas instituies de ensino, pesquisa, desenvolvimento tecnolgico e de prestao de servios. A despeito do avano tecnolgico, o profissional de sade est freqentemente exposto a riscos biolgicos e de produtos qumicos, cujo enfrentamento est consubstanciado na adequao das instalaes do ambiente de trabalho e na capacitao tcnica desses profissionais. O manejo e a avaliao de riscos so fundamentais para a definio de critrios e aes e visam a minimizar os riscos que podem comprometer a sade do homem, dos animais, do meio ambiente ou a qualidade dos trabalhos desenvolvidos. A biossegurana constitui uma rea de conhecimento relativamente nova, regulada em vrios pases por um conjunto de leis, procedimentos ou diretrizes especficas. No Brasil, a legislao de biossegurana foi criada em 1995 e, apesar da grande incidncia de doenas ocupacionais em profissionais de sade, engloba apenas a tecnologia de engenharia gentica, estabelecendo os requisitos para o manejo de organismos geneticamente modificados. A segurana dos laboratrios e dos mtodos de trabalho transcende aos aspectos ticos implcitos nas pesquisas com manipulao gentica. Medidas de biossegurana especficas devem ser adotadas por laboratrios e aliadas a um amplo plano de educao baseado nas normas nacionais e internacionais quanto ao transporte, conservao e manipulao de microorganismos patognicos.
apresentao
Ao apresentar este livro, traduo autorizada do original em ingls Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4th Edition CDC-INH, 1999, esperamos atender s necessidades de conhecimento bsico de biossegurana laboratorial dos profissionais participantes do Programa Nacional de Capacitao em Biossegurana Laboratorial, que est sendo desenvolvido pelo Centro Nacional de Epidemiologia da Fundao Nacional de Sade (Cenepi/funasa), e constituir um roteiro atualizado de condutas gerais de segurana para os profissionais que atuam na Rede Nacional de Laboratrios de Sade Pblica. Braslia (DF), abril de 2004. Jarbas Barbosa da Silva Junior Secretrio de Vigilncia em Sade do Ministrio da Sade
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PREFCIO
Esta publicao descreve as combinaes das prticas padro de microbiologia e as especiais dos equipamentos de segurana e das instalaes que constituem os nveis de biossegurana de 1-4 recomendados para um trabalho que envolva uma variedade de agentes infecciosos em vrios estabelecimentos laboratoriais. Essas recomendaes possuem um carter consultivo. A inteno a de fornecer um guia voluntrio ou um cdigo de prtica, assim como os objetivos para as operaes de um nvel mais alto. Esses conselhos so tambm oferecidos como um guia e uma referncia na construo das instalaes de um novo laboratrio e na reforma de instalaes j existentes. Porm, a aplicao destas recomendaes na operao de um laboratrio particular dever se basear na avaliao do risco dos agentes e das atividades especiais, ao invs de ser considerada como um cdigo universal e genrico aplicvel a todas as situaes. Desde a publicao da terceira edio do livro Biossegurana em Laboratrios Biomdicos e de Microbiologia, ocorreram inmeros eventos que acabaram por influenciar algumas das mudanas feitas nesta quarta edio. Em resposta preocupao global referente s doenas infecciosas emergentes e s reemergentes, a seo de Avaliao de Riscos foi ampliada para proporcionar ao laboratorista informaes adicionais para facilitar a implantao de tais determinaes.
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prefcio
Devido grande demanda de projetos e construes de laboratrios biomdicos e microbiolgicos, particularmente nos nveis de biossegurana 3, foram incorporados esclarecimentos e acrscimos s sees Instalaes, em particular s sees III e IV. O objetivo a expanso da abordagem baseada na atuao, com o objetivo de se obter uma conteno apropriada. Com a identificao da encefalopatia espongiforme bovina (EEB) na Inglaterra, houve um aumento significativo do interesse sobre doenas provocadas por prons. Por essa razo, foi acrescentado um apndice para direcionar as vrias preocupaes associadas ao trabalho com tais agentes. Como tm ocorrido vrias infeces associadas a laboratrios envolvendo agentes previamente conhecidos e desconhecidos, foram modificados ou acrescentados vrios resumos das caractersticas de agentes nesta edio. Os resumos de agentes agora contm informaes sobre os requisitos necessrios para a obteno de licenas para o transporte de microorganismos infecciosos. O motivo para essa modificao foi a preocupao em relao ao crescente transporte nacional e internacional de microorganismos infecciosos. E, finalmente, nestes ltimos anos, houve uma preocupao crescente em relao ao bioterrorismo, o que tem provocado um considervel interesse nas questes que envolvem a biossegurana. Portanto, foi acrescentado um apndice para ajudar na concentrao das atenes sobre as necessidades de se aumentar a segurana nos laboratrios de microbiologia. Gostaramos tambm de agradecer as contribuies de muitos profissionais da comunidade cientfica que proporcionaram idias para o aperfeioamento desta edio. Em particular, temos um grande dbito com o Comit Tcnico de Reviso (Technical Review Committee) da Associao Americana de Segurana Biolgica (American Biological Safety Association), por seus amveis comentrios e suas valiosas sugestes.
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SEO I
Introduo
Laboratrios de microbiologia so, com freqncia, ambientes singulares de trabalho que podem expor as pessoas prximas a eles, ou que neles trabalham, a riscos de doenas infecciosas identificveis. As infeces contradas em um laboratrio tm sido descritas por meio da histria da microbiologia. Os relatrios de microbiologia publicados na virada do sculo descreveram casos de tifo, clera, mormo, brucelose e ttano associados a laboratrios.1 Em 1941, Meyer e Eddie2 publicaram uma pesquisa de 74 casos de brucelose associados a laboratrio ocorridos nos Estados Unidos e concluram que a manipulao de culturas ou espcies e a inalao da poeira contendo a bactria Brucella so eminentemente perigosas para os trabalhadores de um laboratrio. Inmeros casos foram atribudos falta de cuidados ou a uma tcnica de manuseio ruim de materiais infecciosos. Em 1949, Sulkin e Pike3 publicaram a primeira de uma srie de pesquisas sobre infeces associadas a laboratrios. Eles constataram 222 infeces virais, sendo 21 delas fatais. Em pelo menos um tero dos casos, a provvel fonte de infeco estava associada ao manuseio de animais e tecidos infectados. Acidentes conhecidos foram registrados em 27 (12%) dos casos relatados. Em 1951, Sulkin e Pike4 publicaram a segunda de uma srie de pesquisas baseada em um questionrio enviado a 5.000 laboratrios. Somente um tero dos 1.342 casos citados foi relatado na literatura. A brucelose era a infeco mais freqentemente encontrada nos relatrios em relao s infeces contradas em um
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Seo I
introduo
laboratrio e, juntamente com a tuberculose, a tularemia, o tifo e a infeco estreptoccica, contribua para 72% de todas as infeces bacterianas e 31% das infeces causadas por outros agentes. O ndice total de mortalidade era de 3%. Somente 16% de todas as infeces relatadas estavam associados a um acidente documentado. A maioria desses estava relacionada ao uso de pipetas, seringas e agulhas. Essa pesquisa foi atualizada em 1965,5 quando houve um acrscimo de 641 novos casos ou de casos que no haviam sido relatados anteriormente. Em 1976,6 houve uma nova atualizao, perfazendo um total acumulativo de 3.921 casos. A brucelose, o tifo, a tularemia, a tuberculose, a hepatite e a encefalite eqina venezuelana eram as infeces mais comumente relatadas. Menos de 20% de todos os casos estavam associados a um acidente conhecido. A exposio aos aerossis infecciosos era considerada uma fonte plausvel, mas no confirmada, de infeco para mais de 80% dos casos em que as pessoas infectadas haviam trabalhado com o agente. Em 1967,7 Hanson e colaboradores relataram 428 casos patentes de infeces de arbovrus associados a laboratrio. Em alguns casos, a capacidade de um dado arbovrus de produzir uma doena humana foi primeiramente confirmada como o resultado de uma infeco no-intencional da equipe laboratorial. No caso, os aerossis infecciosos eram considerados a fonte mais comum de infeco. Em 1974, Skinholj8 publicou os resultados de uma pesquisa segundo a qual os funcionrios dos laboratrios clnicos dinamarqueses apresentavam uma relatada incidncia de hepatite (2,3 casos ao ano por 1.000 funcionrios) sete vezes maior que a populao em geral. De maneira semelhante, uma pesquisa de 1976, realizada por Harrington e Shannon,9 indicou que os trabalhadores de laboratrios mdicos na Inglaterra apresentavam um risco cinco vezes maior de adquirir uma tuberculose do que a populao em geral. A hepatite B e a shigelose tambm eram conhecidas por serem um contnuo risco ocupacional. Junto com a tuberculose, essas eram as trs causas mais comuns de infeces associadas a laboratrio relatadas na Gr-Bretanha.
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Seo I
introduo
Embora esses relatrios sugerissem que os funcionrios de laboratrios corriam um elevado risco de se contaminar pelos agentes que eles prprios manipulavam, os ndices atuais de infeco no se encontram disponveis. Porm, os estudos de Harrington e Shannon e os de Skinholj10 indicam que as equipes laboratoriais apresentavam maiores ndices de tuberculose, shigelose e de hepatite B do que a maioria da populao em geral. Ao contrrio das ocorrncias documentadas de infeces contradas por funcionrios de laboratrios, esses laboratrios que trabalham com agentes infecciosos no representam uma ameaa sociedade. Por exemplo, embora 109 casos de infeces associadas a laboratrios tenham sido registrados nos Centros de Preveno e Controle de Doenas, de 1947 a 1973,11 nenhum caso secundrio foi relatado nos membros da famlia ou em contatos comunitrios. O Centro Nacional de Doena Animal relatou uma experincia12 semelhante, sem nenhum caso secundrio ocorrido nos contatos laboratoriais e no-laboratoriais em relao aos 18 casos de infeces associadas a laboratrio no perodo de 1960 a 1975. Por meio de um caso secundrio da doena de Marburg, contrado pela esposa de um paciente de caso primrio, concluiuse que a infeco havia sido sexualmente transmitida dois meses aps o marido ter recebido alta do hospital.13 Trs casos secundrios de varola foram relatados em dois surtos associados a laboratrio, na Inglaterra, em 197314 e 1978.15 Relatos anteriores de seis casos de febre Q entre os funcionrios de uma lavanderia comercial que lavava os uniformes e as roupas de um laboratrio que manipulava o agente,16 um caso de uma pessoa que visitava o laboratrio17 e dois casos de febre Q em contatos domiciliares de um rickettsiologista18 tambm foram constatados. Existe o relato de um caso de transmisso do vrus B de um macaco para um tratador de animais infectados e deste para sua esposa, aparentemente provocado pelo contato do vrus com a pele lesionada do indivduo.19 Esses casos so representativos da natureza espordica e da pouca freqncia das infeces na comunidade de trabalhadores de laboratrio que lidam com agentes infecciosos. Na reviso de 1979,20 Pike chegou concluso de que o conhecimento, as tcnicas e o equipamento para a preveno das infeces laboratoriais j estavam disponveis. Nos Estados Uni15
Seo I
introduo
dos, porm, nenhum cdigo de prtica, padres, diretrizes ou outras publicaes proporcionaram descries detalhadas das tcnicas, do equipamento e de outras consideraes ou recomendaes para maior esfera de ao das atividades laboratoriais conduzidas com uma variedade de agentes infecciosos exticos e nativos. O folheto Classificao dos Agentes Etiolgicos Baseando-se no Grau de Risco21 serviu como uma referncia geral para vrias atividades laboratoriais que utilizam agentes infecciosos. Nesse folheto, o conceito sobre a classificao dos agentes infecciosos e das atividades laboratoriais em quatro nveis ou classes serviu como um formato bsico para as edies anteriores do Biossegurana em Laboratrios Biomdicos e de Microbiologia (BLBM). Esta quarta edio do BLBM continua a descrever especificamente as combinaes de prticas microbiolgicas, instalaes laboratoriais, equipamento de segurana e recomendaes sobre suas utilizaes nas quatro categorias ou nos quatro nveis de biossegurana de operao laboratorial com agentes infecciosos que afetam homens. As descries dos nveis de biossegurana de 1-4 paralelas quelas contidas nas Diretrizes do NIH para Pesquisa Envolvendo o DNA Recombinante22, 23 esto de acordo com os critrios gerais originalmente usados para a designao dos agentes infecciosos para as classes de 1-4 na Classificao dos Agentes Etiolgicos Baseando-se no Grau de Risco.24 Quatro nveis de biossegurana tambm so determinados para as atividades de doenas infecciosas utilizando pequenos animais de laboratrio. As recomendaes para os nveis de biossegurana para agentes especficos so feitas com base no risco potencial do agente, da funo ou da atividade do laboratrio. Desde o incio dos anos 80, os laboratrios aplicam esses fundamentos em atividades associadas com manipulaes envolvendo o vrus da imunodeficincia humana (HIV). Mesmo antes de o HIV ter sido identificado como o agente causador da sndrome da imunodeficincia adquirida (AIDS), os princpios que regulam a manipulao de um patgeno presente no sangue j eram considerados adequados para um trabalho laboratorial seguro. Normas tambm foram publicadas para os trabalhadores da rea de sade sob o ttulo de Precaues Universais.25 De fato, as Precaues Universais e esta publicao tornaram-se a base do manuseio se16
Seo I
introduo
guro de sangue e de fluidos corporais, como descrito na recente publicao da OSHA, intitulada Padro de Patgenos Sangneos.26 No final dos anos 80, havia uma grande preocupao com o lixo mdico-hospitalar, o que levou publicao do Ato de Rastreamento de Lixo Hospitalar, de 1988.27 Os princpios estabelecidos nos volumes anteriores do BLBM, para o manuseio de dejetos potencialmente infecciosos como um risco ocupacional, foi reforado pela Pesquisa do Conselho Nacional intitulada Biossegurana em Laboratrios: Prticas Prudentes para o Manuseio e Remoo de Materiais Infecciosos.28 No momento em que esta publicao estava sendo editada, houve uma preocupao crescente em relao ao reaparecimento do M. tuberculosis, segurana dos trabalhadores de laboratrios e aos equipamentos da rea de sade. Os princpios descritos no BLBM que tentam assegurar as prticas, os procedimentos e as instalaes de segurana na sade so aplicveis ao controle deste patgeno areo, incluindo suas cepas resistentes a inmeras drogas (multidrogas) resistentes.29, 30 As tecnologias com DNA recombinante esto sendo aplicadas rotineiramente em laboratrios para modificar a composio gentica de vrios microorganismos. Uma avaliao completa de riscos deve ser conduzida quando nos referimos a essas atividades e a seus resultados desconhecidos. A experincia tem demonstrado a importncia das precaues tomadas com as prticas, os procedimentos e as instalaes dos nveis de biossegurana de 1-4 descritas para as manipulaes de agentes etiolgicos em montagem de laboratrios e dependncias para animais. Embora no exista nenhum tipo de relatrio nacional que descreva as infeces associadas a laboratrio, casos curiosos sugerem que uma rgida adeso a essas normas contribui para um meio de trabalho mais seguro e saudvel para a equipe do laboratrio, seus colaboradores e a comunidade ao redor. Para reduzir ainda mais o potencial de risco de infeces associadas a laboratrios, as normas apresentadas aqui devem ser consideradas como uma orientao mnima para conteno das mesmas. As normas devem ser adaptadas para cada laboratrio em particular e podem ser utilizadas juntamente com outras informaes cientficas disponveis.
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SEO II
Princpios de Biossegurana
O termo conteno usado para descrever os mtodos de segurana utilizados na manipulao de materiais infecciosos em um meio laboratorial onde esto sendo manejados ou mantidos. O objetivo da conteno reduzir ou eliminar a exposio da equipe de um laboratrio, de outras pessoas e do meio ambiente em geral aos agentes potencialmente perigosos. A conteno primria, a proteo da equipe do laboratrio e do meio de trabalho contra a exposio aos agentes infecciosos, proporcionada por uma boa tcnica de microbiologia e pelo uso de um equipamento de segurana adequado. O uso de vacinas pode fornecer um elevado nvel de proteo pessoal. J a conteno secundria, a proteo do meio ambiente externo ao laboratrio contra a exposio aos materiais infecciosos, proporcionada pela combinao de um projeto das instalaes e das prticas operacionais. Dessa forma, os trs elementos de conteno incluem a prtica e a tcnica laboratorial, o equipamento de segurana e o projeto da instalao. A avaliao do risco do trabalho a ser realizado com um agente especfico determinar a combinao adequada desses trs elementos. Prtica e Tcnica Laboratorial: O elemento de conteno mais importante a adeso rgida s prticas e s tcnicas padro de microbiologia. As pessoas que trabalham com agentes infecciosos ou com materiais potencialmente contaminados devem se conscientizar dos riscos potenciais, devem ser treinadas e estar aptas a exercer as tcnicas e prticas necessrias para o manuseio seguro dos materiais. Cabe ao diretor ou pessoa responsvel
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Seo II
princpios de biossegurana
pelo laboratrio a funo de fornecer ou elaborar um treinamento adequado para os funcionrios. Cada laboratrio dever desenvolver ou adotar um manual de biossegurana ou de operaes que identifique os riscos que podem ser encontrados e que especifique tambm as prticas e os procedimentos especficos para minimizar ou eliminar as exposies aos perigos. Os funcionrios devem receber informaes sobre os riscos especiais, devem ler e seguir todas as prticas e os procedimentos solicitados. Um cientista treinado e com grande conhecimento das tcnicas laboratoriais apropriadas, dos procedimentos de segurana e dos perigos associados ao manuseio de agentes infecciosos deve ser o responsvel pela conduo do trabalho envolvendo quaisquer agentes ou materiais infecciosos. Quando as prticas laboratoriais padro no forem suficientes para controlar os perigos associados a um agente ou a um procedimento laboratorial em particular, medidas adicionais podero ser necessrias. O diretor do laboratrio ser o responsvel pela seleo das prticas adicionais de segurana, que devem estar relacionadas aos riscos associados aos agentes ou aos procedimentos. A equipe, as prticas de segurana e as tcnicas laboratoriais devero ser complementadas com um projeto apropriado das instalaes e das caractersticas da arquitetura, do equipamento de segurana e das prticas de gerenciamento. Equipamento de Segurana (Barreiras Primrias): O equipamento de segurana inclui as cabines de segurana biolgica (CSB), os recipientes adequados e outros controles da engenharia de segurana projetados para remover ou minimizar exposies aos materiais biolgicos perigosos. A CSB o dispositivo principal utilizado para proporcionar a conteno de borrifos ou aerossis infecciosos provocados por inmeros procedimentos microbiolgicos. Trs tipos de cabines de segurana biolgica (classes I, II e III) usados em laboratrios de microbiologia esto descritos e ilustrados no apndice A. As cabines de segurana biolgica classes I e II, que possuem a frente aberta, so barreiras primrias que oferecem nveis significativos de proteo para a equipe do laboratrio e para o meio ambiente quando utilizados com boas tcnicas microbiolgicas. A cabine de segurana biolgica classe II tambm
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fornece uma proteo contra a contaminao externa de materiais (por exemplo, cultura de clulas, estoque microbiolgico) que sero manipulados dentro das cabines. A cabine de segurana biolgica classe III hermtica e impermevel aos gases proporciona o mais alto nvel de proteo aos funcionrios e ao meio ambiente. Um outro exemplo de barreira primria o copo de segurana da centrfuga, um recipiente conectado centrfuga projetado para evitar que aerossis sejam liberados durante uma centrifugao. Para minimizarmos esse perigo, controles de conteno como as cabines de segurana biolgica ou os copos da centrfuga devero ser utilizados na manipulao de agentes infecciosos que possam ser transmitidos com a exposio aos aerossis. O equipamento de segurana tambm pode incluir itens para a proteo pessoal, como luvas, aventais, gorros, proteo para sapatos, botas, respiradores, escudo ou protetor facial, mscaras faciais ou culos de proteo. O equipamento de proteo pessoal freqentemente usado em combinao com as cabines de segurana biolgica e outros dispositivos que faam a conteno dos agentes, dos animais ou dos materiais que esto sendo manipulados. Em alguns casos nos quais torna-se impossvel trabalhar em cabines de segurana biolgica, o equipamento de segurana pessoal deve formar a barreira primria entre os trabalhadores e os materiais infecciosos. Os exemplos incluem certos estudos e necropsias de animais, atividades de produo do agente em grande escala e atividades relacionadas manuteno, aos servios ou ao suporte de instalao do laboratrio. Projeto e Construo das Instalaes (Barreiras Secundrias): O planejamento e a construo das instalaes contribuem para a proteo da equipe do laboratrio, proporcionando uma barreira de proteo para as pessoas que se encontram fora do laboratrio e para as pessoas ou os animais da comunidade contra agentes infecciosos que podem ser liberados acidentalmente pelo laboratrio. A gerncia do laboratrio deve zelar para que as instalaes estejam de acordo com o funcionamento do mesmo e com o nvel de biossegurana recomendado para os agentes que forem ali manipulados.
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As barreiras secundrias recomendadas dependero do risco de transmisso dos agentes especficos. Por exemplo, o risco das exposies para grande parte dos trabalhos laboratoriais em dependncias de nveis de biossegurana 1 e 2 ser o contato direto com os agentes ou as exposies inadvertidas por intermdio de um meio de trabalho contaminado. As barreiras secundrias nos laboratrios podem incluir o isolamento da rea de trabalho para o acesso pblico, a disponibilidade de uma dependncia para descontaminao (por exemplo, uma autoclave) e as dependncias para lavagem das mos. Quando o risco de contaminao por meio de exposio aos aerossis infecciosos estiver presente, nveis mais elevados de conteno primria e barreiras de proteo secundrias podero ser necessrios para evitar que agentes infecciosos escapem para o meio ambiente. Essas caractersticas do projeto incluem sistemas de ventilao especializados em assegurar o fluxo de ar unidirecionado, sistemas de tratamento de ar para descontaminao ou remoo do ar liberado, zonas de acesso controlado, cmaras pressurizadas, entradas de laboratrio separadas ou mdulos para isolamento do laboratrio. Os engenheiros responsveis pelo projeto devem levar em considerao as recomendaes especficas para ventilao, como as encontradas no Manual de Aplicaes para Calefao, Ventilao e Refrigerao (Applications Handbook for Heating, Ventilation and Air-Conditioning HVAC), publicado pela Sociedade Americana de Engenheiros de Calefao, Refrigerao e Condicionamento de Ar (American Society of Heating, Refrigerating and Air-Conditioning Engineers ASHRAE).1 Nveis de Biossegurana: Os quatro nveis de biossegurana (NB) esto descritos na seo III e consistem em combinaes de prticas e tcnicas de laboratrio, equipamentos de segurana e instalaes do laboratrio. Cada combinao especificamente adequada para operaes realizadas, vias de transmisses documentadas ou suspeitas de agentes infecciosos e funcionamento ou atividade do laboratrio. Os nveis de biossegurana recomendados para os organismos da seo VII (Resumo dos Agentes) representam as condies nas quais o agente pode ser manuseado com segurana. O diretor do
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laboratrio o responsvel pela avaliao dos riscos e pela aplicao adequada dos nveis de biossegurana recomendados. Geralmente, o trabalho com agentes desconhecidos deve ser conduzido em um nvel de biossegurana recomendado pela seo VII. Prticas mais (ou menos) rgidas podero ser adotadas quando temos uma informao especfica disponvel que possa sugerir a virulncia, a patogenicidade, os padres de resistncia aos antibiticos e s vacinas e a disponibilidade de tratamento ou outros fatores significativamente alterados. Nvel de Biossegurana 1: As prticas, os equipamentos de segurana e o projeto das instalaes so apropriados para o treinamento educacional secundrio ou para o treinamento de tcnicos e de professores de tcnicas laboratoriais. Esse conjunto tambm utilizado em outros laboratrios onde realizado o trabalho com cepas definidas e caracterizadas de microorganismos viveis, conhecidos por no causarem doenas em homens adultos e sadios. O Bacillus subtilis, o Naegleria gruberi, o vrus da hepatite canina infecciosa e os organismos livres sob as Diretrizes do NIH de DNA Recombinantes so exemplos de microorganismos que preenchem todos os requisitos descritos. Muitos agentes que geralmente no esto associados a processos patolgicos em homens so, entretanto, patgenos oportunos que podem causar uma infeco em jovens, idosos e indivduos imunosupressivos ou imunodeprimidos. As cepas de vacina que tenham mltiplas passagens in vivo no devero ser consideradas no-virulentas simplesmente por serem cepas de vacinas. O nvel de biossegurana 1 representa um nvel bsico de conteno que se baseia nas prticas padro de microbiologia sem uma indicao de barreiras primrias ou secundrias, com exceo de uma pia para a higienizao das mos. Nvel de Biossegurana 2: As prticas, os equipamentos, a planta e a construo das instalaes so aplicveis aos laboratrios clnicos, de diagnstico, laboratrios-escola e outros laboratrios onde o trabalho realizado com um maior espectro de agentes nativos de risco moderado, presentes na comunidade e que estejam associados a uma patologia humana de gravidade varivel. Com boas tcnicas de microbiologia, esses agentes podem ser
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usados de maneira segura em atividades conduzidas sobre uma bancada aberta, uma vez que o potencial para a produo de borrifos e aerossis baixo. O vrus da hepatite B, o HIV, a salmonela e o Toxoplasma spp. so exemplos de microorganismos designados para esse nvel de conteno. O nvel de biossegurana 2 adequado para qualquer trabalho que envolva sangue humano, lquidos corporais, tecidos ou linhas de clulas humanas primrias em que a presena de um agente infeccioso pode ser desconhecida. Os laboratoristas que trabalham com materiais humanos devem consultar o livro Padro de Patgenos Transmitidos pelo Sangue, da OSHA (OSHA Bloodborne Pathogen Standard),2 para as precaues especficas necessrias. Os perigos primrios em relao aos funcionrios que trabalham com esses agentes esto relacionados com acidentes percutneos das exposies da membrana mucosa ou com a ingesto de materiais infecciosos. Deve-se tomar um extremo cuidado com agulhas contaminadas ou com instrumentos cortantes. Embora os organismos rotineiramente manipulados em um nvel de biossegurana 2 no sejam transmitidos por aerossis, os procedimentos envolvendo um alto potencial para a produo de salpicos ou aerossis que possam aumentar o risco de exposio desses funcionrios devem ser conduzidos com um equipamento de conteno primria ou com dispositivos como a CSB ou os copos de segurana da centrfuga. Outras barreiras primrias, como os escudos para borrifos, as protees faciais, os aventais e as luvas, devem ser utilizadas de maneira adequada. As barreiras secundrias, como pias para higienizao das mos e instalaes para descontaminao de lixo, devem existir com o objetivo de reduzir a contaminao potencial do meio ambiente. Nvel de Biossegurana 3: As prticas, os equipamentos de segurana, o planejamento e a construo das dependncias so aplicveis para laboratrios clnicos, de diagnsticos, laboratriosescola, de pesquisa ou de produes. Nesses locais, realiza-se o trabalho com agentes nativos ou exticos que possuam um potencial de transmisso via respiratria e que podem causar infeces srias e potencialmente fatais. O Mycobacterium tuberculosis, o vrus da encefalite de St. Louis e a Coxiella burnetii so exemplos de mi24
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croorganismos determinados para esse nvel. Os riscos primrios causados aos trabalhadores que lidam com esses agentes incluem a auto-inoculao, a ingesto e a exposio aos aerossis infecciosos. No nvel de biossegurana 3, enfatizamos mais as barreiras primrias e secundrias para protegermos os funcionrios de reas contguas, a comunidade e o meio ambiente contra a exposio aos aerossis potencialmente infecciosos. Por exemplo, todas as manipulaes laboratoriais devero ser realizadas em uma cabine de segurana biolgica (CSB) ou em um outro equipamento de conteno, como uma cmara hermtica de gerao de aerossis. As barreiras secundrias para esse nvel incluem o acesso controlado ao laboratrio e sistemas de ventilao que minimizem a liberao de aerossis infecciosos do laboratrio. Nvel de Biossegurana 4: As prticas, os equipamentos de segurana, o planejamento e a construo das dependncias so aplicveis para trabalhos que envolvam agentes exticos perigosos, que representam um alto risco por provocarem doenas fatais em indivduos. Esses agentes podem ser transmitidos via aerossis e, at o momento, no h nenhuma vacina ou terapia disponvel. Os agentes que possuem uma relao antignica prxima ou idntica aos dos agentes do nvel de biossegurana 4 tambm devero ser manuseados nesse nvel. Quando possumos dados suficientes, o trabalho com os agentes deve continuar neste nvel ou em um nvel inferior. Os vrus, como os de Marburg ou da febre hemorrgica Crimia-Congo, so manipulados no nvel de biossegurana 4. Os riscos primrios aos trabalhadores que manuseiam agentes do nvel de biossegurana 4 incluem a exposio respiratria aos aerossis infecciosos, a exposio da membrana mucosa e/ou da pele lesionada s gotculas infecciosas e a auto-inoculao. Todas as manipulaes de materiais de diagnstico potencialmente infecciosos, substncias isoladas e animais naturalmente ou experimentalmente infectados apresentam um alto risco de exposio e infeco aos funcionrios de laboratrio, comunidade e ao meio ambiente. O completo isolamento dos trabalhadores de laboratrio em relao aos materiais infecciosos aerossolizados realizado primariamente em cabines de segurana biolgica classe III ou com
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um macaco individual suprido com presso de ar positivo. A instalao do nvel de biossegurana 4 geralmente construda em um prdio separado ou em uma zona completamente isolada com uma complexa e especializada ventilao e sistemas de gerenciamento de lixo que evitem uma liberao de agentes viveis no meio ambiente. O diretor do laboratrio primariamente e especificamente responsvel pela operao segura do laboratrio. O conhecimento e o julgamento dele so crticos para a avaliao dos riscos e para a aplicao adequada destas recomendaes. O nvel de biossegurana recomendado representa as condies sob as quais o agente pode ser manipulado com segurana. As caractersticas especiais dos agentes utilizados, o treinamento, a experincia dos empregados e a natureza da funo do laboratrio podero posteriormente influenciar o diretor quanto aplicao destas recomendaes. Dependncias para Animais: Os quatro nveis de biossegurana tambm so descritos para as atividades que envolvem o trabalho de doenas infecciosas com animais experimentais. Essas quatro combinaes de prticas, equipamentos de segurana e de instalaes so denominadas de nveis de biossegurana animal 1, 2, 3 e 4 e proporcionam nveis crescentes de proteo aos funcionrios e ao meio ambiente. Laboratrios Clnicos: Os laboratrios clnicos, especialmente aqueles situados em clnicas e hospitais, recebem amostras clnicas requisitando uma grande variedade de diagnsticos e servios de apoio clnico. Geralmente, a natureza infecciosa do material clnico desconhecida e as amostras so freqentemente submetidas a uma ampla solicitao de exames microbiolgicos em relao aos mltiplos agentes (por exemplo, o escarro pode ser submetido a uma cultura de rotina, cido resistente e cultura fngica. responsabilidade do diretor do laboratrio estabelecer procedimentos padro no laboratrio que, de fato, direcionem a questo do perigo da infeco imposto pelas amostras clnicas. Com exceo de circunstncias extraordinrias (por exemplo, suspeita de uma febre hemorrgica), o processamento inicial de uma amostra clnica e a identificao sorolgica de substncias
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isoladas podero ser realizados de forma segura em um nvel de biossegurana 2, o nvel recomendado para o trabalho com patgeno do sangue, como o vrus da hepatite B e o HIV. Os elementos de conteno descritos no nvel de biossegurana 2 devero estar de acordo com o padro da OSHA, Exposio Ocupacional aos Patgenos Transmitidos atravs do Sangue, 3, 4 publicado pela Administrao de Sade e Segurana Ocupacional. Isso requer o uso de precaues especficas para todas as amostras clnicas de sangue ou outros materiais potencialmente infecciosos (Precaues ou Padres Universais).5 Alm disso, outras recomendaes especficas para laboratrios clnicos podem ser obtidas com o Comit Nacional de Padres para Laboratrios Clnicos (National Committee for Clinical Laboratory Standard).6 As recomendaes para o nvel de biossegurana 2 e os requerimentos da OSHA enfocam a preveno exposio por contato da pele e das mucosas com materiais clnicos. Barreiras primrias, como as cabines de segurana biolgica (classes I e II), devem ser usadas em procedimentos que causam gotejamento, pulverizao e salpicos de gotas. As cabines de segurana biolgica tambm devem ser usadas no incio da manipulao de espcimes clnicos, cuja natureza do teste o requerer, ou em presena de um agente que reconhecidamente transmita infeces por aerossis (por exemplo, M. tuberculosis) ou quando o uso de uma cabine de segurana biolgica (classe II) for indicado para proteger a integridade do espcime. A segregao das funes de um laboratrio clnico e o acesso limitado ou restrito a essas reas so de responsabilidade do diretor da instituio. responsabilidade tambm do diretor estabelecer um padro e procedimentos por escrito que direcionem os riscos potenciais e os cuidados ou as precaues necessrias a serem implantadas. Importao e Expedio Interestadual de Certos Materiais Biomdicos: A importao de vetores e agentes etiolgicos de patologias humanas est sujeita aos regulamentos da Public Health Service Foreign Quarentine. Os regulamentos do Servio de Sade Pblica e do Departamento de Transportes especificam os requisitos necessrios para a embalagem, a rotulagem e o embar27
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que de agentes etiolgicos e amostras para diagnsticos expedidos para o comrcio interestadual (veja o apndice C). O Departamento de Agricultura dos EUA regulamenta a importao e a expedio interestadual de patgenos animais e probe a importao, a posse ou o uso de certos agentes patolgicos de animais exticos que possam ser uma ameaa para aves e criaes em geral por provocarem srias doenas (veja o apndice D).
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Seo III
nveis de biossegurana laboratorial
Os principais requisitos exigidos para os quatro nveis de biossegurana em atividades que envolvam microorganismos infecciosos e animais de laboratrio esto resumidos na tabela 1 desta seo e na tabela 2 da seo IV. Os nveis so designados em ordem crescente, pelo grau de proteo proporcionado ao pessoal do laboratrio, ao meio ambiente e comunidade. Nvel de Biossegurana (NB-1) O nvel de biossegurana 1 adequado ao trabalho que envolva agentes bem caracterizados e conhecidos por no provocarem doena em seres humanos e que possuam mnimo risco ao pessoal do laboratrio e ao meio ambiente. O laboratrio no est separado das demais dependncias do edifcio. O trabalho conduzido, em geral, em bancada, com adoo das boas prticas laboratoriais (BPL). Equipamentos especficos de proteo ou caractersticas especiais de construo no so geralmente usados ou exigidos. O pessoal do laboratrio dever ter treinamento especfico nos procedimentos realizados no laboratrio e dever ser supervisionado por um cientista com treinamento em microbiologia geral ou cincia correlata. Os seguintes padres e prticas especiais, os equipamentos de segurana e as instalaes devero ser aplicados aos agentes designados ao nvel de biossegurana 1: A. Prticas Padro em Microbiologia 1. O acesso ao laboratrio dever ser limitado ou restrito de acordo com a definio do diretor do laboratrio quando estiverem sendo realizados experimentos ou trabalhos com culturas e amostras.
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2. As pessoas devero lavar as mos aps o manuseio de materiais viveis, aps a remoo das luvas e antes de sarem do laboratrio. 3. No permitido comer, beber, fumar, manusear lentes de contato, aplicar cosmticos ou armazenar alimentos para consumo nas reas de trabalho. As pessoas que usam lentes de contato em laboratrios devero usar tambm culos de proteo ou protetores faciais. Os alimentos devero ser guardados fora das reas de trabalho em armrios ou geladeiras especficos para tal fim. 4. proibida a pipetagem com a boca; devem ser utilizados dispositivos mecnicos. 5. Devem ser institudas normas para o manuseio de agulhas. 6. Todos os procedimentos devem ser realizados cuidadosamente a fim de minimizar a criao de borrifos ou aerossis. 7. As superfcies de trabalho devem ser descontaminadas, pelo menos, uma vez ao dia e sempre depois de qualquer derramamento de material vivel. 8. Todas as culturas, colnias e outros resduos devero ser descontaminados antes de serem descartados com um mtodo de descontaminao aprovado, como, por exemplo, esterilizao por calor mido (autoclave). Os materiais que forem ser descontaminados fora do laboratrio devero ser colocados em recipientes inquebrveis, prova de vazamentos e hermeticamente fechados para serem transportados ao local desejado. Os materiais que forem enviados para descontaminaco fora da instituio devero tambm ser embalados de acordo com os regulamentos locais, estaduais e federais, antes de serem removidos das dependncias do laboratrio. 9. O smbolo de Risco Biolgico dever ser colocado na entrada do laboratrio em qualquer momento em que o agente infeccioso estiver presente no local. Este sinal de alerta dever indicar o(s) agente(s) manipulado(s) e o nome e o nmero do telefone do pesquisador. 10. Deve ser providenciado um programa rotineiro de controle de roedores e insetos (veja o apndice G).
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B. Prticas Especiais Nenhuma. C. Equipamentos de Segurana (Barreiras Primrias) 1. Os equipamentos especiais de conteno, tais como as cabines de segurana biolgica, no so geralmente exigidos para manipulaes de agentes de classe de risco 1. 2. recomendado o uso de jalecos, aventais ou uniformes prprios, para evitar contaminao ou sujeira de suas roupas normais. 3. Recomenda-se o uso de luvas para os casos de rachaduras ou ferimentos na pele das mos. Algumas alternativas, como o uso de luvas de ltex com talco, devero ser avaliadas. 4. culos protetores devero ser usados na execuo de procedimentos que produzam borrifos de microorganismos ou de materiais perigosos. D. Instalaes Laboratoriais (Barreiras Secundrias) 1. Os laboratrios devero possuir portas para o controle do acesso. 2. Cada laboratrio dever conter uma pia para lavagem das mos. 3. O laboratrio deve ser projetado de modo a permitir fcil limpeza. Carpetes e tapetes no so apropriados para laboratrios. 4. recomendvel que a superfcie das bancadas seja impermevel gua e resistente ao calor moderado e aos solventes orgnicos, cidos, lcalis e qumicos usados para a descontaminao da superfcie de trabalho e do equipamento. 5. Os mveis do laboratrio devero ser capazes de suportar cargas e usos previstos. Os espaos entre bancadas, cabines e equipamentos devero ser suficientes de modo a permitir fcil acesso para limpeza. 6. Se o laboratrio possuir janelas que se abram para o exterior, estas devero conter telas de proteo contra insetos.
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Nveis de Biossegurana 2 (NB-2) O nvel de biossegurana 2 semelhante ao nvel de biossegurana 1 e adequado ao trabalho que envolva agentes de risco moderado para as pessoas e o meio ambiente. Difere do NB-1 nos seguintes aspectos: o pessoal de laboratrio dever ter um treinamento especfico no manejo de agentes patognicos e devem ser supervisionados por cientistas competentes; o acesso ao laboratrio deve ser limitado durante os procedimentos operacionais; precaues extremas sero tomadas em relao a objetos cortantes infectados; e determinados procedimentos nos quais exista a possibilidade de formao de aerossis e borrifos infecciosos devem ser conduzidos em cabines de segurana biolgica ou em outros equipamentos de conteno fsica. Os seguintes padres e as prticas especiais, os equipamentos de segurana e as instalaes so aplicveis aos agentes designados para o nvel de biossegurana 2: A. Prticas Padro de Microbiologia 1. O acesso ao laboratrio dever ser limitado ou restrito de acordo com a definio do diretor do laboratrio quando estiver sendo realizado o experimento. 2. As pessoas devem lavar as mos aps a manipulao de materiais viveis, aps a remoo das luvas e antes de sarem do laboratrio. 3. proibido comer, beber, fumar, manusear lentes de contato e aplicar cosmticos nas reas de trabalho. Os alimentos devero ser guardados fora das reas de trabalho em armrios ou geladeiras especficas para tal fim. 4. proibida a pipetagem com a boca; devem ser utilizados dispositivos mecnicos. 5. Devem ser institudas normas para o manuseio de agulhas. 6. Todos os procedimentos devem ser realizados cuidadosamente a fim de minimizar a criao de borrifos ou aerossis. 7. As superfcies de trabalho devem ser descontaminadas com desinfetantes que sejam eficazes contra os agentes manipulados, ao final do trabalho ou no final do dia e aps qualquer vazamento ou borrifada de material vivel.
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8. Todas as culturas, colnias e outros resduos devero ser descontaminados antes de serem descartados com um mtodo de descontaminao aprovado, como, por exemplo, esterilizao por calor mido (autoclave). Os materiais descontaminados fora do prprio laboratrio devero ser colocados em recipientes inquebrveis, prova de vazamentos e hermeticamente fechados para serem transportados ao local desejado. 9. Deve ser providenciado um programa rotineiro de controle contra roedores e insetos (veja o apndice G). B. Prticas Especiais 1. O acesso ao laboratrio dever ser limitado ou restrito de acordo com a definio do diretor, quando o trabalho com agentes infecciosos estiver sendo realizado. Em geral, pessoas susceptveis s infeces ou pessoas que quando infectadas possam apresentar srias complicaes no sero permitidas no laboratrio ou nas salas dos animais. Por exemplo, pessoas que estejam imunocomprometidas ou imunodeprimidas podero estar correndo um srio risco de se contaminarem. Cabe ao diretor a deciso final quanto avaliao de cada circunstncia e a determinao de quem deve entrar ou trabalhar no laboratrio ou na sala de animais. 2. O diretor do laboratrio dever estabelecer normas e procedimentos com ampla informao a todos que trabalharem no laboratrio sobre o potencial de risco associado ao trabalho, bem como sobre os requisitos especficos (por exemplo, imunizao) para entrada em laboratrio. 3. O smbolo de Risco Biolgico dever ser colocado na entrada do laboratrio onde agentes etiolgicos estiverem sendo utilizados. Este sinal de alerta dever conter informaes como o(s) nome(s) do(s) agente(s) manipulado(s), o nvel de biossegurana, as imunizaes necessrias, o nome e o nmero do telefone do pesquisador, o tipo de equipamento de proteo individual que dever ser usado no laboratrio e os procedimentos necessrios para sair do laboratrio.
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4. O pessoal do laboratrio deve estar apropriadamente imunizado ou examinado quanto aos agentes manipulados ou potencialmente presentes no laboratrio (por exemplo, vacina contra a hepatite B ou teste cutneo para a tuberculose). 5. Quando apropriado, dependendo do(s) agente(s) manipulado(s), para referncia futura, devem ser mantidas amostras sorolgicas da equipe do laboratrio e de outras pessoas possivelmente expostas aos riscos. Amostras sorolgicas adicionais devem ser colhidas periodicamente, dependendo dos agentes manipulados ou da funo das instalaes laboratoriais. 6. Os procedimentos de biossegurana devem ser incorporados aos procedimentos padro operacionais ou a um manual de biossegurana especfico do laboratrio, adotado ou preparado pelo diretor do laboratrio. Todo pessoal deve ser orientado sobre os riscos e devem ler e seguir as instrues sobre as prticas e os procedimentos requeridos. 7. O diretor do laboratrio dever assegurar que o laboratrio e a equipe de apoio recebam um treinamento apropriado sobre os riscos potenciais associados ao trabalho desenvolvido, as precaues necessrias para preveno de exposio e os procedimentos para avaliao das exposies. A equipe de funcionrios dever receber cursos anuais de atualizao ou treinamento adicional, quando necessrios e tambm no caso de mudanas de normas ou procedimentos. 8. Deve-se sempre tomar uma enorme precauo em relao a qualquer objeto cortante, incluindo seringas e agulhas, lminas, pipetas, tubos capilares e bisturis. a. Agulhas e seringas hipodrmicas ou outros instrumentos cortantes devem ficar restritos ao laboratrio e ser usados somente quando no houver outra alternativa para inoculao parenteral, flebotomia ou aspirao de fluidos de animais de laboratrio e de garrafas com diafragma. Recipientes plsticos devem ser substitudos por recipientes de vidro sempre que possvel.
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b. Devem ser usadas somente seringas com agulha fixa ou agulha e seringa em uma unidade nica descartvel usada para injeo ou aspirao de materiais infecciosos. As agulhas descartveis usadas no devero ser dobradas, quebradas, reutilizadas, removidas das seringas ou manipuladas antes de desprezadas. Ao contrrio, elas devero ser cuidadosamente colocadas em recipiente resistente a perfuraes localizado convenientemente e utilizado para recolhimento de objetos cortantes desprezados. Objetos cortantes no-descartveis devem ser colocados em um recipiente cuja parede seja bem resistente para o transporte at a rea para descontaminao, de preferncia por meio de uma autoclave. c. As seringas que possuam um envoltrio para a agulha ou sistemas sem agulha e outros dispositivos de segurana devero ser utilizadas quando necessrio. d. Vidros quebrados no devem ser manipulados diretamente com a mo, devem ser removidos por outros meios, tais como vassoura e p de lixo, pinas ou frceps. Os recipientes que contm agulhas, equipamentos cortantes e vidros quebrados contaminados devero passar por um processo de descontaminao antes de serem desprezados, de acordo com os regulamentos locais, estaduais ou federais. 9. Culturas, tecidos e amostras de fluidos corpreos ou dejetos potencialmente infecciosos devem ser colocados em um recipiente com uma tampa que evite o vazamento durante a coleta, o manuseio, o processamento, o armazenamento, o transporte ou o embarque. 10. O equipamento laboratorial e as superfcies de trabalho devero ser descontaminados rotineiramente com um desinfetante eficaz, aps a concluso do trabalho, com materiais infecciosos e especialmente aps borrifos e derramamentos ou depois que outras contaminaes por materiais infecciosos tenham ocorrido. O equipamento contaminado dever ser descontaminado de acordo com as normas locais, estaduais ou federais, antes de ser en35
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viado para conserto, manuteno ou acondicionamento para transporte, de acordo com as normas locais, estaduais ou federais aplicveis, antes de ser removido do local. 11. Respingos e acidentes resultantes de uma exposio de materiais infecciosos aos organismos devero ser imediatamente notificados ao diretor do laboratrio. A avaliao mdica, a vigilncia e o tratamento devero ser providenciados. Registros do acidente e das providncias adotadas devero ser mantidos por escrito. 12. proibida a admisso de animais que no estiverem relacionados ao trabalho em execuo no laboratrio. C. Equipamentos de Segurana (Barreiras Primrias) 1. Devem ser usadas cabines de segurana biolgica mantidas de maneira adequada, de preferncia de classe II, ou outro equipamento de proteo individual adequado ou dispositivos de conteno fsica sempre que: a. Sejam realizados procedimentos com elevado potencial de criao de aerossis ou borrifos infecciosos, como centrifugao, triturao, homogeneizao, agitao vigorosa, misturas, ruptura por sonificao, abertura de recipientes contendo materiais infecciosos em que a presso interna possa ser diferente da presso ambiental, inoculao intranasal em animais e em cultura de tecidos infectados de animais ou de ovos embrionados. b. Altas concentraes ou grandes volumes de agentes infecciosos forem utilizados. Tais materiais s podero ser centrifugados fora das cabines de segurana se forem utilizadas centrfugas de segurana e frascos lacrados. Estes s devero ser abertos no interior de uma cabine de segurana biolgica. 2. Proteo para o rosto (mscaras de proteo, protetor facial, culos de proteo ou outra proteo para respingos) deve ser usada para prevenir respingos ou sprays proveniente de materiais infecciosos ou de outros materiais perigosos, quando for necessria a manipulao de microrganismos fora das cabines de segurana biolgica.
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3. No interior do laboratrio, os freqentadores devero utilizar roupas apropriadas, como jalecos, gorros ou uniformes de proteo. Antes de sair do laboratrio para as reas externas (cantina, biblioteca, escritrio administrativo), a roupa protetora deve ser retirada e deixada no laboratrio ou encaminhada para a lavanderia da instituio. A equipe do laboratrio nunca deve lev-la para casa. 4. Devem ser usadas luvas quando houver um contato direto com materiais e superfcies potencialmente infecciosos ou equipamentos contaminados. O mais adequado usar dois pares de luvas. Essas luvas devem ser desprezadas quando estiverem contaminadas, quando o trabalho com materiais infecciosos for concludo ou quando a integridade das luvas estiver comprometida. Luvas descartveis no podero ser lavadas, reutilizadas ou usadas para tocar superfcies limpas (teclado, telefones, etc.) e no devem ser usadas fora do laboratrio. Alternativas como luvas de ltex com talco devero estar disponveis. As mos devero ser lavadas aps a remoo das luvas. D. Instalaes Laboratoriais (Barreiras Secundrias) 1. exigido um sistema de portas com trancas em dependncias que abrigarem agentes restritos (como o definido em 42 CFR 72.6). 2. Considere a construo de novos laboratrios longe de reas pblicas. 3. Cada laboratrio dever conter uma pia para a lavagem das mos. Recomendamos a construo de pias que funcionem automaticamente ou que sejam acionadas com o p ou com o joelho. 4. O laboratrio dever ser projetado de modo a permitir fcil limpeza e descontaminao. Carpetes e tapetes no so apropriados para laboratrio. 5. As bancadas devero ser impermeveis gua e resistentes ao calor moderado e aos solventes orgnicos, cidos, lcalis e solventes qumicos utilizados na descontaminao das superfcies de trabalho e do equipamento.
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6. Os mveis do laboratrio devem suportar cargas e usos previstos com espaamento suficiente entre bancadas, cabines e equipamentos, para permitir acesso fcil para limpeza. As cadeiras e outros mveis utilizados no trabalho laboratorial devem ser cobertos com um material que no seja tecido e que possa ser facilmente descontaminado. 7. Cabines de segurana biolgica devem ser instaladas, de forma que a variao da entrada e da sada de ar da sala no provoque alterao nos padres de conteno de seu funcionamento. As cabines de segurana biolgica devem estar localizadas longe de portas e janelas que possam ser abertas, reas laboratoriais muito cheias e que possuam outros equipamentos potencialmente dilaceradores, de forma que sejam mantidos os parmetros de fluxo de ar nessas cabines de segurana biolgica. 8. Um lava-olhos deve estar disponvel. 9. A iluminao dever ser adequada para todas as atividades, evitando reflexos e luzes fortes e ofuscantes que possam impedir a viso. 10. No existem exigncias em relao ventilao. Porm, o planejamento de novas instalaes deve considerar sistemas mecnicos de ventilao que proporcionem um fluxo interno de ar sem que haja uma recirculao para os espaos fora do laboratrio. Caso o laboratrio possua janelas que se abram para o exterior, essas devero possuir telas para insetos. Nvel de Biossegurana 3 (NB-3) O nvel de biossegurana 3 aplicvel para laboratrios clnicos, de diagnstico, ensino e pesquisa ou de produo onde o trabalho com agentes exticos possa causar doenas srias ou potencialmente fatais, como resultado de exposio por inalao. A equipe laboratorial deve possuir treinamento especfico no manejo de agentes patognicos e potencialmente letais, devendo ser supervisionados por competentes cientistas que possuam vasta experincia com os agentes. Todos os procedimentos que envolverem a manipulao de materiais infecciosos devem ser conduzidos dentro de cabines de
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segurana biolgica ou de outro dispositivo de conteno fsica. Os manipuladores devem usar roupas e equipamentos de proteo individual. Sabe-se, porm, que algumas instalaes existentes podem no possuir todas as caractersticas recomendadas para um nvel de biossegurana 3 (por exemplo, uma rea de acesso com duas portas, selamento das entradas de ar). Nessas circunstncias, um nvel aceitvel de segurana para a conduo dos procedimentos de rotina (por exemplo, procedimentos para diagnsticos envolvendo a reproduo de um agente para identificao, tipagem, teste de susceptibilidade, etc.) poder ser conseguido com instalaes do nvel de biossegurana 2, garantindo-se que o ar liberado do laboratrio seja jogado para fora da sala; a ventilao do laboratrio seja equilibrada para proporcionar um fluxo de ar direcionado para dentro da sala; o acesso ao laboratrio seja restrito quando o trabalho estiver sendo realizado; e as prticas padro de microbiologia, as prticas especiais e o equipamento de segurana para o nvel de biossegurana 3 sejam rigorosamente seguidas. A deciso de implementar essas modificaes das recomendaes do nvel de biossegurana 3 deve ser tomada somente pelo diretor do laboratrio. Os seguintes padres e as prticas de segurana especiais, os equipamentos e as instalaes se aplicam aos agentes enumerados no nvel de biossegurana 3: A. Prticas Padro de Microbiologia 1. O acesso ao laboratrio deve ser limitado ou restrito de acordo com a definio do diretor do laboratrio quando experimentos estiverem sendo realizados. 2. As pessoas devem lavar as mos aps a manipulao de materiais infecciosos, aps a remoo das luvas e antes de sarem do laboratrio. 3. proibido comer, beber, fumar, manusear lentes de contato e aplicar cosmticos dentro da rea de trabalho. As pessoas que usarem lentes de contato em laboratrios devero tambm usar culos de proteo ou protetores faciais. Os alimentos devem ser armazenados fora do
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ambiente de trabalho em armrios ou geladeiras utilizados somente para tal fim. proibida a pipetagem com a boca e devem ser utilizados dispositivos mecnicos. Devem ser institudas normas para o manuseio de agulhas. Todos os procedimentos devem ser realizados cuidadosamente a fim de minimizar a criao de aerossis. As superfcies de trabalho devem ser descontaminadas pelo menos uma vez ao dia e depois de qualquer derramamento de material vivel. Todas as culturas, colnias e outros resduos relacionados devem ser descontaminados antes de serem descartados, por meio de um mtodo de descontaminao aprovado, como, por exemplo, a autoclavao. Os materiais descontaminados fora da rea prxima ao laboratrio devero ser colocados dentro de um recipiente rgido, prova de vazamento e hermeticamente fechado para ser transportado do laboratrio. O lixo infeccioso de laboratrios de nveis de biossegurana 3 dever ser descontaminado antes de ser removido para locais fora do laboratrio. Deve ser providenciado um programa rotineiro de controle de roedores e insetos (veja o apndice G).
B. Prticas Especiais 1. As portas do laboratrio devem permanecer fechadas quando experimentos estiverem sendo realizados. 2. O diretor do laboratrio dever controlar e limitar o acesso ao laboratrio. Somente as pessoas necessrias para que o programa seja executado ou o pessoal de apoio devem ser admitidos no local. As pessoas que apresentarem risco aumentado de contaminao ou que possam ter srias conseqncias, caso sejam contaminadas, no sero permitidas dentro do laboratrio ou na sala de animais. Por exemplo, pessoas imunocomprometidas ou imunodeprimidas podem estar mais susceptveis a uma contaminao. O diretor dever ser o responsvel final pela avaliao de cada caso e pela determinao de quem
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dever ou no entrar ou trabalhar dentro do laboratrio. No permitida a entrada de menores no laboratrio. O diretor do laboratrio dever estabelecer normas e procedimentos por meio dos quais s sero admitidas no laboratrio ou nas salas dos animais pessoas que j tiverem recebido informaes sobre o potencial de risco, que atendam todos os requisitos para a entrada no mesmo (por exemplo, imunizao) e que obedeam a todas as regras para entrada e sada no laboratrio. Quando materiais infecciosos ou animais infectados estiverem presentes no laboratrio ou no mdulo de conteno, deve ser colocado em todas as portas de acesso do laboratrio e das salas de animais um sinal de alerta contendo o smbolo universal de risco biolgico e a identificao do agente, do nome do pesquisador principal ou de outro responsvel, com endereo completo. O sinal de alerta tambm dever indicar qualquer requisito especial necessrio para a entrada no laboratrio, tais como a necessidade de imunizao, respiradores ou outras medidas de proteo individual. O pessoal do laboratrio deve ser apropriadamente imunizado ou examinado quanto aos agentes manipulados ou potencialmente presentes no laboratrio (por exemplo, vacina para hepatite B ou teste cutneo para tuberculose). Exames peridicos tambm so recomendados. Amostras sorolgicas de toda a equipe e das pessoas expostas ao risco devero ser coletadas e armazenadas adequadamente para futura referncia. Amostras sorolgicas adicionais podero ser periodicamente coletadas, dependendo dos agentes manipulados ou do funcionamento do laboratrio. Um manual de biossegurana especfico dever ser preparado e adotado pelo diretor do laboratrio e os procedimentos de biossegurana devem ser incorporados aos procedimentos padro operacionais. Todo pessoal deve ser orientado sobre os riscos especiais, deve ler e seguir as instrues sobre as prticas e os procedimentos requeridos.
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8. A equipe do laboratrio e a equipe de apoio devero receber treinamento adequado sobre os riscos potenciais associados ao trabalho desenvolvido, os cuidados necessrios para evitar uma exposio perigosa ao agente infeccioso e sobre os procedimentos de avaliao da exposio. A equipe do laboratrio dever freqentar cursos anuais de atualizao ou treinamento adicional, quando necessrio, e tambm em caso de mudanas de normas e procedimentos. 9. Caber ao diretor do laboratrio assegurar que, antes que o trabalho com os organismos designados para o nvel de biossegurana 3 se inicie, toda a equipe do laboratrio demonstre estar apta para prticas e tcnicas padro de microbiologia e esteja habilitada tambm para prticas e operaes especficas do laboratrio. Podem estar includos experincia anterior em manipulao de patgenos humanos, culturas de clulas e treinamento especfico proporcionado pelo diretor do laboratrio ou por outros peritos na rea de manejo de prticas e tcnicas microbiolgicas seguras. 10. Deve-se tomar extrema precauo quando objetos cortantes (incluindo seringas e agulhas, lminas, pipetas, tubos capilares e bisturis) forem manipulados. a. Agulhas e seringas hipodrmicas ou outros instrumentos cortantes devem ficar restritos ao laboratrio e ser usados somente quando no houver outra alternativa para inoculao parenteral, flebotomia ou aspirao de fluidos de animais de laboratrio e de garrafas com diafragma. Recipientes plsticos devem ser substitudos por recipientes de vidro sempre que possvel. b. Devem ser usadas somente seringas com agulha fixa ou agulha e seringa em uma unidade descartvel (por exemplo, quando a agulha parte integrante da seringa) para injeo ou aspirao de materiais infecciosos. As agulhas descartveis usadas no devero ser dobradas, quebradas, reutilizadas, removidas das seringas ou manipuladas antes de serem despreza42
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das. Ao contrrio, elas devero ser cuidadosamente colocadas em um recipiente resistente a perfuraes localizado convenientemente e utilizado para recolhimento de objetos cortantes desprezados. Objetos cortantes no-descartveis devero ser colocados em um recipiente cuja parede dever ser bem resistente para o transporte at uma rea para descontaminao, de preferncia com uma autoclave. c. Seringas que possuem um envoltrio para a agulha ou sistemas sem agulhas e outros dispositivos de segurana devero ser utilizados quando necessrios. d. Vidros quebrados no devem ser manipulados diretamente com a mo, devem ser removidos por outros meios mecnicos, tais como vassoura e p de lixo, pinas ou frceps. Os recipientes que contm agulhas, equipamentos cortantes e vidros quebrados contaminados devero passar por um processo de descontaminao antes de serem desprezados, de acordo com os regulamentos locais, estaduais ou federais. 11. Todas as manipulaes abertas que envolvam materiais infecciosos devero ser conduzidas no interior de cabines de segurana biolgica ou de outros dispositivos de conteno fsica dentro de um mdulo de conteno. Nenhum trabalho em que haja necessidade de abrir a pele para se alcanar os vasos dever ser conduzido em bancadas abertas. A limpeza dever ser facilitada pelo uso de toalhas absorventes com uma face de plstico voltada para baixo, recobrindo as superfcies de trabalho no perfuradas das cabines de segurana biolgica. 12. O equipamento laboratorial e as superfcies de trabalho devero ser descontaminados rotineiramente com um desinfetante eficaz aps a concluso do trabalho com materiais infecciosos, especialmente no caso de derramamento, vazamentos ou outras contaminaes por materiais infecciosos. a. Vazamentos de materiais infecciosos devero ser descontaminados, contidos e limpos pela equipe de profissionais especializados ou por outras pessoas
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adequadamente treinadas e equipadas para trabalharem com material infeccioso concentrado. Os procedimentos para vazamento devero ser desenvolvidos e notificados. b. O equipamento contaminado dever ser descontaminado antes de ser removido do laboratrio para conserto, manuteno ou para ser embalado para transporte de acordo com os regulamentos locais, estaduais e federais aplicveis. 13. As culturas, os tecidos, as amostras de fluidos corpreos ou resduos devero ser colocados em um recipiente que evite um vazamento durante coleta, manuseio, processamento, armazenamento, transporte ou embarque. 14. Todos os dejetos contendo materiais contaminados em laboratrio (por exemplo, luvas, jalecos de laboratrios, etc.) devero ser descontaminados antes de serem desprezados ou reutilizados. 15. Vazamentos e acidentes que resultem em exposies abertas dos materiais infecciosos aos organismos devero ser imediatamente relatados ao diretor do laboratrio. Avaliao mdica adequada, vigilncia e tratamento devero ser proporcionados e registros por escrito devero ser mantidos. 16. Animais e plantas que no estiverem relacionados ao trabalho em desenvolvimento no devero ser admitidos dentro do laboratrio. C. Equipamentos de Segurana (Barreiras Primrias) 1. Roupas de proteo (como jalecos com uma frente inteira, macaco ou uniforme de limpeza) devero ser usadas pela equipe quando estiver dentro do laboratrio. A roupa de proteo no dever ser usada fora do laboratrio. Antes de ser lavada a roupa dever ser descontaminada e trocada depois de contaminada. 2. Todos devero usar luvas quando estiverem manuseando materiais infecciosos, animais infectados e equipamentos contaminados.
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3. Recomenda-se a mudana freqente das luvas acompanhada de lavagem das mos. As luvas descartveis no devero ser reutilizadas. 4. Todas as manipulaes de materiais infecciosos, necropsias de animais infectados, coleta de tecidos ou lquidos de animais infectados ou de ovos embrionados, etc. devero ser conduzidas em uma cabine de segurana biolgica de classe II ou III (veja o apndice A). 5. Quando um procedimento ou processo no puder ser conduzido dentro de uma cabine de segurana biolgica, devem ser utilizadas combinaes apropriadas de equipamentos de proteo individual (por exemplo, respiradores, protetores faciais) com dispositivos de conteno fsica (por exemplo, centrfugas de segurana e frascos selados). 6. A proteo facial e o respirador devero ser usados quando a equipe estiver dentro de salas contendo animais infectados. D. Instalaes do Laboratrio (Barreiras Secundrias) 1. O laboratrio, com acesso restrito, dever estar separado das reas de trnsito irrestrito do prdio. exigido um sistema de dupla porta com sistema de intertravamento automtico como requisito para entrada no laboratrio a partir de corredores de acesso ou outras reas contguas. As portas devero conter fechaduras (veja o apndice F). Uma sala para a troca de roupas dever ser includa no laboratrio. 2. Cada sala do laboratrio dever possuir uma pia para lavagem das mos. A pia dever ser acionada automaticamente sem o uso das mos e estar localizada perto da porta de sada. 3. As superfcies das paredes internas, dos pisos e dos tetos das reas, em que os agentes de NB-3 so manipulados, devero ser construdas e mantidas de forma que facilitem a limpeza e a descontaminao. Toda a superfcie deve ser selada e sem reentrncias. As paredes, os tetos e os pisos devero ser lisos, impermeveis e resistentes a
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substncias qumicas e desinfetantes normalmente usados em laboratrios. Os pisos devero ser monolticos e antiderrapantes. O uso de revestimento de piso dever ser levado em considerao. Orifcios ou aberturas nas superfcies de pisos, paredes e teto devero ser selados. Dutos e espaos entre portas e esquadrias devem permitir o selamento para facilitar a descontaminao. As bancadas devero ser impermeveis e resistentes ao calor moderado e aos solventes orgnicos, cidos, lcalis e solventes qumicos utilizados para descontaminao de superfcies e equipamentos. Os mveis do laboratrio devero suportar cargas e usos previstos com espaamento suficiente entre bancadas, cabines e equipamentos para permitir acesso fcil para a limpeza. As cadeiras e outros mveis utilizados em um laboratrio devero ser cobertos por uma material que no seja tecido e possa ser facilmente descontaminado. Todas as janelas do laboratrio devero ser fechadas e lacradas. Um mtodo para descontaminao de todos os dejetos do laboratrio dever estar disponvel para a equipe e ser utilizado de preferncia dentro do laboratrio (por exemplo, autoclave, desinfeco qumica, incinerao ou outros mtodos aprovados de descontaminao). Deve-se considerar os meios de descontaminao de equipamentos. Caso o lixo seja transportado para fora do laboratrio, ele dever ser adequadamente lacrado e no dever ser transportado em corredores pblicos. Devero existir cabines de segurana biolgica em todos os laboratrios. Essas cabines devero estar distantes de portas, de venezianas, do almoxarifado e de reas do laboratrio que possuam um grande movimento. O laboratrio dever ter um sistema de ar independente, com ventilao unidirecional que permita que o fluxo de ar penetre no laboratrio atravs da rea de entrada. O sistema de ar dever tirar o ar contaminado para fora do laboratrio e jogar o ar de reas limpas para dentro do
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mesmo. O ar de exausto no dever recircular em outras reas do prdio. A filtrao e outros tratamentos do ar liberado no so necessrios, mas podero ser utilizados dependendo das condies do local, dos agentes especficos manipulados e das condies de uso. O ar liberado dever ser jogado fora de reas ocupadas e de entradas de ar ou dever ser filtrado atravs de filtro HEPA (High Efficiency Particulated Air). A equipe do laboratrio dever verificar constantemente se o fluxo de ar (para dentro do laboratrio) est funcionando de forma adequada. Recomenda-se que um monitor visual seja instalado para indicar e confirmar a entrada direcionada do ar para dentro do laboratrio. Devemos considerar a instalao de um sistema de controle HVAC para evitar uma pressurizao positiva contnua do laboratrio. Alarmes audveis tambm so recomendados para notificar a equipe de uma possvel falha no sistema HVAC. 10. O ar exaurido de uma cabine de segurana biolgica classe II, filtrado pelo HEPA, poder recircular no interior do laboratrio se a cabine for testada e certificada anualmente. O ar exaurido das cabines de segurana biolgica deve ser retirado diretamente para fora do ambiente de trabalho atravs do sistema de exausto do edifcio. As cabines devero estar conectadas de maneira que evitem qualquer interferncia no equilbrio do ar das cabines ou do sistema de exausto do edifcio (por exemplo, uma abertura de ar entre o exaustor das cabines e o duto do exaustor). Quando as cabines de segurana biolgica classe III forem utilizadas, estas devero estar conectadas diretamente ao sistema de exaustores. Se as cabines de classe III estiverem conectadas ao sistema de insuflao do ar, isso dever ser feito de tal maneira que previna uma pressurizao positiva das cabines (veja o apndice A). 11. Centrfugas de fluxo contnuo ou outros equipamentos que possam produzir aerossis devero ser refreados por dispositivos que liberem o ar atravs de filtros HEPA antes de serem descarregados no do laboratrio. Esses sistemas HEPA devero ser testados anualmente. Uma
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outra alternativa seria jogar o ar de sada das cabines para fora, em locais distantes de reas ocupadas ou das entradas de ar. 12. As linhas de vcuo devero ser protegidas por sifes contendo desinfetantes lquidos e filtros HEPA ou o equivalente. Os filtros devero ser substitudos quando necessrio. Uma alternativa usar uma bomba a vcuo porttil (tambm adequadamente protegida com sifes e filtros). 13. Um lava-olhos deve estar disponvel no laboratrio. 14. A iluminao dever ser adequada para todas as atividades, evitando reflexos e brilhos que possam ofuscar a viso. 15. O projeto da instalao e os procedimentos operacionais do nvel de biossegurana 3 devem ser documentados. Os parmetros operacionais e das instalaes devero ser verificados quanto ao funcionamento ideal antes que o estabelecimento inicie suas atividades. As instalaes devero ser verificadas pelo menos uma vez ao ano. 16. Protees adicionais ao meio ambiente (por exemplo, chuveiros para a equipe, filtros HEPA para filtrao do ar exaurido, conteno de outras linhas de servios e a descontaminao dos efluentes) devero ser consideradas em conformidade com as recomendaes para manipulao dos agentes, com as normas de avaliao de risco, condies do local ou outras normas locais, estaduais ou federais aplicveis. Nvel de Biossegurana 4 (NB-4) O nvel de biossegurana 4 indicado para o trabalho que envolve agentes exticos e perigosos que exponham o indivduo a um alto risco de contaminao de infeces que podem ser fatais, alm de apresentarem um potencial elevado de transmisso por aerossis. Os agentes com uma relao antignica prxima ou idntica aos dos agentes includos no nvel de biossegurana 4 devero ser manipulados neste nvel at que se consigam dados suficientes para confirmao do trabalho neste nvel ou para o trabalho em um nvel inferior. A equipe do laboratrio dever ter um treinamento especfico e completo direcionado para a manipulao de agentes infecciosos extremamente perigosos e dever ser
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capaz de entender as funes da conteno primria e secundria, das prticas padro especficas, do equipamento de conteno e das caractersticas do planejamento do laboratrio. Os trabalhadores devero ser supervisionados por cientistas competentes, treinados e com vasta experincia no manuseio dos agentes. O acesso ao laboratrio dever ser rigorosamente controlado pelo diretor. A instalao dever ser em um edifcio separado ou em uma rea controlada dentro do edifcio que seja totalmente isolada de todas as outras. Um manual de operaes especfico para as instalaes dever ser preparado ou adotado. Dentro do ambiente de trabalho, todas as atividades devero permanecer restritas s cabines de segurana biolgica classes III ou II usadas com roupas de proteo com presso positiva, ventiladas por sistema de suporte de vida. O laboratrio do nvel de biossegurana 4 dever possuir caractersticas especficas quanto ao projeto e engenharia para preveno da disseminao de microorganismos dentro do meio ambiente. As seguintes prticas padro de segurana e especiais, bem como as instalaes, se aplicam aos agentes pertencentes ao nvel de biossegurana 4: A. Prticas Padro de Microbiologia 1. O acesso ao laboratrio dever ser limitado pelo diretor quando experimentos estiverem sendo realizados. 2. A norma para manipulao segura de objetos perfurocortantes dever ser instituda. 3. Todos os procedimentos devero ser cuidadosamente realizados para minimizar a produo de aerossis. 4. As superfcies de trabalho devem ser descontaminadas pelo menos uma vez ao dia e depois de qualquer vazamento de material vivel. 5. Todo o lixo dever ser descontaminado antes de ser desprezado por meio de um mtodo de descontaminao aprovado tal qual a autoclavao. 6. Deve-se providenciar um programa rotineiro de controle de roedores e insetos (veja o apndice G).
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B. Prticas Especiais 1. Somente as pessoas envolvidas na programao e no suporte ao programa a ser desenvolvido, cujas presenas forem solicitadas no local ou nas salas do laboratrio, devero ter permisso para entrada no local. As pessoas que estiverem imunocomprometidas ou imunodeprimidas estaro correndo um alto risco de adquirir infeces. Portanto, as pessoas que forem susceptveis ou as pessoas em que uma eventual contaminao possa provocar srios danos, como no caso de crianas ou gestantes, no recebero permisso para entrar no laboratrio ou nas salas de animais. O supervisor do laboratrio dever ter a responsabilidade final no controle do acesso. Por questo de segurana, o acesso ao laboratrio dever ser bloqueado por portas hermeticamente fechadas. A entrada dever ser controlada pelo diretor do laboratrio, por outra pessoa responsvel pelo controle dos riscos biolgicos ou por outra pessoa responsvel pela segurana fsica da instalao. Antes de entrar no laboratrio, as pessoas devero ser avisadas sobre o risco potencial e instrudas sobre as medidas apropriadas de segurana. As pessoas autorizadas devero cumprir com rigor as instrues dadas e todos os outros procedimentos aplicveis para entrada e sada no laboratrio. Dever haver um registro, por escrito, de entrada e sada de pessoal, com data, horrio e assinaturas. 2. Quando materiais infecciosos ou animais infectados estiverem presentes no laboratrio, deve ser colocado em todas as portas de acesso ao laboratrio e s salas de animais um sinal de alerta contendo o smbolo universal de risco biolgico. O sinal de alerta dever identificar o agente, relacionar o nome do diretor do laboratrio ou outra pessoa responsvel e tambm indicar qualquer requisito especial necessrio para a entrada na rea (por exemplo, necessidade de imunizao, respiradores ou outras medidas de proteo individual). 3. O diretor do laboratrio dever ser o responsvel por assegurar que, antes de iniciar o trabalho com organismos
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pertencentes ao nvel de biossegurana 4, toda a equipe demonstre uma alta competncia em relao a prticas e tcnicas microbiolgicas e a prticas e operaes especiais especficas do laboratrio. Isso poder incluir uma experincia anterior no manuseio de patgenos humanos, culturas de clulas ou em um treinamento especfico fornecido pelo diretor do laboratrio ou por outro perito com experincia nessas tcnicas e prticas microbiolgicas singulares. A equipe do laboratrio dever receber imunizaes para os agentes manipulados ou potencialmente presentes no laboratrio. Amostras sorolgicas de toda a equipe do laboratrio e de outras pessoas expostas a um elevado risco devero ser coletadas e armazenadas. Amostras sorolgicas adicionais devero ser periodicamente coletadas, dependendo dos agentes manipulados ou do funcionamento do laboratrio. Ao estabelecer um programa de vigilncia sorolgica, deve-se considerar a disponibilidade dos mtodos para a avaliao do(s) anticorpo(s) do(s) agente(s) em questo. O programa para o teste das amostras sorolgicas dever ter um intervalo a cada coleta, e o responsvel pelo projeto dever comunicar os resultados aos participantes. Um manual sobre biossegurana dever ser preparado ou adotado. A equipe dever ser avisada quanto aos perigos e riscos especiais, ler e seguir as instrues sobre as prticas e os procedimentos. A equipe do laboratrio e a equipe de apoio devero receber treinamento adequado sobre os perigos e riscos associados ao trabalho, as precaues necessrias para a preveno de exposies e os procedimentos de avaliao da exposio. A equipe tambm dever participar de cursos anuais de atualizao ou treinamento adicional, quando necessrio, em caso de mudanas nos procedimentos. A entrada e a sada de pessoal do laboratrio devem ocorrer somente aps uso do chuveiro e troca de roupas. Os funcionrios devero usar o chuveiro de descontamina51
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o a cada sada do laboratrio. A entrada e a sada de pessoal por antecmara pressurizada somente devero ocorrer em situaes de emergncia. 9. Para entrar no laboratrio, a roupa comum dever ser trocada (nos vestirios externos) por roupa protetora completa e descartvel. Todas as roupas usadas no laboratrio (incluindo roupas de baixo, calas e camisas ou macaces, sapatos e luvas) devero ser fornecidas e utilizadas por todas as pessoas que entrarem no laboratrio. Ao deixarem o local e antes de se dirigirem para as reas de banho, as pessoas devero retirar a roupa usada no laboratrio, no vestirio interno. As roupas sujas devero passar pela autoclave antes de lavadas. 10. Estoques e materiais necessrios para o laboratrio devero ser descontaminados em autoclave de dupla porta, cmara de fumigao ou sistema de antecmara pressurizada antes de utilizados. Aps garantir a segurana das portas externas, a equipe dentro do laboratrio dever retirar os materiais abrindo as portas interiores da autoclave, da cmara de compresso ou da cmara de fumigao. As portas devero ser trancadas depois da retirada dos materiais. 11. Deve-se sempre tomar extrema precauo com qualquer objeto perfurocortante contaminado, como seringas e agulhas, lminas, pipetas, tubos capilares e bisturis. a. Agulhas e seringas hipodrmicas ou outros instrumentos cortantes so restritos ao laboratrio e usados somente quando no houver outra alternativa para inoculao parenteral, flebotomia ou aspirao de fluidos de animais de laboratrio e de garrafas com diafragma. Recipientes plsticos devem ser substitudos por recipientes de vidro sempre que possvel. b. Devem ser usadas somente seringas com agulhas fixas ou agulha e seringa em uma unidade nica e descartvel (por exemplo, quando a agulha parte integrante da seringa) para injeo ou aspirao de materiais infecciosos. As agulhas descartveis usa52
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das no devero ser dobradas, quebradas, reutilizadas, removidas das seringas ou manipuladas antes de desprezadas. Ao contrrio, elas devero ser cuidadosamente acondicionadas em um recipiente resistente a perfuraes localizado convenientemente e utilizado para recolhimento de objetos cortantes desprezados. Objetos cortantes no descartveis devero ser acondicionados em um recipiente cuja parede dever ser bem resistente para o transporte at uma rea para descontaminao, de preferncia por meio de autoclave. c. As seringas que possuem um envoltrio para a agulha ou sistemas sem agulha e outros dispositivos de segurana devero ser utilizados quando necessrio. d. Vidros quebrados no devem ser manipulados diretamente com a mo, devem ser removidos por meios mecnicos, como vassoura e p de lixo, pinas ou frceps. Os recipientes que contm agulhas, equipamentos cortantes e vidros quebrados contaminados devero passar por um processo de descontaminao antes de desprezados, de acordo com os regulamentos locais, estaduais ou federais. 12. O material biolgico vivel ou intacto a ser removido de cabines classe III ou do laboratrio de nvel de biossegurana dever ser acondicionado em recipiente de conteno primria lacrado e inquebrvel. Este, por sua vez, dever ser acondicionado em um segundo recipiente tambm selado e inquebrvel que dever passar por um tanque de imerso contendo desinfetante, uma cmara de fumigao ou por uma cmara de compresso planejada com esse propsito. 13. Nenhum material, com exceo do material biolgico, que dever permanecer intacto ou vivel, poder ser removido de um laboratrio de nvel de biossegurana 4, sem antes ter sido autoclavado ou descontaminado. Equipamentos ou materiais que no resistam a temperaturas elevadas ou ao vapor devero ser descontaminados utili-
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zando-se gases ou vapor em uma cmara de compresso ou em uma cmara especfica para tal fim. 14. O equipamento do laboratrio dever ser descontaminado rotineiramente aps o trabalho com materiais infecciosos e especialmente depois de vazamentos, gotejamentos ou outras contaminaes por material infeccioso. O equipamento dever ser descontaminado antes de ser enviado para conserto ou manuteno. 15. Vazamentos de materiais infecciosos devero ser refreados e limpos por profissionais especializados ou outros propriamente treinados e equipados para o trabalho com material infeccioso concentrado. Um procedimento para vazamento dever ser desenvolvido e adotado pelo laboratrio. 16. Um sistema de notificao de acidentes e exposies laboratoriais, absentesmo de empregados e doenas associadas ao laboratrio dever ser organizado, bem como um sistema de vigilncia mdica. Relatos por escrito devero ser preparados e mantidos. Deve-se, ainda, prever uma unidade de quarentena, isolamento e cuidados mdicos para o pessoal contaminado por doenas conhecidas ou potencialmente associadas a laboratrio. 17. Todos os materiais no relacionados ao experimento que estiver sendo realizado no momento (por exemplo, plantas, animais e roupas) no devero ser permitidos no laboratrio. C. Equipamentos de Segurana (Barreiras Primrias) Todos os procedimentos dentro do laboratrio devero ser conduzidos em cabines de segurana biolgica classe III ou cabines de classe II usadas em associao com roupas de proteo pessoal com presso positiva e ventiladas por sistema de suporte de vida. D. Instalaes dos Laboratrios (Barreiras Secundrias) Existem dois modelos de laboratrio de nvel de biossegurana 4: (A) o laboratrio cabine, onde todas as manipulaes do agente so realizadas em uma cabine de segurana biolgica classe III; e (B) o laboratrio escafandro, onde a equipe usa uma roupa de
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proteo. Os laboratrios de nvel de biossegurana 4 podem se basear em um dos modelos ou em uma combinao dos dois modelos na construo de um s laboratrio. Se a combinao for utilizada, cada tipo dever atender todos os requisitos identificados para o mesmo. (A) Laboratrio Cabine (veja o apndice A) 1. O laboratrio de biossegurana 4 dever estar separado do prdio ou em uma rea claramente demarcada e isolada. As salas do laboratrio devero ser planejadas para assegurar a passagem atravs de, no mnimo, duas portas antes de se entrar nas salas contendo as cabines de segurana biolgica classe III (sala das cabines). Devem estar previstas cmaras de entrada e sada de pessoal, para troca de roupas, separadas por chuveiro. Deve ser previsto, ainda, um sistema de autoclave de duas portas, um tanque de imerso contendo desinfetante, uma cmara de fumigao ou uma ante-sala ventilada para descontaminao na barreira de conteno para o fluxo de materiais, estoques ou equipamentos que no passam pelo interior dos vestirios para chegar at a sala. 2. Inspees dirias de todos os parmetros de Conteno (por exemplo, fluxo de ar direcionado) e sistemas de suporte de vida devero estar concludos antes que o trabalho se inicie dentro do laboratrio, para assegurar que este esteja funcionando de acordo com os parmetros de operao. 3. As paredes, os pisos e os tetos da sala contendo as cabines e do vestirio interno devero ser construdos de maneira que formem uma concha interna selada que facilitar a fumigao e evitar entrada e sada de animais e insetos. Os pisos devero ser totalmente selados e revestidos. As superfcies internas da concha devero ser resistentes a lquidos e produtos qumicos, para facilitar a limpeza e a descontaminao da rea. Aberturas ao redor das portas das salas de cabine e dentro dos vestirios internos devero ser minimizadas e facilmente seladas para facilitar a descontaminao. O sistema de drenagem
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do piso da sala da cabine dever estar conectado diretamente ao sistema de descontaminao do dejeto lquido. O sistema de esgoto e outra linha de servio devero conter filtros HEPA e protees contra animais nocivos, parasitas, etc. As bancadas devero possuir superfcies seladas e sem reentrncias que devero ser impermeveis gua e resistentes ao calor moderado e aos solventes orgnicos, cidos, lcalis e solventes qumicos utilizados na descontaminao das superfcies de trabalho e dos equipamentos. Os mveis do laboratrio devero ter uma construo simples e suportar cargas e usos previstos. O espaamento entre bancadas, cabines, armrios e equipamentos dever ser suficiente para facilitar a limpeza e a descontaminao. As cadeiras e outros mveis usados em um laboratrio devero ser cobertos por um material que no seja tecido e que possa ser facilmente descontaminado. Pias com acionamento automtico ou que sejam acionadas sem uso das mos devero ser construdas prximas porta da sala da cabine e perto dos vestirios internos e externos. Se existir um sistema central de vcuo, este no dever servir s reas fora da sala das cabines. Filtros HEPA em srie devero ser colocados da forma mais prtica possvel em cada ponto onde ser utilizado ou prximo da vlvula de servio. Os filtros devero ser instalados de forma a permitir a descontaminao e a substituio local dos mesmos. Outras linhas utilitrias, como a de gs e lquidos, que convergem para a sala das cabines, devero ser protegidas por dispositivos que evitem o retorno do fluxo. Se houver bebedouros de gua, eles devero ser acionados automaticamente ou com os ps e devero estar localizados nos corredores do local, fora do laboratrio. O servio de abastecimento da gua dos bebedouros dever ser isolado do sistema de distribuio e abastecimento de gua das reas laboratoriais e dever ser equipado com um dispositivo que previna o retorno do fluxo.
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9. As portas de acesso ao laboratrio devero possuir trancas e fechamento automtico. 10. Todas as janelas devero ser inquebrveis e seladas. 11. Todos os laboratrios devero possuir autoclaves de duas portas para a descontaminao de materiais que passem pelas cabines de segurana biolgica classe III e pelas salas com cabines. As portas das autoclaves, que se abrem para fora da barreira de conteno, devero ser seladas s paredes da barreira de conteno. Essas portas devero ser controladas automaticamente de forma que a porta externa da autoclave somente possa ser aberta depois que o ciclo de esterilizao da autoclave tenha sido concludo. 12. Todos os laboratrios devero possuir tanques de imerso contendo desinfetantes, cmaras de fumigao ou mtodos equivalentes de descontaminao, de forma que os materiais e os equipamentos que no possam ser descontaminados em uma autoclave sejam removidos de maneira segura das cabines de segurana biolgica classe III e das salas com as cabines. 13. Efluentes lquidos vindos da parte suja dos vestirios internos (incluindo os vasos sanitrios), das pias das salas das cabines, do sistema de esgoto (se utilizado), das cmaras da autoclave e de outras fontes dentro da sala das cabines devero ser descontaminados com um mtodo de descontaminao comprovado, de preferncia por meio de um tratamento por calor antes de serem jogados no esgoto sanitrio. Os efluentes vindos de chuveiros e vasos sanitrios limpos devero ser jogados no esgoto sem antes passar por um tratamento. O processo usado para a descontaminao de dejetos lquidos dever ser validado fisicamente e biologicamente. 14. Todos os laboratrios devero possuir um sistema de ventilao sem uma recirculao. Os componentes de abastecimento e de liberao do sistema devero estar equilibrados para assegurar um fluxo de ar direcionado da rea de menos risco para rea(s) de maior risco potencial. O sistema de ar no laboratrio dever prever presso
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diferencial e fluxo unidirecionado de modo a assegurar diferencial de presso que no permita a sada do agente de risco. O fluxo de ar direcionado/presso diferencial dever ser monitorado e dever conter um alarme que acuse qualquer irregularidade no sistema. Um dispositivo visual que monitorize a presso de maneira apropriada, que indique e confirme o diferencial da presso da sala das cabines, dever ser providenciado e dever ser colocado na entrada do vestirio. O fluxo de ar de entrada e sada tambm dever ser monitorado, e um sistema de controle HEPA dever existir para evitar uma contnua pressurizao positiva do laboratrio. A cabine de classe III dever ser diretamente conectada ao sistema de exaustores. Se a cabine de classe III estiver conectada ao sistema de abastecimento, isso dever ser feito de forma que previna uma pressurizao positiva da cabine. 15. O ar que entra e sai da sala das cabines, do vestirio interno e da ante-sala dever passar pelo(s) filtro(s) HEPA. O ar dever ser liberado longe dos espaos ocupados e das entradas de ar. O(s) filtro(s) dever(o) estar localizado(s) de maneira mais prxima possvel da fonte a fim de minimizar a quantidade de canos potencialmente contaminados. Todos os filtros HEPA devero ser testados e certificados anualmente. O alojamento dos filtros HEPA dever ser projetado de maneira que permita uma descontaminao in situ do filtro antes de este ser removido ou antes da remoo do filtro em um recipiente selado e de conteno de gs para subseqente descontaminao e/ou destruio por incinerao. O projeto do abrigo do filtro HEPA dever facilitar a validao da instalao do filtro. O uso de filtros HEPA pr-certificados pode ser vantajoso. A vida mdia de filtros HEPA de exausto pode ser prolongada com uma pr-filtrao adequada do ar insuflado. 16. O projeto e os procedimentos operacionais de um local de nvel de biossegurana 4 devero ser documentados. O local dever ser testado em funo do projeto e dos parmetros operacionais para ser verificado se estes realmente atendem a todos os critrios, antes que comecem
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a funcionar. Os locais devero ser checados novamente pelo menos uma vez ao ano, e os procedimentos neles existentes devero ser modificados de acordo com a experincia operacional. 17. Sistemas de comunicao apropriados devero ser instalados entre o laboratrio e o exterior (por exemplo, fax, computador, interfone). (B) Laboratrio Escafandro 1. A instalao de nvel de biossegurana 4 consiste de um edifcio separado ou de uma rea claramente demarcada e isolada dentro do edifcio. As salas devero ser construdas de forma que assegurem a passagem atravs dos vestirios e da rea de descontaminao antes da entrada na(s) sala(s) onde o trabalho com os agentes do NB4 (rea do escafandro) realizado. Vestirios interno e externo, separados por um chuveiro, devero ser construdos para entrada e sada da equipe que trabalha no laboratrio escafandro. Uma rea para o uso do escafandro, projetada especialmente para o local, tambm ser construda para proporcionar uma proteo pessoal equivalente quela proporcionada pelas cabines de segurana biolgica classe III. As pessoas que entrarem nesta rea devero vestir uma roupa de pea nica de presso positiva e que seja ventilada por um sistema de suporte de vida protegido pelo sistema de filtros HEPA. O sistema de suporte de vida inclui compressores de respirao de ar, alarmes e tanques de ar de reforo de emergncia. A entrada nesta rea dever ser feita atravs de uma cmara de compresso adaptada com portas hermticas. Um chuveiro qumico para descontaminao da superfcie da roupa, antes que o trabalhador saia da rea, dever ser instalado. Um gerador de luz, automaticamente acionado em casos de emergncia, ser instalado para evitar que os sistemas de suporte de vida, os alarmes, a iluminao, os controles de entrada e sada e as cabines de segurana parem de funcionar. A presso do ar dentro da roupa dever ser positiva em relao rea ao redor do labora59
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trio. J a presso do ar dentro da rea da roupa dever ser menor que aquela das reas adjacentes. A iluminao e os sistemas de comunicao de emergncia devero ser instalados. Todas as aberturas e fendas dentro da concha interna da sala da roupa de proteo, do chuveiro qumico e das fechaduras devero ser seladas. 2. Uma inspeo diria de todos os parmetros de conteno (por exemplo, fluxo de ar direcionado, chuveiros qumicos) e dos sistemas de suporte de vida dever estar concluda antes que o trabalho no laboratrio se inicie, para garantir que o laboratrio esteja operando de acordo com os parmetros operacionais. 3. Uma autoclave com duas portas dever ser instalada na barreira de conteno para descontaminao dos dejetos a serem removidos da rea do laboratrio escafandro. A porta da autoclave, que se abre para a rea externa da sala escafandro, dever ser automaticamente controlada de forma que a porta exterior s possa ser aberta depois que o ciclo de esterilizao esteja concludo. Um tanque de imerso, uma cmara de fumigao ou de compresso dever ser colocado no local para permitir a passagem de materiais, suprimentos ou equipamentos que sero trazidos para o interior do laboratrio escafandro, atravs dos vestirios. Esses dispositivos podem tambm ser utilizados para a remoo de materiais, suprimentos ou equipamentos que no possam ser descontaminados em uma autoclave. 4. As paredes, os pisos e os tetos do laboratrio escafandro devero ser construdos de maneira que formem uma concha interna selada, que facilite a fumigao e que evite a entrada de animais e insetos (veja o apndice G). As superfcies internas da concha devero ser resistentes a lquidos e solues qumicas, facilitando a limpeza e a descontaminao da rea. Todas as aberturas e fendas nessas estruturas e superfcies devero ser seladas. Qualquer sistema de drenagem do piso dever conter sifes cheios de desinfetante qumico de eficcia comprovada contra o agente-alvo que devero estar conectados diretamente ao
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sistema de descontaminao de dejetos lquidos. O esgoto e outras linhas de servio devero conter filtros HEPA. 5. Acessrios internos como dutos de ventilao, sistemas de suprimento de luz e gua devero ser instalados de maneira que minimizem a rea da superfcie horizontal. 6. As bancadas devero possuir superfcies seladas e sem emendas, impermeveis e resistentes ao calor moderado e aos solventes orgnicos, cidos, lcalis e solventes qumicos utilizados na descontaminao das superfcies de trabalho e nos equipamentos. 7. Os mveis do laboratrio devero ter uma construo simples e suportar cargas e usos previstos. Recomendase o uso de materiais no porosos. Os espaos entre as bancadas, as cabines e armrios e o equipamento devero ser suficientes para facilitar a limpeza e a descontaminao. As cadeiras e outros mveis do laboratrio devero ser cobertos por um material que no seja tecido e que possa ser facilmente descontaminado. 8. Pias com funcionamento automtico ou que sejam acionadas sem o uso das mos devero ser construdas prximas rea em conjunto com a roupa de proteo. A construo de pias para a lavagem das mos nos vestirios internos e externos dever ser considerada bsica para a avaliao de risco. 9. Se existir um sistema central de vcuo, este no servir s reas fora do laboratrio conjunto com a roupa de proteo. Os filtros HEPA enfileirados devero ser colocados da forma mais prtica possvel em cada ponto em que sero utilizados ou prximo da vlvula de servio. Os filtros devero ser instalados de modo que permitam a descontaminao e a substituio local dos mesmos. Outros servios de gs e lquidos para essas reas conjuntas devero ser protegidos por meio de dispositivos que evitem o retorno do fluxo. 10. As portas de acesso ao laboratrio devero possuir trancas e fechamento automtico. As portas internas e externas ao chuveiro qumico e as internas e externas s en61
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tradas de ar devero ser trancadas para evitar que ambas as portas sejam abertas simultaneamente. 11. Todas as janelas devero ser resistentes e seladas. 12. Efluentes lquidos provenientes das pias, dos canos de esgoto do piso (se utilizado), das cmaras da autoclave e de outras fontes dentro da barreira de conteno devero ser descontaminados com um mtodo de descontaminao comprovado, de preferncia por um tratamento com calor, antes de serem jogados no esgoto sanitrio. Os efluentes vindos de chuveiros e vasos sanitrios limpos devero ser jogados no esgoto sem antes passar por um tratamento. O processo usado para a descontaminao de dejetos lquidos dever ser validado fsica e biologicamente. 13. Todos os laboratrios devero possuir um sistema de ventilao sem recirculao. Os componentes de insuflao e exausto de ar do sistema devero estar equilibrados para assegurar um fluxo de ar direcionado da rea de menos risco para rea(s) de maior perigo. Recomendamos o uso de ventiladores para abastecimento e liberao de ar. O fluxo de ar direcionado/presso diferencial entre as reas adjacentes dever ser monitorado e dever conter um alarme para indicar qualquer irregularidade no sistema. Um dispositivo visual que monitore a presso de maneira apropriada, que indique e confirme o diferencial da presso da sala das cabines dever ser providenciado e colocado na entrada do vestirio. O fluxo de ar nos componentes de abastecimento e escape tambm dever ser monitorado, e um sistema de controle HVAC dever ser instalado para evitar uma pressurizao positiva do laboratrio. 14. O ar que abastece a rea conjunta, o chuveiro qumico e a cmara de compresso dever passar atravs do filtro HEPA. O ar que sai dessa rea conjunta, do chuveiro qumico e das cmaras de compresso e de descontaminao dever passar por dois filtros HEPA em srie antes de ser jogado para fora do laboratrio. O ar dever ser lanado distante dos espaos ocupados e das entradas de ar. O(s) filtro(s) HEPA devero estar localizados de maneira mais
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prxima possvel da fonte a fim de minimizar a extenso dos canos potencialmente contaminados. Todos os filtros HEPA devero ser testados e certificados anualmente. O abrigo para os filtros HEPA dever ser projetado de maneira que permita uma descontaminao in situ do filtro antes de este ser removido. Uma outra alternativa seria a remoo do filtro em um recipiente primrio e hermtico ao gs para subseqente descontaminao e/ou destruio por incinerao. O projeto do abrigo do filtro HEPA dever facilitar a validao da instalao do filtro. O uso de filtros HEPA pr-certificados pode ser vantajoso. A vida mdia de filtros HEPA exaustores pode ser prolongada com uma pr-filtrao adequada do ar fornecido. 15. O posicionamento dos pontos de entrada e sada de ar dever ser de forma que os espaos de ar estticos dentro do laboratrio escafandro sejam minimizados. 16. O ar de sada tratado e o liberado das cabines de segurana biolgica classe II, localizadas no local onde os trabalhadores vestem a roupa de presso positiva, poder ser jogado para dentro do ambiente de trabalho ou para o exterior atravs do sistema de exaustores do local. Se o ar tratado for liberado para fora atravs dos exaustores, este dever estar diretamente conectado ao sistema, de maneira que evite qualquer interferncia no equilbrio do ar das cabines ou do sistema de exaustores. 17. O projeto e os procedimentos operacionais de um local de nvel de biossegurana 4 devero ser documentados. O local dever ser testado em funo do projeto e dos parmetros operacionais, para que se verifique se realmente atendem a todas as necessidades antes que comecem a funcionar. Os locais devero ser checados novamente uma vez ao ano, e os procedimentos neles existentes devero ser modificados de acordo com a experincia operacional. 18. Sistemas de comunicao apropriados devero ser instalados entre o laboratrio e o exterior (por exemplo, fax, computador, interfone).
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Tabela 1. Resumo dos nveis de biossegurana recomendados para agentes infecciosos

NB AGENTES PRTICAS EQUIPAMENTOS DE SEGURANA (Barreiras Primrias) INSTALAES (Barreiras Secundrias)
Que no so conhecidos por cau sarem doenas em adultos sadios. Associados com doenas humanas, risco = leso percutnea, ingesto, exposio da membrana mucosa.
Prticas padro de mi- No so necessrios. crobiologia.
Bancadas abertas com pias prximas.
Prtica de NB-1 mais: acesso limitado; avisos de risco biolgico; precaues com objetos perfurocortantes; manual de biossegurana que defina qualquer descontaminao de dejetos ou normas de vigilncia mdica. Prticas de NB-2 mais: acesso controlado; descontaminao de todo o lixo; descontaminao da roupa usada no laboratrio antes de ser lavada; amostra sorolgica.
Agentes exticos com potencial para transmisso via aerossol; a doena pode trazer conseqncias srias ou at fatais.
Barreiras primrias = cabines de classe I ou II ou outros dispositivos de conteno fsica usados para todas as manipulaes de agentes que provoquem aerossis ou vazamento de materiais infecciosos; procedimentos especiais como o uso de aventais, luvas e proteo para o rosto, quando necessrio. Barreiras primrias = cabines de classe I ou II ou outros dispositivos de conteno usados para todas as manipulaes abertas de agentes; uso de aventais, luvas e proteo respiratria, quando necessrio.
NB-1 mais: autoclave disponvel.
Agentes exticos ou perigosos que impem um alto risco de doenas que ameaam a vida, infeces laboratoriais transmitidas via aerossol ou relacionadas a agentes com risco desconhecido de transmisso.
NB-3 mais: mudana de roupa antes de entrar; banho de ducha na sada; todo o material descontaminado na sada das instalaes.
Barreiras primrias = todos os procedimentos conduzidos em cabines de classe III ou classe I ou II juntamente com macaco de presso positiva com suprimento de ar.
NB-2 mais: separao fsica dos corredores de acesso; portas de acesso duplas com fechamento automtico; ar de exausto no recirculante; fluxo de ar negativo dentro do laboratrio. NB-3 mais: edifcio separado ou rea isolada; sistemas de abastecimento e escape a vcuo e de descontaminao; outros requisitos sublinhados no texto.
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critrios para os nveis de biossegurana para animais vertebrados
Caso sejam usados animais experimentais, a administrao da instituio dever fornecer instalaes adequadas, equipe para cuidar dos animais e estabelecer prticas que assegurem nveis apropriados para qualidade, segurana e cuidados com o meio ambiente. As instalaes para animais de laboratrio consistem de um tipo especial de laboratrio. Como princpio geral, os nveis de biossegurana (as instalaes laboratoriais, as prticas e os requisitos operacionais) indicados para o trabalho envolvendo agentes infecciosos in vivo e in vitro so similares. Porm, bom lembrarmos que as salas onde se encontram os animais podem apresentar alguns problemas singulares. No laboratrio de microbiologia, as condies de risco so provocadas pela equipe do laboratrio ou pelo equipamento usado por eles. Nas salas dos animais, as atividades dos prprios animais podem apresentar novos riscos. Os animais podem produzir aerossis, morder e arranhar e podem estar infectados por uma doena zoontica. Essas recomendaes presumem que as dependncias de um laboratrio de experimentao animal, as prticas operacionais e a qualidade do tratamento ao animal atendam a padres e regulamentos aplicveis (por exemplo, Guide for the Care and Use of Laboratory Animals1 e Laboratory Animal Welfare Regulations2) e que espcies adequadas tenham sido selecionadas para os experimentos animais. Alm desse aspecto, a organizao dever ter um plano de segurana e de sade ocupacionais. A publicao recente do Institute of Medicine, Occupational Health and Safety Care of Research Animals3 auxilia muito.
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O ideal seria que as dependncias para animais de laboratrio usados nos estudos de doenas infecciosas ou no infecciosas possussem um isolamento fsico de outros locais onde so realizadas atividades, tais como a reproduo animal e a quarentena, de laboratrios clnicos e especialmente de dependncias onde pacientes so atendidos. No momento da elaborao do projeto das instalaes, deve-se considerar o fluxo de pessoas no local, de forma que minimize o risco de infeces. As recomendaes detalhadas a seguir descrevem quatro combinaes de prticas, equipamentos de segurana e dependncias para experimentos com animais infectados por agentes que provocam ou possam provocar infeces humanas. Essas quatro combinaes, designadas de nveis de biossegurana para animais (NBA) 1-4, proporcionam nveis crescentes de proteo ao pessoal e ao meio ambiente e so recomendadas como padres mnimos a serem seguidos em atividades que envolvam animais de laboratrios infectados. Os quatro nveis descrevem as dependncias para animais e prticas aplicveis para o trabalho com animais infectados por microorganismos pertencentes aos nveis de biossegurana 1-4, respectivamente. Os pesquisadores inexperientes quanto conduo desses tipos de procedimentos devero procurar ajuda com pessoas que possuam experincia com esse trabalho especial para que possam realiz-lo com segurana. Padres para as instalaes e prticas de manuseio de vetores e hospedeiros invertebrados no esto includos nos padres de trabalho para animais de laboratrio comumente utilizados. O livro Laboratory Safety for Arboviruses and Certain Other Viruses of Vertebrates,4 preparado pelo Subcomit de Segurana de Laboratrios de Arbovrus (SALS), do Comit Americano de Vrus de Artrpodes, serve como uma referncia til no planejamento e na operao das dependncias onde sero realizados trabalhos com artrpodes. Nvel de Biossegurana Animal 1 (NBA-1) O nvel de biossegurana animal 1 (NBA-1) recomendado para o trabalho que envolva agentes bem caracterizados, que no
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sejam conhecidos por provocarem doenas em humanos adultos sadios e que apresentem um risco potencial mnimo para a equipe laboratorial e para o meio ambiente. A. Prticas Padro 1. O chefe do laboratrio de experimentao animal dever estabelecer normas, procedimentos e protocolos para situaes de emergncia. Cada projeto dever ser submetido a uma pr-aprovao pelo Comit Institucional de Tratamento e Uso de Animais (IACUC) e pelo Comit Institucional de Biossegurana (IBC). Quaisquer prticas especiais devero ser aprovadas nesse momento. 2. Somente as pessoas que trabalham ou que fazem parte da equipe de apoio devero receber autorizao para entrar no local. Antes de entrarem, as pessoas devero ser avisadas quanto aos riscos biolgicos potenciais e receber instrues sobre os procedimentos de segurana apropriados. 3. Um programa de vigilncia mdica adequado dever ser institudo. 4. Um manual de segurana dever ser preparado ou adotado. A equipe dever ser avisada sobre os riscos especiais, ler e seguir as instrues sobre as prticas e os procedimentos. 5. proibido comer, beber, fumar, manusear lentes de contato e aplicar cosmticos. Os alimentos para uso humano devero ser guardados somente em reas designadas para tal fim e no sero permitidos nas salas de trabalho ou nas salas dos animais. 6. Todos os procedimentos devero ser realizados com cuidado para minimizar a criao de aerossis e borrifos. 7. As superfcies de trabalho devero ser descontaminadas aps o uso ou depois de qualquer derramamento de materiais viveis. 8. Todos os rejeitos da sala de animais (incluindo tecidos, carcaas e o material das camas de animais contaminados) devero ser transportados da sala dos animais em
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recipientes rgidos, cobertos e a prova de vazamento para serem adequadamente desprezados de acordo com os requisitos locais ou institucionais aplicveis. Recomendase a incinerao. 9. Normas quanto ao manuseio seguro de objetos cortantes devero ser institudas. 10. A equipe dever lavar as mos aps ter manuseado culturas e animais, depois da remoo das luvas e antes de sarem da sala dos animais. 11. Um aviso de risco biolgico dever ser colocado na entrada da sala de animais quando agentes infecciosos estiverem presentes no local. O aviso de risco dever identificar o(s) agente(s) infeccioso(s) em uso, o nome e o nmero do telefone da pessoa responsvel e indicar os requisitos especiais para a entrada na sala dos animais (por exemplo, necessidade de imunizao e do uso de respiradores). 12. Deve ser providenciado um programa rotineiro de controle de roedores e insetos (veja o apndice G). B. Prticas Especiais: Nenhuma. C. Equipamentos de Segurana (Barreiras Primrias): 1. Recomenda-se o uso de jalecos, aventais e/ou uniformes prprios nas dependncias. Estes devero permanecer no local e no devero ser usados fora das dependncias do laboratrio de experimentao animal. 2. As pessoas que tiverem contato com primatas no-humanos devero avaliar o risco de exposio das mucosas e usar uma proteo para os olhos e a face.5 D. Instalaes (Barreiras Secundrias): 1. As dependncias do laboratrio de experimentao animal devero estar separadas das reas do edifcio abertas ao pblico. 2. As portas externas do laboratrio devero ser fechadas e trancadas automaticamente. As portas das salas dos ani68
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mais devero abrir para dentro, fechar automaticamente e ser mantidas fechadas quando os animais estiverem presentes. As portas internas da sala e da ante-sala devero abrir para fora ou deslizar vertical ou horizontalmente. 3. As dependncias devero ser planejadas, construdas e mantidas de forma a facilitar a limpeza e a manuteno. As superfcies das paredes, dos pisos e dos tetos devero ser impermeveis gua. 4. Acessrios internos, como fixao de luzes, dutos de ar e canos de gs e gua devero ser instalados de forma a minimizar reas de superfcie horizontal. 5. Janelas no so recomendadas. Qualquer janela dever ser resistente quebra. Em todos os locais possveis, as janelas que porventura existirem devero ser seladas. Se as dependncias para animais possurem janelas que so abertas, estas devero conter telas para insetos. 6. Se houver sistema de drenagem no piso, os ralos devero sempre conter gua e/ou um desinfetante adequado. 7. A ventilao a ser instalada dever estar de acordo com a ltima edio do Guide for Care and Use of Laboratory Animals.6 No dever haver nenhuma recirculao do ar exaurido. Recomenda-se que as salas para os animais sejam mantidas com uma presso negativa em relao aos corredores adjuntos. 8. A dependncia dever conter uma pia para lavagem das mos. 9. As caixas e gaiolas devero ser lavadas manualmente ou em uma mquina para sua lavagem mecnica. A mquina dever ter enxge final com gua a uma temperatura de pelo menos 72C (180F). 10. A iluminao dever ser adequada para todas as atividades, evitando reflexos e brilhos que possam impedir a viso. Nvel de Biossegurana Animal 2 (NBA-2) O nvel de biossegurana animal 2 envolve prticas para o trabalho com agentes associados a doenas humanas. Este nvel indicado tanto para riscos advindos da ingesto quanto para expo69
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sies da membrana mucosa e cutnea. O NBA-2 baseia-se nos requisitos de prticas padro, procedimentos, equipamentos de conteno e instalaes do NBA-1. A. Prticas Padro 1. Alm das normas, dos procedimentos e dos protocolos padro para situaes de emergncia estabelecidas pelo diretor do local, normas e procedimentos especiais devero ser desenvolvidos quando necessrio e devero ser aprovados pelo Comit Institucional de Tratamento e Uso de Animais (IACUC) e pelo Comit Institucional de Biossegurana (IBC). 2. O acesso s salas dos animais dever ser limitado, permitindo o acesso ao menor nmero de pessoas possvel. As pessoas que receberem autorizao para entrar nas salas para trabalhar ou realizar algum tipo de servio, quando o trabalho estiver sendo realizado, devero ser avisadas em relao aos riscos em potencial. 3. Um programa de vigilncia mdica adequado dever ser adotado. Toda a equipe dever ser imunizada e testada contra os agentes manuseados ou potencialmente presentes (por exemplo, vacina de hepatite B e teste cutneo para TB). Quando apropriado, um sistema de vigilncia sorolgica dever ser implementado.7 4. Um manual de biossegurana dever ser preparado ou adotado. A equipe do laboratrio dever ser avisada sobre os riscos especiais, ler e seguir as instrues sobre prticas e procedimentos. 5. proibido comer, beber, fumar, manusear lentes de contato e aplicar cosmticos. Os alimentos de uso humano devero ser guardados somente em reas designadas para tal fim e no sero permitidos dentro das salas para os animais ou salas de procedimentos. 6. Todos os procedimentos devero ser realizados com cuidado para minimizar a criao de aerossis e borrifos. 7. O equipamento e as superfcies de trabalho na sala devero ser rotineiramente descontaminados com um desin70
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fetante de ao comprovada, aps o trabalho com o agente e especialmente depois de borrifos, derramamentos ou de outras contaminaes com materiais infecciosos. 8. Todas as amostras infecciosas devero ser coletadas, etiquetadas, transportadas e processadas de maneira que contenham e previnam a transmisso do(s) agente(s). Todos os rejeitos da sala para animais (incluindo tecidos, carcaas e o material das camas contaminadas dos animais, sobra de alimentos e objetos perfurocortantes) devero ser transportados da sala de animais em recipientes rgidos, cobertos e a prova de vazamentos, de acordo com os requisitos locais aplicveis. A superfcie exterior dos recipientes dever ser desinfetada antes de o material ser transportado. Antes da incinerao o contedo dever ser autoclavado. 9. Normas para um manuseio seguro de objetos perfurocortantes devero ser adotadas: a. As seringas e agulhas ou outros instrumentos perfurocortantes devero ficar restritos ao laboratrio e ser usados somente quando no houver uma outra alternativa, como nos casos de injeo parenteral, flebotomia, aspirao de lquidos de animais e de garrafas de diafragma. b. Usar seringas que possuam envoltrio para a agulha, ou sistemas que no utilizam agulhas e outros dispositivos de segurana quando apropriados. c. Recipientes de plstico devero ser substitudos por recipientes de vidro sempre que possvel. 10. A equipe dever lavar as mos aps o manuseio de culturas e animais, aps a remoo das luvas e antes de sair das dependncias dos animais. 11. Um aviso de risco biolgico dever ser colocado na entrada da sala dos animais sempre que houver agentes infecciosos presentes. O aviso dever conter a identificao do(s) agente(s) infeccioso(s), dever relacionar o nome e o telefone da pessoa responsvel e indicar os requisitos
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especiais (por exemplo, necessidade de imunizao e do uso de respiradores) para a entrada na sala dos animais. 12. Um programa de controle de insetos e roedores dever ser adotado (veja o apndice G). B. Prticas Especiais 1. As pessoas que tratam dos animais e as que do suporte ao programa devero receber treinamento adequado sobre os riscos potenciais associados ao trabalho, sobre as precaues necessrias para evitar exposies e os procedimentos de avaliao da exposio. A equipe dever receber cursos anuais de atualizao ou treinamento adicional quando forem necessrias mudanas de normas ou procedimentos. Os registros de todo o treinamento fornecido devero ser mantidos. Em geral, as pessoas expostas a um elevado risco de contaminao ou para quem as infeces possam ser perigosas no sero permitidas dentro da sala para animais, a menos que procedimentos especiais possam eliminar os riscos extras. 2. Somente animais usados para o(s) experimento(s) sero permitidos na sala. 3. Todo o equipamento dever ser adequadamente descontaminado antes de ser removido da sala. 4. Respingos e acidentes que resultem em exposies a materiais infecciosos devero ser imediatamente relatados ao chefe do laboratrio. Avaliao mdica, vigilncia e tratamento devero ser providenciados e registros por escrito devero ser mantidos. C. Equipamentos de Segurana (Barreiras Primrias) 1. Os aventais, uniformes ou jalecos de laboratrio devero ser usados enquanto a pessoa estiver dentro da sala dos animais. O jaleco do laboratrio dever ser removido e mantido dentro da sala. Antes de sair desta, os aventais, uniformes e jalecos devero ser removidos. As luvas devero ser usadas ao manipular animais infectados e quando for inevitvel o contato da pele com os animais infectados.
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2. O equipamento de proteo individual dever ser baseado nas determinaes da avaliao do risco (veja a seo V). Protetores respiratrios e para olhos/rosto devero ser usados por todos que entrarem nas salas de animais que abrigam primatas no-humanos.8 3. Cabines de segurana biolgica, assim como outros dispositivos de conteno fsica e/ou equipamentos de conteno fsica (por exemplo, respiradores, protetores faciais), devero ser usados ao conduzir procedimentos que apresentem um alto potencial de criao de aerossis. Esses procedimentos incluem necropsia de animais infectados, coleta de tecidos, lquidos de animais ou ovos infectados e inoculao intranasal de animais. 4. Quando necessrio, os animais devero ser alojados em equipamentos de conteno primria apropriados s espcies animais. Sistemas com filtros de caixas ou gaiolas devero sempre ser manipulados em cabines de bioconteno animal, recomendadas para roedores, adequadamente projetadas e operadas. D. Instalaes (Barreiras Secundrias) 1. A dependncia para animais dever ser separada das reas que so abertas ao trnsito irrestrito de pessoas dentro do edifcio. 2. O acesso s dependncias dever ser limitado com portas hermeticamente fechadas. As portas externas devero ser fechadas e trancadas automaticamente. As portas das salas dos animais devero se abrir para dentro, ser fechadas automaticamente e mantidas fechadas quando os animais estiverem presentes. As portas internas da sala e da ante-sala devero ser abertas para fora ou deslizar vertical ou horizontalmente. 3. As dependncias devero ser planejadas, construdas e mantidas de tal forma a facilitar a limpeza e a manuteno. As superfcies das paredes, dos pisos e dos tetos devero ser impermeveis gua.
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4. Acessrios internos, como fixao de luzes, dutos de ar e canos de gs e gua devero ser instalados de forma a minimizar reas de superfcie horizontal. 5. As janelas no so indicadas. Qualquer janela dever ser resistente quebra. Em todos os locais possveis, as janelas que porventura existirem devero ser seladas. 6. Se houver sistema de drenagem no piso, os sifes devero sempre conter desinfetante adequado. 7. O ar exaurido dever ser jogado para o lado de fora do prdio, sem recircular por outras salas. A ventilao a ser instalada dever estar de acordo com a ltima edio do Guide for Care and Use of Laboratory Animals. A direo do fluxo de ar na sala dos animais dever ser para dentro. As salas para os animais devero ser mantidas sob presso negativa em relao aos corredores adjuntos. 8. As caixas e gaiolas devero ser lavadas manualmente ou em uma mquina para a lavagem mecnica. A mquina dever ter enxge final com gua a uma temperatura de pelo menos 72C (180F). 9. Dever existir uma autoclave dentro do laboratrio de experimentao animal para descontaminao do lixo infeccioso. 10. A sala de manuteno de animais infectados dever conter uma pia para lavagem das mos, assim como em qualquer outro lugar do laboratrio. 11. A iluminao dever ser adequada para todas as atividades, evitando reflexos e brilhos que possam impedir a viso. Nvel de Biossegurana Animal 3 (NBA 3) O nvel de biossegurana animal 3 envolve as prticas adequadas para o trabalho com animais infectados por agentes nativos ou exticos que apresentem potencial elevado de transmisso por aerossis e risco de provocar doenas fatais ou srias. O NBA-3 baseia-se nos requisitos de prticas padro, procedimentos, equipamentos de conteno e instalaes do NBA-2.
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A. Prticas Padro 1. Alm de normas, procedimentos e protocolos padro para situaes de emergncia estabelecidas pela chefia do laboratrio, normas e procedimentos especiais devero ser desenvolvidos quando necessrio e ser aprovados pelo Comit Institucional de Tratamento e Uso de Animais (IACUC) e pelo Comit Institucional de Biossegurana (IBC). 2. O chefe do laboratrio limitar o acesso s salas dos animais ao menor nmero de pessoas possvel. As pessoas que receberem autorizao de entrada, para trabalhar ou realizar algum tipo de servio, devero ser avisadas em relao ao risco em potencial. 3. Um programa de vigilncia mdica adequado dever ser adotado. Toda a equipe dever ser imunizada e testada contra os agentes manuseados ou potencialmente presentes (por exemplo, vacina de hepatite B, teste cutneo para TB). Quando apropriado, um sistema de vigilncia sorolgica dever ser adotado9. Em geral, as pessoas que podem estar passando por um risco crescente de adquirir a infeco ou para quem as infeces possam ter srias conseqncias no sero permitidas dentro da sala para animais, a menos que procedimentos especiais possam eliminar os riscos extras. 4. Um manual de biossegurana dever ser preparado ou adotado. A equipe do laboratrio dever ser avisada sobre os riscos especiais, ler e seguir as instrues sobre prticas e procedimentos. 5. proibido comer, beber, fumar, manusear lentes de contato e aplicar cosmticos. Os alimentos de uso humano devero ser guardados somente em reas designadas para tal fim e no sero permitidos dentro das salas para animais ou das salas de procedimentos. 6. Todos os procedimentos devero ser realizados cuidadosamente para minimizar a produo de aerossis e borrifos. 7. Os equipamentos e as superfcies de trabalho na sala devero ser rotineiramente descontaminados com desinfetante que possua ao comprovada, aps o trabalho
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com agentes infecciosos e especialmente aps borrifos, derramamentos ou outras contaminaes com materiais infecciosos que tenham ocorrido. 8. Todos os rejeitos da sala de animais (incluindo tecidos, carcaas e o material das camas dos animais contaminados, alimentao que no tenha sido utilizada e objetos perfurocortantes) devero ser transportados da sala dos animais em recipientes rgidos, a prova de vazamentos e cobertos, para serem desprezados de forma adequada e de acordo com os requisitos locais ou institucionais aplicveis. Recomendamos a incinerao. A superfcie externa dos recipientes dever ser desinfetada antes da remoo do material (veja Prticas Especiais n. 3, a seguir). 9. Normas quanto ao manuseio seguro de objetos perfurocortantes devero ser institudas. a. As seringas e agulhas ou outros instrumentos perfurocortantes devero ser restritos ao laboratrio e somente usados quando no houver outra alternativa, como nos casos de injeo parenteral, flebotomia, aspirao de lquidos de animais e de garrafas de diafragma. Os recipientes de plstico devero ser substitudos por recipientes de vidro sempre que possvel. b. As seringas que possuem um envoltrio para a agulha ou sistemas sem agulhas e outros dispositivos de segurana devero ser utilizados quando necessrio. c. Vasilhas plsticas devero ser substitudas por vasilhames de vidro sempre que possvel. 10. A equipe dever lavar as mos aps ter manuseado culturas e animais, depois da remoo das luvas e antes de sair da sala dos animais. 11. Um aviso de risco biolgico dever ser colocado na entrada da sala do laboratrio de experimentao animal quando agentes infecciosos estiverem presentes no local. O aviso de risco dever identificar o(s) agente(s) infeccioso(s) em uso, relacionar o nome e o nmero do telefone da pessoa responsvel e indicar os requisitos es-
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peciais para a entrada na sala dos animais (por exemplo, necessidade de imunizao e do uso de respiradores). 12. Todas as amostras infecciosas devero ser coletadas, etiquetadas, transportadas e processadas de maneira que faam a devida conteno e previnam a transmisso de agentes. 13. As pessoas que cuidam dos animais de laboratrio e as que do suporte ao programa devero receber treinamento adequado sobre os riscos potenciais associados ao trabalho, sobre as precaues necessrias para evitar exposies e os procedimentos de avaliao da exposio. A equipe dever receber cursos anuais de atualizao ou treinamento adicional quando forem necessrias mudanas de normas ou procedimentos. Os registros de todo o treinamento fornecido devero ser mantidos. 14. Um programa de controle de insetos e roedores dever ser adotado. B. Prticas Especiais 1. As caixas e gaiolas dos animais devero passar pela autoclave ou tero que ser descontaminadas antes que o material da cama seja removido e antes de serem lavadas. O equipamento dever ser descontaminado de acordo com as normas locais, estaduais ou federais antes de ser embalado para transporte ou remoo do local, para reparo ou manuteno. 2. Deve-se desenvolver um procedimento para o caso de respingos. Somente o pessoal adequadamente treinado e equipado para trabalhar com materiais infecciosos dever limpar os respingos. Respingos e acidentes que resultem em uma exposio direta com materiais infecciosos devero ser imediatamente relatados ao chefe do laboratrio. Avaliao mdica, vigilncia e tratamento devero ser providenciados e registros por escrito devero ser mantidos. 3. Antes de incinerados, todos os rejeitos provenientes das salas de animais devero passar pela autoclave ou ser tratados com outro mtodo de esterilizao.
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4. Os materiais que no tiverem relao alguma com o experimento (por exemplo, plantas ou animais que no forem ser utilizados no ensaio) no sero permitidos na sala. C. Equipamentos de Segurana (Barreiras Primrias) 1. Uniformes ou roupas especficos devero ser usados pelas pessoas que entrarem na sala de animais. As vestimentas tero toda a frente protegida. As roupas abotoadas na frente no so adequadas. O uniforme dever ser retirado e deixado na sala de animais NBA-3. Antes de sair das salas, as roupas ou os uniformes devero ser removidos e adequadamente acondicionados e descontaminados antes de lavados ou descartados (no caso de uniformes descartveis). 2. O equipamento de proteo individual dever ser usado de acordo com as determinaes da avaliao de riscos. a. O equipamento de proteo individual dever ser usado em todas as atividades envolvendo manipulaes de material infeccioso ou de animais infectados. b. A equipe dever usar luvas ao manusear animais infectados. As luvas devero ser removidas assepticamente e autoclavadas juntamente com outros lixos da sala de animais antes de descartadas. c. Protetores respiratrios e para olhos/rosto devero ser usados por todos que entrarem nas salas de animais. d. Botas, sapatilhas ou pr-ps ou outro tipo de proteo para os ps e banhos desinfetantes para os ps ou lava-ps devero ser avaliados e usados onde forem indicados. 3. Podemos reduzir o risco de formao de aerossis infecciosos advindos da manipulao de animais infectados ou dos materiais utilizados nas camas infectadas, se os animais forem colocados em sistemas de confinamento parcial, como caixas cobertas com filtros e paredes rgidas, colocadas em locais com ventilao direcionada para o interior das mesmas (por exemplo, cabines de fluxo laminar) ou outros sistemas similares de conteno primria.
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4. As cabines de segurana biolgica e outros dispositivos de conteno fsica devero ser usados ao conduzir procedimentos que possuam um alto risco de criao de aerossis. Esses incluem a necropsia de animais infectados, coleta de tecidos, lquidos de animais ou ovos infectados e inoculao intranasal de animais. Em um laboratrio NBA-3, todo o trabalho dever ser realizado em uma barreira primria, caso contrrio as pessoas devero usar protetores respiratrios dentro da sala. D. Instalaes (Barreiras Secundrias) 1. A dependncia para os animais dever ser separada das reas que so abertas ao trnsito irrestrito de pessoas dentro do edifcio. 2. O acesso s dependncias dever ser limitado por meio de portas que se fecham e se trancam automaticamente, com sistema de intertravamento ou leitura tica ou carto magntico. A entrada de pessoal para a sala dos animais dever ser realizada atravs de uma antecmara pressurizada, que dever incluir chuveiro(s) e um vestirio para troca de roupa. Um acesso adicional com porta dupla (air-lock) dever ser construdo ou uma autoclave com porta dupla dever existir no local para o fluxo de suprimentos e rejeitos dentro e fora do laboratrio, respectivamente. As portas para as salas de animais devero se abrir para dentro e se fechar automaticamente. As portas internas da ante-sala dentro de uma sala para animais devero ser abertas para fora ou deslizar vertical ou horizontalmente. 3. As instalaes de um laboratrio de experimentao animal NBA-3 devero ser planejadas, construdas e mantidas de forma que facilitem a limpeza e a manuteno. As superfcies das paredes, dos pisos e dos tetos devero ser impermeveis gua. Selar juntas, fendas ou aberturas em paredes, pisos e tetos. Penetraes das linhas de servio, tais como gua, luz, gs e outras devem ser vedadas. Os espaos entre portas e esquadrias devero
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permitir um selamento para facilitar a descontaminao do ambiente. Cada sala para animais dever conter uma pia perto das portas de sada, para lavagem das mos acionada automaticamente ou sem o uso destas. O sifo da pia dever conter um desinfetante adequado aps o uso da mesma. Acessrios internos, como fixao de luzes, dutos de ar e canos de gs e gua devero ser instalados de forma a minimizar reas de superfcie horizontal. Qualquer janela dever ser resistente quebra. Em todos os locais possveis, as janelas que porventura existirem devero ser vedadas. Se as instalaes para animais possurem janelas que so abertas, estas devero conter telas contra insetos. Se houver sistema de drenagem no piso, este dever sempre conter um desinfetante adequado. A ventilao instalada dever estar de acordo com a ltima edio do Guide for Care and Use of Laboratory Animals. Os sistemas de entrada de ar e exausto devem ser interligados. O sistema cria um fluxo de ar direcionado, retirando o ar contaminado de dentro do laboratrio, jogando-o para fora e ao mesmo tempo retirando o ar das reas limpas e jogando-o para dentro do laboratrio. O ar exaurido no pode recircular em nenhuma outra rea do prdio. Filtrao ou outros tipos de tratamento do ar exaurido podem no ser necessrios, mas devero ser considerados, com base nos requisitos do local, nos microorganismos especficos manipulados e nas condies de uso. O ar exaurido dever ser lanado para longe de reas ocupadas e de entradas de ar ou poder ser filtrado atravs de filtros HEPA. A equipe dever verificar se a direo do ar insuflado (para dentro das reas dos animais) est apropriada. Recomenda-se o uso de monitores visuais que indiquem e confirmem o fluxo de ar direcionado para dentro do recinto. Devemos considerar a instalao de um sistema de controle de HVAC para evitar a pressurizao positiva nas reas onde esto os animais. Alar-
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mes audveis devem ser considerados para evidenciar qualquer falha no sistema de controle HVAC. 9. O ar filtrado pelo HEPA de uma cabine de segurana biolgica classe II poder recircular dentro da sala para animais se a cabine for testada e aprovada anualmente. Quando o ar exaurido das cabines de segurana biolgica classe II for lanado para fora do ambiente de trabalho, atravs do sistema de exausto do edifcio, as cabines devero estar conectadas de maneira que evitem qualquer interferncia no equilbrio do ar das cabines ou do sistema de exausto do edifcio (por exemplo, uma conexo metlica entre o exaustor das cabines e o que se prende ao duto dos exaustores do edifcio). Quando as cabines de segurana biolgica classe III forem utilizadas, elas devero estar conectadas diretamente ao sistema de exausto. Se as cabines de classe III estiverem conectadas ao sistema de insuflao, isso dever ser feito de tal maneira que previna a pressurizao positiva das cabines (veja o apndice A). 10. As caixas e gaiolas devero ser lavadas manualmente ou em uma mquina para a lavagem mecnica. A mquina dever ter enxge final com gua a uma temperatura de pelo menos 72C (180F). 11. Dever existir uma autoclave dentro da sala de experimentao animal NBA-3, onde o risco est contido, para descontaminao de lixo infeccioso antes de ser removido para outras reas do local. 12. Se houver um sistema de vcuo (por exemplo, central ou local), cada conexo de servio dever possuir um sifo contendo desinfetante lquido e um filtro HEPA em linha, colocado o mais prximo possvel de cada ponto de uso ou da vlvula de servio. Os filtros devero ser instalados de tal forma que permitam a descontaminao e a substituio dos mesmos no local. 13. A iluminao dever ser adequada para todas as atividades, evitando reflexos e brilhos que possam impedir a viso. 14. O projeto de edificao e os procedimentos operacionais do laboratrio de experimentao animal NBA-3 devem
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ser documentados. O local dever ser testado em funo do projeto e dos parmetros operacionais, para que se verifique se realmente eles atendem a todas as necessidades antes que comecem a operar. Os locais devero ser checados novamente pelo menos uma vez ao ano. Os procedimentos neles existentes devero ser modificados de acordo com a experincia operacional. 15. Protees adicionais ao meio ambiente (por exemplo, chuveiros para a equipe, filtros HEPA para filtrao do ar exaurido, conteno de outras linhas de servios e proviso da descontaminao dos efluentes) devero ser consideradas, se recomendadas devido s caractersticas dos agentes manipulados, como determinado pela avaliao do risco das condies locais ou por outros regulamentos locais, estaduais ou federais. Nvel de Biossegurana Animal 4 (NBA-4) O nvel de biossegurana animal 4 envolve as prticas adequadas para o trabalho com agentes perigosos ou exticos que exponha o indivduo a um alto risco de infeces que podem ser fatais, alm de apresentarem um potencial elevado de transmisso por aerossis ou de agentes relacionados com um risco de transmisso desconhecido. O NBA-4 baseia-se nos requisitos de prticas, procedimentos, equipamentos de conteno e instalaes padro do NBA-3. Os procedimentos devero ser desenvolvidos no prprio local para direcionar as operaes especficas das cabines de segurana biolgica classe III ou no laboratrio escafandro. A. Prticas Padro 1. Alm de normas, procedimentos e protocolos padro para situaes de emergncia estabelecidos pela chefia do laboratrio, normas e procedimentos especiais devero ser desenvolvidos, quando necessrio, e aprovados pelo Comit Institucional de Tratamento e Uso de Animais (IACUC) e pelo Comit Institucional de Biossegurana (IBC). 2. O chefe do laboratrio dever limitar o acesso s salas dos animais, permitindo o acesso ao menor nmero de pessoas possvel. As pessoas que receberem autorizao de
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entrada, para trabalhar ou realizar algum tipo de servio, devero ser avisadas em relao ao risco em potencial. Um programa de vigilncia mdica adequado dever ser adotado para todas as pessoas que entrarem em um laboratrio NBA-4. Esse programa dever incluir imunizaes, coleta para acompanhamento sorolgico, disponibilidade de aconselhamento ps-exposio e potencial profilaxia.10 Em geral, as pessoas que podem estar passando por um crescente risco de adquirir a infeco ou para quem as infeces possam ser perigosas no sero permitidas dentro da sala para animais, a menos que procedimentos especiais possam eliminar os riscos extras. A avaliao dever ser realizada pelo mdico do trabalho. Um manual de biossegurana especfico para o local dever ser preparado ou adotado. A equipe do laboratrio dever ser avisada sobre os riscos especiais, ler e seguir as instrues sobre prticas e procedimentos. proibido comer, beber, fumar, manusear lentes de contato e aplicar cosmticos. O alimento de uso humano dever ser guardado somente em reas designadas para tal fim e no ser permitido dentro das salas para os animais ou salas de procedimentos. Todos os procedimentos devero ser realizados cuidadosamente para minimizar a produo de aerossis e borrifos. Os equipamentos e as superfcies de trabalho na sala devero ser rotineiramente descontaminados com desinfetante que possua ao comprovada, aps o trabalho com agentes infecciosos e especialmente aps borrifos, derramamentos ou outras contaminaes com materiais infecciosos que tenham ocorrido. Um procedimento para borrifos dever ser desenvolvido e institudo. Somente o pessoal adequadamente treinado e equipado para esse tipo de trabalho dever limpar os borrifos de materiais infecciosos. Borrifos e acidentes que resultem em uma exposio direta com materiais infecciosos devero ser imediatamente relatados ao chefe do laboratrio. Avaliao mdica, vigilncia e tratamento
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devero ser providenciados e registros por escrito devero ser mantidos. 9. Todos os rejeitos provenientes das salas de animais (incluindo tecidos animais, carcaas e material da cama contaminado), outros materiais que sero descartados e as roupas ou uniformes usados que iro ser encaminhados para a lavanderia devero ser esterilizados em uma autoclave de porta dupla (veja B-4, a seguir). Recomendamos a incinerao de materiais descartveis. 10. Normas quanto ao manuseio seguro de objetos perfurocortantes devero ser institudas. a. Seringas, agulhas ou outros instrumentos perfurocortantes devero ser restritos sala dos animais e usados somente quando no houver outra alternativa, como nos casos de injeo parenteral, coleta de sangue ou aspirao de lquidos de animais de laboratrio e de garrafas de diafragma. b. As seringas que possuem um envoltrio para a agulha ou sistemas sem agulhas e outros dispositivos de segurana devero ser utilizados quando necessrio. c. Vasilhas plsticas devero ser substitudas por vasilhames de vidro sempre que possvel. 11. Um aviso de risco biolgico dever ser colocado na entrada da sala do laboratrio de experimentao animal, quando agentes infecciosos estiverem presentes no local. O aviso de risco dever identificar o(s) agente(s) infeccioso(s) em uso, relacionar o nome e o nmero do telefone da pessoa responsvel e indicar os requisitos especiais para a entrada na sala dos animais (por exemplo, necessidade de imunizao e do uso de respiradores). 12. As pessoas que cuidam dos animais de laboratrio e as que do suporte ao programa devero receber treinamento adequado sobre os riscos potenciais associados ao trabalho, sobre as precaues necessrias para evitar exposies e os procedimentos de avaliao da exposio. A equipe dever receber cursos anuais de atualizao ou treinamento adicional quando forem necessrias mudan84
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as de normas ou procedimentos. Os registros de todo o treinamento fornecido devero ser mantidos. 13. As caixas e gaiolas dos animais devero passar pela autoclave ou tero que ser descontaminadas antes que o material da cama seja removido e antes de lavadas. Os equipamentos e as superfcies de trabalho devero ser rotineiramente descontaminados com desinfetante que possua ao comprovada, aps o trabalho com materiais infecciosos e especialmente depois de borrifos, derramamentos ou outras contaminaes com materiais infecciosos. Os equipamentos devero ser descontaminados de acordo com qualquer regulamento local, estadual ou federal antes de ser removido do local para reparo ou manuteno. 14. As pessoas responsveis pelo trabalho com animais infectados devero trabalhar em pares. Baseados na avaliao dos riscos (veja a seo V), procedimentos devero ser adotados, tais como o uso de caixas ou gaiolas de conteno, realizao de trabalho somente com animais anestesiados ou outros que visem a reduzir as possveis exposies do trabalhador. 15. Os materiais no relacionados ao ensaio (por exemplo, plantas e animais no utilizados) no sero permitidos no local. B. Prticas Especiais 1. Medidas adicionais devero ser efetivadas para controle do acesso (por exemplo, um sistema de guarda durante 24 horas para entrada e sada de pessoas). A equipe dever entrar ou sair do local somente atravs do vestirio e das salas de banhos. Cada vez que sair do local, a equipe dever tomar banho. A entrada ou a sada de pessoal por antecmara pressurizada somente dever ocorrer em situaes de emergncia. 2. Em uma operao na cabine de segurana biolgica classe III, a roupa do pessoal dever ser retirada no vestirio externo e deixada l mesmo. O traje laboratorial completo, incluindo peas ntimas, calas e camisas ou macaces,
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sapatos e luvas, dever ser providenciado e usado pelo pessoal. Na sada, as pessoas devero retirar os trajes laboratoriais no vestirio interno antes de entrar na sala de banho. A roupa suja (usada) dever ser esterilizada na autoclave. Nos procedimentos operacionais em laboratrios NBA4, dever ser necessria a mudana completa de roupa. Um banho ser necessrio aps a remoo da roupa descontaminada. As roupas sujas do laboratrio devero ser autoclavadas antes de lavadas. Os materiais e suprimentos que forem introduzidos no laboratrio devero passar por uma autoclave de porta dupla ou por uma cmara de fumigao. Depois que a porta externa estiver trancada, as pessoas dentro do laboratrio devero abrir a porta interna e retirar os materiais. As portas da autoclave e da cmara de fumigao devero ser interligadas de maneira que a porta externa s seja aberta depois que o ciclo de esterilizao tenha sido concludo ou depois que a cmara de fumigao tenha sido descontaminada. Um sistema para notificao de acidentes, incidentes, exposies e absentesmo deve ser estabelecido, bem como um outro sistema para a vigilncia mdica de doenas potencialmente associadas ao trabalho em laboratrio. Um aspecto essencial para essa vigilncia/notificao a disponibilidade de um local para quarentena, isolamento e atendimento mdico de pessoas com suspeitas de contaminao. As amostras sorolgicas coletadas devero ser analisadas periodicamente. Os resultados devero ser comunicados aos participantes.
C. Equipamentos de Segurana (Barreiras Primrias) 1. Os animais infectados com microorganismos da classe de risco 4 devero ser alojados dentro de cabines de segurana biolgica classe III em um laboratrio NBA-4. Em um laboratrio NBA-4 escafandro, toda a equipe dever vestir macaces com presso positiva e ventilados com
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um sistema de suporte de vida. Os animais infectados devero ser alojados em um sistema de conteno parcial (como em caixas abertas colocadas em locais ventilados, caixas de paredes slidas, possuindo um sistema de ventilao e exausto feitas atravs de filtros e abertas em fluxos laminares ou outros sistemas de conteno primria equivalentes). 2. O uso de materiais descartveis que no requerem limpeza, incluindo caixas e gaiolas de animais, dever ser levado em considerao. Esses materiais descartveis devero passar pela autoclave na sada do laboratrio e depois incinerados. D. Instalaes (Barreiras Secundrias) Os laboratrios NBA-4 podero ser includos como uma parte integrante dos laboratrios NBA-4 de cabine ou aos laboratrios NBA-4 de escafandro, como descrito na seo III deste documento. Os requisitos para instalao descritos na seo laboratrio NB-4 devero ser utilizados juntamente com o uso das caixas descritas na seo de equipamentos.
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Tabela 2. Resumo dos nveis de biossegurana recomendados para as atividades nas quais animais vertebrados infectados naturalmente ou experimentalmente so utilizados
BSL 1 Agentes Desconhecidos por causarem doenas em adultos humanos sadios. Equipamentos de Instalaes Segurana (Barreiras Secundrias) (Barreiras Primrias) Cuidados com o animal e as Cuidados normais solicitados Instalao padro para animais: -nenhuma recirculao do ar prticas padro de gerencia- de cada espcie. mento, incluindo prograexaurido; mas de vigilncia mdica -recomendao de fluxo de ar adequados. direcionado; -recomendao de pia para lavagem das mos. Prticas de NBA-1 mais: Equipamento de NBA-1 mais Instalaes de NBA-1 mais: -acesso limitado; barreiras primrias: equipa- -autoclave disposio; mento de conteno adequado -pia para lavagem das mos dentro -avisos de risco; -precauo com objetos para espcies animais; PPES: da sala de animais; perfurocortantes; jalecos, luvas, proteo facial - uso de lavagem mecnica das -manual de biossegurana; e respiradores quando ne- caixas e gaiolas. -descontaminao de todo cessrios. o lixo infeccioso e de caixas e gaiolas de animais antes da lavagem. Prticas de NB-2 mais: Prticas de NBA-2 mais: Equipamento de NBA-2 mais: -acesso controlado; -acesso controlado; -equipamento de conteno para -descontaminao de todo -descontaminao das roupas manuteno dos animais; -cabines SB de classe I ou II para o lixo; antes de serem lavadas; manipulaes (inoculao, ne-descontaminao da roupa -descontaminao das caixas usada no laboratrio antes e gaiolas antes de o material cropsia) que possam criar aerosde ser lavada; da cama ser removido; sis infecciosos. PPEs: proteo respiratria adequada. -amostra sorolgica. -lavagem dos ps com desinfetante. Instalaes de NBA-2 mais: -separao fsica dos corredores de acesso; -fechamento automtico, porta dupla de acesso; -linhas de penetrao seladas; -janelas vedadas; -autoclave presente no local. Prticas de NBA-3 mais: Equipamento de NBA-3 mais: Instalaes de NBA-3 mais: -entrada atravs do vesti - equipamento de mxima -edifcio separado ou rea isorio para troca de roupa conteno (CSB classe III ou lada; onde a roupa pessoal rede conteno parcial junto -sistemas de insuflao e exausto, movida e a do laboratrio, com macaco pressurizado vcuo e sistemas de descontavestida. Banho na sada; positivamente com ar) usado minao; -todos os lixos devero ser para todas as atividades e os -outros requisitos enfatizados descontaminados antes da procedimentos. no texto. remoo do local. Prticas
Associados com doenas humanas. Risco: exposio cutnea, ingesto, exposio da membrana mucosa.
Agentes nativos ou exticos com elevado potencial de transmisso por aerossis; doenas que podem causar srios danos sade.
Agentes exticos ou perigosos que imponham alto risco de doena fatal, transmisso por aerossis ou relacionada a agentes com risco de transmisso desconhecido.
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Avaliao dos Riscos
A palavra risco indica a probabilidade que um dano, um ferimento ou uma doena ocorra. No contexto dos laboratrios biomdicos e de microbiologia, a avaliao do risco se concentra primariamente na preveno de infeces relacionadas aos laboratrios. Ao enderear atividades laboratoriais que envolvam materiais infecciosos ou potencialmente infecciosos, a avaliao do risco um exerccio essencial e produtivo. Ele auxilia a designar os nveis de biossegurana (instalaes, equipamentos e prticas) que reduziro, para um risco mnimo, a exposio de trabalhadores e do meio ambiente a um agente perigoso. A inteno desta seo fornecer um guia e estabelecer parmetros para a seleo do apropriado nvel de biossegurana. A avaliao do risco pode ser qualitativa ou quantitativa. Na presena de riscos conhecidos (por exemplo, nveis residuais de gs de formaldedo depois da descontaminao do laboratrio), a avaliao quantitativa poder ser realizada. Mas, em muitos casos, os dados quantitativos estaro incompletos ou ausentes (por exemplo, a investigao de um agente desconhecido ou de uma amostra sem rtulo). Os tipos, os subtipos e as variantes dos agentes infecciosos envolvendo vetores diferentes ou raros, a dificuldade de avaliar as medidas de um potencial de amplificao do agente e as singulares consideraes dos recombinantes genticos so alguns dos vrios desafios na conduo segura de um laboratrio. Diante de tal complexidade, nem sempre os mtodos de amostragem quantitativa significativos esto nossa disposio. Dessa forma, o processo de avaliao do risco para o trabalho com
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avaliao dos riscos
materiais biolgicos perigosos pode no depender de um algoritmo prescrito. O diretor do laboratrio ou o principal pesquisador dever ser o responsvel pela avaliao dos riscos que implique no estabelecimento de nveis de biossegurana para o trabalho. Isso dever ser realizado em colaborao com o Institutional Biosafety Committee (e/ou outros profissionais ou instituies, se necessrio) para assegurar a obedincia s normas e regras estabelecidas. Ao se realizar a avaliao do risco qualitativo, todos os fatores de risco devero ser identificados e explorados. Informaes relacionadas devero estar disponveis na forma de um manual. Consultas s Normas do NIH de DNA Recombinante, Normas de Biossegurana em Laboratrios Canadenses e Normas de Segurana da Organizao Mundial da Sade devero ser consideradas. Em alguns casos, devemos confiar nas fontes de informaes, como os dados de campo de um expert no assunto. Essa informao dever ser interpretada pela sua tendncia em aumentar ou diminuir o risco de uma infeco adquirida em laboratrio.1 O desafio da avaliao do risco se encontra naqueles casos em que uma informao completa sobre esses fatores no est nossa disposio. Uma abordagem conservadora geralmente aconselhada quando as informaes forem insuficientes, forando a um julgamento subjetivo. As Precaues Universais devero sempre ser recomendadas. Os fatores de interesse em uma avaliao dos riscos incluem: A patogenicidade do agente infeccioso ou suspeito, incluindo a incidncia e a gravidade da doena (por exemplo, morbidade mdia contra uma mortalidade alta, doena aguda versus doena crnica). Quanto mais grave a potencialidade da doena adquirida, maior ser o risco. Por exemplo, o Sthaphilococcus aureus raramente provoca uma doena grave ou fatal em um indivduo contaminado em um laboratrio e est relegado ao NB-2. J vrus como o ebola, Marburg e da febre de Lassa, que provocam doenas com alta taxa de mortalidade, para as quais no existem vacinas ou tratamentos, so trabalhadas em um
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NB-4. Porm, a gravidade da doena precisa ser amenizada por outros fatores. O trabalho com um vrus humano de imunodeficincia (HIV) e com o vrus da hepatite B tambm feito em um NB-2, embora eles possam causar uma doena potencialmente fatal. Mas esses vrus no so transmitidos por meio de aerossis, e a incidncia de uma infeco adquirida em laboratrio extremamente baixa para o HIV. No caso da hepatite B, j existe uma vacina eficaz contra esta patologia. A via de transmisso (por exemplo, parenteral, via area ou por ingesto) de agentes isolados recentemente pode no estar definitivamente estabelecida. Os agentes que podem ser transmitidos via aerossol tm provocado grande parte das infeces laboratoriais. Ao planejar o trabalho com um agente relativamente no caracterizado e com um modo de transmisso desconhecido, o mais seguro considerar o potencial de transmisso por via aerossol. Quanto maior o potencial do aerossol, maior o risco. A estabilidade do agente um aspecto que envolve no somente a infectividade por aerossis (por exemplo, por bactrias formadoras de esporos), mas tambm a capacidade do agente de sobreviver por um tempo extra no meio ambiente. Fatores como a dissecao, a exposio luz solar ou ultravioleta ou a exposio a desinfetantes qumicos devero ser considerados. A dose infecciosa do agente um outro fator a ser considerado. A dose infecciosa pode variar de uma a milhares de unidades. A natureza complexa da interao dos microorganismos e do hospedeiro apresenta um desafio significativo at mesmo para o mais saudvel e imunizado trabalhador de laboratrio, podendo impor um srio risco queles com menos resistncia. O grau de imunizao do trabalhador do laboratrio est diretamente relacionado sua susceptibilidade doena provocada por um agente infeccioso. A concentrao (nmero de organismos infecciosos por unidade de volume) ser importante na determinao do
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risco. Essa determinao dever considerar o meio que contm o organismo (por exemplo, tecido slido, sangue viscoso, escarro ou meio lquido) e a atividade laboratorial planejada (por exemplo, amplificao, sonificao ou centrifugao do agente). O volume do material concentrado a ser manipulado tambm importante. Na maioria dos casos, os fatores de risco aumentam com o aumento do volume de trabalho de microorganismos de alta titulao, uma vez que um manuseio adicional dos materiais freqentemente solicitado. A origem do material potencialmente infeccioso tambm fundamental para a avaliao dos riscos. A palavra origem pode se referir localizao geogrfica (por exemplo, domstico ou originrio de outros pases), hospedeiro (por exemplo, animal ou ser humano infectado ou no) ou natureza da fonte (por exemplo, potencialmente zoontica ou associada a um outro surto de doena). Sob outro ngulo, esse fator pode tambm levar em considerao o potencial dos agentes que ameaam as aves e os animais de criao. A disponibilidade de dados gerados por estudos animais, na falta de dados humanos, poder fornecer informaes teis para uma avaliao do risco. As informaes sobre a patogenicidade, a infectividade e a via de transmisso em animais podem proporcionar informaes valiosas. Porm, sempre devemos tomar cuidado em traduzir dados de uma espcie animal para os de outras espcies. A disponibilidade de uma profilaxia eficaz estabelecida ou de uma interveno teraputica outro fator importante a ser considerado. A forma mais comum de profilaxia a imunizao com uma vacina eficiente. A avaliao do risco inclui a determinao da disponibilidade de imunizaes eficazes. Em alguns casos, a imunizao pode afetar o nvel de biossegurana (por exemplo, o vrus Junin do grupo NB-4 pode ser trabalhado no NB-3 por um trabalhador imunizado). A imunizao tambm pode ser passiva (por exemplo, o uso de uma imunoglobulina sorolgica nas exposies ao HBV). Apesar de importante,
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a imunizao somente servir como uma camada adicional de proteo mediante os controles de engenharia, as prticas e os procedimentos padro e o uso de equipamentos de proteo individual. Ocasionalmente, a imunizao ou a interveno teraputica (terapia com antibiticos ou antiviral) pode ser particularmente importante nas condies de campo. A oferta de imunizaes parte do gerenciamento do risco. A vigilncia mdica assegura que as normas de segurana decididas realmente produzam os resultados positivos esperados. A vigilncia mdica tambm parte da administrao do risco. Podemos incluir o banco de soro, o monitoramento da condio de sade do trabalhador e a participao em um gerenciamento ps-exposio. A avaliao do risco tambm pode incluir uma avaliao da experincia e do nvel de capacitao das pessoas expostas a riscos, como os laboratoristas e as pessoas que cuidam dos animais, da limpeza e da manuteno (veja a seo III). Uma educao adicional tambm pode ser necessria para garantir a segurana das pessoas que trabalham em cada um dos nveis de biossegurana. Os agentes infecciosos cujo risco avaliado freqentemente sero classificados em uma destas categorias: Materiais contendo agentes infecciosos conhecidos. As caractersticas da maioria dos agentes infecciosos so conhecidas. As informaes teis para a avaliao do risco podem ser obtidas com pesquisas laboratoriais, vigilncia da doena e estudos epidemiolgicos. Os agentes infecciosos conhecidos por causarem infeces associadas a laboratrio esto includos no resumo das caractersticas dos agentes, neste volume (veja a seo VII). Outras fontes incluem o manual do American Public Health A ssociation, Control of Communicable Diseases.2 Os artigos liter rios sobre infeces adquiridas em laboratrio tambm podero ser teis.3, 4, 5, 6, 7, 8 Materiais contendo agentes infecciosos desconhecidos. O desafio aqui estabelecer o nvel de biossegurana mais adequado, tendo em mos somente informaes limitadas. Com
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freqncia essas sero amostras clnicas. Algumas perguntas que podero auxili-lo em uma avaliao de risco so as seguintes: 1. Por que um agente infeccioso considerado suspeito? 2. Quais so os dados epidemiolgicos disponveis? Qual via de infeco indicada? Qual o ndice de morbidade ou de mortalidade associado ao agente? 3. Quais so os dados mdicos disponveis? As respostas a essas perguntas podem identificar o agente ou o agente substituto cujas caractersticas so encontradas no resumo das caractersticas dos agentes e podero ser utilizadas para determinar um nvel de biossegurana. Na ausncia de dados concretos, recomenda-se uma abordagem conservadora. Materiais contendo molculas de DNA recombinantes. Essa categoria de agentes inclui os microorganismos que foram geneticamente modificados por tecnologias do DNA recombinante. Essas tecnologias continuam a ser desenvolvidas rapidamente. Os projetos experimentais designados para extrair novos vrus, bactrias, levedo e outros microorganismos recombinantes se tornaram comuns nos dias de hoje. muito provvel que futuras aplicaes da tecnologia do DNA recombinante produziro novos vrus hbridos. A publicao do National Institutes of Health chamada Guidelines for Research Involving Recombinant DNA Molecules9 um excelente ponto de referncia para a seleo de um nvel de biossegurana adequado para o trabalho que envolva microorganismos recombinantes. Ao selecionar um nvel de biossegurana apropriado para este trabalho, talvez o maior desafio seja avaliar o aumento do risco biolgico associado a uma modificao gentica em particular. Em grande parte dos casos, a seleo de um nvel de biossegurana adequado comea ao se estabelecer a classificao dos vrus no modificados. Entre os vrus recombinantes, agora rotineiramente desenvolvidos, esto o adenovrus, alfavrus, retrovrus, vrus vacnia, herpesvrus e outros designados para expressar os produtos de genes heterlogos. Porm, a natureza da modificao gentica e a quantidade de vrus devero ser cuidadosamente considerados
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ao selecionar um nvel de biossegurana adequado para o trabalho com um vrus recombinante. Dentre os pontos a serem considerados no trabalho com os microorganismos recombinantes esto: O gene inserido codifica uma toxina conhecida ou uma toxina relativamente descaracterizada? A modificao possui um potencial para alterar o alcance do hospedeiro ou o tropismo celular do vrus? A modificao possui um potencial para aumentar a capacidade de replicao do vrus? O gene inserido codifica um oncogene conhecido? O gene inserido possui potencial para alterar o ciclo celular? O DNA viral se integra ao genoma do hospedeiro? Qual a probabilidade de que cepas de vrus competentes replicados sejam geradas? A lista de perguntas no significa que seja uma questo inclusiva. Pelo contrrio, elas servem como um exemplo de informao necessrio para julgar se um nvel de biossegurana maior necessrio para o trabalho com microorganismos geneticamente modificados. J que em muitos casos as respostas para essas perguntas no sero definitivas, importante que a empresa possua um Comit Institucional de Biossegurana constitudo e informado, como enfatizado pelos estatutos do NIH, para verificar a avaliao do risco. Materiais que possam conter ou no agentes infecciosos desconhecidos. Na ausncia de informaes que possam sugerir a infectividade do agente, deve-se considerar as precaues universais. Estudos Animais. Estudos laboratoriais que envolvam animais podero apresentar muitos tipos diferentes de riscos fsicos, biolgicos e ao meio ambiente. Os riscos especficos presentes em qualquer dependncia para animais em particular so nicos, variando de acordo com as espcies envolvidas e com a natureza da pesquisa desenvolvida. A avaliao do risco quanto ao perigo biolgico dever se concentrar particularmente no potencial das
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instalaes animais para uma aumentada exposio de patgenos humanos e aos agentes zoonticos. Os prprios animais podem introduzir novos perigos biolgicos nas instalaes. As infeces latentes so mais comuns em animais capturados no campo ou em animais vindos de populaes no selecionadas. Por exemplo, o vrus-b do macaco apresenta um risco latente aos indivduos que lidam com smios. As vias de transmisso animais devem tambm ser consideradas na avaliao do risco. Os animais que transmitem vrus por disseminao respiratria ou disseminao na urina ou nas fezes so muito mais perigosos do que aqueles que no o fazem. As pessoas que lidam com animais experimentais em locais de pesquisas e trabalham com agentes infecciosos apresentam um risco muito maior de exposio devido s mordidas, aos arranhes e aos aerossis provocados por eles. A seo IV descreve prticas e instalaes aplicveis ao trabalho de animais infectados por agentes listados nos nveis de biossegurana de 1-4.1 Outras aplicaes. O processo de avaliao dos riscos descritos tambm se aplica s operaes laboratoriais que no envolvam o uso de agentes primrios de doenas humanas. verdade que os estudos microbiolgicos de patgenos especficos de hospedeiros animais, do solo, da gua, dos alimentos, das raes e de outros materiais naturais ou industrializados impem riscos consideravelmente menores para os laboratoristas. Ainda assim, os microbiologistas e outros cientistas que trabalhem com esses materiais podem achar de grande valor tais prticas, equipamentos de conteno e recomendaes para as instalaes descritas neste livro, para o desenvolvimento de padres operacionais que atendam a todas as necessidades de suas prprias avaliaes.
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SEO VI
Nveis de Biossegurana Recomendados para Agentes Infecciosos e Animais Infectados
A seleo de um nvel de biossegurana adequado para o trabalho envolvendo um agente ou um estudo animal em particular depende de um nmero de fatores (veja a seo V, Avaliao dos Riscos). Alguns desses fatores mais importantes so a virulncia, a patogenicidade, a estabilidade biolgica, a rota de disseminao e a transmissibilidade do agente; a natureza ou a funo do laboratrio; os procedimentos e as manipulaes envolvendo o agente; a endemicidade do agente e a disponibilidade de vacinas ou de medidas teraputicas eficazes. A relao sumria dos agentes apresentada nesta seo proporciona um guia para a seleo dos nveis de biossegurana adequados. Tambm se encontram relacionadas nesta seo as informaes especficas sobre riscos laboratoriais relacionados com um agente em particular e as recomendaes sobre uma conduta segura de procedimentos que possam reduzir significativamente o risco de doenas associadas ao trabalho laboratorial. As relaes sumrias dos agentes incluem um ou mais dos seguintes critrios: o agente um fator de risco comprovado para os trabalhadores que manipulam materiais infecciosos (por exemplo, vrus da hepatite B, M. tuberculosis); o potencial para as infeces associadas ao trabalho laboratorial elevado mesmo na falta de um documento prvio das infeces adquiridas em laboratrio (por exemplo, arbovrus exticos) ou as conseqncias da infeco sero graves. As recomendaes para o uso de vacinas e toxides esto includas nas relaes sumrias dos agentes, assim como os produtos licenciados disponveis, alm dos produtos em investigao pelo Investigational New Drug (IND) (veja o apndice B, Imunoprofila-
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nveis de biossegurana recomendados para agentes infecciosos e animais infectados
xia). Quando aplicvel, as recomendaes para o uso desses produtos sero baseadas nas recomendaes do Public Health Service Advisory Committee on Immunization Practice e so especficas s pessoas que esto expostas a esse tipo de risco, que trabalham em laboratrio ou as que tm de entrar em reas laboratoriais. Essas recomendaes especficas de maneira alguma devero impedir o uso rotineiro desses produtos, como o toxide tetnico-diftrico, a vacina contra plio, a vacina contra influenza e outras, porque o risco potencial de exposio da comunidade independe de quaisquer riscos laboratoriais. Precaues adequadas devero ser tomadas na administrao de vacinas atenuadas de vrus vivo em indivduos com sistema auto-imune alterado ou com outra condio mdica (por exemplo, gravidez), nos quais uma infeco viral pode resultar em conseqncias adversas. As avaliaes dos riscos e os nveis de biossegurana recomendados nas relaes sumrias dos agentes referem-se a uma populao de indivduos imunocompetentes. As pessoas com a imunocompetncia alterada podero ser expostas gradativamente aos riscos. A imunodeficincia pode ser hereditria, congnita ou induzida por um nmero de doenas neoplsicas ou infecciosas, por terapia ou por radiao. O risco de se tornar infectado ou a conseqncia de uma infeco podem tambm ser influenciados por fatores, tais como: idade, sexo, raa, gravidez, cirurgias (por exemplo, esplenectomia, gastrostomia), predisposio a doenas (por exemplo, diabetes, lpus eritematoso) ou uma funo fisiolgica alterada. Estas e outras variveis devero ser consideradas na aplicao das avaliaes dos riscos s atividades especficas dos indivduos selecionados. O nvel de biossegurana escolhido para um agente baseado nas atividades associadas ao crescimento e manipulao das quantidades e concentraes dos agentes infecciosos requeridos para realizar a identificao ou a tipagem. Se as atividades com os materiais infecciosos provocarem um menor risco aos trabalhadores do que aquelas atividades associadas com a manipulao de culturas, recomenda-se um nvel de biossegurana menor. Por outro lado, se as atividades envolverem grandes volumes e/ou altas concentraes (quantidades de produo) ou se as manipulaes geralmente
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provocarem a formao de aerossis ou que sejam intrinsecamente perigosas, podem ser indicadas precaues individuais especficas ou se elevar os nveis de conteno primria a secundria. O termo quantidades de produo se refere a grandes volumes ou altas concentraes de agentes infecciosos considerados volumosos em relao quelas usadas para a identificao e a tipagem. A propagao e a concentrao dos agentes infecciosos, como ocorre na fermentao em grande escala, na produo de antgenos e vacinas e em inmeras atividades comerciais e de pesquisa, lidam claramente com massas significativas de agentes infecciosos que so considerados quantidades de produo. Porm, em termos de um risco potencialmente aumentado em funo da massa de agentes infecciosos, impossvel definir como quantidades de produo os volumes ou as concentraes finitas de qualquer agente. Portanto, cabe ao diretor do laboratrio realizar uma avaliao das atividades conduzidas e das prticas selecionadas, dos equipamentos de conteno e das instalaes apropriadas ao risco, independente do volume ou da concentrao do agente envolvido. Haver casos em que o diretor do laboratrio ter que selecionar um nvel de biossegurana maior que o recomendado. Por exemplo, um nvel de biossegurana maior poder ser indicado pela natureza nica da atividade proposta (por exemplo, a necessidade de uma conteno especial para aerossis gerados experimentalmente para estudos de inalao) ou pela proximidade das reas de risco do laboratrio (por exemplo, um laboratrio de diagnsticos localizado prximo s reas de atendimento de pessoas). Da mesma forma, um nvel de biossegurana recomendado pode ser adaptado para compensar a ausncia de certas protees recomendadas. Por exemplo, nas situaes em que recomendado o nvel de biossegurana 3, pode-se conseguir um nvel satisfatrio de proteo nas operaes rotineiras ou repetitivas (por exemplo, procedimentos para diagnstico envolvendo a reproduo de um agente para identificao, tipagem e teste de susceptibilidade) nos laboratrios onde as caractersticas construtivas satisfaam as recomendaes para o nvel de biossegurana 2, providos das boas prticas microbiolgicas, de prticas especiais e de equipamentos de segurana para que o nvel de biossegurana 3 seja rigorosamente seguido.
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Um exemplo envolve o trabalho com o vrus da imunodeficin cia humana (HIV). O trabalho de rotina para o diagnstico do vrus com amostras clnicas pode ser feito com segurana em um nvel de biossegurana 2, usando as prticas e os procedimentos do nvel de biossegurana 2. O trabalho de pesquisa (incluindo co-cultivo, estudos de replicao do vrus ou manipulaes envolvendo o vrus concentrado) pode ser feito em instalaes NB-2, usando as prticas e os procedimentos de NB-3. As atividades de produo de vrus, incluindo as concentraes virais, requerem instalaes NB-3 e o uso de prticas e procedimentos de NB-3 (veja o resumo dos agentes). A deciso de adaptar as recomendaes do nvel de biossegurana 3, como foi feito no exemplo citado, dever ser tomada somente pelo diretor do laboratrio. Essa adaptao, porm, no indicada para operaes ou atividades de produo de agentes em que os procedimentos freqentemente so mudados. O diretor do laboratrio tambm dever ter uma ateno especial ao estabelecer procedimentos de segurana para os materiais que possam conter um agente suspeito. Por exemplo, soro de origem humana pode conter vrus da hepatite B e, dessa forma, todo o sangue ou os fluidos derivados do sangue devero ser manuseados sob condies que evitem ao mximo a exposio cutnea, da membrana mucosa ou parenteral do pessoal. O escarro enviado ao laboratrio para o ensaio do bacilo da tuberculose dever ser manipulado sob condies que evitem a formao de aerossis durante a manipulao dos materiais clnicos ou das culturas. Os agentes infecciosos que atendam aos critrios anteriormente estabelecidos esto relacionados pela categoria do agente na seo VII. Para usar esses sumrios, primeiro localize o agente na lista pela categoria adequada ao mesmo. Segundo, utilize as prticas, os equipamentos de segurana e o tipo de instalao recomendado nas relaes dos agentes, como descrito na seo VII para o trabalho com materiais clnicos, culturas, agentes infecciosos ou animais infectados. O diretor do laboratrio tambm ser o responsvel pela avaliao dos riscos e pela utilizao adequada das prticas, dos equipamentos de conteno e das instalaes para os agentes no includos na lista dos agentes.
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Relao dos Agentes
Seo VII-A: Agentes Bacterianos

Agente: Bacillus anthracis Numerosos casos de carbnculo adquiridos em laboratrio, que acontecem primariamente em locais onde so conduzidas pesquisas do antraz, tm sido relatados.1, 2 Nenhum caso de antraz que no esteja associado a laboratrio foi relatado nos Estados Unidos desde o final dos anos 50, quando a vacina contra o carbnculo foi introduzida. Todo trabalho com o B. anthracis requer consideraes de segurana especiais devido ao seu uso potencial no terrorismo biolgico. Os animais naturalmente e experimentalmente infectados oferecem um risco potencial equipe do laboratrio e aos tratadores de animais. Riscos em Laboratrio: O agente pode estar presente no sangue, em exudatos de leso de pele, no lquido cerebroespinhal, no lquido pleural, no escarro e raramente na urina e nas fezes. O contato direto e indireto da pele intacta e rachada com culturas e superfcies laboratoriais contaminadas, inoculaes parenterais por acidente, e raramente por aerossis infecciosos, considerado como risco primrio para os trabalhadores de um laboratrio. Precaues Recomendadas: As prticas, os equipamentos de conteno e as dependncias do nvel de biossegurana 2 devero ser os procedimentos indicados para as atividades que utilizem materiais clnicos e quantidades de culturas infecciosas para diagnstico. As prticas, os equipamentos de conteno e as dependncias do nvel de biossegurana animal 2 so os recomenda-
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dos para estudos que utilizem roedores de laboratrio infectados experimentalmente. J as prticas, os equipamentos de conteno e as dependncias do nvel de biossegurana 3 so indicados para o trabalho que envolva quantidades ou concentraes de produo de culturas e para as atividades com um alto potencial para a produo de aerossis. Observao: Uma vacina licenciada est disponvel por meio dos Centers for Disease Control and Prevention. Porm, a imunizao de toda a equipe no recomendada a no ser que o freqente trabalho com amostras clnicas ou culturas para diagnstico esteja previsto (por exemplo, laboratrio de diagnstico de doena animal). Nessas dependncias, a imunizao desse agente pode ser obtida junto ao CDC. J para a exportao, ligue para o Department of Commerce. necessrio um registro do laboratrio com o CDC antes de enviar ou receber esse agente. Uma licena para a importao ou o transporte domstico pode ser obtida com a USDA/APHIS/VS. Agente: Bordetella pertussis O Bordetella pertussis, um patgeno presente no sistema respiratrio humano e de distribuio mundial, o agente causador da coqueluche. A doena ocorre tipicamente na infncia; entretanto, o agente tem sido cada dia mais associado com a doena em adultos.3, 4, 5 Vrios surtos em trabalhadores da rea da sade foram relatados na literatura.6, 7 Adolescentes e adultos com doena atpica ou sem diagnstico podem servir como reservatrios da infeco e podem transmitir o patgeno para recm-nascidos e crianas.8 Oito casos de infeco em adultos pelo B. pertussis foram documentados em um instituto de grandes pesquisas. Os indivduos infectados no trabalhavam diretamente com o microorganismo, mas possuam um acesso aos espaos em comum de um laboratrio onde o agente era manipulado. Um caso de transmisso secundria para uma pessoa da famlia foi tambm documentado.9 Um incidente semelhante ocorreu em uma grande universidade do meio-oeste dos Estados Unidos, que resultou em dois casos documentados de infeco adquirida em laboratrio e um caso documentado de transmisso secundria.10 Outras infeces com o B. pertussis adquiridas em laboratrio foram relatadas, assim como
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a transmisso de adulto para adulto no local de trabalho.11, 12 As infeces adquiridas em laboratrio resultantes de manipulao de amostras clnicas ou substncias isoladas no foram relatadas. A incidncia dessa infeco disseminada no ar influenciada pela intimidade e freqncia da exposio de indivduos susceptveis. Riscos em Laboratrio: O agente pode estar presente em secrees respiratrias, mas no encontrado no sangue ou tecido. Uma vez que o modo de transmisso via respiratria, quanto maior a gerao de aerossis, durante a manipulao de culturas ou de suspenses concentradas do agente, maior ser o risco. Precaues Recomendadas: As prticas, os equipamentos de conteno e as dependncias do nvel de biossegurana 2 so recomendados para todas as atividades que envolvam a manipulao de materiais ou culturas conhecida ou potencialmente infecciosas. J o nvel de biossegurana animal 2 dever ser usado para o alojamento de animais. Os dispositivos e equipamentos de conteno primria (por exemplo, cabines de segurana biolgica, conchas de segurana para centrfugas ou centrfugas de segurana especialmente projetadas) devero ser utilizados para as atividades que provavelmente iro causar a formao de aerossis potencialmente infecciosos. As prticas, os procedimentos e as dependncias do nvel de biossegurana 3 so indicados para produes em grande escala. Observao: As vacinas contra a coqueluche esto disponveis, mas no so atualmente recomendadas para uso em adultos. Sugere-se ao leitor consultar as recomendaes atuais do Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP), publicada no CDC Morbidity and Mortality Weekly Report (MMWR), para a vacinao de adultos contra a coqueluche. Transferncia do Agente: A licena de importao desse agente dever ser obtida junto ao CDC. Agente: Brucella (B. abortus, B. canis, B. melitensis, B. suis) A brucelose continua sendo a infeco bacteriana associada a laboratrio mais comumente relatada.13, 14, 15 O B. abortus, o B. canis, o B. melitensis e o B. suis tm provocado vrias doenas em tra-
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balhadores de laboratrios.16, 17, 18 A hipersensibilidade aos antgenos da Brucella tambm prejudicial equipe do laboratrio. Casos ocasionais tm sido atribudos exposio a animais infectados experimentalmente ou naturalmente e aos seus tecidos. Riscos em Laboratrio: O agente pode estar presente no sangue, no lquido cerebroespinhal, no smen e ocasionalmente na urina. A maioria dos casos associados a laboratrio ocorreu em dependncias para pesquisas e envolveu a exposio ao agente Brucella largamente produzido. Vrios casos em laboratrios clnicos tambm foram constatados em culturas bacteriolgicas desprezadas.19 O contato direto da pele com culturas ou com amostras clnicas infecciosas de animais (por exemplo, sangue, secrees uterinas) est comumente envolvido nesses casos. Os aerossis formados durante os procedimentos laboratoriais tm provocado grandes surtos.20, 21 Pipetagem com a boca, inoculaes parenterais acidentais e sprays lanados nos olhos, nariz e boca tambm tm provocado infeces. Precaues Recomendadas: Recomendam-se as prticas do nvel de biossegurana 2 para atividades que envolvam amostras clnicas de origem humana ou animal contendo ou potencialmente contendo Brucella spp. patognico. J as prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana 3 e do nvel de biossegurana animal 3 so recomendados, respectivamente, para todas as manipulaes de culturas do Brucella spp. patognico relacionadas neste resumo e para estudos de animais experimentais. Observao: Embora as vacinas humanas contra a brucelose tenham sido desenvolvidas e testadas em outros pases com limitado sucesso, at o momento da publicao deste volume nenhuma vacina humana encontrava-se disposio nos Estados Unidos.22 Transferncia do Agente: A licena para a importao deste agente deve ser conseguida junto ao CDC, e a licena de exportao dever ser obtida no Department of Commerce. No caso de envio ou recebimento deste agente necessrio obter um registro do laboratrio com o CDC. A licena para importao ou transporte domstico do agente poder ser obtida no USDA/APHIS/VS.
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Agentes: Burkholderia pseudomallei (Pseudomonas pseudomallei) Dois casos de melioidose associados a laboratrio foram relatados: um associado exposio massiva da pele aos aerossis e, o segundo, provocado pela formao de aerossis durante a destruio de uma cultura que se supunha ser de Ps. Cepacia, em frasco aberto atravs de ondas sonoras de alta freqncia.24 Riscos em Laboratrio: Este agente pode estar presente no escarro, no sangue, nos exsudatos de um ferimento e em vrios tecidos, dependendo do local da infeco. O contato direto com culturas e materiais infecciosos de homens, animais ou do meio ambiente, a ingesto, a auto-inoculao e a exposio aos aerossis e perdigotos infecciosos so considerados como riscos primrios de um laboratrio. O agente tem sido encontrado em sangue, escarro e materiais de abscesso e pode estar presente em amostras de solo e de gua de reas endmicas. Precaues Recomendadas: As prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so recomendados para todas as atividades que envolvam lquidos corporais, tecidos e culturas reconhecidamente ou potencialmente infecciosas. Deve-se usar luvas ao manusear animais infectados durante a necropsia e quando existir a possibilidade de contato direto da pele com os materiais infecciosos dos animais. A conteno primria e as precaues pessoais adicionais, como aquelas descritas para o nvel de biossegurana 3, podem ser indicadas para atividades com um alto potencial para produo de aerossis ou perdigotos e para as atividades envolvendo quantidades ou concentraes de produo de materiais infecciosos. As vacinas no se encontram atualmente disposio para o uso em homens. Transferncia do Agente: Entre em contato com o Department of Commerce para uma licena de exportao do agente. Agente: Campylobacter (C. jejuni/C. coli, C. fetus subsp. fetus) O C. jejuni/C. coli gastroenteritis raramente a causa de doenas associadas a laboratrio, embora alguns casos adquiridos em laboratrio tenham sido documentados.25, 26, 27 Numerosos animais domsticos e selvagens, incluindo aves, animais de estimao, ani105
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mais de fazenda, animais de laboratrio e pssaros selvagens so reconhecidos como reservatrios e so uma fonte potencial de infeco para as pessoas que cuidam desses animais e que trabalham no laboratrio. Animais experimentalmente infectados tambm so uma fonte potencial de infeco.28 Riscos em Laboratrio: As campylobacters patognicas podem ser encontradas em amostras fecais em grande nmero. A C. fetus subsp. fetus pode tambm estar presente no sangue, nos exsudatos de abscessos, nos tecidos e no escarro. A ingesto ou inoculao parenteral da C. jejuni constitui os riscos primrios de um laboratrio. A ingesto oral de 500 microorganismos provocou uma infeco em um indivduo.29 A importncia da exposio aos aerossis no conhecida. Precaues Recomendadas: As prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so recomendados para atividades que envolvam culturas ou materiais clnicos potencialmente infecciosos. As prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana animal 2 so recomendados para atividades com animais experimental ou naturalmente infectados. As vacinas, atualmente, no se encontram disposio para o uso em humanos. Transferncia do Agente: Para obteno de uma licena para importao, entre em contato com o CDC. Agentes: Chlamidia psittaci, C. pneumoniae, C. trachomatis. Infeces como a psitacose, tracoma e o linfogranuloma venreo j foram, no passado, as infeces bacterianas mais comuns associadas a laboratrio.30 Em casos relatados antes de 1955,31 a maioria das infeces diagnosticadas era de psitacose, que era a doena que apresentava o mais alto ndice de mortalidade de agentes infecciosos adquiridos em laboratrio. O contato e a exposio aos aerossis infecciosos ao manusear, cuidar ou realizar necropsias em animais natural ou experimentalmente infectados so as maiores fontes de transmisso da psitacose associada a laboratrio. Ratos e ovos infectados so fontes menos importantes do C. psittaci. Os animais de laboratrio no so fontes relatadas de infeco humana com o C. trachomatis.
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Riscos em Laboratrio: A bactria C. psittaci pode estar presente nos tecidos, nas fezes, nas secrees nasais e no sangue de pssaros infectados e no sangue, no escarro e nos tecidos de homens infectados. A C. trachomatis pode estar presente nos lquidos genitais, bulbares e conjuntivais de homens infectados. A exposio aos aerossis e perdigotos infecciosos produzidos durante o manuseio de pssaros e tecidos infectados o risco primrio para os trabalhadores de um laboratrio que trabalham com a bactria psitacose. J os riscos primrios em um laboratrio, em relao ao C. trachomatis, se encontram na inoculao parenteral acidental e na exposio direta ou indireta das membranas mucosas dos olhos, do nariz e da boca aos lquidos genitais, bulbares e conjuntivais, aos materiais de culturas de clulas e aos lquidos de ovos infectados. Os aerossis infecciosos tambm podem ser uma fonte potencial de infeco. Precaues Recomendadas: As prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so os recomendados para atividades envolvendo a necropsia de pssaros infectados e no diagnstico de tecidos ou de culturas conhecidas por conterem ou estarem potencialmente infectadas com a C. psittaci ou a C. trachomatis. Para reduzir o risco de formao de aerossis de fezes e secrees nasais infectadas contidas nas asas e nas superfcies externas do pssaro, o melhor procedimento molhar as asas dos pssaros infectados com um detergente-desinfetante antes de realizar a necropsia. As prticas, os equipamentos de conteno, as instalaes e a proteo respiratria do nvel de biossegurana animal 2 so os procedimentos indicados para as pessoas que realizam trabalhos com pssaros engaiolados natural ou experimentalmente infectados. Recomenda-se o uso de luvas para a necropsia dos pssaros e ratos, para a abertura de ovos inoculados e quando houver a possibilidade de contato direto da pele com tecidos infectados, lquido bulbar e outros materiais clnicos. As instalaes e as prticas do nvel de biossegurana 3 so indicadas para as atividades com alto potencial de produo de perdigotos ou aerossis e para as atividades envolvendo grandes quantidades ou concentraes de materiais infecciosos. Observao: Atualmente, as vacinas para esses agentes no se encontram disponveis para o uso humano.
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Transferncia dos Agentes: Para obter uma licena para exportao dos agentes, entre em contato com o Department of Commerce. Agente: Clostridium botulinum Embora s exista um relatrio32 sobre o botulismo associado ao manuseio do agente ou da toxina no laboratrio ou no trabalho com animais natural ou experimentalmente infectados, as conseqncias de tais intoxicaes ainda so consideradas bem graves. O trabalho com culturas de C. botulinum requer consideraes especiais de segurana devido ao uso potencial dessas culturas no terrorismo biolgico. Riscos em Laboratrio: O C. botulinum ou a sua toxina pode estar presente em uma variedade de produtos alimentcios, em materiais clnicos (soro, fezes) e amostras do meio ambiente (solo, gua de superfcie). A exposio toxina do C. botulinum considerada o risco laboratorial primrio. Essa toxina pode ser absorvida aps ingesto ou contato posterior com a pele ou com as membranas mucosas, incluindo o trato respiratrio. A inoculao parenteral acidental tambm representa uma significativa exposio toxina. O crescimento das culturas em caldos, quando sob tima produo de toxina, pode conter uma DL50 de 2x106 ratos por mL.34 Precaues Recomendadas: As prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so os indicados para todas as atividades com materiais conhecidos por conter ou potencialmente conter a toxina. Um toxide pentavalente do botulismo (ABCDE) encontra-se disponvel por meio dos Centers for Disease Control and Prevention, como uma nova droga de pesquisa (IND). Esse toxide indicado para as pessoas que trabalham com culturas de C. botulinum ou com suas toxinas. Solues de hipoclorito de sdio (0.1%) ou de hidrxido de sdio (0.1 N) inativam a toxina prontamente e so recomendadas para a descontaminao das superfcies de trabalho e de perdigotos de culturas ou de toxinas. Cuidados pessoais e conteno primria adicional, como os recomendados para o nvel de biossegurana 3, so indicados para as atividades com um alto potencial para a produo de aerossis ou perdigotos e para as atividades envolvendo quantidades grandes de toxinas. As prticas, os equipamentos de
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conteno e as instalaes do nvel de biossegurana animal 2 so indicados para estudos de diagnsticos e titulao da toxina. Transferncia do Agente: Para obter uma licena de importao para esse agente, entre em contato com o CDC. Agente: Clostridium tetani Embora o risco de infeco da equipe do laboratrio seja insignificante, cinco incidentes relacionados exposio do pessoal durante a manipulao da toxina foram relatados.35 Riscos em Laboratrio: A inoculao parenteral acidental e a ingesto da toxina so consideradas como risco primrio para a equipe laboratorial. Como no se tem certeza se a toxina pode ser absorvida atravs das membranas mucosas, os riscos associados aos aerossis e perdigotos ainda permanecem desconhecidos. Precaues Recomendadas: As prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicados para atividades envolvendo a manipulao de culturas ou toxinas. Embora o risco de ttano associado a laboratrio seja baixo, a administrao de um toxide ttano-difteria adulto, em intervalos de 10 anos, reduz o risco de exposio toxina e de contaminao por ferimento do pessoal do laboratrio e dos tratadores de animais e , portanto, altamente recomendada.36 O leitor dever consultar as atuais recomendaes do Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP), publicadas no CDC Morbidity and Mortality Weekly Report (MMWR), para a vacinao de adultos contra o C. tetani. Transporte do Agente: Para obter uma licena de importao para esse agente, entre em contato com o CDC e com o Department of Commerce para uma licena de exportao. O registro do laboratrio com o CDC ser necessrio antes do envio ou recebimento do agente. Agente: Corynebacterium diphtheriae As infeces com o C. diphtheriae associadas a laboratrio tm sido relatadas, ao contrrio das associadas a animais de laboratrio.37 Riscos em Laboratrio: O agente pode estar presente em exsudatos ou secrees de nariz, garganta (amgdala), faringe, laringe,
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ferimentos, sangue e sobre a pele. A inalao, a inoculao parenteral acidental e a ingesto so os riscos primrios em um laboratrio. Precaues Recomendadas: As prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so os indicados para todas as atividades utilizando materiais clnicos ou culturas potencial ou conhecidamente infectadas. J as prticas do nvel de biossegurana animal 2 so indicadas para estudos que utilizem animais de laboratrio infectados. Embora o risco da difteria associado a laboratrio seja baixo, a administrao de um toxide ttano-difteria adulto em intervalos de 10 anos pode posteriormente reduzir o risco de exposies toxina e a trabalhos com materiais infecciosos pela equipe do laboratrio e aos tratadores de animais.38 O leitor dever consultar as atuais recomendaes do Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP), publicadas no CDC Morbidity and Mortality Weekly Report (MMWR), para a vacinao contra o C. diphtheriae. Transferncia do Agente: Para obteno de uma licena para esse agente, entre em contato com o CDC. Escherichia coli (organismos produtores Agentes: (VTEC/SLT) de citotoxina) As cepas produtoras de citotoxina (VTEC/SLT) da Escherichia coli (tambm chamada de cepas enteroemorrgicas) so riscos comprovados para as pessoas que trabalham em laboratrios nos Estados Unidos e em outros locais.39, 40, 41 A sndrome urmica hemoltica ocorre em uma pequena proporo de pacientes (geralmente crianas) e a responsvel pela maioria das mortes associadas s infeces com esses organismos. Os animais domsticos de fazendas (em particular os bovinos) so reservatrios significativos do organismo. Porm, os pequenos animais experimentalmente infectados tambm so fontes de infeces no laboratrio. Riscos em Laboratrio: A E. coli enteroemorrgica geralmente isolada nas fezes. Uma grande variedade de alimentos contaminados com esses agentes pode servir como veculo de transmisso e inclui a carne moda crua e os produtos de laticnio no-pasteurizados. Ela raramente encontrada no sangue de homens e animais infectados. A ingesto o risco laboratorial pri110
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mrio. A importncia da exposio aos aerossis ainda no conhecida. Precaues Recomendadas: As prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so os indicados para todas as atividades utilizando materiais clnicos ou culturas conhecidamente ou potencialmente infecciosos. J as prticas do nvel de biossegurana animal 2 so indicadas para as atividades com animais natural ou experimentalmente infectados. Atualmente, as vacinas para uso em homens no se encontram disposio. O leitor deve consultar as recomendaes atualizadas do ACIP, relacionadas no CDC Morbidity and Mortality Weekly Report (MMWR), sobre a existncia de indicaes para a vacinao contra cepas enteroemorrgicas de E. coli. Transferncia do Agente: A licena para importao desse agente dever ser obtida no CDC. Agente: Francisella tularensis A tularemia tem sido uma infeco bacteriana associada a laboratrio comumente relatada.42 Quase todos os casos ocorreram nas dependncias onde a pesquisa da tularemia estava sendo realizada. Casos ocasionais tm sido relacionados ao trabalho com animais natural ou experimentalmente infectados ou seus ectoparasitas. Embora no tenham sido relatados, existem casos que ocorreram em laboratrios. O trabalho com culturas de F. tularensis requer uma segurana especial devido ao seu potencial uso no terrorismo biolgico. Riscos em Laboratrio: O agente pode estar presente em exsudatos de leses, nas secrees respiratrias, no lquido cerebroespinhal, no sangue, na urina, nos tecidos de animais infectados e nos lquidos de artrpodes infectados. Resultaram em infeco o contato direto da pele ou de membranas mucosas com materiais infecciosos, a inoculao parenteral acidental e a ingesto e a exposio aos aerossis e perdigotos infecciosos. A infeco tem sido mais comumente associada s culturas do que aos materiais clnicos e animais infectados. As doses de 25% a 50% infecciosas para homens so de aproximadamente 10 microorganismos pela via respiratria.43
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Precaues Recomendadas: As prticas, os equipamentos de conteno e as dependncias do nvel de biossegurana 2 so indicados para as atividades com materiais clnicos de origem humana ou animal contendo ou potencialmente contendo Francisella tularensis. J as prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana 3 e do nvel de biossegurana animal 3 so indicados, respectivamente, para todas as manipulaes de culturas e para estudos de animais experimentais. Observao: A vacinao contra a F. tularensis encontra-se disposio para a populao e deve ser levada em considerao pelas pessoas que trabalham com materiais infecciosos ou roedores infectados. A vacina tambm recomendada para as pessoas que trabalham com o agente ou animais infectados e para aquelas que trabalham dentro ou que entram no laboratrio ou na sala para animais onde as culturas ou animais infectados esto sendo mantidos.44 O leitor dever consultar as recomendaes atualizadas do Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP), publicadas no CDC Morbidity and Mortality Weekly Report (MMWR), sobre as recomendaes para vacinas contra a F. tularensis. Transferncia do Agente: Para obteno de licena para importao do agente, entre em contato com o CDC. Se a licena for para exportao do agente, entre em contato com o Department of Commerce. O registro do laboratrio com o CDC necessrio antes do envio ou recebimento do agente. Agente: Heliobacter pylori Desde a sua descoberta em 1982, a Heliobacter pylori tem recebido uma grande ateno como um agente causador da gastrite.45 O habitat principal da H. pylori a membrana mucosa gstrica humana. A infeco com esse agente pode ser longa quanto durao, com poucos ou nenhum sintoma ou pode-se apresentar como uma doena gstrica aguda. Tanto as infeces humanas associadas a laboratrios experimentais quanto as acidentais foram relatadas.46, 47 O agente pode estar presente nas secrees gstricas ou orais e nas fezes. A transmisso, embora no seja completamente clara, acredita-se ser atravs da via oral-fecal ou oral-oral.
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Riscos em Laboratrio: O agente pode ser encontrado nas secrees gstricas e orais ou nas fezes. A ingesto o principal risco dentro de um laboratrio. A importncia da exposio aos aerossis desconhecida. Precaues Recomendadas: As prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicados para as atividades com materiais clnicos e culturas conhecidamente ou potencialmente infectados pelo agente. J as prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana animal 2 so indicados para atividades com animais natural ou experimentalmente infectados. Atualmente, as vacinas no se encontram disposio para o uso em homens. Transferncia do Agente: A licena para importao do agente poder ser obtida junto ao CDC. Agente: Leptospira interrogans todos os sorotipos A leptospirose um risco laboratorial muito bem documentado. Pike relatou 67 infeces associadas a laboratrio, 10 mortes48 e ainda trs casos foram relatados em outros locais.49 Um coelho infectado experimentalmente foi identificado como uma fonte de contaminao do L. interrogans sorotipo icterohemorrhagiae.50 Tanto o contato direto e indireto com lquidos e tecidos de mamferos natural ou experimentalmente infectados, durante o manuseio e o cuidado, quanto a necropsia so fontes potenciais de infeco. Em animais com infeces renais crnicas, o agente encontrado na urina em numerosas quantidades por longos perodos. Riscos em Laboratrio: O agente pode ser encontrado na urina, no sangue e nos tecidos de animais e homens infectados. A ingesto, a inoculao parenteral acidental e o contato direto ou indireto da pele ou da membrana mucosa com culturas, tecidos ou lquidos corporais infectados especialmente a urina so considerados riscos laboratoriais primrios. Ainda no se conhece a importncia da exposio aos aerossis. Precaues Recomendadas: As prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicados para todas as atividades que envolvam o uso ou a manipu113
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lao de tecidos, lquidos corporais e culturas conhecidamente ou potencialmente infecciosas e para o alojamento de animais infectados. Recomenda-se o uso de luvas para o manuseio e a necropsia de animais infectados e quando houver uma possibilidade de contato direto da pele com os materiais infectados. Atualmente, as vacinas contra o agente no se encontram disposio para uso em homens. Transferncia de Agentes: Uma licena para importao dos agentes poder ser obtida junto ao CDC. Uma licena para importao ou transporte domstico do agente poder ser obtida no USDA/APHIS/VS. Agente: Listeria monocytogenes A Listeria monocytogenes oferece um risco potencial para a equipe do laboratrio. Os bacilos aerbicos gram-positivos e no formadores de esporos so hemolticos e catalase positivos.51 As bactrias tm sido isoladas no solo, na poeira, no alimento humano, nos animais e nos humanos assintomticos.52, 53 A maioria dos casos de listerose aconteceu devido ingesto de alimentos contaminados, mais notavelmente de queijos suaves, carne crua e vegetais crus no-lavados.54 Embora adultos e crianas saudveis possam contrair a infeco por Listeria, elas geralmente no adquirem uma doena sria. J as mulheres grvidas, os recm-nascidos e as pessoas com um sistema imunodeficiente fazem parte do grupo de risco e adquirem a forma grave da doena. Riscos em Laboratrio: A Listeria monocytogenes pode ser encontrada nas fezes, no lquido cerebroespinhal e no sangue, assim como em alimentos e materiais provenientes do meio ambiente.55, 56 Os animais naturalmente ou experimentalmente infectados so uma fonte de exposio para os trabalhadores de laboratrio, para as pessoas que zelam pelos animais e para outros animais. A ingesto o modo de exposio mais provvel, mas a Listeria tambm pode causar infeces nos olhos e na pele aps uma exposio direta. As infeces causadas pelo agente em mulheres grvidas ocorrem com mais freqncia no terceiro semestre e podem precipitar o parto. A transmisso transplacentria do agente oferece um grave risco ao feto e pode at resultar em um abscesso disseminado, contribuindo para o ndice de mortalidade de aproximadamente 100%.57
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Precaues Recomendadas: As prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicados para todas as atividades com amostras clnicas e culturas reconhecidas ou suspeitas de conterem o agente. Recomenda-se o uso de luvas e proteo para os olhos ao manusear culturas infectadas. As prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana animal 2 so indicados para atividades com animais natural ou experimentalmente infectados. Atualmente, as vacinas no se encontram disposio para uso humano.58 Mulheres grvidas que trabalham com o agente em um laboratrio de diagnstico ou de pesquisa devero ser informadas sobre os riscos potenciais associados ao agente, inclusive para o feto. Transferncia do Agente: Uma licena para importao ou transporte domstico do agente poder ser obtida junto ao USDA/ APHIS/VS. Legionella pneumophila Agentes: (e outros agentes semelhantes Legionella) Devido a uma presumida exposio aos aerossis ou perdigotos durante estudos animais com o agente da febre de Pontiac (L. pneumophilia), um nico documento apresentando um caso de legionelose associado a laboratrio foi relatado.59 A transmisso de homem para homem ainda no foi documentada. As infeces experimentais so prontamente produzidas em cobaias e ovos de galinha embrionrios.60 Coelhos de laboratrio tambm desenvolvem anticorpos, mas no a doena clnica, enquanto que os camundongos so resistentes exposio parenteral. Estudos no publicados dos Centers for Disease Control and Prevention mostram que a transmisso de animais para animais no acontece em uma variedade de espcies mamferas e avcolas experimentalmente infectadas. Riscos em Laboratrio: O agente pode ser encontrado no lquido pleural, no tecido, no escarro e nas fontes do meio ambiente (por exemplo, gua de torre). Uma vez que o modo natural de transmisso aparentemente via area, o maior risco potencial a produo de aerossis durante a manipulao de culturas ou de outros materiais que contenham uma grande concentrao de
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microorganismos infecciosos (por exemplo, tecidos e o saco vitelino infectado). Precaues Recomendadas: As prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicados para todas as atividades envolvendo o uso ou a manipulao de materiais clnicos ou de culturas sabiamente ou potencialmente infecciosas. J as prticas do nvel de biossegurana 3 com dispositivos de conteno primrios e equipamentos (por exemplo, cabines de segurana biolgica, conchas de segurana em centrfugas) so usadas para atividades que possivelmente produzem aerossis potencialmente infecciosos e para as atividades que envolvam quantidades de produo de microorganismos. Observao: Atualmente, as vacinas para uso em homens no se encontram disposio. Transferncia do Agente: A obteno de uma licena para importao do agente dever ser feita junto ao CDC. Agente: Mycobacterium leprae A transmisso parenteral acidental da lepra de homens para homens tem sido relatada aps a contaminao de um cirurgio por uma picada acidental de uma agulha61 e pelo uso de uma agulha para tatuagem provavelmente contaminada.62 No existem casos relatados que tenham sido provocados pelo trabalho em um laboratrio envolvendo bipsias ou outros materiais clnicos de origem humana e animal. Embora a lepra que ocorra naturalmente e as doenas semelhantes lepra tenham sido relatadas em tatus63 e em primatas no-humanos,64, 65 o ser humano o nico reservatrio importante da doena. Riscos em Laboratrio: O agente infeccioso pode ser encontrado em tecidos e exsudatos de leses de homens infectados e em animais natural ou experimentalmente infectados. O contato direto da pele e das membranas mucosas com materiais e inoculaes parenterais acidentais infecciosas considerado risco primrio de um laboratrio, associado com o manuseio de materiais clnicos infecciosos.
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Precaues Recomendadas: As prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicados para todas as atividades com materiais clnicos sabidamente ou potencialmente infecciosos de homens e animais infectados. Um cuidado especial deve ser tomado para evitar uma inoculao parenteral acidental com instrumentos cortantes contaminados. As prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana animal 2 so indicados para estudos animais que utilizem roedores, tatus e primatas-no humanos. Atualmente, as vacinas para uso em humanos no se encontram disposio. Transferncia do Agente: A obteno de uma licena para importao do agente dever ser feita junto ao CDC. Mycobacterium spp. diferente da M. tuberculosis, M. Agentes: bovis ou M. leprae Pike relatou 40 casos de tuberculose no-pulmonar que se acreditava estar relacionada a acidentes ou incidentes ocorridos no laboratrio ou na sala de autpsia.66 Provavelmente, essas infeces eram provocadas por um outro tipo de micobactria que no a M. tuberculosis ou a M. bovis. Um nmero de micobactrias que so ubquas na natureza associado com outras doenas que no a tuberculose ou a lepra em homens, animais domsticos e selvagens. Em relao s caractersticas, esses organismos so infecciosos, mas no so contagiosos. J clinicamente, as doenas associadas com as infeces por essas atpicas bactrias podem ser divididas, em geral, em trs categorias: 1. Doenas semelhantes tuberculose, que podem estar associadas com a infeco pelo complexo M. kansasii, M. avium e raramente pelo M. xenopi, M. malmoense, M. asiaticum, M. simiae e M. szulgai. 2. Limfadenitis, que podem estar associadas infeco pelo complexo M. scrofulaceum, M. avium e raramente pelo M. fortuitum e M. kansasii. 3. lceras de pele e infeces de ferimentos do tecido mole, que podem estar associadas infeco pelo complexo M. ulcerans, M. marinum, M. fortuitum e M. chelonei.
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Riscos em Laboratrio: Os agentes podem ser encontrados no escarro, nos exsudatos de leses, nos tecidos e em amostras do meio ambiente (por exemplo, solo e gua). O contato direto da pele ou da membrana mucosa com materiais infecciosos, a ingesto e a inoculao parenteral acidental so riscos primrios laboratoriais associados aos materiais clnicos e s culturas. Um risco de infeco potencial aos trabalhadores de laboratrio tambm oferecido pelos aerossis infecciosos criados durante a manipulao do caldo de culturas ou homogeneizao de tecidos contendo esses organismos associados doena pulmonar. Precaues Recomendadas: As prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicados para atividades com materiais clnicos e culturas de Mycobacterium spp. com exceo dos tipos M. tuberculosis ou M. bovis. As prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana animal 2 so indicados para estudos animais com a micobactria que no a M. tuberculosis, M. bovis ou M. leprae. Atualmente, as vacinas para uso humano ainda no se encontram disponveis. Transferncia do Agente: A obteno de uma licena para importao do agente dever ser feita junto ao CDC. Agente: Mycobacterium tuberculosis, M. bovis As infeces com a Mycobacterium tuberculosis e a M. bovis (incluindo a BCG) so um risco comprovado aos trabalhadores de laboratrio, assim como para outras pessoas que podem estar expostas aos aerossis infecciosos no laboratrio.67, 68, 69, 70, 71 A incidncia da tuberculose em pessoas que trabalham com a M. tuberculosis em laboratrio tem sido relatada como sendo trs vezes maior do que em pessoas que no trabalham com o agente. Primatas no-humanos infectados natural ou experimentalmente so uma fonte comprovada de infeco humana (por exemplo, o ndice de converso anual de tuberculina em pessoas que trabalham com primatas no-humanos infectados de aproximadamente 70/10.000 se comparado ao ndice de menos de 3/10.000 da populao em geral).73 Cobaias ou camundongos experimentalmente infectados no oferecem o mesmo risco, uma vez que ncleos em perdigotos no so produzidos pela tosse nessas espcies. Porm,
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o dejeto de animais infectados pode se tornar contaminado e servir como uma fonte de aerossis infecciosos. Riscos em Laboratrio: Os bacilos da tuberculose podem ser encontrados no escarro, nos lquidos de lavagem gstrica, no lquido cerebroespinhal, na urina e nas leses em vrios tecidos.74 A exposio aos aerossis produzidos em laboratrio o risco mais importante encontrado. Os bacilos da tuberculose podem sobreviver em esfregaos fixados com o calor75 e ser nebulizados na preparao de seces congeladas e durante a manipulao de culturas lquidas. Devido baixa dose infecciosa da M. tuberculosis para homens (i.e., DI50< 10 bacilos) e, em alguns laboratrios, um alto ndice de isolamento de organismos resistentes ao cido originado de amostras clnicas (>10%),76 o escarro e outras amostras clnicas de casos de tuberculose suspeitos ou j comprovados devem ser considerados potencialmente infecciosos e manipulados com os adequados cuidados. Precaues Recomendadas: As prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicados para as manipulaes de materiais clnicos que no produzam aerossis, como a preparao de esfregaos cido-resistentes. Todas as atividades que formem aerossis devero ser conduzidas em cabines de segurana biolgicas classe I ou II. Recomenda-se o uso de uma bandeja para aquecer a lmina ao invs de sec-la em um bico de Bunsen. A liquidificao ou a concentrao do escarro para a colorao cido-resistente pode tambm ser conduzida de forma segura em uma bancada aberta, tratando, primeiramente, a amostra (em uma cabine de segurana classe I ou II) com um igual volume de soluo de hipoclorito de sdio a 5% (branqueamento domstico no-diludo) e, depois, esperando 15 minutos antes da centrifugao.77, 78 As prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana 3 so indicados para atividades laboratoriais na propagao e na manipulao de culturas de M. tuberculosis ou M. bovis e para estudos animais que utilizem primatas nohumanos naturalmente ou experimentalmente infectados com a M. tuberculosis ou a M. bovis. Estudos animais utilizando cobaias
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ou camundongos podem ser conduzidos em um nvel de biossegurana animal 2.79 Observao: O teste cutneo com uma protena purificada derivada (PPD) de pessoas que trabalham em laboratrios e apresentem um teste cutneo negativo pode ser usado como um procedimento de vigilncia. Uma vacina de vrus vivo atenuado (BCG) encontra-se disposio, mas no usada nos Estados Unidos para equipes de laboratrio. O leitor deve consultar as recomendaes atuais do Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP), publicadas no CDC Morbidity and Mortality Weekly Report (MMWR), para as recomendaes atuais de vacinao. Transferncia do Agente: A obteno de uma licena para importao do agente conseguida no CDC. J a licena para importao e transporte domstico da M. bovis deve ser obtida junto ao USDA/APHIS/VS. Agente: Neisseria gonorrhoeae As infeces gonoccicas associadas a laboratrio tm sido relatadas nos Estados Unidos.80 Riscos em Laboratrio: Esse agente pode ser encontrado em exsudatos cervicais, uretrais e conjuntivais, no lquido sinovial, na urina, nas fezes e no lquido cerebroespinhal. A inoculao parenteral acidental e o contato direto ou indireto da membrana mucosa com materiais infecciosos so os riscos primrios laboratoriais conhecidos. A importncia dos aerossis no foi ainda determinada. Precaues Recomendadas: As prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicados para todas as atividades que envolvam o uso ou a manipulao de materiais clnicos ou de culturas. Recomenda-se o uso de luvas ao manipular animais laboratoriais infectados e quando houver a possibilidade do contato direto da pele com os materiais infecciosos. Cuidados de conteno primria ou pessoal, como as descritas para o nvel de biossegurana 3, podem ser indicados para a produo de perdigotos ou aerossis e para as atividades envolvendo quantidades de produo ou concentraes de materiais infecciosos. As vacinas, atualmente, no esto disponveis para uso em humanos.
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Transferncia do Agente: A obteno e a licena para importao do agente devero ser feitas junto ao CDC. Agente: Neisseria meningitis A meningite meningoccica um risco demonstrado, mas raro de ocorrer com trabalhadores de laboratrio.81, 82, 83 Riscos em Laboratrio: O agente pode ser encontrado em exsudatos faringneos, no lquido cerebroespinhal, no sangue e na saliva. A inoculao parenteral, a exposio da membrana mucosa a perdigotos e a ingesto so os riscos primrios para a equipe do laboratrio. Precaues Recomendadas: As prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicados para todas as atividades que utilizem lquidos corpreos, tecidos e culturas conhecidamente ou potencialmente infecciosas. Precaues pessoais e de conteno primria adicional, como as descritas para o nvel de biossegurana 3, podem ser indicadas para atividades com um alto risco potencial para formao de perdigotos ou aerossis e para as atividades que envolvam quantidades de produo ou concentraes de materiais infecciosos. Observao: As vacinas para a N. meningitidis esto disponveis e devem ser indicadas para as pessoas que trabalham regularmente com materiais infecciosos. O leitor deve consultar as atuais recomendaes do Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP), publicadas no CDC Morbidity and Mortality Weekly Report (MMWR), para as recomendaes sobre vacinao contra a N. meningitidis. Transferncia de Agentes: A obteno de uma licena para importao do agente deve ser feita junto ao CDC. Agente: Salmonella todos os sorotipos, com exceo do typhi A salmonelose um risco documentado para as pessoas que trabalham em laboratrios.84, 85, 86 Os hospedeiros, reservatrios primrios, compreendem um amplo espectro de animais domsticos e selvagens, incluindo pssaros, mamferos e rpteis, sendo que todos podem servir como uma fonte de infeco para a equipe laboratorial.
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Riscos em Laboratrio: O agente pode ser encontrado nas fezes, no sangue, na urina e em alimentos, raes e materiais provenientes do meio ambiente. A ingesto ou a inoculao parenteral um perigo primrio para um laboratrio. A importncia da exposio aos aerossis ainda desconhecida. Animais naturalmente ou experimentalmente infectados so uma fonte potencial de infeco para funcionrios do laboratrio e para os que tratam dos animais, alm de perigosos para outros animais tambm. Precaues Recomendadas: As prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicados para as atividades com materiais clnicos e culturas conhecidas por possurem ou potencialmente conterem os agentes. As prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana animal 2 so recomendados para atividades com animais naturalmente ou experimentalmente infectados. As vacinas ainda no se encontram disposio da populao. Transferncia do Agente: A licena para importao do agente deve ser obtida junto ao CDC. Agente: Salmonella typhi A febre tifide um risco comprovado para pessoas que trabalham em laboratrio.87, 88, 89 Riscos em Laboratrio: O agente pode ser encontrado nas fezes, no sangue, na vescula biliar (bile) e na urina. O ser humano o nico reservatrio conhecido da infeco. A ingesto e a inoculao parenteral do agente representam o risco primrio em laboratrio. No se conhece ainda a importncia da exposio aos aerossis. Precaues Recomendadas: As prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicados para todas as atividades que utilizem materiais clnicos e culturas sabidamente ou potencialmente infecciosas. As prticas do nvel de biossegurana 3 so indicadas para atividades que possivelmente provoquem a formao de aerossis ou de atividades que envolvam quantidades de produo de microorganismos. As vacinas para a S. typhi esto disponveis no mercado e devem ser indicadas para as pessoas que trabalham regularmente
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com materiais potencialmente infecciosos. O leitor deve consultar as recomendaes atuais do Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP), publicadas pelo CDC Morbidity and Mortality Weekly Report (MMWR), para as recomendaes sobre a vacinao contra a S. typhi. Transferncia do Agente: A licena para importao pode ser conseguida junto ao CDC. Agente: Shiguella spp. A shigelose um risco comprovado aos trabalhadores de um laboratrio, com dzias de casos relatados s nos Estados Unidos e na Gr-Bretanha.90, 91, 92, 93 Embora surtos tenham ocorrido em primatas no-humanos em cativeiro, somente o ser humano considerado um reservatrio significativo da infeco. Porm, cobaias, outros roedores e primatas no-humanos experimentalmente infectados tambm so fontes comprovadas de infeco. Riscos em Laboratrio: O agente pode ser encontrado nas fezes e raramente no sangue de animais e humanos infectados. A ingesto e a inoculao parenteral do agente so os riscos primrios de um laboratrio. A dose oral de 25% a 50% infecciosa do agente da S. flexneri para humanos de aproximadamente 200 microorganismos.94 Ainda no se sabe a importncia da exposio aos aerossis do agente. Precaues Recomendadas: As prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicados para todas as atividades que utilizem materiais clnicos ou culturas sabidamente ou potencialmente infecciosas. J as prticas e as instalaes do nvel de biossegurana animal 2 so indicadas para atividades com animais infectados experimentalmente ou naturalmente. As vacinas no se encontram disposio no mercado para uso humano. Transferncia do Agente: A licena para a exportao do agente dever ser obtida no Department of Commerce. Agente: Treponema pallidum A sfilis um risco comprovado para as pessoas de laboratrio que manipulam ou coletam materiais clnicos de leses cutneas.
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Pike relacionou 20 casos dessa infeco associada a laboratrio.95 O ser humano o nico reservatrio conhecido desse agente. Um exemplo o caso de um agente que foi transmitido a um indivduo da equipe de um laboratrio que trabalhava com uma suspenso concentrada do T. pallidum obtido de um coelho com orquite experimental.96 A transferncia hematognica da sfilis tem ocorrido por meio da transfuso de uma unidade de sangue fresco obtida de um paciente com sfilis secundria. O T. pallidum se encontra presente na circulao durante a sfilis primria e a secundria. O nmero mnimo de organismos do T. pallidum (DL50) necessrio para infectar um indivduo por uma injeo subcutnea de 23.97 A concentrao do T. pallidum no sangue de pacientes durante o incio da sfilis, porm, ainda no foi determinada. Nenhum caso de infeco associado a laboratrios animais foi relatado at o momento. Porm, cepas do T. pallidum (Nichols e possivelmente outras) adaptadas a coelhos conservaram suas virulncias em homens. Riscos em Laboratrio: O agente pode ser encontrado em materiais coletados de leses cutneas, de membranas mucosas primrias e secundrias e no sangue. A inoculao parenteral acidental, o contato das membranas mucosas e de pele lesada com os materiais infecciosos e possivelmente com aerossis infecciosos so os riscos primrios para as pessoas que trabalham em laboratrio. Precaues Recomendadas: As prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicados para todas as atividades que envolvam o uso ou a manipulao de sangue ou material de leses de homens ou de coelhos infectados. Recomenda-se o uso de luvas quando houver a possibilidade do contato direto da pele com os materiais da leso. O monitoramento sorolgico peridico deve ser considerado para pessoas que trabalham com materiais infecciosos. As vacinas, atualmente, no se encontram disponveis para o uso em humanos. Transferncia do Agente: A licena para importao do agente dever ser obtida junto ao CDC.
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Agentes: Vibrionic enteritis (Vibrio cholerae,Vibrio parahaemolyticus) A enterite vibrinica causada pelo Vibrio cholerae ou pelo Vibrio parahaemolyticus uma doena documentada associada a laboratrio, mas rara.98 Os animais naturalmente ou experimentalmente infectados so uma fonte potencial de infeco. Riscos em Laboratrio: Os vibries patognicos podem ser encontrados nas fezes. A ingesto do V. cholerae e a ingesto ou inoculao parenteral de outros vibries constituem os riscos primrios laboratoriais. A dose infecciosa oral humana de aproximadamente 106 organismos.99 A importncia da exposio aos aerossis ainda desconhecida. O risco de infeco aps uma exposio oral pode ser aumentado em indivduos aclordricos. Precaues Recomendadas: As prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicados para atividades com culturas ou materiais clnicos potencialmente infecciosos. J as prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana animal 2 so indicados para atividades com animais naturalmente ou experimentalmente infectados. Embora existam vacinas contra a clera, no se recomenda o uso rotineiro pela equipe laboratorial. O leitor deve consultar as atuais recomendaes do Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP), publicadas no CDC Morbidity and Mortality Weekly Report (MMWR), sobre as recomendaes para a vacinao humana contra o V. parahaemolyticus. Transferncia do Agente: A licena para exportao do agente dever ser obtida no Department of Commerce. Agente: Yersinia pestis A peste um risco laboratorial comprovado, mas raro. Nos Estados Unidos h relatos dessa infeco.100, 101 O trabalho com o Y. pestis requer consideraes especiais de segurana devido ao seu alto uso potencial no terrorismo biolgico. Riscos em Laboratrio: Esse agente pode ser encontrado no lquido bulbar, no sangue, no escarro, no lquido cerebroespinhal, nas fezes e na urina humana, dependendo da forma clnica e do estgio da doena. Os riscos primrios para a equipe do labo125
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ratrio se constituem por meio do contato direto com culturas e materiais infecciosos de homens ou animais, aerossis ou perdigotos infecciosos produzidos durante a manipulao de culturas e de tecidos infectados. Na necropsia de roedores, o risco primrio para a equipe laboratorial inclui a inoculao parenteral acidental, a ingesto e a picada de pulgas infectadas coletadas em roedores. Precaues Recomendadas: As prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicados para todas as atividades que envolvam o manuseio de materiais clnicos e culturas potencialmente infecciosas. Deve-se tomar um cuidado especial para evitar a produo de aerossis de materiais infecciosos e durante a necropsia de roedores naturalmente ou experimentalmente infectados. Recomenda-se o uso de luvas ao manusear roedores de laboratrio coletados no campo ou infectados e quando houver a possibilidade do contato direto da pele com os materiais infecciosos. A necropsia de roedores idealmente conduzida em uma cabine de segurana biolgica. Precaues individuais e de conteno primria adicional, como as descritas para o nvel de biossegurana 3, so recomendadas para atividades com um alto potencial para formao de perdigotos ou aerossis, para o trabalho com cepas resistentes a antibiticos e para as atividades envolvendo quantidades ou concentraes de produo de materiais infecciosos. Observao: A vacina para o Y. pestis est disposio para uso em humanos e deve ser usada pela equipe do laboratrio que trabalha com materiais infecciosos ou roedores infectados. O leitor deve consultar as recomendaes atuais do Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP), publicadas no CDC Morbidity and Mortality Weekly Report (MMWR), para maiores informaes sobre a vacinao contra o Y. pestis. Transferncia do Agente: A licena para importao do agente dever ser obtida no CDC. J a licena para exportao deve ser conseguida por intermdio do Department of Commerce. necessrio o registro do laboratrio junto ao CDC antes do envio ou recebimento desse agente.
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Seo VII-B: Agentes Fngicos

Agente: Blastomyces dermatitidis Infeces locais associadas a laboratrio tm sido relatadas aps a inoculao parenteral acidental com tecidos ou culturas infectadas contendo formas da B. dermatitidis semelhantes levedura. 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 Infeces pulmonares ocorreram depois de uma suposta inalao de condios; duas pessoas desenvolveram pneumonia e uma apresentou uma leso osteoltica da qual se retirou amostra da B. dermatitidis para cultura. 9, 10 Provavelmente, as infeces pulmonares esto associadas somente s formas semelhantes levedura formadoras de esporos (condios). Riscos em Laboratrio: Formas semelhantes a leveduras podem ser encontradas nos tecidos de animais infectados e em amostras clnicas. A inoculao parenteral (subcutnea) desses materiais pode provocar granulomas locais. As culturas das formas fngicas da B. dermatitidis contendo condios infecciosos, solo processado ou outras amostras ambientais podem oferecer um risco quanto exposio aos aerossis. Precaues Recomendadas: As prticas e as instalaes do nvel de biossegurana 2 e do nvel de biossegurana animal 2 so indicadas para as atividades com materiais clnicos, tecidos animais, culturas, amostras ambientais e animais infectados. Transferncia do Agente: A licena para importao desse agente dever ser obtida junto ao CDC. O registro do laboratrio no CDC dever ser obtido antes do envio ou recebimento do agente. Agente: Coccidioides immitis A coccidioidomicose adquirida em laboratrio um risco documentado.11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 Smith relatou que de 31 infeces adquiridas em laboratrio da sua instituio, 28 (90%) resultaram em uma doena clnica, em que mais da metade dessas infeces adquiridas na natureza eram assintomticas.23 Riscos em Laboratrio: Devido ao tamanho (2-5 milimcrons), os artrocondios tendem a ser prontamente espalhados no ar e retidos nos profundos espaos pulmonares. Quanto maior o
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tamanho da esfrula (30-60 milimcrons), mais reduzida ser a eficcia dessa forma de fungo como um patgeno areo. As esfrulas dos fungos podem estar presentes em amostras clnicas e tecidos animais. J os artrocondios infecciosos so encontrados em culturas e solos mofados ou em outras amostras de locais naturais. A inalao do artrocondio contido nas amostras ambientais ou nas culturas da forma fngica um perigo srio dentro de um laboratrio. Um risco terico dentro de um laboratrio imposto por amostras clnicas ou tecidos de animais ou homens infectados que foram armazenados ou embalados de forma a produzir a germinao de artrocondios. H um nico relatrio sobre um veterinrio com uma coccidiodomicose que se iniciou 13 dias depois da autpsia de um cavalo com essa infeco, embora o veterinrio morasse em uma rea endmica.24 A inoculao percutnea acidental da esfrula pode resultar na formao de um granuloma local.25 A doena disseminada ocorre com uma freqncia muito maior em negros e em filipinos do que em brancos. Precaues Recomendadas: As prticas e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicadas para manuseio e processamento de amostras clnicas, identificao isolada e processamento dos tecidos animais. J as prticas e as instalaes do nvel de biossegurana animal 2 so indicadas para estudos de experimentao animal quando a via de transmisso do agente a via parenteral. As prticas e as instalaes do nvel de biossegurana 3 so indicadas para reproduo e manipulao de culturas que formam esporos j identificados como C. immitis e para o processamento de solo ou outros materiais do meio ambiente que contenham ou possivelmente contenham artrocondios infecciosos. Transferncia do Agente: A licena para importao do agente dever ser obtida junto ao CDC. O registro do laboratrio dever ser obtido no CDC antes do envio ou recebimento do agente. Agente: Cryptococcus neoformans A inoculao acidental de uma pesada quantidade de Cryptococcus neoformans nas mos de um trabalhador de laboratrio ocorreu durante a injeo ou a necropsia de animais de laboratrios.26, 27 Mas no houve a formao de um granuloma local e nem
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uma leso, sugerindo uma baixa patogenicidade por esta via. As infeces respiratrias como conseqncia de exposio laboratorial ainda no foram registradas. Riscos em Laboratrio: A inoculao parenteral acidental de culturas ou de outros materiais infecciosos representa um risco potencial para a equipe laboratorial, particularmente queles que possam estar imunodeprimidos. Mordidas de camundongos experimentalmente infectados e as manipulaes de materiais do meio ambiente infeccioso (por exemplo, excrementos de pombos) tambm representam um risco primrio ao pessoal do laboratrio. Precaues Recomendadas: As prticas e as instalaes do nvel de biossegurana 2 e do nvel de biossegurana animal 2 so indicadas, respectivamente, para atividades com materiais clnicos, ambientais ou de culturas sabidamente ou potencialmente infecciosas e ainda com animais infectados experimentalmente. O processamento do solo ou de outros materiais do meio ambiente que contenha ou que potencialmente contenha clulas infecciosas semelhantes levedura dever ser conduzido em cabines de segurana biolgicas classe I ou II. Essa precauo tambm indicada para a cultura do estado perfeito ou sexual do agente. Transferncia do Agente: A licena para importao do agente dever ser obtida junto ao CDC. Agente: Histoplasma capsulatum A histoplasmose associada a laboratrio um risco comprovado em instalaes onde so conduzidos trabalhos de investigao ou de diagnsticos.28, 29, 30 As infeces pulmonares so resultantes de culturas que formam fungos.31 J uma perfurao na pele durante uma autpsia de um indivduo infectado32 e uma inoculao parenteral acidental de uma cultura vivel33 provocam uma infeco local. A coleta e o processamento de amostras de solo retiradas de reas endmicas tm provocado infeces pulmonares em trabalhadores de laboratrio. Os esporos encapsulados so resistentes secagem e podem permanecer viveis durante longos perodos de tempo. O pequeno tamanho do condio infeccioso (menos que 5 mcrons) possibilita sua disperso no ar e a reteno intrapulmonar. Furcolow relatou que em camundongos 10 es129
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poros foram quase que to infecciosos quanto uma dose letal de 10.000 a 100.000 esporos.34 Riscos em Laboratrio: O estgio infeccioso desse fungo dimrfico (condio) est presente nas culturas de formas esporuladas e no solo de reas endmicas. A forma de levedura em tecidos ou lquidos de animais infectados pode produzir uma infeco local aps uma inoculao parenteral. As prticas e as instalaes do nvel de biossegurana 2 e do nvel de biossegurana animal 2 so indicadas para o manuseio e o processamento de materiais clnicos, identificao de substncias isoladas, tecidos animais e culturas fngicas, identificao de culturas na rotina de laboratrios de diagnsticos e para estudos animais experimentais quando a via do agente for parenteral. As prticas e as instalaes do nvel de biossegurana 3 so indicadas para reproduo e manipulao de culturas j identificadas como de H. capsulatum e para o processamento de solo ou de outros materiais ambientais conhecidos por conter ou possivelmente conter condio infeccioso. Transferncia do Agente: A licena para importao desse agente deve ser feita junto ao CDC. Agente: Sporothrix schenckii O S. schenckii tem causado um nmero expressivo de infeces locais na pele e nos olhos de pessoas que trabalham em laboratrios.35 A maioria dos casos est associada a acidentes que ocorrem com borrifos do material de uma cultura dentro do olho, 36, 37 arranho 38 ou mordida de um animal infectado 40, 41 ou ao injetar 39 material infectado na pele. As infeces dermatolgicas so causadas tambm pelo manuseio de culturas 42, 43 ou por necropsias de animais 45 sem que ocorra um conhecido erro tcnico na hora do procedimento. No houve nenhum caso de infeco pulmonar resultante da exposio laboratorial, embora se suponha que a doena pulmonar tenha ocorrido naturalmente como resultado de uma inalao. Precaues Recomendadas: As prticas e as instalaes do nvel de biossegurana 2 e do nvel de biossegurana animal 2 so indicadas para todas as atividades em laboratrio e em ativida130
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des com experimentao animal com S. schenckii. Recomenda-se o uso de luvas ao manusear animais experimentalmente infectados e durante operaes com culturas lquidas (caldos) que possam resultar em uma contaminao da mo. Transferncia do Agente: A licena para importao desse agente dever ser obtida junto ao CDC. Agentes:Membros patognicos dos gneros Epidermophyton, Microsporum e Trychophyton Embora as infeces de pele, cabelo e unhas provocadas por esses fungos dermatofdites estejam entre as infeces humanas mais freqentes, o processamento do material clnico ainda no foi associado s infeces laboratoriais. As infeces relatadas foram adquiridas por meio de contatos com animais de laboratrio naturalmente ou experimentalmente infectados (camundongo, cobaias, etc.) e ocasionalmente com o manuseio de culturas.46, 47, 48, 49 Perigos em Laboratrio: Os agentes podem ser encontrados na pele, no cabelo e nas unhas de hospedeiros humanos e animais. O contato com animais de laboratrios infectados que apresentem infeces aparentes ou no considerado risco primrio para a equipe do laboratrio. As culturas e os materiais clnicos no so uma fonte importante de infeco humana. Precaues Recomendadas: As prticas e as instalaes do nvel de biossegurana 2 e do nvel de biossegurana animal 2 so indicadas para todas as atividades em laboratrio e em atividades com experimentao animal com os dermatofitdes. Os animais infectados experimentalmente devem ser manipulados com luvas descartveis. Transferncia do Agente: A licena para importao desse agente dever ser obtida junto ao CDC. Agentes: Fungos diversos Vrios fungos tm provocado srias infeces em hospedeiros imunocompetentes aps uma provvel inalao ou inoculao parenteral acidental de fontes do meio ambiente. Esses agentes so os Penicillium marneffei, Exophiala (Wangiella) dermatitidis, Fonseca131
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ea pedrosoi, Ochroconis gallopavum, Clauduphialopora bantians e Ramichlorisium mackenzieim. Embora nenhuma infeco causada por grande parte desses agentes associados a laboratrio tenha sido registrada, a gravidade dessa patologia adquirida naturalmente suficiente para se adotar cuidados especiais no laboratrio. O Penicillium marneffei causou uma infeco local por inoculao acidental em um laboratorista.50 J o Stachybotrus atra provavelmente no o agente causador da infeco em seres humanos quando o fungo ou fmites contidos no mofo so inalados, embora a ingesto de gros mofados que possuam o fungo tenha envenenado animais. Riscos em Laboratrio: A inalao de condios em culturas de fungos com esporos ou a injeo acidental na pele durante um procedimento de infeco de animais de experimentao so riscos tericos aos trabalhadores de um laboratrio. Precaues Recomendadas: As prticas e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicadas para reproduo e manipulao de culturas conhecidas por conterem esses agentes. Transferncia do Agente: A licena para importao dever ser obtida junto ao CDC.
Seo VII-C: Agentes Parasitrios

Agentes: Protozorios Parasitas de Tecido e Sangue Humanos Infeces com o Plasmodium spp. (incluindo o P. cynomolgi), o Trypanosoma spp. e a Leishmania spp. adquiridas em laboratrio foram relatadas.1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 Embora nenhuma infeco laboratorial com a Babesia spp. tenha sido relatada, um indivduo pode adquirir uma infeco por meio de uma picada acidental com agulha ou por uma picada de um carrapato infectado. Embora infeces associadas a animais de laboratrio no sejam comuns, a malria transmitida pelo mosquito realmente ocorre. Outras fontes diretas potenciais de infeco para a equipe de um laboratrio incluem o contato com um material extrado de uma leso de roedores que apresentam uma leishmaniose cutnea e o contato com fezes ou sangue de animais experimentalmente ou naturalmente infectados com T. cruzi.13
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Riscos em Laboratrio: Os estgios contagiosos desses agentes podem estar presentes no sangue, nas fezes, no fluido cerebroespinhal, na medula ssea ou em outros tecidos de bipsia, exsudatos de leso e artrpodes infectados. Dependendo do parasita, os riscos primrios laboratoriais incluem a ingesto, a penetrao na pele por meio de ferimentos ou microabrases, a inoculao parenteral acidental e a transmisso por vetores artrpodes. A exposio aos aerossis ou perdigotos de organismos nas membranas mucosas dos olhos, do nariz ou da boca considerada um risco potencial quando o trabalho realizado com culturas de Leishmania spp., T. cruzi ou com homogeneizao de culturas ou de sangue contendo hemoflagelados. Os indivduos imunocomprometidos devem evitar qualquer trabalho com esses agentes vivos. Precaues Recomendadas: As prticas e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicadas para atividades com estgios infecciosos dos parasitas relacionados. Os artrpodes infectados devem ser mantidos em dependncias que impeam a exposio do pessoal do laboratrio ou a sada do artrpode para fora do local. A conteno primria (por exemplo, cabine de segurana biolgica) e a proteo pessoal (por exemplo, proteo facial) podem ser indicadas quando o trabalho for realizado com culturas de Leishmania spp., T. cruzi ou com a homogeneizao de tecidos ou de sangue contendo hemoflagelados.14, 15 Recomenda-se o uso de luvas para atividades nas quais exista a possibilidade do contato direto da pele com os estgios infecciosos dos parasitas referidos. O tratamento apropriado para a maioria das infeces provocadas por protozorios existe. As informaes sobre dosagem, fonte da droga, etc. se encontram disposio.16 Transferncia do Agente: A licena para importao desse agente dever ser obtida junto ao CDC. Agentes: Protozorios Parasitas do Intestino Humano Infeces com Toxoplasma spp., Entamoeba spp., Isospora spp., Giardia spp., Sarcocystis spp. e o Cryptosporidium spp. associadas a laboratrio foram relatadas.17, 18, 19, 20, 21 Nenhuma infeco laboratorial com microspordios foi registrada, mas a ingesto de esporos encontrados nas fezes, na urina, no escarro, no fluido cerebroespinhal ou nas culturas pode provocar uma infeco.
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Infeces associadas ao laboratrio de experimentao animal tm sido relatadas e constituem uma fonte direta de infeco para as pessoas que trabalham nesses locais e esto em contato com as fezes de animais naturalmente ou experimentalmente infectados. No caso de roedores inoculados experimentalmente com o Toxoplasma via intraperitoneal, o contato com o lquido peritoneal pode provocar uma exposio aos organismos infecciosos. J as infeces com o Cryptosporidium adquiridas em laboratrio ocorrem com regularidade em quase todos os laboratrios que trabalham com esse agente, especialmente aqueles nos quais os bezerros so usados como fonte de ocitos. Outros animais infectados experimentalmente tambm oferecem riscos potenciais. A evidncia circunstancial sugere que a transmisso area de ocitos desse pequeno organismo pode acontecer. Uma obedincia rigorosa a todas essas recomendaes reduz a ocorrncia de infeces nos laboratrios e em tratadores de animais. Riscos em Laboratrio: Os estgios ativos infecciosos podem ser encontrados nas fezes ou em outros fluidos e tecidos corporais. Dependendo do parasita, a ingesto o risco primrio laboratorial. Embora no se conhea o nvel do risco, as exposies das membranas mucosas dos olhos, do nariz ou da boca aos aerossis ou perdigotos de trofozotas podem ser riscos potenciais quando esto sendo realizados trabalhos com culturas de amebas que vivem livremente, como a Naegleria fowleri, Acanthamoeba ou a Balamuthia. Os indivduos imunocomprometidos devem evitar o trabalho com organismos vivos. Devido s graves conseqncias da toxoplasmose em fetos em desenvolvimento e em mulheres sorologicamente negativas que podem engravidar, cabe ao supervisor do laboratrio informar essas mulheres sobre os riscos potenciais ao feto. Caso os empregados bem informados sobre os riscos se recusarem a ficar expostos a esses agentes, o laboratrio dever designar outras atividades em uma rea de trabalho onde o toxoplasma no esteja sendo manipulado. O trabalho com ocitos contagiosos oferece um risco maior de se adquirir uma infeco. As picadas de agulhas com material contendo taquizotas ou bradizotas atravs da membrana mucosa ou de abrases na pele tambm so riscos significativos. A infeco por taquizotas ou bradizotas atravs da membrana mucosa ou de abrases da pele tambm so
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possveis. Os laboratrios que conduzem estudos somente com materiais de parasitas mortos ou inativados e com fraes de parasitas no oferecem riscos significativos de infeco. Precaues Recomendadas: As prticas e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicadas para atividades com estgios contagiosos dos parasitas citados. A conteno primria (por exemplo, cabine de segurana biolgica) e a proteo pessoal (por exemplo, protetor facial) podem ser indicadas em trabalhos envolvendo culturas de Naegleria fowleri ou Cryptosporidium. O tratamento apropriado para a maioria das infeces provocadas por protozorios j existe. Mais informaes sobre a dose e a fonte das drogas, etc. esto disponveis.22 Transferncia do Agente: A licena para importao desse agente dever ser obtida junto ao CDC. Trematdeos Parasitas de Humanos Agentes: (Schistosoma spp. e Fasciola spp.) Infeces com o Schistosoma spp. e a Fasciola spp. adquiridas em laboratrio tm sido relatadas. Nenhuma infeco estava diretamente associada aos animais de laboratrio, com exceo dos moluscos infectados, que so os hospedeiros intermedirios.23, 24, 25, 26 Riscos em Laboratrio: Os estgios contagiosos do Schistosoma spp. (cercria) e da Fasciola spp. (metacercria) podem ser encontrados, respectivamente, na gua ou encistados em plantas de aqurios de laboratrios usados para manter os caracis hospedeiros. A penetrao das cercrias do esquistossomo na pele e a ingesto da metacercria de qualquer trematdeo so consideradas riscos primrios. A disseco e o esmagamento de caracis infectados pelo esquistossomo podem tambm resultar na exposio da pele ou da membrana mucosa aos tecidos contendo as cercrias. Alm disso, a metacercria pode ser transferida inadvertidamente das mos para a boca pelos dedos ou pelas luvas, depois do contato com a vegetao aqutica contaminada ou com as superfcies contaminadas do aqurio. A maioria das exposies laboratoriais ao Schistosoma spp. supostamente resultaria em baixas cargas de vermes com um potencial mnimo da doena. Drogas seguras e eficazes para o tratamento da esquistossomose j se encontram no mercado.
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Precaues Recomendadas: As prticas e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicadas para atividades com os estgios contagiosos dos parasitas citados. Recomenda-se o uso de luvas quando houver um contato direto com gua contaminada por cercrias ou vegetao contendo metacercria de caracis infectados experimentalmente ou naturalmente. Jalecos de mangas compridas ou outro traje de proteo devero ser usados quando estiver sendo realizado um trabalho ao redor do aqurio ou em outras fontes de gua que possam conter cercrias do esquistossomo. Os caracis e as cercrias encontradas na gua proveniente do aqurio do laboratrio devem ser eliminados com substncias qumicas (por exemplo, hipoclorito, iodo) ou por meio do calor antes de serem jogados no esgoto. O tratamento apropriado para grande parte das infeces causadas por trematdeos existe. As informaes sobre a fonte das drogas e sobre as dosagens esto disponveis.27 Transferncia do Agente: A licena para importao do agente deve ser obtida junto ao CDC. Agentes:Cestides Parasitas de Humanos Echinococcus granulosus, Taenia solium (cysticercus cellulosae) e Hymenolepis nana Embora nenhuma infeco com o E. granulosus ou a T. solium relacionada a laboratrio tenha sido relatada, as conseqncias dessas infeces aps a ingesto de ovos infectados por E. granulosus ou T. solium so potencialmente srias. A H. nana um parasita cosmopolita que no requer um hospedeiro intermedirio, e a contaminao se d diretamente pela ingesto de fezes humanas ou de roedores infectados. Riscos em Laboratrio: Os ovos infectados podem ser encontrados nas fezes de ces ou de outros candeos (hospedeiro definitivo do E. granulosus) ou nas fezes humanas (o hospedeiro definitivo da T. solium). A ingesto de ovos infectados dessas fontes considerada risco primrio em laboratrios. Os cistos e o fluido de cistos do E. granulosus no so infecciosos para o homem. J os cistos que contm a larva da T. solium (Cysticercus cellulosae) prontamente produzem a infeco humana com a solitria adulta. A ingesto de um nico ovo infectado pelos dois parasitas, proveniente das fezes do hospedeiro definitivo, pode potencialmente resultar
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em uma sria patologia. A ingesto dos ovos da H. nana nas fezes do hospedeiro definitivo pode causar uma infeco intestinal. Precaues Recomendadas: As prticas e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicadas para o trabalho com os estgios contagiosos desses parasitas. Deve-se dar uma ateno especial higiene pessoal (por exemplo, lavagem das mos) e evitar a ingesto de ovos infectados. Recomenda-se o uso de luvas quando houver um contato direto com as fezes ou com superfcies contaminadas por fezes frescas de ces infectados por E. granulosus, com humanos infectados pela T. solium adulta ou com humanos ou roedores infectados pela H. nana. O tratamento adequado para muitas infeces causadas por cestides existe. Informaes sobre a fonte das drogas, da dosagem, etc. j se encontram disponveis.28 Transferncia do Agente: A licena para importao desse agente deve ser obtida junto ao CDC. Agentes: Nematides Parasitas de Humanos Infeces por Ascaris spp., Strongyloides spp., ancilstomos e Enterobius spp. j foram relatadas. As reaes alrgicas a vrios componentes antignicos de nematides (por exemplo, antgenos de Ascaris nebulizados) podem representar um risco ao indivduo sensvel. As infeces associadas a laboratrio (incluindo artrpodes) no foram registradas, mas as larvas contagiosas encontradas nas fezes de primatas no-humanos infectados com o Strongyloides spp. so consideradas um risco potencial de infeco para trabalhadores de laboratrio e tratadores de animais. Riscos em Laboratrio: Os ovos e as larvas de fezes frescas do hospedeiro definitivo no so geralmente infecciosos, uma vez que o desenvolvimento dos estgios infecciosos pode levar de um dia at vrias semanas. A Trichinella preocupa porque o tecido fresco ou digerido pode conter larvas que seriam infecciosas se ingeridas. A ingesto de ovos infectados e a penetrao de larvas infectadas na pele so os riscos primrios para as pessoas que trabalham em um laboratrio e as que tratam dos animais. Os artrpodes infectados com os parasitas filariais oferecem um risco potencial para a equipe laboratorial. comum o desenvolvimento de uma
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hipersensibilidade em trabalhadores de laboratrio que freqentemente so expostos aos antgenos aerolizados de Ascaris spp. Precaues Recomendadas: As prticas e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicadas para atividades que envolvam os estgios contagiosos relacionados . A exposio aos antgenos sensibilizados aerolizados do Ascaris spp. deve ser evitada. Uma conteno primria (por exemplo, cabine de segurana biolgica) pode ser necessria para o trabalho com esses materiais por indivduos hipersensveis. O tratamento adequado para maior parte das infeces causadas por nematides existe. Maiores informaes sobre a dosagem, a fonte das drogas, etc. j se encontram disponveis.32 Transferncia do Agente: A licena para importao desse agente deve ser obtida junto ao CDC. Seo VII-D: Prons Os Centros para Preveno e Controle de Doenas e os Institutos Nacionais de Sade gostariam de expressar seus agradecimentos a Jiri Safar, M.D; Darlene Groth, A.B; Stephen J. DeArmond, M.D., PhD. e Stanley B. Prusiner, M.D., da University of California San Francisco, San Francisco, CA, pelas contribuies neste campo emergente e na preparao desta seo. Os prons so partculas infecciosas de proteinceos que no possuem cidos nuclicos.1 Os prons so, em grande parte, se no totalmente, compostos por um isoforme anormal de uma protena celular normal. Em mamferos, os prons so compostos de um isoforme anormal, patognico da protena prinio (PrP), chamada de PrPSc. O expoente Sc inicialmente derivou-se do termo scrapie (tronco), j que scrapie um distrbio degenerativo contagioso do sistema nervoso de ovinos e caprinos provocado pelos prons. Uma vez que todas as doenas conhecidas causadas por prons (tabela 3) em mamferos envolvem o metabolismo aberrante do PrP semelhante ao observado na scrapie, o uso de um expoente Sc indicado para todos os isoformes PrP patognicos anormais.2 Nesse contexto, o expoente Sc utilizado para designar a isoforma do PrP semelhante da scrapie.
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Um gene cromossmico decodifica os genes PrP e no PrP que so encontrados em preparaes purificadas dos prons. O PrPSc derivado do PrPC (o isoforme celular do PRP) por um processo ps-translacional em que o PrPSc adquire um alto contedo da enzima B da ovelha.3 Nem os cidos nuclicos especficos de prons nem as partculas semelhantes ao vrus foram detectados nas preparaes infecciosas purificadas. Em fungos, evidncias de trs prons diferentes foram acumuladas.4 Os prons em mamferos causam scrapie e outras doenas neurodegenerativas relacionadas ao homem e aos animais (tabela 3). As doenas provocadas pelos prons tambm so referidas como encefalopatias espongiformes transmissveis (TSEs).5 Tabela 3. As doenas causadas por prons
Patologias (abreviao) Scrapie Hospedeiro natural ovelhas e cabras Prons scrapie prons prons TME prons CWD prons BSE prons FSE prons EUE prons kuru prons CJD prons GSS prons FFI Isoforma patognica do PrP OvPrPSc MkPrPSc MdePrSc BoPrPSc FePrPSc UngPrPSc HuPrPSc HuPrPSc HuPrPSc HuPrPSc
Encefalopatia transmissvel viso de viso (TME) Doena crnica distrfica (CWD) alce e veado de orelhas longas Encefalopatia espongiforme gado bovina (BSE) Encefalopatia espongiforme gatos felina (FSE) Encefalopatia extica ungula- antlope africano e niala do (EUE) Kuru humanos Doena de Cretzfeldt Jakob humanos (CDJ) Sndrome de Gerstmann humanos Stussler-Scheinker (GSS) Insnia familiar Gatal (FFI) humanos
Prons especficos de espcies: Diferente de alguns vrus, as propriedades dos prons mudam dramaticamente quando so passados de uma espcie para outra. Os resultados de estudos transgnicos (Tg) em camundongos indicam que, quando os pr139
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ons de homens so passados para os camundongos, a patogenicidade potencial dos no-transgnicos para os humanos diminui drasticamente.6 Os prons que so reproduzidos em camundongos no-transgnicos so agora prons de camundongos e prons nohumanos. Os prons de camundongos contm o PrP Sc e o PrPSc no-humano. Essa mudana especfica da espcie na molcula do PrPSc acompanhada pela alterao na patogenicidade do prons. Em contraste com os prons humanos, os prons de camundongos so altamente patognicos para os prprios camundongos. A compreenso dessas mudanas especficas na patogenicidade do prons de cada espcie proveniente, em grande parte, de estudos de camundongos que apresentam uma variedade de transgenes PrP. Uma vez que o PrPSc produzido no camundongo derivado do PrPC, no possvel determinar a origem do prons inicialmente inoculados no camundongo.7 Vale a pena observar que a susceptibilidade de espcies em particular a um pron de outras espcies pode ser profundamente afetada pelas diferentes cepas de prons. As propriedades manifestadas pelas cepas de prons, como o perodo de incubao e os perfis neuropatolgicos, parecem estar contidas na estrutura do PrP Sc. Tais consideraes dos princpios bsicos da biologia prinica ajudam a formar a base para a classificao da biossegurana de diferentes prons. Classificao do Nvel de Biossegurana: Os prons humanos e os reproduzidos em macacos e chimpanzs so manipulados no nvel de biossegurana 2 ou 3, dependendo dos estudos que esto sendo conduzidos. Os prons BSE so igualmente manipulados no nvel de biossegurana 2 ou 3, devido possibilidade de os prons terem sido transmitidos aos seres humanos na GrBretanha e na Frana.9 Todos os outros prons animais so considerados patgenos do nvel de biossegurana 2. Portanto, baseado na nossa compreenso atual sobre a biologia descrita dos prons, assim que os prons humanos so passados para camundongos, ocorre a produo do PrPSc de camundongo. Nesse caso, esses prons devem ser considerados como do nvel de biossegurana 2, embora os prons humanos sejam manipulados no nvel de biossegurana 3, em gran140
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de parte das condies experimentais. Uma exceo a essa regra o caso de camundongos que apresentam transgenes de camundongos/humanos quimricos ou humanos. Os camundongos transgnicos produzem prons humanos quando infectados por prons humanos e devem ser tratados no nvel de biossegurana 2 ou 3, de acordo com os procedimentos descritos. Os mecanismos dos prons disseminados em ovelhas e caprinos, que so os responsveis pelo desenvolvimento do scrapie, ainda so desconhecidos.10, 11 Acredita-se que os prons CWD, TME, BSE, FSE e EUE ocorrem depois do consumo de alimentos infectados por prons.12, 13, 14, 15 Doenas Humanas Provocadas por Prons: Os mesmos cuidados usados em pacientes com aids ou com hepatite so certamente adequados para as patologias provocadas por prons e pacientes que esto morrendo devido a tal patologia. Em contraste com essas doenas virticas, as doenas provocadas por prons no so transmissveis nem contagiosas.16 No h evidncias sobre a transmisso por contato de aerossis de prons de um indivduo para outro. Porm, esses agentes se tornam contagiosos em algumas circunstncias como, por exemplo, no ritual de canibalismo na Nova Guin, que provoca a doena chamada kuru, na administrao do hormnio do crescimento contaminado por prons, que resultar na CJD iatrognica e no transplante de enxertos de tecido da dura-mter contaminado por prons que provocam a doena em outras pessoas. J as doenas CJD, GSS e FFI familiares so doenas provocadas por prons dominantes herdados. Cinco mutaes diferentes do gene PrP mostraram ser geneticamente ligadas ao desenvolvimento da doena congnita. Muitos prons de doenas congnitas foram transmitidos a chimpanzs, macacos e camundongos portadores de transgenes PrP humano.20, 21, 22 Procedimentos Cirrgicos: Os procedimentos cirrgicos em pacientes diagnosticados como portadores da doena prinica devem ser minimizados. Acredita-se que a CJD tenha sido transmitida de um paciente portador da CJD para dois outros que, momentos depois, sofreram procedimentos neurocirrgicos na mesma sala de cirurgia.23 Embora no existam documentos que comprovem a transmisso de prons aos homens pela exposio da pele intacta ou das membranas mucosas e gstricas aos perdigotos de sangue ou de lquido cerebroespinhal, o risco da ocorrncia de tais infeces uma possibilidade. A esterilizao dos
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instrumentos e a descontaminao da sala de cirurgia devem ser realizadas de acordo com as recomendaes descritas. Por serem importantes o estabelecimento de um diagnstico definitivo de uma doena provocada por prons e a distino entre casos familiares e espordicos e as doenas adquiridas pela contaminao ocorrida em procedimentos mdicos ou pela ingesto de alimentos contaminados por prons, deve-se obter o tecido cerebral no-fixado. Em todos os casos de suspeita de uma doena prinica, o mnimo de um centmetro cbico de crtex cerebral no-fixado deve fazer parte da bipsia. A amostra deve ser bisseccionada a partir da superfcie cortical at a substncia branca do crebro adjacente, com uma metade da amostra fixada em formalina e a outra metade congelada. Autpsias: As autpsias de rotina e o processamento de quantidades de tecidos fixados em formalina contendo prons humanos requerem os cuidados de um nvel de biossegurana 2. 21 Na autpsia, todo o crebro deve ser coletado e cortado em seces coronais de aproximadamente 4cm de espessura. Pequenos blocos de tecidos podem facilmente ser removidos de cada seco coronal e colocados em um fixador para posterior anlise histopatolgica. Cada seco coronal dever ser imediatamente lacrada por calor em uma sacola de plstico para carga pesada. Pressupe-se que o exterior da sacola esteja contaminado por prons e outros patgenos. Com luvas novas ou com a ajuda de um assistente que esteja usando luvas sem contaminao, a sacola contendo a amostra dever ser colocada em outra sacola plstica que no possua uma superfcie exterior contaminada. As amostras, ento, devero ser congeladas em gelo seco ou colocadas diretamente em um freezer com temperatura de 70C, para armazenamento. Deve-se obter e congelar, no mnimo, uma seco coronal do hemisfrio do cerebelo contendo o tlamo e uma do hemisfrio cerebelar e do tronco cerebral. A ausncia de qualquer tratamento eficaz para doenas prinicas demanda muita cautela. As maiores concentraes de prons se encontram na rea do sistema nervoso central. Com base em estudos animais, h a possibilidade de que altas concentraes de prons sejam encontradas no bao, no timo, nos ndulos linfticos e nos pulmes. O principal cuidado a ser tomado, quando se
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estiver realizando um trabalho com material contaminado ou infectado por prons, o de evitar a perfurao da pele.25 A pessoa que estiver realizando o procedimento dever utilizar luvas resistentes a perfuraes. Caso ocorra uma contaminao acidental da pele, a rea dever ser esfregada com hidrxido de sdio a 1N durante cinco minutos e depois lavada com enormes quantidades de gua. As listas de 1 a 4 proporcionam procedimentos para a reduo de perfuraes na pele, formao de aerossis e contaminao da sala de cirurgia, das superfcies do necrotrio e dos instrumentos. As amostras no-fixadas de crebro, medula espinhal e de outros tecidos contendo prons humanos devero ser processadas com extremo cuidado em um nvel de biossegurana 3. Encefalopatia Espongiforme Bovina: O risco de contaminao humana pelos prons BSE ainda no est muito claro. Talvez, a abordagem mais prudente seja estudar os prons BSE em dependncias de um nvel de biossegurana 2 ou 3 dependendo das amostras a serem estudadas, como observado para prons humanos (crebro e medula espinhal). Doenas Prinicas em Roedores Experimentais: Os camundongos e hamsters so os animais experimentais de escolha para todos os estudos da doena prinica. Com o desenvolvimento do camundongo transgnico, que altamente susceptvel aos prons humanos, o uso de chimpanzs e macacos raramente necessrio. As maiores titulaes de prons (~109,5 DI50/g) so encontradas no crebro e na medula espinhal de roedores de laboratrio infectados com cepas adaptadas de prons.26, 27 As menores titulaes (~106 DI50 /g) esto presentes no bao e no sistema linforreticular.28, 29 Propriedades Fsicas dos Prons: A menor partcula de um pron infeccioso provavelmente de um dmero de PrPSc. Essa estimativa consistente com o tamanho de um alvo de radiao ionizante de 55 9 kDa.30 Portanto, os prons podem no ser contidos pela maioria dos filtros existentes que, de forma eficaz, eliminam as bactrias e os vrus. Alm disso, os prons se agregam s partculas de tamanho no-uniforme e, assim, os detergentes no conseguem solubiliz-los, exceto sob condies de desnaturao em que a infectividade perdida.31, 32 Os prons resistem inativao
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por meio da nuclease,33 da irradiao de UV a 254nm34, 35 e do tratamento com psoralens,36 ctions divalentes, queladores do on metal, cidos (entre pH 3 e 7), hidroxilamina, formalina, ebulio ou proteases.37, 38 Inativao dos prons. Os prons se caracterizam pela extrema resistncia aos procedimentos convencionais de inativao, incluindo a irradiao, a ebulio, o calor seco e os agentes qumicos (formalina, betapropiolactona e lcoois). Embora a infectividade do pron em amostras purificadas seja diminuda pela prolongada digesto com proteases,39, 40 os resultados de ebulies em dodecilsulfato de sdio e uria so variveis. A esterilizao de extratos cerebrais de roedores com altas titulaes requer o uso da autoclave a 132C durante quatro horas e meia. Os solventes orgnicos desnaturadores, como o fenol, os reagentes caotrpicos, como o tiocianato de guanidina, e os lcalis, como o NaOH, podem tambm ser utilizados para a esterilizao.41, 42, 43, 44, 45 Os prons so inativados por meio do NaOH a 1N, do cloridrato ou do isocianato de guanidnio a 4.0 M, do hipoclorito de sdio (concentrao de cloro livre 2%) e da autoclave a vapor a 132C durante quatro horas e meia.46, 47, 48, 49 Recomenda-se que o dejeto seco seja autoclavado a 132C durante quatro horas e meia ou ento incinerado. Grandes volumes de dejetos lquidos infecciosos contendo altas titulaes de prons podem ser totalmente esterilizados por meio do tratamento com NaOH a 1N (concentrao final) ou por meio de uma autoclave a 132C durante quatro horas e meia. Os vasilhames plsticos, que podem ser descartados como dejeto seco, so altamente recomendveis. Uma vez que o procedimento de vaporizao com paraformaldedo no diminui a titulao do prons, as cabines de segurana devem ser descontaminadas com NaOH a 1N, seguido de HCI a 1N e depois enxaguadas com gua. Os filtros HEPA devem ser autoclavados e incinerados. Embora no haja evidncias que possam sugerir que a transmisso via aerossol ocorra na doena natural, mais prudente evitar a formao de aerossis ou perdigotos durante a manipulao de tecidos ou lquidos e durante a necropsia de animais experimentais. Recomenda-se, tambm, o uso de luvas para atividades que propiciem o contato direto da pele com tecidos e lquidos infecciosos. Os tecidos fixados em formaldedos e embebidos em
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parafina, especialmente os tecidos cerebrais, permanecem infecciosos. Alguns pesquisadores recomendam que tecidos de casos suspeitos de doenas prinicas fixados em formaldedos sejam imersos, durante 30 minutos, em cido frmico a 96% ou em fenol, antes de ser processados histopatologicamente,50 mas esse tratamento pode distorcer a neuropatologia microscpica. Manuseio e Processamento de Tecidos de Pacientes com Suspeita de Doena por Prons: As caractersticas especiais do trabalho com prons requerem uma ateno particular com as instalaes, os equipamentos, as normas e os procedimentos envolvidos. As consideraes relacionadas sublinhadas nas seguintes listas devem ser incorporadas administrao dos riscos laboratoriais para este trabalho. Lista 1. Precaues padro* para autpsias de pacientes com suspeita de doena por prons 1. O atendimento dever ser limitado a um patologista experiente e a uma equipe pequena. Os membros da equipe devero evitar o contato direto com o corpo, mas devero assistir ao procedimento por meio do manuseio dos instrumentos e recipientes da amostra.
*No confundir com procedimentos padro universais.
2. Um traje padro para autpsia obrigatrio. a. Ao invs de um avental de tecido, deve-se usar uma roupa descartvel e prova de gua. b. Luvas resistentes a cortes e perfuraes devero ser colocadas debaixo de dois pares de luvas cirrgicas ou luvas chain mail, que devero ser usadas entre dois pares de luvas cirrgicas. c. Os aerossis so formados principalmente durante a abertura do crnio com uma serra Stryker. Uma proteo respiratria adequada dever ser utilizada (PAPR). 3. Para reduzir a contaminao da sala de autpsia: a. A mesa de autpsia dever ser coberta com um lenol descartvel com fundo plstico prova dgua. b. Os instrumentos contaminados devero ser colocados em um papel absorvente.
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c. O crebro dever ser removido, enquanto a cabea dever ser colocada em um saco plstico para a reduo da nebulizao e de borrifos. d. O crebro poder ser colocado em um recipiente com um revestimento de saco plstico para pesagem. e. O crebro dever ser colocado em uma tbua de corte e as amostras adequadas sero dissecadas para o congelamento instantneo (veja a lista 3). f. O crebro ou os rgos a ser fixados devero ser imediatamente colocados em um recipiente com um tampo neutro de formalina a 10%. g. Na maioria dos casos de suspeita de doena prinica, a autpsia pode ser limitada somente ao exame do crebro. Em casos que exijam uma autpsia completa, devemos considerar o exame e a amostragem dos rgos torcicos e abdominais in situ. Lista 2. Procedimentos de descontaminao da sala de autpsia 1. Os instrumentos (grampos) e as lminas da serra devero ser colocados em uma placa grande de ao inoxidvel que dever ser imersa durante uma hora em hidrxido de sdio a 2N ou durante duas horas em hidrxido de sdio a 1N. Depois devero ser bem enxaguados em gua antes de serem autoclavados a uma temperatura de 134C (autoclave de vapor com deslocamento de gravidade por 1 hora; autoclave de vapor para cargas porosas por um ciclo de 18 minutos a 30 libras por polegada quadrada ou seis ciclos de 3 minutos a 30 libras por polegada quadrada). 2. A serra Stryker dever ser descontaminada com repetidas umidificaes com uma soluo de hidrxido de sdio a 2N, por um perodo de um hora. Uma lavagem adequada dever ser realizada para remoo do NaOH residual. 3. O papel absorvente que cobre a mesa e envolve os instrumentos, as roupas descartveis, etc. devero ser duplamente embalados em sacos adequados para lixos infecciosos, para posterior incinerao. 4. Quaisquer reas suspeitas de contaminao da mesa ou da sala de autpsia devero ser descontaminadas por re146
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petidos banhos de uma soluo de hidrxido de sdio a 2N, durante uma hora. Lista 3. Procedimentos de corte do crebro 1. Aps a adequada fixao em formaldedo (pelo menos de 10 a 14 dias), o crebro dever ser examinado e cortado sobre uma mesa coberta com um papel absorvente que possua a parte de trs coberta por um material impermevel. 2. As amostras para a histologia devero ser etiquetadas com o termo: As precaues da CJD. Para laboratrios que no possuam equipamento para colorao e imerso ou um micrtomo exclusivo para doenas infecciosas incluindo a CJD, blocos de tecido fixado pela formalina podero ser colocados em cido frmico absoluto a 96% durante 30 minutos, seguido de uma soluo de tampo neutro de formalina a 10% por pelo menos 48 horas.51 O bloco de tecido ser, ento, imerso em parafina como normalmente realizado. As tcnicas padro neuroistolgicas ou imunoistoqumicas no so afetadas pelo tratamento com o cido frmico. Porm, de acordo com experincias, os cortes de tecidos se tornam quebradios e danificados durante o seccionamento. 3. Todos os instrumentos e as superfcies que tiveram um contato com o tecido devero ser descontaminados como descrito na lista 2. 4. Os resduos de tecidos, fragmentos de cortes e a soluo de formaldedo contaminado devero ser descartados como lixo hospitalar para eventual incinerao. Lista 4. Preparao do tecido 1. Os tcnicos de histologia devero usar luvas, aventais, jalecos e proteo facial. 2. A fixao adequada de pequenas amostras de tecidos (por exemplo, bipsias) de um paciente com suspeita de doena prinica dever passar por uma ps-fixao em cido frmico absoluto a 96% durante 30 minutos, seguido de 48 horas em formalina fresca a 10%.
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3. O dejeto lquido dever ser coletado em um garrafo para lixo de 4 litros contendo 600ml de hidrxido de sdio a 6N. 4. As luvas, os moldes imersos e todos os materiais de manipulao devero ser descartados como lixo de perigo biolgico. 5. As fitas de tecido devero ser processadas manualmente para prevenir a contaminao dos processadores de tecido. 6. Os tecidos devero ser imersos em um molde descartvel. Caso haja sua utilizao, as pinas devero ser descontaminadas. 7. Ao preparar as seces, recomenda-se o uso de luvas. Os cortes no usados devero ser coletados e desprezados em um recipiente para lixo de perigo biolgico. A faca dever ser lavada com uma soluo de NaOH a 1-2N e dever ser descartada imediatamente em um recipiente para objetos cortantes biolgicos. As lminas devero ser etiquetadas com os dizeres Precaues contra CDJ. O bloco seccionado dever ser fixado com parafina. 8. Colorao de rotina: a. As lminas devero ser processadas manualmente. b. Os reagentes devero ser preparados em clices de 100ml descartveis. c. Aps a colocao da lamnula, as lminas devero ser descontaminadas ao mergulh-las em uma soluo de NaOh a 2N durante 1 hora. d. As lminas devero ser etiquetadas como CDJ Infecciosos. 9. Outras sugestes: a. Os clices descartveis ou as estantes para lminas podero ser usados para os reagentes. b. As lminas para a imunocitoqumica podero ser processadas em placas de Petri descartveis. c. O equipamento dever ser descontaminado como descrito.
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Seo VII-E: Agentes Rickettsiais

Agente: Coxiella burnetii Dos agentes rickettisiais, a Coxiella burnetii provavelmente o agente que apresenta o maior risco de uma infeco laboratorial. O organismo altamente contagioso e incrivelmente resistente secagem e s condies ambientais.1 A dose infecciosa dos organismos da fase I virulenta em laboratrios animais tem sido calculada como sendo to pequena quanto um nico microorganismo. A dose humana infecciosa estimada ID25-50 (inalao) para a febre Q de 10 organismos.2 O resumo de Pike indica que a febre Q a segunda infeco associada a laboratrio mais comumente relatada, com surtos envolvendo 15 ou mais pessoas registradas em vrias instituies.3, 4 Vrios mamferos domsticos e selvagens so os hospedeiros naturais da febre Q e podem servir como fontes potenciais de infeco para as pessoas que trabalham em um laboratrio e para os tratadores de animais de laboratrio. A exposio a ovelhas naturalmente infectadas e freqentemente assintomticas e a seus filhotes so parte de um risco documentado ao pessoal.5, 6 Embora rara, a C. burnetii conhecida por causar infeces crnicas como a endocardite ou a hepatite granulomatosa. Riscos em Laboratrio: A necessidade do uso de ovos embrionrios ou de tcnicas de cultura celular para a reproduo da C. burnetii leva a extensivos procedimentos de purificao. A exposio aos aerossis contagiosos e a inoculao parenteral so as fontes mais provveis de contgio para as pessoas que trabalham em laboratrios e as que tratam de animais.7 Os agentes podem ser encontrados em artrpodes infectados, no sangue, na urina, nas fezes, no leite e nos tecidos de hospedeiros animais ou humanos infectados. As placentas de ovelhas infectadas podem conter at 109 organismos por grama de tecido,8 enquanto que o leite pode conter 105 organismos por grama. Precaues Recomendadas: As prticas e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicadas para procedimentos laboratoriais no-reprodutivos, incluindo os exames sorolgicos e a colorao de impresso dos esfregaos. As prticas e as instalaes
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do nvel de biossegurana 3 so indicadas para atividades envolvendo a inoculao, a incubao e a coleta de ovos embrionados ou de culturas de clulas, a necropsia de animais infectados e a manipulao de tecidos infectados. Uma vez que cobaias e outros roedores possam conter o agente nas fezes ou na urina,9 os roedores experimentalmente infectados devero ser mantidos sob um nvel de biossegurana animal 3. O isolamento clonal especfico de cepas no-virulentas (fase II) pode ser considerado para condies de conteno inferiores.10 Spinelli11 e Bernard12 descreveram as precaues recomendadas para as instalaes quando ovelhas so utilizadas como animais experimentais. Uma nova fase I de investigao, a vacina contra a febre Q (IND), j se encontra disponvel para os indivduos includos no Special Immnunizations Program (USAMRIID), em Fort Detrick, Maryland. O uso da vacina deve se limitar aos indivduos que esto expostos a altos riscos e que no tenham demonstrado sensibilidade ao antgeno da febre Q. Os indivduos que possuem uma doena cardiovalvular no devero trabalhar com a C. burnetii. Transferncia do Agente: A licena para importao desse agente deve ser obtida junto ao CDC. No caso de uma licena para exportao, esta dever ser conseguida no Department of Commerce. O registro do laboratrio junto ao CDC necessrio para envio ou recebimento do agente. J a licena para importao ou transporte domstico do agente poder ser obtida no USDA/APHI/VS. Agentes:Rickettsia prowazekii, Rickettsia typhi (R. mooseri), Orientia (Rickettsia) tsutsugamushi e os agentes do Grupo da Febre Maculosa de Doena Humana; Rickettsia ricketsii, Rickettsia conorii, Rickettsia akari, Rickettsia australis, Rickettsia siberica e Rickettsia japonicum. Pike relatou 57 casos de tifo (tipo no especificado) associado a laboratrio; 56 casos de tifo epidmico, com trs mortes; e alguns casos de tifo murino.13 Mais recentemente, trs casos de tifo murino foram relatados em um laboratrio de pesquisa.14 Dois desses trs casos estavam associados ao manuseio de materiais infecciosos em bancadas abertas. O terceiro caso foi provocado por uma inoculao parenteral acidental. Esses trs casos representaram
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uma incidncia de 20% das pessoas que trabalham com materiais infecciosos. A febre maculosa das Montanhas Rochosas um risco documentado para as equipes laboratoriais. Pike relatou 63 casos adquiridos em laboratrio, dos quais 11 foram fatais.15 Oster, por sua vez, registrou 9 casos que ocorreram por um perodo de 6 anos em um laboratrio, que acreditava serem resultantes de uma exposio aos aerossis infecciosos.16 Riscos em Laboratrio: A inoculao parenteral acidental e a exposio aos aerossis contagiosos so as fontes mais provveis de infeces associadas a laboratrio.17 A transmisso bemsucedida por meio de aerossis contaminados por R. rickettsii foi documentada experimentalmente em primatas no-humanos.18 Cinco casos de varola por riqutsia registrados por Pike estavam associados exposio s picadas de caros infectados.19 Mamferos naturalmente ou experimentalmente infectados, seus ectoparasitas e seus tecidos infectados so considerados riscos potenciais de infeco humana. Os organismos so relativamente instveis sob condies ambientais normais. Precaues Recomendadas: As prticas e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicadas para procedimentos laboratoriais no-reprodutivos, incluindo procedimentos sorolgicos e de anticorpo fluorescente e, ainda, a colorao de impresso dos esfregaos. As prticas e as instalaes do nvel de biossegurana 3 so indicadas para todas as outras manipulaes de materiais sabidamente ou potencialmente infecciosos, incluindo a necropsia de animais experimentalmente infectados e a triturao de seus tecidos, a inoculao, a incubao e a coleta de ovos embrionados e as culturas de clulas. As prticas e as instalaes do nvel de biossegurana animal 2 so indicadas para o alojamento de mamferos, com exceo dos artrpodes experimentalmente infectados. J as prticas e as instalaes do nvel de biossegurana 3 so indicadas para estudos animais com artrpodes naturalmente ou experimentalmente infectados por agentes rickettsiais da doena humana. Devido ao valor comprovado da terapia com antibiticos nos estgios iniciais da infeco, essencial que os laboratrios que
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trabalham com a riqutsia possuam um sistema eficaz de relato de doenas febris na equipe laboratorial, uma avaliao mdica de casos potenciais e, quando indicada, a instituio de uma terapia antibitica adequada. As vacinas, atualmente, no esto disposio para uso em homens (veja a seo seguinte sobre Vigilncia). Transferncia do Agente: A licena para importao desse agente deve ser obtida junto ao CDC. No caso de uma licena para exportao, esta dever ser conseguida no Department of Commerce. O registro do laboratrio junto ao CDC necessrio para envio ou recebimento do agente. Vigilncia da Equipe Laboratorial em Relao s Infeces Rickettsiais Adquiridas em Laboratrio Sob circunstncias naturais, a gravidade da doena causada por agentes rickettsiais varia consideravelmente. Em laboratrio, inoculaes muito grandes so possveis, o que poderia produzir respostas raras, mas muito srias. A vigilncia da equipe em relao s infeces por riqutsias adquiridas em laboratrio pode reduzir de forma dramtica o risco de srias conseqncias da doena. A experincia mostra que as infeces, quando adequadamente tratadas com quimioterapia anti-rickettisial especfica no primeiro dia da doena, geralmente no provocam srios problemas no indivduo. A demora em adotar essa quimioterapia, porm, pode resultar em uma doena debilitante ou muito aguda, variando com perodos crescentes de convalescena no caso do tifo, e em morte no caso de tifo rural em infeces por R. rickettsii. A chave para a reduo da gravidade da doena provocada por infeces associadas a laboratrio um sistema confivel de vigilncia, que inclui: 1. Disponibilidade total de um mdico experiente; 2. Doutrinao de toda a equipe sobre os riscos potenciais do trabalho com agentes rickettisiais e as vantagens de uma terapia precoce; 3. Um sistema de relatrios para todas as exposies conhecidas e os acidentes ocorridos; 4. Relatrios de todas as doenas febris, especialmente as associadas dor de cabea, ao mal-estar e prostrao, quando no existir nenhuma outra causa; e 5. Uma atmosfera de no-punio que possa motivar o relato de qualquer doena febril. Os agentes rickttesiais podem ser manipulados em um laboratrio com um perigo real mnimo, quando um sistema adequado
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de vigilncia for complementado por uma equipe que tenha conhecimento sobre os riscos de infeces por riqutsias e usos de medidas seguras recomendadas pelo Resumo das Caractersticas dos Agentes.
Seo VII-F: Agentes Virais (no incluindo o arbovrus)

Agentes: Hantavrus O trabalho com o vrus de Hantaan (febre hemorrgica com sndrome renal) e outros hantavrus (Puumala, Seul e Sin Nombre sendo ou no registrados no International Catalogue of Arboviruses and Certain Other Viruses 1985, como o vrus El Moro Canyon) em ratos, ratazanas e outros roedores de laboratrio dever ser conduzido com especial cuidado devido ao risco extremo de contgio por aerossis, especialmente da urina de roedores infectados. A sndrome pulmonar por hantavrus (HPS) uma nova doena grave e freqentemente fatal, causada pelo vrus Sin Nombre e/ou um vrus relacionado.1 A maioria dos casos de patologias humanas resultou de exposies a roedores selvagens naturalmente infectados. Os vetores artrpodes no so conhecidos como transmissores do hantavrus. Nenhuma transmisso de um indivduo para outro foi provocada por um vrus associado a essa doena. Riscos em Laboratrio: A transmisso laboratorial do hantavrus de roedores para os homens por aerossol bem documentada.2, 3, 4, 5 As exposies s excrees de roedores, ao material fresco para necropsia e s roupas que envolvem os animais de laboratrio so supostamente associadas ao risco. Outras vias potenciais de infeco incluem a ingesto, o contato de materiais contagiosos com membranas mucosas ou pele rachada e, em particular, as mordidas de animais. Quatro trabalhadores de laboratrio foram infectados enquanto trabalhavam com o vrus Hantaan adaptado a uma cultura de clulas. Embora os procedimentos associados s infeces ainda no estejam bem explicados, esses quatro indivduos trabalharam repetidas vezes com culturas de hantavrus e realizaram a cen153
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trifugao do vrus concentrado.6 O RNA viral foi detectado em amostras de necropsias e no sangue e plasma de um paciente coletados no incio da doena.7 As implicaes dessas descobertas para a infectividade do sangue ou dos tecidos so desconhecidas. Precaues Recomendadas: As prticas e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicadas para o manuseio laboratorial de soros de pessoas potencialmente infectadas com os agentes da HPS. O uso de uma cabine de segurana biolgica certificada recomendado para todas as manipulaes com lquidos humanos corporais quando existe um potencial para a formao de borrifos ou aerossis. Amostras de tecidos potencialmente infectados devero ser manipuladas em instalaes do NB-2, seguindo as prticas e os procedimentos do NB-3. A reproduo do vrus em culturas de clulas dever ser realizada em uma instalao do NB-3, seguida das prticas e dos procedimentos do NB-3. O crescimento em grande escala do vrus, incluindo a preparao e o manuseio dos concentrados virais, dever ser feito em instalaes de conteno do NB-4. Espcies de roedores experimentalmente infectados conhecidos por no apresentarem o vrus nas fezes podero ser alojados em instalaes do NBA-2, usando prticas e procedimentos do NBA-2. As cabines de segurana e outros dispositivos de conteno fsica primria devero ser utilizados onde procedimentos com um alto potencial para formao de aerossis estiverem sendo conduzidos. O soro ou as amostras de tecidos de roedores potencialmente infectados devero ser manipulados em NB-2, usando prticas e procedimentos de um NB-3. Todo o trabalho envolvendo a inoculao do vrus contendo amostras do P. maniculatus ou outras espcies permissivas dever ser conduzido em NBA-4. Transferncia do Agente: A licena para importao desses agentes deve ser conseguida no CDC. A licena para exportao dever ser conseguida junto ao Department of Commerce e necessrio o registro do laboratrio no CDC antes do envio ou recebimento dos agentes.
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Agentes:Hendra e Vrus Semelhantes Hendra (inclusive o vrus anteriormente conhecido como Morbilivrus Eqino) Surtos de um paramixovrus anteriormente desconhecido, que foi primeiramente chamado de morbilivrus eqino e posteriormente denominado de vrus Hendra, ocorreram em cavalos na Austrlia em 1994 e 1995.8, 9, 10, 11, 12 Trs pessoas que possuam um contato prximo com cavalos enfermos desenvolveram a encefalite ou a doena respiratria e duas falecerem. Nenhum surto associado doena humana foi reconhecido, mas dois indivduos que trabalhavam em chiqueiro de porcos lembraram de uma doena que tiveram semelhante gripe, na mesma poca em que ocorreram os surtos. Alm disso, todos os dois indivduos possuam titulaes neutralizadoras de anticorpos ao vrus de Menangle. De 1998 a 1999, um surto da doena provocado por um vrus semelhante, mas distinto do Hendra, aconteceu em Cingapura e na Malsia.13 Nesses dois pases, a doena humana caracterizada por febre, dor de cabea grave, mialgia e sinais de encefalite acometeu indivduos que tiveram um contato prximo com porcos (isto , fazendeiros e trabalhadores de abatedouros). Poucos pacientes desenvolveram uma doena respiratria. Metade das pessoas infectadas por esse vrus faleceram. O(s) hospedeiro(s) natural(is) da Hendra e dos vrus semelhantes Hendra no foram identificados. Porm, na Austrlia os morcegos eram animais suspeitos de carregarem o vrus Hendra. Estudos epidemiolgicos e laboratoriais esto em andamento. Nenhuma infeco adquirida em laboratrio conhecida por ter sido resultante da exposio ao vrus Hendra ou semelhante a ele. Porm, deve-se observar que nos surtos da Austrlia e da Malsia/Cingapura, o vrus foi reconhecido como um significativo patgeno veterinrio. Estudos laboratoriais foram limitados aos laboratrios de doenas infecciosas humanas e/ou veterinrias de alta conteno. Os cientistas e veterinrios da sade pblica, por sua vez, tm acompanhado de perto todos esses estudos. Riscos em Laboratrio: O modo exato de transmisso ainda no foi estabelecido. Todos os casos at hoje estavam associados ao contato prximo com cavalos e com sangue ou lquidos corporais de cavalos (Austrlia) ou de porcos (Malsia/Cingapura). O
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vrus Hendra e o semelhante a ele foram encontrados nos tecidos de animais contaminados durante os surtos descritos. Em um recente surto na Malsia e em Cingapura, o antgeno viral foi descoberto no sistema nervoso central, nos tecidos renais e pulmonares de casos humanos fatais.14 Precaues Recomendadas: Devido aos riscos desconhecidos para os trabalhadores do laboratrio e ao impacto potencial sobre criaes de animais nativos, o vrus dever ser pesquisado ou diagnosticado no laboratrio. Os fiscais da sade e os gerentes dos laboratrios devero avaliar a necessidade de se realizar um trabalho com o vrus e a capacidade das dependncias antes de iniciarem qualquer contato com o vrus Hendra, com o semelhante a ele ou com vrus suspeitos relacionados. Especialistas em doenas da sade pblica e veterinria devero desenvolver planejamentos, como estudos laboratoriais e transporte de amostras e de substncias isoladas para o laboratrio. At que mais informaes sejam conseguidas, o manuseio de amostras clnicas humanas e as tentativas de isolamento desse vrus devero ser realizados em dependncias de um NB-3 e por pessoas experientes. O NB-4 (laboratrio escafandro ou cabines de segurana classe III) dever ser utilizado em qualquer trabalho envolvendo animais contaminados ou grandes quantidades de vrus.15 Transferncia do Agente: A licena para importao desse agente deve ser obtida junto ao CDC. No caso de uma licena para exportao, esta dever ser conseguida no Department of Commerce. O registro do laboratrio junto ao CDC necessrio para envio ou recebimento do agente. Agentes: Vrus da Hepatite A, Vrus da Hepatite E As infeces com os vrus da hepatite A e E adquiridas em laboratrio no parecem ser importantes riscos ocupacionais para as equipes laboratoriais. Porm, a doena um risco documentado para as pessoas que manuseiam animais e para outros que trabalham com chimpanzs e outros primatas no-humanos experimental ou naturalmente contaminados.16 O vrus da hepatite E parece ser um risco menor para as pessoas que trabalham com ele em relao ao grande risco envolvendo os que manuseiam o vrus da hepatite A, exceto durante a gravidez, quando a infeco pode resultar
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em uma doena fatal ou grave. Os trabalhadores que manipulam outros primatas recentemente capturados e susceptveis (macacos-coruja, sagis) podem tambm estar correndo um srio risco. Riscos em Laboratrio: Os agentes podem ser encontrados nas fezes, na saliva e no sangue de humanos e primatas nohumanos contaminados. A ingesto de fezes, gua de vaso sani trio e outros materiais contaminados o risco primrio para a equipe laboratorial. A importncia da exposio aos aerossis no foi demonstrada. Cepas atenuadas ou no-virulentas dos vrus da hepatite A resultantes de passagens em srie em cultura celular foram descritas.17, 18 Precaues Recomendadas: As prticas, os equipamentos de segurana e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicados para atividades com fezes humanas ou de primatas nohumanos conhecidamente ou potencialmente contaminadas. J as prticas e as instalaes do nvel de biossegurana animal 2 so indicadas para atividades que usem primatas no-humanos naturalmente ou experimentalmente contaminados. Os tratadores de animais devero usar luvas e tomar outras precaues adequadas para evitar possveis exposies fecais-orais. Uma vacina inativada licenciada contra a hepatite A est disponvel na Europa. Nos Estados Unidos encontramos somente uma vacina de pesquisa recomendada para os trabalhadores de laboratrio. As vacinas contra a hepatite E no esto disponveis para o uso em humanos. Transferncia do Agente: A licena para importao desse agente dever ser obtida junto ao CDC. Agentes:Vrus da Hepatite B, Vrus da Hepatite C (anteriormente conhecidos como Vrus no-A e Vrus no-B) e Vrus da Hepatite D A hepatite B tem sido uma das infeces associadas a laboratrio19 mais freqentemente encontradas, e os trabalhadores de laboratrio so reconhecidos como o grupo de maior risco de contaminao por esse vrus.20 Os indivduos contaminados pelo vrus da hepatite B correm o risco de contrarem o vrus da hepatite D (delta), que incompleto e requer a presena do vrus da hepatite B para se reproduzir.
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A infeco por hepatite C pode acontecer em um laboratrio. A prevalncia do anticorpo da hepatite C levemente maior em trabalhadores da rea da sade pblica do que na populao em geral. Evidncias epidemiolgicas indicam que a hepatite C disseminada predominantemente pela via parenteral.21, 22, 23 Riscos em Laboratrio: O vrus da hepatite B pode ser encontrado no sangue e nos produtos sangneos de origem humana, na urina, no smen, no lquido cerebroespinhal e na saliva. A inoculao parenteral, a exposio das membranas mucosas e da pele lesada aos perdigotos so os riscos primrios laboratoriais. O vrus pode ser estvel no sangue ou nos componentes do sangue seco. Cepas atenuadas ou no-virulentas no foram identificadas. O vrus da hepatite C tem sido detectado primariamente em sangue e soro, menos freqentemente na saliva e raramente em urina ou smen. Ele parece ser relativamente instvel, quando estocado em temperatura ambiente e em congelamentos e descongelamentos repetidos. Precaues Recomendadas: As prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicados para todas as atividades utilizando lquidos corporais e tecidos conhecidamente ou potencialmente contaminados. Precaues pessoais e conteno primria adicional, como as descritas para o nvel de biossegurana 3, podem ser indicadas para atividades com potencial para a formao de perdigotos ou aerossis e para as atividades envolvendo quantidades ou concentraes de produo de materiais infecciosos. As prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana animal 2 so indicados para atividades que utilizem chimpanzs ou outros primatas no-humanos contaminados naturalmente ou experimentalmente. Deve-se usar luvas quando trabalhos com animais contaminados estiverem sendo realizados ou quando houver a possibilidade de contato da pele com materiais contaminados. As vacinas recombinantes licenciadas contra a hepatite B esto disponveis e so altamente recomendadas e oferecidas aos trabalhadores de laboratrio.24 J as vacinas contra as hepatites C e D ainda no esto disponveis para uso humano.
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Alm dessas precaues recomendadas, as pessoas que trabalham com o HBV, o HVC ou outros patgenos do sangue devero consultar o OSHA Bloodborne Pathogen Standard.25 Questes relacionadas interpretao desses padres devero ser direcionadas aos escritrios federais, regionais e estaduais da OSHA. Transferncia do Agente: A licena para importao desses agentes dever ser obtida junto ao CDC. Agentes:Herpesvirus simiae (Cercopithecine herpesvirus [CHV-1], B-virus) O CHV-1 um alfaherpesvrus que ocorre naturalmente contaminando smios livres ou em cativeiro, incluindo a Macaca mulatta, a M. fascicularis e outros membros do gnero. Em smios, este est associado a leses orais vesiculares agudas, assim como infeces latentes e freqentemente recrudescentes.26 A infeco humana tem sido documentada em pelo menos 50 casos, geralmente com um resultado fatal ou com srias seqelas de encefalites.27, 28, 29, 30, 31, 32, 33 Vinte e nove casos fatais de infeces humanas (com um ndice de fatalidade de 58%) com o CHV-1 foram relatados.34, 35, 36, 37 Embora o CHV-1 apresente um risco potencial aos trabalhadores de laboratrios que manipulam esse agente, as infeces humanas com o CHV-1 adquiridas em laboratrio, com raras excees, se limitaram aos trabalhadores que tiveram um contato direto com os smios. As culturas celulares primrias de smios, incluindo as clulas dos rins dos macacos rhesus comercialmente preparadas, ocasionalmente podem ser assintomaticamente contaminadas com o CHV-1 e comprometidas em um caso humano.38 O treinamento especfico peridico sobre a avaliao do risco, a compreenso dos modos de transmisso, a exposio ao CHV-1 e o uso adequado de equipamentos de proteo pessoal so itens altamente recomendados para as pessoas que trabalham com ou que possuam um contato direto com smios, seus tecidos e com um meio ambiente potencialmente contaminado por eles (incluindo gaiolas, brinquedos e materiais de dejetos). necessrio um treinamento adequado para primeiros socorros e para o abastecimento, alm de um apoio mdico emergencial.
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Riscos em Laboratrio: O alojamento assintomtico acontece na maioria das transmisses entre os macacos e os trabalhadores humanos, embora o maior risco de se adquirir o vrus CHV1 de smios seja por meio da mordida de um macaco contaminado que possua leses ativas. A contaminao da pele rachada ou das membranas mucosas por secrees orais, oculares ou urogenitais de smios contaminados durante suas infeces recrudescentes ou primrias tambm perigosa e tem provocado pelo menos um caso de mortalidade ocupacional.39 A estabilidade de partculas virais em gaiolas e outras superfcies no conhecida, mas o risco potencial dever ser reconhecido para cortes ou abrases provocados por essas superfcies potencialmente contaminadas. Acreditase que outros alfaherpesvrus no iro persistir no meio ambiente por longo tempo. O trabalho experimental com animais indica que a importncia da exposio aos aerossis do CHV-1 possivelmente mnima. Cepas atenuadas ou no-virulentas ainda no foram identificadas. O agente tambm pode ser encontrado em vsceras torcicas e abdominais e nos tecidos nervosos de smios naturalmente contaminados. Esses tecidos e as culturas preparadas a partir deles so riscos potenciais.40 Precaues Recomendadas: As prticas e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicadas para todas as atividades envolvendo uso ou manipulao de tecidos lquidos corporais e materiais para cultura de tecidos de smios. As prticas e as precaues individuais adicionais, como as detalhadas para o nvel de biossegurana 3, so indicadas para atividades envolvendo uso ou manipulao de qualquer material conhecido por conter ou supostamente conter o CHV-1, incluindo a reproduo in vitro do vrus para diagnstico. Seria prudente limitar as manipulaes de culturas positivas contendo altas titulaes de vrus para instalaes do nvel de biossegurana 4 (CSB de classe III ou laboratrio escafandro veja a seo III), dependendo da deciso do diretor do laboratrio. As prticas e as instalaes do nvel de biossegurana 4 so recomendadas para as atividades envolvendo a reproduo e a manipulao de quantidades e concentraes de produo de CHV-1.
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Todas as colnias de smios, mesmo as que acreditamos no possurem o anticorpo do CHV-1, devem ser vistas como naturalmente contaminadas. Os animais com leses orais sugestivas de uma infeco pelo vrus B ativo devero ser identificados e manipulados com extremo cuidado. Os estudos com animais experimentalmente contaminados por CHV-1 devero ser conduzidos em um NBA-3. Existem normas para o trabalho seguro com smios e estas devero ser consultadas.41, 42 O uso de luvas, mscaras, jalecos e macaces recomendado para todas as pessoas enquanto estiverem trabalhando com primatas no-humanos especialmente smios e outras espcies do Velho Mundo e para todas as pessoas que entrarem nas salas de animais onde os primatas no-humanos so alojados. Para minimizar o potencial da exposio da membrana mucosa,43 alguma forma de barreira dever ser utilizada para prevenir a contaminao dos olhos, da boca e das narinas por borrifos e perdigotos. O uso de diferentes tipos de equipamento de proteo individual (culos de proteo, culos com escudos slidos ou escudos faciais usados juntamente com mscaras e respiradores) deve ser obrigatrio para a avaliao do risco em laboratrio. As especificaes do equipamento devero ser balanceadas com o trabalho realizado, de maneira que as barreiras selecionadas no aumentem o perigo apresentado pelo local de trabalho, obscurecendo a viso e contribuindo para o aumento de mordidas, picadas por agulhas ou arranhes de animais. As drogas antivirais representam grandes promessas em relao terapia de coelhos contaminados com H. simiae. A limitada experincia clnica44, 45 sugere que essa terapia pode ser estendida ao homem.46, 47 Devido gravidade da infeco com o vrus, pessoas com experincia mdica devero estar constantemente presentes e disponveis para que possam gerenciar os incidentes envolvendo as exposies ao agente ou as infeces suspeitas. A transmisso de homens para homens foi documentada em um nico caso, mostrando que se deve tomar cuidado com lquidos vesiculares, secrees orais e secrees conjuntivais de pessoas contaminadas.48 As vacinas no esto disponveis para o uso em humanos. Transferncia do Agente: A licena para a importao do agente dever ser obtida junto ao CDC.
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Agente: Herpesvrus Humano Os herpesvrus so patgenos humanos ubquos e so comumente encontrados em uma variedade de materiais clnicos submetidos ao isolamento do vrus. Embora poucos vrus sejam agentes comprovadamente causadores de infeces associadas a laboratrio, eles so patgenos primrios e oportunistas, especialmente em hospedeiros imunocomprometidos. Os vrus herpes simples 1 e 2 e o vrus da varicela apresentam algum risco pelo contato direto e/ou pelos aerossis. J os citomegalovrus e o vrus Epstein-Barr apresentam riscos de infeco relativamente baixos para as equipes de laboratrio. O risco de uma infeco laboratorial tendo os herpesvrus 6 e 7 como agentes etiolgicos ainda desconhecido. Embora esse grupo diversificado de agentes virais nativos no atenda aos critrios para que possam ser includos no resumo das caractersticas dos agentes (isto , risco comprovado ou alto risco potencial para infeces associadas a laboratrio e para graves seqelas provocadas por uma infeco), a freqncia de sua presena em materiais clnicos e o uso comum desse grupo em pesquisas garante sua incluso nesta publicao. Riscos em Laboratrio: Os materiais clnicos e as substncias isoladas dos herpesvrus apresentam um risco de infeco aps ingesto, inoculao parenteral acidental, exposio das membranas mucosas dos olhos, do nariz ou da boca aos perdigotos ou inalao de materiais concentrados nebulizados. As amostras clnicas contendo o Herpesvirus simiae (vrus B), mais virulento, podem ser inadvertidamente submetidas a diagnstico de uma suspeita infeco por herpes simples. O vrus tambm foi encontrado em culturas de clulas renais primrias dos macacos rhesus. O citomegalovrus pode ser um risco especial durante a gravidez devido infeco potencial do feto. Precaues Recomendadas: As prticas, os equipamentos de conteno e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicados para atividades que utilizem materiais clnicos sabidamente ou potencialmente infecciosos ou culturas de agentes virais nativos que estejam associadas ou sejam identificadas como patgenos primrios de doena humana. Embora existam poucas evidncias de que os aerossis infecciosos sejam uma fonte significativa de infeces associadas a laboratrio, mais prudente evitar a for162
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mao de aerossis durante a manipulao de materiais clnicos ou de produtos isolados ou durante a necropsia de animais. Os dispositivos de conteno primria (cabines de segurana biolgica) constituem a barreira bsica de proteo dos trabalhadores para evitar a exposio a aerossis infecciosos. Transferncia do Agente: A licena para importao desses agentes dever ser obtida junto ao CDC. Agente: Influenza As infeces adquiridas em laboratrio e que possuem o vrus da influenza como agente causador no so normalmente documentadas na literatura. Entretanto, devem-se considerar dados informais e relatrios publicados que indicam que, quando novas cepas que apresentam um desvio ou uma flutuao antignica foram introduzidas em um laboratrio para diagnstico ou pesquisa, acabaram por causar infeces desse tipo.49 As infeces adquiridas em laboratrios animais, por sua vez, no foram relatadas, mas h uma grande possibilidade de transmisso por doninhas infectadas para o ser humano e vice-versa. Riscos em Laboratrio: O agente pode ser encontrado em tecidos ou secrees respiratrias de humanos ou de grande parte de animais contaminados e na cloaca de muitas espcies de aves contaminadas. O vrus pode ser disseminado em mltiplos rgos de algumas espcies animais infectadas. O risco laboratorial primrio a inalao do vrus pela formao de aerossis de materiais de animais contaminados ou pela aspirao, suspenso ou mistura de amostras contaminadas pelo vrus. A manipulao gentica tem um potencial de alterar o alcance, a patogenicidade e a composio dos vrus da influenza. Existe um potencial desconhecido na introduo de vrus humanos transmissveis com uma nova composio antignica. Precaues Recomendadas: As prticas e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicadas para recebimento e inoculao rotineira de amostras laboratoriais para diagnsticos. O material para autpsia dever ser manipulado em uma cabine de segurana biolgica usando os procedimentos do nvel de biossegurana 2.
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Atividades Utilizando Cepas de Vrus No-Contemporneas: Os requisitos para a biossegurana, no caso de infeco adquirida em laboratrio e transmisso subseqente, devem estar de acordo com as informaes disponveis sobre a patogenicidade e a virulncia das cepas que esto sendo usadas e o potencial de danos para o ser humano ou para a sociedade. As atividades de produo e pesquisa utilizando cepas contemporneas podem ser realizadas com segurana usando as prticas de conteno do nvel de biossegurana 2. A susceptibilidade infeco com cepas humanas no contemporneas mais velhas, recombinantes ou com substncias isoladas de animais garante o uso de procedimentos de conteno do nvel de biossegurana 2. Mas no h evidncias para infeces adquiridas em laboratrio com referncia s cepas A/PR/8/34 e A/WS/33 ou com suas variantes neurotrpicas mais comumente usadas. Transferncia do Agente: A licena para importao do agente dever ser feita junto ao CDC. J a licena para importao ou transporte domstico dever ser obtida junto ao USDA/APHIS/VS. Agente: Vrus da Coriomeningite Linfoctica As infeces com o vrus LCM adquiridas em laboratrio so bem documentadas onde ocorram infeces em roedores de laboratrio especialmente camundongos, hamsters e cobaias.50, 51, 52 Os camundongos desprotegidos podem oferecer riscos especiais por alojarem infeces crnicas silenciosas. As culturas celulares que inadvertidamente se tornaram contaminadas representam uma fonte potencial de infeco ou de disseminao do agente. As infeces naturais so encontradas em primatas no-humanos, incluindo chimpanzs e macacos sagis (o vrus Callitrichid um vrus coriomeningite linfoctica), e pode ser fatal para os sagis. Sunos e ces so vetores menos importantes. Riscos em Laboratrio: Esse agente pode ser encontrado no sangue, no lquido cerebroespinhal, na urina, nas secrees da nasofaringe, nas fezes e nos tecidos de hospedeiros animais contaminados e, possivelmente, do homem. A inoculao parenteral, a inalao, a contaminao das membranas mucosas ou de peles rachadas por tecidos ou lquidos contaminados de animais in164
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fectados so os riscos mais comuns. A transmisso por aerossis tambm bem documentada.53 O vrus pode oferecer um risco especial durante a gravidez devido infeco potencial do feto. Precaues Recomendadas: As prticas e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicadas para as atividades que utilizam lquidos corporais sabidamente ou potencialmente infecciosos e passagem de cultura celular de cepas de clulas cerebrais de camundongo adaptadas para laboratrio. As prticas e as instalaes do nvel de biossegurana animal 2 so adequadas para estudos em camundongos adultos com cepas de passagem cerebrais de rato. Porm, a conteno e as precaues individuais adicionais, como as descritas para o nvel de biossegurana 3, so indicadas para atividades que possuam um alto potencial para a formao de aerossis ou atividades que envolvam quantidades ou concentraes de produo de materiais infecciosos. Essas precaues tambm so recomendadas para a manipulao de tumores contaminados infectveis, o isolamento de campo e os materiais clnicos de casos humanos. As prticas e as instalaes do nvel de biossegurana animal 3 so recomendadas para o trabalho com hamsters contaminados. As vacinas no esto disponveis para uso em humanos.54 Transferncia do Agente: A licena para importao desse agente deve ser obtida junto ao CDC. Agente: Poliovrus As infeces com o poliovrus adquiridas em laboratrio so raras e se limitam s pessoas que trabalham diretamente com esse vrus em laboratrio e no so vacinadas.55 Existem no mnimo 12 casos documentados de infeces por poliovrus associados a laboratrio, incluindo duas mortes entre 1941 e 1976.56 Porm, uma vez que ~1% das infeces com o poliovrus resultou em patologia, sem uma confirmao laboratorial impossvel estimar precisamente os nmeros das infeces adquiridas em laboratrio. Com vacinas e instalaes laboratoriais eficazes, tecnologia e procedimentos bem possvel que essas infeces j sejam raras em laboratrios. Mas, se os trabalhadores de um laboratrio se contaminarem, eles se tornaro uma fonte de vrus para a populao no-vacinada.57 As infeces em animais associadas a laboratrio, entretanto, no tm sido relatadas,58 mas os primatas no-huma165
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nos experimentalmente ou naturalmente contaminados poderiam ser uma fonte de infeco se expostos s pessoas no-imunizadas. Os ratos transgnicos apresentam o receptor humano para o poliovrus e podem tambm ser fontes potenciais de infeco humana. Riscos em Laboratrio: Esse agente est presente nas fezes e em secrees de garganta de pessoas infectadas. A ingesto e a inoculao parenteral de tecidos ou lquidos infecciosos por trabalhadores no-imunizados so consideradas como risco primrio de infeco em laboratrios. As exposies laboratoriais oferecem um risco insignificante para as pessoas adequadamente imunizadas. Precaues Recomendadas: As prticas e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicadas para todas as atividades que utilizam lquidos sabidamente ou potencialmente infecciosos e materiais clnicos contendo ou suspeitos de conter cepas do tipo selvagem. Todos os trabalhadores de laboratrio que trabalhem diretamente com o agente devero possuir um atestado de vacinao ou provas sorolgicas da imunidade a todos os trs tipos de poliovrus.59 As prticas e as instalaes do nvel de biossegurana animal 2 so indicadas para estudos de vrus virulentos em animais. A menos que existam fortes razes cientficas para o trabalho com poliovrus virulentos (que foram erradicados dos Estados Unidos), os laboratrios devero usar cepas de vacina oral Sabin de poliovrus atenuado. Essas no oferecem risco algum equipe imunizada dos laboratrios. A Organizao Mundial da Sade (WHO) tem publicado guias documentadas60 relacionadas ao trabalho com o poliovrus selvagem. A partir de 1999, os laboratrios que manipulam o poliovrus devero estabelecer um NB-2 (especfico para plio) para todos os trabalhadores que manipulam ou que forem manipular o poliovrus selvagem. As NB-2 para plio seguem os requisitos do NB-2 tradicional quanto a instalaes, prticas e procedimentos com os seguintes acrscimos: 1) todos os estoques de poliovrus e materiais potencialmente infecciosos sero descartados quando no houver mais a necessidade de ret-los para a realizao de pesquisas ou diagnsticos; 2) todas as pessoas que entrarem no laboratrio devero estar completamente imunizadas contra o vrus da plio; 3) o acesso ao laboratrio dever ser restrito; 4) todos os poliovrus
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selvagens retidos no laboratrio devero ser relacionados e armazenados em uma rea separada e segura com acesso limitado; 5) somente os vrus que forem prontamente identificveis por mtodos moleculares sero usados se as cepas de vrus selvagens ou estoques de trabalho forem necessrios; e 6) o descarte de poliovrus selvagens, materiais infecciosos e materiais potencialmente infecciosos dever ser feito utilizando a esterilizao e/ou a incinerao. Todos os laboratrios que desejarem guardar materiais contaminados por poliovrus selvagem ou potencialmente infecciosos devero comear a implementao dos procedimentos de conteno do nvel de biossegurana 3 para plio e fornecer a documentao necessria para implementao at o segundo ano. Os laboratrios que desejarem ser qualificados como uma instalao de NB-3/plio e quiserem reter materiais contaminados por poliovrus devero ser relacionados na Agency/Institutional e no National Inventories. J os que no desejarem a converso para uma conteno de NB especfica para a plio devero destruir todos os materiais contendo o poliovrus selvagem ou potencialmente infecciosos com incinerao ou uso da autoclave. Uma outra alternativa seria o contato com um depsito especfico designado pela Organizao de Sade Pblica para conteno de agentes de um NB-3/plio, que sero responsveis pelo transporte e armazenamento dos materiais selecionados. Quando a imunizao pela OPV (vacina oral de poliovrus vivos) terminar, todo o trabalho com o poliovrus selvagem ficar restrito a laboratrios de conteno mxima (NB-4). Essa dever ser em laboratrios cabines ou laboratrios de roupa de proteo (seo III). Transferncia do Agente: A licena para a importao desse agente dever ser obtida junto ao CDC. Agente: Poxvrus Casos espordicos de infeces por poxvrus (catapora, vacnia, yabapox, tanabox) foram relatados.61 Evidncias epidemiolgicas sugerem que a transmisso do vrus do macaco para homens ou de roedores para homens possa ter ocorrido na natureza, mas no nas dependncias de um laboratrio. Animais de laboratrios naturalmente ou experimentalmente contaminados so fontes
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potenciais de infeco para pessoas que trabalham em um laboratrio e no so vacinadas. Vrus da vacnia recombinantes reproduzidos geneticamente oferecem um risco potencial ainda maior para a equipe laboratorial devido ao contato direto ou contato com materiais clnicos de voluntrios ou animais contaminados. Riscos em Laboratrio: Esses agentes podem ser encontrados em lquidos de leses ou em escaras, secrees respiratrias ou tecidos de hospedeiros contaminados. A ingesto, a inoculao parenteral e a exposio de membranas mucosas ou da pele rachada aos perdigotos ou aerossis de lquidos ou tecidos infecciosos so os riscos primrios para trabalhadores de laboratrio e tratadores de animais. Alguns poxvrus so estveis em temperatura ambiente quando secos e podem ser transmitidos por meio dos fmites. Precaues Recomendadas: A posse e o uso do vrus da varola ficam restritos ao Collaborating Center for Smallpox and Other Poxvirus Infections, da Organizao Mundial da Sade, localizado nos Centros de Controle e Preveno de Doenas, em Atlanta, Georgia. As prticas e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so recomendadas para todas as atividades envolvendo o uso ou a manipulao de poxvrus, com exceo do vrus da varola, que apresenta um grande risco de infeco aos homens. Todas as pessoas que trabalham dentro de um laboratrio ou que forem entrar nas reas de laboratrio ou reas dos animais onde atividades com os vrus vacnia, vrus da varola bovina e de macacos estiverem sendo conduzidas devero possuir um atestado de vacinao. Essa imunizao dever ter sido realizada dentro de um perodo de dez anos. As atividades com os vrus relacionados anteriormente, em quantidades maiores que as apresentadas nas culturas para diagnstico, podero tambm ser conduzidas em um nvel de biossegurana 2, mas por pessoas imunizadas j que todas as manipulaes de materiais viveis devero ser realizadas em cabines de segurana biolgica classe I ou II. Indivduos imunodeprimidos correm um risco de adquirirem uma patologia ainda mais grave quando infectados por um poxvrus.64 Transferncia do Agente: A licena para importao desse agente dever ser obtida junto ao CDC. No caso de uma licena
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para exportao, esta dever ser obtida no Department of Commerce. O registro dos laboratrios junto ao CDC dever ser obtido antes do envio ou recebimento dos agentes. Agente: Vrus da Raiva As infeces provocadas por esse agente e adquiridas em laboratrio so extremamente raras. Somente duas foram documentadas. Todas as duas resultaram de uma suposta exposio a nevoas infecciosas de altas titulaes, sendo uma formada em um local de produo da vacina65 e a outra em um local de pesquisa.66 Os animais naturalmente ou experimentalmente contaminados, seus tecidos e suas excrees constituem uma fonte potencial de exposio para o pessoal do laboratrio e tratadores de animais. Riscos em Laboratrio: O agente pode estar presente em todos os tecidos de animais contaminados. As maiores titulaes so encontradas em tecidos do sistema nervoso central, glndulas salivares e na saliva. A inoculao acidental, os cortes ou as farpas de equipamento laboratorial contaminado, as mordidas de animais infectados e a exposio de membranas mucosas (ou da pele rachada) a lquidos ou tecidos contaminados so as fontes mais provveis de riscos para a equipe laboratorial e os tratadores de animais. J os aerossis contaminados ainda no foram demonstrados como sendo um perigo comprovado ao pessoal que trabalha com materiais clnicos e conduzem exames de diagnsticos. Cepas fixas ou atenuadas desse vrus so supostamente menos perigosas, mas os nicos dois casos comprovados de raiva adquiridos em laboratrio resultaram de exposio de um Padro Viral Desafiador (CVS) fixo e de uma cepa atenuada derivada de uma cepa SAD (Street Alabama Dufferin), respectivamente.67, 68 Precaues Recomendadas: As prticas e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicadas para todas as atividades que utilizam materiais sabidamente ou potencialmente infecciosos. A imunizao recomendada para todos os indivduos antes que se inicie o trabalho com o vrus da raiva ou com animais infectados ou atividades que envolvam diagnstico, produo ou pesquisa do vrus. A imunizao tambm recomendada para todos os indivduos que forem entrar na mesma sala onde o vrus da raiva ou de animais contaminados estiver sendo usado. Embora
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no seja sempre possvel abrir o crnio ou retirar o crebro de um animal infectado dentro de uma cabine de segurana biolgica, essencial o uso de luvas pesadas de proteo para prevenir cortes ou farpas de instrumentos cortantes ou de fragmentos de ossos e tambm o uso de um escudo facial para proteo das membranas mucosas dos olhos, do nariz e da boca quanto exposio destas aos perdigotos infecciosos ou aos fragmentos de tecidos. Se a serra de Stryker for usada para abrir o crnio, evite o contato do crebro com a lmina da serra. A conteno primria e as precaues individuais adicionais, como as descritas para o nvel de biossegurana 3, podero ser indicadas para atividades com um alto potencial de formao de aerossis ou perdigotos e para as atividades que envolvam quantidades ou concentraes de materiais infecciosos em grande escala. Transferncia do Agente: A licena para importao desse agente dever ser obtida junto ao CDC. Agentes: Retrovrus, incluindo o Vrus da Imunodeficincia Humana e o Vrus da Imunodeficincia Smia (HIV e SIV) Os dados sobre a transmisso do HIV ocupacional para trabalhadores de um laboratrio so coletados por intermdio de dois sistemas de vigilncia nacional apoiados pelos CDC: vigilncia quanto aids e s pessoas infectadas pelo HIV que no adquiriram a infeco em exposies ocupacionais. Para propsitos de vigilncia, os trabalhadores de laboratrio so definidos como as pessoas, incluindo estudantes e estagirios, que trabalham ou j trabalharam em um laboratrio para diagnstico do HIV ou laboratrio clnico a partir de 1987. Os casos reportados nesses dois sistemas so classificados como uma transmisso ocupacional possvel ou documentada. As que so classificadas como transmisso ocupacional documentada possuem evidncias de uma soroconverso do HIV (um teste HIV negativo no momento da exposio que se alterou e se tornou positivo) seguida de uma discreta exposio ocupacional percutnea ou mucocutnea ao sangue, aos lquidos ou a outras amostras clnicas ou laboratoriais. At junho de 1998, o CDC havia registrado 16 trabalhadores de laboratrios (todos clnicos) nos Estados Unidos com transmisso ocupacional documentada.69
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Em 1992, dois trabalhadores de diferentes laboratrios desenvolveram o vrus da imunodeficincia de smios (SIV) aps terem se exposto. Um caso estava associado a uma picada de agulha, que aconteceu enquanto o trabalhador estava manipulando uma agulha contaminada com sangue aps uma hemorragia em um macaco infectado por SIV.70 J o outro caso envolveu um trabalhador que manipulava amostras de sangue de um macaco infectado pelo SIV sem usar luvas. Embora ele no se lembrasse desse incidente especfico, este indivduo apresentou dermatites nos antebraos e nas mos enquanto trabalhava com amostras de sangue infectado.71 O primeiro trabalhador apresentou uma soroconverso e, portanto, no apresentou evidncia alguma de infeco pelo SIV. O segundo era soropositivo durante pelo menos nove anos, sem evidncia alguma da doena ou de deficincia imunolgica. Publicaes recentes72, 73 identificaram a prevalncia (4/231, 1,8%) da infeco por vrus espumosos de smios (SFV) entre humanos ocupacionalmente expostos a primatas no-humanos. O diagnstico de infeces por SFV inclui a soropositividade, a deteco de DNA proviral e o isolamento do vrus espumoso. O SFV se originou do macaco-verde africano (uma pessoa) e de babunos (trs pessoas). Essas infeces ainda no provocaram doenas ou transmisso sexual e podem representar infeces benignas. Riscos em Laboratrio: O HIV tem sido isolado do sangue, do smen, da saliva, das lgrimas, da urina, do lquido cerebroespinhal e do tecido de pessoas infectadas e de primatas no-humanos experimentalmente infectados.74 O CDC recomenda que os cuidados com o sangue e os lquidos corporais sejam intensificados consistentemente quando amostras de sangue contaminadas estejam sendo manipuladas.75, 76 Essa abordagem, chamada de precaues universais, inclui a necessidade de identificar as amostras clnicas obtidas de pacientes soropositivos ou de se realizar um teste HIV da amostra. Embora o risco de um HIV adquirido ocupacionalmente se d primariamente por meio da exposio ao sangue contaminado, deve-se usar luvas quando outros lquidos corporais como fezes, saliva, urina, lgrimas, suor, vmito e leite do seio humano estiverem sendo manipulados. Esse procedimento tambm reduzir
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o potencial de exposio a outros microorganismos que possam causar outros tipos de infeces. No laboratrio, deve-se supor que o vrus esteja presente em todas as amostras sangneas ou clnicas contaminadas por sangue, em qualquer tecido ou rgo (que no seja a pele intacta) humano (vivo ou morto) no fixado, em culturas de HIV, em todos os materiais derivados de culturas de HIV e em/sobre equipamentos e dispositivos que tenham um contato direto com qualquer um desses materiais. J o SIV tem sido isolado no sangue, no lquido cerebroespinhal e em uma variedade de tecidos de primatas no-humanos infectados. Existem dados limitados sobre a concentrao do vrus no smen, na saliva, no lquido cerebroespinhal, na urina, no leite materno humano e no lquido amnitico. No laboratrio, deve-se supor que o vrus esteja presente em todas as culturas com SIV, em animais experimentalmente infectados ou inoculados com SIV, em todos os materiais derivados de culturas de HIV ou de SIV e em/sobre todos os equipamentos de dispositivos que tenham um contato direto com qualquer um desses materiais.77 No laboratrio, a pele (especialmente quando arranhes, cortes, abrases, dermatites ou outras leses estiverem presentes) e as membranas mucosas dos olhos, do nariz e da boca devero ser consideradas como vias de entrada potenciais desses retrovrus. No se sabe se a infeco pode ocorrer via trato respiratrio. A necessidade do uso de objetos cortantes no laboratrio dever ser avaliada. Agulhas, instrumentos afiados, vidros quebrados e outros objetos afiados devero ser cuidadosamente manipulados e adequadamente descartados. Deve-se tomar cuidado para prevenir a formao de borrifos ou o vazamento do lquido de cultura de clulas contaminadas e de outros materiais contendo o vrus ou potencialmente contaminados.78 Precaues Recomendadas: Alm das seguintes precaues recomendadas, as pessoas que trabalham com o HIV, o SIV ou outros patgenos presentes no sangue devero consultar a OSHA Bloodborne Pathogen Standard.79 As questes relacionadas
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interpretao desse padro devero ser dirigidas aos escritrios federais, regionais ou estaduais da OSHA. 1. O padro do NB-2 e as prticas especiais, os equipamentos de conteno e as instalaes so indicados para as atividades que envolvam todas as amostras clnicas contaminadas com sangue, lquido corporal e tecidos de todos os homens ou animais laboratoriais inoculados ou infectados com SIV ou HIV. 2. As atividades como a produo de quantidades em grande escala, para laboratrios de pesquisas de HIV ou SIV, a manipulao de preparaes concentradas de vrus e a conduo de procedimentos que possam formar perdigotos ou aerossis devero ser realizadas em um local de NB-2, mas usando prticas e equipamentos de conteno adicionais recomendadas para o nvel de biossegurana 3. 3. As atividades que envolvem volumes em escala industrial ou a preparao de HIV ou SIV concentrado devero ser conduzidas em um local de NB-3, usando prticas e equipamentos de contenos 3. 4. Primatas no-humanos ou outros animais infectados com HIV ou SIV devero ser alojados em instalaes de NB-2 usando prticas especiais e equipamentos de conteno de NBA-2. Comentrios Adicionais: 1. No existem evidncias de que as roupas usadas em laboratrio representam um risco para a transmisso do retrovrus. Porm, as roupas contaminadas pelo HIV ou SIV devero ser descontaminadas antes de encaminhadas para a lavanderia ou descartadas. A equipe do laboratrio dever retirar a roupa usada nesse local antes de se dirigir s reas no-pertencentes ao laboratrio. 2. As superfcies de trabalho devero ser descontaminadas com um germicida qumico apropriado depois de o procedimento ser concludo, quando as superfcies estiverem excessivamente contaminadas e no final de cada dia de trabalho. Muitos desinfetantes qumicos vendidos comercialmente 80, 81, 82, 83, 84 podero ser utilizados para
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a descontaminao das superfcies do laboratrio e de alguns instrumentos, para limpeza local de roupas contaminadas usadas em laboratrio e para vazamento de materiais infecciosos. A descontaminao imediata de vazamentos ocorridos dever ser uma prtica padro. 3. O soro humano de qualquer fonte usado como um controle ou reagente em um teste dever ser manipulado em um NB-2. 4. Recomenda-se que todas as instituies estabeleam normas por escrito em relao ao gerenciamento das exposies em laboratrio do HIV e do SIV juntamente com as leis federais, estaduais e locais aplicveis. Tais normas devero considerar como confidenciais questes como o consentimento para realizao de teste, a administrao de terapia de drogas profilticas adequadas,85 o aconselhamento e outros itens relacionados. Se um trabalhador do laboratrio expuser a membrana mucosa ou parenteral ao sangue, ao lquido corporal ou ao material de cultura viral, o material utilizado dever ser identificado e, se possvel, testado para verificao da presena do vrus. Se o material fonte for HIV positivo para o antgeno, vrus ou anticorpo ou no possuir quantidade suficiente para realizao do teste, o trabalhador dever ser aconselhado sobre o risco de infeco e avaliado clinicamente e sorologicamente para evidncia de uma infeco por HIV. A profilaxia ps-exposio dever ser oferecida de acordo com as ltimas normas. O trabalhador deve ser instrudo a relatar e procurar atendimento mdico caso haja a ocorrncia de um quadro agudo de febre, com 12 semanas aps a exposio.86 Uma vez que a doena possui caractersticas singulares, se o indivduo apresentar sintomas como febre, erupes ou linfoadenopatias, esses podero ser indicativos de uma infeco recente ao HIV. Se no incio (no momento da exposio) o teste for negativo, o trabalhador dever refazer o teste 6 semanas depois da exposio e, a partir da, periodicamente (isto , na 12. semana e no 6., 9. e 12. ms aps a exposio). Durante o acompanhamento, os trabalhadores ex174
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postos devero ser aconselhados a se prevenir contra a transmisso do HIV. 87, 88, 89, 90, 91 5. Outros agentes patognicos oportunistas e primrios podero estar presentes nos lquidos corporais e tecidos de pessoas infectadas com o HIV. Os trabalhadores de laboratrio devero seguir as prticas de biossegurana aceitas para assegurar uma proteo mxima contra a exposio inadvertida aos agentes, que podem tambm estar presentes em amostras clnicas ou em amostras obtidas de primatas no-humanos.92, 93, 94 A pesquisa envolvendo outros retrovrus humanos (isto , vrus linfotrpico-T tipos I e II) e de smios est sendo desenvolvida em muitos laboratrios. Uma vigilncia recente para essas infeces revelou a exposio e a infeco ocupacional pelo vrus espumoso do smio entre zeladores de animais de locais de pesquisas laboratoriais.95, 96 As precaues destacadas devero ser suficientes enquanto o trabalho com os agentes estiver sendo conduzido. Os laboratrios que trabalham com vetores do retrovrus, especialmente os que possurem genomas moleculares infecciosos de longa durao (HIV-1), devero ser manipulados em NB-2 sob a prtica de NB-2/3. Isso inclui os clones infecciosos derivados de vrus no-humanos, mas que possuem uma esfera de hospedeiro xemotrpio (especialmente para clulas humanas). Transferncia do Agente: A licena para importao desse agente dever ser obtida junto ao CDC. Agentes:Encefalopatias Espongiformes Transmissveis (por agentes da Creutzfeldt-Jakob, kuru e outros agentes) As infeces por encefalopatias espongiformes transmissveis adquiridas em laboratrio (doenas prinicas) ainda no foram documentadas. Porm, existe uma evidncia de que a doena de Creutzfeldt-Jakob (CJD) tenha sido iatrogenicamente transmitida aos pacientes em transplantes de crnea, transplantes da dura-mter, na extrao do hormnio do crescimento das glndulas pituitrias humanas e pela exposio aos eletrodos eletroencefalogrficos contaminados.97 A infeco sempre fatal. No se
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conhece um reservatrio no-humano para a CJD ou para a kuru. Os primatas no-humanos e outros animais de laboratrio foram contaminados por intermdio da inoculao, mas no existem evidncias de uma transmisso secundria. A scrapie de ovelhas e cabras, a encefalopatia espongiforme bovina e a encefalopatia de vises so encefalopatias espongiformes transmissveis de animais que so semelhantes s doenas humanas transmissveis. Entretanto, no existem evidncias de que as doenas animais possam ser transmitidas ao homem. (Veja tambm a seo VII-D, Prons). Riscos em Laboratrio: Altas titulaes de um agente transmissvel foram encontradas no crebro e na medula espinhal de pessoas com kuru. Em pessoas com a doena de Creutzfeldt-Jakob e as variantes da Sndrome de Gerstmann-StrusslerSchenker, encontrou-se um agente transmissvel semelhante no crebro, no bao, no fgado, nos ndulos linfticos, nos pulmes, na medula espinhal, nos rins, na crnea, nas lentes, no lquido espinhal e no sangue. A inoculao parenteral acidental, especialmente de tecidos nervosos, incluindo amostras de tecidos no-fixados, extremamente perigosa. Embora os tecidos no-nervosos sejam bem menos infecciosos, todos os tecidos de homens e de animais infectados com esses agentes devero ser considerados potencialmente perigosos. O risco de uma infeco por aerossis, perdigotos e exposies da pele intacta, das membranas mucosas e gstricas no conhecido. No h evidncia de contaminaes por transmisso por aerossis ou contato. Esses agentes so caracterizados pela extrema resistncia aos procedimentos de inativao convencionais, incluindo a radiao, a ebulio, o calor seco e as substncias qumicas (formalina, betapropiolactona, lcool). Porm, eles foram inativados pelo uso de NaOH a 1N, de hipocloreto de sdio (concentrao de cloro livre > 2%) e da autoclave a vapor durante quatro horas e meia em uma temperatura de 132C. Precaues Recomendadas: As prticas e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicadas para todas as atividades utilizando tecidos e lquidos sabidamente ou potencialmente infecciosos de homens naturalmente infectados e de animais experimentalmente infectados. Deve-se tomar um extremo cuidado para evitar a auto-inoculao acidental ou outras inoculaes parenterais traumticas de tecidos e lquidos infecciosos. 98 Embora
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no haja evidncias que sugiram a transmisso via aerossis na doena natural, mais prudente evitar a formao de aerossis ou perdigotos durante a manipulao de tecidos e lquidos e durante a necropsia de animais experimentais. Recomenda-se muito o uso de luvas para as atividades que proporcionem o contato da pele com tecidos e lquidos infectados. Os tecidos fixados em formaldedo e imersos em parafina, especialmente os tecidos do crebro, permanecem infecciosos. Recomenda-se, ento, que os tecidos de casos suspeitos de encefalopatia fixados em formalina sejam imersos em cido frmico a 96% durante trinta minutos antes do processamento histopatolgico.99 As vacinas no esto disponveis para uso em humanos.100 Transferncia do Agente: A licena para importao desses agentes dever ser obtida junto ao CDC. A licena para importao ou transporte domstico do vrus da encefalopatia espongiforme bovina poder ser obtido no USDA/APHIS/VS. Agente: Vrus da Estomatite Vesicular (VSV) Um nmero de infeces por cepas nativas do VSV adquiridas em laboratrio foi relatado.101 As atividades laboratoriais com essas cepas apresentam dois diferentes nveis de risco ao pessoal do laboratrio e esto relacionadas, pelo menos em parte, histria das passagens das cepas utilizadas. As atividades que usam criaes, seus tecidos infectados e substncias virulentas isoladas dessas fontes so um perigo demonstrado aos funcionrios do laboratrio e aos tratadores de animais.102, 103 Os ndices de soroconverso e doena clnica em pessoas que trabalham com esses materiais so altos.104 Riscos semelhantes podem estar associados s cepas exticas como a Piry.105 Em contraste, informaes no-oficiais indicam que as atividades com cepas menos virulentas adaptadas a laboratrio (por exemplo, Indiana, San Juan e Glascow) so raramente associadas com a soroconverso ou com a doena. Essas cepas so comumente utilizadas por bilogos moleculares, freqentemente em grandes volumes e altas concentraes, sob condies de conteno mnima ou nenhuma conteno primria. Algumas cepas do VSV so consideradas organismos restritos pelos regulamentos da USDA (9CFR 122.2). Ratos infectados experimentalmente no serviram como uma fonte documentada de infeco humana.
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Riscos em Laboratrio: O agente pode ser encontrado no lquido vesicular, nos tecidos de animais infectados e no sangue e nas secrees de garganta de homens infectados. A exposio aos aerossis ou perdigotos contaminados, ao contato direto da pele e da membrana mucosa com os tecidos e lquidos infectados e a auto-inoculao acidental so os perigos primrios associados com a substncia virulenta isolada. A inoculao parenteral acidental e a exposio aos aerossis infectados representam os riscos potenciais ao pessoal que trabalha com cepas menos virulentas adaptadas aos laboratrios. Precaues Recomendadas: As prticas e as instalaes do nvel de biossegurana 3 so indicadas para atividades que envolvam o uso ou a manipulao de tecidos infectados e substncias virulentas isoladas de animais de criao infectados naturalmente ou experimentalmente. As luvas e a proteo respiratria so recomendadas para a necropsia e o manuseio de animais infectados. As prticas e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicadas para atividades que utilizam cepas adaptadas em laboratrios de baixa virulncia. As vacinas no esto disponveis para uso em humanos. Transferncia do Agente: A licena para exportao desse agente dever ser obtida no Department of Commerce. J a licena para importao ou transporte domstico para o agente dever ser obtido no USDA/APHIS/VS.
Seo VII-G: Arbovrus e Vrus Zoonticos Relacionados

Arbovrus Designados para o Nvel de Biossegurana 2 O American Committee on Arthropod-Borne Viruses (ACAV) registou 537 casos de arbovrus at dezembro de 1997. Em 1979, o subcomit da ACAV sobre a segurana quanto ao arbovrus em laboratrio (Subcommittee on Arbovirus Laboratory Safety SALS) classificou e registrou 424 vrus no Catalogue of Arboviruses and Certain Other Viruses of Vertebrates (Catlogo de Arbovrus e Alguns Outros Vrus de Vertebrados) em um dos quatro grupos de prticas, equipamentos de segurana e instalaes recomendadas. Essas recomendaes esto descritas nesta publicao
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como nveis de biossegurana 1-4.2 O SALS tem atualizado periodicamente a publicao de 1980, fornecendo uma lista suplementar para os arbovrus registrados desde 1979. As classificaes do SALS se baseiam nas avaliaes do risco derivadas de informaes fornecidas por uma pesquisa mundial de 585 laboratrios que trabalham com o arbovrus. O SALS recomenda que o trabalho com grande parte desses agentes seja conduzido em um nvel semelhante ao do nvel de biossegurana 2 (lista 5). O SALS tambm reconhece cinco cepas de vacinas comumente usadas, nas quais a atenuao foi firmemente estabelecida. Esses vrus podem ser manipulados com segurana em um nvel de biossegurana 2, uma vez que as pessoas que trabalham com essas cepas de vacinas so imunizadas (tabela 5). O SALS classificou todos os vrus registrados com os quais a experincia laboratorial insuficiente como um nvel de biossegurana 3 (lista 6) e reavalia a classificao assim que recebe novas informaes. Os vrus classificados em um NB-2 esto relacionados por ordem alfabtica na lista 5 e incluem os seguintes agentes que so relatados como causadores de infeces adquiridas em laboratrio.3, 4, 5 Tabela 4. Agentes causadores de infeces adquiridas em laboratrio
Vrus Estomatite Vesicular** Febre do Carrapato do Colorado Dengue* Pichinde Encefalomielite Eqina Ocidental** Rio Bravo Kunjin Catu Caraparu Rio Ross Bunyamwera Encefalomielite Eqina do Leste* ** Zika Casos 46 16 11 17 7 (2 mortes) 7 6 5 5 5 4 4 4
continua
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continuao
Vrus Apeu Marituba Tacaribe Murutucu Onyong-nyong Modoc Oriboca Ossa Keystone Bebaru Bluetongue * **
Casos 2 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1
* Licena de exportao obtida no Department of Commerce. ** A licena para importao ou transporte domstico para este agente pode ser obtida junto ao USDA/APHIS/VS.
Os resultados de uma pesquisa realizada pelo SALS indicam, claramente, que a fonte suspeita das infeces adquiridas em laboratrio relacionadas no foi a exposio aos aerossis infecciosos. A recomendao de que o trabalho com os 342 vrus relacionados na lista 5 seja conduzido em um nvel de biossegurana 2 baseouse na existncia de uma experincia laboratorial durante toda a histria, para a avaliao dos riscos do trabalho com esse grupo de vrus de risco. Isso indica que (a) nenhuma infeco aberta e associada ao laboratrio foi relatada; (b) as infeces foram provocadas por exposies diferentes das exposies aos aerossis; ou (c) se a doena provocada pela exposio aos aerossis foi documentada, ela rara. Riscos em Laboratrio: Os agentes relacionados neste grupo podem ser encontrados no sangue, lquido cerebroespinhal, tecidos do sistema nervoso central e outros tecidos e em artrpodes infectados, dependendo do agente e do estgio da infeco. Os riscos primrios em laboratrios so impostos pela inoculao parenteral acidental, contato do vrus com pele rachada ou membranas mucosas e mordidas de roedores e artrpodes de laboratrio. Porm, os aerossis infecciosos podem tambm ser uma fonte potencial de infeco. Precaues Recomendadas: As prticas, os equipamentos de segurana e as instalaes do nvel de biossegurana 2 so indicados para as atividades com materiais clnicos poten180
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cialmente infecciosos, ovos embrionados e roedores. A infeco de galinhas recm-nascidas pelos vrus da encefalomielite eqina ocidental e do leste especialmente perigosa e dever ser manipulada por pessoas imunizadas em condies de um nvel de biossegurana 3. As vacinas investigacionais (IND) contra a encefalomielite eqina do leste e a ocidental esto disposio por meio do Centro de Preveno e Controle da Doena (telefone 404-639-3356) e por meio do Instituto de Pesquisa Mdica de Doenas Infecciosas do Exrcito (USDAMRIID) em Fort Detrick, Maryland (telefone 301-619-2833). O uso dessas vacinas recomendado para as pessoas que trabalham diretamente e regularmente com esses dois agentes no laboratrio. Antes de 1988, foram relatados 12 casos de dengue adquiridos em laboratrio. Porm, de 1988 at 1991, somente quatro casos foram documentados. Em todos os quatro casos, no se usou uma roupa de segurana apropriada (jaleco de manga comprida amarrado atrs, luvas, mscaras e culos de proteo) e em trs casos a conteno para aerossis potenciais em uma cabine de biossegurana de fluxo laminar foi ignorada. Esses sprays ou lquidos infectados possivelmente contaminaram a pele desprotegida ou rachada. Um fator adicional nesses casos foi o trabalho com quantidades de vrus altamente concentradas. A manipulao segura do vrus da dengue em laboratrio (particularmente em preparaes concentradas) requer uma obedincia severa s recomendaes do nvel de biossegurana 2. Grandes quantidades e/ou altas concentraes de qualquer vrus possuem um potencial para superar os mecanismos imunes naturais e a imunidade induzida pela vacina. Quando um vrus do nvel de biossegurana 2 produzido em grandes quantidades ou em altas concentraes, os diretores dos laboratrios devero garantir que a roupa de proteo adequada seja usada, como descrita no pargrafo anterior, e que as manipulaes sejam realizadas em cabines de biossegurana de fluxo laminar (veja tambm a seo V, "Avaliao dos Riscos"). Transferncia do Agente: A licena para importao desses agentes dever ser conseguida no CDC. O registro do laboratrio junto ao CDC necessrio antes do envio ou recebimento dos agentes.
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Lista 5. Arbovrus e arenavrus designados para o nvel de biossegurana 2

Abras Abu Hammad Acado Acara Aguacate Alfuy Almpiwar Amapari Ananindeua Anhang Anhembi Anfilo A Anfilo B Apeu Apoi Aride Arkonam Aroa Aruac Arumowot Aura Avalon Babahoyo Bagaza Bahig Bakau Baku Bandia Bangoran Bangui Banzi Barur Batai Batama Bauline Bebaru Belmont Benevides Benfica Bertioga Bimiti Birao Bluetongue* Boracia Botambi Boteke Bouiboui Bujaru Bunyamwera Bunyp Creek Burg El Arab Bushbush Bussuquara Buttonwillow Bwamba Cacao Cache Valley Caimito California Enc. Calovo Candiru Cape Wrath Capim Caraparu Catu Chaco Chagres Chandipuras Changuinola Chardleville Chenuda Chilibre Chobar Gorge Clo Mor Corriparta Cotia Cowbone Ridge Csiro Village Cuiab DAguilar Dengue-1 Dengue-2 Dengue-3 Dengue-4 Dera Ghazi Khan do Leste ** Doena Hem. Ep. Edge Hill Encef. Eqina Encef. Eqina Ocid.** Erve Eubenangee Eyach Feb. do Carrapato do Colorado Febre do Mosquito-Plvora (Naples) Febre do Mosquito-Plvora (Sicilian) Febre Hem. de Smios Flanders Floresta Barmah Forte Morgan Frijoles Gamboa Gan Gan Gomoka Gossas Grand Arbaud Great Island Guajara Guama Guaratuba Guaroa Gumbo Limbo
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Hart Park Highlands J Huacho Hughes Icoaraci Ieri Ilesha Ilha Carey Ilheus Ingwavuma Inkoo Ippy Irituia Isfahan Itaporanga Itaqui Jamestown Canyon Japanaut Johnson Atoll Joinjakaka Juan Diaz Jugra Jurona Jutiapa Kadam Kaeng Khoi Kaikalur Kaisodi Kamese Kammavanpettai Kannamangalam Kao Shuan Karimabad Karshi Kasba Kemerovo Kern Canyn Ketapang Keterah Keuraliba
Keystone Kismayo Klamath Kokobera Kolongo Koongol Kowanyama Kunjin Kununurra Kwatta La Crosse La Joya Landjia Langat Lanjan Las Maloyas Latino Le Bombo Le Dantec Lednice Lipovnik Lokern Lone Star Lukuni Mpoko Madrid Maguari Main Drain Malakal Manawa Manitoba Manzanilla Mapputta Maprik Marco Marituba Marrakai Matara Matruh Matucare
Melao Mermet Minatitlan Minnal Mirim Mitchell River Modoc Mono Lake Mont. Myotis leuk Morcego Dakar Morcego Entebe Morcego Lagos Morcego Mount Elgon Morcego Phnom-Penh Moriche Mosqueiro Mossuril Murutucu Mykines Navarro Ncgaigan Nepuyo Nique Nkolbisson Nola Ntaya Nugget Nyamanini Nyando Onyong-nyong Okhotskiy Okola Olifantsvlei Oriboca Ossa Pacora Pacui Palyam Paran Pata
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Pathum Thani Patois Pichinde Pixuna Pongola Ponteves Precarious Point Pretoria Prospect Hill Puchong Punta Salinas Punta Toro Qalyub Quaranfil Rede Mahogany Restan Rio Bravo Rio Grande Ross River Royal Farm Sabo Saboya Saint Floris Sakhalin Salehabad San Angelo Sandjimba Sango Sathuperi Sawgrass Sebokele Seletar Serra do Navio Shark River Sharmonda
Shuni Silverwater Simbu Sindbis Sixgun City Snowshoew Hare Sokuluk Soldado Sororoca Stratford Sunday Canyon Tacaiuma Tacaribe Taggert Tahyna Tamiami Tanga Tanjong Rabok Tataguine Tehran Tembre Tembusu Tensaw Tete Tettnang Thimiri Thottapalayan Tibrogargan Timbo Timboteua Toscana Toure Tribec Triniti Trivittatus
Tsuruse Turlock Tyndholmur Tyuleniy Uganda S. Uma Umatilla Umbre Upolu Urucuri Usutu Uukuniemi Vellore Venkatapuram Vinces Virgin River VS-Indiana VS-New Jersey Wad Medani Wallal Wanowrie Warrego Whataroa Witwatersand Wongal Wongorr Wyeomyia Yaquina Head Yata Yogue Zaliv Terpeniya Zegla Zika Zirqa
* A licena para a exportao desse agente deve ser obtida no Department of Commerce. ** A vacina j se encontra disponvel e recomendada para todas as pessoas que trabalham com o agente. A licena para importao ou transporte domstico para esse agente poder ser obtida junto ao USDA/APHIS/VS.
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Transferncia do Agente: A licena para importao dos agentes deve ser obtida no CDC. O registro do laboratrio junto ao CDC necessrio para o envio ou recebimento dos agentes. Tabela 5. Cepas vacinais de vrus do NB-3/4 que podem ser manipuladas em um nvel de biossegurana 2 Vrus Cepa da Vacina Chikungunya* 131/25 Junin* cndida n. 1 Febre do Vale Rift* 20 MP-12 Encefalomielite Eqina Venezuelana* TC-83 Febre Amarela* 17-D
* A licena para exportao deve ser obtida no Department of Commerce.
Arbovrus e Arenavrus Designados para o Nvel de Biossegurana 3 O SALS recomenda que o trabalho com os 184 arbovrus inclu dos nas listas por ordem alfabtica das listas 6 e 7 seja conduzido pelas prticas, pelos equipamentos de segurana e pelas instalaes semelhantes as do nvel de biossegurana 3. Essas recomendaes baseiam-se nos seguintes critrios: para a lista 6, o SALS considerou inadequada a experincia laboratorial para a avaliao de risco, sem levar em considerao as informaes disponveis sobre a gravidade da doena. Para os agentes relacionados na lista 7, o SALS registrou as infeces adquiridas em laboratrios abertos que eram transmitidas por aerossis e na ausncia de vacinas. O SALS considerou que a doena natural em homens potencialmente grave, ameaa vida ou causa seqelas. Os arbovrus tambm foram classificados no NB-3 por causarem doenas em animais domsticos em pases fora dos Estados Unidos. As infeces associadas ao laboratrio ou ao laboratrio animal com os seguintes agentes de NB-3 foram relatados: 6, 7, 8
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Tabela 6. Infeces associadas ao laboratrio ou ao laboratrio animal (1) Vrus Casos (SALS) Encefalomielite Eqina Venezuelana* 150 (1 morte) Febre do Vale Rift * 47 (1 morte) Chikungunya * 39 Febre Amarela* 38 (8 mortes) Encefalite Japonesa* 22 Encefalite Ovina 22 Nilo Oeste 18 Coriomeningite Linfoctica* 15 Orungo 13 Piry 13 Wesselsbron 13 Mucambo 10 Bhanja 6 Hantaan* 6 Mayaro 5 Spondweni 4 Encefalite do Vale Murray 3 Semliki Forest 3 (1 morte) Powassan 2 Dugbe 2 Issyk-kul 1 Koutango 1
* A licena para a exportao desses agentes deve ser obtida no Department of Commerce. A licena para importao ou transporte domstico do agente dever ser conseguida junto ao USDA/APHIS/VS.
Grandes quantidades e altas concentraes do vrus da floresta de Semliki so comumente usadas ou manipuladas por bilogos moleculares sob condies de uma conteno moderada ou baixa. Embora os anticorpos tenham sido demonstrados em indivduos que trabalhavam com esse vrus, a primeira infeco aberta (e fatal) adquirida em laboratrio foi relatada em 1979. Uma vez que o resultado dessa infeco pode ter sido influenciado por uma via de exposio incomum ou por uma alta dose, um hospedeiro comprometido ou uma cepa de vrus mutante, este caso e seu resultado no so exemplos tpicos. Mais recentemente, o SFV foi
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associado ao surto de doenas febris entre soldados europeus cuja base militar era em Bangui.9 A via de exposio no foi determinada na infeco laboratorial fatal, uma vez que os mosquitos foram os provveis vetores dessas infeces naturais. O SALS continua a classificar esse vrus (SFV) como um vrus do NB-3, com advertncia de que a maioria das atividades com o vrus pode ser conduzida com segurana em um nvel de biossegurana 2. Alguns vrus (por exemplo, a meningoencefalite turca de Israel, Akabane) esto relacionados em um NB-3, no por serem uma ameaa sade humana, mas por serem doenas exticas de aves ou criaes domsticas. Riscos em Laboratrio: Os agentes relacionados nesse grupo podem ser encontrados no sangue, no lquido cerebroespinhal, na urina e nos exsudatos, dependendo do agente especfico e do estgio da doena. Os riscos laboratoriais primrios so a exposio aos aerossis de solues infecciosas e roupas de cama de animais, inoculao parenteral acidental e o contato com a pele rachada. Alguns desses agentes (por exemplo, o VEE) podem ser relativamente estveis no sangue seco ou em exsudatos. Para os vrus de um NB-3/4, as cepas atenuadas existem e podem ser manipuladas em um NB-2, conforme relacionado na tabela 5. Precaues Recomendadas: As prticas, os equipamentos de segurana e as instalaes do nvel de biossegurana 3 so indicados para as atividades que usam materiais clnicos potencialmente infecciosos e culturas de tecido, animais e artrpodes infectados. Um vrus vivo atenuado licenciado se encontra disposio para a imunizao contra a febre amarela. Recomenda-se o uso dessa vacina para as pessoas que trabalham com o agente ou com animais infectados e a pessoas autorizadas a entrar na sala onde os agentes ou os animais infectados estejam presentes. Realmente, para essa vacina, a infectividade dos aerossis e o alto ndice de fatalidade do vrus da febre amarela fazem com que ele seja classificado como um vrus do NB-4. Para a encefalomielite eqina venezuelana, a vacina investigacional TC-83 proporciona uma excelente proteo contra muitas cepas epizoticas. Essa proteo pode se estender a outras cepas de VEE do complexo, incluindo os vrus Everglades, Mucambo, Tonate e Cabassou. A vacina TC-38
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dever ser usada como parte de um programa de segurana e pode ser particularmente importante para a proteo das pessoas que trabalham com animais infectados e vrus concentrados. A administrao da vacina e o uso desse complemento inativado (C-84) devero ser determinados por peritos com experincia no uso dessas vacinas dentro das restries compatveis com as drogas de pesquisa. De forma semelhante, a vacina IND inativada est disposio para o vrus da febre do Vale Rift. Uma vacina de vrus Junin atenuado (Cndida n. 1) tambm est disponvel. Essas vacinas de IND podem ser obtidas no U.S Army Medical Research and Material Command, aps consulta ao USAMRIID (telefone 301619-2833). O SALS tem diminudo a classificao do risco biolgico do vrus Junin para o nvel de biossegurana 3, j que todas as pessoas do grupo de risco so imunizadas e o laboratrio se encontra equipado com filtros HEPA de exausto. O SALS tambm diminuiu a classificao do vrus da encefalite transmitida pelo carrapato da Europa Central (CETBE) para o nvel de biossegurana 3, j que todas as pessoas do grupo de risco so imunizadas. Uma vacina IND inativada para o CTEBE se encontra disponvel junto ao USAMRIID e recomendada para todos os funcionrios de laboratrio e tratadores de animais que trabalham com o agente ou os animais infectados e tambm para todas as pessoas que entrarem nos laboratrios ou nas salas de animais quando o agente estiver sendo usado. Conteno acentuada do Nvel de Biossegurana 3: Podem ocorrer situaes em que so necessrias intensificaes das prticas e dos equipamentos do nvel de biossegurana 3. Um exemplo dessa situao seria um laboratrio de NB-3 realizar testes de diagnstico em amostras de pacientes com febre hemorrgica quando se suspeita de uma febre amarela ou dengue. Quando a origem das amostras a frica, o Oriente Mdio ou a Amrica do Sul, o potencial est presente em amostras que contenham agentes etiolgicos como o arenavrus, filovrus ou outros vrus que so geralmente manipulados em laboratrios de NB-4. As intensificaes aos laboratrios de NB-3 podem incluir uma ou mais destas trs categorias a seguir: a) aumentada proteo respiratria individual contra os aerossis; b) filtrao pelo HEPA do ar liberado do laboratrio; c) descontaminao de efluentes lquidos
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de laboratrios. Um treinamento apropriado para as pessoas que tratam dos animais dever ser considerado. Bioconteno de Agentes Infecciosos Desconhecidos: As decises em relao classificao do perigo biolgico para materiais que contenham um vrus infeccioso devero se basear em todas as informaes disponveis em relao ao agente. Os vrus isolados de pacientes humanos infectados devero ser manipulados em um nvel de biossegurana 3 com precaues intensificadas, como detalhado no resumo das caractersticas do agente Hantavrus ou de preferncia em um NB-4, a menos que se tenha certeza de que o agente no infeccioso por meio de aerossis. Todas as amostras desconhecidas devero ser manipuladas em um NB-3, a menos que haja evidncias de uma transmisso por aerossis (que iria requerer uma conteno do NB-4). O SALS continuar a avaliar a infectividade e os dados sobre a virulncia para todos os vrus registrados no Catalogue of Arboviruses and Certain Other Viruses of Vertebrates e para vrus recentemente desenvolvidos antes do registro. Transferncia do Agente: A licena para a importao dos agentes dever ser conseguida junto ao CDC. Lista 6. Arbovrus e alguns outros vrus designados para o nvel de biossegurana 3 (com base em experincia insuficiente)
Adelaide River gua Preta Alenquer Almeirim Altamira Andasibe Antequera Araguari Aransas Bay Arbia Arboledas Babanki Batken Belm Berrimah Bimbo Bobaya Bobia Bozo Buenaventura Cabassou 1, 2 Cacipacore Calchaqui Canania Canind Chim Coastal Plains Connecticut Corfou Dabakala Douglas Enseada Estero Real Fomede Forecariah Fort Sherman Gabek Forest Gadgets Gully Garba Gordil Gray Lodge Gurupi Iaco Ibaraki Ife Iguape Inhangapi Inini
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Issyk-Kul Itaituba Itimirim Itupiranga Jacareacanga Jamanxi Jar Kedougou Khasan Kindia Kyzylagach Lake Clarendon Llano Seco Macaua Mapuera Mboke Meaban Moji Dos Compos Monte Dourado Munguba Naranjal Nariva Nasoule Ndelle New Minto Ngari Ngoupe
Nodamura Northway Odrenisrou Omo Oriximina Ouango Oubangui Oubi Ourem Palestina Palma Para Paramushir Paroo River Perinet Petevo Picola Playas Pueblo Viejo Purus Radi Razdan Resistencia Rochambeau Salanga San Juan Santa Rosa
Santarm Saraca Saumarez Reef Sena Madureira Sendlec Sepik Shokwe Slovakia Somone Sripur Tai Tamdy Telok Forest Termeil Thiafora Tilligerry Tinaroo Tlacotalpan Tonate 1, 2 Utinga Xiburema Yacaaba Yaounde Yoka Yug Bogdanovac
O SALS recomenda que o trabalho com esse agente dever ser feito somente em instalaes de NB-3 que proporcionem a filtrao HEPA de todo o ar liberado antes de ser jogado para o laboratrio. A vacina TC-83 est disponvel e recomendada para todas as pessoas que trabalhem com o agente.
Lista 7. Arbovrus e alguns outros vrus designados para o nvel de biossegurana 3

Cocal Aino Dhori Akabane c Dobrava-Belgrade Banna a, f Doena Ovina de Nairobi a Bhanja Dugbe Central Eur. TBE b, d Enc. de Vale Murray (Kumlinge. Hypr, Hanzalova, Absettarov) Encef. Japonesa h Chikungunya c, d Encefalite Eqina Venezuelana c, d, h Estomatite Vesicular (Alagoas) h Everglades c, d Febre Amarela c, d Febre do Rift Valley a, c, d, h Flexal
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Germiston c Getah Haantan h Junin c, d, h Kairi Kimberley Koutango Kumlinge (Europa Central, TBE) Louping III a, c, h Mayaro Menin. Tur. de Israel.
Mopeia e Middelburg Mobala Mucambo c, d Ndumu Negishi Oropouche c Orungo Peaton Piry Puumala Rocio
Sagiyama Sal Vieja San Perlita Seuol Sin Nombre Spondweni Thogoto Turuna Wesselsbron a, c West Nile Zinga g
a. A importao, a posse e o uso desse agente ficam restritos ao regulamento ou norma administrativa do USDA. Veja o apndice D. b. O vrus da encefalite do carrapato da Europa Central (CETBE) no um nome registrado no The International Catalogue of Arboviruses 1985. At a questo do registro do nome ter sido resolvida taxonomicamente, a CETBE se refere ao seguinte grupo de flavivrus associado ao carrapato muito prximo, mas no idntico, da Tchecoslovquia, Finlndia e Rssia, como: Absettarov, Hanzalova, Hypr e Kumlinge. Esses quatro vrus so antigenicamente homogneos e so diferenciados do vrus da encefalite primavera-vero da Rssia (RSSE).10, 11, 12 Embora haja uma vacina que confira imunidade ao grupo da CETBE de vrus geneticamente homogneos (> 98%), a eficcia dessa vacina contra as infeces causadas pelo vrus da CETBE ainda no foi estabelecida. Dessa forma, o SALS reclassificou o grupo de vrus CETBE como do nvel de biossegurana 3, quando as pessoas esto imunizadas com a vacina contra a CETBE. O RSSE continua classificado como um vrus pertencente ao nvel de biossegurana 4. c. O SALS tambm recomenda que o trabalho com esses agentes seja conduzido somente em instalaes do nvel de biossegurana 3 que proporcionem uma filtrao HEPA de todo o ar liberado antes de ser jogado para dentro do laboratrio. d. A vacina est disponvel e recomendada para todas as pessoas que trabalhem com esse agente. e. Esse vrus atualmente est sendo registrado no Catalogue of Arboviruses. f. Os cientistas da Repblica da China verbalmente relataram o vrus Banna como sendo associado a casos graves de encefalites. As tradues dos originais do chins para o ingls no se encontravam disposio para esta reviso. g. O vrus Zinga agora reconhecido como idntico ao vrus da febre do Rift Vale. h. A licena para exportao desse vrus deve ser obtida junto ao Department of Commerce. i. Uma licena de importao ou transporte domstico desse agente pode ser obtida junto ao USDA/APHIS/VS.
Arbovrus, Arenavrus e Filovrus Designados para o Nvel de Biossegurana 4 O SALS recomenda que o trabalho com os 11 arbovrus, arenavrus ou filovrus13 includos na lista 8 seja conduzido pela prtica, pelos equipamentos de segurana e pelas instalaes semelhantes s do nvel de biossegurana 4. Essas recomendaes so basea191
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das em casos documentados de infeces freqentemente fatais ocorridas naturalmente em homens e nas infeces transmitidas por aerossis em laboratrios. O SALS tambm recomenda que alguns agentes com uma relao prxima com os agentes do nvel de biossegurana 4 (por exemplo, o vrus da encefalite primavera-vero da Rssia) tambm sejam provisoriamente manipulados nesse nvel at que experincias laboratoriais suficientes indiquem a posio do mesmo nesse nvel ou a reclassificao deste para um nvel menor. Como observado a seguir, com a imunizao, o SALS recomenda uma diminuio do nvel de classificao do vrus Junin e do complexo de vrus da encefalite do carrapato da Europa Central (Absettarov, Hanzalova, Hypr e Kumlinge) ao nvel de biossegurana 3. As infeces associadas a laboratrio ou ao laboratrio animal provocadas pelos seguintes agentes foram relatadas:14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 Tabela 7. Infeces associadas ao laboratrio ou ao laboratrio animal (2) Vrus Casos (SALS) Junin* 21 (1 morte) Marburg* 25 (5 mortes) Enc. Primavera-vero 8 Enc. Hemorrgica Crimia-Congo 8 (1 morte) Febre Hemorrgica Omsk 5 Lassa* 2 (1 morte) Machupo* 1 (1 morte) Ebola* 1 Sabia* 3 (1 morte)
* A licena para exportao desse agente dever ser obtida junto ao Department of Commerce.
Os roedores so hospedeiros naturais do vrus da Lassa (Mastomys spp.), do Junin, do vrus Machupo (Calomys spp.), Guaranito (Zygodontomys spp.) e talvez de outros membros desse grupo. Os primatas no-humanos estavam associados aos surtos iniciais da doena da floresta de Kyasanur (Presbytis spp.) e o vrus da doena de Marburg (Cercopithecus spp.). Mais recentemente, os filovrus relacionados com o ebo192
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la foram associados com o Macaca spp. e chimpanzs (Pan troglodytes). Os artrpodes so os vetores naturais do complexo de agentes da encefalite do carrapato. O trabalho com ou a exposio aos roedores, aos primatas no-humanos ou aos vetores naturalmente ou experimentalmente infectados com esses agentes representa uma fonte potencial de infeco humana. Riscos em Laboratrio: Os agentes infecciosos podem ser encontrados no sangue, na urina e nas secrees da garganta, no smen e nos tecidos de hospedeiros humanos ou animais, artrpodes, roedores e primatas no-humanos. A exposio respiratria aos aerossis infecciosos, a exposio da membrana mucosa aos perdigotos infecciosos e a inoculao parenteral acidental so os perigos primrios para o laboratrio e para as pessoas que cuidam de animais.21, 22 Precaues Recomendadas: As prticas e as instalaes do nvel de biossegurana 4 so indicadas para todas as atividades que utilizem materiais sabidamente ou potencialmente infecciosos de origem humana, animal ou artrpode. As amostras clnicas de pessoas com suspeita de terem sido contaminadas pelos agentes relacionados devero ser submetidas a um exame laboratorial do nvel de biossegurana 4 de mxima conteno.23, 24 Transferncia do Agente: A licena para a importao dos agentes dever ser obtida no CDC. J a licena para exportao dever ser conseguida no Department of Commerce. O registro do laboratrio necessrio junto ao CDC antes do envio ou recebimento dos agentes. Lista 8. Arbovrus, arenavrus e filovrus designados para o nvel de biossegurana 4 Encefalite do Carrapato da Doena da Floresta de Kyasanur Europa Central Lassa Febre Hemorrgica Machupo Crimia-Congo Febre Hemorrgica de Omsk Ebola Encefalite Primavera-vero da Guaranito Rssia Junin Sabia
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REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
Referncias e Lista de Notas*
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* N.E. As referncias e/ou notas com dados ausentes, como ttulo e/ou autoria, foram mantidas do original em ingls.
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referncias e lista de notas
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APNDICE A
Conteno Primria: Cabines de Segurana Biolgica
As cabines de segurana biolgica (CSB) esto entre os mais comuns e eficazes dispositivos de conteno primria utilizados em laboratrios que trabalham com agentes infecciosos 1. Os trs tipos gerais de cabines (classes I, II e III) possuem caractersticas e aplicaes que sero descritas neste apndice. As CSB de classes I e II adequadamente mantidas, quando usadas em conjunto com boas tcnicas de microbiologia, proporcionam um sistema de conteno eficaz para uma manipulao segura de microorganismos de risco moderado ou alto (agentes dos nveis de biossegurana 2 e 3). Tanto as cabines de classe I como as de classe II possuem uma velocidade de fluxo de ar (75-100 ps lineares por minuto) que proporciona nveis de conteno comparveis proteo dos funcionrios de laboratrio e do meio ambiente das reas adjacentes contra aerossis infecciosos gerados dentro das cabines. As cabines de segurana biolgica de classe II tambm protegem o prprio material e a pesquisa com uma filtrao altamente eficiente (filtrao HEPA) do fluxo de ar sobre toda a superfcie de trabalho (fluxo laminar vertical). J as cabines de classe III oferecem uma proteo mxima para os trabalhadores do laboratrio, para a comunidade e para o meio ambiente porque todos os materiais perigosos esto contidos em uma cabine ventilada e totalmente fechada. Classe I (Observao: as cabines de classe I, atualmente, esto sendo fabricadas em nmero limitado. Muitas podem ser substitudas por cabines de classe II).
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APNDICE A
conteno primria: cabines de segurana biolgica
A cabine de segurana biolgica de classe I (fig. 1) uma cabine ventilada de presso negativa operada por uma abertura frontal e uma mnima velocidade de face para abertura de trabalho de 75 ps lineares por minuto (lfpm). Todo o ar da cabine liberado atravs de um filtro HEPA para dentro ou para fora do laboratrio. A cabine de classe I projetada para a pesquisa geral de agentes microbiolgicos de risco moderado e baixo e til para a conteno de processadores, liquidificadores e outros equipamentos. Essas cabines no so apropriadas para a manipulao de materiais de pesquisa que sejam vulnerveis contaminao pelo ar, uma vez que o fluxo interno do ar no-filtrado do laboratrio pode carregar microorganismos contaminantes para dentro da cabine. A cabine de classe I pode tambm ser usada com um painel frontal fechado e sem as luvas de borracha, que aumentaro a velocidade do fluxo interno para aproximadamente 150 lfpm. Se essas cabines equipadas estiverem ligadas por dutos externos de exausto, elas podero ser usadas para materiais txicos ou com baixos nveis radioativos usados como auxiliares da pesquisa microbiolgica. Alm disso, as luvas de braos longos de borracha podem ser anexadas ao painel frontal com um dispositivo de liberao da presso do ar para proteo adicional. Nessa configurao, necessrio instalar uma entrada de ar adaptada e ajustada com um filtro HEPA na cabine. Classe II A cabine de segurana biolgica de classe II (fig. 2) projetada com um fluxo de ar interior com uma velocidade de 75-100 lfpm, para proteger os funcionrios, um fluxo de ar laminar vertical filtrado pelo sistema HEPA, para proteo do produto, e com ar de sada, de exausto, filtrado pelo sistema HEPA para proteo do meio ambiente. Os padres do projeto, da construo e da atuao das cabines de classe II, assim como as listas de produtos que atendam a esses padres, foram desenvolvidos pela National Sanitation Foundation International 2, em Ann Arbor, Michigan. A utilizao do padro e da lista dever ser o primeiro passo na seleo e aquisio de uma cabine de classe II. As cabines de classe II so classificadas em dois tipos (A e B) baseados na construo, nas velocidades e nos padres do fluxo
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APNDICE A
de ar e nos sistemas de exausto. Basicamente, as cabines do tipo A so adequadas para pesquisas microbiolgicas na ausncia de substncias qumicas volteis ou txicas e de radionucldeos, uma vez que o ar recirculado dentro da cabine. As cabines do tipo A podem ter exausto dentro do laboratrio ou para fora atravs de uma conexo metlica que se prende ao sistema de exaustores do edifcio. As cabines do tipo B so subdivididas em tipos B1, B2 e B3. Uma comparao entre as caractersticas do projeto e as aplicaes est representada nas figuras 2b, 2c e 2d, respectivamente. As cabines do tipo B possuem dutos rgidos conectados ao sistema de exausto do prdio e contm um sistema de ar de presso negativa. Essas caractersticas, mais uma velocidade plena de 100 lfpm, permitem o trabalho a ser feito com substncias qumicas txicas ou radionucldeos. essencial que as cabines de proteo biolgica I e II sejam testadas e certificadas in situ no momento da instalao dentro do laboratrio, todas as vezes que a CSB for removida ou uma vez ao ano. A verificao local pode atestar a performance da cabine individual ou modelo, mas no poder excluir os testes crticos antes do uso em laboratrio. Como em qualquer equipamento de laboratrio, as pessoas devero ser treinadas para o uso adequado das cabines de segurana biolgica. De particular interesse so as atividades que possam romper o fluxo direcionado para o interior. Causam a liberao de partculas aerolizadas de dentro da cabine fatores como a insero e a retirada repetida dos braos dos trabalhadores para dentro e para fora das cabines, a abertura e o fechamento de portas do laboratrio ou do cubculo de isolamento, a colocao ou a operao imprpria dos materiais ou dos equipamentos dentro da cmara de trabalho ou uma caminhada vigorosa prxima CSB enquanto esta estiver sendo utilizada. As cabines de classes I e II devero estar localizadas longe do fluxo de pessoas e das portas. O fluxo de ar gerado por ventiladores, a ventilao proveniente de venezianas metlicas em portas ou paredes e outros dispositivos para movimentao do ar podem interromper o padro de fluxo de ar na frente da cabine. A obedincia severa a essas regras para uso de
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APNDICE A
CSB e a colocao adequada das mesmas em um laboratrio so to importantes na manuteno da capacidade de conteno mxima do equipamento quanto o prprio funcionamento deste. Classe III A cabine de segurana biolgica de classe III (fig. 3) uma cabine totalmente fechada e ventilada, prova de escape de ar, que oferece o mais alto grau de proteo ao pessoal e ao meio ambiente contra aerossis infecciosos, assim como a proteo de materiais de pesquisa de contaminantes microbiolgicos. As cabines de classe III so mais adequadas para o trabalho com agentes perigosos que requerem uma conteno de um nvel de biossegurana 3 ou 4. Todas as operaes na rea de trabalho da cabine devero ser realizadas por meio de braos com luvas de borracha ou por meio de macaco. A cabine de classe III operada com presso negativa. O suprimento de ar filtrado atravs do sistema HEPA, e o ar liberado da cabine filtrado atravs de dois filtros HEPA em srie ou a filtrao HEPA seguida de uma incinerao, antes de ser descartado para fora do local. Todos os equipamentos necessrios para uma atividade em um laboratrio, como as incubadoras, geladeiras e centrfugas devero ser uma parte integral do sistema de cabine. A cabine de classe III dever ser conectada a uma autoclave de duas portas e/ou um tanque de imerso qumica usado para esterilizar ou desinfetar todos os materiais que sarem da cabine, permitindo que os estoques entrem na cabine. Vrias cabines de classe II so, portanto, tipicamente instaladas como um sistema interconectado. Macaco individual de presso positiva A proteo individual equivalente fornecida por cabines de classe III tambm pode ser obtida pelo uso de uma vestimenta de pea nica e ventilada. O trabalhador dever us-la quando estiver trabalhando com agentes do nvel de biossegurana 3 ou 4 em uma rea de risco correspondente e usando CSB de classe I ou II. A roupa individual mantida sob uma presso positiva com um sistema de suporte de vida, para prevenir o vazamento dentro da
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APNDICE A
vestimenta. Nesse sistema de conteno, o trabalhador dever estar isolado dos materiais de trabalho. A rea escafandro dever ser essencialmente equivalente a uma cabine grande de classe III. A entrada nessa rea dever ser feita atravs da cmara de compresso adaptada com portas hermticas. Um chuveiro qumico dever ser instalado como um tanque de imerso para descontaminao das superfcies da roupa e dos trabalhadores que entram e saem da rea. O ar liberado da rea escafandro dever ser filtrado atravs de dois filtros HEPA instalados em srie. Toda a rea dever estar sob presso negativa. Assim como nas CSB III, as luvas das roupas individuais so o componente mais vulnervel do sistema, pois esto sujeitas a perfuraes por objetos cortantes e mordidas de animais. Outros dispositivos: As bancadas de fluxo laminar de ar horizontal de clean benches so usadas em instalaes clnicas, farmacuticas e laboratoriais estritamente para garantir a proteo do produto. Esse equipamento nunca dever ser usado para a manipulao de materiais txicos, infecciosos, radioativos ou sensibilizadores, uma vez que o trabalhador respira o ar liberado da bancada limpa. As bancadas de fluxo laminar vertical podem ser teis para algumas manipulaes de materiais limpos (por exemplo, placa de agar), mas no devero ser usadas quando o trabalho com materiais infecciosos estiver sendo conduzido. Tabela 8. Comparao entre as cabines de segurana biolgica
Tipo Classe I* com a frente aberta Classe II Tipo A Velocidade frontal 75 Padro de fluxo do ar Frontal, atrs e acima atravs do filtro HEPA. 70% de ar recirculado atravs do HEPA; exausto atravs do HEPA. 30% de ar recirculado atravs do HEPA; exausto de ar via HEPA e dutos. Proteo Radionucldeos/ Nveis de substncias do biossegurana qumicas Produto No 2, 3 No
75
No
2, 3
Sim
Tipo B1
100
Sim (nveis baixos/ volatilidade)
2, 3
Sim
continua
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APNDICE A continuao Tipo
Velocidade frontal
Padro de fluxo do ar Nenhuma recirculao do ar; total exausto via HEPA e dutos. Idntica s cabines II A, mais o sistema de ventilao plena sob presso negativa para sala e exausto atravs de dutos. Entradas e sada do ar atravs do filtro HEPA 2.
Proteo Radionucldeos/ Nveis de substncias do biossegurana qumicas Produto Sim 2, 3 Sim
Tipo B2
100
Tipo B3
100
Sim
2, 3
Sim
Classe III
NA
Sim
3, 4
Sim
* Os compartimentos para as luvas podero ser acrescentados e aumentaro a velocidade frontal para 150 lfpm. As luvas podem ser adicionadas com a liberao da presso da entrada de ar, que permitir o trabalho com radionucldeos/substncias qumicas.
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APNDICE A
Figura 1. Cabine de segurana biolgica classe I. (A) Abertura frontal. (B) Vidraa corredia. (C) Filtro HEPA para exausto. (D) Espao de exausto.
vista lateral
Ar ambiente Ar potencialmente contaminado Ar filtrado por filtro HEPA
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APNDICE A
Figura 2a. Cabine de segurana biolgica classe II, tipo A. (A) Abertura frontal. (B) Vidraa corredia. (C) Filtro HEPA para exausto. (D) Espao posterior. (E) Filtro HEPA para suprimento de ar. (F) Ventilador.
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APNDICE A
Figura 2b. Cabine de segurana biolgica classe II, tipo B1 (desenho clssico). (A) Abertura frontal. (B) Vidraa corredia. (C) Filtro HEPA para exausto. (D) Filtro HEPA para suprimento de ar. (E) Espao de exausto com presso negativa. (F) Ventilador. (G) Filtro HEPA adicional para suprimento de ar. Observao: O exaustor da cabine necessita ser conectado ao sistema de exaustores do edifcio.
Conexo necessria de sistema de exaustores do edifcio
vista lateral
vista frontal
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APNDICE A
Figura 2c. Cabine de segurana biolgica classe II, tipo B2. (A) Abertura frontal. (B) Vidraa corredia. (C) Filtro HEPA para exausto. (D) Filtro HEPA para suprimento de ar. (E) Espao de exausto com presso negativa. (F) Tela do filtro. Observao: O filtro de carbono do sistema de exaustores do edifcio no est mostrado nesta figura. O ar de exausto na cabine dever ser conectado ao sistema de exaustores do edifcio.
vista lateral
vista frontal
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APNDICE A
Figura 2d. Cabine de segurana biolgica classe II, tipo B3 (modelo de mesa). (A) Abertura frontal. (B) Vidraa corredia. (C) Filtro HEPA de exausto. (D) Filtro HEPA para suprimento de ar. (E) Espao de presso positiva. (F) Espao de presso negativa. Observao: Os exaustores da cabine devero ser conectados aos sistemas de exaustores do edifcio.
vista lateral
vista frontal
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APNDICE A
Figura 3. Cabine de segurana biolgica classe III. (A) Compartimento para fixao de luvas longas de borracha cabine. (B) Vidraa corredia. (C) Filtro HEPA para exausto. (D) Filtro HEPA para o suprimento de ar. (E) Autoclave dupla sada na extremidade ou caixa de passagem da cabine. Observao: Um tanque de imerso qumica pode ser instalado e dever ser colocado abaixo da superfcie de trabalho da CSB com o acesso por cima. O sistema de exaustores da cabine necessita ser conectado a um sistema de exaustores independente.
vista frontal
vista lateral
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APNDICE B
Imunoprofilaxia
Um nvel adicional de proteo para pessoas do grupo de risco pode ser conseguido com imunizaes profilticas adequadas. essencial uma norma organizacional por escrito que defina as pessoas do grupo de risco, os riscos e os benefcios das vacinas especficas, fazendo distino entre as vacinas solicitadas e as recomendadas. Ao se desenvolver tal norma, as recomendaes e os requisitos devero ser especificamente concentrados em doenas infecciosas que sero ou provavelmente vo ser encontradas em um local em particular. As vacinas licenciadas cujos benefcios (nveis de anticorpos considerados como protetores) excedam os riscos (por exemplo, as reaes locais ou sistmicas) devero ser requisitadas para todas as pessoas claramente identificadas. Exemplos dessas preparaes incluem as vacinas anti-rbicas e contra hepatite B, febre amarela e plio. As recomendaes para aplicao de vacinas menos eficazes, como as associadas aos altos ndices de reaes locais ou sistmicas, as que produzem reaes muito graves com o uso repetido e as vacinas no-licenciadas, dadas sob os protocolos de uma nova droga de pesquisa (IND), devero ser cuidadosamente consideradas. Os produtos com essas caractersticas (por exemplo, as vacinas contra a clera, o antraz e a tularemia) podem ser recomendados, mas no podero ser requisitados para o trabalho. Um registro completo das vacinas recebidas baseando-se em requisitos ou recomendaes ocupacionais dever ser mantido em cada ficha mdica do trabalhador. As recomendaes para o uso de vacinas adaptadas da lista mencionada no Public Health Service Advisory Committee
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APNDICE B
imunoprofilaxia
on Immunization Practices esto includas no resumo das caractersticas dos agentes na seo VII e esto elaboradas nas referncias a seguir.1, 2 O leitor dever consultar as recomendaes atuais da ACIP publicadas no CDC Morbidity and Mortality Weekly Report (MMWR). Deve-se dar uma ateno particular para os indivduos que esto ou que podem se tornar imunodeprimidos, uma vez que as recomendaes para a administrao de vacinas podem ser diferentes das recomendaes indicadas para um adulto imunologicamente competente.
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APNDICE C
Transporte e Transferncia de Agentes Biolgicos
Os agentes biolgicos incluem os agentes infecciosos de homens, plantas e animais, assim como as toxinas que podem ser produzidas por micrbios e por material gentico potencialmente perigoso por si s ou quando introduzido em um vetor adequado. Agentes etiolgicos e substncias infecciosas so termos intimamente relacionados e so encontrados nas normas de transporte e de transferncia. Os agentes biolgicos podem existir em culturas purificadas e concentradas, mas tambm podem ser encontrados em uma variedade de materiais como fluidos corpreos, tecidos, amostras de solo, etc. Agentes biolgicos e materiais suspeitos de cont-los, ou que sabidamente os contm, so reconhecidos pelos governos federais e estaduais como materiais perigosos, e o transporte e a transferncia desses materiais devero estar sujeitos a controle normativo. O termo transporte se refere ao acondicionamento e envio desses materiais pelo ar, pela terra ou pelo mar, geralmente feito por uma empresa comercial. J o termo transferncia se refere ao processo de mudana de local dos materiais. Transporte Os regulamentos sobre o transporte de agentes biolgicos so definidos de forma a assegurar proteo ao pblico e aos trabalhadores da rede de transporte contra a exposio a qualquer agente que possa estar presente na embalagem. A proteo obtida por meio de: (a) requisitos para um rigoroso acondicionamento que suporte manipulaes bruscas e a conteno de todo o material lquido dentro da embalagem sem que ocorra vazamento para o lado de fora; (b) rotulagem adequada das embalagens com
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APNDICE C
transporte e transferncia de agentes biolgicos
o smbolo de risco biolgico e outros rtulos que alertem os trabalhadores da rede de transporte sobre o contedo perigoso da embalagem; (c) documentao sobre o contedo perigoso da embalagem contendo informaes necessrias para o caso de uma situao de emergncia; e (d) treinamento de trabalhadores da rede de transporte para que possam se familiarizar com os contedos perigosos, de forma que sejam capazes de responder s situaes de emergncia. Regulamentos Servio Pblico de Sade. 42 CRF Parte 72. Transporte Interestadual de Agentes Etiolgicos. Este regulamento est sendo revisado para se harmonizar com outros regulamentos internacionais e dos E.U.A. Uma cpia do regulamento atual poder ser conseguida pela internet: <http://www.cdc.gov/od/ohs>. Departamento de Transporte. 49 CFR Partes 171-178. Regulamentos para transporte de Materiais Perigosos. Este se aplica aos agentes biolgicos e s amostras clnicas. Maiores informaes podero ser obtidas pela internet: <http://dot.gov.rules.html>. Servio Postal dos Estados Unidos. 39 CFR Parte 111. Envio Postal de Agentes Etiolgicos. Codificados no Manual de Postagem Domstica 124.38: Preparaes dos Agentes Etiolgicos. Uma cpia do Manual de Postagem Domstica poder ser obtida no Setor de Publicao do Governo pelo telefone 1-202-512-1800 ou pela internet: <http://www.access.gpo.gov>. Administrao da Segurana e da Sade Ocupacional (OSHA). 29 CFR Parte 1910.1030: Exposio Ocupacional aos Patgenos do Sangue. Estabelece os requisitos mnimos de acondicionamento e rotulagem para o transporte de sangue e de fluidos corpreos dentro e fora do laboratrio. Maiores informaes podero ser adquiridas no escritrio local da OSHA ou pela internet: <http://osha.gov>. Regulamentos sobre Produtos Perigosos (DGR). Associao Internacional de Transporte Areo (IATA). Esses regulamentos fornecem os requisitos para o acondicionamento e a rotulagem de substncias e materiais infecciosos e de amostras clnicas que possuam uma baixa probabilidade de conter substncias infecciosas. Esses so os regulamentos seguidos pelas empresas areas. Eles se
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baseiam nos regulamentos do Comit de Peritos em Transporte de Produtos Perigosos e do Secretariado das Naes Unidas e nas Instrues Tcnicas para o Transporte de Produtos Perigosos via area, que so fornecidas pela Organizao Internacional da Associao Civil (ICAO). A cpia do DGR poder ser obtida pelo telefone 1-800-716-6326 ou pela internet: <http://www.iata.org> ou <http://who.org>. Requisitos Gerais de Acondicionamento para Transporte de Agentes Biolgicos e de Amostras Clnicas A figura 4 mostra o acondicionamento do tipo triplo (container primrio, embalagem secundria com conteno de gua, embalagem externa resistente a impacto) necessrio para agente biolgico oriundo de doena humana ou de materiais suspeitos de cont-los ou que sabidamente os contm. Essa embalagem requer a colocao de um rtulo externo, com os dizeres Substncia Infecciosa, como mostrado na figura 2. A embalagem dever atender aos testes de performance enfatizados nos regulamentos do DOT, USPS, PHS e da IATA. As amostras clnicas com uma baixa probabilidade de conter um agente infeccioso tambm necessitam de um acondicionamento triplo, mas os testes de performance s exigem que a embalagem no apresente vazamentos aps o teste de uma queda de quatro ps. O DOT, o PHS e a IATA exigem um rtulo externo identificando a embalagem como Amostra Clnica. Transferncia Os regulamentos para a transferncia de agentes biolgicos objetivam assegurar que a mudana de posse dos materiais biolgicos esteja dentro dos interesses do pblico e da nao. Esses regulamentos exigem a documentao dos trabalhadores, instalaes e justificativa da necessidade de transferncia do agente e subseqente aprovao desse processo por uma autoridade federal. Os seguintes regulamentos se aplicam nesta categoria: Importao de Agentes Etiolgicos de Doenas Humanas 42 CFR Parte 71 Quarentena Estrangeira. Parte 71.54 Agentes, Hospedeiros e Vetores Etiolgicos. Esse regulamento exige uma licena para a importao (obtida nos Centros de Preveno e Con251
APNDICE C
trole de Doenas) dos agentes etiolgicos de doenas humanas e de quaisquer materiais, incluindo animais e insetos vivos que possam cont-los. Um requerimento e maiores informaes sobre as licenas para importao podero ser obtidos pelo telefone 1-888-CDCFAXX e dando entrada no documento nmero 101000 ou pela internet: <http://www.cdc.gov/od/ohs/biosty/imprtper.html>. Importao de Agentes Etiolgicos de Criaes, Aves e de Outras Doenas em Animais 9 CFR Partes 92, 94, 95, 96, 122 e 130. Esses regulamentos exigem que uma licena de importao obtida no Departamento de Agricultura dos Estados Unidos (USDA), no Servio de Inspeo de Sade de Plantas e Animais (APHIS) e nos servios veterinrios para importao ou transferncia domstica de agentes etiolgicos de criaes, aves, outros animais e qualquer outro material que possa conter esses agentes etiolgicos. Maiores informaes podero ser obtidas pelo telefone (301) 734-3277 ou pela internet: <http://aphisweb.aphis.usda.gov/ncie>. Importao de Pestes de Plantas 7 CFR Parte 330. Regulamentos Federais de Pestes de Plantas; Geral; Pestes de Plantas; Solo; Pedras e Produtos de Ardsia; Lixo. Esse regulamento exige uma licena para a importao ou a transferncia domstica de pestes botnicas, agentes biolgicos de plantas ou de qualquer material que possa cont-los. Maiores informaes podero ser obtidas pelo telefone 301-734-3277 ou pela internet: <http://aphis.usda.gov./ppq/ppqpermits.html>. Transferncia de Agentes Biolgicos Selecionados de Doenas Humanas 42 CFR Parte 72.6. Exigncias Adicionais para Instalaes que Realizam Transferncias ou Recebimento de Agentes Selecionados. Instalaes que transferem ou importam agentes selecionados devero ser registradas junto ao CDC. Cada transferncia de um agente selecionado dever ser documentada. Maiores informaes podero ser conseguidas pela internet: <http://www.cdc.gov/od/ohs/lrsat>.
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Exportao de Agentes Etiolgicos Humanos, Animais, Plantas e Materiais Relacionados Departamento de Comrcio. 15 CFR Partes 730 a 799. Esses regulamentos exigem que os exportadores de uma grande variedade de agentes etiolgicos humanos, plantas e doenas animais, incluindo o material gentico e produtos que podero ser usados na cultura de grandes quantidades de agentes, possuam uma licena para exportao. Maiores informaes podero ser obtidas pelo telefone do DOC Bureau of Export Administration: 202482-4811 ou pela internet: <http://www.bxa.fedworld.gov> ou <http://www.bxa.doc.gov>. As figuras 4 e 5 ilustram o acondicionamento e a rotulao de substncias e amostras clnicas infecciosas em volumes de menos de 50ml, de acordo com as provises do subpargrafo 72.3 (a) do regulamento do Interstate Shipment of Etiologic Agents (42 CFR, Parte 72). A reviso depende ainda dos resultados dos requisitos adicionais de rotulao de embalagens, mas at o momento da publicao desta quarta edio do BMBL essas modificaes no haviam sido concludas. Para maiores informaes sobre qualquer clusula deste regulamento, entre em contato com: Centers for Disease Control and Prevention Attn: External Activities Program
Mail Stop F-05 1600 Clifton Road N.E.
Atlanta, GA 30.333 Telephone: (404) 639-4418 FAX: (404) 639-2294. Observe que o nome, o endereo e o nmero de telefone do remetente devero ser colocados nos lados externo e interno dos containers. Recomendamos ao leitor consultar outras clusulas adicionais do Department of Transportation (49 CFR, Partes 171180) Hazardous Materials Regulations.
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APNDICE C
Figura 4. Embalagem e rotulagem de substncias infecciosas
Recipiente primrio Embalagem de material absorvente Cultura Rtulo de risco biolgico Fita prova dgua Cultura Rtulo de identificao da amostra Rtulo de risco biolgico Embalagem de material absorvente Rtulo de substncia infecciosa Segundo recipiente ou recipiente secundrio
Tampa
Nome, telefone e endereo do remetente. Outro recipiente
Figura 5. Embalagem e rotulagem de amostras clnicas

Recipiente hermtico primrio Recipiente secundrio hermeticamente fechado (lacrado em um saco plstico) Embalagem de material absorvente
Lista discriminada dos contedos Recipiente secundrio hermeticamente fechado (lacrado em um saco plstico) Recipiente hermtico primrio Amostra ID Rtulo de risco biolgico Embalagem de material absorvente Rtulo da amostra clnica
Embalagem exterior
Nome, telefone e endereo do destinatrio
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APNDICE D
Patgenos Animais
Os patgenos que normalmente no so encontrados na criao domstica de aves e de gado podero necessitar de um projeto laboratorial especial, uma operao e de caractersticas especficas de conteno, que geralmente no esto especificadas nesta publicao. A importao, a posse e o uso dos seguintes agentes so proibidos ou restritos por lei ou pelos regulamentos ou normas administrativas do Departamento de Agricultura dos Estados Unidos ou por polticas administrativas: Tabela 9. Patgenos animais
Doena do cavalo africano Vrus da febre suna africana* Vrus da Akabane Vrus da influenza aviria Besnoitia Besnoiti Vrus da lngua azul* Vrus da doena de Borna Encefalopatia espongiforme bovina Agente da febre petequial infecciosa bovina Brucella abortus Brucellosis melitensis* Burckholderia mallei (Pseudomonas mallei Glanders) Mycoplasma mycoides (mycoides) Vrus da doena de ovinos africanos (vrus Ganjam) Vrus da doena de Newcastle* (cepas velognicas) Peste dos pequenos ruminantes* (praga dos pequenos ruminantes) Vrus da febre do Vale Rift* Vrus de Rinderspest* Varola de ovinos e caprinos* Vrus da doena vesicular de sunos* Vrus da doena de Teschen* Theileria annulata Theileria lawrencei Theileria bovis
continua
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APNDICE D
patgenos animais
continuao
Vrus da varola do camelo Febre suna clssica Cochliomya hominivorax (larva da Cochliomya hominivorax) Cowdria ruminantium (caudriose) Encefalopatia espongiforme bovina, variante da doena de Creutzeldt-Jakob Vrus da febre efemeral Vrus da doena da mo-e-boca* Histoplasma (Zymonema) farciminosum Vrus da encefalite bovina Vrus da doena da pele granulosa Mycobacterium bovis Mycoplasma agalactiae
Theileria hirci Trypanosoma brucei Trypanosoma congolense Trypanosoma equiperdum (dourine) Trypanosoma evansi Trypanosoma vivax Encefalomielite eqina venezuelana Vrus do exantema vesicular Estomatite vesicular Doena hemorrgica viral de coelhos Vrus da doena de Wesselsbron
A importao, a posse, o uso ou o embarque interestadual de patgenos animais, com exceo dos relacionados, podem tambm estar sujeitos aos regulamentos do Departamento de Agricultura dos Estados Unidos. A licena para importao por meio do USDA/APHIS necessria para a importao de qualquer agente infeccioso animal que esteja na lista de patgenos animais da USDA/APHIS. Essa licena poder ser requerida para a importao de qualquer outro agente de infeco de aves e gado. Uma licena tambm necessria para a importao de qualquer produto derivado de aves ou de gado, tais como sangue, soro ou outros tecidos. Mais informaes podero ser obtidas escrevendo para: U.S. Department of Agriculture Animal and Plant Health Inspection Service Veterinary Services, National Center for Import and Export 4700 River Road, Unit # 40 Riverdale, Maryland 20737-1231 Telefone: (301) 734-3277 Fax: (301) 734-8226 Internet: http://www.aphis.usda.gov/ncei
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APNDICE E
fontes de informaes
As fontes de informaes, as consultas e as recomendaes sobre o controle de risco biolgico, os procedimentos de descontaminao e outros aspectos do gerenciamento da segurana de um laboratrio incluem: Centers for Disease Control and Prevention Attention: External Activities Program Atlanta, Georgia 30333 Telefone: (404) 639-4418 National Institutes of Health Attention: Division of Safety Bethesda, Maryland Telefone: (301) 496-1357 National Animal Disease Center U.S Department of Agriculture Ames, Iowa 50010 Telefone: (515) 862-8258 United States Department of Labor, Occupational Safety and Health Administration Exposio Ocupacional aos Patgenos do Sangue, Regra Final Fed Reg 1991; 56: 64041-64182 http://www.osha-slc.gov/OshStd_data/1910_1030.html. Regra Proposta para TB: http://www.osha-slc.gov/FedReg_osha_data/FED19980205.html. Padres de Segurana e de Sade. Ocupacional 29 CFR Parte 1910: http://www.oshda-slc.gov/OshStd_toc/OSHA_Std_toc_1910.html
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APNDICE e
fontes de informaes
Normas: Centros de Preveno e Controle de Doenas Tuberculose: 1994: http://www.cdc.gov/nchstp/tb/pubs/250001.pdf 1997 (labs): http://www.cdc.gov/od/ohs/tbdoc2.html Imunizao para Trabalhadores da rea de Sade: http://www.cdc.gov/epo/mmwr/preview/rr4618.html Normas para Controle de Infeces em Trabalhadores da rea de Sade, 1998: http://www.cdc.gov/ncidod/hip/draft_gu/waisgate.txt Profilaxia para o HIV: http://www.cdc.gov/epo/mmwr/mmwr_rr.html Departamento do Exrcito, DOD. 32 CFR Partes 626, 627 Programa de Segurana da Defesa Biolgica: http://www.gpo.gov Comit Nacional para Padres de Laboratrios Clnicos (NCCLS) Normas aprovadas para a proteo de trabalhadores de laboratrios contra os agentes de risco biolgico e doenas infecciosas transmitidas pelo sangue, fluidos corpreos e tecidos. Dezembro de 1997, NCCLS Doc. M29-A (ISBN1-56238-339-6. http://www/exoffice@nccls.org ). Institutos Nacionais de Sade Normas do NIH para Molculas de DNA Recombinante: http://www.NIH.gov/od/orda/toc.html Escritrio do NIH para Atividades com DNA Recombinante: http://www.NIH.gov/od/orda
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APNDICE F
Segurana do Laboratrio e Resposta de Emergncia para Laboratrios Biomdicos e de Microbiologia
Normas tradicionais de segurana laboratorial enfatizam o uso de boas prticas de trabalho, de equipamentos de conteno adequados, dependncias bem projetadas e controles administrativos que minimizem os riscos de uma infeco acidental ou ferimentos em trabalhadores de laboratrio e que evitem a contaminao do meio ambiente. Embora os laboratrios clnicos e de pesquisas possam conter uma variedade de materiais biolgicos, qumicos e radioativos perigosos, at o momento existem poucos relatrios sobre o uso intencional de quaisquer desses materiais para ferir trabalhadores de laboratrio ou outras pessoas.1, 2, 3, 4, 5, 6 Entretanto, h uma crescente preocupao sobre o possvel uso de materiais biolgicos, qumicos e radioativos como agentes para o terrorismo.7, 8 Em resposta a essas preocupaes, as seguintes normas orientam essas questes de segurana laboratorial (por exemplo, preveno da entrada de pessoas no autorizadas em reas laboratoriais e preveno da remoo no autorizada de agentes biolgicos perigosos). Os seguintes itens so oferecidos como normas para os laboratrios que usam agentes biolgicos ou toxinas capazes de causarem doenas srias ou fatais aos homens e aos animais. A maioria desses laboratrios estaria trabalhando sob condies de nveis de biossegurana 3 ou 4 descritas nas sees II e III. Porm, os laboratrios de pesquisa, de produo e os clnicos que trabalham com patgenos recentemente identificados, patgenos animais de alto nvel e/ou toxinas no-cobertas pelas recomendaes dos n-
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APNDICE f
segurana do laboratrio e resposta de emergncia para laboratrios biomdicos e de microbiologia
veis de biossegurana 3 ou 4 devero tambm seguir essas normas para minimizar as oportunidades de remoo acidental ou intencional dos agentes de um laboratrio. 1. Reconhecer que a segurana do laboratrio est relatada, mas diferente de um laboratrio seguro Envolver profissionais com experincia em segurana e proteo para avaliao e desenvolvimento das recomendaes para um dado local ou laboratrio. Revisar as normas e os procedimentos de segurana regularmente. A administrao dever revisar as normas para garantir que esto adequadas para as condies atuais e consistentes com outras normas e procedimentos amplos do local. Os supervisores do laboratrio devero assegurar que todos os trabalhadores e visitantes de um laboratrio entendam os requisitos de segurana e sejam treinados e equipados para seguirem os procedimentos estabelecidos. Rever as normas e os procedimentos quando ocorrer um incidente ou quando uma nova ameaa for identificada. 2. Acesso controlado s reas onde agentes biolgicos ou toxinas estejam sendo usados ou armazenados As reas dos laboratrios e de tratamento de animais devero ser separadas das reas pblicas dos edifcios onde se encontram localizadas. As reas do laboratrio ou de cuidados animais devero ser trancadas todas as vezes. Os cartes-chave ou dispositivos similares devero ser usados para permitir a entrada nas reas do laboratrio e nas de cuidado dos animais. Todas as entradas (incluindo as entradas para visitantes, trabalhadores de manuteno, trabalhadores para realizao de reparos e outros que precisarem entrar ocasionalmente) devero ser registradas por um dispositivo semelhante a um carto-chave (prefervel) ou pela assinatura no livro de entrada.
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APNDICE f
Somente os trabalhadores necessrios para a realizao de um trabalho devero receber permisso para entrar nas reas e nas horas que um trabalho em particular for realizado. a. O acesso para estudantes, cientistas, etc. dever ser limitado ao horrio em que os funcionrios regulares estiverem presentes. b. O acesso para limpeza, manuteno e consertos rotineiros dever ser limitado ao horrio em que os funcionrios estiverem presentes. Freezers, geladeiras, cabines e outros recipientes, em que estoques de agentes biolgicos, materiais clnicos ou radioativos so guardados, devero ser trancados quando no estiverem vista dos trabalhadores (por exemplo, quando localizados em reas de armazenamento no freqentadas regularmente).
3. Saber quem est nas reas do laboratrio Os supervisores e diretores do local devero conhecer todos os trabalhadores. Dependendo dos agentes biolgicos envolvidos e do tipo de trabalho a ser desenvolvido, deve-se fazer uma reviso da limpeza e da segurana antes que novos funcionrios sejam designados para a rea de trabalho. Todos os trabalhadores (incluindo estudantes, cientistas visitantes e outros trabalhadores temporrios) devero usar crachs de identificao. Os crachs devero conter no mnimo uma fotografia, o nome do indivduo e a data de vencimento da identificao. O uso de marcadores coloridos ou de outros smbolos facilmente identificveis sobre os crachs seria til para a identificao e para indicar a liberao para a entrada em reas restritas (por exemplo, laboratrios de NB-3 ou 4 e reas de tratamento de animais). Os visitantes devero ser identificados com crachs e acompanhados ou autorizados a entrar usando os mesmos procedimentos como os usados para trabalhadores.
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4. Saber quais os materiais que esto sendo trazidos para dentro da rea laboratorial Todos os materiais devero ser verificados (visualmente ou por raios-x) antes de trazidos para dentro do laboratrio. Os pacotes contendo amostras, substncias bacterianas ou isoladas ou toxinas devero ser abertos em uma cabine de segurana ou em outro dispositivo de conteno adequado. 5. Saber quais materiais esto sendo removidos da rea laboratorial Os materiais/toxinas biolgicas que sero removidos para outros laboratrios devero ser embalados e rotulados de acordo com todos os regulamentos locais, federais e internacionais aplicveis.9 a. As licenas necessrias (por exemplo, PHS, DOT, DOC, USDA) devero ser obtidas antes que os materiais sejam acondicionados e rotulados. b. Os recipientes (de preferncia) ou o local de recebimento dos materiais devero ser conhecidos pelo remetente. Este dever fazer um esforo para assegurar que os materiais sejam enviados para um local equipado com recursos para manipular os materiais com segurana. O transporte manual de materiais e toxinas biolgicas para outros laboratrios considerado inadequado. Se os materiais ou toxinas biolgicas a serem carregados manualmente forem transportados por carregadores comuns, todos os regulamentos devero ser seguidos. Materiais contaminados ou possivelmente contaminados devero ser descontaminados antes de sar da rea do laboratrio. Os materiais qumicos e radioativos devero ser descartados de acordo com os regulamentos locais, federais e estaduais. 6. Tenha um plano de emergncia O controle do acesso s reas do laboratrio poder fazer com que os procedimentos de emergncia sejam dificul262
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tados. Esse fato dever ser considerado quando os planos de emergncia forem desenvolvidos. a. Uma avaliao da rea laboratorial pelos funcionrios do local, com profissionais de fora, se necessrio, para a identificao dos aspectos de segurana e proteo, dever ser conduzida antes que um plano de emergncia seja desenvolvido. b. Os administradores, diretores, principais pesquisadores e trabalhadores do laboratrio e os trabalhadores responsveis pela segurana do local devero estar envolvidos no planejamento de emergncia. c. A polcia, o corpo de bombeiros ou outras pessoas envolvidas em situaes de emergncia devero ser informados quanto aos tipos de materiais biolgicos em uso nas reas laboratoriais e devero dar uma assistncia ao planejamento dos procedimentos de emergncia nas reas laboratoriais. d. Os planos devero incluir a proviso de uma notificao imediata aos diretores e trabalhadores do laboratrio e pessoas encarregadas pela segurana ou outros indivduos quando ocorrer uma emergncia, de maneira que possam lidar com as questes de biossegurana caso ocorram. O planejamento de emergncia laboratorial dever ser coordenado com planos de expanso. Fatores como ameaas de bombas, problemas climticos (furaco e inundao), terremotos, falta de energia e outros desastres naturais (ou no-naturais) devero ser considerados quando o plano de emergncia estiver sendo desenvolvido.
7. Possua um protocolo para relato de incidentes Os diretores do laboratrio, em cooperao com os encarregados pela segurana e proteo do local, devero ter normas e procedimentos no local para relatar e investigar os incidentes ou possveis incidentes (por exemplo, visitantes sem documentos, desaparecimento de substncias qumicas, telefonemas incomuns ou ameaadores).
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Gerenciamento Integrado de Roedores e de Insetos
O gerenciamento de roedores e de insetos uma parte importante na administrao de um local de pesquisa. Muitos insetos, como mosquitos e baratas, podem ser vetores e espalhar mecanicamente os patgenos de doenas, comprometendo o meio ambiente de pesquisa. Mesmo a presena de insetos incuos contribui para as condies fora dos padres sanitrios. A abordagem mais comum para o controle de roedores e de insetos tem sido a aplicao de produtos qumicos, como uma medida preventiva ou remediadora. Os tratamentos com pesticidas podem ser eficazes e necessrios como medidas corretivas, mas tm resultados limitados a longo prazo quando usados sozinhos. As aplicaes de pesticidas tambm apresentam potencial de contaminao para o meio ambiente de pesquisa, pela aerolizao e volatilizao do pesticida. Para controlar os roedores e os insetos e minimizar o uso de pesticidas, necessrio empregar um programa de abordagem que integre os servios de limpeza, de manuteno e de controle de roedores e insetos. Esse mtodo de controle freqentemente chamado de gerenciamento integrado de roedores e de insetos (GIRI). O objetivo primrio de um programa GIRI prevenir os problemas causados pelos roedores e insetos por meio do gerenciamento do meio ambiente local, de maneira que o torne menos propcio para a infestao de roedores e de insetos. Juntamente com as aplicaes limitadas de pesticidas, o controle conseguido com estratgias de intervenes administrativas e operacionais retroativas para corrigirem condies que propiciem o surgimento de roedores e insetos.
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gerenciamento integrado de roedores e de insetos
O GIRI um servio baseado em estratgias. A deciso de implementar um programa GIRI dever se basear no somente no custo, mas tambm na eficcia dos componentes do servio. O GIRI especfico para cada local. Cada programa dever ser idealizado conforme o meio ambiente onde ser aplicado. Os servios de GIRI em um laboratrio sero diferentes daqueles aplicados em um edifcio de escritrios ou em um local de tratamento de animais. Os programas de gerenciamento integrado de roedores e de insetos (GIRI) so baseados nos vrios componentes que esto inter-relacionados e que contribuem para o gerenciamento do meio ambiente de pesquisa para controlar os roedores e os insetos. So eles: Projeto do Local: A incluso de questes e requisitos para o gerenciamento de roedores e de insetos no planejamento, no projeto e na construo proporciona a oportunidade de incorporar caractersticas que auxiliam a impedir a presena de roedores e de insetos, a minimizar o seu habitat e a promover condies sanitrias adequadas. Isso poder ajudar a reduzir a necessidade de futuros servios corretivos de gerenciamento de roedores e de insetos, que podem ser um obstculo para as operaes de pesquisa. Monitoramento: Armadilhas, inspees visuais e entrevistas com os funcionrios so usadas para identificao das reas e das condies que possam abrigar roedores e insetos. O monitoramento a atividade central de um programa de GIRI e usado no lugar de tratamentos preventivos com pesticidas. Manuteno do Local e do Saneamento Bsico: Muitos dos problemas com roedores e insetos podem ser prevenidos ou corrigidos ao usarmos um saneamento adequado, reduzindo a desordem e o habitat desses. A manuteno de registros das deficincias estruturais e das condies de manuteno do local pode ajudar a detectar problemas e determinar se as aes corretivas foram concludas de maneira satisfatria.
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Comunicao: Um membro da equipe do laboratrio pode ser designado para se reunir com os funcionrios do gerenciamento de roedores e de insetos, para assistilos nas resolues de questes especficas do laboratrio que tenham impacto sobre o gerenciamento de roedores e de insetos. As informaes sobre as atividades de roedores e de insetos e as recomendaes sobre as prticas e as condies do local que possam impactar o gerenciamento de roedores e de insetos devem ser retransmitidos verbalmente ou por escrito para aquelas pessoas. O treinamento dos indivduos em questes relacionadas identificao, biologia e s condies sanitrias pode tambm promover a compreenso e a cooperao com os objetivos do programa de GIRI. Manuteno de Registros: Um livro de registro pode ser usado para anotar a atividade dos roedores e dos insetos e as condies pertinentes ao programa de GIRI. O livro poder conter os protocolos e os procedimentos para os servios de GIRI naquela instalao, folhas de dados sobre a segurana dos pesticidas, rtulos dos mesmos, registros de tratamento, planos para o uso, relatrios de pesquisa, etc. Controle de Roedores e de Insetos sem o uso de Pesticidas: Os mtodos de controle como o uso de armadilhas, calafetagem ou vedao, lavagem e congelamento podem ser aplicados de forma segura e eficiente, quando usados juntamente com condies sanitrias e reparos estruturais adequados. Controle de Roedores e de Insetos usando Pesticidas: As aplicaes preventivas dos pesticidas devero ser desencorajadas, e os tratamentos devero ficar restritos s reas de atividades conhecidas de roedores e dos insetos. Quando os pesticidas so aplicados, deve-se usar e aplicar produtos menos txicos, de melhor eficcia, de maneira segura. Avaliao e Garantia de Qualidade do Programa: A reviso do programa e a garantia da qualidade devero
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proporcionar uma avaliao contnua e objetiva das atividades e da eficcia do GIRI. Isso feito para assegurar que o programa esteja realmente controlando os roedores e os insetos e atendendo as necessidades bsicas do programa de instalao e de seus ocupantes. Baseado nessa reviso, os protocolos de gerenciamento de roedores e de insetos podem ser modificados e novos procedimentos podem ser implementados. Percia Tcnica: Um entomologista qualificado pode fornecer um guia tcnico til ao desenvolvimento e implementao de um programa GIRI. As pessoas responsveis pelo gerenciamento de roedores e de insetos devero ser licenciadas e certificadas por uma agncia regulamentadora adequada. Segurana: Ao limitar o espectro dos tratamentos com pesticidas e ao usarmos prticas de controle sem pesticidas, o programa de GIRI poder minimizar o potencial de exposio do meio ambiente de pesquisa e da equipe de funcionrios ao pesticida. Antes de iniciar qualquer tipo de programa de controle de roedores e de insetos, o desenvolvimento de uma estrutura operacional para os servios GIRI poder ajudar a promover a colaborao entre especialistas no controle e o pessoal do local. Essa estrutura pode tambm ser usada para incorporar as restries de instalao fsica laboratorial e questes operacionais e processuais dentro do programa de GIRI. Um programa eficaz de gerenciamento de roedores e de insetos uma parte integral da administrao das instalaes laboratoriais. Ao incluir uma poltica de GIRI nos procedimentos padro de operao de instalaes laboratoriais, aumenta-se a conscientizao do programa. O treinamento sobre os princpios e as prticas do gerenciamento estrutural (indoor) integrado ao gerenciamento de roedores e de insetos e as informaes sobre o programa do GIRI esto disponveis em muitas fontes. Algumas delas so: os departamentos de entomologia de universidades, os escritrios de extenso municipal, a Sociedade Entomolgica dos EUA, os departamentos estaduais de agricultura, as associaes estaduais de controle de
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roedores e de insetos, os estoques de equipamentos para controle e os consultores ou as firmas de gerenciamento de roedores e de insetos. H tambm cursos por correspondncia em vrias universidades, cursos de curta extenso e conferncias de treinamento sobre o gerenciamento estrutural de roedores e de insetos. Informaes adicionais: Urban Entomolgy. 1996. Insect and mite Pests in the Human Environment. W.H. Robinson. Chapman and Hall. New York. Advances in Urban Pest Management. 1986. Gary W. Bennett and John M. Owens, eds. Van Nostrand Reinhold Company. New York. Common Sense Pest Control. 1991. Least-toxic solutions for four home, garden, pests and community. William Olkowski, Sheila Daar, Helga Olkowski. The Taunton Press Inc. Internet: Associao Nacional de Controle de Roedores e de Insetos: http://www.pestworld.org Rede de Biocontrole: http://www.bioconet.com
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Trabalhos com Clulas e Tecidos Humanos e de Outros Primatas
Os Centers for Disease Control and Prevention e o National Institutes of Health gostariam de expressar agradecimentos a Frank P. Simione, M.S. e Jane Caputo, B.A., da American Type Culture Collection (ATCC), uma organizao global de biocincia dedicada aos padres biolgicos e biodiversidade, por suas contribuies na preparao deste apndice. Pelo menos 24 casos documentados de infeco em funcionrios de laboratrio que manipulam culturas de clulas primrias (por exemplo, clulas renais do macaco rhesus) ocorreram nos ltimos 30 anos.1, 2 Embora um nmero limitado de infeces adquiridas em laboratrio tenha sido relatado como resultado da manipulao de clulas humanas e de outros primatas, h um risco significativamente maior em adquirir uma infeco pelo HIV ou pelo HBV por meio da exposio ao sangue humano e a outros lquidos corporais.3, 4, 5 Por essa razo, a OSHA desenvolveu um padro para patgenos do sangue. 6 Os procedimentos foram publicados para reduzir a contaminao de culturas celulares com microorganismos7, 8 ou com outras clulas.9 Riscos Potenciais em Laboratrios: Os riscos potenciais laboratoriais associados s clulas e aos tecidos humanos incluem os patgenos do sangue HBV e HIV, assim como agentes tais como Mycobacterium tuberculosis que podem estar presentes nos tecidos pulmonares humanos. Outras clulas e tecidos de primatas tambm apresentam riscos aos trabalhadores de laboratrio.10 Riscos potenciais aos trabalhadores de laboratrio so apresentados por clulas transformadas por agentes virais, como as SV-40, EBV ou a HBV, assim como as clulas que carregam material gentico vi-
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trabalhos com clulas e tecidos humanos e de outros primatas
ral. As clulas humanas tumorignicas tambm podem oferecer potenciais riscos como resultado de uma auto-inoculao.11 Prticas Recomendadas: Clulas humanas e de outros primatas devero ser manipuladas usando as prticas e a conteno do nvel de biossegurana 2. Todo o trabalho dever ser realizado em uma cabine de segurana biolgica, e todo o material dever ser descontaminado pela autoclave ou desinfetado antes de ser descartado.12, 13, 14, 15 Todos os funcionrios que trabalham com clulas e tecidos humanos devero ser registrados no Programa de Patgenos do Sangue e trabalhar de acordo com as normas e polticas estabelecidas pelo Plano Institucional de Controle de Infeco.16 Os empregados devero fornecer uma amostra do soro, permitir a sua imunizao contra o vrus da hepatite B e ser avaliados por um profissional da rea de sade depois de qualquer exposio incidental.
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APNDICE I
Normas para o Trabalho com Toxinas de Origem Biolgica
Em reconhecimento ao crescente nmero de laboratrios biomdicos e microbiolgicos que trabalham com toxinas de origem biolgica, apresentamos as seguintes normas para o trabalho com essas toxinas. O material a seguir foi adaptado do Programa de Segurana da Defesa Biolgica e dos Requisitos de Segurana Tcnica (DA Pamphlet 385-69)1 e do apndice A do United States Department of Labor Occupational Safety and Health Association regulado por Occupational Exposure to Hazardous Chemicals in Laboratories. 2 Os gerentes de laboratrio e os encarregados pela segurana das instalaes devero ser encorajados a utilizar as referncias relacionadas a seguir e a consultar peritos no assunto antes de usar qualquer toxina, para assegurar que as instalaes, os equipamentos de conteno, as normas e os procedimentos, os programas de treinamento de pessoal e os protocolos de vigilncia mdica especficos para a toxina e para o laboratrio so adequados. Geral As instalaes, os equipamentos e os procedimentos laboratoriais para o trabalho com toxinas de origem biolgica devero refletir o nvel intrnseco de perigo imposto por uma toxina em particular, assim como os riscos potenciais inerentes s operaes realizadas. Se a toxina e os agentes infecciosos forem usados, os dois devero ser levados em considerao quando o equipamento de conteno for selecionado e os procedimentos e as normas forem escritos. Caso sejam usados animais, as prticas de segurana animal tambm devero ser consideradas.
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normas para o trabalho com toxinas de origem biolgica
Prticas padro As prticas padro relacionadas nos NB-2 e 3 devero ser revisadas e incorporadas aos protocolos para o trabalho com as toxinas. Prticas Especiais As prticas especiais relacionadas nos NB-2 e 3 devero ser revisadas e incorporadas aos protocolos apropriados para o trabalho com as toxinas. 1. Cada laboratrio dever desenvolver um plano de higienizao qumica especfico para a(s) toxina(s) usada(s). O plano de higienizao qumica dever: 1) identificar os perigos que sero encontrados no uso normal da toxina e no caso de um vazamento ou outro acidente; e 2) especificar as prticas e normas a serem usadas para minimizar os riscos (por exemplo, equipamento de conteno e proteo individual, gerenciamento de vazamentos, gerenciamento de exposies acidentais e vigilncia mdica). 3 2. O treinamento especfico para o uso de toxinas dever ser exigido e documentado para todos os funcionrios de laboratrio que trabalhem com as toxinas antes que o trabalho com esse elemento seja iniciado e, a partir da, em intervalos de tempo. 3. Um sistema de controle de inventrio dever ser adotado. 4. As toxinas devero ser guardadas em salas de armazenamento, cabines ou freezers trancados, quando no estiverem sendo usadas. 5. O acesso s reas que contm toxinas dever ficar restrito s pessoas que trabalham no local. 6. A preparao de recipientes primrios contendo estoques de solues de toxinas e manipulaes de containers primrios de formas secas de toxinas dever ser conduzida em uma coifa qumica a vapor, em uma cabine com luvas (glove box), em uma cabine de segurana biolgica ou em um sistema de conteno equivalente aprovado pelo responsvel pela segurana. A filtrao do ar liberado atravs de filtros HEPA e/ou atravs de carvo poder ser necessria, dependendo da toxina.
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APNDICE i
7. O usurio dever verificar o fluxo de ar no interior da coifa ou da cabine de segurana biolgica antes de iniciar o trabalho. 8. Todo trabalho dever ser feito dentro de uma rea efetiva da coifa ou da cabine de segurana biolgica. 9. Quando as toxinas estiverem sendo usadas, a sala dever conter um aviso indicando Toxinas em Uso Somente Pessoas Autorizadas. Qualquer solicitao especial para a entrada no recinto dever ser colocada na entrada da sala. Somente os funcionrios cuja presena necessria devero ser permitidos enquanto as toxinas estiverem sendo usadas. 10. Todas as operaes de alto risco devero ser conduzidas na presena de duas pessoas experientes. Cada um dever estar familiarizado com os procedimentos aplicveis, mantendo o contato visual um com o outro e pronto a prestar socorro no caso de um acidente. 11. Antes que os recipientes sejam removidos da sala, da coifa, das cabines ou da cabine com luvas (glove box), o exterior do recipiente primrio fechado dever ser descontaminado e colocado em um container secundrio limpo. As toxinas devero ser transportadas somente em containers prova de vazamentos. 12. As roupas e os equipamentos de proteo contaminados ou potencialmente contaminados devero ser descontaminados utilizando mtodos conhecidos pela eficcia contra toxinas antes de serem removidos do laboratrio, para que possam ser desprezados, limpos ou consertados. Caso a descontaminao no seja possvel/prtica, os materiais (por exemplo, luvas usadas) devero ser descartados como lixo txico. Os materiais contaminados com agentes infecciosos e as toxinas devero tambm ser autoclavados ou convertidos em no-infecciosos de outra maneira antes de deixar o laboratrio. 13. O interior da coifa, da cabine com luvas (glove box) ou da cabine dever ser descontaminado periodicamente, por exemplo, no final de uma srie de experimentos relacio275
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nados. At que sejam descontaminadas, a coifa, a cabine com luvas e a cabine devero conter um aviso indicando que toxinas esto sendo usadas e que o acesso ao equipamento e aos utenslios fica restrito aos funcionrios autorizados. Equipamentos de Segurana As normas para o uso de equipamentos de segurana relacionados nos nveis de biossegurana 2 e 3 (veja seo III) devero ser revisadas e incorporadas adequadamente aos protocolos para o trabalho com as toxinas. 1. Quando utilizando coifas a vapor com abertura frontal ou cabine de segurana biolgica, roupa de proteo, incluindo as luvas e uma capa descartvel que cubra o corpo e tenha manga comprida (jaleco, avental ou traje semelhante), estes devero ser usados de maneira que as mos e os braos estejam completamente cobertos. 2. Uma proteo para os olhos dever ser utilizada se um sistema de conteno que possua uma abertura na frente for usado. 3. Outro equipamento poder ser necessrio, dependendo das caractersticas da toxina e do sistema de conteno. Por exemplo, use uma proteo respiratria adicional se a a formao de aerossis ocorrer e no for possvel o uso de um equipamento de conteno ou de outros controles de engenharia de segurana. 4. Quando manipular formas secas de toxinas que sejam eletrostticas: a. No use luvas (como as de ltex) que ajudem a formar eletricidade esttica. b. Use uma glove box ou uma cabine com luvas ou uma cabine de segurana biolgica de classe III. 5. Quando manipular toxinas que sejam perigosas para a membrana percutnea (irritantes, que provocam necrose no tecido ou sejam extremamente txicas para a exposio dermatolgica), selecione luvas que sejam impermeveis toxina.
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6. Considere a toxina e o diluente quando for selecionar luvas e outras roupas de proteo. 7. Se os agentes infecciosos e as toxinas forem usados juntamente com um sistema experimental, considere os dois quando for selecionar os equipamentos e as roupas de proteo. Instalaes do Laboratrio As recomendaes de instalao do laboratrio relacionadas para os nveis de biossegurana 2 e 3 (veja a seo III) e os padres da OSHA* devero ser revisados e incorporados de forma apropriada nos protocolos para o trabalho com toxinas. 1. Linhas de Vcuo. Ao usar as linhas de vcuo juntamente com sistemas de conteno de toxinas, estas devero ser protegidas com um filtro HEPA para prevenir a entrada de toxinas nas linhas. Os ralos das pias devero ser tambm protegidos quando os aspiradores de gua forem usados.
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NDICE REMISSIVO
A
Agentes Bacterianos 101 Agentes Parasitrios 132 Trematdeos 135, 136 agentes virais 153, 162, 271 Agulhas e seringas 34, 42, 52 Antraz 101, 247 Arbovrus e Arenavrus 182, 185 Ascaris spp 137, 138 Avaliao dos Riscos 23, 26, 85, 89, 90, 92, 96, 97, 100, 180
B
Bacillus anthracis 101 Bacillus subtilis 23 Besnoitia Besnoiti 255 BMBL 253 Bordetella pertussis 102 Botulismo 108 Bovino 110, 139, 143, 168, 176, 177, 255, 256 Abortus 103, 255 Canis 103, 201 Melitensis 103, 201, 202, 255 Suis 103 Brucelose 13, 14, 103, 104
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NDICE REMISSIVO
C
Cabines de Segurana Biolgica 20, 21, 24, 25, 27, 31, 32, 36, 38, 43, 46, 47, 49, 54, 55, 57, 59, 63, 73, 79, 81, 82, 86, 88, 103, 116, 119, 129, 160, 163, 168, 235, 237, 238, 239, 246 Classe I 64, 88, 119, 129, 168, 235, 236, 238, 239, 241 Classe II 20, 27, 36, 45, 47, 54, 63, 81, 235, 236, 238, 239, 242, 243, 244, 245 Classe III 21, 25, 47, 53, 54, 55, 57, 58, 59, 64, 81, 82, 85, 86, 88, 156, 160, 235, 238, 239, 240, 246, 276 Calomys spp. 192 Campylobacter 105, 106, 202, 203 Caudriose 256 Cercopithecus spp. 192 Chimpanzs 140, 141, 143, 156, 158, 164, 193 Citomegalovrus 162 Clostridium 108, 109 Coccidioides immitis 127 Clera 13, 125, 247 Condios 127, 132 Conteno 17, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 27, 31, 32, 36, 38, 39, 41, 43, 45, 48, 49, 53, 55, 57, 58, 60, 62, 64, 70, 73, 74, 77, 78, 79, 82, 85, 87, 88, 96, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 133, 135, 138, 150, 154, 155, 158, 162, 163, 164, 165, 167, 170, 173, 177, 181, 186, 188, 189, 193, 235, 236, 238, 239, 249, 251, 255, 259, 262, 272, 273, 274 Conteno primria 19, 22, 24, 49, 53, 73, 78, 87, 99, 103, 105, 108, 120, 121, 126, 133, 135, 138, 158, 163, 170, 177, 235 Conteno secundria 19 Coriomeningite Linfoctica 164, 186 Coxiella burnetii 24, 149, 218 Cryptococcus neoformans 128, 209 CSB. vejaCabines de Segurana Biolgica
D
Dengue 179, 181, 182, 188
280
NDICE REMISSIVO
Descontaminao 22, 24, 30, 31, 33, 35, 37, 40, 43, 45, 46, 48, 49, 51, 53, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 74, 80, 81, 82, 88, 89, 108, 142, 146, 174, 188, 239, 257, 275 Difteria 109, 110 Doena da Floresta de Kyasanur 192, 193
E
Ebola 90, 192, 193, 229 Encefalite 186, 190, 193 Encefalomielite eqina 179, 185, 186, 190, 256 Envio 104, 109, 112, 126, 127, 128, 150, 152, 154, 156, 169, 181, 185, 193, 249, 250 Equipamento de segurana 16, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 29, 32, 39, 64, 66, 99, 100, 157, 178, 180, 185, 187, 191, 276 Escherichia coli 110, 203
F
Fasciola spp 135 Febre Amarela 185, 186, 187, 188, 190, 247 Febre de Pontiac 115 Febre Hemorrgica de Omsk 193 Febre maculosa das Montanhas Rochosas 151 Febre Q 15, 149, 150 Febre tifide 122 Filovrus 188, 191, 192, 193 Filtro HEPA 47, 58, 62, 63, 81, 236, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246 Francisella tularensis 111, 112, 203
G
Giardia spp 133
H
Hantavrus 153, 189 Heliobacter pylori 112, 203 Hepatite 14, 15, 23, 24, 27, 34, 41, 70, 75, 91, 97, 100, 141, 149,
281
NDICE REMISSIVO
156, 157, 158, 247, 272 Herpesvrus 94, 162 Histoplasma 129, 256 Capsulatum 129, 130 Farciminosum 256
I
Imunoprofilaxia 97, 247 Influenza 98, 163, 223, 255 Instalaes animais 96
K
Kuru 139, 141, 175, 176, 214
L
Laboratrios clnicos 14, 23, 24, 26, 27, 38, 66, 104, 259 Laboratrio escafandro 54, 59, 60, 63, 82, 156, 160 Legionella pneumophila 115, 204 Leishmania spp 132, 133 Lepra 116, 117 Limpeza 31, 37, 38, 43, 44, 45, 46, 55, 56, 60, 61, 69, 73, 79, 87, 93, 174, 261, 265 Listeria monocytogenes 114, 204 Luvas 21, 24, 30, 31, 32, 37, 39, 44, 45, 52, 64, 68, 71, 72, 76, 78, 86, 88, 105, 107, 114, 115, 120, 124, 126, 131, 133, 135, 136, 137, 142, 143, 144, 145, 147, 148, 157, 158, 161, 170, 171, 177, 178, 181, 236, 238, 239, 240, 246, 274, 275, 276, 277
M
Machupo 192, 193 Malria 132 Marburg 15, 25, 90, 192, 229 Meningitis 121, 206 Metacercria 135, 136 Meyer e Eddie 13 Moldes 148
282
NDICE REMISSIVO
Mycobacterium 24, 116, 117, 118, 256, 271 asiaticum 117 bovis 117, 118, 119, 120, 255, 256 fortuitum 117 kansasii 117 leprae 116, 117, 118 malmoense 117 marinum 117 scrofulaceum 117 simiae 117, 159, 161, 162, 222 szulgai 117 tuberculosis 17, 24, 27, 97, 117, 118, 119, 196, 197, 205, 271 ulcerans 117 xenopi 117 Mycoplasma agalactiae 256 Mycoplasma mycoides 255
N
Naegleria 23, 134, 135 fowleri 134, 135 gruberi 23 Neisseria 120, 121 Nveis de Biossegurana (NB) 16, 17, 22, 23, 26, 29, 32, 40, 64, 65, 66, 88, 89, 90, 93, 96, 97, 98, 179, 235, 259, 276, 277 Nvel de Biossegurana 1 23, 29, 32 Nvel de Biossegurana 2 23, 24, 27, 32, 39, 99, 100, 101, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 135, 136, 137, 138, 140, 141, 142, 143, 149, 151, 154, 157, 158, 160, 162, 163, 164, 165, 166, 168, 169, 176, 178, 179, 180, 181, 182, 185, 187, 272 Nvel de Biossegurana 3 24, 25, 38, 39, 42, 48, 99, 100, 102, 103, 104, 105, 107, 108, 112, 116, 119, 120, 121, 122, 126, 128, 130, 140, 143, 150, 151, 158, 160, 165, 167, 170, 173, 178, 179, 181, 185, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 238 Nvel de Biossegurana 4 25, 26, 48, 49, 51, 53, 54, 55, 58, 59, 63, 160, 191, 192, 193 Nvel de Biossegurana Animal 1 66
283
NDICE REMISSIVO
Nvel de Biossegurana Animal 2 69, 101, 103, 106, 107, 109, 110, 111, 113, 115, 117, 118, 120, 122, 123, 125, 127, 128, 129, 130, 131, 151, 157, 158, 165, 166 Nvel de Biossegurana Animal 3 74, 104, 112, 150, 165 Nvel de Biossegurana Animal 4 82 Normas 2, 3, 9, 16, 17, 30, 32, 33, 34, 35, 36, 40, 41, 42, 48, 64, 67, 68, 70, 71, 72, 75, 76, 77, 82, 84, 85, 90, 93, 145, 161, 174, 249, 255, 258, 259, 260, 263, 272, 273, 274, 276 Nova droga de pesquisa 108, 247
O
Objetos cortantes 32, 35, 42, 43, 53, 68, 148, 172, 239
P
Patgenos 17, 23, 24, 27, 28, 42, 51, 96, 140, 142, 159, 162, 172, 250, 255, 256, 257, 259, 265 Patgenos animais 28, 255, 256, 259 Patgenos do sangue 159, 271, 272 Pipetagem 30, 32, 40, 104 Poliovrus 165, 166, 167, 223 Poxvrus 167, 168 Praga 255 Prticas laboratoriais 29 Precaues universais 16, 90, 95, 171 Presbytis spp 192 Primatas 68, 73, 116, 117, 118, 119, 123, 137, 151, 156, 157, 158, 161, 164, 165, 171, 172, 173, 175, 176, 192, 193, 271, 272 Prons 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 176 Projeto da instalao 19, 48 Protozorios parasitas 133, 135 Pseudomonas 105, 255 pseudomallei 105 Psittaci 106, 107
Q
Quantidades de produo 98, 99, 116, 120, 121, 122
284
NDICE REMISSIVO
R
Reaes alrgicas 137 Retrovrus 94, 170, 172, 173, 175 Rickettsia 150, 219 akari 150 australis 150 conorii 150 coxiella burnetii 218 grupo da febre maculosa 151 mooseri 150 prowazekii 150 rickettsii 151, 152, 219 Riscos laboratoriais 97, 98, 113, 145, 187
S
Salmonella 121, 122, 206 SALS 66, 178, 179, 180, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192 Schistosoma spp 135 Shiguella spp 123 Sfilis 123, 124 Smio 175 Sujeira 31
T
Taenia solium 136 Tatus 117 Tecnologias do DNA recombinante 94 Ttano 13, 109, 110 Toxinas de origem biolgica 273 Toxides 97 Toxoplasma spp 24, 133 Transporte e Transferncia de Agentes Biolgicos 249 Treponema pallidum 123 Trypanosoma 132, 256 cruzi 132, 133, 212 evansi 256 vivax 256 285
NDICE REMISSIVO
Tuberculose 14, 15, 34, 41, 100, 117, 118, 119, 258 Tularemia 14, 111, 203, 247
V
Vacinas 19, 23, 90, 97, 98, 99, 103, 104, 105, 106, 107, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 152, 157, 158, 161, 165, 177, 178, 179, 181, 185, 188, 247, 248 Vacnia 94, 167, 168 Varola 15, 151, 168, 255, 256 Vigilncia 36, 44, 51, 54, 64, 67, 70, 72, 75, 77, 83, 86, 88, 93, 120, 152, 153, 170, 175, 273, 274 Vrus da doena de Borna 255 Vrus da Estomatite Vesicular (VSV) 177 Vrus da febre do Vale Rift 188, 255 Vrus da febre efemeral 256 Vrus da imunodeficincia humana 16, 100, 170 Vrus da raiva 169 Vrus hendra 220 Vrus Junin 92, 188, 192
Y
Yersinia pestis 125
286
equipe tcnica e editorial
Equipe tcnica e editorial

Editores da Obra Original 1999 Jonathan Y. Richmond, Ph.D. Diretor do Escritrio de Sade e Segurana Servio de Sade Pblica Centros de Preveno e Controle da Doena 1600 Clifton Road N. E. Atlanta, Gergia, 30333 Robert W. McKinney, Ph.D. Diretor da Diviso de Segurana Servio de Sade Pblica Institutos Nacionais de Sade Building 31, Room 1C02 Bethesda, Maryland, 20892 Editores Convidados Centers for Prevention and Control of the Diseases (United States) Robert B. Craveb, M.D. Chefe do Departamento de Epidemiologia Diviso de Doena Provocada por Arbovrus Centro Nacional de Doenas Infecciosas Mark L. Eberhard, Ph.D. Chefe da Diviso de Biologia e Diagnsticos Diviso de Doenas Parasitrias Centro Nacional de Doenas Infecciosas Thomas Folks, Ph.D. Chefe da Diviso de HIV e Retrovirologia Diviso de AIDS, DST e Laboratrio de Pesquisa. Centro Nacional de Doenas Infecciosas Bradford Kay, Dr. P.H. Consultor Snior do Laboratrio da Diviso de Bacteriologia e Doenas Micticas. Centro Nacional de Doenas Infecciosas Richard C. Knudsen, Ph.D. Chefe do Laboratrio de Segurana Secretaria da Sade e Segurana Brian W. J. Mahy, Sc. D, Ph.D. Diretor da Diviso de Doenas Virais e Rickettsiais. Centro Nacional de Doenas Infecciosas C.J. Peters, M.D. Chefe da Diviso de Patgenos Especiais Centro Nacional de Doenas Infecciosas Margaret A.Tipple, M.D. Chefe do Programa de Atividades Externas Secretaria da Sade e Segurana National institute of Health (United States) John Bennett, M.D. Chefe da Seo de Micologia do Instituto Nacional de Alergias e Doenas Infecciosas David Hackstadt, Ph.D Microbiologista do Rocky Mountain Laboratory. Pgina 4 - A IV Deborah E. Wilson, Dr. P.H. Chefe da Diviso de Segurana e Sade Ocupacional Departamento de Segurana Editores Individuais Convidados Jonathan Crane, A.I.A. Arquiteto Atlanta, GA
287
equipe tcnica e editorial
Peter J. Gerone, Sc.D. Diretor do Centro de Pesquisa Regional de Primatas de Tulane Centro Mdico da Universidade de Tulane Convington, Louisiana Thomas Hamm, D.V.M, Ph.D. Consultor Cary, NC Debra L. Hunt, Dr. P.H. Diretor da Segurana Biolgica e Controle de Infeces Centro Mdico da Universidade de Duke Durham, North Carolina Peter Jahrling, Ph.D. Cientista Senior de Pesquisa Diviso de Avaliao da Doena USAMRIID Frederick, Maryland. Thomas Kost, Ph.D. Chefe do Departamento de Cincias Moleculares Glaxo Welcome, Inc. Research Triangle Park, NC Editor Tcnico Marie J. Murray Editor Escritora Atlanta, GA Editores da Obra Traduzida Organizao da 1. Edio em Portugus 2001 Coordenao Nacional de Laboratrios de Sade Pblica Centro Nacional de Epidemiologia Fundao Nacional de Sade Equipe Tcnica Ana Rosa dos Santos Maria Adelaide Millington (Coordenadora) Mrio Cesar Althoff Reviso Tcnica da Traduo Ncleo de Biossegurana/NuBio Vice-Presidncia de Tecnologia Fundao Oswaldo Cruz Equipe Tcnica Bernardo Elias Corra Soares Francelina Helena Alvarenga Lima e Silva Leila Macedo Oda (Coordenadora) Sheila Sotelino da Rocha Telma Abdalla de Oliveira Cardoso Traduo: Denise Bittar Reviso Grfica: Junio Ferreira da Silva
288
A coleo institucional do Ministrio da Sade pode ser acessada gratuitamente na Biblioteca Virtual em Sade do Ministrio da Sade: http://www.saude.gov.br/bvs
O contedo desta e de outras obras da Editora do Ministrio da Sade pode ser acessado na pgina: http://www.saude.gov.br/editora
EDITORA MS Coordenao-Geral de Documentao e Informao/SAA/SE MINISTRIO DA SADE (Normalizao, reviso, editorao, impresso e acabamento) SIA, trecho 4, lotes 540/610 CEP: 71200-040 Telefone: (61) 3233-2020 Fax: (61) 3233-9558 E-mail: editora.ms@saude.gov.br Home page: http://www.saude.gov.br/editora Braslia DF, junho de 2006 OS 0694/2006

Biosseguranca Laboratorios Biomedicos Microbiologia

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MINISTRIO DA SADE Secretaria de Vigilncia em Sade Departamento de Vigilncia Epidemiolgica

Biossegurana em Laboratrios Biomdicos e de Microbiologia

relao DE tabelas, FIGURAS e listas......................................................... APRESENTAO. ......................................................................................................................................

relao DE tabelas, FIGURAS e listas

Tabela 1. Resumo dos nveis de biossegurana recomendados para agentes infecciosos

Prticas padro de mi- No so necessrios. crobiologia.

Bancadas abertas com pias prximas.

NB-1 mais: autoclave disponvel.

Seo VII-A: Agentes Bacterianos

Seo VII-B: Agentes Fngicos

Seo VII-C: Agentes Parasitrios

Seo VII-E: Agentes Rickettsiais

Seo VII-F: Agentes Virais (no incluindo o arbovrus)

Seo VII-G: Arbovrus e Vrus Zoonticos Relacionados

Lista 5. Arbovrus e arenavrus designados para o nvel de biossegurana 2

Lista 7. Arbovrus e alguns outros vrus designados para o nvel de biossegurana 3

conteno primria: cabines de segurana biolgica

conteno primria: cabines de segurana biolgica

conteno primria: cabines de segurana biolgica

conteno primria: cabines de segurana biolgica

Sim (nveis baixos/ volatilidade)

APNDICE A continuao Tipo

conteno primria: cabines de segurana biolgica

Proteo Radionucldeos/ Nveis de substncias do biossegurana qumicas Produto Sim 2, 3 Sim

conteno primria: cabines de segurana biolgica

Ar ambiente Ar potencialmente contaminado Ar filtrado por filtro HEPA

conteno primria: cabines de segurana biolgica

Ar ambiente Ar potencialmente contaminado Ar filtrado por filtro HEPA

conteno primria: cabines de segurana biolgica

Conexo necessria de sistema de exaustores do edifcio

Ar ambiente Ar potencialmente contaminado Ar filtrado por filtro HEPA

conteno primria: cabines de segurana biolgica

Conexo necessria de sistema de exaustores do edifcio

Ar ambiente Ar potencialmente contaminado Ar filtrado por filtro HEPA

conteno primria: cabines de segurana biolgica

Conexo necessria de sistema de exaustores do edifcio

Ar ambiente Ar potencialmente contaminado Ar filtrado por filtro HEPA

conteno primria: cabines de segurana biolgica

Conexo necessria de sistema de exaustores do edifcio

Ar ambiente Ar potencialmente contaminado Ar filtrado por filtro HEPA

Figura 4. Embalagem e rotulagem de substncias infecciosas

Nome, telefone e endereo do remetente. Outro recipiente

Figura 5. Embalagem e rotulagem de amostras clnicas

Nome, telefone e endereo do destinatrio

equipe tcnica e editorial

Equipe tcnica e editorial

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